Resumo
Streptococcosis caused by Streptococcus agalactiae is a major economic problem for Nile tilapia Oreochromis niloticus production worldwide. Inactivated vaccines are considered an efficient method for controlling streptococcosis. However, during the vaccination process, stress during fish handling could affect the immune response. Immunomodulators, such as thymomodulin, act on the immune system and can improve vaccination responses. Thus, the aim of this study was to assess the immunomodulatory effect of thymomodulin in O. niloticus vaccinated against S. agalactiae. For this, fish were distributed in a factorial design (2x2x6), corresponding to two levels of thymomodulin supplementation (0.0 and 0.3%), two treatments (sterile phosphate buffered saline and inactivated S. agalactiae vaccine). Initially, fish received thymomodulin supplementation for 30 days. Next, fish were vaccinated by injection intraperitoneal (i.p.) of heat inactivated S. agalactiae vaccine. 15 days after vaccination, all fish were challenged i.p. with S. agalactiae and blood samples were collected at 7, 14, 21 days post infection (DPI).Results revealed that fish supplemented with thymomodulin vaccinated or not developed better protection against S. agalactiae than vaccinated fish without thymomodulin. Furthermore, fish vaccinated and supplemented with thymomodulin presented high levels of antibodies after 14 and21 DPI, suggesting that thymomodulin can promote the immune response in Nile tilapia.
A estreptococose causada pelo Streptococcus agalactiae é um grande problema econômico para a produção de tilápia-do-nilo Oreochromis niloticus em todo o mundo. As vacinas inativadas são consideradas um método eficiente para o controle da estreptococose. No entanto, durante o processo de vacinação o estresse durante o manejo dos peixes pode afetar sua resposta imune. Imunomoduladores como a timomodulina, atuam no sistema imunológico e podem melhorar as respostas vacinais. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito imunomodulador da timomodulina em O. niloticus vacinado contra S. agalactiae. Para isso, os peixes foram distribuídos em esquema fatorial (2x2x6), correspondendo a dois níveis de suplementação de timodulina (0,0 e 0,3%), dois tratamentos (solução salina tamponada com fosfato estéril e vacina S. agalactiae inativada). Inicialmente, os peixes receberam suplementação de timomodulina por 30 dias. Em seguida, os peixes foram vacinados por via intraperitoneal (i.p.) da vacina de S. agalactiae inativada pelo calor. 15 dias após a vacinação, todos os peixes foram desafiados i.p. com S. agalactiae e amostras de sangue foram coletadas aos 7, 14, 21 dias após a infecção (DPI). Os resultados revelaram que os peixes suplementados com timomodulina vacinados ou não desenvolveram melhor proteção contra S. agalactiae do que os peixes vacinados sem timomodulina. Além disso, os peixes vacinados e suplementados com timomodulina apresentaram altos níveis de anticorpos após 14 e 21 DPI, sugerindo que a timomodulina pode promover a resposta imune em tilápia-do-nilo.
Assuntos
Animais , Streptococcus agalactiae/isolamento & purificação , Extratos do Timo , Vacinas Estreptocócicas/administração & dosagem , Ciclídeos/imunologia , Adjuvantes Imunológicos/análiseResumo
The consumption of inadequately thermally treated fish is a public health risk due to the possible propagation of Anisakis larvae. The present study demonstrated the physiological and histopathological changes that accompanied an oral inoculation of crude extracts from fresh and thermally treated Anisakis Type II (L3) in rats. Worms were isolated from a marine fish and examined and identified using light and scanning electron microscopy. The study was performed in 6 rat groups: control (I), garlic oil (GO) inoculated (II), fresh L3 inoculated (III), thermally treated L3 inoculated (IV), fresh L3 + GO inoculated (V), and a thermally treated L3 + GO inoculated (VI) groups. Rats inoculated with fresh and thermally treated L3 showed abnormal liver and kidney functions associated with the destruction of normal architecture. GO produced a protective effect in rat groups inoculated with L3 extracts + GO via the amelioration of liver and kidney functions, which was confirmed by the marked normal structure on histology. Cooking of L3-infected fish induced severe alterations compared to uncooked fish. The administration of garlic before and after fish eating is recommended to avoid the dangerous effect of anisakids, even if they are cooked.(AU)
O consumo de peixe inadequadamente tratado termicamente representa um risco para a saúde pública, com a possibilidade da propagação de larvas de Anisakis. O presente estudo demonstrou as alterações fisiológicas e histopatológicas acompanhadas de inoculação oral de extractos brutos de Anisakis tipo II (L3) frescos e termicamente tratados em ratos. Os vermes foram isolados de um peixe marinho, examinados e identificados por microscopia de luz e eletrônica de varredura. O estudo foi conduzido em 6 grupos de ratos: controle (I), óleo de alho (GO) inoculado (II), L3 fresco inoculado (III), L3 tratado termicamente inoculado (IV), L3 fresco + GO inoculado (V), e um grupo L3 + GO tratado termicamente inoculado (VI). Observou-se que ratos inoculados com L3 fresco e tratados termicamente mostraram funções hepáticas e renais anormais, associadas à destruição da sua arquitetura normal. GO produziu um efeito protector em grupos de ratos inoculados com extractos L3 + GO através da melhoria das funções do fígado e dos rins, o que foi confirmado pela estrutura normal marcada da sua histologia. A cozedura de peixes infectados com L3 induziu alterações mais graves do que os peixes não cozidos. Recomenda-se a administração de alho antes e depois do consumo de peixe, para evitar o efeito perigoso dos anisakids, mesmo que sejam cozidos.(AU)
Assuntos
Animais , Ratos , Ratos Wistar/parasitologia , Alho/química , Anisakis/patogenicidade , Anisaquíase/parasitologia , Anticorpos Anti-HelmínticosResumo
The capybara (Hydrochaeris hydrochaeris L. 1766) is the largest existing rodent in the world. This animal species, being synanthropic, may serve as a transmitter of different diseases and parasitic infections in animals and humans as well. Leptospirosis is a cosmopolitan infectious disease with a high prevalence in tropical and subtropical regions that can affect humans and other domestic and wild animals. Due to the absence of regional data and the importance of this animal species in transmitting diseases to animals and humans, the aim of this study was to analyze DNA and anti-Leptospira spp. antibodies in free-living capybaras (Hydrochaeris hydrochaeris) from a university campus in the city of Araras in São Paulo, Brazil. A total of 31 capybaras (Hydrochaeris hydrochaeris) were captured for collecting their blood samples. The collected sera were analyzed using the microscopic agglutination test (MAT). For the detection of Leptospira spp. DNA, the serum samples were used to extract genomic DNA for the nested-PCR analysis. Out of the 31 serum samples, 29 (93.55%) were reactive for MAT, with titers ranging from 25 to 400. The antibody could be identified against the most probable serovar in 26 (89.65%) samples, namely: Grippotyphosa (69.23%), Autumnalis (26.92%), and Bratislava (3.85%). Presence of Leptospira via nested-PCR was found only in 3.22% of serum samples. This study revealed the presence of DNA and anti-Leptospira spp. antibodies in free-living capybara. Characterization of these animals as possible carriers and disseminators of the etiological agent in the environment is necessary for identification of infection in other animals and campus visitors.
A capivara (Hydrochaeris hydrochaeris, L., 1766) é o maior roedor existente, pertencente a ordem Rodentia e família Hydrichaeridae. Esta espécie animal por ser sinantrópica pode ser transmissora de diferentes enfermidades infecto-parasitárias para animais e também para o homem. Entre as enfermidades, destaca-se a leptospirose, doença infecciosa cosmopolita com elevada prevalência em regiões tropicais e subtropicais que pode acometer o homem e outros animais domésticos e silvestres. Devido à ausência de dados regionais e a importância desta espécie animal para a saúde única o objetivo deste trabalho foi detectar DNA e anticorpos anti-Leptospira spp. em capivaras (Hydrochaeris hydrochaeris) de vida livre provenientes de um campus universitário da cidade de Araras em São Paulo, Brasil. Foram capturadas 31 capivaras (Hydrochaeris hydrochaeris), as quais passaram por coletas de sangue, onde os soros colhidos foram analisados mediante a técnica de Soroaglutinação Microscópica (SAM). Para a detecção de DNA de Leptospira spp., as amostras de soro foram submetidas a extração de DNA e esses submetidos à técnica de nested-PCR. Das 31 amostras de soro, 29 (93,55%) foram reagentes na SAM com títulos variando de 25 a 400. Em 26 (89,65%) amostras foi possível identificar o anticorpo contra o sorovar mais provável sendo: Grippotyphosa (69,23%), Autumnalis (26,92%) e Bratislava (3,85%) e em uma amostra de soro (3,22%) evidenciou-se a presença de leptospiras através da nested-PCR. Este estudo evidenciou a presença de DNA e anticorpos anti-Leptospira spp. em capivara de vida livre, caracterizando estes animais como possíveis portadores e disseminadores do agente etiológico no ambiente, permitindo a infecção de outros animais e também de visitantes do campus.
