Monitoring periodontal lesions and their effects during pregnancy: microbiological aspects of the oral cavity and amniotic fluid in pregnant ewes / Monitoramento de lesões periodontais e seus efeitos na gestação: aspectos microbiológicos da cavidade bucal e líquido amniótico de ovelhas gestantes

Periodontitis affects the teeth supporting tissues, leading to tooth loss and damage to animal health. Evidence in humans suggests that oral microorganisms spread systemically, increasing the risk of pregnancy disorders such as miscarriage, prematurity, and low birth weight. This study aimed to verify whether periodontopathogenic microorganisms reach the transplacental unit, culminating in problems in pregnant ewes. After analyzing the oral cavity, 10 clinically healthy pregnant ewes (OGCH group) and 10 pregnant ewes with periodontitis (OGP group) were selected. The subgingival biofilm was collected for the polymerase chain reaction (PCR) test and amniotic fluid for both the PCR and interleukin (IL) analysis. Peripheral blood was collected for complete blood count, and analyses of IL-6, IL1-ß, and tumor necrosis factor-α were performed. Placental fragments were collected to assess the inflammatory changes using optical microscopy. After giving birth, both the ewes and their lambs were weighed. On clinical examination, a positive correlation between bleeding and suppuration (correlation index - CI=0.54), suppuration and marginal gingivitis (CI=0.34), and marginal gingivitis and edema (CI=0.54) was observed. The weights of the ewes (p=0.013) and their respective lambs (p=0.04) in the OGP group were lower than those of their OGCH group counterparts. The hematological analysis revealed that the OGP group ewes showed a slight increase in the mean corpuscular volume (p=0.2447), segmented cells (p=0.3375), and eosinophils (p=0.3823) when compared with the OGCH group ewes, without a statistical difference. Regarding the microorganisms detected in the oral cavity, there was a significant difference between the occurrence of periodontal pockets and the presence of Fusobacterium necrophorum (p=0.0328), Porphyromonas asaccharolytica (p=0.0392), and the Mollicutes class (p=0.0352). Staphylococcus genus (p=0.9107) and Archaea domain (p=0.7245) were detected in the amniotic samples of both groups, without a significant difference, whereas P. asaccharolytica (p=0.2685) was only detected in one sample in the OGCH group. The expression of cytokine IL-6 in the OGP group differed significantly between the prepartum and postpartum periods (p=0.0039); moreover, it differed significantly in the postpartum period between the OGCH and OGP groups (p=0.0198). Histological examination showed a higher percentage of placental changes in the OGP group (70%) than in the OGCH group, such as the presence of macrophages, neutrophils, plasma cells, and multifocal areas of calcification. These results do not corroborate the hypothesis of dissemination of oral microorganisms to the placental unit, suggesting that it constitutes placental isolation in sheep.

A periodontite afeta os tecidos de suporte dos dentes levando à perda dentária e danos à saúde do animal. Evidências em humanos sugerem que os microrganismos orais se espalham sistemicamente, aumentando o risco de distúrbios da gravidez, como aborto espontâneo, prematuridade e baixo peso ao nascer. Este estudo teve como objetivo verificar se microrganismos periodontopatogênicos atingem a unidade transplacentária, culminando em problemas em ovelhas gestantes. Após análise da cavidade oral, foram selecionadas 10 ovelhas gestantes clinicamente saudáveis (grupo OGCH) e 10 ovelhas gestantes com periodontite (grupo OGP). O biofilme subgengival foi coletado para o teste de reação em cadeia da polimerase (PCR) e o líquido amniótico para teste de PCR e análise de interleucina (IL). Sangue periférico foi coletado para hemograma completo e análises de IL-6, IL1-ß e fator de necrose tumoral-α foram realizadas. Fragmentos de placenta foram coletados para avaliação das alterações inflamatórias por meio de microscopia óptica. Após o parto, as ovelhas e seus cordeiros foram pesados. Ao exame clínico, observou-se correlação positiva entre sangramento e supuração (índice de correlação - IC=0,54), supuração e gengivite marginal (IC=0,34) e gengivite marginal e edema (IC=0,54). Os pesos das ovelhas (p=0,013) e de seus respectivos cordeiros (p=0,04) do grupo OGP foram inferiores aos do grupo OGCH. A análise hematológica revelou que as ovelhas do grupo OGP apresentaram discreto aumento no volume corpuscular médio (p=0,2447), células segmentadas (p=0,3375) e eosinófilos (p=0,3823) quando comparadas com as ovelhas do grupo OGCH, sem diferença estatística diferença. Em relação aos microrganismos detectados na cavidade oral, houve diferença significativa entre a ocorrência de bolsas periodontais e a presença de Fusobacterium necrophorum (p=0,0328), Porphyromonas asaccharolytica (p=0,0392) e da classe Mollicutes (p=0,0352). O gênero Staphylococcus (p=0,9107) e o domínio Archaea (p=0,7245) foram detectados nas amostras amnióticas de ambos os grupos, sem diferença significativa, enquanto P. asaccharolytica (p=0,2685) foi detectado apenas em uma amostra do grupo OGCH. A expressão da citocina IL-6 no grupo OGP diferiu significativamente entre os períodos pré e pós-parto (p=0,0039); além disso, diferiu significativamente no período pós-parto entre os grupos OGCH e OGP (p=0,0198). O exame histológico mostrou maior porcentagem de alterações placentárias no grupo OGP (70%) do que no grupo OGCH, como a presença de macrófagos, neutrófilos, plasmócitos e áreas multifocais de calcificação. Esses resultados não corroboram a hipótese de disseminação de microrganismos orais para a unidade placentária, sugerindo que se trata de um isolamento placentário em ovinos.

