Resumo

O objetivo desta pesquisa foi analisar o transcriptoma de mRNA de feridas cutâneasexperimentais na região lombar de equinos tratadas ou não com óleo de copaíba a 10% a partir de biopsia de amostras, fixadas em formalina e embebidas em parafina(FFPE). Foram utilizadas biopsias de feridas experimentais em região lombar de equinos tratadas ou não (controle) com óleo de copaíba a 10% obtidas e armazenadas em FFPE há sete anos. A extração do RNA foi realizada utilizando Kit Qiagen RNeasy FFPE, devidamente quantificado e qualificado para análise da expressão do transcriptoma no GeneChip Equine Gene 1.1 ST Array Strip, escaneadas pelo GeneAtlas (Affymetrix®), utilizando o software TranscriptomeAnalysis Console (TAC) (Affymetrix®) para identificação, empregando-seaanáliseestatística ANOVA (fold change ± 1,5; FDR corrigido P < 0,05). A metodologia de extração de mRNA mostrou-se eficaz na avaliação de amostras de tecido tegumentar FFPE para realização de transcriptoma. O grupo que recebeu o óleo de copaíba a 10% apresentou cinco mRNA supra regulados, relacionados aos genes MIR365-2, MIR551B, LOC100060487, RPL12 e CNN3, além de três mRNA infra relulados, estes relacionados aos genes LOC102149005, LOC102149966 e C10H19orf33. Este é o primeiro estudo relacionado ao transcriptoma de mRNA de feridas lombares em equinos tratados com óleo de copaíba 10%. Os cinco genes supra regulados estão relacionados ao controle de tecido de granulação, apoptose e migração fibroblástica e, entre os três genes infra regulados, há o envolvimento da proteína ligadora de histonas, que ao ser inibida há diminuição da fibrose em pele, melhorando as características de cicatrização feridas ferida.

The objective of this research was to analyze the mRNA transcriptome of experimental cutaneous wounds in the lumbar region of horses treated or not with 10% copaiba oil from biopsy samples, fixed in formalin and embedded in paraffin (FFPE). Were used biopsies of experimental skin wounds in the lumbar region of horses treated or not (control) with 10% copaiba oil, fixed in formalin and embedded in paraffin (FFPE), obtained and stored seven years ago. The RNA extraction was performed Quiagen RNeasy FFPE kit, properly quantified and qualified for analysis of transcriptome expression in the GeneChip Equine Gene 1.1 ST Array Strip, scanted by GeneAtlas (Affymetrix®), and genes identified by TranscriptomeAnalysisConsole (TAC) (Affymetrix® software), using the statistical analysis ANOVA (fold change ± 1.5; FDR corrected p < 0.05). The mRNA extraction methodology was favorable in the evaluation of FFPE samples for transcriptome performance. Comparing the groups, 10% copaiba oil showed increased expression of five mRNAs related to genes MIR365-2, MIR551B, LOC100060487, RPL12 and CNN3, and decreased expression of three mRNAs related to genes LOC102149005, LOC102149966 and C10H19orf33. This is the first study related to mRNA transcriptome from lumbar wounds in horses treated with 10% copaiba oil of healing wounds. The five genes upregulated are related to the control of granulation tissue, apoptosis and fibroblast migration and, among the three downregulated genes, there is the involvement of the histone-binding protein, which, when inhibited, reduces fibrosis in the skin, improving the characteristics of the skin.

Resumo

Objetivou-se analisar o transcriptoma de miRNA de feridas cutâneas experimentais de equinos tratadas ou não com óleo de copaíba a partir de amostras anteriormente biopsiadas, fixadas em formalina e embebidas em parafina (FFPE). A cicatrização de feridas é um processo biológico que restaura a integridade física da pele. Biópsias obtidas e armazenadas há sete anos pelo método FFPE de feridas experimentais em região metacárpica de quatro animais foram utilizadas, sendo provenientes da borda da ferida e do tecido sadio subjacente equinos do grupo controle e do tratamento, que receberam óleo de copaíba a 10% topicamente. A extração de RNA, devidamente quantificado e qualificado foi realizada para processamento de miRNA. As amostras escaneadas pelo GeneAtlas (Affymetrix®) e genes identificados com auxílio do software Transcriptome Analysis Console (Affymetrix®), empregando-se a analise estatistica ANOVA (fold change ± 1,5; FDR corrigido P < 0,05). Comparando-se os grupos tratamento e controle, três miRNAs equinos diferencialmente expressos foram identificados: eca-miR-450c, eca-miR-98 e eca-miR-487b, todos supra regulados no grupo tratamento.