Assuntos
Animais , Anticorpos/análise , Leptospirose/veterinária , Roedores/parasitologiaResumo
The capybara (Hydrochaeris hydrochaeris L. 1766) is the largest existing rodent in the world. This animal species, being synanthropic, may serve as a transmitter of different diseases and parasitic infections in animals and humans as well. Leptospirosis is a cosmopolitan infectious disease with a high prevalence in tropical and subtropical regions that can affect humans and other domestic and wild animals. Due to the absence of regional data and the importance of this animal species in transmitting diseases to animals and humans, the aim of this study was to analyze DNA and anti-Leptospira spp. antibodies in free-living capybaras (Hydrochaeris hydrochaeris) from a university campus in the city of Araras in São Paulo, Brazil. A total of 31 capybaras (Hydrochaeris hydrochaeris) were captured for collecting their blood samples. The collected sera were analyzed using the microscopic agglutination test (MAT). For the detection of Leptospira spp. DNA, the serum samples were used to extract genomic DNA for the nested-PCR analysis. Out of the 31 serum samples, 29 (93.55%) were reactive for MAT, with titers ranging from 25 to 400. The antibody could be identified against the most probable serovar in 26 (89.65%) samples, namely: Grippotyphosa (69.23%), Autumnalis (26.92%), and Bratislava (3.85%). Presence of Leptospira via nested-PCR was found only in 3.22% of serum samples. This study revealed the presence of DNA and anti-Leptospira spp. antibodies in free-living capybara. Characterization of these animals as possible carriers and disseminators of the etiological agent in the environment is necessary for identification of infection in other animals and campus visitors.(AU)
A capivara (Hydrochaeris hydrochaeris, L., 1766) é o maior roedor existente, pertencente a ordem Rodentia e família Hydrichaeridae. Esta espécie animal por ser sinantrópica pode ser transmissora de diferentes enfermidades infecto-parasitárias para animais e também para o homem. Entre as enfermidades, destaca-se a leptospirose, doença infecciosa cosmopolita com elevada prevalência em regiões tropicais e subtropicais que pode acometer o homem e outros animais domésticos e silvestres. Devido à ausência de dados regionais e a importância desta espécie animal para a saúde única o objetivo deste trabalho foi detectar DNA e anticorpos anti-Leptospira spp. em capivaras (Hydrochaeris hydrochaeris) de vida livre provenientes de um campus universitário da cidade de Araras em São Paulo, Brasil. Foram capturadas 31 capivaras (Hydrochaeris hydrochaeris), as quais passaram por coletas de sangue, onde os soros colhidos foram analisados mediante a técnica de Soroaglutinação Microscópica (SAM). Para a detecção de DNA de Leptospira spp., as amostras de soro foram submetidas a extração de DNA e esses submetidos à técnica de nested-PCR. Das 31 amostras de soro, 29 (93,55%) foram reagentes na SAM com títulos variando de 25 a 400. Em 26 (89,65%) amostras foi possível identificar o anticorpo contra o sorovar mais provável sendo: Grippotyphosa (69,23%), Autumnalis (26,92%) e Bratislava (3,85%) e em uma amostra de soro (3,22%) evidenciou-se a presença de leptospiras através da nested-PCR. Este estudo evidenciou a presença de DNA e anticorpos anti-Leptospira spp. em capivara de vida livre, caracterizando estes animais como possíveis portadores e disseminadores do agente etiológico no ambiente, permitindo a infecção de outros animais e também de visitantes do campus.(AU)
Assuntos
Animais , Leptospirose/veterinária , Roedores/parasitologia , Anticorpos/análiseResumo
This study aimed to evaluate the humoral immune response in pigs immunized intranasally and intramuscularly with recombinant Toxoplasma gondii rROP2 protein in combination with the adjuvant Iscomatrix. Twelve mixed breed pigs divided into three groups (n=4) were used, G1 received recombinant ROP2 proteins (200 µg/dose) plus Iscomatrix, G2 received PBS plus Iscomatrix, and G3 as the control group. The intranasal (IN) and intramuscular (IM) routes were used. Animals were challenged orally with VEG strain oocysts and treated on day three after challenge. Fever, anorexia, and prostration were the clinical signs observed in all animals. All the G1 animals produced antibodies above the cut-off on the day of the challenge, while the G2 and G3 remained below the cut-off. Better partial protection against parasitemia and cyst tissue formation was observed in G1 than G3. The protection factors against tissue cyst formation were 40.0% and 6.1% for G1 and G2, respectively, compared to G3. In conclusion, there were not systemic antibody responses in pigs with IN immunization with rROP2+Iscomatrix; however, after IM immunization, those animals produced higher titers than animal controls. We associated these results with partial protection obtained against parasitemia and tissue cysts formation.(AU)
O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta imune humoral em suínos imunizados pelas vias intranasal e intramuscular com proteínas recombinantes rROP2 do Toxoplasma gondii associadas ao adjuvante Iscomatrix. Doze suínos cruzados divididos em 3 grupos (n=4) foram utilizados. O G1 recebeu proteína recombinante ROP2 (200mg/dose) associada ao adjuvante Iscomatrix; o G2 recebeu PBS associado ao Iscomatrix; e o G3 foi o grupo controle. As vias intranasal (IN) e intramuscular (IM) foram utilizadas. Os animais foram desafiados por via oral com a cepa VEG e tratados no dia três após o desafio. Febre, anorexia e prostração foram os sinais clínicos observados em todos os animais. Todos os animais do G1 produziram anticorpos acima do ponto de corte no dia do desafio, enquanto os animais do G2 e G3 permaneceram abaixo do ponto de corte no desafio. Proteção parcial contra parasitemia e formação de cistos teciduais foram observadas nos suínos do G1 comparados ao G3. Os fatores de proteção contra a formação de cistos teciduais foram 40,0% e 6,1% no G1 e G2, respectivamente, comparados com o G3. Como conclusão, não houve estimulação da resposta imune humoral sistêmica nos suínos após as imunizações IN com rROP2+Iscomatrix. Estes animais, porém, após a imunização IM, produziram títulos de anticorpos mais altos que os animais controles. Esses resultados foram associados a uma proteção parcial contra a parasitemia e formação de cistos teciduais.(AU)
Assuntos
Animais , Suínos/imunologia , Suínos/microbiologia , Proteínas Recombinantes/análise , Toxoplasmose Animal , Vacinas/análiseResumo
Leptospirosis is a zoonosis transmitted by contact with infected urine or water contaminated with the agent. Searches for Leptospira spp. in reptiles are scarce although most species have contact with aquatic environments. We evaluated the presence of anti-Leptospira spp. antibodies in Podocnemis expansa housed at the Amazonian Zoobotanical Garden, in Belém, Pará state, Brazil. We analyzed 74 serum samples through the microscopic agglutination test using 31 live antigens from different Leptospira spp. serogroups. Thirty samples (40.5%) were positive against Leptospira spp., with titrations between 100 and 3,200 for one or more serogroups. The Hebdomadis serogroup was the most prevalent, with 26 (87%) out of the 30 positive samples, followed by Djasiman, with two (7%) and Celledoni and Bataviae with one (3%) sample each. The detection of anti-Leptospira spp. agglutinins in P. expansa suggests that the aquatic environment is a transmission route for this pathogen among chelonians.(AU)
A leptospirose é uma zoonose transmitida pelo contato com urina infectada ou água contaminada com o agente. Estudos de Leptospira spp. em répteis são escassos, apesar da maioria das espécies terem contato com ambientes aquáticos. Avaliamos a presença de anticorpos anti-Leptospira spp. em Podocnemis expansa mantidas no Jardim Zoobotânico da Amazônia, em Belém, Pará, Brasil. Analisamos 74 amostras de soro por meio do teste de aglutinação microscópica usando 31 antígenos vivos de diferentes sorogrupos de Leptospira spp. Trinta amostras (40,5%) foram reagentes contra Leptospira spp., com titulações entre 100 e 3.200 para um ou mais sorogrupos. O sorogrupo Hebdomadis foi o mais prevalente, com 26 (87%) das 30 amostras positivas, seguido por Djasiman, com duas (7%) e Celledoni e Bataviae com uma (3%) amostra cada. A detecção de aglutininas anti-Leptospira spp. em P. expansa sugere que o ambiente aquático é uma via de transmissão para esse patógeno entre quelônios.(AU)
Assuntos
Animais , Leptospirose/veterinária , Tartarugas/microbiologia , Aglutininas/análise , Leptospira/imunologiaResumo
ABSTRACT: Vaccination is a strategy to the prevention and control of reproductive diseases caused by bovine viral diarrhea virus (BVDV) and bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1), however the various compositions of commercial vaccines should be evaluated for their ability to induce protection mediated by antibodies. The objective of this research was to evaluate the production of specific neutralizing Abs against BVDV-1 and 2, and BoHV-1 induced by commercial vaccines composed by different adjuvants. Holstein heifers were vaccinated and distributed in three experimental groups: Group I (G1) was vaccinated with a commercial vaccine containing inactivated BVDV-1, BVDV-2 and BoHV-1 diluted in alum hydroxide as adjuvant (n=9); Group II (G2) was vaccinated with an product containing inactivated strains of BVDV-1, BVDV-2, BoHV-1 and BoHV-5 diluted in oil emulsion as adjuvant (n=10); Group III (G3) was vaccinated with a commercial vaccine containing inactivated BVDV-1 and BVDV-2, besides live modified thermosensitive BoHV-1, diluted in Quil A, amphigen and cholesterol (n=10); A control, non-vaccinated group (n=6) was mock vaccinated with saline. Heifers received two subcutaneous doses of 5mL of each commercial vaccine on the right side of the neck, with 21 days interval. Humoral immune response was assessed by the virus neutralization test (VN) against BVDV-1 (NADL and Singer strains), BVDV-2 (SV253 strain) and BoHV-1 (Los Angeles strain) in serum samples collected on vaccination days zero (D0), 21 (D21) and 42 (D42; 21 days after boosting). Neutralizing Abs against BVDV-1 NADL was detected only in D42, regardless of the vaccine used. Similar geometric mean titers (GMT) for BVDV-1 NADL were observed between G1 (log2=5.1) and G3 (log2=5.1). The seroconversion rate (%) was higher in G1 (78%) when compared to G2 (10%) and G3 (40%). For BVDV-1 Singer, it was also possible to detect Abs production in G1 (log2=5.8, 100% seroconversion rate) and G3 (log2=3.5, seroconversion rate = 60%), only after the booster dose (D42). Neutralizing Abs to BVDV-2 (SV253) were detected only in G3, observing 90% seroconversion associated with high titers of Abs (log2=6.7) after the 2nd dose of vaccine (D42). Heifers from G1 and G3 responded to BoHV-1 after the first dose (D21): G1 (log2=2.5, seroconversion rate = 67%) and G3 (log2=0.7, seroconversion rate = 80%). In D42, a higher magnitude response was observed in the heifers from G3 (log2=6.1, 100%) compared with G1 (log2=4.3, 100%) and G2 (log2=2.7, 60%). Based on the data obtained, it can be concluded that the commercial vaccine contained aluminum hydroxide (G1) was most effective in the induction of antibodies against BVDV-1. On the other hand, this vaccine did not induce the production of neutralizing Abs against BVDV-2. Only the heifers from G3 (Quil A, amphigen and cholesterol) generated neutralizing Abs against BVDV-2. The animals that received commercial vaccine containing oil emulsion as adjuvant (G2) had a weak/undetectable response against BVDV-1 and BVDV-2. The best protective response against BoHV-1 was observed in heifers vaccinated with the live modified thermosensitive virus.