Perfil bioquímico do líquido amniótico de éguas com placentite ascendente e sua relação com parâmetros séricos do potro neonato / Biochemical profile of amniotic fluid in mares with ascending placentitis and its relationship with serum biochemical parameters in neonatal foals

O objetivo do presente estudo foi identificar os parâmetros bioquímicos do líquido amniótico (LA) no momento do parto de éguas com placentite ascendente e relacionar com parâmetros bioquímicos séricos dos neonatos. Foram utilizadas 36 éguas gestantes da raça Puro Sangue Inglês, divididas em dois grupos: placentite (n=5) e sadias (n=31). A placentite foi definida de acordo com a avaliação clínica, exame ultrassonográfico e histopatologia das placentas. Essas éguas foram submetidas a terapia antimicrobiana, antiinflamatórios e altrenogest. A coleta do LA foi realizada na segunda fase do parto e as amostras sanguíneas dos neonatos imediatamente após o nascimento. Foi observada menor concentração de creatinina no LA de éguas com placentite. Potros provenientes de éguas com placentite foram menores em peso e altura ao nascimento, e apresentaram concentrações elevadas de ureia e reduzidas de PPT na avaliação sérica. Foi observado correlação positiva moderada entre creatinina e ureia no LA e correlação positiva fraca entre a creatinina do LA e sérica dos potros. Concluiu-se que o perfil bioquímico do LA e sérico dos neonatos oriundos de éguas com placentite ascendente diferem de gestações sadias. Sendo que esses parâmetros podem ser utilizados como indicadores de alterações placentárias em éguas.(AU)

The aim of this study was to identify the biochemical parameters of amniotic fluid (AF) at parturition in mares with ascending placentitis, and to relate with biochemical parameters in neonatal foals serum. Thirty-six pregnant Thoroughbred mares were divided in 2 groups: mares with placentitis (n=5) and healthy mares (n=31). Placentitis was identified based on clinical signs, ultrasound evaluation and histopathological features in the placenta. Mares with placentitis were treated with antibiotics, antiinflammatories and altrenogest. AF was collected during the second stage of labor and blood samples were taken immediately after foaling. Lower concentrations of creatinine were found in the AF of mares with placentitis. Foals from mares with placentitis showed smaller height and lower birthweight, also showed increase of urea and decrease of total protein levels in blood serum. A moderate positive correlation between urea and creatinine in AF was observed, and a weak positive correlation was found between creatinine in AF and the serum of foals. In conclusion, biochemical composition of AF and of blood serum of neonatal foals from mares with ascending placentitis are different of healthy mares. So, those analysis could be useful to identify placental changes in mares.(AU)

Perfil bioquímico do líquido amniótico de éguas com placentite ascendente e sua relação com parâmetros séricos do potro neonato / Biochemical profile of amniotic fluid in mares with ascending placentitis and its relationship with serum biochemical parameters in neonatal foals

O objetivo do presente estudo foi identificar os parâmetros bioquímicos do líquido amniótico (LA) no momento do parto de éguas com placentite ascendente e relacionar com parâmetros bioquímicos séricos dos neonatos. Foram utilizadas 36 éguas gestantes da raça Puro Sangue Inglês, divididas em dois grupos: placentite (n=5) e sadias (n=31). A placentite foi definida de acordo com a avaliação clínica, exame ultrassonográfico e histopatologia das placentas. Essas éguas foram submetidas a terapia antimicrobiana, antiinflamatórios e altrenogest. A coleta do LA foi realizada na segunda fase do parto e as amostras sanguíneas dos neonatos imediatamente após o nascimento. Foi observada menor concentração de creatinina no LA de éguas com placentite. Potros provenientes de éguas com placentite foram menores em peso e altura ao nascimento, e apresentaram concentrações elevadas de ureia e reduzidas de PPT na avaliação sérica. Foi observado correlação positiva moderada entre creatinina e ureia no LA e correlação positiva fraca entre a creatinina do LA e sérica dos potros. Concluiu-se que o perfil bioquímico do LA e sérico dos neonatos oriundos de éguas com placentite ascendente diferem de gestações sadias. Sendo que esses parâmetros podem ser utilizados como indicadores de alterações placentárias em éguas.

The aim of this study was to identify the biochemical parameters of amniotic fluid (AF) at parturition in mares with ascending placentitis, and to relate with biochemical parameters in neonatal foals’ serum. Thirty-six pregnant Thoroughbred mares were divided in 2 groups: mares with placentitis (n=5) and healthy mares (n=31). Placentitis was identified based on clinical signs, ultrasound evaluation and histopathological features in the placenta. Mares with placentitis were treated with antibiotics, antiinflammatories and altrenogest. AF was collected during the second stage of labor and blood samples were taken immediately after foaling. Lower concentrations of creatinine were found in the AF of mares with placentitis. Foals from mares with placentitis showed smaller height and lower birthweight, also showed increase of urea and decrease of total protein levels in blood serum. A moderate positive correlation between urea and creatinine in AF was observed, and a weak positive correlation was found between creatinine in AF and the serum of foals. In conclusion, biochemical composition of AF and of blood serum of neonatal foals from mares with ascending placentitis are different of healthy mares. So, those analysis could be useful to identify placental changes in mares.

Avaliação da maturidade pulmonar de cabritos nascidos a termo e prematuros / [Evaluation of lung maturity of term and premature kid]

Avaliou-se a maturidade pulmonar de cabritos no líquido amniótico de suas mães pela coloração de Shor, pelo azul de Nilo e pela contagem de corpos lamelares, bem como a vitalidade e os níveis de glicose e lactato séricos em cabritos nascidos a termo e prematuros. Para tanto, foram utilizados 32 cabritos, divididos em três grupos, a saber: grupo I: cabritos nascidos de cesarianas com 149 dias de gestação; grupo II: cabritos nascidos de cesarianas com 143 dias de gestação; e grupo III: cabritos nascidos de cesarianas com 143 dias de gestação, oriundos de mães que receberam, por via intramuscular, 20mg/cabra de dexametasona, 36 horas antes da cirurgia eletiva. A coloração de Shorr e a contagem de corpos lamelares demonstraram ser métodos diagnósticos promissores para a avaliação da maturidade pulmonar em neonatos caprinos. Contudo, a administração de dexametasona nas cabras no período antenatal não influenciou a maturidade fetal. Constatou-se, entretanto, que a avaliação física do paciente, logo após o nascimento, também se mostra fundamental no que tange à percepção da vitalidade e da viabilidade de cabritos recém-nascidos.(AU)

