Cardiorespiratory alterations in rodents experimentally envenomed with Hadruroides lunatus scorpion venom

Background Hadruroides lunatus is the most abundant scorpion species in the Peruvian central coast, where most of the accidents involving humans are registered. In spite of its prevalence, there are only very few studies on H. lunatus envenomation. The aim of the present study was to analyze the cardiorespiratory alterations caused by H. lunatus envenomation in rodents. Methods Wistar rats injected with H. lunatus scorpion venom were submitted to electrocardiography. After euthanasia, rat lungs were collected and histopathologically analyzed. Mouse cardiomyocytes were used to perform immunofluorescence and calcium transient assays. Data were analyzed by ANOVA or Students t-test. The significance level was set at p< 0.05. Results It was observed that H. lunatus venom increased heart rate and caused arrhythmia, thereby impairing the heart functioning. Lungs of envenomed animals showed significant alterations, such as diffuse hemorrhage. In addition, immunofluorescence showed that H. lunatus venom was capable of binding to cardiomyocytes. Furthermore, mouse ventricular cardiomyocytes incubated with H. lunatus venom showed a significant decrease in calcium transient, confirming that H. lunatus venom exerts a toxic effect on heart. Conclusion Our results showed that H. lunatus venom is capable of inducing cardiorespiratory alterations, a typical systemic effect of scorpionism, stressing the importance of medical monitoring in envenomation cases.(AU)

Haemonchus contortus: I. atividade de Pleurotus ostreatus em diferentes estádios biológicos do nematoide; II. potencial do poli (ácido lático-co-ácido glicólico) no nanoencapsulamento de IgY anti-H. contortus

A produção de pequenos ruminantes representa uma das principais fontes de renda para pequenos e médios produtores em regiões tropicais e subtropicais, principalmente nas regiões nordeste e sul do Brasil. Dentre os problemas sanitários que afetam os animais, as doenças parasitárias se destacam como um dos principais fatores limitantes da produtividade e regularidade na oferta dos produtos e derivados. Dados epidemiológicos indicam que mais de 80% da carga parasitária de pequenos ruminantes é constituída pelo helminto Haemonchus contortus. Este parasito possui distribuição cosmopolita e é considerado o mais patogênico entre os nematoides gastrointestinais, pois possui hábito hematófago. A enfermidade além de causar a morte de ovinos e caprinos em casos mais graves, pode reduzir a produção e gerar custos adicionais com utilização de antiparasitários. O uso excessivo e indiscriminado de anti-helmínticos resultou na seleção de nematódeos multirresistentes e por consequência, a redução da eficácia dos produtos disponíveis. Dessa forma, estudos que buscam métodos de controle não químicos tornam-se indispensáveis para continuidade deste seguimento. Neste contexto, esta tese foi elaborada com os objetivos de avaliar e aprimorar diferentes alternativas no controle de H. contortus: (1) avaliar in vitro a atividade ovicida e larvicida do extrato aquoso do cogumelo Pleurotus ostreatus e em gerbils experimentalmente infectados com H. contortus; (2) analisar o potencial do polímero poli (ácido lático-co-ácido glicólico) (PLGA) em diferentes proporções de ácido lático e ácido glicólico (50:50, 82:18) no nanoencapsulamento de imunoglobulinas Y anti-H. contortus na liberação in vitro e in vivo utilizando ratos Wistar. Concluímos assim, que o extrato aquoso de P. ostreatus demonstrou efeitos nematicidas em baixas concentrações contra os ovos e larvas de H. contortus in vitro, no entanto sem efeitos no teste in vivo. Da mesma forma foi demonstrado que as nanoesferas de PLGA têm a capacidade de servir como depósitos de anticorpos IgY e que as nanopartículas podem ser exploradas para a entrega de anticorpos. No entanto, em ambos os estudos são necessárias mais avaliações para verificar a resposta das formulações no hospedeiro alvo.