RESUMO: A vacinação é utilizada como estratégia para a prevenção e controle das doenças reprodutivas, causadas pelos vírus da diarreia viral bovina (BVDV) e herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1), entretanto, as diversas composições de vacinas comerciais devem ser avaliadas quanto a sua eficiência protetiva mediada por anticorpos (Acs). O objetivo desta pesquisa foi avaliar a produção Acs neutralizantes específicos para cepas de BVDV-1 e 2, e BoHV-1 induzida por vacinas comerciais contendo diferentes tipos de adjuvantes. Para tal, novilhas Holandesas foram vacinadas e distribuídas em três grupos experimentais: Grupo I (G1) foi vacinado com uma vacina comercial composta por cepas inativadas de BVDV-1, BVDV-2 e BoHV-1 diluídas em hidróxido de alumínio como adjuvante (n=9); Grupo II (G2) foi vacinado com produto contendo as cepas inativadas de BVDV-1, BVDV-2, BoHV-1 e BoHV-5 em uma emulsão oleosa como adjuvante (n=10); O Grupo III (G3) foi vacinado com uma vacina comercial contendo BVDV-1 e BVDV-2 inativado, além do BoHV-1 vivo modificado e termosensivel, diluídos em adjuvante contendo Quil A, Amphigem e colesterol (n=10); O Grupo Controle não vacinado (n=6) foi inoculado com solução salina. As novilhas receberam duas doses das respectivas vacinas ou solução salina (5mL), com intervalo de 21 dias, por via subcutânea, na tábua do pescoço do lado direito. A resposta imune humoral foi avaliada pelo teste de vírus neutralização (VN) contra o BVDV-1 (cepas NADL e Singer), BVDV-2 (cepa SV253) e BoHV-1 (cepa Los Angeles) em amostras de soro coletadas nos dias (D) de vacinação zero (D0), 21 dias após 1ª dose (D21)e 42 (D42; 21 dias após A 2ª dose). Os anticorpos neutralizantes contra o BVDV-1 NADL foram detectados apenas em D42, independentemente da vacina utilizada. Os títulos médios geométricos (GMT) de anticorpos foram semelhantes entre G1 (log2=5,1) e G3 (log2=5,1). A taxa de soroconversão foi maior no G1 (78%) quando comparado ao G2 (10%) e G3 (40%). Para o BVDV-1 Singer, somente após D42 foi observada a produção de Acs no G1 (log2=5,8; taxa de soroconversão de 100%) e G3 (log2=3,5; taxa de soroconversão = 60%). Os anticorpos contra BVDV-2 (SV253) foram detectados apenas nas novilhas do G3, observando-se taxa de soroconversão de 90% com altos títulos de anticorpos neutralizantes (log2=6,7) em D42. Novilhas G1 e G3 responderam ao BoHV-1 após a primeira dose (D21): G1 (log2=2,5; taxa de seroconversão = 67%) e G3 (log2=0,7; taxa de seroconversão = 80%). Em contrapartida, foi observada uma maior magnitude de resposta para as novilhas G3 (log2=6,1; 100%) em D42, em relação aos animais G1 (log2=4,3; 100%) e G2 (log2=2,7; 60%). Com base nos dados obtidos, foi possível concluir que a vacina composta por hidróxido de alumínio (G1) foi mais eficaz na produção de anticorpos contra o BVDV-1, em contrapartida esse produto não induziu anticorpos contra o BVDV-2. Apenas as novilhas do G3 (Quil A, amphigen e colesterol) geraram Acs neutralizantes contra o BVDV-2. Os animais que receberam a vacina em emulsão oleosa (G2) como adjuvante apresentaram uma resposta fraca/indetectável contra o BVDV-1 e BVDV-2. A melhor resposta protetiva contra o BoHV-1 foi observada nas novilhas vacinadas com a vacina viva modificada termosensível.
Resumo
Vaccination is a strategy to the prevention and control of reproductive diseases caused by bovine viral diarrhea virus (BVDV) and bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1), however the various compositions of commercial vaccines should be evaluated for their ability to induce protection mediated by antibodies. The objective of this research was to evaluate the production of specific neutralizing Abs against BVDV-1 and 2, and BoHV-1 induced by commercial vaccines composed by different adjuvants. Holstein heifers were vaccinated and distributed in three experimental groups: Group I (G1) was vaccinated with a commercial vaccine containing inactivated BVDV-1, BVDV-2 and BoHV-1 diluted in alum hydroxide as adjuvant (n=9); Group II (G2) was vaccinated with an product containing inactivated strains of BVDV-1, BVDV-2, BoHV-1 and BoHV-5 diluted in oil emulsion as adjuvant (n=10); Group III (G3) was vaccinated with a commercial vaccine containing inactivated BVDV-1 and BVDV-2, besides live modified thermosensitive BoHV-1, diluted in Quil A, amphigen and cholesterol (n=10); A control, non-vaccinated group (n=6) was mock vaccinated with saline. Heifers received two subcutaneous doses of 5mL of each commercial vaccine on the right side of the neck, with 21 days interval. Humoral immune response was assessed by the virus neutralization test (VN) against BVDV-1 (NADL and Singer strains), BVDV-2 (SV253 strain) and BoHV-1 (Los Angeles strain) in serum samples collected on vaccination days zero (D0), 21 (D21) and 42 (D42; 21 days after boosting). Neutralizing Abs against BVDV-1 NADL was detected only in D42, regardless of the vaccine used. Similar geometric mean titers (GMT) for BVDV-1 NADL were observed between G1 (log2=5.1) and G3 (log2=5.1). The seroconversion rate (%) was higher in G1 (78%) when compared to G2 (10%) and G3 (40%). For BVDV-1 Singer, it was also possible to detect Abs production in G1 (log2=5.8, 100% seroconversion rate) and G3 (log2=3.5, seroconversion rate = 60%), only after the booster dose (D42). Neutralizing Abs to BVDV-2 (SV253) were detected only in G3, observing 90% seroconversion associated with high titers of Abs (log2=6.7) after the 2nd dose of vaccine (D42). Heifers from G1 and G3 responded to BoHV-1 after the first dose (D21): G1 (log2=2.5, seroconversion rate = 67%) and G3 (log2=0.7, seroconversion rate = 80%). In D42, a higher magnitude response was observed in the heifers from G3 (log2=6.1, 100%) compared with G1 (log2=4.3, 100%) and G2 (log2=2.7, 60%). Based on the data obtained, it can be concluded that the commercial vaccine contained aluminum hydroxide (G1) was most effective in the induction of antibodies against BVDV-1. On the other hand, this vaccine did not induce the production of neutralizing Abs against BVDV-2. Only the heifers from G3 (Quil A, amphigen and cholesterol) generated neutralizing Abs against BVDV-2. The animals that received commercial vaccine containing oil emulsion as adjuvant (G2) had a weak/undetectable response against BVDV-1 and BVDV-2. The best protective response against BoHV-1 was observed in heifers vaccinated with the live modified thermosensitive virus.(AU)
A vacinação é utilizada como estratégia para a prevenção e controle das doenças reprodutivas, causadas pelos vírus da diarreia viral bovina (BVDV) e herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1), entretanto, as diversas composições de vacinas comerciais devem ser avaliadas quanto a sua eficiência protetiva mediada por anticorpos (Acs). O objetivo desta pesquisa foi avaliar a produção Acs neutralizantes específicos para cepas de BVDV-1 e 2, e BoHV-1 induzida por vacinas comerciais contendo diferentes tipos de adjuvantes. Para tal, novilhas Holandesas foram vacinadas e distribuídas em três grupos experimentais: Grupo I (G1) foi vacinado com uma vacina comercial composta por cepas inativadas de BVDV-1, BVDV-2 e BoHV-1 diluídas em hidróxido de alumínio como adjuvante (n=9); Grupo II (G2) foi vacinado com produto contendo as cepas inativadas de BVDV-1, BVDV-2, BoHV-1 e BoHV-5 em uma emulsão oleosa como adjuvante (n=10); O Grupo III (G3) foi vacinado com uma vacina comercial contendo BVDV-1 e BVDV-2 inativado, além do BoHV-1 vivo modificado e termosensivel, diluídos em adjuvante contendo Quil A, Amphigem e colesterol (n=10); O Grupo Controle não vacinado (n=6) foi inoculado com solução salina. As novilhas receberam duas doses das respectivas vacinas ou solução salina (5mL), com intervalo de 21 dias, por via subcutânea, na tábua do pescoço do lado direito. A resposta imune humoral foi avaliada pelo teste de vírus neutralização (VN) contra o BVDV-1 (cepas NADL e Singer), BVDV-2 (cepa SV253) e BoHV-1 (cepa Los Angeles) em amostras de soro coletadas nos dias (D) de vacinação zero (D0), 21 dias após 1ª dose (D21)e 42 (D42; 21 dias após A 2ª dose). Os anticorpos neutralizantes contra o BVDV-1 NADL foram detectados apenas em D42, independentemente da vacina utilizada. Os títulos médios geométricos (GMT) de anticorpos foram semelhantes entre G1 (log2=5,1) e G3 (log2=5,1). A taxa de soroconversão foi maior no G1 (78%) quando comparado ao G2 (10%) e G3 (40%). Para o BVDV-1 Singer, somente após D42 foi observada a produção de Acs no G1 (log2=5,8; taxa de soroconversão de 100%) e G3 (log2=3,5; taxa de soroconversão = 60%). Os anticorpos contra BVDV-2 (SV253) foram detectados apenas nas novilhas do G3, observando-se taxa de soroconversão de 90% com altos títulos de anticorpos neutralizantes (log2=6,7) em D42. Novilhas G1 e G3 responderam ao BoHV-1 após a primeira dose (D21): G1 (log2=2,5; taxa de seroconversão = 67%) e G3 (log2=0,7; taxa de seroconversão = 80%). Em contrapartida, foi observada uma maior magnitude de resposta para as novilhas G3 (log2=6,1; 100%) em D42, em relação aos animais G1 (log2=4,3; 100%) e G2 (log2=2,7; 60%). Com base nos dados obtidos, foi possível concluir que a vacina composta por hidróxido de alumínio (G1) foi mais eficaz na produção de anticorpos contra o BVDV-1, em contrapartida esse produto não induziu anticorpos contra o BVDV-2. Apenas as novilhas do G3 (Quil A, amphigen e colesterol) geraram Acs neutralizantes contra o BVDV-2. Os animais que receberam a vacina em emulsão oleosa (G2) como adjuvante apresentaram uma resposta fraca/indetectável contra o BVDV-1 e BVDV-2. A melhor resposta protetiva contra o BoHV-1 foi observada nas novilhas vacinadas com a vacina viva modificada termosensível.(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Vacinas/efeitos adversos , Vacinas/imunologia , Herpesvirus Bovino 1/imunologia , Vírus da Diarreia Viral Bovina Tipo 1/imunologiaResumo
Protozoários do gênero Neospora adquiriram grande importância ao serem incriminados como causa de aborto em bovinos, ingressando assim, no grupo de patógenos de relevância em medicina veterinária. Atualmente são conhecidas duas espécies potencialmente patogênicas, a saber, N. hughesi e N. caninum. A primeira espécie é relacionada a distúrbios neurológicos em potros e a segunda concorre como possível causa de aborto também em equinos. São conhecidas duas formas de transmissão deste Apicomplexa, a vertical ou transplacentária e a horizontal. Sabidamente fatores referentes ao parasita e ao hospedeiro interferem na eficiência tanto da infecção como na confecção de uma resposta imune efetiva, que culmine com a produção de anticorpos específicos ao imunógeno desafiante. Neste sentido o presente trabalho buscou verificar se as imunoglobulinas produzidas pelo concepto ainda em sua vida intrauterina, mediante desafio endógeno, persistem em seu organismo no seu primeiro ano de vida. Para tal, utilizou-se como forma de diagnóstico a pesquisa de anticorpos via Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Foi realizado acompanhamento sorológico de potros congenitamente infectado e livres de Neospora spp. ao nascimento e aos 12 meses de idade. Constatou-se que 40% dos potros congenitamente infectados apresentavam IgG contra Neospora spp. aos 12 meses e, entre os potros soronegativos ao nascimento 28% produziram IgG específico ao final de seu primeiro ano de vida. Estes resultados apontam que a presença de imunoglobulinas específicas antiNeospora spp. ao final do primeiro ano de vida dos potros, independe do status sorológico materno, indicando que a via de infecção horizontal é importante para equinos.
