Resumo
Mycotoxins often contaminate cattle food, which can cause liver damage, immunosuppression, and reduced milk production. Although previous studies have shown the benefits of adsorbents in farm animals, knowledge regarding their mechanism of action is limited, especially when intoxication occurs due to naturally contaminated diets. The present study aimed to assess whether the daily oral administration of mycotoxin adsorbent bentonite clay based on aluminosilicate for 56 days, would attenuate these changes in 18 dairy cows, which were multiparous in the middle of the lactation stage, and were consuming a diet containing fumonisin B1 and B2, zearalenone, and desoxynivalenol. The animals were divided into treatment (TG, n = 9) and control (CG, n = 9) groups, and subjected to assessment of liver functions, hematological assessments, assessment of oxidative leucocyte metabolism by the tetrazolium nitroazul (NBT) technique, and physical chemical analysis of milk, every week for two months, totaling eight analyses. It was observed that the use of the adsorbent caused a reduction in the milk excretion of aflatoxin M1 (AFM1), an increase in levels of serum protein (p = 0.03) and albumin (p = 0.0001), an increase in leukocyte oxidative metabolism from day 24 of treatment(p = 0.05), and increased milk production from the day 16 of treatment (p = 0.08). There was no improvement in the physicochemical indices of the milk. It was concluded that the use of an aluminosilicate-based adsorbent was able to attenuate the effects of mycotoxins on the function of leukocytes and increase milk production.(AU)
Micotoxinas podem contaminar alimentos de bovinos, levando a distúrbios hepáticos, imunodepressão e redução da produção. Embora existam estudos mostrando os benefícios de adsorventes em animais de produção, há limitado conhecimento sobre sua ação quando a intoxicação de bovinos ocorre por dietas naturalmente contaminadas. O presente estudo objetivou avaliar se a administração oral diária do adsorvente de micotoxinas, argila bentonita a base de aluminossilicato durante 56 dias atenuaria alterações promovidas pelas micotoxinas em 18 vacas leiteiras, multíparas no meio do estágio da lactação, consumindo dieta contendo fumonisina B1 e B2, zearalenona (ZEA) e desoxinivalenol (DON). Os animais foram divididos, grupos tratamento (GT, n=9) e controle (GC, n=9), e submetidos às avaliações de enzimas e função hepática, hematológicas, metabolismo oxidativo de leucócitos pela técnica do nitroazul de tetrazolium (NBT) e análise físico-química do leite, a cada semana, durante dois meses, totalizando oito análises. Observou-se que o uso do adsorvente promoveu redução da excreção láctea de aflatoxina M1 (AFM1), aumento de proteína (p = 0,03) e albumina séricas (p= 0,0001), e aumento do metabolismo oxidativo leucocitário a partir do dia 24 (p = 0,05). Houve também elevação da produção leiteira a partir do 16º dia de tratamento (p= 0,008). Não foi observado melhora nos índices físico-químicos do leite dos animais e houve pouca influência na atividade das enzimas hepáticas. Conclui-se que o uso do adsorvente a base de aluminossilicato foi capaz de atenuar os efeitos das micotoxinas na função de leucócitos e de elevar a produção leiteira.(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Bovinos , Bentonita , Aflatoxina M1 , Fumonisinas , Leite , MicotoxinasResumo
Background: Mycotoxins produced by yeast and fungi have toxic effects on human and animal health. Aflatoxin B1 (AFB1)is the most toxic hepatocarcinogen to mammals. Aflatoxin M1 (AFM1), which has been found in milk and dairy products,is the hydroxylated metabolite of AFB1. Aflatoxin M1 is formed by the cytochrome P450 enzyme in the liver. OchratoxinA (OTA) is synthesized by Aspergillus and Penicillium species. Ochratoxin A is known to cause teratogenic, immunotoxic,nephrotoxic and carcinogenic effects. Due to the potential harmful effects on human and animal health, OTA has also beenreceiving increased attention globally; however, there is limited information on the presence of OTA in milk and dairy products. The aim of this study was to determine how mycotoxins impact the hygienic quality of raw and heat-processed milk.Materials, Methods & Results: In this study, a total of 105 milk samples were analyzed (35 raw, 35 pasteurized and 35UHT) to identify AFM1 and OTA in raw, pasteurized and ultra-high temperature processing (UHT) milk. The levels ofAFM1 were detected by using the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The milk samples were centrifuged inorder to remove the fat content from the milk. After centrifugation, the upper cream layer was withdrawn with a pipette.The non-fat liquid portion was placed in wells at 100 μL for analysis. The concentration of AFM1 in the milk sampleswas analyzed by AFM1 test kit. The milk samples with AFM1 levels greater than 50 ng/L were confirmed by using HighPerformance Liquid Chromatography (HPLC). An Ochratoxin A Serum / Milk ELISA test kit was used for the analysesof OTA. The analyses were made according to the manufacturers instructions, and samples were analyzed in duplicate.The absorbance value of milk samples was obtained from the ELISA plate reader at 450 nm...
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Aflatoxina M1/isolamento & purificação , Leite/microbiologia , Ocratoxinas/isolamento & purificação , Micotoxinas/análiseResumo
Background: Mycotoxins produced by yeast and fungi have toxic effects on human and animal health. Aflatoxin B1 (AFB1)is the most toxic hepatocarcinogen to mammals. Aflatoxin M1 (AFM1), which has been found in milk and dairy products,is the hydroxylated metabolite of AFB1. Aflatoxin M1 is formed by the cytochrome P450 enzyme in the liver. OchratoxinA (OTA) is synthesized by Aspergillus and Penicillium species. Ochratoxin A is known to cause teratogenic, immunotoxic,nephrotoxic and carcinogenic effects. Due to the potential harmful effects on human and animal health, OTA has also beenreceiving increased attention globally; however, there is limited information on the presence of OTA in milk and dairy products. The aim of this study was to determine how mycotoxins impact the hygienic quality of raw and heat-processed milk.Materials, Methods & Results: In this study, a total of 105 milk samples were analyzed (35 raw, 35 pasteurized and 35UHT) to identify AFM1 and OTA in raw, pasteurized and ultra-high temperature processing (UHT) milk. The levels ofAFM1 were detected by using the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The milk samples were centrifuged inorder to remove the fat content from the milk. After centrifugation, the upper cream layer was withdrawn with a pipette.The non-fat liquid portion was placed in wells at 100 μL for analysis. The concentration of AFM1 in the milk sampleswas analyzed by AFM1 test kit. The milk samples with AFM1 levels greater than 50 ng/L were confirmed by using HighPerformance Liquid Chromatography (HPLC). An Ochratoxin A Serum / Milk ELISA test kit was used for the analysesof OTA. The analyses were made according to the manufacturers instructions, and samples were analyzed in duplicate.The absorbance value of milk samples was obtained from the ELISA plate reader at 450 nm...(AU)
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Aflatoxina M1/isolamento & purificação , Ocratoxinas/isolamento & purificação , Leite/microbiologia , Micotoxinas/análiseResumo
Several strains of lactic acid bacteria (LAB), frequently used in food fermentation and preservation, have been reported to bind different types of toxins in liquid media. This study was carried out to investigate the effect of different concentrations of Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC 53103) to bind aflatoxin M1 (AFM1) in liquid media. AFM1 binding was tested following repetitive washes or filtration procedures in combination with additional treatments such as heating, pipetting, and centrifugation. The mixture of L. rhamnosus GG and AFM1 was incubated for 18 h at 37 °C and the binding efficiency was determined by quantifying the unbound AFM1 using HPLC. The stability of the complexes viable bacteria-AFM1 and heat treated bacteria-AFM1 was tested. Depending on the bacterial concentration and procedure used, the percentages of bound AFM1 by L. rhamnosus GG varied from as low as undetectable to as high as 63%. The highest reduction in the level of unbound AFM1 was recorded for the five washes procedure that involved heating and pipetting. Results also showed that binding was partially reversible and AFM1 was released after repeated washes. These findings highlight the effect of different treatments on the binding of AFM1 to L. rhamnosus GG in liquid matrix.(AU)
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Aflatoxina M1/análise , Aflatoxina M1/química , Lacticaseibacillus rhamnosus , Leite/microbiologiaResumo
Two hundred and fifty-seven samples of milk proceeding from different geographical regions of Brazil were analyzed for determining the presence of aflatoxin M1 (AFM1). The AFM1 extraction was carried out using immunoaffinity column, separated by reversed-phase (C-18) high performance liquid chromatography (HPLC), and quantified by fluorescence detector. The Limits of Quantification (LOQ) were 0.008 µg/kg and 0.080 µg/kg to the fluid and the powder milk, respectively. AFM1 were detected in 209 (81.3 %) samples, being 26 (63.4 %), 105 (84.0 %) and 78 (85.7 %) of pasteurized, UHT (Ultra-high Temperature) and powder milk, respectively. The highest concentration of AFM1 in powder milk was found in one sample from Minas Gerais (1.210 µg/kg). In UHT and pasteurized milk, the highest levels were detected in one sample from Sergipe (0.120 µg/kg) and one sample from Goiás (0.050 µg/kg), respectively. None of the samples analyzed in this study exceeded the Brazilian legal limits for AFM1.