The production of small ruminants is one of the main sources of income for small and medium farmers in tropical and subtropical regions, mainly in the northeast and south regions of Brazil. Among the health problems that affect animals, parasitic diseases stand out as one of the main factors limiting productivity and regularity in the offer of products and derivatives. Epidemiological data indicate that more than 80% of the parasitic load of small ruminants is made up of the helminth Haemonchus contortus. This parasite has a cosmopolitan distribution and is considered the most pathogenic among gastrointestinal nematodes, as it has a bloodsucking habit. The disease in addition to causing the death of sheep and goats in more severe cases, can reduce production and generate additional costs with the use of antiparasitic agents. Due to the importance of control, the excessive and indiscriminate use of anthelmintic resulted in the selection of multi-resistant nematodes and, consequently, a reduction in the action of the available products. Thus, studies that seek non-chemical control methods are essential. Therefore, this thesis was developed with the objectives of evaluating and improving different alternatives in the control of H. contortus: (1) to evaluate in vitro the ovicidal and larvicidal activity of the aqueous extract of the mushroom Pleurotus ostreatus and in gerbils experimentally infected with H. contortus; (2) to analyse the potential of the poly (lactic acidco- glycolic acid) polymer (PLGA) in different proportions of lactic acid and glycolic acid (50:50, 82:18) in the anti-H. contortus immunoglobulin Y nanoencapsulation in vitro and in vivo release using Wistar rats. We conclude that the aqueous extract of P. ostreatus demonstrated nematocidal effects in low concentrations against eggs and larvae of H. contortus in vitro, however without effects in the in vivo test. Likewise, we demonstrate that PLGA nanospheres have the ability to serve as deposits of IgY antibodies and that nanoparticles can be exploited for the delivery of antibodies. However, in both studies, further evaluations are needed to verify the response of the formulations in the target host

Produção de imunoglobulina Y anti-Haemonchus contortus e aplicação imunoterápica em Meriones unguiculatus

Na última década, dentre os rebanhos de médio porte (aves, suínos, ovinos), o que apresentou o maior índice de crescimento foi o efetivo ovino. Para a ovinocultura, as helmintoses gastrintestinais podem ser consideradas um dos principais entraves para criação atualmente. Dentre essas, destacamos a haemoncose, causada pela espécie Haemonchus contortus, parasito cosmopolita, altamente patogênico e prevalente. Esta enfermidade, além de causar a morte de animais e retardo no desenvolvimento, reduz a produção, gerando maiores custos e maior tempo para o retorno do capital empregado. Devido à importância do controle desta parasitose, o uso massivo e indiscriminado de anti-helmínticos culminou com seleção de nematódeos multirresistentes e por consequência, a deficiente ação dos produtos disponíveis no mercado. Assim, pesquisas por métodos de controle não químicos tornam-se indispensáveis para continuidade deste seguimento. Neste contexto, esta tese foi elaborada com os objetivos de avaliar diferentes protocolos experimentais para estabelecimento da infecção de Meriones unguiculatus por H. contortus com e sem imunossupressão (manuscrito 1); de produzir e caracterizar imunoglobulinas Y (IgY) anti H. contortus a partir de larvas de terceiro estágio (L3) (manuscrito 2) e estágios adultos desse helminto (manuscrito 3) e de avaliar a atividade imunoterapêutica da IgY anti-H. contortus em Meriones unguiculatus infectados experimentalmente. Concluímos assim, que é possível estabelecer a infecção de gerbils por H. contortus, sendo a imunossupressão com metilprednisolona a que obteve os melhores resultados comparado a dexametasona e com animais imunocompetentes. Galinhas imunizadas com larvas de terceiro estágio e adultos de H. contortus produziram imunoglobulinas específicas anti-H. contortus e com alta avidez. A imunoterapia interferiu no estabelecimento de H. contortus em gerbils infectados experimentalmente.