Protozoa of the genus Neospora acquired great importance to be incriminated as a major cause of abortion in cattle in some regions of the planet, thus joining in relevant pathogens group in veterinary medicine. Currently known are two potentially pathogenic species, namely N. hughesi and N. caninum. The first kind is related to neurological disorders in foals and the second competes as a possible cause of abortion also in horses. Two are known forms of transmission of this Apicomplexa, vertical or placenta and the horizontal. Known factors related to the parasite and the host interfere with the efficiency of both the infection and the manufacture of an effective immune response, culminating in the production of specific antibodies to challenging immunogen. In this sense, the present study was to ascertain whether the immunoglobulins produced by the fetus still in its intrauterine life through endogenous challenge, persist in your body in its first year of life. Therefore, we used as a means of diagnosis for antibodies via Immunofluorescence Assay (IFA). Was conducted serological monitoring of congenitally infected foals and free of Neospora spp. birth until they fulfilled: 12 months of age. It was found that 40% of congenitally infected foals had IgG against Neospora spp. at 12 months, and among seronegative foals at birth 28% produced specific IgG to the end of their first year of life. These results indicate that thepresence of specific anti-Neospora spp. immunoglobulins. the end of the first year of foals, independent of maternal HIV status, indicating that the horizontal infection pathway is important for horses.
Assuntos
Animais , Cavalos/parasitologia , Coccidiose/congênito , Coccidiose/diagnóstico , Coccidiose/transmissão , Coccidiose/veterinária , Neospora , Técnica Indireta de Fluorescência para Anticorpo/veterináriaResumo
Protozoários do gênero Neospora adquiriram grande importância ao serem incriminados como causa de aborto em bovinos, ingressando assim, no grupo de patógenos de relevância em medicina veterinária. Atualmente são conhecidas duas espécies potencialmente patogênicas, a saber, N. hughesi e N. caninum. A primeira espécie é relacionada a distúrbios neurológicos em potros e a segunda concorre como possível causa de aborto também em equinos. São conhecidas duas formas de transmissão deste Apicomplexa, a vertical ou transplacentária e a horizontal. Sabidamente fatores referentes ao parasita e ao hospedeiro interferem na eficiência tanto da infecção como na confecção de uma resposta imune efetiva, que culmine com a produção de anticorpos específicos ao imunógeno desafiante. Neste sentido o presente trabalho buscou verificar se as imunoglobulinas produzidas pelo concepto ainda em sua vida intrauterina, mediante desafio endógeno, persistem em seu organismo no seu primeiro ano de vida. Para tal, utilizou-se como forma de diagnóstico a pesquisa de anticorpos via Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Foi realizado acompanhamento sorológico de potros congenitamente infectado e livres de Neospora spp. ao nascimento e aos 12 meses de idade. Constatou-se que 40% dos potros congenitamente infectados apresentavam IgG contra Neospora spp. aos 12 meses e, entre os potros soronegativos ao nascimento 28% produziram IgG específico ao final de seu primeiro ano de vida. Estes resultados apontam que a presença de imunoglobulinas específicas antiNeospora spp. ao final do primeiro ano de vida dos potros, independe do status sorológico materno, indicando que a via de infecção horizontal é importante para equinos.(AU)
Protozoa of the genus Neospora acquired great importance to be incriminated as a major cause of abortion in cattle in some regions of the planet, thus joining in relevant pathogens group in veterinary medicine. Currently known are two potentially pathogenic species, namely N. hughesi and N. caninum. The first kind is related to neurological disorders in foals and the second competes as a possible cause of abortion also in horses. Two are known forms of transmission of this Apicomplexa, vertical or placenta and the horizontal. Known factors related to the parasite and the host interfere with the efficiency of both the infection and the manufacture of an effective immune response, culminating in the production of specific antibodies to challenging immunogen. In this sense, the present study was to ascertain whether the immunoglobulins produced by the fetus still in its intrauterine life through endogenous challenge, persist in your body in its first year of life. Therefore, we used as a means of diagnosis for antibodies via Immunofluorescence Assay (IFA). Was conducted serological monitoring of congenitally infected foals and free of Neospora spp. birth until they fulfilled: 12 months of age. It was found that 40% of congenitally infected foals had IgG against Neospora spp. at 12 months, and among seronegative foals at birth 28% produced specific IgG to the end of their first year of life. These results indicate that thepresence of specific anti-Neospora spp. immunoglobulins. the end of the first year of foals, independent of maternal HIV status, indicating that the horizontal infection pathway is important for horses.(AU)
Assuntos
Animais , Cavalos/parasitologia , Neospora , Coccidiose/congênito , Coccidiose/veterinária , Coccidiose/diagnóstico , Coccidiose/transmissão , Técnica Indireta de Fluorescência para Anticorpo/veterináriaResumo
Vaccination is a strategy to the prevention and control of reproductive diseases caused by bovine viral diarrhea virus (BVDV) and bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1), however the various compositions of commercial vaccines should be evaluated for their ability to induce protection mediated by antibodies. The objective of this research was to evaluate the production of specific neutralizing Abs against BVDV-1 and 2, and BoHV-1 induced by commercial vaccines composed by different adjuvants. Holstein heifers were vaccinated and distributed in three experimental groups: Group I (G1) was vaccinated with a commercial vaccine containing inactivated BVDV-1, BVDV-2 and BoHV-1 diluted in alum hydroxide as adjuvant (n=9); Group II (G2) was vaccinated with an product containing inactivated strains of BVDV-1, BVDV-2, BoHV-1 and BoHV-5 diluted in oil emulsion as adjuvant (n=10); Group III (G3) was vaccinated with a commercial vaccine containing inactivated BVDV-1 and BVDV-2, besides live modified thermosensitive BoHV-1, diluted in Quil A, amphigen and cholesterol (n=10); A control, non-vaccinated group (n=6) was mock vaccinated with saline. Heifers received two subcutaneous doses of 5mL of each commercial vaccine on the right side of the neck, with 21 days interval. Humoral immune response was assessed by the virus neutralization test (VN) against BVDV-1 (NADL and Singer strains), BVDV-2 (SV253 strain) and BoHV-1 (Los Angeles strain) in serum samples collected on vaccination days zero (D0), 21 (D21) and 42 (D42; 21 days after boosting). Neutralizing Abs against BVDV-1 NADL was detected only in D42, regardless of the vaccine used. Similar geometric mean titers (GMT) for BVDV-1 NADL were observed between G1 (log2=5.1) and G3 (log2=5.1). The seroconversion rate (%) was higher in G1 (78%) when compared to G2 (10%) and G3 (40%)...
A vacinação é utilizada como estratégia para a prevenção e controle das doenças reprodutivas, causadas pelos vírus da diarreia viral bovina (BVDV) e herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1), entretanto, as diversas composições de vacinas comerciais devem ser avaliadas quanto a sua eficiência protetiva mediada por anticorpos (Acs). O objetivo desta pesquisa foi avaliar a produção Acs neutralizantes específicos para cepas de BVDV-1 e 2, e BoHV-1 induzida por vacinas comerciais contendo diferentes tipos de adjuvantes. Para tal, novilhas Holandesas foram vacinadas e distribuídas em três grupos experimentais: Grupo I (G1) foi vacinado com uma vacina comercial composta por cepas inativadas de BVDV-1, BVDV-2 e BoHV-1 diluídas em hidróxido de alumínio como adjuvante (n=9); Grupo II (G2) foi vacinado com produto contendo as cepas inativadas de BVDV-1, BVDV-2, BoHV-1 e BoHV-5 em uma emulsão oleosa como adjuvante (n=10); O Grupo III (G3) foi vacinado com uma vacina comercial contendo BVDV-1 e BVDV-2 inativado, além do BoHV-1 vivo modificado e termosensivel, diluídos em adjuvante contendo Quil A, Amphigem e colesterol (n=10); O Grupo Controle não vacinado (n=6) foi inoculado com solução salina. As novilhas receberam duas doses das respectivas vacinas ou solução salina (5mL), com intervalo de 21 dias, por via subcutânea, na tábua do pescoço do lado direito. A resposta imune humoral foi avaliada pelo teste de vírus neutralização (VN) contra o BVDV-1 (cepas NADL e Singer), BVDV-2 (cepa SV253) e BoHV-1 (cepa Los Angeles) em amostras de soro coletadas nos dias (D) de vacinação zero (D0), 21 dias após 1ª dose (D21)e 42 (D42; 21 dias após A 2ª dose). Os anticorpos neutralizantes contra o BVDV-1 NADL foram detectados apenas em D42, independentemente da vacina utilizada. Os títulos médios geométricos (GMT) de anticorpos foram semelhantes entre G1 (log2=5,1) e G3 (log2=5,1). A taxa de soroconversão foi maior no G1 (78%) quando comparado ao G2 (10%) e G3 (40%)...(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Vacinas/efeitos adversos , Vacinas/imunologia , Herpesvirus Bovino 1/imunologia , Vírus da Diarreia Viral Bovina Tipo 1/imunologiaResumo
Con el objetivo de evaluar la sueroprevalencia de anticuerpos contra Toxoplasma gondii en ovejas en la microregión de Umuarama, estado de Paraná, las muestras de suero fueron colectadas en cuatro propiedades, totalizando 194 animales, el cual, en consecuencia, fueron evaluados por el método, estandarizadas, reacción imunofluorescencia indireta (RIFI) para la detección de anticuerpos contra el agente. El total de la muestra regional, el promedio fue de 28,3% (55) animales soropositivos para T.gondii, que es el mayor valor que se encuentra en una propiedad fue de 58,2%, lo cual puede ser un motivo de preocupación en relación con la salud pública. El resto de las propiedades, los valores obtenidos entre ellos, discrepantes, girando alrededor del 3,5% al 53,6%, lo que puede indicar una probable variabilidad en el manejo y creación de los animales entre estas propiedades, que a su vez, por aumentar o disminuir el riesgo de infección por coccideo en cuestión. En resumen, considerando los estudios realizados en otras regiones de Paraná, o incluso en otros estados brasileños, el valor promedio de sueroprevalencia (28,3%) para Toxoplasma gondii encontradas en este trabajo se puede considerar como moderada. Sin embargo, si consideramos que cada sitio por separado, se puede inferir que la carne ovina de algunas propiedades pueden ser una fuente importante de infección de toxoplasmose para [...](AU)
With the objective to evaluate the seroprevalence of antibodies against Toxoplasma gondii of the ovine flock from the microregion of Umuarama, in the state of Paraná, 194 blood samples were collected in four properties and evaluated by the Immunofluorescence Antibody Test (IFAT). Of the total samples, 28.3 % (55 animals) were positive. Among the properties, the values ranged from 3.5 % to 58.2 %, which may indicate variability in the management of animals among these properties, which consequently may increase or decrease the risk of the infection. Considering the studies conducted in other regions of Paraná, or even in other states, the seroprevalence of 28.3% found in this study can be considered moderate. However, considering each property isolated, it can be inferred that the meat of certain properties can be a major source of infection for humans toxoplasmosis, since the prevalence of 58.2% was observed in one sheep farm. Future studies should be conducted in order to correlate the prevalence of most sheep flocks in this region with the possible risk factors for this important zoonosis.(AU)
Com o objetivo de avaliar a soroprevalência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii do rebanho ovino na microrregião de Umuarama, estado do Paraná, foram coletadas amostras de sangue de 194 animais procedentes de quatro propriedades, tendo-se utilizado o método de Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para detecção de anticorpos contra o agente. Do total amostrado, 28,3% (55 animais) foram reagentes. Entre as propriedades, os valores variaram de 3,5% a 58,2%, o que pode indicar uma provável diferença no manejo e criação dos animais entre estas propriedades, o que consequentemente pode aumentar ou diminuir os riscos da infecção. Em suma, considerando os estudos conduzidos em outras regiões do Paraná, ou mesmo em outros estados brasileiros, a soroprevalência de 28,3% encontrada neste trabalho pode ser considerada moderada. Entretanto, se considerarmos cada local isoladamente, podese inferir que a carne ovina de determinadas propriedades pode ser uma importante via de transmissão de toxoplasmose para humanos, uma vez que a prevalência de 58,2% foi verificada em ovinos de uma fazenda. Futuros estudos deverão ser conduzidos com o objetivo de se correlacionar a prevalência de mais rebanhos ovinos desta região com os possíveis fatores de risco para esta importante zoonose.(AU)
Assuntos
Animais , Toxoplasma/imunologia , Anticorpos Antiprotozoários/sangue , Ovinos/imunologia , Toxoplasmose Animal/epidemiologia , Técnica Indireta de Fluorescência para Anticorpo/veterináriaResumo
Con el objetivo de evaluar la sueroprevalencia de anticuerpos contra Toxoplasma gondii en ovejas en la microregión de Umuarama, estado de Paraná, las muestras de suero fueron colectadas en cuatro propiedades, totalizando 194 animales, el cual, en consecuencia, fueron evaluados por el método, estandarizadas, reacción imunofluorescencia indireta (RIFI) para la detección de anticuerpos contra el agente. El total de la muestra regional, el promedio fue de 28,3% (55) animales soropositivos para T.gondii, que es el mayor valor que se encuentra en una propiedad fue de 58,2%, lo cual puede ser un motivo de preocupación en relación con la salud pública. El resto de las propiedades, los valores obtenidos entre ellos, discrepantes, girando alrededor del 3,5% al 53,6%, lo que puede indicar una probable variabilidad en el manejo y creación de los animales entre estas propiedades, que a su vez, por aumentar o disminuir el riesgo de infección por coccideo en cuestión. En resumen, considerando los estudios realizados en otras regiones de Paraná, o incluso en otros estados brasileños, el valor promedio de sueroprevalencia (28,3%) para Toxoplasma gondii encontradas en este trabajo se puede considerar como moderada. Sin embargo, si consideramos que cada sitio por separado, se puede inferir que la carne ovina de algunas propiedades pueden ser una fuente importante de infección de toxoplasmose para [...]
