Resumo
In this study, neem leaves were successively extracted with petroleum ether, 95% ethanol and water and the insecticidal activities of these extracts against Oxya chinensis larvae were measured. The results showed that 95% ethanol extract gave the highest extraction yield and insecticidal activity, and it was further extracted with five different solvents. The petroleum ether extract from the 95% ethanol extract possessed the highest insecticidal activity with median lethal concentration values ranging from 14.93 to 55.66mg/mL. The gas chromatography-mass spectrometer analysis showed that the petroleum ether extract mainly composed of alkanes, olefin, esters and amide. The pathological examination revealed that the prominent lesions, including reduced regenerative cells in midgut and swelled and degenerated cylindrical cells, were observed in the 5th instar Oxya chinensis after treatment. The ultrastructural features showed that the cylindrical cells, microvilli and mitochondria were seriously damaged. These results suggested that the petroleum ether extract from neem leaves had potent insecticidal activity and could be a candidate insecticide.(AU)
Nesse estudo, folhas "neem" foram extraídas com sucesso com éter de petróleo, 95% de etanol e água, e as atividades inseticidas desses extratos foram medidas contra larvas de Oxya chinesis. Os resultados mostram que extrato com 95% de etanol deram o maior resultado de extração e atividade inseticida e foi então extraído utilizando mais cinco diferentes solventes. O éter de petróleo do extrato de 95% etanol apresentou maior atividade inseticida com concentração letal média variando de 14.93 a 55.66mg/mL. A análise por cromatografia de massa mostrou que o extrato de éter de petróleo está composto principalmente de alcanos, alcenos, ésteres e amidas. A avaliação patológica revelou que as lesões proeminentes, inclusive células regenerativas reduzidas no intestino e células cilíndricas edemaciadas e degeneradas foram observadas no quinto estágio de desenvolvimento da Oxya chinesis após tratamento. As características ultraestruturais mostraram que as células cilíndricas, microvilos e mitocôndrias apresentavam lesões graves. Esses resultados sugerem que o extrato de éter de petróleo de folhas de "neem" tem atividade inseticida potente e pode ser um candidato a inseticida.(AU)
Assuntos
Azadirachta/fisiologia , Inseticidas/análiseResumo
In this study, neem leaves were successively extracted with petroleum ether, 95% ethanol and water and the insecticidal activities of these extracts against Oxya chinensis larvae were measured. The results showed that 95% ethanol extract gave the highest extraction yield and insecticidal activity, and it was further extracted with five different solvents. The petroleum ether extract from the 95% ethanol extract possessed the highest insecticidal activity with median lethal concentration values ranging from 14.93 to 55.66mg/mL. The gas chromatography-mass spectrometer analysis showed that the petroleum ether extract mainly composed of alkanes, olefin, esters and amide. The pathological examination revealed that the prominent lesions, including reduced regenerative cells in midgut and swelled and degenerated cylindrical cells, were observed in the 5th instar Oxya chinensis after treatment. The ultrastructural features showed that the cylindrical cells, microvilli and mitochondria were seriously damaged. These results suggested that the petroleum ether extract from neem leaves had potent insecticidal activity and could be a candidate insecticide.(AU)
Nesse estudo, folhas "neem" foram extraídas com sucesso com éter de petróleo, 95% de etanol e água, e as atividades inseticidas desses extratos foram medidas contra larvas de Oxya chinesis. Os resultados mostram que extrato com 95% de etanol deram o maior resultado de extração e atividade inseticida e foi então extraído utilizando mais cinco diferentes solventes. O éter de petróleo do extrato de 95% etanol apresentou maior atividade inseticida com concentração letal média variando de 14.93 a 55.66mg/mL. A análise por cromatografia de massa mostrou que o extrato de éter de petróleo está composto principalmente de alcanos, alcenos, ésteres e amidas. A avaliação patológica revelou que as lesões proeminentes, inclusive células regenerativas reduzidas no intestino e células cilíndricas edemaciadas e degeneradas foram observadas no quinto estágio de desenvolvimento da Oxya chinesis após tratamento. As características ultraestruturais mostraram que as células cilíndricas, microvilos e mitocôndrias apresentavam lesões graves. Esses resultados sugerem que o extrato de éter de petróleo de folhas de "neem" tem atividade inseticida potente e pode ser um candidato a inseticida.(AU)
Assuntos
Azadirachta/fisiologia , Inseticidas/análiseResumo
Abstract Piper tuberculatum (Piperaceae) is a species that accumulates especially amides as secondary metabolites and several biological activities was previously reported. In this article, we report a proteomic study of P. tuberculatum. Bidimensional electrophoresis (2D SDS-PAGE) and mass spectrometry (ESI-Q-TOF) were used in this study. Over a hundred spots and various peptides were identified in this species and the putative functions of these peptides related to defense mechanism as biotic and abiotic stress were assigned. The information presented extend the range of molecular information of P. tuberculatum.
Resumo Piper tuberculatum (Piperaceae) é uma espécie que acumula especialmente amidas como metabólitos secundários e diversas atividades biológicas dessa espécie foram relatadas anteriormente. No presente artigo, relatamos um estudo proteômico dessa espécie. Eletroforese bidimensional (2D SDS-PAGE) e espectrometria de massas (ESI-Q-TOF) foram utilizadas nesse estudos. Mais de cem spots e vários peptídeos foram identificados nesta espécie e as funções putativas desses peptídeos relacionadas a mecanismo de defesa como estresse biótico e abiótico foram atribuídos. As informações apresentadas ampliam a gama de informações moleculares dessa espécie.
Resumo
Abstract Piper tuberculatum (Piperaceae) is a species that accumulates especially amides as secondary metabolites and several biological activities was previously reported. In this article, we report a proteomic study of P. tuberculatum. Bidimensional electrophoresis (2D SDS-PAGE) and mass spectrometry (ESI-Q-TOF) were used in this study. Over a hundred spots and various peptides were identified in this species and the putative functions of these peptides related to defense mechanism as biotic and abiotic stress were assigned. The information presented extend the range of molecular information of P. tuberculatum.
Resumo Piper tuberculatum (Piperaceae) é uma espécie que acumula especialmente amidas como metabólitos secundários e diversas atividades biológicas dessa espécie foram relatadas anteriormente. No presente artigo, relatamos um estudo proteômico dessa espécie. Eletroforese bidimensional (2D SDS-PAGE) e espectrometria de massas (ESI-Q-TOF) foram utilizadas nesse estudos. Mais de cem spots e vários peptídeos foram identificados nesta espécie e as funções putativas desses peptídeos relacionadas a mecanismo de defesa como estresse biótico e abiótico foram atribuídos. As informações apresentadas ampliam a gama de informações moleculares dessa espécie.