In the last decade, among the medium-sized herds (poultry, swine, sheep), the one with the highest growth rate was sheep. For the sheep farming, gastrointestinal helminths can be considered one of the main barriers for breeding today. Among these, we highlight the haemoncosis, caused by the Haemonchus contortus species, a cosmopolitan parasite, highly pathogenic and prevalent. This disease, in addition to causing the death and delayed development of animals, reduces production, resulting in increased breeding costs. Due to the importance of the control of this parasitosis, the massive and indiscriminate use of antihelmintics promoted the selection of multiresistant nematodes and, consequently, the deficient action of the products commercially available. Thus, to research this topic is essential for the prevention and control of infections caused by H. contortus. In this context, this thesis was elaborated with the aim of evaluate different experimental protocols for the establishment of H. contortus infection of Meriones unguiculatus with and without immunosuppression (manuscript 1); to produce and characterize anti-H. contortus immunoglobulins Y (IgY) from third instar larvae (L3) (manuscript 2) and adult stages of this helminth (manuscript 3), and to evaluate the IgY immunotherapeutic activity anti-H. contortus in Meriones unguiculatus experimentally infected. We observed that is possible to establish gerbils infection by H. contortus, after immunosuppression with methylprednisolone compared to dexamethasone immunosuppression and immunocompetent animals. Chickens immunized with third-stage larvae and adults of H. contortus produced immunoglobulins anti-H. contortus displaying specificity and high avidity. Lastly, we verified that immunotherapy interfered in the establishment of H. contortus in experimentally infected gerbils.

Toxoplasma gondii: evaluation of immunofluorescence assay using heterologous secondary antibody in experimentally infected wild small rodents / Toxoplasma gondii: avaliação da reação de imunofluorescência indireta usando anticorpo secundário heterólogo em roedores silvestres experimentalmente infectados

Toxoplasmosis is a zoonotic infection caused by Toxoplasma gondii that affects a wide range of vertebrates. Rodents are intermediate hosts and serve as food for felids, the definitive hosts. However, because of the high variety of species in the order Rodentia, the serological diagnosis is difficult to perform, since the most used techniques require the use of specific antibody conjugated to fluorescein or enzymes. The aim of this study was to evaluate the use of a heterologous secondary antibody conjugate in Immunofluorescence Antibody Test (IFAT) for diagnosis of anti-T. gondii antibodies in two species of wild rodents: Euryoryzomys russatus (WAGNER, 1848) and Calomys callosus (RENGGER, 1830). The specie Mus musculus (Linnaeus, 1758) was used as control conjugate. The animals were experimentally infected with five cysts of T. gondii (strain ME 49) per animal. The Modified Agglutination Test (MAT), which does not require the use of conjugates, and the presence of T. gondii cysts in the rodents were used to confirm the infection. For each animal species, serum samples were collected weekly for five weeks and tested (50 samples per rodent specie, total of 150 samples). None of the samples from C. callosus and E. russatus were positive in the IFAT when anti-mouse heterologous conjugate was used. Brain cysts of T. gondii were microscopically observed in all animals, except in one of the E. russatus. Positive results were found in the MAT 14 days after T. gondii infection in all three species of rodents and IFAT of the control group (M. musculus) was also positive 14 days after infection using anti-mouse (homologous) conjugate. The use of heterologous secondary antibody conjugates should be used with caution and the MAT had a good agreement for serological diagnosis of T. gondii in the studied rodent species(AU)

A toxoplasmose é uma zoonose causada pelo Toxoplasma gondii, que afeta uma grande variedade de vertebrados. Os roedores são hospedeiros intermediários e servem de alimento para felinos, os hospedeiros definitivos. No entanto, por causa da elevada variedade de espécies na ordem Rodentia, o diagnóstico serológico é difícil de ser realizado, uma vez que as técnicas mais empregadas requerem a utilização de um anticorpo específico conjugado com fluoresceína ou enzimas. O objetivo deste estudo foi avaliar o uso de um conjugado secundário heterólogo na Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para diagnóstico de anticorpos anti-T. gondii em duas espécies de roedores silvestres: Euryoryzomys russatus (WAGNER, 1848) e Calomys callosus (RENGGER, 1830). A espécie Mus musculus (Linnaeus, 1758) foi utilizada como controle do conjugado. As três espécies de roedores foram experimentalmente infectadas com cinco cistos de T. gondii (cepas ME 49) por animal. O Teste de Aglutinação Modificado (MAT), que não requer o uso de conjugados, bem como, a presença de cistos de T. gondii nos roedores foram usados para confirmar a infecção. Para cada espécie de animal, amostras de soro foram coletadas durante cinco semanas e testadas (50 amostras por espécie de roedor, total de 150 amostras). Nenhuma das amostras de C. callosus e E. russatus foram positivas na RIFI, quando foi usado o conjugado heterólogo anti-camundongo. Cistos cerebrais de T. gondii foram microscopicamente observados em todos os animais, exceto em um dos E. russatus. Resultados positivos foram encontrados pelo MAT após 14 dias de inoculação em todas as três espécies estudadas e pela RIFI no grupo controle (M. musculus), também no dia 14 após a infecção utilizando conjugado anti-camundongo. O uso de conjugados secundários heterólogos deve ser empregado com cautela e o MAT apresentou uma boa concordância para o diagnóstico sorológico de T. gondii nas espécies de roedores estudadas(AU)