Pulmonary maturity of goats in their amniotic fluid was evaluated by Shor, Nile blue staining, and lamellar body count, as well as vitality and serum glucose and lactate levels in term and premature goats. Twenty-four kids were divided into three groups: group I: comprised of eight animals born by cesarean section with 149 days of gestation; group II: comprised of eight animals born by cesarean section with 143 days of gestation; and group III: comprised of eight animals born by cesarean section with 143 days of gestation, in which the does received intramuscular dexamethasone (20mg/goat) 36 hours prior to elective cesarean section. Shorr staining and lamellar body count have shown to be promising diagnostic methods for the assessment of lung maturity in goat neonates. However, the administration of dexamethasone to goats during antenatal period did not influence fetal maturity. It was verified that the physical evaluation of the patient, shortly after birth, is fundamental for the perception of vitality and viability of newborn goats.(AU)

Avaliação da maturidade pulmonar de cabritos nascidos a termo e prematuros / [Evaluation of lung maturity of term and premature kid]

Avaliou-se a maturidade pulmonar de cabritos no líquido amniótico de suas mães pela coloração de Shor, pelo azul de Nilo e pela contagem de corpos lamelares, bem como a vitalidade e os níveis de glicose e lactato séricos em cabritos nascidos a termo e prematuros. Para tanto, foram utilizados 32 cabritos, divididos em três grupos, a saber: grupo I: cabritos nascidos de cesarianas com 149 dias de gestação; grupo II: cabritos nascidos de cesarianas com 143 dias de gestação; e grupo III: cabritos nascidos de cesarianas com 143 dias de gestação, oriundos de mães que receberam, por via intramuscular, 20mg/cabra de dexametasona, 36 horas antes da cirurgia eletiva. A coloração de Shorr e a contagem de corpos lamelares demonstraram ser métodos diagnósticos promissores para a avaliação da maturidade pulmonar em neonatos caprinos. Contudo, a administração de dexametasona nas cabras no período antenatal não influenciou a maturidade fetal. Constatou-se, entretanto, que a avaliação física do paciente, logo após o nascimento, também se mostra fundamental no que tange à percepção da vitalidade e da viabilidade de cabritos recém-nascidos.(AU)

Pulmonary maturity of goats in their amniotic fluid was evaluated by Shor, Nile blue staining, and lamellar body count, as well as vitality and serum glucose and lactate levels in term and premature goats. Twenty-four kids were divided into three groups: group I: comprised of eight animals born by cesarean section with 149 days of gestation; group II: comprised of eight animals born by cesarean section with 143 days of gestation; and group III: comprised of eight animals born by cesarean section with 143 days of gestation, in which the does received intramuscular dexamethasone (20mg/goat) 36 hours prior to elective cesarean section. Shorr staining and lamellar body count have shown to be promising diagnostic methods for the assessment of lung maturity in goat neonates. However, the administration of dexamethasone to goats during antenatal period did not influence fetal maturity. It was verified that the physical evaluation of the patient, shortly after birth, is fundamental for the perception of vitality and viability of newborn goats.(AU)

Assessment of fetal lung maturity using analysis of amniotic fluid from ewes that gave birth prematurely and at term / Avaliação da maturidade pulmonar fetal utilizando a análise de líquido amniótico de ovelhas que deram à luz prematuramente e a termo

The aim of this study was to evaluate the lung maturity of premature and full-term lambs by analyzing amniotic fluid using the following methods: Clements test, Nile blue cytology test, hematoxylin-Shorr stain, lamellar body count, and radiographic tests. The use of these methods is intended to identify high-risk newborns and provide immediate clinical intervention after birth. Altogether, 56 animals (24 ewes and 32 lambs) were included in the study and divided into 3 groups. Group I consisted of 8 ewes that were at approximately 145 days of gestation; this group delivered 10 lambs naturally. Group II consisted of 8 ewes that were at 138 days' gestation; this group delivered 11 lambs by cesarean section. Group III consisted of 8 ewes at 138 days' gestation; this group was administered intramuscular dexamethasone (16mg/animal) 36 hours prior to a cesarean section. Group III delivered11 lambs. Cytological tests were performed using a microscope with a maximum magnification of 1000x, while the Clements test was visually observed by one of the researchers. Amnioticfluid lamellar body counts were measured using transmission electron microscopy. Among the staining methods, hematoxylin-Shorr was reliable, and Group III had a greater number of orangeophilic cells when compared to Group II, probably due to corticoid administration. The Clements test showed pulmonary maturity in approximately 20% of Group I lambs and Group II showed 9.1% of bubbles; however, Group III had the highest pulmonary maturity percentage (36.4%). The lamellar bodies were measured, and all groups had sizes between 0.019 and 0.590μm. Radiographic evaluation revealed that the majority of lambs presented some level of pulmonary radiodensity, indicating an acinar pattern at birth. These results are in line with the expectations of each group. We found that the normal group showed greater pulmonary maturity, whereas Group II presented pulmonary immaturity, which is expected because this group comprised lambs born prematurely and Group III showed pulmonary maturity almost comparable to the normal delivery group (Group I). This is due to the fact that although these animals are premature, the use of dexamethasone helped in pulmonary maturation. Therefore, these pulmonary maturity tests are considered effective when more than one technique is used and can be used routinely in the care of a pregnant ewe in labor, where a simple collection of amniotic fluid can predict a high-risk pregnancy and alert the veterinarian if the newborn needs intensive supportive treatment.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a maturidade pulmonar de cordeiros prematuros e a termo por meio da análise do líquido amniótico utilizando os seguintes métodos: teste de Clements, teste de citologia do azul do Nilo, coloração de hematoxilina-Shorr, contagem de corpos lamelares e testes radiográficos. Um desses métodos tem por objetivo identificar recém-nascidos de alto risco e fornecer intervenção clínica imediata após o nascimento. Ao todo, 56 animais (24 ovelhas e 32 cordeiros) foram incluídos no estudo e divididos em 3 grupos. O grupo I foi composto por 8 ovelhas com aproximadamente 145 dias de gestação; este grupo deu à luz 10 cordeiros naturalmente. O Grupo II foi composto por 8 ovelhas com 138 dias de gestação; este grupo deu à luz 11 cordeiros por cesariana. Grupo III consistiu de 8 ovelhas com 138 dias de gestação; este grupo recebeu dexametasona intramuscular (16 mg / animal) 36 horas antes de uma cesariana. O Grupo III entregou 11 cordeiros. Os testes citológicos foram realizados em microscópio com aumento máximo de 1000x, enquanto o teste de Clements foi observado visualmente por um dos pesquisadores. A contagem de corpos lamelares de líquido amniótico foi medida usando microscopia eletrônica de transmissão. Dentre os métodos de coloração, o hematoxilina-Shorr foi confiável, sendo que o Grupo III apresentou maior número de células orangeofílicas quando comparado ao grupo II, provavelmente devido à administração de corticóide. O teste de Clements mostrou maturidade pulmonar em aproximadamente 20% dos cordeiros do Grupo I e o Grupo II apresentou 9,1% de bolhas; entretanto, o Grupo III apresentou o maior percentual de maturidade pulmonar (36,4%). Os corpos lamelares foram medidos e todos os grupos apresentaram tamanhos entre 0,019 e 0,590μm. A avaliação radiográfica revelou que a maioria dos cordeiros apresentava algum grau de radiodensidade pulmonar, indicando padrão acinar ao nascimento. Esses resultados estão alinhados com as expectativas de cada grupo. Verificamos que o grupo normal apresentou maior maturidade pulmonar, enquanto o Grupo II apresentou imaturidade pulmonar, o que é esperado por se tratar de cordeiros nascidos prematuramente e o Grupo III apresentou maturidade pulmonar quase comparável ao grupo de parto normal (Grupo I). Isso se deve ao fato de que, embora esses animais sejam prematuros, o uso da dexametasona auxiliou na maturação pulmonar. Portanto, esses testes de maturidade pulmonar são considerados eficazes quando mais de uma técnica são utilizadas e podem ser usadas rotineiramente no cuidado de uma ovelha gestante em trabalho de parto, onde uma simples coleta de líquido amniótico pode prever uma gravidez de alto risco e alertar o veterinário se o recém-nascido precisa de tratamento de suporte intensivo.(AU)