Resumo
Piper tuberculatum (Piperaceae) is a species that accumulates especially amides as secondary metabolites and several biological activities was previously reported. In this article, we report a proteomic study of P. tuberculatum. Bidimensional electrophoresis (2D SDS-PAGE) and mass spectrometry (ESI-Q-TOF) were used in this study. Over a hundred spots and various peptides were identified in this species and the putative functions of these peptides related to defense mechanism as biotic and abiotic stress were assigned. The information presented extend the range of molecular information of P. tuberculatum.(AU)
Piper tuberculatum (Piperaceae) é uma espécie que acumula especialmente amidas como metabólitos secundários e diversas atividades biológicas dessa espécie foram relatadas anteriormente. No presente artigo, relatamos um estudo proteômico dessa espécie. Eletroforese bidimensional (2D SDS-PAGE) e espectrometria de massas (ESI-Q-TOF) foram utilizadas nesse estudos. Mais de cem spots e vários peptídeos foram identificados nesta espécie e as funções putativas desses peptídeos relacionadas a mecanismo de defesa como estresse biótico e abiótico foram atribuídos. As informações apresentadas ampliam a gama de informações moleculares dessa espécie.(AU)
Assuntos
Proteômica , Piperaceae/metabolismo , Eletroforese em Gel Bidimensional , Espectrometria de MassasResumo
Abstract Piper tuberculatum (Piperaceae) is a species that accumulates especially amides as secondary metabolites and several biological activities was previously reported. In this article, we report a proteomic study of P. tuberculatum. Bidimensional electrophoresis (2D SDS-PAGE) and mass spectrometry (ESI-Q-TOF) were used in this study. Over a hundred spots and various peptides were identified in this species and the putative functions of these peptides related to defense mechanism as biotic and abiotic stress were assigned. The information presented extend the range of molecular information of P. tuberculatum.
Resumo Piper tuberculatum (Piperaceae) é uma espécie que acumula especialmente amidas como metabólitos secundários e diversas atividades biológicas dessa espécie foram relatadas anteriormente. No presente artigo, relatamos um estudo proteômico dessa espécie. Eletroforese bidimensional (2D SDS-PAGE) e espectrometria de massas (ESI-Q-TOF) foram utilizadas nesse estudos. Mais de cem spots e vários peptídeos foram identificados nesta espécie e as funções putativas desses peptídeos relacionadas a mecanismo de defesa como estresse biótico e abiótico foram atribuídos. As informações apresentadas ampliam a gama de informações moleculares dessa espécie.
Resumo
Abstract Piper tuberculatum (Piperaceae) is a species that accumulates especially amides as secondary metabolites and several biological activities was previously reported. In this article, we report a proteomic study of P. tuberculatum. Bidimensional electrophoresis (2D SDS-PAGE) and mass spectrometry (ESI-Q-TOF) were used in this study. Over a hundred spots and various peptides were identified in this species and the putative functions of these peptides related to defense mechanism as biotic and abiotic stress were assigned. The information presented extend the range of molecular information of P. tuberculatum.
Resumo Piper tuberculatum (Piperaceae) é uma espécie que acumula especialmente amidas como metabólitos secundários e diversas atividades biológicas dessa espécie foram relatadas anteriormente. No presente artigo, relatamos um estudo proteômico dessa espécie. Eletroforese bidimensional (2D SDS-PAGE) e espectrometria de massas (ESI-Q-TOF) foram utilizadas nesse estudos. Mais de cem spots e vários peptídeos foram identificados nesta espécie e as funções putativas desses peptídeos relacionadas a mecanismo de defesa como estresse biótico e abiótico foram atribuídos. As informações apresentadas ampliam a gama de informações moleculares dessa espécie.
Resumo
En la búsqueda de la obtención de una mejor proteína de origen animal para el consumo humano, se estableció una rede de prácticas interconectadas, las cuales comienzan en el momento de la alimentación de los animales en la propiedad hasta el momento del consumo humano. Dentro de estas prácticas, en relación con el animal post- mortem y su seguimiento, se puede relacionar como esencial para la formación de un producto de calidad. Por lo tanto, los aspectos físico - químicas inherentes a la materia prima son fundamentales, y esta formación está directamente relacionada con la calidad de la proteína resultante en el proceso. Para evaluar las características de una proteína de un alimento, una de las técnicas utilizadas es la electroforesis, en el que se puede comprobar las propiedades de éstos y de sus perfiles, incluyendo la identificación de lo que surge especie. Este estudio tuvo como objetivo identificar y caracterizar la pérdida específica de las fracciones de proteínas que se producen en la post mortem mediante la evaluación de la movilidad relativa y análisis densitométrico de las proteínas del pectoral mayor de pollos de engorde. Las muestras de carne se utilizaron para 5 pollos de engorde sacrificados en un laboratorio, con muestras tomadas a intervalos de 30 minutos, un total de seis cosechas. Después de la extracción de muestras de proteínas,logrado para ejecutar electroforesis en 10 % SDS - PAGE y la identificación de la imagen fraccionado celebrada de extracción de gel en la captura de la imagen VDS y su programaestadístico ANOVA en bandas de proteína, para la tabulación de los resultados. Con el análisis de los datos, fue posible ver cuando durante el proceso de resolución del rigor mortis,en el post mortem se produce una pérdida significativa de fracciones de proteína, con una mayor pérdida de proteína con una mayor densidad. También puede analizar que debido a que el uso de pollos de engorde de un mismo lote, el sexo, y el peso [...]
In the quest for obtaining better animal protein for human consumption, was established a network of interconnected practices, which begin at the time of feeding the animal on the property until the time of human consumption. Within these practices, in relation to the animal post-mortem and your monitoring, can be related as essential to the formation of a quality product. Therefore, the physical-chemical aspects inherent in raw material are fundamental, and this formation is directly related to the quality of the resulting protein in the process. To evaluate the characteristics of a protein of a food, one of the techniques widely used is the electrophoresis, in which we can check the properties of these and their profiles, including identifying what species arises. This study aimed to identify and characterize the specific loss of protein fractions that occur in post mortem by evaluating the relative mobility and densitometric analysis of proteins from Pectoralis major of broiler. Meat samples were used for 5 broilers slaughtered in a laboratory, with samples taken at intervals of 30 minutes, totaling six harvests. After extraction of protein samples, succeeded to run electrophoresis in 10% SDS-PAGE and identification of protein bands fractionated held extraction gel image in Image Capture VDS and your ANOVA in statistical program, for tabulation of results. Withthe analysis of the data, it was possible to see when during the process of resolution of rigormortis, in the post mortem occurs one significant loss of protein fractions, with higher loss inprotein with greater density. You can also analyze that because the use of broilers of the samebatch, sex, and weight, with management similarly, no expected significant changes inrelative mobility, because this proving to be a specific characteristic and distinctive for eachspecies [...]
Na busca por obtenção de proteínas animais para alimentação humana, foi estabelecida uma rede de práticas interligadas, que se iniciam no momento da alimentação do animal na propriedade até o momento do consumo humano. Dentro destas práticas, a que se refere ao post mortem do animal e seu acompanhamento pode ser relacionada como essencial para formação de um produto de qualidade. Para tanto, os aspectos físico-químicos inerentes à matéria-prima são fundamentais e sua formação está diretamente relacionada com a qualidade da proteína resultante no processo. Para avaliar as características proteicas de um alimento, uma técnica muito utilizada é a de eletroforese, na qual se podem conferir as propriedades destas proteínas e seus perfis, inclusive identificando de qual espécie advém. O presente trabalho teve como objetivo específico identificar e caracterizar as perdas de frações proteicas que acontecem no post mortem pela avaliação da mobilidade relativa e análise densitométrica das proteínas do Pectoralis major de frangos de corte. Foram utilizadas amostras cárneas de Pectoralis major de 5 frangos de corte, abatidos em laboratório, com colheitas realizadas com intervalos de 30 minutos, totalizando 6 colheitas. Após extração proteica das amostras,sucedeu-se a corrida eletroforética em SDS-PAGE 10% e identificação das bandas proteicasfracionadas, realizou-se extração de imagem do gel em fotodocumentador e ANOVA emprograma estatístico para tabulação de resultados. Com a análise dos dados, conseguiu-seconstatar que durante o processo de resolução do rigor mortis, no postmortem ocorre perdasignificativa de frações proteicas, tendo maior concentração em proteínas com maiorresultado em densitometria. Pode-se analisar também que, devido à utilização de aves demesmo lote, sexo, manejo e peso semelhante, não houve alterações significativas namobilidade relativa, comprovando esta ser uma característica específica e diferenciadora decada espécie [...]