Falha na sexagem por inibição do desenvolvimento de embriões bovinos produzidos in vitro com anticorpos anti H-Y / Failure of sexing by developmental arrest of bovine embryos in vitro produced with H-Y antisera

Embriões bovinos produzidos in vitro, em estádio de mórula, foram cultivados em meio contendo anticorpos anti H-Y de alto título proveniente de ratos por 24h e, após este tempo, classificados em dois grupos: 1) embriões inibidos em estádio de mórula (classificados como machos) e 2) embriões que se desenvolveram e formaram a blastocele (classificados como fêmeas). O sexo de 311 embriões, distribuídos em três grupos de concentração dos anticorpos, 3 por cento, 5 por cento ou 7 por cento, foi identificado pela reação em cadeia da polimerase. Não houve desvio da proporção entre machos e fêmeas (P>0,05) nos grupos em que se utilizaram os anticorpos anti H-Y, quando comparadas ao grupo-controle, sem adição de anticorpos anti H-Y. Diferentemente dos resultados obtidos utilizando-se embriões bovinos produzidos in vivo, a sexagem com anticorpos anti H-Y de alto título em embriões produzidos in vitro não propiciou sucesso.(AU)

In vitro produced bovine embryos at morula stage were cultured in medium containing high titer of rat H-Y antisera for 24h. The embryos were classified in two groups: 1) embryos arrested at morula stage (classified as males); and 2) embryos that developed and formed a blastocoele (classified as female). The sex of 311 embryos, divided in three groups of concentration of H-Y antisera, 3 percent, 5 percent or 7 percent, was identified by polimerase chain reaction. The results showed no difference (P>0.05) on sexual deviation in groups in which the H-Y antisera was added, in relation to control group, in which no H-Y antisera was added. In contrast with results obtained with in vivo produced bovine embryos, the sexing of in vitro produced bovine embryos with high H-Y antisera titer did not succed.(AU)

Gastric ulcers in pigs affected with postweaning multisystemic wasting syndrome / Úlceras gástricas em suínos afetados pela síndrome multissistêmica do definhamento

Samples of gastric lymph nodes and the stomachs from 24 pigs selected from herds affected by postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) and sudden death associated with gastric ulcers were studied. Pigs were selected on the basis of unthriftiness, decreased feed intake, and wasting. The stomachs were opened, inverted, and classified into 0-3 score according the severity of the gross lesions present in pars oesophagica (non-glandulargastric mucosa). Selected samples were processed for paraffin embedding and stained with hematoxylin and eosin. Immunohistochemistry using anti-PCV2 (porcine circovírus type 2) antibody, anti-Helicobacter pylori antibody and a wide-spectrum anti-cytokeratin antibody was performed. Gross changes in pars oesophagea were classified according to the severity of lesions as score 3, 2, and 1 in 8, 6, 5 stomachs respectivelly. Microscopically, hyperplastic lymphoid follicles, lymphohistiocytic inflammatory infiltrates and focci of necrosis in the gastric mucosa were common findings. Large amounts of PCV2 antigen were observed in the cytoplasm and nuclei from intralesional cells and debris from the gastric glandular mucosal zone; however, in the fundus, anti-PCV2 immunostaining was restricted to the surface mucosal cells and foveolar compartment. All gastric lymph nodes were positive for PCV2 antigen. Anti-H. pylori immunostaining was seen in eleven cases, mainly in the antrum, on the mucosal surface and foveolar compartment. The association of the anti-PCV2 immunostaining with the glandular mucus-producing cells suggests a role for PCV2 as an additional factor for the swine ulcer development.(AU)