With the objective to evaluate the seroprevalence of antibodies against Toxoplasma gondii of the ovine flock from the microregion of Umuarama, in the state of Paraná, 194 blood samples were collected in four properties and evaluated by the Immunofluorescence Antibody Test (IFAT). Of the total samples, 28.3 % (55 animals) were positive. Among the properties, the values ranged from 3.5 % to 58.2 %, which may indicate variability in the management of animals among these properties, which consequently may increase or decrease the risk of the infection. Considering the studies conducted in other regions of Paraná, or even in other states, the seroprevalence of 28.3% found in this study can be considered moderate. However, considering each property isolated, it can be inferred that the meat of certain properties can be a major source of infection for humans toxoplasmosis, since the prevalence of 58.2% was observed in one sheep farm. Future studies should be conducted in order to correlate the prevalence of most sheep flocks in this region with the possible risk factors for this important zoonosis.
Com o objetivo de avaliar a soroprevalência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii do rebanho ovino na microrregião de Umuarama, estado do Paraná, foram coletadas amostras de sangue de 194 animais procedentes de quatro propriedades, tendo-se utilizado o método de Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para detecção de anticorpos contra o agente. Do total amostrado, 28,3% (55 animais) foram reagentes. Entre as propriedades, os valores variaram de 3,5% a 58,2%, o que pode indicar uma provável diferença no manejo e criação dos animais entre estas propriedades, o que consequentemente pode aumentar ou diminuir os riscos da infecção. Em suma, considerando os estudos conduzidos em outras regiões do Paraná, ou mesmo em outros estados brasileiros, a soroprevalência de 28,3% encontrada neste trabalho pode ser considerada moderada. Entretanto, se considerarmos cada local isoladamente, podese inferir que a carne ovina de determinadas propriedades pode ser uma importante via de transmissão de toxoplasmose para humanos, uma vez que a prevalência de 58,2% foi verificada em ovinos de uma fazenda. Futuros estudos deverão ser conduzidos com o objetivo de se correlacionar a prevalência de mais rebanhos ovinos desta região com os possíveis fatores de risco para esta importante zoonose.
Assuntos
Animais , Anticorpos Antiprotozoários/sangue , Ovinos/imunologia , Toxoplasma/imunologia , Toxoplasmose Animal/epidemiologia , Técnica Indireta de Fluorescência para Anticorpo/veterináriaResumo
As aves de vida livre e de criações de fundo de quintal são potenciais reservatórios de patógenos e têm sido objeto de estudos epidemiológic os . A Organi zação Mundial de Saúde Animal (OIE) introduziu, em 2003, o conceito de compartimentação no Código Sanitário dos Animais Terrestres, descrevendo os procedimentos de biosseguridade aplicados por um país para definir em seu território subpopulações de status sanitário s diferenciados , no presente caso para preven ção d a infecção pelos vírus d a influenza aviária ( v IA) e da doença de Newcastle ( vDNC A vigilância epidemiológica em criações de aves localizadas no entorno de compartimentos avícolas com base na avaliação do risco de introdução e de disseminação d os vIA e vDNC foi regulamentada no Brasil em 2014. O presente estudo teve como objetivo identificar os p otenciais fatores de risco para a introdução e disseminação desses vírus em criações de aves de fundo de quintal, com a aplicação de um questionário de caráter censitário e epidemiológico em 81 criatórios de aves de fundo de quintal localizados no entorno de 5 unidades de compartimento s av ícola s d a região noroeste do Estado de São Paulo , com col heita de amostras de sangue e de suabe (traqueal e clo a cal) em 583 aves , para a detecção de anticorpos cont r a o vIA e o vDNC pelo teste de ELISA, e detecção viral pela técnica de RT PCR . Não houve a detecção de anticorpos e de circulação viral contra o vIA . A nticorpos contra o vDNC foram identificados em 5 6.7 % dos criatórios investigados , com 14.8% das aves testadas como positivas . O vDNC não foi detectado pelo teste molecular nas amostras de suabes A ausência de isolamento viral, e portanto do perigo, não permitiu associar os potenciais fatores identificados neste estudo ao risco de introdução e disseminação d os vIA e vDNC em criatórios de aves de fundo de quintal. Entretanto, as atividades de vigilância para estes vírus devem ser mantidas, com especial destaque à s notificaç ões de sinais clínicos compatíveis com as síndromes respiratórios e neurológica ou mortalidade em ave s.
Wild and backyard birds are potential reservoirs of pathogens and have been evaluated for epidemiological studies. In 2003, the World Organization for Animal H ealth (OIE) introduced the compartmentalization concept in the Terrestrial Animal Health Code, with the procedures applied by a country to define within its territory sub populations of differentiated health status. Those are determined based on a biosecur ity health program to prevent infection by avian influenza virus (AI v and Newcastle disease virus (ND v ). The epidemiological surveillance in backyard birds , close to poultry breeding compartments units , based on the risk assessment of the introduction and dissemination of AIv and ND v was regulated in Brazil in 2014. The present study aimed to identify the potential risk factors for the introduction and dissemination of AI v and ND v to poultry compartment s. The present study aimed to identify the potential risk factors for introducing and disseminating AIv and NDv to poultry compartments. The present study was carried out using a census and epidemiological information questionnaire in 81 backyard poultry l ocated close to five poultry compartment units in the northwest of the São Paulo state, Brazil. Blood and swab samples (tracheal and cloacal) from 583 birds were also collected to detect antibodies against AIv and NDv and viruses by ELISA and RT PCR tests, respectively. No specific antibody to AIv was detected in any sample . Antibodies specific to NDv were identified in 14.8% of the tested samples from 5 6.7 % of the investigated backyard s However, the NDv was not detected by molecular testing The absence o f viral isolation, and therefore the danger, did not allow us to associate the potential factors identified in this study with the risk of introduction and dissemination of the IAv and NDv in backyard poultry. However, surveillance activities for these viruses must be maintained, in special on the notification of clinical signs compatible with respiratory and neurological syndromes or mortality in backyard poultry
Resumo
A bactéria Streptococcus agalactiae é um potente agente causador de surtos por doenças bacterianas em peixes. O estresse provocado pelo manejo zootécnico e pela má qualidade ambiental torna a tilápia susceptível às infecções por essa bactéria. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a resistência de tilápias-do-nilo imunizadas com soro hiperimune anti-S. agalactiae, posteriormente desafiadas com cepa homóloga da mesma bactéria. Após determinação da DL 50 de S. agalactiae, 36 tilápias foram distribuídas em quatro aquários, dois para o grupo controle e dois para inoculação celomática para produção de anticorpos anti-S. agalactiae. No 21° e 28° dias, foi coletado sangue para obtenção de soro hiperimune utilizado na transferência passiva. Em seguida, 30 tilápias foram distribuídas em três aquários e submetidas a três tratamentos: GI: controle; GII: imunizadas com o soro inativado; GIII: imunizadas com soro ativo. Após 48 horas e sete, 14, 21, 28 e 35 dias, foram realizadas coletas de sangue para titulação de anticorpos anti-S. agalactiae utilizando-se o teste de aglutinação direta. Para avaliar a taxa de sobrevivência, outras 30 tilápias foram distribuídas em três aquários e submetidas a três tratamentos (GI: controle; GII: imunizadas com soro inativado; GIII: imunizadas com soro ativo). Após 48 horas da imunização, as tilápias foram desafiadas via celomática com 100µL de S. agalactiae e avaliadas duas vezes ao dia, pelo período de 35 dias. Os resultados dos títulos séricos de anticorpos foram detectados pela aglutinação direta até o 21° dia pós-transferência passiva, e, no mesmo período, houve proteção de 80% entre os grupos imunizados com soro inativado e soro ativo contendo anticorpos anti-S. agalactiae. Ao final, os grupos soro inativado e soro ativo apresentaram 60 e 80% de proteção, respectivamente, enquanto no grupo controle 100% dos peixes adoeceram, apresentando sinais graves da infecção, e foram eutanasiados. Não houve diferença estatística significativa na taxa de proteção entre os grupos imunizados.(AU)
The Streptococcus agalactiae bacteria is a potent agent which causes outbreaks of bacterial diseases in fish. The stress caused by management and poor environmental quality makes tilapia susceptible to infections, including by bacterium. The aim of this study was to evaluate the resistance of the Nile tilapia immunized with hyperimmune serum against S. agalactiae subsequently challenged with homologous strain of the same bacteria. After determining the DL 50 of S. agalactiae, 36 tilapias were distributed in 4 aquariums, 2 for the control group and 2 for the group via coelomic, inoculated with the DL 50 for anti-S. agalactiae antibodies production. On the 21st and 28th day blood was collected for the obtainment of hiperimmune serum used in passive transference. Then, 30 tilapias were distributed in 3 aquariums submitted to 3 treatments (GI: control; GII: immunized with inactivated-serum; GIII: immunized with non-inactivated serum). After 48 hours, 7, 14, 21, 28 and 35 days blood collections were done for anti-S. agalactiae antibodies titration using the direct agglutination test. For survival evaluation 30 tilapias were distributed in 3 aquariums and submitted to 3 treatments (GI: control; GII: immunized with inactivated-serum; GIII: immunized with non-inactivated serum). After 48 hours of inoculation tilapias were challenged with 100µL of S. agalactiae and monitored twice a day for 35 days. The results showed that titers of antibodies were detected by direct agglutination until the 21st day after passive transference and during the same period the protection between the groups immunized with inactivated serum and non-inactivated serum contending anti-S. agalactiae antibodies was of 80% after challenge with S. agalactiae. In the end, the serum-inactivated serum and active groups had 60 and 80% protection, respectively, while 100% of the fish in the control group developed severe signs of infection and were euthanized. There was no statistical difference in the survival rate between the immunized groups.(AU)
Assuntos
Animais , Streptococcus agalactiae/patogenicidade , Peixes , Surtos de Doenças/veterinária , Infecções Bacterianas/veterinária , Ciclídeos , Infecções Bacterianas , Anticorpos/análise , Imunização Passiva/veterinária , Imunoglobulinas/análiseResumo