Assessment of fetal lung maturity using analysis of amniotic fluid from ewes that gave birth prematurely and at term / Avaliação da maturidade pulmonar fetal utilizando a análise de líquido amniótico de ovelhas que deram à luz prematuramente e a termo

The aim of this study was to evaluate the lung maturity of premature and full-term lambs by analyzing amniotic fluid using the following methods: Clements test, Nile blue cytology test, hematoxylin-Shorr stain, lamellar body count, and radiographic tests. The use of these methods is intended to identify high-risk newborns and provide immediate clinical intervention after birth. Altogether, 56 animals (24 ewes and 32 lambs) were included in the study and divided into 3 groups. Group I consisted of 8 ewes that were at approximately 145 days of gestation; this group delivered 10 lambs naturally. Group II consisted of 8 ewes that were at 138 days' gestation; this group delivered 11 lambs by cesarean section. Group III consisted of 8 ewes at 138 days' gestation; this group was administered intramuscular dexamethasone (16mg/animal) 36 hours prior to a cesarean section. Group III delivered11 lambs. Cytological tests were performed using a microscope with a maximum magnification of 1000x, while the Clements test was visually observed by one of the researchers. Amnioticfluid lamellar body counts were measured using transmission electron microscopy. Among the staining methods, hematoxylin-Shorr was reliable, and Group III had a greater number of orangeophilic cells when compared to Group II, probably due to corticoid administration. The Clements test showed pulmonary maturity in approximately 20% of Group I lambs and Group II showed 9.1% of bubbles; however, Group III had the highest pulmonary maturity percentage (36.4%). The lamellar bodies were measured, and all groups had sizes between 0.019 and 0.590μm. Radiographic evaluation revealed that the majority of lambs presented some level of pulmonary radiodensity, indicating an acinar pattern at birth. These results are in line with the expectations of each group. We found that the normal group showed greater pulmonary maturity, whereas Group II presented pulmonary immaturity, which is expected because this group comprised lambs born prematurely and Group III showed pulmonary maturity almost comparable to the normal delivery group (Group I). This is due to the fact that although these animals are premature, the use of dexamethasone helped in pulmonary maturation. Therefore, these pulmonary maturity tests are considered effective when more than one technique is used and can be used routinely in the care of a pregnant ewe in labor, where a simple collection of amniotic fluid can predict a high-risk pregnancy and alert the veterinarian if the newborn needs intensive supportive treatment.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a maturidade pulmonar de cordeiros prematuros e a termo por meio da análise do líquido amniótico utilizando os seguintes métodos: teste de Clements, teste de citologia do azul do Nilo, coloração de hematoxilina-Shorr, contagem de corpos lamelares e testes radiográficos. Um desses métodos tem por objetivo identificar recém-nascidos de alto risco e fornecer intervenção clínica imediata após o nascimento. Ao todo, 56 animais (24 ovelhas e 32 cordeiros) foram incluídos no estudo e divididos em 3 grupos. O grupo I foi composto por 8 ovelhas com aproximadamente 145 dias de gestação; este grupo deu à luz 10 cordeiros naturalmente. O Grupo II foi composto por 8 ovelhas com 138 dias de gestação; este grupo deu à luz 11 cordeiros por cesariana. Grupo III consistiu de 8 ovelhas com 138 dias de gestação; este grupo recebeu dexametasona intramuscular (16 mg / animal) 36 horas antes de uma cesariana. O Grupo III entregou 11 cordeiros. Os testes citológicos foram realizados em microscópio com aumento máximo de 1000x, enquanto o teste de Clements foi observado visualmente por um dos pesquisadores. A contagem de corpos lamelares de líquido amniótico foi medida usando microscopia eletrônica de transmissão. Dentre os métodos de coloração, o hematoxilina-Shorr foi confiável, sendo que o Grupo III apresentou maior número de células orangeofílicas quando comparado ao grupo II, provavelmente devido à administração de corticóide. O teste de Clements mostrou maturidade pulmonar em aproximadamente 20% dos cordeiros do Grupo I e o Grupo II apresentou 9,1% de bolhas; entretanto, o Grupo III apresentou o maior percentual de maturidade pulmonar (36,4%). Os corpos lamelares foram medidos e todos os grupos apresentaram tamanhos entre 0,019 e 0,590μm. A avaliação radiográfica revelou que a maioria dos cordeiros apresentava algum grau de radiodensidade pulmonar, indicando padrão acinar ao nascimento. Esses resultados estão alinhados com as expectativas de cada grupo. Verificamos que o grupo normal apresentou maior maturidade pulmonar, enquanto o Grupo II apresentou imaturidade pulmonar, o que é esperado por se tratar de cordeiros nascidos prematuramente e o Grupo III apresentou maturidade pulmonar quase comparável ao grupo de parto normal (Grupo I). Isso se deve ao fato de que, embora esses animais sejam prematuros, o uso da dexametasona auxiliou na maturação pulmonar. Portanto, esses testes de maturidade pulmonar são considerados eficazes quando mais de uma técnica são utilizadas e podem ser usadas rotineiramente no cuidado de uma ovelha gestante em trabalho de parto, onde uma simples coleta de líquido amniótico pode prever uma gravidez de alto risco e alertar o veterinário se o recém-nascido precisa de tratamento de suporte intensivo.(AU)