Assuntos
Animais , Galinhas/fisiologia , Mudanças Depois da Morte , Nutrientes/análise , Amidas , Densitometria/veterinária , Ensaio de Desvio de Mobilidade Eletroforética/veterináriaResumo
En la búsqueda de la obtención de una mejor proteína de origen animal para el consumo humano, se estableció una rede de prácticas interconectadas, las cuales comienzan en el momento de la alimentación de los animales en la propiedad hasta el momento del consumo humano. Dentro de estas prácticas, en relación con el animal post- mortem y su seguimiento, se puede relacionar como esencial para la formación de un producto de calidad. Por lo tanto, los aspectos físico - químicas inherentes a la materia prima son fundamentales, y esta formación está directamente relacionada con la calidad de la proteína resultante en el proceso. Para evaluar las características de una proteína de un alimento, una de las técnicas utilizadas es la electroforesis, en el que se puede comprobar las propiedades de éstos y de sus perfiles, incluyendo la identificación de lo que surge especie. Este estudio tuvo como objetivo identificar y caracterizar la pérdida específica de las fracciones de proteínas que se producen en la post mortem mediante la evaluación de la movilidad relativa y análisis densitométrico de las proteínas del pectoral mayor de pollos de engorde. Las muestras de carne se utilizaron para 5 pollos de engorde sacrificados en un laboratorio, con muestras tomadas a intervalos de 30 minutos, un total de seis cosechas. Después de la extracción de muestras de proteínas,logrado para ejecutar electroforesis en 10 % SDS - PAGE y la identificación de la imagen fraccionado celebrada de extracción de gel en la captura de la imagen VDS y su programaestadístico ANOVA en bandas de proteína, para la tabulación de los resultados. Con el análisis de los datos, fue posible ver cuando durante el proceso de resolución del rigor mortis,en el post mortem se produce una pérdida significativa de fracciones de proteína, con una mayor pérdida de proteína con una mayor densidad. También puede analizar que debido a que el uso de pollos de engorde de un mismo lote, el sexo, y el peso [...] (AU)
In the quest for obtaining better animal protein for human consumption, was established a network of interconnected practices, which begin at the time of feeding the animal on the property until the time of human consumption. Within these practices, in relation to the animal post-mortem and your monitoring, can be related as essential to the formation of a quality product. Therefore, the physical-chemical aspects inherent in raw material are fundamental, and this formation is directly related to the quality of the resulting protein in the process. To evaluate the characteristics of a protein of a food, one of the techniques widely used is the electrophoresis, in which we can check the properties of these and their profiles, including identifying what species arises. This study aimed to identify and characterize the specific loss of protein fractions that occur in post mortem by evaluating the relative mobility and densitometric analysis of proteins from Pectoralis major of broiler. Meat samples were used for 5 broilers slaughtered in a laboratory, with samples taken at intervals of 30 minutes, totaling six harvests. After extraction of protein samples, succeeded to run electrophoresis in 10% SDS-PAGE and identification of protein bands fractionated held extraction gel image in Image Capture VDS and your ANOVA in statistical program, for tabulation of results. Withthe analysis of the data, it was possible to see when during the process of resolution of rigormortis, in the post mortem occurs one significant loss of protein fractions, with higher loss inprotein with greater density. You can also analyze that because the use of broilers of the samebatch, sex, and weight, with management similarly, no expected significant changes inrelative mobility, because this proving to be a specific characteristic and distinctive for eachspecies [...](AU)
Na busca por obtenção de proteínas animais para alimentação humana, foi estabelecida uma rede de práticas interligadas, que se iniciam no momento da alimentação do animal na propriedade até o momento do consumo humano. Dentro destas práticas, a que se refere ao post mortem do animal e seu acompanhamento pode ser relacionada como essencial para formação de um produto de qualidade. Para tanto, os aspectos físico-químicos inerentes à matéria-prima são fundamentais e sua formação está diretamente relacionada com a qualidade da proteína resultante no processo. Para avaliar as características proteicas de um alimento, uma técnica muito utilizada é a de eletroforese, na qual se podem conferir as propriedades destas proteínas e seus perfis, inclusive identificando de qual espécie advém. O presente trabalho teve como objetivo específico identificar e caracterizar as perdas de frações proteicas que acontecem no post mortem pela avaliação da mobilidade relativa e análise densitométrica das proteínas do Pectoralis major de frangos de corte. Foram utilizadas amostras cárneas de Pectoralis major de 5 frangos de corte, abatidos em laboratório, com colheitas realizadas com intervalos de 30 minutos, totalizando 6 colheitas. Após extração proteica das amostras,sucedeu-se a corrida eletroforética em SDS-PAGE 10% e identificação das bandas proteicasfracionadas, realizou-se extração de imagem do gel em fotodocumentador e ANOVA emprograma estatístico para tabulação de resultados. Com a análise dos dados, conseguiu-seconstatar que durante o processo de resolução do rigor mortis, no postmortem ocorre perdasignificativa de frações proteicas, tendo maior concentração em proteínas com maiorresultado em densitometria. Pode-se analisar também que, devido à utilização de aves demesmo lote, sexo, manejo e peso semelhante, não houve alterações significativas namobilidade relativa, comprovando esta ser uma característica específica e diferenciadora decada espécie [...](AU)
Assuntos
Animais , Galinhas/fisiologia , Nutrientes/análise , Mudanças Depois da Morte , Amidas , Densitometria/veterinária , Ensaio de Desvio de Mobilidade Eletroforética/veterináriaResumo
Durante o processo de criopreservação os espermatozoides de garanhões sofrem danos osmóticos que são irreversíveis. Mesmo utilizando-se as melhores técnicas de criopreservação, este processo ainda é prejudicial às células espermáticas sendo em média a taxa de sobrevivência espermática em torno de 50%. Além disso, ainda há uma porcentagem de espermatozoides sobreviventes portadores de danos subletais, fazendo com que seja limitada a capacidade de sobrevivência das células espermáticas após a descongelação e como consequência existe uma queda na fertilidade. Está bem estabelecido que os espermatozoides de diferentes garanhões domésticos variam significativamente em criosensibilidade, este fato pode estar relacionado com o efeito do crioprotetor, assim como pode ter relação com o tamanho molecular do crioprotetor penetrante e curva de refrigeração utilizada. Enquanto o glicerol continua a ser o crioprotetor mais comum para espermatozoides, existem fatores limitantes pelo seu uso, incluindo danos na membrana através de um efeito osmótico, sendo assim, as amidas têm sido estudas com o objetivo de minimizar os efeitos causados pelo glicerol durante o processo de criopreservação, por apresentarem melhor crioproteção da membrana das células espermáticas. Sendo assim, a proposta desse trabalho foi avaliar diferentes crioprotetores em diferentes curvas de refrigeração sobre a qualidade do sêmen equino. Para tanto, o estudo foi realizado para avaliar o efeito dos crioprotetores glicerol, metilformamida, dimetilformamida e dimetilacetamida em concentração a 5% em quatro curvas de refrigeração: 1°C/min-1, 0,25°C/min-1, 4°C/min-1 com estabilização à 5°C de 15min e 75min em refrigeração automática através da Mini-Digitcool ZH 400. Como resultado, o glicerol foi o crioprotetor que possibilitou melhor motilidade progressiva assim como alto potencial mitocondrial, apesar disso, esse crioprotetor provocou mais lesões a membrana plasmática. Por outro lado, a dimetilformamida foi o crioprotetor que melhor protegeu a membrana das células espermáticas pós-descongelação. A curva que possibilitou melhor viabilidade espermática em associação da cinética, potencial mitocondrial e integridade da membrana foi a curva de 1°C/min-1.