Duzentas e cinquenta e sete amostras de leite provenientes das diferentes regiões geográficas do Brasil foram analisadas para realizar a determinação de aflatoxina M1 (AFM1). As AFM1 foram extraídas por meio de colunas de imunoafinidade, separadas por cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (C-18) e quantificadas por detector de fluorescência (CLAE-FL). Os limites de quantificação (LQ) foram de 0,008 µg/kg e 0,080 µg/kg para o leite fluido e em pó, respectivamente. AFM1 foi detectada em 209 (81,3 %) amostras, sendo 26 (63,4 %), 105 (84,0 %) e 78 (85,7 %) para o leite pasteurizado, UHT (Ultra-high Temperature) e em pó, respectivamente. A maior concentração de AFM1 no leite em pó foi encontrada em uma amostra proveniente de Minas Gerais (1,210 µg/kg). No leite UHT e pasteurizado, os maiores níveis foram encontrados em uma amostra de Sergipe (0,120 µg/kg) e Goiás (0,050 µg/kg), respectivamente. Nenhuma amostra analisada ultrapassou os limites da legislação brasileira em vigor para AFM1.
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Aflatoxina M1/análise , Leite/microbiologia , Micotoxinas , Bovinos , Cromatografia Líquida de Alta PressãoResumo
Two hundred and fifty-seven samples of milk proceeding from different geographical regions of Brazil were analyzed for determining the presence of aflatoxin M1 (AFM1). The AFM1 extraction was carried out using immunoaffinity column, separated by reversed-phase (C-18) high performance liquid chromatography (HPLC), and quantified by fluorescence detector. The Limits of Quantification (LOQ) were 0.008 µg/kg and 0.080 µg/kg to the fluid and the powder milk, respectively. AFM1 were detected in 209 (81.3 %) samples, being 26 (63.4 %), 105 (84.0 %) and 78 (85.7 %) of pasteurized, UHT (Ultra-high Temperature) and powder milk, respectively. The highest concentration of AFM1 in powder milk was found in one sample from Minas Gerais (1.210 µg/kg). In UHT and pasteurized milk, the highest levels were detected in one sample from Sergipe (0.120 µg/kg) and one sample from Goiás (0.050 µg/kg), respectively. None of the samples analyzed in this study exceeded the Brazilian legal limits for AFM1.(AU)
Duzentas e cinquenta e sete amostras de leite provenientes das diferentes regiões geográficas do Brasil foram analisadas para realizar a determinação de aflatoxina M1 (AFM1). As AFM1 foram extraídas por meio de colunas de imunoafinidade, separadas por cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (C-18) e quantificadas por detector de fluorescência (CLAE-FL). Os limites de quantificação (LQ) foram de 0,008 µg/kg e 0,080 µg/kg para o leite fluido e em pó, respectivamente. AFM1 foi detectada em 209 (81,3 %) amostras, sendo 26 (63,4 %), 105 (84,0 %) e 78 (85,7 %) para o leite pasteurizado, UHT (Ultra-high Temperature) e em pó, respectivamente. A maior concentração de AFM1 no leite em pó foi encontrada em uma amostra proveniente de Minas Gerais (1,210 µg/kg). No leite UHT e pasteurizado, os maiores níveis foram encontrados em uma amostra de Sergipe (0,120 µg/kg) e Goiás (0,050 µg/kg), respectivamente. Nenhuma amostra analisada ultrapassou os limites da legislação brasileira em vigor para AFM1.(AU)
Assuntos
Leite/microbiologia , Aflatoxina M1/análise , Micotoxinas , Bovinos , Cromatografia Líquida de Alta PressãoResumo
Aflatoxinas B1(AFB1) são metabólitos secundários prejudiciais produzido principalmente pelos fungos Aspergillus flavus e Aspergillus parasiticus, são imunossupressores e carcinogênico. As dietas contaminadas com AFB1 são fornecidas para animais lactantes, a toxina é metabolizada principalmente no fígado, irão excretar aflatoxina M1, transportado para a glândula mamária via sangue e transferido para o leite. Por esse motivo, objetivou-se avaliar o uso de adsorvente biológico sobre desempenho produtivo, composição do leite, excreção de aflatoxina M1 no leite, função hepática, renal e viabilidade econômica do adsorvente em vacas leiteiras recebendo dietas experimentalmente contaminadas com aflatoxina B1. Foram utilizadas 05 vacas primíparas da raça Jersey, com produção de leite= 15.0 ± 4,25 kg/dia, peso médio das vacas = 410 ± 36.50 kg. O delineamento em quadrado latino, sendo 5 tratamentos e 5 períodos. Os tratamentos foram: 1- CONTROLE (sem micotoxinas e sem adsorvente); 2- MICOTOXINA (adição de 200 µg de aflatoxina/kg de concentrado e sem adsorvente); 3- ADSORVENTE (adição de 200 µg de aflatoxina/kg de concentrado + 2 kg de adsorvente ADS/tonelada de concentrado) 4- ANT1 (adição de 200 µg de aflatoxina/kg de concentrado + 1 kg de ANT. /tonelada de concentrado), 5- ANT3 (adição de 200 µg de aflatoxina/kg de concentrado + 3 kg de ANT. /tonelada de concentrado). Foram realizadas analises das amostras de alimentos da dieta, para presença de micotoxinas, além da produção e composição do leite, presença e excreção de AFB1 nas amostras de leite cru, analise dos parâmetros sanguíneos. Além de uma análise de viabilidade econômica. A inclusão de adsorvente em dietas contaminadas com AFB1 melhorou a produção de leite, significativamente maior no grupo ANT3 (21,80 kg/d) do que nos grupos MIC (16,38 kg/d). O tratamento foi eficaz na absorção AFB1 no trato gastrointestinal de vacas, reduzindo assim a excreção de AFM1 no leite. Os resultados sugerem um efeito positivo do uso ANTIMICOX MR na imunidade animal.