In ovo feeding: a review / Alimentação in ovo: uma revisão

The poultry industry plays a large role in the Brazilian economy. In fact,Brazil ranks as the worlds leading exporter and second largest producer ofpoultry meat as the result of genetic improvement, animal nutrition,management, and biosecurity. During the development of bird embryos, thenutrients are stored within the egg, but carbohydrate supplementation isunsatisfactory upon hatching. Poor carbohydrate supplementation candamage the embryo development and negatively affect poultry weight. Inovo feeding is a promising technique to improve the quality of newly hatchedchicks as it uses systems for feeding the embryos by inoculating nutrientsinto the egg amniotic fluid. However, further studies are needed in order toimprove this technique and create effective implementations and protocolsthat can be widely used in the industry. This study aims to both review theliterature on the use of in-ovo feeding and understand the perspectives ofits use in the broiler production chain.

A avicultura tem tido papel expressivo na economia brasileira, estando o país classificado como o segundo maior produtor e o maior exportador do mundo. Esse resultado é proveniente de avanços no melhoramento genético, nutrição, manejo e biosseguridade. Nas aves, os nutrientes utilizados durante o desenvolvimento embrionário estão contidos no ovo, sendo escassa a reserva de carboidratos logo após a eclosão do pintainho. Essa restrição pode causar prejuízos ao desenvolvimento embrionário, impactando negativamente no peso das aves. Diante disso, a nutrição in ovo mostra-se como uma técnica promissora, que visa prover nutrientes ao embrião por meio da inoculação de soluções com efeitos benéficos ao seu desenvolvimento. Contudo, são necessários mais estudos no intuito de aprimorar a técnica e criação de protocolos efetivos que possam ser amplamente utilizados pela indústria. Nesse contexto, o objetivo desta revisão de literatura foi abordar e depreender as perspectivas da utilização da técnica nutrição in ovo na cadeia produtiva de frangos de corte.

In ovo feeding: a review / Alimentação in ovo: uma revisão

The poultry industry plays a large role in the Brazilian economy. In fact,Brazil ranks as the worlds leading exporter and second largest producer ofpoultry meat as the result of genetic improvement, animal nutrition,management, and biosecurity. During the development of bird embryos, thenutrients are stored within the egg, but carbohydrate supplementation isunsatisfactory upon hatching. Poor carbohydrate supplementation candamage the embryo development and negatively affect poultry weight. Inovo feeding is a promising technique to improve the quality of newly hatchedchicks as it uses systems for feeding the embryos by inoculating nutrientsinto the egg amniotic fluid. However, further studies are needed in order toimprove this technique and create effective implementations and protocolsthat can be widely used in the industry. This study aims to both review theliterature on the use of in-ovo feeding and understand the perspectives ofits use in the broiler production chain.(AU)

A avicultura tem tido papel expressivo na economia brasileira, estando o país classificado como o segundo maior produtor e o maior exportador do mundo. Esse resultado é proveniente de avanços no melhoramento genético, nutrição, manejo e biosseguridade. Nas aves, os nutrientes utilizados durante o desenvolvimento embrionário estão contidos no ovo, sendo escassa a reserva de carboidratos logo após a eclosão do pintainho. Essa restrição pode causar prejuízos ao desenvolvimento embrionário, impactando negativamente no peso das aves. Diante disso, a nutrição in ovo mostra-se como uma técnica promissora, que visa prover nutrientes ao embrião por meio da inoculação de soluções com efeitos benéficos ao seu desenvolvimento. Contudo, são necessários mais estudos no intuito de aprimorar a técnica e criação de protocolos efetivos que possam ser amplamente utilizados pela indústria. Nesse contexto, o objetivo desta revisão de literatura foi abordar e depreender as perspectivas da utilização da técnica nutrição in ovo na cadeia produtiva de frangos de corte.(AU)

Evaluation of pulmonary maturity in bovine neonates: analysis of amniotic fluid

ABSTRACT: Considering the representativeness of dairy cattle in our country, the concern about the mortality rates of the animals increases each time. Regarding to calf mortality, the Respiratory Distress Syndrome (RDS) has an important relevance during the neonatal period, and it is present in immature lungs. The amniotic fluid is in direct contact with the fetus, and it is able to offer evidence about his maturity. The aim of this study was to standardize the characteristics of the amniotic fluid, color, aspect, viscosity, quantification of lamellar body and surfactant evaluation by the Clements test and cytology, of term-born, mature and healthy calves. There were used 50 Black and White Holstein calves, which mothers were observed at calving in order to collect the amniotic fluid by puncture in the moment of exposure of the fetal membrane through the vaginal canal. Most amniotic fluid had a clear and hazy appearance due to varying degrees of viscosity and the presence or absence of clots. The Clements test could be adapted to the bovine species by the modification consisting in the addition of 3mL of amniotic fluid and 1mL of 95% ethanol. The methodology of the lamellar body count by the automated particle counter is not applicable for the bovine because of the small size of their lamellar body. The Nile Blue staining is unsatisfactory on predicting fetal maturity on the bovine species, different from cytology using Hematoxylin-Shorr stain. The presence of orange cells, increase in large amounts at the end of pregnancy. The cell stained orange counting, cells which are found in great amounts at the end of pregnancy. The present study stablished new parameters for evaluation of fetal and pulmonary maturity in the bovine species.