During the cryopreservation process, sperm from stallions suffer osmotic damage that is irreversible. Even using the best cryopreservation techniques, this process is still harmful to sperm cells, with an average sperm survival rate of around 50%. In addition, there is still a percentage of surviving sperm with sublethal damage, causing the sperm cells' ability to survive after thawing to be limited and as a consequence there is a fall in fertility. It is well established that sperm from different domestic stallions vary significantly in cryosensitivity, this fact may be related to the effect of the cryoprotectant, as well as it may be related to the molecular size of the penetrating cryoprotectant and the cooling curve used. While glycerol remains the most common cryoprotectant for sperm, there are limiting factors for its use, including damage to the membrane through an osmotic effect, so amides have been studied with the aim of minimizing the effects caused by glycerol during cryopreservation process, as they present better cryoprotection of the sperm cell membrane. Thus, the purpose of this work was to evaluate different cryoprotectants in different refrigeration curves on the quality of equine semen. To this end, the study was carried out to evaluate the effect of cryoprotectants glycerol, methylformamide, dimethylformamide and dimethylacetamide in concentration at 5% in four refrigeration curves: 1°C/min-1, 0.25°C/min-1, 4°C/min-1 with stabilization at 5°C for 15min and 75min in automatic refrigeration through Mini-Digitcool ZH 400. As a result, glycerol was the cryoprotectant that enabled better progressive motility as well as high mitochondrial potential. cryoprotectant caused more damage to the plasma membrane. On the other hand, dimethylformamide was the cryoprotectant that best protected the membrane of sperm cells after thawing. The curve that enabled better sperm viability in association with kinetics, mitochondrial potential and membrane integrity was the 1°C/min-1 curve.
Resumo
title>Abstract /title> p>The techniques applied to animal reproduction such as artificial insemination, transfer and italic>in vitro /italic> production of embryos, heat synchronization and induction, and gametes cryopreservation have been more utilized in veterinary practice each day. Nevertheless, some techniques have not achieved their full technical capacity within the equine reproduction field, such as semen cryopreservation. The aim of this study was to evaluate the characteristics of post-thawing semen (total motility, strength, plasmatic and acrosomal membrane integrity) of Mangalarga Marchador breed stallions, using three different extenders (Botucrio, FR5 and FR6). Ejaculates from five stallions were collected and the gel-free semen was diluted in a 1:1 dilution in skim milk extender, and centrifuged at 600 g for 10 minutes. After the centrifugation the supernatant was removed and sperm pellet was divided and re-suspended using three different extenders to a concentration of 200 x 10 sup>6 /sup> cells/mL. The samples were packed into 0.5 mL straws, placed in a stainless steel support and kept inside the refrigerator (5 ºC) for one hour. Subsequently, these straws were kept at a height of 6 cm from liquid nitrogen for 15 minutes in an isotherm box and, after that, plunged into liquid nitrogen (-196 ºC) and stored in a liquid nitrogen holding tank. There were no differences in the parameters evaluated when extenders using mixed amides and glycerol (Botucrio and FR6) were used (P > 0.05). All parameters evaluated were lower for the extender containing only glycerol (P 0.05). The use of cryoprotectants (methylformamide and dimethylformamide) in association with glycerol concentrations around 1 to 2% is an alternative for semen cryopreservation of Mangalarga Marchador breed stallions. /p>
title>Resumo /title> p>As biotécnicas aplicadas à reprodução animal como inseminação artificial, transferência e produção italic>in vitro /italic> de embriões, indução e sincronização de cio e congelamento de gametas vêm sendo cada vez mais utilizadas na prática veterinária. No entanto, algumas biotécnicas ainda não alcançaram o seu total aperfeiçoamento técnico na reprodução equina, como a criopreservação de sêmen. Objetivou-se avaliar as características pós-descongelamento (motilidade total, vigor e integridade de membrana plasmática e acrosomal) dos espermatozoides de garanhões da raça Mangalarga Marchador (n=5), empregando-se três diluentes de criopreservação. Após a colheita, o sêmen foi diluído na proporção de 1:1 em meio à base de leite em pó desnatado e centrifugado a 600 G por 10 minutos. Após a centrifugação, o sobrenadante foi desprezado e o italic>pellet /italic> obtido dividido e ressuspendido com Botucrio, FR5 ou FR6. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 mL sendo a concentração ajustada para 200x10 sup>6 /sup>espermatozoides/mL. As palhetas foram distribuídas em uma plataforma-suporte e estabilizadas a 5 ºC/60 min., em refrigerador comercial. Para o congelamento, as palhetas, posicionadas horizontalmente, foram expostas por 15 minutos ao vapor de nitrogênio líquido, em uma caixa de isopor, a 6 cm acima do nível de nitrogênio líquido. Logo em seguida, as palhetas foram imersas no nitrogênio líquido, acondicionadas em raques e estocadas em botijão criogênico a -196 ºC, para posterior avaliação. Não houve diferença para as variáveis motilidade, vigor e integridade das membranas plasmática e acrossomais quando se utilizaram diluentes que contêm a associação de amidas e glicerol (Botucrio e FR6; P>0,05). As variáveis seminais no diluente contendo apenas glicerol foram inferiores em todas as avaliações (P 0,05). A utilização de crioprotetores como a metilformamida, em associação com concentrações de 1 ou 2% de glicerol é uma alternativa para a criopreservação do sêmen de garanhões da raça Mangalarga Marchador. /p>
Resumo
The techniques applied to animal reproduction such as artificial insemination, transfer and in vitro production of embryos, heat synchronization and induction, and gametes cryopreservation have been more utilized in veterinary practice each day. Nevertheless, some techniques have not achieved their full technical capacity within the equine reproduction field, such as semen cryopreservation. The aim of this study was to evaluate the characteristics of post-thawing semen (total motility, strength, plasmatic and acrosomal membrane integrity) of Mangalarga Marchador breed stallions, using three different extenders (Botucrio, FR5 and FR6). Ejaculates from five stallions were collected and the gel-free semen was diluted in a 1:1 dilution in skim milk extender, and centrifuged at 600 g for 10 minutes. After the centrifugation the supernatant was removed and sperm pellet was divided and re-suspended using three different extenders to a concentration of 200 x 106 cells/mL. The samples were packed into 0.5 mL straws, placed in a stainless steel support and kept inside the refrigerator (5 oC) for one hour. Subsequently, these straws were kept at a height of 6 cm from liquid nitrogen for 15 minutes in an isotherm box and, after that, plunged into liquid nitrogen (-196 oC) and stored in a liquid nitrogen holding tank. There were no differences in theparameters evaluated when extenders using mixed amides and glycerol (Botucrio and FR6) were used (P > 0.05). All parameters evaluated were lower for the extender containing only glycerol (P<0.05). The use of cryoprotectants (methylformamide and (imethylformamide) in associationwith glycerol concentrations around 1 to 2% is an alternative for semen cryopreservation of Mangalarga Marchador breed stallions.