Aflatoxin B1(AFB1) are harmful secondary metabolites produced mainly by the fungi Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus, are immunosuppressive and carcinogenic. Diets contaminated with AFB1 are fed to lactating animals, the toxin is metabolized mainly in the liver, will excrete aflatoxin M1, transported to the mammary gland via blood and transferred to the milk. For this reason, we aimed to evaluate the use of biological adsorbent on productive performance, milk composition, excretion of aflatoxin M1 in milk, liver and kidney function and economic feasibility of the adsorbent in dairy cows receiving diets experimentally contaminated with aflatoxin B1. Five primiparous Jersey cows were used, with milk production= 15.0 ± 4.25 kg/day, average cow weight = 410 ± 36.50 kg. The design was a latin square, with 5 treatments and 5 periods. The treatments were: 1- CONTROL (no mycotoxins and no adsorbent); 2- MYCOTOXIN (addition of 200 µg aflatoxin/kg concentrate and no adsorbent); 3-ADSORBENT (addition of 200 µg aflatoxin/kg concentrate + 2 kg of adsorbent ADS/ton of concentrate) 4- ANT1 (addition of 200 µg aflatoxin/kg concentrate + 1 kg ANT. /5- ANT3 (addition of 200 µg aflatoxin/kg concentrate + 3 kg ANT/ton concentrate). Analyses of the feed samples of the diet were performed for the presence of mycotoxins, in addition to milk production and composition, presence and excretion of AFB1 in the raw milk samples, analysis of blood parameters. In addition to an economic feasibility analysis. The inclusion of adsorbent in diets contaminated with AFB1 improved milk production, significantly higher in the ANT3 group (21.80 kg/d) than in the MIC groups (16.38 kg/d). The treatment was effective on AFB1 absorption in the gastrointestinal tract of cows, thus reducing AFM1 excretion in milk. The results suggest a positive effect of ANTIMICOX MR use on animal immunity.
Resumo
Este estudo, teve como objetivo, avaliar a ação da pentoxifilina e melatonina sobre o estresse oxidativo em lesões hepáticas ocasionado por Aflatoxina B1 em Ratos Wistar. Foram utilizados 40 ratos Wistar machos com 70 dias de idade. Os animais receberam DMSO 3%, 1 mg/ kg AFB1, 1 mg/kg AFB1 + 5 mg / kg de MEL, 1 mg/kg AFB1 + 100 mg /kg de PTX + 5 mg / kg e 1 mg/kg AFB1 + 100 mg/kg de PTX. Nos níveis de enzimas oxidantes e antioxidantes, a mensuração em nível sérico, o NO reduziu em todos grupos, o MDA tecidual elevou nos grupos PTX e MEL+PTX. A GST tecidual reduziu 0,47% para AFB1 e a CAT elevou no grupo AFB1; MEL e PTX. A nível sérico SOD reduziu em todos grupos e a PTN reduziu em PTX e PTX+MEL. Não foram observadas diferenças significativas entre AST, ALT, FA e GGT, bem como, em área de glicogênio hepático. Microscopicamente os animais que receberam AFB1 observamos proliferação e ativação de células de Kupffer, necrose de hepatócitos periportais e binucleação dos hepatócitos. No grupo MEL foi observado, proliferação de ductos biliares, hepatócitos binucleares e discreta necrose hepática. Os animais tratados com PTX tiveram congestão moderada, necrose discreta, proliferação de células de Kupffer, hiperplasia de ductos com pleomorfismo celular, binucleação. Os animais que recebram MEL+PTX proliferação e ativação de ductos biliares, necrose de hepatócitos periportais A histomorfométria hepática, revelou que os animais que receberam AFB1, PTX e MEL+PTX tiveram redução de núcleo; o grupo AFB1 e PTX tiveram aumento de citoplasma de hepatócitos. As células de Kupffer reduziram nos grupos AFB1, PTX e MEL+PTX; o espaço porta reduziu em MEL e MEL+PTX . O capilar sinusóide reduziu em todos grupos. Adicionalmente a ánalise imunohistoquímica evidenciou marcação de arginase-1 em todos grupos experimentais, não havendo diferenças estatísticas na quantificação em pixel desta imunomarcação. Observou-se com os resultados expostos que a aflatoxina induziu a lesões hepatobiliares na dose e períodos de exposição, entretanto, a utilização de melatonina e pentoxifilina e sua associação, demonstrou que a melatonina minimizou lesões no parênquima hepático e o fígado mesmo após intoxicação a micotoxina expressou a arginase-1.
This study aimed to evaluate the action of pentoxifylline and melatonin on oxidative stress in liver systems by Aflatoxin B1 in Wistar Rats. Forty male Wistar rats with 70 days of age were used. Animals received DMSO 3%, 1 mg/kg AFB1, 1 mg/kg AFB1 + 5 mg/kg MEL, 1 mg/kg AFB1 + 100 mg/kg PTX + 5 mg/kg and 1 mg/kg AFB1 + 100 mg/kg PTX. In the levels of oxidants and antioxidants, measured at serum level, NO enzyme levels in all groups, cidual MDA increased in PTX and M+PTX groups. GST Tissue Corrector 0.47% for AFB1 and CAT increased in the AFB1 group; MEL and PTX. Serum SOD in all groups and PTN+ in PTX and PTXMEL. No significant differences were observed between AST, ALT FA and GGT, as well as in the liver area. Microscopically, the animals that received AFB1 observed and offered Kup necrosis cells, periportal cells and hepatocytes binucleation. In the MEL group, binuclear hepatocytes and mild hepatic necrosis were observed. Animals treated with PTX had moderate management, mild necrosis, Kup cell hyperplasia, ducts with pleomorphism, binucleation and cell hyperplasia. Animals that received reduced hepatocytes were bred for animals that received reduced AFB1, PTX and MEL+PTX from animals that received AFB1, PTX and animals that received reduced AFB1, PTX and MEL+PTX from animals that received AFB1, PTX and reduced MEL+PTX of animals that received the animals that received AFB1, PTX and MEL+PTX. the AFB1 and PTX group had increased hepatocyte cytoplasm. Kupffer cells will reduce in AFB1, PTX and MEL+PTX groups; the transport space in MEL and MEL+PTX . The sinusoid capillary in all groups. Additionally, an immunohistochemical analysis showed arginase-1 labeling in all experimental groups, with no statistical differences in pixel quantification of unlabeling. Observe with the results that exposure to flatoxin induced hepatobiliary treatments at the dose and exposure periods, however, the use of melatonin and pentoxifylline and their association, that melatonin aflatoxin minimized treatments in the liver parenchyma and even after intoxication the toxin expressed an arginase -1.