RESUMO: O objetivo desse estudo foi reunir novos dados práticos sobre a avaliação da maturidade pulmonar em neonatos bovinos, padronizando as características do líquido amniótico de bezerros maduros e hígidos, o que proporcionará a oportunidade de tratamento precoce dos animais prematuros, evitando prejuízos econômicos, principalmente quando consideramos os animais de alto valor genético. Amostras de líquido amniótico foram coletadas de 50 vacas da Raça Holandesa Preta e Branca. Corpos lamelares foram identificados por microscopia eletrônica de transmissão como estruturas de tamanho aproximado de 130nm, o que impede sua contagem em analisadores automáticos. O teste de Clements sofreu adaptações de técnica e se mostrou viável com a diluição de 3mL de líquido amniótico em 1mL de etanol a 95%. A citologia utilizando o método de Hematoxilina-Shorr, diferentemente do teste de Azul de Nilo, foi eficaz na identificação das células orangiofílicas, indicativas de maturidade fetal. Esses métodos mostraram-se originais e úteis ferramentas para a avaliação de maturidade pulmonar na espécie bovina, porém estudos com bezerros prematuros ainda são necessários.

Evaluation of pulmonary maturity in bovine neonates: analysis of amniotic fluid / Avaliação maturidade pulmonar em neonatos bovinos: análise do líquido amniótico

Considering the representativeness of dairy cattle in our country, the concern about the mortality rates of the animals increases each time. Regarding to calf mortality, the Respiratory Distress Syndrome (RDS) has an important relevance during the neonatal period, and it is present in immature lungs. The amniotic fluid is in direct contact with the fetus, and it is able to offer evidence about his maturity. The aim of this study was to standardize the characteristics of the amniotic fluid, color, aspect, viscosity, quantification of lamellar body and surfactant evaluation by the Clements test and cytology, of term-born, mature and healthy calves. There were used 50 Black and White Holstein calves, which mothers were observed at calving in order to collect the amniotic fluid by puncture in the moment of exposure of the fetal membrane through the vaginal canal. Most amniotic fluid had a clear and hazy appearance due to varying degrees of viscosity and the presence or absence of clots. The Clements test could be adapted to the bovine species by the modification consisting in the addition of 3mL of amniotic fluid and 1mL of 95% ethanol. The methodology of the lamellar body count by the automated particle counter is not applicable for the bovine because of the small size of their lamellar body. The Nile Blue staining is unsatisfactory on predicting fetal maturity on the bovine species, different from cytology using Hematoxylin-Shorr stain. The presence of orange cells, increase in large amounts at the end of pregnancy. The cell stained orange counting, cells which are found in great amounts at the end of pregnancy. The present study stablished new parameters for evaluation of fetal and pulmonary maturity in the bovine species.(AU)

O objetivo desse estudo foi reunir novos dados práticos sobre a avaliação da maturidade pulmonar em neonatos bovinos, padronizando as características do líquido amniótico de bezerros maduros e hígidos, o que proporcionará a oportunidade de tratamento precoce dos animais prematuros, evitando prejuízos econômicos, principalmente quando consideramos os animais de alto valor genético. Amostras de líquido amniótico foram coletadas de 50 vacas da Raça Holandesa Preta e Branca. Corpos lamelares foram identificados por microscopia eletrônica de transmissão como estruturas de tamanho aproximado de 130nm, o que impede sua contagem em analisadores automáticos. O teste de Clements sofreu adaptações de técnica e se mostrou viável com a diluição de 3mL de líquido amniótico em 1mL de etanol a 95%. A citologia utilizando o método de Hematoxilina-Shorr, diferentemente do teste de Azul de Nilo, foi eficaz na identificação das células orangiofílicas, indicativas de maturidade fetal. Esses métodos mostraram-se originais e úteis ferramentas para a avaliação de maturidade pulmonar na espécie bovina, porém estudos com bezerros prematuros ainda são necessários.(AU)

Evaluation of pulmonary maturity in bovine neonates: analysis of amniotic fluid / Avaliação maturidade pulmonar em neonatos bovinos: análise do líquido amniótico

Considering the representativeness of dairy cattle in our country, the concern about the mortality rates of the animals increases each time. Regarding to calf mortality, the Respiratory Distress Syndrome (RDS) has an important relevance during the neonatal period, and it is present in immature lungs. The amniotic fluid is in direct contact with the fetus, and it is able to offer evidence about his maturity. The aim of this study was to standardize the characteristics of the amniotic fluid, color, aspect, viscosity, quantification of lamellar body and surfactant evaluation by the Clements test and cytology, of term-born, mature and healthy calves. There were used 50 Black and White Holstein calves, which mothers were observed at calving in order to collect the amniotic fluid by puncture in the moment of exposure of the fetal membrane through the vaginal canal. Most amniotic fluid had a clear and hazy appearance due to varying degrees of viscosity and the presence or absence of clots. The Clements test could be adapted to the bovine species by the modification consisting in the addition of 3mL of amniotic fluid and 1mL of 95% ethanol. The methodology of the lamellar body count by the automated particle counter is not applicable for the bovine because of the small size of their lamellar body. The Nile Blue staining is unsatisfactory on predicting fetal maturity on the bovine species, different from cytology using Hematoxylin-Shorr stain. The presence of orange cells, increase in large amounts at the end of pregnancy. The cell stained orange counting, cells which are found in great amounts at the end of pregnancy. The present study stablished new parameters for evaluation of fetal and pulmonary maturity in the bovine species.(AU)