O sistema imune de mucosa representa a barreira inicial frente a diversos patógenos 13 que utilizam estas superfícies como porta de entrada no organismo, como é o caso 14 dos alphaherpesvírus bovinos (BoHV). Estes vírus utilizam as mucosas, 15 principalmente nasal e genital, como ponto inicial de replicação, seguido de 16 disseminação local, viremia sistêmica e disseminação neuronal. Devido à grande 17 importância das vias mucosas na transmissão dos BoHV, torna-se evidenciado o 18 interesse no desenvolvimento de vacinas que propiciem imunidade de mucosa 19 contra estes vírus. No presente estudo, 63 fêmeas bovinas da raça Braford foram 20 divididas em sete grupos de nove animais e foram inoculadas por via intravaginal 21 com BoHV-5 inativado, associado à subunidade B recombinante da enterotoxina 22 termolábil de E. coli (rLTB) como segue: G1 (2-hidroxietilcelulose + BoHV-5 + rLTB), 23 G2 (2-hidroxietilcelulose + BoHV-5), G3 (Poloxâmero 407 + BoHV-5 + rLTB), G4 24 (Poloxâmero 407 + BoHV-5), G5 (BoHV-5 + rLTB), G6 (Controle negativo) e G7 25 (Controle positivo). A resposta humoral local e sistêmica induzida nos animais 26 inoculados foi mensurada por meio do teste ELISA indireto (IgA e IgG) e de 27 soroneutralização, e a resposta celular por Elisa direto quantitativo (IL-2 e IFN-28 Gama). Como resultados, na mucosa vaginal, apesar do grupo G5 proporcionar os 29 maiores níveis de IgG, os grupos experimentais com polímeros (G1 e G3) 30 demonstraram-se superiores estatisticamente em relação ao grupo controle positivo 31 (G7), assim como, com relação aos níveis de IgA observados na mucosa vaginal 32 aos 30, 60 e 90 dias após a primeira inoculação. Os grupos G1 e G3 também 33 proporcionaram títulos superiores de anticorpos neutralizantes (log2) em relação aos 34 demais tratamentos (p<0,01) 90 dias pós inoculação, evidenciando a eficiência dos 35 polímeros testados como sistema de entrega do antígeno. Já na mucosa nasal, 36 houve incremento dos níveis de IgA e IgG com o uso das vacinas dos grupos G1 e 37 G3, em relação ao controle positivo, G7 (p<0,05) aos 60 e 90 dias após a primeira 38 inoculação, o que enfatiza a forte relação entre os sistemas de mucosa. A 39 inoculação das vacinas experimentais também resultou em aumento nos níveis de 40 IgA e IgG no soro dos animais, mensurado por ELISA indireto, além de 41 apresentarem títulos de anticorpos neutralizantes aos 60 e 90 dias, detectados 42 através de soroneutralização. Os maiores títulos de anticorpos neutralizantes foram 43 proporcionados pelo grupo G5 (sem polímeros e intramuscular), entretanto, os níveis 44 de IL-2 e IFN-Gama obtidos com o uso dos polímeros foram superiores aos demais 1 grupos aos 30, 60 e 90 dias após primeira inoculação. A vacina intravaginal 2 demonstrou-se capaz de incrementar os níveis de IgA e IgG e de interleucinas no 3 soro e nas mucosas nasal e vaginal dos bovinos imunizados. Estes dados 4 comprovam a capacidade da vacina de aplicação intravaginal em bovinos em 5 estimular uma resposta imune local e sistêmica, além de corroborar a atividade 6 imunoestimulante, em mucosas, da rLTB. Deste modo, esta via de administração de 7 vacinas torna-se uma alternativa interessante, principalmente quando se objetiva 8 gerar proteção local contra patógenos que utilizam as superfícies mucosas como 9 porta de entrada no organismo.
The mucosal immune system represents the initial barrier against several pathogens 13 that use these surfaces as a gateway to the organism, such as bovine 14 alphaherpesviruses (BoHV). These viruses use mucous membranes, mainly nasal 15 and genital, as the initial point of replication, followed by local dissemination, 16 systemic viremia and neuronal dissemination. Due to the great importance of the 17 mucous pathways in the transmission of BoHV, the interest in the development of 18 vaccines that provide mucosal immunity against these viruses becomes evident. In 19 the present study, 63 Braford bovine females were divided into seven groups of nine 20 animals and were inoculated intravaginally with inactivated BoHV-5, associated with 21 the recombinant B subunit of the E. coli thermolabile enterotoxin (rLTB) as follows: 22 G1 (2-hydroxyethylcellulose + BoHV-5 + rLTB), G2 (2-hydroxyethylcellulose + BoHV-23 5), G3 (Poloxamer 407 + BoHV-5 + rLTB), G4 (Poloxamer 407 + BoHV-5), G5 24 (BoHV-5 + rLTB), G6 (Negative control) and G7 (Positive control). The local and 25 systemic humoral response induced in the inoculated animals were measured using 26 the indirect ELISA test (IgA and IgG) and serum neutralization, and the cellular 27 response, direct quantitative Elisa (IL-2 and IFN-Gamma). As a result, in the vaginal 28 mucosa, despite the G5 group providing the highest levels of IgG, the experimental 29 groups with polymers (G1 and G3) showed to be statistically superior in relation to 30 the positive control group (G7), as well as, in relation to the levels of IgA observed in 31 the vaginal mucosa at 30, 60 and 90 days after the first inoculation. Groups G1 and 32 G3 also provided superior titers of neutralizing antibodies (log2) in relation to the 33 other treatments (p <0.01) 90 days after inoculation, showing the efficiency of the 34 tested polymers as an antigen delivery system. In the nasal mucosa, there was an 35 increase in IgA and IgG levels with the use of vaccines in groups G1 and G3, in 36 relation to the positive control, G7 (p<0.05) at 60 and 90 days after the first 37 inoculation, which emphasizes the strong relationship between mucosal systems. 38 The inoculation of experimental vaccines also resulted in increased levels of IgA and 39 IgG in the animals' serum, measured by indirect ELISA, in addition to presenting 40 neutralizing antibody titers at 60 and 90 days, detected through serum neutralization. 41 The highest titers of neutralizing antibodies were provided by the G5 group (without 42 polymers and intramuscular), however, the levels of IL-2 and IFN-Gamma obtained 43 with the use of polymers were higher than the other groups at 30, 60 and 90 days 44 after first inoculation. The intravaginal vaccine has been shown to increase the levels 45 of IgA and IgG and interleukins in the serum and in the nasal and vaginal mucosa of 46 immunized cattle. These data prove the capacity of the vaccine for intravaginal 1 application in cattle to stimulate a local and systemic immune response, in addition to 2 corroborating the immunostimulating activity in mucous membranes of rLTB. Thus, 3 this route of administration of vaccines becomes an interesting alternative, especially 4 when the objective is to generate local protection against pathogens that use mucous 5 surfaces as a gateway into the body.
Resumo
A maior parte dos dados descritos na literatura sobre patógenos de cervídeos neotropicais são provenientes de levantamentos sorológicos, informações sobre vías de transmissão e avaliações clínicas ainda são escasos. O presente trabalho teve como objetivos: a) estimar a prevalência de cervídeos positivos para Toxoplasma gondii e Neospora canium em 92 animais mantidos em cativeiro; b) Avaliar a probabilidade de diferentes vias de transmissão do T. gondii e N. caninum; c) avaliar a sintomatologia clínica e resposta imune humoral de machos de veados-catingueiros (Mazama gouazoubira) infectados experimentalmente com oocistos da cepa ME49 (genotipo tipo II) de T. gondii e d) padronizar a técnica de ELISA indireta para detecção de anticorpos fecais específicos para T. gondii e N. caninum. Inicialmente, foram colhidas amostras dos animais cervídeos pertencentes a dois criadouro conservacionistas e comparados os resultados sorológicos obtidos nos testes de imunofluorescência indireta (RIFI) e ELISA indireto pelo teste de concordância Kappa de Cohen. Em seguida, foram desenhadas árvores genealógicas dos animais de cada espécie para estimativa da taxa de transmissão congênita de cada doença. A prevalência estimada para T. gondii foi de 20,73% pela tecnica de RIFI e 25,60% por ELISA, apresenando uma concordância rasoável ( = 0,277) entre as duas técnicas sorológicas utilizadas. Já para N. caninum a prevalência estimada foi de 40,24% por RIFI e 39,02% por ELISA com uma correlação quase perfeita ( = 0,83) entre as técnicas. A taxa de transmissão congênita, estimada com base em números de filhos positivos de mães positivas entre o número total de filhos de mães positivas, diferiu bastante entre as doenças, sendo de 0% para toxoplasmose e 81,25% para neosporose. No capítulo 3, para a infecção experimental dos animais, quatro machos da espécie Mazama gouazoubira foram infectados experimentalmente com 5000 oocistos esporulados de T. gondii da cepa ME49, enquanto um animal soronegativo foi usado como controle. Os animais foram monitorados quanto aos parâmetros clínicos de -7 a 40 dias após a infecção (dpi). Amostras de sangue foram coletadas semanalmente até 49 dpi para detecção de anticorpos pelo teste de ELISA. A cada 15 dias os animais foram submetidos à contenção química e coleta de sêmen por eletroejaculação e o material genético das amostras de semen foi extraído para posterior análise por PCR para T. gondii. Apenas dois dos quatro animais infectados desenvolveram resposta de anticorpos detectável no teste de ELISA, e mesmo sem nenhum animal ter manifestado sinais clínicos da infecção, o material genético do parasita foi encontrado no sêmen dos animais soropositivos aos 35 e 49 dpi. A terceira etapa do projeto visou a padronização da técnica de ELISA para detecção de imunoglobulinas fecais contra os dois patógenos. Amostras de fezes frescas foram coletadas, extraídas e armazenadas em nitrogênio líquido ou processadas imediatamente. Um pool de amostras de animais soropositivos foi utilizado como controle positivo para N. caninum e um pool de amostras de animais experimentalmente infectados foi usado como controle para T. gondii. Mesmo com diversas alterações de protocolos não foi possível contornar o problema da baixa iv especificidade do teste, constatada pelos altos ruídos nas leituras das placas. Foi possível concluir que as técnicas sorológicas provaram ser muito úteis para estudos epidemiológicos em animais de cativeiro, tendo diversas aplicações além da simples estimativa da prevalência, porém sem a padronização de um método não invasivo de detecção de anticorpos, estudos epidemiológicos em populações de vida-livre ainda são um grande desafio. Nesses estudos foi possível inferir que a principal via de transmissão do N. caninum em cervídeos é a via congênita, de forma semelhante ao que se observa em bovinos , enquanto que o T. gondii parece utilizar da via horizontal para a transmissão na maioria dos casos. Além disso , a infecção experimental com 5000 oocistos esporulados de T. gondii não causou sinais clínicos nos animais estudados, sugerindo que a espécie apresenta certa resistência à doença, por outro lado, a detecção do DNA do parasito no sêmen dos animais sugere que a transmissão sexual é uma possibilidade nessas espécies, o que deve ser levado em consideração por criadouros conservacionistas.