Resumo
The objective of this study was evaluate the presence of AFM1 in 82 samples of pasteurized bovine milk commercialized in 11 municipalities in the State of Parana, Brazil, from March 2010 to May 2011. Analytical methodology used was the enzyme immunoassay to determine qualitatively the presence of AFM1 (detection limit = 0.05 ?g.kg-1). AFM1 was not detected in any sample. The results were satisfactory. However, there is need for monitoring by government agencies, in order to provide safety, quality and integrity for human health.(AU)
O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença de aflatoxina M1 em 82 amostras de leite bovino pasteurizado, coletadas no período de março/2010 a maio/2011 em 11 municípios do Estado do Paraná, Brasil. A metodologia analítica utilizada foi o ensaio imunoenzimático empregada para determinar qualitativamente a presença de AFM1 (limite de detecção = 0,05 ?g.kg-1). AFM1 não foi detectada em nenhuma das amostras avaliadas. Apesar dos resultados satisfatórios, se faz necessário a realização de uma vigilância ativa desta micotoxina, a fim de proporcionar segurança, qualidade e integridade a saúde humana.(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Leite/microbiologia , Aflatoxina M1/análise , Micotoxinas , Técnicas ImunoenzimáticasResumo
This study aims at evaluating the effects of Zataria multiflora (Z. multiflora) essential oil (EO) on growth, aflatoxin production and transcription of aflatoxin biosynthesis pathway genes. Total RNAs of Aspergillus parasiticus (A.parasiticus) ATCC56775 grown in yeast extract sucrose (YES) broth medium treated with Z. multiflora EO were subjected to reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). Specific primers of nor-1, ver-1, omt-A and aflR genes were used. In parallel mycelial dry weight of samples were measured and all the media were assayed by high-pressure liquid chromatography (HPLC) for aflatoxinB1 (AFB1), aflatoxinB2 (AFB2), aflatoxinG1 (AFG1), aflatoxinG2 (AFG2) and aflatoxin total (AFTotal) production. The results showed that mycelial dry weight and aflatoxin production reduce in the presence of Z. multiflora EO (100 ppm) on day 5 of growth. It was found that the expression of nor-1, ver-1, omt-A and aflR genes was correlated with the ability of fungus to produce aflatoxins on day 5 in YES medium. RT-PCR showed that in the presence of Z.multiflora EO (100 ppm) nor-1, ver-1 and omtA genes expression was reduced. It seems that toxin production inhibitory effects of Z. multiflora EO on day 5 may be at the transcription level and this herb may cause reduction in aflatoxin biosynthesis pathway genes activity.(AU)
Assuntos
Aflatoxina M1 , Aspergillus , Óleos Voláteis , Antifúngicos , Reação em Cadeia da PolimeraseResumo
Capítulo 1: O estudo foi realizado com o objetivo de caracterizar e tipificar os Sistemas de Producao Leiteiros (SPL) e a ocorrencia de contaminacao por micotoxinas e aflatoxina M1 (AFM1) na regiao do Sisal da Bahia, identificando seus principais motivos e ocorrencia regional. Na primeira etapa foram estudados 111 SPL. Os produtores foram submetidos a uma entrevista semiestruturada e questionario guia aprovado, relativo a variaveis quantitativas e qualitativas. Foi utilizada a Analise Fatorial Multipla (AFM) seguida de Tipologia dos SPL. Foram realizadas analises qualitativas para AFM1 em todos os SPL. A segunda etapa teve inicio apos triagem, na qual 23 SPL foram acompanhados durante um ano e colhidas amostras de alimentos e leite de cabra para deteccao de micotoxinas e AFM1 no inverno e na primavera. Foi determinada a probabilidade de contaminacao por micotoxinas e AFM1 e as correlacoes entre a contaminacao delas dentro de cada Tipo. Foram colhidas amostras de leite para avaliacao fisico-quimica dos componentes em funcao dos Tipos de SPL utilizando AFM. Utilizou-se o Software R 2.15.0 e pacote Factor Miner em todas as analises. As dimensoes 1 e 2 foram caracterizadas pelas variaveis sociais e manejo sanitario, respectivamente. A partir da tipologia foram obtidos tres Tipos de SPL. Foram detectadas seis amostras positivas para micotoxinas (AF B1, B2, G2 e Zearalenona) em 8,22% (06/73) amostras de alimentos colhidos nos SPL selecionados. Houveram dois resultados positivos no inverno e quatro na primavera. Houveram tres amostras positivas para AFM1 (0,01 a 0,04 g/kg) e em nenhuma das amostras os niveis de concentracao excederam os limites maximos do Brasil (0,5 g/kg) e da Uniao Europeia (0,05 g/kg). Todos os casos positivos de contaminacao ocorreram no Tipo 3. O Tipo 3 apresentou 25% (p< 0,01) de probabilidade estimada para contaminacao por micotoxinas e 29% (p< 0,01) para AFM1 e os Tipos 1 e 2 apresentaram 0% (p> 0,01). A associacao bidirecional via correlacao demonstrou que a micotoxina teve correlacao de 85% com a AFM1 no teste de Kendall e de 88% no teste de Spermean. As comparacoes das probabilidades de contaminacao por micotoxinas e AFM1 entre os Tipos demonstraram que o Tipo 3 foi diferente (p<0,05) dos Tipos 1 e 2, e os Tipos 1 e 2 nao foram diferentes (p>0,05) entre si. As variaveis de qualidade do leite nao diferiram (p>0,05) entre os Tipos. Caracteristicas climaticas, de gestao (anotacoes zootecnicas, decisao e centralizacao), de manejo sanitario e alimentar, e o numero de atividades desenvolvidas no SPL diferenciam muito os produtores quanto a contaminacao. Houve contaminacao para micotoxinas e AFM1 nos SPL mais especializados em producao de leite (Tipo 3), porem nao apresentaram risco aos consumidores da regiao estudada em 2016. Capítulo 2: O objetivo deste estudo foi avaliar a composicao quimica, perfil proteico, rendimento do leite, composicao quimica e qualidade sensorial do queijo minas frescal produzido a partir do leite de diferentes genotipos de cabra sob o mesmo manejo dietetico. Foram utilizadas 23 cabras lactantes, recem-paridas, 9 da raca Saanen (PVI: 35,9 ± 1,3 kg), 8 da raca Moxoto (PVI: 25,9 ± 1,9 kg) e 6 da raca Anglo Nubiana (PVI: 42,6 ± 1,6 kg) com idade media de dois anos. As amostras de leite de diferentes grupos geneticos (GG) apresentaram os valores medios de gordura (3,66 6,79%), proteina (3,31 4,98%), lactose (4,27 4,47%), solidos totais (ST: 12,04 17,12%), extrato seco desengordurado (ESD: 8,84 10,33%), nitrogenio ureico (NU: 27,24 30,09%) e caseina (2,43 3,94%). Houve efeito (P<0,05) de GG para todos os componentes do leite avaliados. O periodo de lactacao influenciou (P<0,05) na producao de leite e nos teores de proteina, lactose, NU e caseina. Em relacao ao perfil proteico do leite, houve efeito (P <0,05) de GG sobre os teores de proteina bruta, nitrogenio nao-caseinoso, proteina verdadeira e caseina. Da mesma forma, foi verificado efeito (P<0,05) nas proporcoes de nitrogenio nao-proteico, nitrogenio nao-caseinoso, proteina verdadeira, caseina e proteina serica com base no teor de proteina total. Cabras Anglo Nubianas apresentaram valores intermediarios destes compostos em comparacao as cabras das racas Moxoto e a Saanen. Os valores medios da composicao do queijo de Minas frescal para materia seca (MS), umidade, cinzas (MS e umidade), EE (MS e umidade), proteina e rendimento (% e - L de leite/Kg de queijo) oscilaram entre 40,32 43,35%, 56,68 59,97%, 0,99 1,00%, 2,29 2,48%, 46,13 53,16%, 18,58 23,15%, 39,04 41,79%, 17,60 25,88% e 4,07 6,09%. Todas as variaveis de composicao do queijo apresentaram diferenca (P<0,05) durante o periodo de lactacao. Houve efeito (P<0,05) de interacao entre GG e periodo de lactacao para cinzas (MS%), EE (umidade%), proteina bruta e rendimentos (% e L de leite/Kg de queijo). Cabras Moxoto produziram leite de maior rendimento (%) em praticamente todos os periodos de lactacao. Houve efeito (P<0,05) de GG para textura na avaliacao sensorial do queijo de cabra. Queijos de Cabras Saanen apresentaram menor (P<0,05) nota quando comparados aos queijos de Anglo Nubiana e a Moxoto. Para os demais aspectos sensoriais avaliados: cor, odor, sabor, aceitacao global nao houve diferenca (P>0,05). O Indice de Aceitabilidade do queijo minas frescal apresentou percentuais de 86,63% (Moxoto), 86,07% (Anglo) e 84,55% (Saanen). Foi utilizada analise de componentes principais para buscar a discriminacao entre os GG no perfil sensorial de queijos. Houve separacao entre as amostras de acordo com a aproximacao das caracteristicas sensoriais entre os queijos das racas Anglo Nubiana e da Moxoto. Podemos concluir que os parametros fisico-quimicos do leite e do queijo de cabras foram diferentes de entre as racas estudadas. Cabras Moxoto apresentaram menor producao de leite, maior rendimento do leite e melhor perfil sensorial quando comparado as racas Saanen e Anglo Nubiana. A textura do queijo minas frescal e uma caracteristica sensorial influenciada pela raca das cabras.