As biotécnicas aplicadas à reprodução animal como inseminação artificial, transferência e produção in vitro de embriões, indução e sincronização de cio e congelamento de gametas vêm sendo cada vez mais utilizadas na prática veterinária. No entanto, algumas biotécnicas ainda não alcançaram o seu total aperfeiçoamento técnico na reprodução equina, como a criopreservação de sêmen. Objetivou-se avaliar as características pós-descongelamento (motilidade total, vigor e integridade de membrana plasmática e acrosomal) dos espermatozoides de garanhões da raça Mangalarga Marchador (n=5), empregando-se três diluentes de criopreservação. Após a colheita, o sêmen foi diluído na proporção de 1:1 em meio à base de leite em pó desnatado e centrifugado a 600 G por 10 minutos. Após a centrifugação, o sobrenadante foi desprezado e o pellet obtido dividido e ressuspendido com Botucrio, FR5 ou FR6. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 mL sendo a concentração ajustada para 200x106 espermatozoides/mL. As palhetas foram distribuídas em uma plataforma-suporte e estabilizadas a 5 ºC/60 min., em refrigerador comercial. Para o congelamento, as palhetas, posicionadas horizontalmente, foram expostas por 15 minutos ao vapor de nitrogênio líquido, em uma caixa de isopor, a 6 cm acima do nível de nitrogênio líquido. [...]
Assuntos
Animais , Cavalos/embriologia , Criopreservação/veterinária , Preservação do Sêmen/métodos , Reprodução , Sêmen/fisiologia , Amidas , Análise do Sêmen/veterinária , Crioprotetores/análise , Glicerol/administração & dosagem , Inseminação Artificial/veterináriaResumo
Uma revisão sistemática e meta-análise (MA) foram realizadas para resumir as evidências científicas dos efeitos da criopreservação do esperma de espécies neotropicais sul americanas de peixes de água doce nos indicadores de qualidade espermática caracterizados pela motilidade e anormalidades morfológicas. A estratégia de busca foi aplicada em quatro bases de dados eletrônicas, os principais critérios de inclusão envolveram estudos realizados com peixes neotropicais cujos gametas masculinos foram submetidos ao processo de criopreservação. Meta-análise para efeitos aleatórios foi realizada para cada indicador separadamente com a média dos grupos controle e grupos tratados. Um total de vinte e cinco publicações relatando 26 estudos e 131 ensaios foram incluídos na MA envolvendo 44 peixes de espécies distintas. Foi observada heterogeneidade entre os estudos em todas as variáveis. De maneira geral, o sêmen criopreservado apresentou motilidade significativamente inferior ao sêmen fresco. A motilidade aumenta (P<0,01) com maior proporção de diluição do sêmen. A percentagem de das células normais não apresentou alterações significativas após a criopreservação. As anormalidades morfológicas primária aumentaram, significativamente, a um nível de 1,91% (IC 95%: - 3,72, - 0,09; P=0,02), após a criopreservação, quando comparadas ao sêmen fresco. A percentagem de anormalidades secundárias não mostrou alteração significativa (P0,05) entre sêmen fresco e criopreservado. Nossos resultados sugerem que a criopreservação com o uso de crioprotetores álcoois e amidas parecem favorecer taxas de motilidade e aumenta significativamente (P<0,05) a percentagem de anormalidades primárias pós criopreservação, não causando influência significativa na alteração de anormalidades secundárias do sêmen criopreservado de espécies neotropicais sul-americanas de água doce.
systematic review and meta-analysis (MA) was carried out to summarize the scientific evidence of the effects of cryopreservation of sperm from neotropical species of South American freshwater fish on sperm quality indicators characterized by motility rate and morphological abnormalities. The search strategy was applied to four electronic databases and the main inclusion criteria involved studies with neotropical fish whose male gametes were submitted to the cryopreservation process. Meta-analysis for random effects was performed for each indicator separately with the average of the control and treated groups. A total of twenty-five publications reporting 26 studies and 131 trials were included in the MA involving 44 fish of different species. Heterogeneity was observed among studies in all variables. In general, cryopreserved semen showed significantly lower motility than fresh semen. Motility increases (P < 0,01) with a higher proportion of semen dilution. The percentage of normal cells did not change significantly after cryopreservation. Primary morphological abnormalities increased significantly, at a level of 1,91% (95% CI: - 3,72, - 0.09; P = 0,02), after cryopreservation, when compared to fresh semen. The percentage of secondary abnormalities did not show a significant change (P0,05) between fresh and cryopreserved semen. Our results suggest that cryopreservation with the use of cryoprotectants alcohols and amides seems to improve motility rates and significantly (P<0,05) increases the percentage of primary abnormalities after cryopreservation, causing no significant influence in the alteration of secondary abnormalities of the cryopreserved semen of neotropical South American freshwater species.
Resumo
Este estudo descreveu as características seminais, da membrana plasmática e do acrossoma de espermatozoide congelado/descongelado de 19 ejaculados de garanhões da raça Nordestina. Os aspectos analisados incluíram os parâmetros físicos do sêmen fresco; a motilidade e a longevidade do sêmen diluído e descongelado; a morfologia espermática, integridade funcional e estrutural da membrana plasmática do espermatozoide e a habilidade de ligação do espermatozoide à membrana perivitelina da gema do ovo de galinha do sêmen descongelado. As variáveis foram avaliadas pela ANOVA com post hoc teste de Student Newman-Keuls (P<0,05). A MT e a MP foram maiores (P<0,05) no sêmen diluído do que no descongelado. A percentagem média de defeitos maiores, menores e totais foi muito inferior ao limite recomendado pelo CBRA. A porcentagem de reativos ao HOST foi de 14,21±1,12% e a porcentagem média de membranas íntegras detectadas pelo teste supravital de 62,22±9,06% e pela sonda SYBR-14 de 81,47±26,90. O número médio de espermatozoides ligados à MPV após a descongelação do sêmen foi de 230,39±57,09. A MT e MP no tempo 0 min do TTR foi superior (P<0,05) em relação a 150 min, não diferindo nos tempos 10 min e 30 min. Os resultados demonstram que a utilização dos testes laboratoriais adicionais ajudam no processo de avaliação das amostras, possibilitando a obtenção de informações mais confiáveis e precisas. Embora a criopreservação tenha provocado queda na motilidade seminal, o uso de diluidor contendo amidas minimizou os danos osmóticos nas células espermáticas e manteve a integridade morfológica, funcional e estrutural da membrana plasmática do espermatozoide. Estes resultados são um referencial em estudos futuros uma vez que, inexistem dados comparativos nesta raça.(AU)