The aim was analyze the miRNA transcriptome of skin wound in horses treated or not with copaíba oil from fixed in formalin and embedded in paraffin (FFPE) samples previously biopsied. Wound healing is a biological process that restores skin physical integrity. Biopsies obtained and stored seven years ago by FFPE method of experimental wounds in the metacarpal region of four animals were used, coming from the wound margins and the underlying healthy tissue of the control and treatment group horses, which received 10% copaíba oil topically. The properly quantified and qualified RNA extraction was performed for miRNA processing. The samples scanted by GeneAtlas (Affymetrix®) and genes identified with the aid of the Transcriptome Analysis Console (Affymetrix® software), using the statistical analysis ANOVA (fold change ± 1.5; FDR corrected p < 0.05). Comparing the treatment and control groups, three differentially expressed equine miRNAs were identified: eca-miR-450c, eca-miR- 98 and eca-miR-487b, all superregulated in the treatment group.

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A placa aural é uma dermatopatia associada à quatro Equus caballus papillomavirus (EcPVs). Até o momento, o DNA de EcPVs não foi identificado em amostras de placa aural fixadas em formalina e embebidas em parafina (FFPE). O objetivo deste estudo foi otimizar um método para a detecção dos quatro tipos de EcPVs em 21 amostras FFPE usando a PCR. O DNA dos EcPVs foram detectados em 11 amostras (52.4%). O DNA do EcPV4 foi detectado em 38.1% (8/21) e do EcPV3 em 4.8% (1/21) das amostras. Coinfecção foi identificada em duas amostras (9.5%); EcPV4 e 5 foram detectados simultaneamente em uma amostra, enquanto o DNA dos EcPV4 e 6 foi detectado em outra. A especificidade do DNA dos papilomavírus equinos foi avaliada por sequenciamento gênico direto, que confirmou a especificidade dos produtos. A metodologia de PCR proposta possibilita o diagnóstico dos EcPV3, 4, 5 e 6 em amostras FFPE de placa aural equina.(AU)

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Influenza A virus (IAV) is a respiratory pathogen of pigs and is associated with the porcine respiratory disease complex (PRDC), along with other respiratory infectious agents. The aim of this study was to diagnose and to perform a clinic-pathological characterization of influenza virus infection in Brazilian pigs. Lung samples from 86 pigs in 37 farrow-to-finish and two farrow-to-feeder operations located in the States of Minas Gerais, São Paulo, Paraná, Rio Grande do Sul, Santa Catarina, and Mato Grosso were studied. Virus detection was performed by virus isolation and quantitative real time reverse-transcription PCR (qRT-PCR). Pathologic examination and immunohistochemistry (IHC) were performed in 60 lung formalin-fixed paraffin-embedded tissue fragments. Affected animals showed coughing, sneezing, nasal discharge, hyperthermia, inactivity, apathy, anorexia, weight loss and growth delay, which lasted for five to 10 days. Influenza virus was isolated from 31 (36.0%) lung samples and 36 (41.9%) were positive for qRT-PCR. Thirty-eight (63.3%) lung samples were positive by IHC and the most frequent microscopic lesion observed was inflammatory infiltrate in the alveoli, bronchiole, or bronchi wall or lumen (76.7%). These results indicate that influenza virus is circulating and causing disease in pigs in several Brazilian states.

O vírus influenza A (IAV) é um patógeno respiratório comum de suínos e faz parte do complexo de doenças respiratórias do suíno (PRDC) junto com outros agentes infecciosos. O objetivo deste estudo foi diagnosticar e realizar a caracterização clínica e patológica de casos/surtos de influenza em suínos brasileiros. Foram utilizadas amostras de tecido pulmonar de 86 suínos de 37 granjas de ciclo completo e duas unidades produtoras de leitões localizadas em Minas Gerais, São Paulo, Paraná, Rio Grande do Sul, Santa Catarina e Mato Grosso. A detecção viral em fragmentos pulmonares frescos foi realizada através do isolamento viral e da transcrição reversa-PCR em tempo real quantitativa (qRT-PCR). Exame patológico e imuno-histoquímica (IHQ) foram realizados em 60 amostras de pulmão fixadas em formalina 10% e embebidas em parafina. As amostras eram de animais apresentando tosse, espirros, secreção nasal, hipertermia, prostração, apatia, anorexia, perda de peso e ganho de peso reduzido, com duração entre cinco e 10 dias. O vírus influenza foi isolado de 31 (36,0%) amostras e 36 (41,9%) foram positivas na qRT-PCR. Na IHQ, 38 (63,3%) amostras foram positivas e a lesão mais frequentemente observada foi a presença de infiltrado inflamatório na parede e lúmen de vias aéreas (76,7%). Estes resultados indicam que o vírus influenza está circulando e causando lesões e doença respiratória em suínos de diversos Estados do Brasil.