Chapter 1: The objective of this study was to characterize and typify Milk Production Systems (MPS) and the occurrence of contamination by mycotoxins and aflatoxin M1 (AFM1) in the Sisal Region of Bahia, identifying their main reasons, regional occurrence, and prevalence. In the first stage, 111 MPS were studied. The producers were submitted to a semi-structured interview and approved guide questionnaire following the methodologies described by Foody (2003) and Ramos (2008), regarding quantitative and qualitative variables. It was used a Multiple Factorial Analysis (MFA) followed by MPS Typology. Qualitative analyzes were performed for AFM1 in all MPS. The second stage started after the screening, in which 23 MPS were followed for one year and food and milk samples were collected for mycotoxins and AFM1 detection in the winter and spring. The probability of contamination by mycotoxins and AFM1 and the correlations between the contamination of them within each Type were determined. Milk samples were collected for physicochemical analysis of the components according to MPS Types using AFM. Software R 2.15.0 and Factor Miner package were used in all analyzes. Dimensions 1 and 2 were characterized by social variables and sanitary management, respectively. From the typology, three types of MPS were obtained. Six positive samples for mycotoxins (AF B1, B2, G2 and Zearalenone) were detected in 8.22% (06/73) samples of foods collected from the selected MPSs. There were two positive results in the winter and four in the spring seasons. There were three positive samples for AFM1 (0.01 to 0.04 g / kg) and, in none of the samples, did the concentration levels exceed the maximum Brazilian limits (0.5 g / kg) (BRASIL, 2011) and the European Union (EU) (0.05 g / kg). All positive cases of contamination occurred in Type 3. Type 3 presented 25% (P<0.01) of probability estimated for mycotoxin contamination and 29% (P<0.01) for AFM1 and, Types 1 and 2, presented 0% (P>0.01). Bidirectional association via correlation showed that mycotoxin had a correlation of 85% with AFM1 in the Kendall and 88% in the Spermean tests. Comparisons of probabilities of contamination by mycotoxins and AFM1 among Types showed that Type 3 was different (P<0.05) from Types 1 and 2, and Types 1 and 2 were not different (P>0.05) between them. The milk quality variables did not differ (P>0.05) between the types. Climatic characteristics, management (zootechnical notes, decision, and centralization), of sanitary and food management, and the number of activities developed in the MPS greatly differentiate producers from contamination. There was contamination for mycotoxins and AFM1 in more specialized MPS in milk production (Type 3); however, did not present risk to the consumers of the studied region in 2016. Chapter 2: The objective of this study was to evaluate the chemical composition, proteic profile, milk yield, chemical composition and sensorial quality of Minas frescal cheese produced from milk of different goat genotypes under the same dietary management. Twenty-nine lactating goats, 9 Saanen (IBW: 35.9 ± 1.3 kg), 8 Moxoto breed (IBW: 25.9 ± 1.9 kg) and 6 Anglo Nubian breed (IBW: 42.6 ± 1.6 kg) with mean average of two years. The milk samples from different genetic groups (GG) showed mean values of fat (3.66 - 6.79%), protein (3.31 - 4.98%), lactose (4.27 - 4.47%), total solids (TS: 12.04-17.12%), total dry extract (TDE: 8.84-10.33%), ureic nitrogen (UN: 27.24- 30.09%) and casein (2.43-3.94%). There was an effect (P <0,05) of goat genotypes for all milk components evaluated. There was effect of the lactation period (P<0,05) on milk yield and protein, lactose, UN and casein levels. In relation to the proteic profile of the milk, there was effect (P<0,05) of GG on the crude protein, non-casein nitrogen, true protein and casein contents. Likewise, there was effect (P<0,05) on the proportions of non-protein nitrogen, non-casein nitrogen, true protein, casein and serum protein based on the total protein content. Anglo Nubian goats presented intermediate values of these compounds in comparison to the goats from Moxoto and Saanen genotypes. The mean values of the composition of Minas frescal cheese for dry matter (DM), moisture, ash (DM and humidity), EE (DM and moisture), protein and yield (% and liters milk (L) / kg cheese) ranged from 40.32 - 43.35%, 56.68 - 59.97%, 0.99 - 1.00%, 2.29 - 2.48%, 46.13 - 53.16%, 18.58 - 23.15% 39.04 - 41.79%, 17.60 - 25.88% and 4.07 - 6.09%. All of the cheese composition variables showed a difference (P<0,05) during the lactation period. There was an interaction effect (P<0.05) between GG and lactation period for ash (DM %), EE (moisture %), crude protein and yields (% and L milk / kg cheese). Moxoto goats produced higher milk yield (%) in almost all lactation periods. There was an effect (P <0.05) of GG for texture in the sensory evaluation of goat cheese. Saanen goat cheese presented lower (P<0.05) grade when compared to Anglo Nubian and Moxoto cheeses. For the other sensorial aspects evaluated: color, odor, taste, overall acceptance there was no difference (P>0.05). The Acceptability Index of the Minas frescal cheese presented percentages of 86.63% (Moxoto), 86.07% (Anglo) and 84.55% (Saanen). Principal component analysis was used to search for discrimination between GG in the sensory profile of cheeses. The samples were separated according to the approximation of the sensorial characteristics between the cheeses of the Anglo Nubian and Moxoto breeds. It is concluded that the physical-chemical characteristics of milk and goat cheese were different from the studied breeds. Moxoto goats presented lower milk production, higher milk yield and better sensory profile when compared to the Saanen and Anglo Nubian breeds. The texture of the Minas frescal cheese is a sensorial characteristic influenced by the breed of goats.
Resumo
objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito protetivo da adição de biomassa de Saccharomyces cerevisiae (SC) residual, obtida da fermentação alcoólica de cana e cerveja contra a passagem de aflatoxina M1 para o leite. Para tanto, foi realizado ensaio preliminar in vitro de remoção de AFB1 em solução tampão fosfato pelas diferentes fontes de biomassa de SC (levedura de cana-de-açúcar seca e inativada, LCSI; levedura autolizada, LA; parede celular, PC; e co-produto de cervejaria parcialmente desidratado, CCPD), em temperatura ambiente pelos tempos de contato de 05, 10, 20 e 30 min. O ensaio in vivo foi realizado por meio de 20 vacas multíparas da raça holandesa que foram selecionadas em estágio médio de lactação. O delineamento experimental consistiu em dez tratamentos, um controle negativo, um controle positivo e dois tratamentos (com e sem inclusão de AFB1) para cada uma das quatro diferentes fontes de SC, durante um período de 10 dias para avaliar a produção e a composição do leite, escore de condição corporal e bioquímica sérica. A análise de amostras de leite para quantificação de AFM1 foi realizada empregando-se coluna de imunoafinidade para purificação associada a CLAE acoplada a espectrômetro de massa triplo quadrupolo. O valor do limite de quantificação de AFM1 foi 0,5 g kg-1. Amostras de ração foram analisadas para quantificação de AFB1 por meio de coluna de imunoafinidade para purificação associada a CLAE. O valor do limite de quantificação de AFB1 foi de 0,5 g.kg-1. Através do estudo in vitro foi possível observar que a viabilidade celular não é pré requisito para adsorção e que o tempo de incubação não interfere na capacidade de adsorção de AFB1. No estudo in vivo, não foi observado efeito da AFB1 e nem das diferentes fontes de biomassa de SC sobre o escore de condição corporal, produção e composição do leite. A bioquímica sérica (AST, ALT e PT) avaliada foi similar entre os grupos não intoxicados e intoxicado com AFB1. Os tratamentos LA e PC apresentaram maior capacidade de adsorção de AFB1 em vacas leiteiras previamente intoxicadas.