This paper describes the seminal characteristics of the plasma membrane of frozen-thawed sperm. Nineteen ejaculates of Nordestino horse breed. The aspects analyzed in the physical parameters of fresh semen were total and progressive motility and your longevity after dilution or thawed; sperm morphology, functional and structural integrity of the plasma membrane of the sperm and the sperm-binding ability to the perivitelline membrane of the yolk (MPV) after thawed. The variables were assessed by ANOVA with post hoc test of Student Newman-Keuls test (P<0.05). The total and progressive motility were higher in diluted semen than thawed (P<0.05). The average percentage of the major, minor and total defects was lower than the limit recommended by the CBRA. The percentage of reactive to hypo-osmotic swelling test was 14.21±1.12%, the intact membrane detected by supravitally test was 62.22±9.06% and the SYBR-14 was 81.47±26.9. The ability of sperm to bind to the MPV after thawing semen was 230.39±57.09. The total and progressive motility at time 0 min of termo resistance test was higher than to 150 minutes (P<0.05), and no difference was observed in the times 10 and 30 minutes. The results demonstrate that the use of additional laboratory tests help in the process of evaluation of samples, making possible to obtain more reliable and accurate information. Although cryopreservation has caused decrease in sperm motility and was used diluents with amides to diluted and cryopreservation protocol and this minimized the osmotic damage to sperm cells and maintained the morphological, functional and structural integrity of the plasma membrane of the sperm. These results are a reference for future studies since there are no comparative data on this breed.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Cavalos/fisiologia , Espermatozoides/fisiologia , Análise do Sêmen/veterinária , Motilidade dos Espermatozoides/fisiologia , Preservação do Sêmen/veterinária , Criopreservação/veterinária , Preservação do Sêmen/efeitos adversosResumo
MENEZES, G. F. O., Utilização da dimetilacetamida e da dimeltilformamida associadas ao glicerol para criopreservação do sêmen ovino, Salvador-BA, 2019. 62p. Tese (Doutorado em Ciência Animal dos Trópicos) - Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia - Universidade Federal da Bahia, 2019. Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar o efeito dos crioprotetores dimetilacetamida (DMA) e dimetilformamida (DMF) associadas ou não ao glicerol (GL), utilizados na formulação de meios diluidores para criopreservação do sêmen ovino, sobre os parâmetros espermáticos in vitro e fertilidade in vivo. Para tanto, foram realizados dois experimentos com sete tratamentos cada. No experimento 1 objetivou-se avaliar o efeito da utilização da dimetilacetamida, em diferentes concentrações, associada ou não ao glicerol, para confecção de diluidores para criopreservação espermática, sobre os parâmetros espermáticos e índice de fertilidade do sêmen ovino pós-descongelação. Os tratamentos foram divididos em G1: GL6%; G2: DMA3%; G3: GL5%+ DMA1%; G4: GL4%+DMA2%; G5: GL3%+DMA3%; G6: GL2%+DMA4% e G7: GL1%+DMA5%. O experimento 2 teve como objetivo estudar a eficiência da dimetilformamida em diferentes concentrações nos meios diluidores, associada ou não ao glicerol, para a manutenção da viabilidade espermática ovina in vitro e in vivo pós-descongelação. Os grupos foram divididos em G1: GL6%; G2: DMF3%; G3: GL5%+ DMF1%; G4: GL4%+DMF2%; G5: GL3%+DMF3%; G6: GL2%+DMF4%; G7: GL1%+DMF5%. As amostras de ambos os experimentos foram avaliadas, após a descongelação, quanto à cinética espermática através da análise computadorizada do sêmen - CASA e da integridade de membrana por citometria de fluxo. Os resultados obtidos foram analisados através do Statistical Analysis System - SAS com nível de significância de 5%. Não foi observada diferença (P>0,05) entre os tratamentos do experimento 1 utilizando o DMA nas avaliações in vitro e in vivo. No experimento 2 com o DMF, houve diferença na avaliação da integridade de membrana apenas entre o grupo G4 e G7 (P<0,05), que não foi demonstrada no teste in vivo. Conclui-se que os crioprotetores a base de dimetilacetamida e da dimetilformamida foram eficientes na criopreservação do sêmen ovino, podendo ser utilizado como um crioprotetor alternativo.
MENEZES, G. F. O., Use of dimethylacetamide and dimeltilformamide associated with glycerol for criopreservation of ovine semen, Salvador-BA, 2019. 62p. Thesis (Doctorate in Animal Science of the Tropics) - School of Veterinary Medicine and Zootechnics - Federal University of Bahia, 2019. The objective of this work was to evaluate the effect of cryoprotectants dimethylacetamide (DMA) and dimethylformamide (DMF) associated or not to glycerol (GL) used in the formulation of diluent media for cryopreservation of ovine semen in vitro sperm parameters and fertility in vivo. For that, two experiments were carried out with seven treatments each. In the experiment 1 the objective was to evaluate the effect of the use of dimethylacetamide, in different concentrations, associated or not to glycerol, for the preparation of diluents for sperm cryopreservation, on sperm parameters and fertility index of post-thaw sheep semen. The treatments were divided into G1: GL6%; G2: DMA3%; G3: GL5% + DMA1%; G4: GL4% + DMA2%; G5: GL3% + DMA3%; G6: GL2% + DMA4% and G7: GL1% + DMA5%. Experiment 2 had the objective of studying the efficiency of dimethylformamide in different concentrations in the dilution media, associated or not to glycerol, for the maintenance of ovine sperm viability in vitro and in vivo after thawing. The groups were divided into G1: GL6%; G2: DMF3%; G3: GL5% + DMF1%; G4: GL4% + DMF2%; G5: GL3% + DMF3%; G6: GL2% + DMF4%; G7: GL1% + DMF5%. Samples from both experiments were evaluated after thawing, for sperm kinetics through computer assisted sperm analysis and membrane integrity by flow cytometry. The results were analyzed through the Statistical Analysis System - SAS with significance level of 5%. No difference (P> 0.05) was observed between the treatments of experiment 1 using DMA in the in vitro and in vivo evaluations. In experiment 2 with DMF, there was difference in membrane integrity only between G4 and G7 (P <0.05), which was not demonstrated in the in vivo test. It was concluded that cryoprotectants based on dimethylacetamide and dimethylformamide were efficient in the cryopreservation of ovine semen and could be used as an alternative cryoprotectant.
Resumo
Apesar das dificuldades na utilização de sêmen congelado pela indústria avícola o pujante mercado envolvido representa grande oportunidade para a difusão da técnica de criopreservação nesta espécie.Neste estudo, foi avaliada a adição de dimetilformamida (DMF) como crioprotetor ao diluente de congelamento de sêmen de galos nas concentrações de 3%, 6%, 9% e 12% por diferentes períodos de exposição 1, 3, 5, 7 e 9 minutos. As análises pós-descongelamento foram realizadas no Computer-assisted semen analysis (CASA) analisando parâmetros cinéticos e por citometria de fluxo avaliando a funcionalidade da membrana plasmática, funcionalidade de mitocôndria, produção de espécies reativas de oxigênio, peroxidação lipídica e o índice de fragmentação de DNA.O tratamento com adição de 6% de DMF e 5 minutos de exposição apresentou melhor motilidade progressiva, não diferindo apenas do tratamento com adição de 6% de DMF e 7 minutos de exposição, assim como demonstrou superioridade em quase todos os parâmetros avaliados pelo CASA. Com os resultados da citometria de fluxo foi possível perceber que o ponto de intersecção entre uma boa preservação da membrana plasmática e uma baixa produção de espécies reativas de oxigênio, foi o tratamento de 6% de DMF com 5 minutos de exposição.
DMF addition to freezing medium has been evaluated as a cryoprotector for rooster semen in the concentrations of 3%, 6%, 9% e 12% during 1, 3, 5, 7 e 9 minutes of exposition. Analysis after thawing such as kinect sperm parameters were assessed by Computer-assisted semen analysis (CASA) and by flow cytometry the evaluations of plasmatic membrane functionality, mitochondria functionality, reactive oxygen species (ROS) production, lipid peroxidation (LPO) and DNA fragmentation index (DFI). The 6% DMF addition treatment during 5 minutes of exposition presented higher progressive motility, differing from not only the 6% addition and 7 minutes of time exposition, but also demonstrating superiority in almost all parameters assayed by CASA system. With data obtained by flow cytometry it was possible to realize the intersection point between a good plasmatic membrane preservation and a low reactive oxygen species production, it was the 6% DMF addition treatment during 5 minutes of exposition.