Most of the data on neotropical deer pathogens come from serological surveys, little is known about transmission routes and clinical evaluations.The present study aimed to: a) estimate the prevalence of positive cervids for Toxoplasma gondii and Neospora canium in animals kept in captivity; b) Assess different routes of infection of T. gondii and N.caninum on these deer populations; c) Evaluate the clinical symptomatology and humoral immune response of male brocket deer (Mazama gouazoubira) experimentally infected with T. gondii (ME49 strain) oocysts; and d) Standardize an indirect ELISA technique for non-invasive detection of specific fecal antibodies to T. gondii and N. caninum. Initially, deer serum samples collected from animals from two conservation breeding centers were tested by both techniques making it possible to compare the results obtained in the indirect immunofluorescence tests (IFAT) and indirect ELISA by the Cohen's Kappa concordance test. Furthermore, family trees were drawn for each species to estimate the congenital transmission rate of both diseases. The T. gondii prevalence were 20,73% by IFAT and 25,60 by ELISA, with , with an fair agreement of = 0.277 between the two serological techniques. For N. caninum, the antibody prevalence was 40,24% by IFAT and 39,02% by ELISA, with a almost perfect correlation of = 0.83 between techniques. The congenital transmission rate, estimated by the number of positive offspring from positive mothers by the total of positive mother offspring, differed significantly between diseases, resulting in 0% for Toxoplasmosis and 81,25% for Neosporosis. In Chapter 3, four Mazama gouazoubira males were inoculated with 5000 sporulated T. gondii oocysts (ME49), while one seronegative animal was used as a control. Animals were monitored for clinical parameters from -7 to 40 days post-infection (dpi). Blood samples were collected weekly up to 49 dpi for antibody detection by the previously standardized ELISA test. Once every 15 days, the animals were chemical restraint for semen collection by electroejaculation. DNA of the semen samples was extracted for T. gondii PCR analysis. Only two from four infected animals developed an antibody response detectable in the ELISA test, and despite the animals didnt manifest any clinical signs, the parasite's genetic material was found in the semen of the seropositive animals at 35 and 49 dpi. In the third step, the standardization of ELISA technique for detection of fecal immunoglobulins against the two pathogens was carried out, aiming to apply the methodology to epidemiological studies in free-living animals. Fresh stool samples were collected, extracted and stored in liquid nitrogen or processed immediately. A pool of samples from seropositive animals was used as a positive control for N. caninum and a pool of samples from experimentally infected animals was used as a control for T. gondii. Even with several protocol changes, it was not possible to overcome the problem of the low specificity evidenced by the high background at plate readings. Finally, it was possible to conclude that serological techniques have proved very useful for epidemiological studies in captive animals, having several applications beyond the simple estimation of prevalence, but without the standardization of a non-invasive method of detection of antibodies, epidemiological studies in free-living populations are still challenging. Whith these studies it was possible to infer tha the congenital transmission is the major route of infection os N. caninum in neotropical deer, in the other hand, horizontal transmission seem to be more important to T. gondii epidemiology in these species. Furthermore, the experimental infection with 5000 T. gondii oocysts did not caused clinical signs in Mazama gouazoubira, implying that the specie present some resistance to the disease, still, the detection of the parasite in semen samples indicate the possibility of sexual transmission of T. gondii in cervids, vi and breeding centers should take this into account for better reproductive performance of the animals
Resumo
A diarreia neonatal dos bezerros (DNB) é um dos eventos de saúde mais importantes durante o período de criação de bezerros de corte, sendo responsável por grande parte da morbidade e mortalidade nesta fase. Entre as medidas para mitigar o risco de surtos de DNB, a vacinação da vaca na última fase da gestação é uma das mais importantes. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a eficácia da vacinação pré-parto contra DNB, especialmente Rotavírus Bovino tipo A (BoRVA) e Coronavírus Bovino (BCoV), em animais da raça Nelore. Um total de 117 animais, divididos em vacas (n=81) e novilhas (n=36) foram distribuídos em dois grupos experimentais, sendo estes: grupo de animais vacinados (VAC: vacas=40; novilhas=19) e grupo de animais não vacinados (NVAC: vacas=41; novilhas=17). O tratamento dos animais ocorreu entre 60 a 50 dias antes da data prevista para o parto, sendo aplicado no grupo VAC uma única dose de uma vacina comercial (2mL), administrado por via intramuscular, e no grupo NVAC uma dose de solução salina 0,9%. Amostras de sangue foram coletadas imediatamente antes da vacinação e após 30 dias, para avaliar a resposta de anticorpos específicos (IgG1) contra BoRVA e BCoV. O nascimento dos bezerros foi monitorado e a transferência de imunidade passiva foi avaliada entre o segundo e o terceiro dias de vida. A diarreia foi monitorada nos primeiros 30 dias de idade, e amostras de fezes foram coletadas para identificação do agente etiológico em animais com diarreia. Como controle, amostras de fezes de bezerros saudáveis com idade semelhante à dos animais com diarreia, também foram coletadas. Os anticorpos específicos (IgG1) contra BoRVA e BCoV foram medidos usando a técnica Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA). A comparação de médias pelo teste T de Student mostrou títulos mais elevados de IgG1 contra BoRVA e BCoV no grupo VAC quando comparado ao grupo NVAC na categoria de vacas (P<0,0001) e no total de animais (P<0,0001). Em relação aos bezerros, não houve diferenças (P>0,05) entre os grupos para a concentração de proteína total sérica (PTS) e taxa (%) de falha da transferência imune passiva (FTIP). O título de IgG1 específico no soro de bezerros refletiu a resposta das mães, observando títulos mais elevados de IgG1 para BoRVA (P<0,0016) e BCoV (P<0,0095) nos bezerros nascidos da categoria de vacas do grupo VAC; e títulos mais elevados de IgG1 para BoRVA (P<0,0171) e BCoV (P<0,0200) nos bezerros nascidos do total de animais do grupo VAC. A incidência geral de diarreia observada foi de 18,6% (11/59) e 29,3% (17/58) nos bezerros nascidos do grupo VAC e NVAC, respectivamente. Apesar da diferença observada, o pequeno tamanho amostral não permitiu detectar diferenças estatísticas entre os grupos experimentais para diarreia (P>0,05). Entre bezerros com diarreia, o agente mais prevalente foi o BoRVA. A vacinação pré-parto com uma única dose da vacina testada aumentou os títulos de IgG1 contra BCoV e BoRVA, podendo ser utilizada como estratégia preventiva para diminuir a ocorrência de DNB em animais da raça Nelore.
Neonatal calf diarrhea (NCD) is one of the most important health events during the rearing period of beef calves, accounting for much of the morbidity and mortality at this stage. Among the measures to mitigate the risk of NCD outbreaks, cow vaccination in the last stage of pregnancy is one of the most important. The objective of this research was to evaluate the effectiveness of prepartum vaccination against NCD, especially Bovine Rotavirus type A (BoRVA) and Bovine Coronavirus (BCoV), in Nelore animals. A total of 117 animals, divided into cows (n=81) and heifers (n=36) were divided into two experimental groups, namely: vaccinated animal group (VAC: cows=40; heifers=19) and animal group unvaccinated (NVAC: cows=41; heifers=17). The treatment of the animals occurred between 60 to 50 days before the expected date of calving, with a single dose of a commercial vaccine (2mL) being applied to the VAC group, administered intramuscularly, and to the NVAC group a dose of saline solution 0, 9%. Blood samples were collected immediately before vaccination and after 30 days to assess the specific antibody response (IgG1) against BoRVA and BCoV. The calf birth was monitored and the transfer of passive immunity was evaluated between the second and third days of life. Diarrhea was monitored in the first 30 days of age, and stool samples were collected to identify the etiologic agent in animals with diarrhea. As a control, fecal samples from healthy calves with age similar to that of animals with diarrhea were also collected. Specific antibodies (IgG1) against BoRVA and BCoV were measured using the Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA) technique. Comparison of means by Student's t test showed higher IgG1 titers against BoRVA and BCoV in the VAC group when compared to the NVAC group in the cows category (P<0.0001) and in total animals (P<0.0001) . In relation to calves, there were no differences (P>0.05) between groups for serum total protein concentration (STP) and rate (%) of passive immune transfer failure (PITF). The specific IgG1 titer in the serum of calves reflected the response of the dams, observing higher IgG1 titers for BoRVA (P<0.0016) and BCoV (P<0.0095) in calves born from the category of cows in the VAC group; and higher IgG1 titers for BoRVA (P<0.0171) and BCoV (P<0.0200) in calves born from the total number of animals in the VAC group. The overall incidence of diarrhea observed was 18.6% (11/59) and 29.3% (17/58) in calves born in the VAC and NVAC groups, respectively. Despite the observed difference, the small sample size did not allow detecting statistical differences between the experimental groups for diarrhea (P>0.05). Among calves with diarrhea, the most prevalent agent was BoRVA. Prepartum vaccination with a single dose of the tested vaccine increased IgG1 titers against BCoV and BoRVA, and can be used as a preventive strategy to reduce the occurrence of NCD in Nelore animals.