The aim of this study was to evaluate the protective effect of adding residual biomass of Saccharomyces cerevisiae (SC), obtained from the fermentation of sugarcane and beer against aflatoxin M1 passage into milk. Therefore, preliminary in vitro test of AFB1 removal in phosphate buffer solution by SC different biomass sources (inactive dry yeast sugarcane, IDYS, autolyzed yeast, AY; cell wall, CW and co- brewery partially dehydrated product, CBPDP) at room temperature for contact times of 05, 10, 20 and 30 min was performed. The in vivo assays were performed using 20 multiparous Holstein cows that were selected in mid lactation stage. The experimental design consisted of ten treatments, a negative control, a positive control and two treatments (with and without inclusion of AFB1) for each of four different sources of SC, over a period of 10 days to evaluate the milk yield and composition, body condition score and serum biochemistry. Milk sample analysis for quantification of AFM1 were carried out using an immunoaffinity column for purification associated with HPLC coupled to triple quadrupole mass spectrometer. The limit of quantification for AFM1 was 0.5 g. kg-1. Feed samples were analyzed for AFB1 quantification by immunoaffinity purification column associated with HPLC. The limit of quantification for AFB1 was 0.5 g.kg-1. For in vitro study it was observed that the cell viability is not prerequisite for adsorption and the incubation time does not interfere with AFB1 adsorption capacity. For in vivo study, there was no effect of AFB1 nor the different SC biomass sources on body condition score, milk yield and composition. There was no significant difference between the originated AFB1 levels from food samples in different days of the experimental period. Serum biochemical (AST, ALT, TP) evaluated was similar between the control group and intoxicated with AFB1. The AY and CW treatments had higher adsorption capacity in dairy cows previously intoxicated.
Resumo
A exposição à aflatoxina B1 (AFB1) ocorre predominantemente através da ingestão de alimentos contaminados. A AFB1 é biotransformada por enzimas hepáticas, levando à formação de adutos AFB1-N7-guanina e AFB1-lisina (AFB1-Lys), entre outros compostos que podem permanecer como resíduos no fígado, tais como aflatoxina M1 (AFM1) e aflatoxicol (AFL). Os produtos de biotransformação da AFB1 podem ser utilizados como biomarcadores de exposição às aflatoxinas através da dieta. O presente trabalho teve por objetivo verificar a aplicabilidade da determinação de biomarcadores de AFB1 na avaliação da eficiência de adsorventes em suínos. Foram utilizados 24 suínos machos castrados com 28 dias de idade, que após 21 dias de adaptação foram divididos em 4 tratamentos experimentais, em arranjo fatorial 2 x 2, correspondendo à dois níveis de incorporação de AFB1 às rações (0 e 1,1 mg/kg) e dois níveis de incorporação (0 e 0,5%) de Aluminossilicato de Cálcio e Sódio Hidratado (HSCAS) por 42 dias. Semanalmente foram analisados parâmetros de desempenho, coletadas amostras de soro e plasma para análises bioquímicas, hematológicas e dosagem de AFB1-Lys. Nos primeiros dez dias de intoxicação foram coletadas amostras diárias de urina para análise de produtos da biotransformação de AFB1 incluindo AFB1-N7-guanina. Após este período, as coletas de urina foram semanais. Ao final do experimento, foram coletadas amostras de soro, plasma heparinizado e com EDTA para avaliação de AFB1-Lys, e os animais foram abatidos para avaliação da carcaça e coleta de órgãos para avaliação do peso relativo, histopatologia e análise de resíduos. O HSCAS foi efetivo na adsorção in vitro de AFB1, cujos percentuais de ligação variaram de 36,83 a 100%, para concentrações do adsorvente entre 0,005 e 10 mg/10 mL. A adição de HSCAS restaurou significativamente (P<0,05) os efeitos deletérios sobre a maioria dos parâmetros avaliados. Em fígado, os níveis de AFB1, AFB2 e AFG1 foram menores (P<0,05) no tratamento com AFB1 e HSCAS, indicando que houve proteção do adsorvente nos animais deste grupo. Em urina, a AFM1 consistiu em ~93% do total de aflatoxinas excretadas quantificada. A inclusão de adsorvente nas dietas reduziu (P<0,05) os níveis urinários de AFB1, AFQ1 e AFB1-N7-guanina durante todo o experimento. Nos níveis de AFM1 houve redução significativa entre os dias 1 e 28 de intoxicação. Comparando-se com os resultados obtidos em soro e plasma heparinizado, os níveis de AFB1-Lys foram fortemente suprimidos em amostras com EDTA devido à interferência deste composto no processo de digestão enzimática. Os níveis semanais de AFB1-Lys séricos nos animais tratados com AFB1 e HSCAS foram menores (P<0,05) do que nos animais alimentados somente com AFB1 durante todo o período de intoxicação. Os dados indicam que níveis de AFB1, AFM1, AFQ1 e AFB1-N7-guanina urinária bem como AFB1-Lys sérica podem ser utilizados como biomarcadores de exposição para aflatoxinas em suínos. Além disso, as determinações de AFB1 e AFB1-N7-guanina urinária e AFB1-Lys sérica podem ser utilizadas para avaliar a capacidade de proteção dos adsorvente como biomarcadores de dose interna de AFB1, sendo capazes de demonstrar à severidade da intoxicação em cada animal. Outros estudos são necessários para esclarecer a toxicocinéticados biomarcadores avaliados em suínos.
Exposure to aflatoxin B1 (AFB1) occurs primarily through ingestion of contaminated food. AFB1 is biotransformed by liver enzymes leading to the formation of adducts AFB1-N7-guanine and AFB1-lysine (AFB1-lys), among other compounds which may remain as residue in the liver, such as Aflatoxin M1 (AFM1) and aflatoxicol (AFL). The products of AFB1 biotransformation can be used as exposure biomarkers to aflatoxins through diets. This study aims to verify the applicability of the determination of AFB1 biomarkers in the evaluation of adsorbents efficiency in swine. Twenty four barrows with 28 days of age were used. After 21 days of adaptation they were divided into 4 experimental treatments in a factorial 2 x 2, corresponding to two AFB1 incorporation levels to feed (0 to 1.1 mg / kg) and incorporating two levels (0 and 0.5%) of sodium calcium aluminosilicate hydrate (HSCAS) for 42 days. Performance parameters were weekly analyzed, as well the biochemical and hematological, and AFB1-Lys dosage. Urine samples were collected daily in the first ten days of intoxication to assess biotransformation products of AFB1, including AFB1-N7-guanine. After this period, the collection of urine samples occurs weekly. At the end of the experiment, serum, heparinized and EDTA plasma samples were collected for AFB1-Lys evaluation, and the animals were slaughtered to evaluate carcass and collection agencies to assess the relative weight, histopathology and residue analysis. The HSCAS was effective in in vitro adsorption of AFB1 binding percentages that ranged from 36.83 to 100% for the adsorbent concentrations between 0.005 and 10 mg/10 ml. Adding HSCAS restored significantly (P <0.05) the deleterious effects on the majority of the parameters evaluated. In liver, levels of AFB1, AFB2 and AFG1 were lower (P <0.05) in the treatment AFB1 and HSCAS, indicating that there was protection of the adsorbent in the animals of this group. In urine, AFM1 consisted of ~ 93% of total aflatoxins excreted and quantified. The inclusion of adsorbent in diets reduced (P <0.05) urinary levels of AFB1, AFQ1 and AFB1-N7-guanine throughout the experiment. In AFM1 levels decreased significantly between days 1 and 28 of poisoning. Compared with the results obtained in serum or heparinized plasma, AFB1-Lys levels were strongly suppressed in the samples with EDTA interference due to this compound in the enzyme digestion process. Weekly serum levels of AFB1-Lys in animals treated with AFB1 and HSCAS were lower (P <0.05) than animals treated with AFB1 alone during all the poisoning period. The data indicate that the urinary levels of AFB1, AFM1, AFQ1 and AFB1-N7-guanine and serum AFB1-Lys can be used as biomarkers of exposure to aflatoxins in pigs. Furthermore, the determinations of AFB1 and AFB1-N7-guanine urinary and serum AFB1-Lys can be used to evaluate the protective ability of the adsorbent as internal dose biomarkers, being able to demonstrate the severity of toxicity in each animal. Further studies are necessary to provide physiologically based toxicokinetics of the evaluated biomarkers in pigs.