Amostras de linfonodos gástricos e os estômagos de 24 leitões selecionados de rebanhos afetados pela síndrome multissistêmica do definhamento suíno e mortes súbitas por úlceras gástricas foram estudados. Os animais foram seleciona dos por baixa performance, baixo consumo de alimento e desnutrição. Os estômagos foram abertos, invertidos e classificados, conforme a severidade das lesões presentes na pars oesophagica (porção não-glandular da mucosa gástrica). Amostras selecionadas foram processadas por método histológico convencional para coloração de hematoxilina-eosina. Testes imuno-histoquímicos utilizando anticorpos anti-PCV2 (circovírus suíno tipo 2), anti-Helicobacter pylori e anticitoqueratina de largo espectro foram feitos. As alterações macroscópicas na pars oesophagica foram classificadas como de escore 3, 2 e 1 respectivamente em 8, 6 e 5 estômagos. Microscopicamente, foram notados folículos linfóides hiperplásicos, infiltrados linfohistiocitários e focos de necrose na mucosa gástrica. Grandes quantidades de antígeno do PCV2 foram observadas no citoplasma, núcleo e restos necróticos de células intralesionais das glândulas gástricas nas regiões do antro e cárdia; entretanto, na região do fundo, a marcação anti-PCV2 foi restrita às células da superfície mucosa e fossetas gástricas. Todos os linfonodos gástricos foram positivos para PCV2. Coloração anti-H. pylori foi identificada em 11 casos, principalmente, na superfície mucosa e fossetas gástricas no antro. A associação de antígenos PCV2 com células produtoras de muco lesadas na zona glandular gástrica sugere o envolvimento de PCV2 como um fator adicional para o desenvolvimento da úlcera gástrica suína.(AU)

Gastric ulcers in pigs affected with postweaning multisystemic wasting syndrome / Úlceras gástricas em suínos afetados pela síndrome multissistêmica do definhamento

Samples of gastric lymph nodes and the stomachs from 24 pigs selected from herds affected by postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) and sudden death associated with gastric ulcers were studied. Pigs were selected on the basis of unthriftiness, decreased feed intake, and wasting. The stomachs were opened, inverted, and classified into 0-3 score according the severity of the gross lesions present in pars oesophagica (non-glandulargastric mucosa). Selected samples were processed for paraffin embedding and stained with hematoxylin and eosin. Immunohistochemistry using anti-PCV2 (porcine circovírus type 2) antibody, anti-Helicobacter pylori antibody and a wide-spectrum anti-cytokeratin antibody was performed. Gross changes in pars oesophagea were classified according to the severity of lesions as score 3, 2, and 1 in 8, 6, 5 stomachs respectivelly. Microscopically, hyperplastic lymphoid follicles, lymphohistiocytic inflammatory infiltrates and focci of necrosis in the gastric mucosa were common findings. Large amounts of PCV2 antigen were observed in the cytoplasm and nuclei from intralesional cells and debris from the gastric glandular mucosal zone; however, in the fundus, anti-PCV2 immunostaining was restricted to the surface mucosal cells and foveolar compartment. All gastric lymph nodes were positive for PCV2 antigen. Anti-H. pylori immunostaining was seen in eleven cases, mainly in the antrum, on the mucosal surface and foveolar compartment. The association of the anti-PCV2 immunostaining with the glandular mucus-producing cells suggests a role for PCV2 as an additional factor for the swine ulcer development.(AU)