Resumo
No Brasil, a febre maculosa brasileira, é a rickettsiose de maior importância, sendo uma doença febril, hemorrágica grave, atingindo altas taxas de letalidade (acima de 50%). Trabalhos in vitro e in vivo, publicados na última década, demonstraram igual ou maior efetividade do tratamento com tigeciclina quando comparado com doxiciclina, frente a bactérias patogênicas da ordem Rickettsiales. Com base nestes achados, na alta taxa de letalidade da doença e ausência da doxiciclina injetável no Brasil, nosso estudo teve como objetivo avaliar se o tratamento com tigeciclina em cobaios (Cavia porcellus) previamente infectados com Rickettsia rickettsii pode ser igual ou mais eficiente no controle da infecção por esta Rickettsia quando comparado com doxiciclina. Foram utilizados 25 cobaios, dispostos aleatoriamente em 4 grupos: Grupo 1 (infectados e tratados com tigeciclina), Grupo 2 (infectados e tratados com doxiciclina), Grupo 3 (infectados e tratados com PBS [grupo controle positivo]) e Grupo 4 (grupo não infectado ou grupo controle negativo). Para o tratamento da doença rickettsial foi administrado ao grupo 1, 4 mg/kg de tigeciclina, ao grupo 2, 5 mg/kg doxiciclina, e ao grupo 3, 1 mL/kg de PBS, por via subcutânea a cada 12 horas. Para início do tratamento os animais do grupo 1 e 2 foram subdivididos utilizando como critério a apresentação de temperatura retal 39,7 ºC (Febre), por 48, 72 ou 96 horas, sendo que o tratamento teve duração de 7 dias. Amostras de sangue foram colhidas 0, 6, 14 e 21 dias pós-infecção (DPI), e processadas pela RIFI e hemograma. O DNA rickettsial foi extraído das amostras de sangue colhidas no 6º e 14º DPI e do pulmão dos animais que vieram a óbito durante o experimento e posteriormente analisado pela qPCR e PCR convencional. Os animais inoculados com Rickettsia rickettsii (G1, G2 e G3) apresentaram sinais clínicos como febre, eritema conjuntival, edema e eritema em saco escrotal. Também foi observado que os animais infectados apresentaram perda de peso, trombocitopenia e leucopenia no 6ºDPI. Nas análises sorológicas, 100% (21/21) dos animais não apresentaram anticorpos reativos nos dias 0 e 6 pós infecção com R. rickettsii cepa Itú, no entanto, 100% (15/15) dos animais inoculados que sobreviveram até o final do experimento soroconverteram, no 14º e 21º DPI. Os animais do G1A e G1B (tratados após 48h e 72h de febre, respectivamente) e do G2B e G2C (tratados após 72h e 96h de febre, respectivamente) com tigeciclina e doxicilina, respectivamente, tiveram 100% de recuperação, enquanto os animais do grupo controle positivo ou infectados não tratados apresentaram uma taxa de letalidade de 75%. Todos os animais do grupo controle negativo não manifestaram sinais clínico compatíveis com FMB. Estes dados indicam que a tigeciclina quando usada em 48 e 72h da apresentação da febre, é eficaz no controle da infecção causada por R. rickettsii em Cavia porcellus, o modelo animal para estudos com R. rickettsii. Nosso estudo aponta que na ausência da doxiciclina injetável no Brasil, o uso da tigeciclina em pacientes humanos no país poderia diminuir a elevada taxa de letalidade da FMB.
Brazilian spotted fever is the most important rickettsial disease in Brazil, being a febrile and severe hemorrhagic disease, reaching high lethality rates (above 50%). In vitro and in vivo studies published in the last decade have demonstrated equal or greater effectiveness of treatment with tigecycline when compared to doxycycline, against pathogenic bacteria of the Rickettsiales order. Based on these findings, the high lethality rate of the disease and the unavailability of injectable doxycycline in Brazil, the objective of our study was to assess whether treatment with tigecycline in guinea pigs (Cavia porcellus) previously infected with Rickettsia rickettsii can be equal or more efficient in controlling of infection by this Rickettsia when compared to doxycycline. A total of 25 guinea pigs were randomly arranged in 4 groups: Group 1 (infected and treated with tigecycline), Group 2 (infected and treated with doxycycline), Group 3 (infected and treated with PBS [positive control group]) and Group 4 (uninfected group or negative control group). For the rickettseal disease treatment 4mg/kg of tigecycline, 5mg/kg of doxycycline and 1ml/kg of PBS was administered subcutaneously every 12 hours to group 1, 2 and 3, respectively. rectal temperature 39.7ºC (fever) for 48, 72 or 96 hours were used to determine the start of treatment, which lasted 7 days. Blood samples were collected 0, 6, 14 and 21 days post infection (DPI), and processed by RIFI and blood count. The rickettsial DNA was extracted from the blood samples collected at the 6th and 14th DPI and from the lung of animals that died during the experiment and later analyzed by conventional PCR and qPCR. Animals inoculated with Rickettsia rickettsii (G1, G2 and G3) showed clinical signs such as fever, conjunctival erythema, edema and erythema in the scrotal sac. It was also observed that the infected animals showed weight loss, thrombocytopenia and leukopenia in the 6th PDI. In serological analyzes, 100% (21/21) of the animals did not show reactive antibodies on days 0 and 6 after infection with R. rickettsii cepa Itú, however, 100% (15/15) of the inoculated animals that survived until the end of seroconverted experiment, on the 14th and 21st DPI. The animals of G1A and G1B (treated after 48h and 72h of fever, respectively) and G2B and G2C (treated after 72h and 96h of fever, respectively) with tigecycline and doxycycline, respectively, had 100% recovery, while animals in the positive control or infected untreated group had a lethality rate 75%. All animals in the negative control group showed no clinical signs compatible with FMB. Data obtained in this study indicate that tigecycline, when used 48 and 72 hours after the presentation of fever, is effective in controlling infection caused by R. rickettsii in Cavia porcellus, the animal model for studies with R. rickettsii. Our study also points out that in the absence of injectable doxycycline in Brazil, the use of tigecycline in human patients in the country could decrease the high lethality rate of FMB.
Resumo
Clostridium perfringens tem sido classificado como principal agente patogênico gastrointestinal em potros com até 10 dias de idade, apesar dos quadros de enterocolites serem mais comuns em neonatos, animais jovens e adultos também podem ser acometidos. O quadro clínico que se manifesta na forma de cólica, diarreia sanguinolenta e evolui rapidamente para choque circulatório, é causado por ação da toxina (CPB) de C. perfringens tipo C. Esse agente bacteriano também está associado a graves quadros de mionecrose, geralmente fatais, por envolvimento da toxina (CPA) de C. perfringens tipo A. Para equinocultura, a importância dessas enfermidades deve-se a elevada mortalidade e a inexistência de vacinas comerciais, que garantam a imunização, principal forma de prevenção. Assim o objetivo deste trabalho foi ser o pioneiro em utilizar e avaliar a longevidade da resposta imune humoral no período de um ano, em equinos imunizados com diferentes concentrações (100, 200 e 400µg) de toxóides recombinantes CPA e CPB de C. perfringens tipos A e C, respectivamente, bem como comparar aos resultados obtidos em animais inoculados com toxóide comercial. Foram utilizados 50 animais da espécie equina, raça Mangalarga Marchador, de ambos os sexos, a partir de um ano de idade, sem histórico vacinal contra clostridioses. Os animais foram divididos aleatoriamente em cinco grupos de dez equinos: Grupo Vacina Recombinante 100µg (G1), Grupo Vacina Recombinante 200µg (G2), Grupo Vacina Recombinante 400µg (G3), Grupo Vacina Comercial (G4) e Grupo Controle Negativo (G5). Os equinos do G1, G2 e G3 foram vacinados com a vacina recombinante contendo diferentes concentrações dos toxóides recombinantes CPA e CPB 100, 200 e 400µg, respectivamente, G4 com vacina comercial e o G5 recebeu solução salina estéril (NaCl 0,9%). Todos os animais receberam duas doses de 2ml, por via intramuscular, na tábua do pescoço, nos dias zero e 28 após a primeira dose. As amostras de soro sanguíneo foram coletadas nos dias zero, 28, 56, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 e 360 após a primeira vacinação. Os soros obtidos, após centrifugação foram submetidos a técnica de soroneutralização em camundongos. O teste de potência realizado no dia 56, demonstrou que as formulações de 200 e 400µg foram capazes de induzir resposta imune em todos os equinos inoculados, de acordo com os níveis exigidos na legislação, assim como, ao avaliar a longevidade (teste de eficiência) da resposta imune vacinal, as mesmas concentrações apresentaram níveis de anticorpos detectáveis até o dia 180, não havendo diferenças significativas entre os resultados obtidos. A vacina recombinante nas concentrações acima de 200µg foi capaz de estimular resposta imune humoral satisfatória em equinos.
Clostridium perfringens has been rated as the main gastrointestinal pathogen in foals up to age 10 days old, although enterocolitis is more common in neonates, young and adult animals may also be affected. The clinical picture which manifests itself in a form of colic, bloody diarrhoea and progresses rapidly towards a circulatory shock, is caused by the action of toxin (CPB) of C. perfringens type C. This bacterial agent is also associated with severe myonecrosis, usually fatal, due to the involvement of toxin (CPA) of C. perfringens type A. For equinoculture, the importance of these diseases is due to the high mortality and the absence of commercial vaccines, which ensure immunization, the main form to prevent. Therefore, the aim of the present work was to be pioneer in using and to analyse the longevity of humoral immune response in the period of one year, in horses immunized with different concentrations (100, 200 and 400µg) of recombinant toxoids CPA and CPB of C. perfringens types A and C, respectively, as well as compare to results acquired from inoculated animals with commercial toxoid. Fifty horses were used, Mangalarga Marchador breed, of both sexes, from the age of one year and up, no vaccine history against clostridiosis. The animals were randomly divided into five groups of ten horses: Recombinant Vaccine Group 100µg (G1), Recombinant Vaccine Group 200µg (G2), Recombinant Vaccine Group 400µg (G3), Commercial Vaccine Group (G4) and Negative Control Group (G5). G1, G2 and G3 horses have been vaccinated with the recombinant vaccine containing different concentrations of recombinant toxoids CPA and CPB 100, 200 and 400µg, respectively, G4 with commercial vaccine and G5 received sterile saline (NaCl 0.9%). All animals received two doses of 2ml, intramuscularly, in the neck, on days zero and 28 after the first dose. Blood serum samples were collected on days zero, 28, 56, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 and 360 after the first vaccination. The serum obtained after centrifugation was submitted to the serum neutralization technique in mice. The potency test held on day 56 has demonstrated that the formulations of 200 and 400µg were able to induce an immune response in all inoculated horses, according to levels required by legislation, as well as, when assessing the longevity (efficiency test) of the immune response, the same concentrations presented levels of detectable antibodies until day 180, without significant differences between the results obtained. The recombinant vaccine in above concentrations 200 µg was able to stimulate a satisfactory humoral immune response in horses.