Resumo
Witheringia solanaceae é uma planta utilizada na medicina popular no tratamento da inflamação, dor, hipertensão, infecções microbianas, distúrbios gastrointestinais, respiratórios e urogenitais. No entanto, não há estudos científicos sobre a composição química dos frutos de W. solanaceae e nem sobre possíveis atividades biológicas dos mesmos que confirmem seu uso na medicina popular. O objetivo deste trabalho foi determinar a composição química e as atividades antioxidante, antimicrobiana, citotóxica, hipoglicemiante e a toxicidade aguda oral dos frutos de W. solanaceae. Para isto foram preparados extratos etanólico e aquoso, assim como frações metanólica e hexânica dos frutos não maduros de W. solanaceae. As amostras de frutos foram analisadas por cromatografia líquida de ultra-performance acoplada a espectrometria de massas e um total de 11 compostos foram identificados, entre eles conjugados do ácido hidroxicinâmico com amidas de poliaminas, conjugados do ácido quínico e fisalinas. O teor de fenólicos totais foi determinado pelo método de Folin-Ciocalteu, sendo a maior quantidade de fenóis encontrada no extrato etanólico e na fração metanólica, com 152.4 e 111.9 mg de GAE/g, respectivamente. Todas as amostras exibiram alta atividade sequestradora de radicais livres pelos métodos DPPH (desde 12.2 a 199.6 µg/mL) e ABTS (desde 14.2 a 222 µg/mL). A atividade antimicrobiana foi determinada pelo método microdiluição frente a bactérias gram positivas, gram negativas e levedura, mas nenhuma das amostras exibiu atividade antimicrobiana. A citotoxicidade dos frutos foi testada pelo método MTT, em células tumorais (HT29, NCI-H292, HCT116 e HL-60) e não tumorais (L929), sendo o extrato etanólico ativo contra a linhagem celular HL-60, com uma CI50 de 3.84 µg/mL. O teste de toxicidade aguda foi realizado com o extrato etanólico na dose de 2000 mg/kg, administrado via oral em dose única, o qual não produziu alterações significativas nos parâmetros comportamentais, fisiológicos ou histopatológicos. O extrato etanólico nas doses de 200 e 400 mg/kg, administrado a camundongos via oral, não apresentou atividade hipoglicemiante. Os dados obtidos neste trabalho revelam, por primeira vez, a presença de compostos fenólicos e fisalinas na composição química dos frutos de W. solanaceae, assim como alta atividade antioxidante em especial no extrato etanólico e fração metanólica; tendo o extrato etanólico elevada atividade citotóxica contra a linhagem HL-60, porém sem causar toxicidade aguda em camundongos.
Witheringia solanaceae is usually employed as a folk medicine on the treatment of inflammation, pain, hypertension, bacterial infections, gastrointestinal, respiratory and urogenital disorders. However, there are no scientific studies on the chemical composition and biological effect of the W. solanaceae fruits. The purpose of this work was to determine, for the first time, the chemical composition and the antioxidant, antimicrobial, cytotoxic, hypoglycemic activities and acute toxicity of W. solanaceae fruits. Ethanolic and aqueous extracts were prepared as well as methanolic and hexane fractions of the unripe fruits of W. solanaceae. The fruit samples were analyzed by ultra-performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry (UHPLC-qTOF-MS/MS) and a total of 11 compounds were identified, among them, hydroxynamic acid conjugates with polyamine amides, conjugates of quinic acid and physalins compounds. The phenolic content was determined by the Folin-Ciocalteu method, being the highest amount of phenolic composts found in the ethanolic extract and methanolic fraction, with 152.4 and 111.9 mg GAE/g, respectively. Moreover, all the samples demonstrated high free radical scavenger by DPPH (from 12.2 to 199.6 g/mL) and ABTS (from 14.2 to 222 g/mL). The antimicrobial activity was determined by broth microdilution technique, however no sample exhibited antimicrobial activity against the gram-positive and gram-negative bacteria and yeast. The cytotoxicity of the fruits was tested by the MTT method in tumor cells (HT29, NCI-H292, HCT116 and HL-60) and non-tumor cells (L929), as a result the ethanolic extract was active against the HL-60 cell line and its IC50 was 3.84 g/mL. The acute toxicity test was performed only with the ethanolic extract at the dose of 2000 mg/kg, administered orally in a single dose to mice, which did not produce changes on behavioral, physiological or histopathological characteristics. The ethanolic extract at doses of 200 and 400 mg/kg, did not produce hypoglycemic activity. The data of this work are of great relevance since they provide important information about the chemical composition, the toxicity and the biological activities of fruits from an important plant in the folk medicine.
Resumo
Objetivou-se avaliar a eficácia da metil-formamida na criopreservação do sêmen ovino. O pool de sêmen utilizado no experimento foi obtido a partir da coleta, com vagina artificial, do sêmen de quatro carneiros mestiços Santa Inês, com idade aproximada de quatro anos. As coletas foram realizadas uma vez por semana, por seis semanas consecutivas, correspondendo, cada semana, a uma repetição do experimento. As frações do pool foram diluídas em cinco diferentes meios de congelação: (1) tris-gema com 5,3% de glicerol (TG5,3G); (2) tris-gema com 3% de metil-formamida (TG3MF); (3) tris-gema com 5% de metil-formamida (TG5MF); (4) tris-gema com 7% de metil-formamida (TG7MF); (5) tris-gema com 9% de metil-formamida (TG9MF). Foram avaliadas a motilidade progressiva e o vigor das células espermáticas e realizado o teste de termorresistência pós-descongelação. O tratamento que obteve maior motilidade foi o TG5,3G (50%), seguido do TG3MF (38%) e os tratamentos que apresentaram menor motilidade progressiva foram TG5MF (29%), TG7MF (1,0%), TG9MF (6,0%). Os meios contendo metil-formamida apresentaram resultados inferiores ao meio controle para preservar a integridade morfológica dos espermatozoides, sendo que nos meios TG7MF e TG9MF menos de 60% de espermatozoides apresentaram-se morfologicamente normais. Os espermatozoides do meio TG5,3G apresentaram motilidade (15%) e vigor (2,8) similares aos do meio TG3MF (15% e 2,6, respectivamente) no teste de termorresistência, mas o meio TG5,3G preservou melhor a integridade funcional da membrana plasmática. O glicerol foi mais eficiente como crioprotetor do que a metil-formamidana criopreservação de sêmen ovino.