O objetivo desse estudo foi reunir novos dados práticos sobre a avaliação da maturidade pulmonar em neonatos bovinos, padronizando as características do líquido amniótico de bezerros maduros e hígidos, o que proporcionará a oportunidade de tratamento precoce dos animais prematuros, evitando prejuízos econômicos, principalmente quando consideramos os animais de alto valor genético. Amostras de líquido amniótico foram coletadas de 50 vacas da Raça Holandesa Preta e Branca. Corpos lamelares foram identificados por microscopia eletrônica de transmissão como estruturas de tamanho aproximado de 130nm, o que impede sua contagem em analisadores automáticos. O teste de Clements sofreu adaptações de técnica e se mostrou viável com a diluição de 3mL de líquido amniótico em 1mL de etanol a 95%. A citologia utilizando o método de Hematoxilina-Shorr, diferentemente do teste de Azul de Nilo, foi eficaz na identificação das células orangiofílicas, indicativas de maturidade fetal. Esses métodos mostraram-se originais e úteis ferramentas para a avaliação de maturidade pulmonar na espécie bovina, porém estudos com bezerros prematuros ainda são necessários.(AU)

Efeito do DMSO e glicerol na criopreservação de células tronco mesenquimais derivadas de líquido amniótico de fetos caprinos / Effect of DMSO and glycerol in criopreservation of mesenquimial trunk cells derived from amniotic fluid of caprine fetus

O objetivo do estudo foi avaliar a viabilidade e taxa de proliferação de células-tronco mesenquimais (CTMs) derivadas do líquido amniótico (LA) após cultivo in vitro, e o efeito de dois agentes crioprotetores. Foram utilizadas 9 cabras prenhes. As amostras foram colhidas de fetos caprinos por laparotomia, e delas obtidos as (CTMs) e submetidas ao cultivo in vitro. Posteriormente, uma fração das células foi criopreservada em meio DMSO (dimetilsulfóxido) ou glicerol e vitrificadas para posterior avaliação da viabilidade. O meio DMSO promoveu melhores taxas de sobrevida celular preservando as características de pluripotencialidade e de replicação in vitro.

The objective of the study was to evaluate the viability and proliferation rate of mesenchymal stem cells (MTCs) derived from amniotic fluid (LA) after in vitro culture, and the effect of two cryoprotective agents. 9 pregnant goats were used. The samples were collected from goat fetuses by laparotomy, and from them (CTMs) were obtained and cultured in vitro. Subsequently, a fraction of the cells were cryopreserved in DMSO (dimethylsulfoxide) or glycerol medium and vitrified for further evaluation of viability. The DMSO medium promoted better cell survival rates while preserving the characteristics of pluripotency and replication in vitro.

Efeito do DMSO e glicerol na criopreservação de células tronco mesenquimais derivadas de líquido amniótico de fetos caprinos / Effect of DMSO and glycerol in criopreservation of mesenquimial trunk cells derived from amniotic fluid of caprine fetus

O objetivo do estudo foi avaliar a viabilidade e taxa de proliferação de células-tronco mesenquimais (CTMs) derivadas do líquido amniótico (LA) após cultivo in vitro, e o efeito de dois agentes crioprotetores. Foram utilizadas 9 cabras prenhes. As amostras foram colhidas de fetos caprinos por laparotomia, e delas obtidos as (CTMs) e submetidas ao cultivo in vitro. Posteriormente, uma fração das células foi criopreservada em meio DMSO (dimetilsulfóxido) ou glicerol e vitrificadas para posterior avaliação da viabilidade. O meio DMSO promoveu melhores taxas de sobrevida celular preservando as características de pluripotencialidade e de replicação in vitro.(AU)

The objective of the study was to evaluate the viability and proliferation rate of mesenchymal stem cells (MTCs) derived from amniotic fluid (LA) after in vitro culture, and the effect of two cryoprotective agents. 9 pregnant goats were used. The samples were collected from goat fetuses by laparotomy, and from them (CTMs) were obtained and cultured in vitro. Subsequently, a fraction of the cells were cryopreserved in DMSO (dimethylsulfoxide) or glycerol medium and vitrified for further evaluation of viability. The DMSO medium promoted better cell survival rates while preserving the characteristics of pluripotency and replication in vitro.(AU)

A new organ preservation solution for static cold storage of the liver. Amniotic fluid

Purpose: To evaluate the effect of amniotic fluid in liver preservation in organ transplantation, and compare it with standard preservation solutions. Methods: The groups consisted of Group 1: Ringer Lactate (RL) group, Group 2: HTK group, Group 3: UW group, Group 4: AF group. The livers of rats from Group 1, 2, 3, and 4 were perfused and placed into falcon tubes containing RL, HTK, UW, and AF solutions at +4°C, respectively. The tubes were stored for 12 hours in the refrigerator at +4°C. Tissue samples were taken at the 6th and 12th hours for histopathological examinations of the perfused livers, and storage solutions for biochemical analyzes at 6th and 12th hours. Results: AF was shown to maintain organ viability by reducing the number of cells undergoing apoptosis. Histopathological changes such as sinusoidal dilatation, hydropic degeneration, and focal necrosis were found to be similar to the groups in which the standard organ preservation solutions were used. Additionally, the results of INOS, IL-10, and TNF-,which were evaluated immunohistochemically, have been shown to be similar to the UW and HTK groups. Conclusions: AF provided conservation similar to UW and HTK in the 12-hour liver SCS process. The fact that apoptosis values are comparable to standard preservation solutions supports the success of AF in the cold storage of the liver.(AU)

Espectroscopia NIR e análise multivariada aplicadas à identificação de grupos espectrais de células tronco derivadas do fluido amniótico de caprinos / NIR spectroscopy and multivariate analysis applied to the identification of spectrum groups of trunk cells derived from goats amniotic fluid

O objetivo deste trabalho foi desenvolver um modelo preditivo através de técnica multivariada para diferenciar meios de cultivo de células-tronco cultivadas in vitro e criopreservadas de acordo com os perfis de absorbância obtidas por NIR. Para tanto, foram coletados meios de cultivo de células-tronco oriundo do fluido amniótico de fetos caprinos, antes e após o processo de criopreservação por vitrificarão, e submetidos à análise pelo NIR. Foi possível estimar com alta acurácia o tratamento empregado nas amostras, gerando uma impressão digital dos meios de cultivo in vitro de células criopreservadas ou não.