Resumo
The purpose of this study was to characterize Eimeria bateri oocysts and to evaluate the aflatoxin effect in the morphometry of sporulated oocysts in Japanese quails infected naturally. Of a total of 50 quails naturally infected by E. bateri were randomly divided into two groups with 25 birds each. In one of them, quails were orally administered with aflatoxin in dose of 0.04 mg/kg body weight previously. Both experimental groups shed E. bateri oocysts. These oocysts were subspherical to ellipsoidal, 25.1 x 18.9 Lim, with bi-layered wall. Micropyle and residuum were absent, but one or more polar granules were present. Sporocysts elongate ovoid, 12.5 x 7.4 m. Stieda and substieda bodies were present. Sporocyst residuum was dispersed and sporozoites presented a nucleus and a refractile body. Histograms confirmed the presence of a single species, E. bateri. Linear regression proved that E. bateri oocysts are polymorphic, due, basically, to shape of these oocysts. The comparative morphometry between two experimental groups demonstrated that the aflatoxin influenced significantly in the E. bateri oocysts.
O objetivo deste estudo foi caracterizar os oocistos de Eimeria bateri e avaliar o efeito da aflatoxina na morfometria destes oocistos em codornas japonesas naturalmente infectadas. Cinqüenta codornas naturalmente parasitadas por E. bateri foram separadas aleatoriamente em dois grupos com 25 aves cada. Um dos grupos foi intoxicado experimentalmente com aflatoxina, por via oral, na dose de 0,04 mg/kg de peso vivo. Os dois grupos experimentais eliminaram oocistos de E. bateri nas fezes. Esses oocistos foram de subesféricos a elipsóides, 25,1 x 18,9 Lm, com parede dupla. A micrópila e o resíduo estavam ausentes, mas um ou vários grânulos polares estavam presentes. Esporocistos ovóides alongados, 12,5 x 7,4 L m. Os corpos de Stieda e substieda estavam presentes. O resíduo do esporocisto estava disperso e os esporozoítas apresentaram um núcleo e um corpo refráctil. Os histogramas confirmaram a presença de uma única espécie, E. bateri. A regressão linear comprovou que os oocistos de E. bateri são polimórficos, devido, basicamente, à forma desses oocistos. A morfometria comparativa entre os dois grupos experimentais, demonstrou que a aflatoxina influiu significativamente nos oocistos de E. bateri.
Resumo
Fumonisin B1 is a mycotoxin produced by Fusarium verticillioides and Fusarium proliferatum, and it is found chiefly in corn and corn-based products. Since its discovery fumonisin B1 has been associated with diseases in animals, such as leukoencephalomalacia in horses, and pulmonary edema in swine. On humans, the ingestion of foods with fumonisin B1 is associated with esophageal cancer. Aflatoxin M1 is the principal hydroxylated metabolite occurring in milk from animals which have consumed aflatoxin B1-contaminated feeds. It is also present in milk from nursing mothers who consumed foodstuffs with aflatoxin B1. In this study the effect of gamma-irradiation (60Co) was verified, in doses ranged from 0 to 20 kGy, in order to inactivate fumonisin B1 in corn flour and aflatoxin M1 in fluid and powdered milk. Fumonisin B1 was extracted from the samples with methanol:water (3:1). The extract was purified through immunoaffinity column followed by separation and quantification by means of high-performance liquid chromatography (HPLC) with o-phthaldialdehyde (OPA). For determining aflatoxin M1 the purification was done through immunoaffinity column followed by separation and quantification by means of HPLC with fluorescence detector. Gamma irradiation (60Co) at doses from 3 to 20 kGy reduced the fumonisin B1 content in a range of 11.2 % to 55.5 %. Gamma irradiation (60Co) at 20 kGy dose r
Fumonisina B1 é a micotoxina produzida por Fusarium verticillioides e Fusarium proliferatum e é encontrada principalmente em milho e produtos a base de milho. Desde sua descoberta a fumonisina B1 tem sido associada a doenças em animais, como leucoencefalomalácia em cavalos e edema pulmonar em suínos. Em humanos, o consumo de alimentos com fumonisina B1 tem sido associado com câncer esofágico. A aflatoxina M1 é o principal metabólito hidroxilado encontrado no leite de animais que consumiram rações contaminadas com aflatoxina B1, bem como no leite de lactantes que consumiram alimentos com esta substância. Neste estudo foi verificado o efeito da irradiação gama (60Co), em doses que variaram de 0 a 20 kGy, quanto à capacidade de inativar fumonisina B1 em farinha de milho e aflatoxina M1 em leite fluido e em pó. A fumonisina B1 foi extraída das amostras com metanol:água (8:2). O extrato foi purificado em coluna de imunoafinidade, seguido de separação e quantificação por meio de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detector de fluorescência, após derivatização com ortoftaldialdeído. Para efetuar a determinação da aflatoxina M1, a amostra foi purificada em coluna de imunoafinidade e a separação e a quantificação por meio de CLAE com detector de fluorescência. Foi observada uma redução da concentração da fumonisina B1 na faixa de 11,2 % a 55,5% em doses de 3 a 20 kGy de
Resumo
O objetivo do trabalho foi avaliar a capacidade de cepas de bactérias ácido-láticas (BAL) em remover a aflatoxina M1 (AFM1) em solução tampão fosfato salina (TFS) e em amostras de leite. Nos ensaios com TFS, verificou-se a influência do tempo de contato (15 min. ou 24 horas) entre as células de sete cepas de BAL e AFM1, as diferenças entre a eficiência de remoção das bactérias viáveis e inviabilizadas termicamente, e a estabilidade do complexo BAL/AFM1 formado. As três cepas de BAL com maior percentual (> 33%) de remoção da AFM1 nos ensaios com TFS foram re-avaliadas utilizando-se leite UHT (ultra-high-temperature) desnatado artificialmente contaminado com AFM1. Para isso, foram utilizadas somente células inviabilizadas termicamente, verificando-se o efeito da temperatura (4ºC ou 37ºC) sobre a capacidade de remoção da toxina por 15 minutos. A remoção média da AFM1 pelas cepas de BAL em TFS variou entre 5,60±0,45 e 45,67±1,65% (n=3), sendo que as células inviáveis obtiveram percentuais de remoção de AFM1 significativamente maiores que as células viáveis, em ambos os tempos de contato analisados (15 min. ou 24 horas), não havendo diferença significativa entre os tempos. Observou-se que o complexo BAL/AFM1 obtido nos ensaios com TFS é instável, pois 40,57±4,66 a 87,37±1,82% da AFM1 retida pela bactéria foram recuperados em solução após a lavagem do complexo com TFS. As três cepas de BAL com maior percentual de remoção da AFM1 em TFS (Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus delbrueckii spp. bulgaricus e Bifidobacterium lactis) não apresentaram diferenças significativas nos ensaios com leite UHT a 37ºC. Somente B. lactis apresentou maior capacidade de remover a AFM1 do leite UHT a 4ºC. Os resultados demonstraram que a remoção de AFM1 empregando-se as BAL em alimentos é viável para reduzir as concentrações da toxina a níveis seguros. Entretanto, estudos adicionais são necessários a fim de investigar os mecanismos envolvidos na remoção da toxina pelas BAL com vistas à aplicação em indústrias de alimentos
The purpose of this study was to evaluate the ability of strains of lactic acid bacteria (LAB) to remove aflatoxin M1 (AFM1) in phosphate buffer saline (PBS) and in milk samples. In the assays with PBS, the influence of contact time (15 min. or 24 hours) between the cells of seven LAB strains and AFM1 was evaluated, as well as the differences between the removal efficiency of viable and non-viable (heat-killed) bacteria, and the stability of AFM1/LAB complex produced. The three LAB strains with the highest percentage (> 33%) of AFM1 removal in the tests with PBS were reevaluated using UHT (ultra-high-temperature) skimmed milk spiked with AFM1. For these assays, only non-viable bacterial cells were used for checking the effect of temperature (4ºC or 37ºC) on the toxin removal capacity during 15 min. The mean AFM1 removal by LAB strains in PBS ranged from 5.60±0.45 and 45.67±1.65% (n=3). Non-viable cells showed AFM1 removal percentages significantly higher than viable cells in both contact times (15 min. or 24 hours), although there were not significant differences between these contact times. The AFM1/LAB complex resulted from the tests with PBS was unstable, as 40.57±4.66 to 87.37±1.82% of AFM1 retained by the bacteria were recovered in solution after washing the complex with PBS. The three LAB strains with the highest percentage of AFM1 removal in the PBS assays (Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus delbrueckii spp. bulgaricus and Bifidobacterium lactis) showed no significant differences in the UHT skimmed milk assays at 37ºC. Only B. lactis had greater ability to remove AFM1 in UHT milk at 4ºC. The results demonstrated that the removal of AFM1 by using LAB in foods is viable to reduce the toxin concentrations until safe levels. However, additional studies are needed to investigate the mechanisms involved in the toxin removal by LAB aiming its application in food industries
Resumo
Aflatoxin M1 is a toxic metabolic from aflatoxin B1, which is excreted in milk after the cows receive contaminated feed. The dairy cows in a farm in Itú city, São Paulo state, Brazil, were fed with cottonseed meal naturally contaminated with aflatoxin. The aflatoxins B1, B2, G1 and G2 were identifiedby TLC and quantified by fotodensitometry and the results were 43.5; 15.2; 9.1 and 8.6ng.g-1 respectively. The milk from these cows was also analyzed by higth performance liquid chromatography (HPLC) and 0.64ng.mL-1 aflatoxin M1 was quantified. The aflatoxins concentration were higher than the brazilian low permit, and this should be a damage to public health.