The aim of this study was to evaluate the efficacy of methyl-formamide in ram semen cryopreservation. The semen pool used in this experiment was obtained by artificial vagina collection from four mixed breed Santa Inês rams, around four years of age. Semen collection was performed once a week, during six weeks. Each week corresponded to one experiment replication. The semen pool was divided in five fractions in order to be diluted in one of the following freezing media: (1) tris-egg yolk with 5.3% of glycerol (TG5.3G); (2) tris-egg yolk with 3% of methyl-formamide (TG3MF); tris-egg yolk with 5% of methyl-formamide (TG5MF); tris-egg yolk with 7% of methyl-formamide (TG7MF); tris-egg yolk with 9% of methyl-formamide (TG9MF). Semen progressive motility, vigor and thermoresistance were evaluated. The treatments TG5.3G (50%) and TG3MF (38%) showed higher progressive motility after thawing, while TG5MF (29%), TG7MF (1%) and TG9MF (6%) showerd lower motility. Freezing media containing methyl-formamide were less effective in preserving spermatozoa membrane integrity and morphology than control media. In TG7MF and TG9MF extenders, less than 60% spermatozoa showed normal morphology. After thermoresistance test, semen cryopreserved in TG3MF showed vigor (2.6) and motility (15%) statistically similar to TG5.3G media (15% and 2.8, respectively); however, the extender TG5.3G was more effective in preserving plasma membrane functional integrity. In conclusion, in the experimental conditions used, glycerol showed more cryoprotectant potential than methyl-formamide.
Assuntos
Masculino , Animais , Criopreservação/veterinária , Formamidas/administração & dosagem , Ovinos , Sêmen/efeitos dos fármacosResumo
Objetivou-se avaliar a eficácia da metil-formamida na criopreservação do sêmen ovino. O pool de sêmen utilizado no experimento foi obtido a partir da coleta, com vagina artificial, do sêmen de quatro carneiros mestiços Santa Inês, com idade aproximada de quatro anos. As coletas foram realizadas uma vez por semana, por seis semanas consecutivas, correspondendo, cada semana, a uma repetição do experimento. As frações do pool foram diluídas em cinco diferentes meios de congelação: (1) tris-gema com 5,3% de glicerol (TG5,3G); (2) tris-gema com 3% de metil-formamida (TG3MF); (3) tris-gema com 5% de metil-formamida (TG5MF); (4) tris-gema com 7% de metil-formamida (TG7MF); (5) tris-gema com 9% de metil-formamida (TG9MF). Foram avaliadas a motilidade progressiva e o vigor das células espermáticas e realizado o teste de termorresistência pós-descongelação. O tratamento que obteve maior motilidade foi o TG5,3G (50%), seguido do TG3MF (38%) e os tratamentos que apresentaram menor motilidade progressiva foram TG5MF (29%), TG7MF (1,0%), TG9MF (6,0%). Os meios contendo metil-formamida apresentaram resultados inferiores ao meio controle para preservar a integridade morfológica dos espermatozoides, sendo que nos meios TG7MF e TG9MF menos de 60% de espermatozoides apresentaram-se morfologicamente normais. Os espermatozoides do meio TG5,3G apresentaram motilidade (15%) e vigor (2,8) similares aos do meio TG3MF (15% e 2,6, respectivamente) no teste de termorresistência, mas o meio TG5,3G preservou melhor a integridade funcional da membrana plasmática. O glicerol foi mais eficiente como crioprotetor do que a metil-formamidana criopreservação de sêmen ovino.(AU)
The aim of this study was to evaluate the efficacy of methyl-formamide in ram semen cryopreservation. The semen pool used in this experiment was obtained by artificial vagina collection from four mixed breed Santa Inês rams, around four years of age. Semen collection was performed once a week, during six weeks. Each week corresponded to one experiment replication. The semen pool was divided in five fractions in order to be diluted in one of the following freezing media: (1) tris-egg yolk with 5.3% of glycerol (TG5.3G); (2) tris-egg yolk with 3% of methyl-formamide (TG3MF); tris-egg yolk with 5% of methyl-formamide (TG5MF); tris-egg yolk with 7% of methyl-formamide (TG7MF); tris-egg yolk with 9% of methyl-formamide (TG9MF). Semen progressive motility, vigor and thermoresistance were evaluated. The treatments TG5.3G (50%) and TG3MF (38%) showed higher progressive motility after thawing, while TG5MF (29%), TG7MF (1%) and TG9MF (6%) showerd lower motility. Freezing media containing methyl-formamide were less effective in preserving spermatozoa membrane integrity and morphology than control media. In TG7MF and TG9MF extenders, less than 60% spermatozoa showed normal morphology. After thermoresistance test, semen cryopreserved in TG3MF showed vigor (2.6) and motility (15%) statistically similar to TG5.3G media (15% and 2.8, respectively); however, the extender TG5.3G was more effective in preserving plasma membrane functional integrity. In conclusion, in the experimental conditions used, glycerol showed more cryoprotectant potential than methyl-formamide.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Ovinos , Sêmen/efeitos dos fármacos , Criopreservação/veterinária , Formamidas/administração & dosagemResumo
PURPOSE: To evaluate the histological features in lungs, peritoneum and liver of rats subjected to fecal peritonitis and treated with peritoneal lavage with 0.2 percent ropivacaine. METHODS: Twenty Wistar rats were subjected to laparotomy 6 h after the fecal peritonitis induction with autogenous stool. Rats were randomly distributed into 4 groups: I - (n=5) Control, no treatment; II - (n=5) Drying of the abdominal cavity; III - (n=5) Abdominal cavity lavage with 3 ml 0.9 percent saline solution and drying; and IV - (n=5) Abdominal cavity lavage with 3 ml 0.2 percent ropivacaine and drying. The animals that died underwent necropsy, and the surviving ones were subjected to euthanasia on the 11th day post-surgery. Fragments of liver, lungs and peritoneum were removed for histological evaluation. RESULTS: The animals that received peritoneal lavage (groups III and IV) showed greater survival than the drying and control groups. Lavage with ropivacaine prevented death during the observed period. Peritoneal lavage with ropivacaine maintained the architecture of the lung, peritoneum and liver without any important histological alterations. The histopathological findings analyzed correlated with greater survival of group IV. CONCLUSION: Treatment of fecal peritonitis in rats with peritoneal lavage using 0.2 percent ropivacaine demonstrated a reduction in histopathological alterations related to inflammatory response and sepsis.(AU)
OBJETIVO: Avaliar os aspectos histopatológicos em pulmões, peritônios e fígados de ratos submetidos à peritonite fecal e tratados com lavagem peritoneal com ropivacaína a 0,2 por cento. MÉTODOS: Utilizou-se 20 ratos Wistar, submetidos à laparotomia 6 horas após a indução de peritonite fecal com fezes autógenas, distribuídos aleatoriamente em quatro grupos: I- (n=5) Controle, nenhum tratamento; II- (n=5) Enxugamento da cavidade abdominal; III- (n=5) Lavagem da cavidade abdominal com 3 ml de solução salina 0,9 por cento e enxugamento ; IV- (n=5) Lavagem da cavidade abdominal com 3 ml de ropivacaína a 0,2 por cento e enxugamento. Os animais que morreram foram necropsiados e os sobreviventes foram eutanasiados no 11º dia do pós-operatório. Retirou-se fragmentos do fígado, pulmões e do peritônio dos animais para estudo histopatológico. RESULTADOS: Os animais que receberam lavagem peritoneal (grupos III e IV) apresentaram maior sobrevida que os grupos enxugamento e controle. A lavagem com ropivacaína impediu o óbito no período avaliado. A lavagem peritoneal com ropivacaína manteve a arquitetura do pulmão, peritônio e fígado sem alterações histológicas importantes. Os achados histopatológicos analisados foram condizentes com o maior tempo de sobrevida no grupo IV. CONCLUSÃO: A lavagem peritoneal com ropivacaína a 0,2 por cento no tratamento da peritonite fecal em ratos demonstrou reduzir as alterações histopatológicas relacionados à resposta inflamatória e sepse.(AU)