The objective of this work was to develop a predictive model through a multivariate technique to differentiate culture media from stem cells cultured in vitro and cryopreserved according to the absorbance profiles obtained by NIR. For this purpose, culture media were collected from stem cells from the amniotic fluid of goat fetuses, before and after cryopreservation by vitrification, and submitted to NIR analysis. It was possible to estimate with high accuracy the treatment used in the samples, generating a fingerprint of in vitro culture media of cryopreserved cells or not.

Espectroscopia NIR e análise multivariada aplicadas à identificação de grupos espectrais de células tronco derivadas do fluido amniótico de caprinos / NIR spectroscopy and multivariate analysis applied to the identification of spectrum groups of trunk cells derived from goats amniotic fluid

O objetivo deste trabalho foi desenvolver um modelo preditivo através de técnica multivariada para diferenciar meios de cultivo de células-tronco cultivadas in vitro e criopreservadas de acordo com os perfis de absorbância obtidas por NIR. Para tanto, foram coletados meios de cultivo de células-tronco oriundo do fluido amniótico de fetos caprinos, antes e após o processo de criopreservação por vitrificarão, e submetidos à análise pelo NIR. Foi possível estimar com alta acurácia o tratamento empregado nas amostras, gerando uma impressão digital dos meios de cultivo in vitro de células criopreservadas ou não.(AU)

The objective of this work was to develop a predictive model through a multivariate technique to differentiate culture media from stem cells cultured in vitro and cryopreserved according to the absorbance profiles obtained by NIR. For this purpose, culture media were collected from stem cells from the amniotic fluid of goat fetuses, before and after cryopreservation by vitrification, and submitted to NIR analysis. It was possible to estimate with high accuracy the treatment used in the samples, generating a fingerprint of in vitro culture media of cryopreserved cells or not.(AU)

Fluido amniótico, alternativa eficiente para obtenção de células-tronco mesenquimais multipotentes / Amniotic fluid, efficient alternative to obtain multipotent mesenchymal stem cells

Na última década houve um crescente interesse na investigação quanto à presença de células-tronco no fluido amniótico, devido a facilidade de obtenção, isolamento e cultivo in vitro. Além disso, a utilização do fluido como fonte de células-tronco possibilita a obtenção de células com alto grau de indiferenciação e elevada taxa de proliferação in vitro e grande capacidade de diferenciação. Todas estas vantagens tornam o líquido amniótico uma fonte atrativa de células-tronco para utilização em biotecnologias reprodutivas, como a clonagem e transgênese, bem como ensaios clínicos e terapias celulares em animais para posterior utilização em seres humanos. Este artigo apresenta um panorama da pesquisa científica com células-tronco derivadas do fluido amniótico no mundo, a partir de levantamento bibliográfico de artigos científicos de pesquisadores brasileiros e estrangeiros.

In the last decade there has been a growing interest in investigation of presence of stem cells in amniotic fluid due to the ease of obtaining, isolating and in vitro culture. In addition, the use of amniotic fluid as a source of stem cells makes it possible to obtain cells with a high degree of indifferentiation and a high rate of in vitro proliferation and a great capacity for differentiation. All of these advantages make amniotic fluid an attractive source of stem cells for use in reproductive biotechnologies, such as cloning and transgenesis, as well as clinical trials in animals for further use in humans. This article presents a panorama of the scientific research with stem cells derived from amniotic fluid in the world, from a bibliographical survey of scientific articles of Brazilian and foreign researchers.

Fluido amniótico, alternativa eficiente para obtenção de células-tronco mesenquimais multipotentes / Amniotic fluid, efficient alternative to obtain multipotent mesenchymal stem cells

Na última década houve um crescente interesse na investigação quanto à presença de células-tronco no fluido amniótico, devido a facilidade de obtenção, isolamento e cultivo in vitro. Além disso, a utilização do fluido como fonte de células-tronco possibilita a obtenção de células com alto grau de indiferenciação e elevada taxa de proliferação in vitro e grande capacidade de diferenciação. Todas estas vantagens tornam o líquido amniótico uma fonte atrativa de células-tronco para utilização em biotecnologias reprodutivas, como a clonagem e transgênese, bem como ensaios clínicos e terapias celulares em animais para posterior utilização em seres humanos. Este artigo apresenta um panorama da pesquisa científica com células-tronco derivadas do fluido amniótico no mundo, a partir de levantamento bibliográfico de artigos científicos de pesquisadores brasileiros e estrangeiros.(AU)

In the last decade there has been a growing interest in investigation of presence of stem cells in amniotic fluid due to the ease of obtaining, isolating and in vitro culture. In addition, the use of amniotic fluid as a source of stem cells makes it possible to obtain cells with a high degree of indifferentiation and a high rate of in vitro proliferation and a great capacity for differentiation. All of these advantages make amniotic fluid an attractive source of stem cells for use in reproductive biotechnologies, such as cloning and transgenesis, as well as clinical trials in animals for further use in humans. This article presents a panorama of the scientific research with stem cells derived from amniotic fluid in the world, from a bibliographical survey of scientific articles of Brazilian and foreign researchers. (AU)

Clinical and epidemiological use of nested PCR targeting the repetitive element IS1111 associated with the transposase gene from Coxiella burnetii

Q fever is a worldwide zoonosis caused by Coxiella burnetii—a small obligate intracellular Gram-negative bacterium found in a variety of animals. It is transmitted to humans by inhalation of contaminated aerosols from urine, feces, milk, amniotic fluid, placenta, abortion products, wool, and rarely by ingestion of raw milk from infected animals. Nested PCR can improve the sensitivity and specificity of testing while offering a suitable amplicon size for sequencing. Serial dilutions were performed tenfold to test the limit of detection, and the result was 10× detection of C. burnetti DNA with internal nested PCR primers relative to trans-PCR. Different biological samples were tested and identified only in nested PCR. This demonstrates the efficiency and effectiveness of the primers. Of the 19 samples, which amplify the partial sequence of C. burnetii, 12 were positive by conventional PCR and nested PCR. Seven samples—five spleen tissue samples from rodents and two tick samples—were only positive in nested PCR. With these new internal primers for trans-PCR, we demonstrate that our nested PCR assay for C. burnetii can achieve better results than conventional PCR.(AU)