Aflatoxina M1 é um dos metabólitos tóxico da aflatoxina B1, excretada pelo leite de animais que ingerem alimentos contaminados. O presente trabalho descreve o caso de uma fazenda produtora de leite na região de Itú, São Paulo, onde os animais foram alimentados com farelo de algodão naturalmente contaminado com as aflatoxinas. As aflatoxinas B1, B2, G1 e G2 foram identificadas por CCD e quantificadas por fotodensitometria nas concentrações de 43,5; 15,2; 9,1 e 8,6ng.g-1 respectivamente. O leite destes animais foi analisado por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), e a aflatoxina M1 foi identificada e quantificada (0,64ng.mL-1). As concentrações encontradas para as aflatoxinas no farelo de algodão e no leite estão acima dos valores permitidos pela legislação brasileira, representando um risco à saúde pública.
Resumo
Aflatoxin M1 is a toxic metabolic from aflatoxin B1, which is excreted in milk after the cows receive contaminated feed. The dairy cows in a farm in Itú city, São Paulo state, Brazil, were fed with cottonseed meal naturally contaminated with aflatoxin. The aflatoxins B1, B2, G1 and G2 were identifiedby TLC and quantified by fotodensitometry and the results were 43.5; 15.2; 9.1 and 8.6ng.g-1 respectively. The milk from these cows was also analyzed by higth performance liquid chromatography (HPLC) and 0.64ng.mL-1 aflatoxin M1 was quantified. The aflatoxins concentration were higher than the brazilian low permit, and this should be a damage to public health.
Aflatoxina M1 é um dos metabólitos tóxico da aflatoxina B1, excretada pelo leite de animais que ingerem alimentos contaminados. O presente trabalho descreve o caso de uma fazenda produtora de leite na região de Itú, São Paulo, onde os animais foram alimentados com farelo de algodão naturalmente contaminado com as aflatoxinas. As aflatoxinas B1, B2, G1 e G2 foram identificadas por CCD e quantificadas por fotodensitometria nas concentrações de 43,5; 15,2; 9,1 e 8,6ng.g-1 respectivamente. O leite destes animais foi analisado por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), e a aflatoxina M1 foi identificada e quantificada (0,64ng.mL-1). As concentrações encontradas para as aflatoxinas no farelo de algodão e no leite estão acima dos valores permitidos pela legislação brasileira, representando um risco à saúde pública.
Resumo
Fumonisin B1 is a mycotoxin produced by Fusarium verticillioides and Fusarium proliferatum, and it is found chiefly in corn and corn-based products. Since its discovery fumonisin B1 has been associated with diseases in animals, such as leukoencephalomalacia in horses, and pulmonary edema in swine. On humans, the ingestion of foods with fumonisin B1 is associated with esophageal cancer. Aflatoxin M1 is the principal hydroxylated metabolite occurring in milk from animals which have consumed aflatoxin B1-contaminated feeds. It is also present in milk from nursing mothers who consumed foodstuffs with aflatoxin B1. In this study the effect of gamma-irradiation (60Co) was verified, in doses ranged from 0 to 20 kGy, in order to inactivate fumonisin B1 in corn flour and aflatoxin M1 in fluid and powdered milk. Fumonisin B1 was extracted from the samples with methanol:water (3:1). The extract was purified through immunoaffinity column followed by separation and quantification by means of high-performance liquid chromatography (HPLC) with o-phthaldialdehyde (OPA). For determining aflatoxin M1 the purification was done through immunoaffinity column followed by separation and quantification by means of HPLC with fluorescence detector. Gamma irradiation (60Co) at doses from 3 to 20 kGy reduced the fumonisin B1 content in a range of 11.2 % to 55.5 %. Gamma irradiation (60Co) at 20 kGy dose r
Fumonisina B1 é a micotoxina produzida por Fusarium verticillioides e Fusarium proliferatum e é encontrada principalmente em milho e produtos a base de milho. Desde sua descoberta a fumonisina B1 tem sido associada a doenças em animais, como leucoencefalomalácia em cavalos e edema pulmonar em suínos. Em humanos, o consumo de alimentos com fumonisina B1 tem sido associado com câncer esofágico. A aflatoxina M1 é o principal metabólito hidroxilado encontrado no leite de animais que consumiram rações contaminadas com aflatoxina B1, bem como no leite de lactantes que consumiram alimentos com esta substância. Neste estudo foi verificado o efeito da irradiação gama (60Co), em doses que variaram de 0 a 20 kGy, quanto à capacidade de inativar fumonisina B1 em farinha de milho e aflatoxina M1 em leite fluido e em pó. A fumonisina B1 foi extraída das amostras com metanol:água (8:2). O extrato foi purificado em coluna de imunoafinidade, seguido de separação e quantificação por meio de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detector de fluorescência, após derivatização com ortoftaldialdeído. Para efetuar a determinação da aflatoxina M1, a amostra foi purificada em coluna de imunoafinidade e a separação e a quantificação por meio de CLAE com detector de fluorescência. Foi observada uma redução da concentração da fumonisina B1 na faixa de 11,2 % a 55,5% em doses de 3 a 20 kGy de
Resumo
The objective of this study was evaluate the presence of AFM1 in 82 samples of pasteurized bovine milk commercialized in 11 municipalities in the State of Parana, Brazil, from March 2010 to May 2011. Analytical methodology used was the enzyme immunoassay to determine qualitatively the presence of AFM1 (detection limit = 0.05 ?g.kg-1). AFM1 was not detected in any sample. The results were satisfactory. However, there is need for monitoring by government agencies, in order to provide safety, quality and integrity for human health.
O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença de aflatoxina M1 em 82 amostras de leite bovino pasteurizado, coletadas no período de março/2010 a maio/2011 em 11 municípios do Estado do Paraná, Brasil. A metodologia analítica utilizada foi o ensaio imunoenzimático empregada para determinar qualitativamente a presença de AFM1 (limite de detecção = 0,05 ?g.kg-1). AFM1 não foi detectada em nenhuma das amostras avaliadas. Apesar dos resultados satisfatórios, se faz necessário a realização de uma vigilância ativa desta micotoxina, a fim de proporcionar segurança, qualidade e integridade a saúde humana.