Amostras de linfonodos gástricos e os estômagos de 24 leitões selecionados de rebanhos afetados pela síndrome multissistêmica do definhamento suíno e mortes súbitas por úlceras gástricas foram estudados. Os animais foram seleciona dos por baixa performance, baixo consumo de alimento e desnutrição. Os estômagos foram abertos, invertidos e classificados, conforme a severidade das lesões presentes na pars oesophagica (porção não-glandular da mucosa gástrica). Amostras selecionadas foram processadas por método histológico convencional para coloração de hematoxilina-eosina. Testes imuno-histoquímicos utilizando anticorpos anti-PCV2 (circovírus suíno tipo 2), anti-Helicobacter pylori e anticitoqueratina de largo espectro foram feitos. As alterações macroscópicas na pars oesophagica foram classificadas como de escore 3, 2 e 1 respectivamente em 8, 6 e 5 estômagos. Microscopicamente, foram notados folículos linfóides hiperplásicos, infiltrados linfohistiocitários e focos de necrose na mucosa gástrica. Grandes quantidades de antígeno do PCV2 foram observadas no citoplasma, núcleo e restos necróticos de células intralesionais das glândulas gástricas nas regiões do antro e cárdia; entretanto, na região do fundo, a marcação anti-PCV2 foi restrita às células da superfície mucosa e fossetas gástricas. Todos os linfonodos gástricos foram positivos para PCV2. Coloração anti-H. pylori foi identificada em 11 casos, principalmente, na superfície mucosa e fossetas gástricas no antro. A associação de antígenos PCV2 com células produtoras de muco lesadas na zona glandular gástrica sugere o envolvimento de PCV2 como um fator adicional para o desenvolvimento da úlcera gástrica suína.(AU)

Feeding different levels of vitamin E and selenium has no effect on serum immunoglobulin Y (IgY) production by layers vaccinated against Escherichia coli and avian encephalomyelitis virus / Alimentação com diferentes níveis de vitamina E e selênio não influencia a produção de imunoglobulina Y (IgY) no soro de poedeiras leves vacinadas contra Escherichia coli e encefalomielite aviária

The effects of vitamin E and selenium (Se) supplementation on the immunity of hens vaccinated against a mixture of six swine-pathogenic Escherichia coli (EC) and avian encephalomyelitis virus (AEV) were studied. Antibody production (AbP) was evaluated in ninety 49 to 57-weekold H&N Nick Chick hens fed diets containing 14IU Vitamin E kg-1 (basal diet), 27, 59, 111, or 111IU vitamin E kg-1 + 0.56ppm Se supplementation. At 51 wks of age, half of the hens were vaccinated against EC, and all birds were vaccinated against AEV. At 53-weeks of age, the birds received a second dose of EC vaccine. Blood samples were collected weekly and serum was analyzed by ELISA for antiEC IgY and was expressed as optical density (OD). Vaccinated hens had higher serum OD than the non-vaccinated hens (P0.05). Vaccinated hens fed 27 and 59IU of vitamin E/kg had a higher (P 0.05) serum OD than hens fed 111IU + Se. Neither EC nor AEV seem to be appropriate models for the study of the influence of micronutrients on immune responsiveness of older hens.(AU)

Os efeitos da suplementação de vitamina E e Selênio (Se) na imunidade de galinhas vacinadas contra uma mistura de 6 sorotipos patogênicos de Escherichia coli (EC) e o vírus da encefalomielite aviária (VEA) foram estudados. A produção de anticorpos foi avaliada em galinhas H&N Nick Chick durante a 49a e 57a semanas de vida. As aves foram alimentadas com dietas contendo 14UI de Vitamina E kg-1 (dieta basal), 27, 59, 111 e 111UI de Vitamina E kg-1 + 0,56ppm Se suplementar. Às 51 semanas de idade, metade das galinhas foi vacinada contra EC, e todas as aves foram vacinadas contra VEA. Às 53 semanas, as aves receberam a segunda vacina contra EC. Amostras de sangue foram coletadas semanalmente e o soro foi analisado por ELISA para anti-EC IgY e expresso como densidade óptica (DO). Galinhas vacinadas tiveram maior DO do que as não-vacinadas (P 0,05). Aves vacinadas que receberam 27 e 59 UI de vitamina E/kg tiveram maior DO do soro (P 0,05) do que as alimentadas com 111 UI + Se. Os antígenos utilizados mostraram não ser modelos satisfatórios para estudar a influência de micronutrientes na resposta imune de aves mais velhas.(AU)

Inibição do desenvolvimento de embriões produzidos in vitro por anticorpos anti H-Y em bovinos

Anticorpos anti H-Y foram produzidos em ratas da linhagem isogênica Wistar Furth, e utilizados no sistema de cultivo in vitro de embriões bovinos, com o objetivo de desviar a proporção sexual. As ratas foram imunizadas com leucócitos do baço de machos de mesma linhagem, e a atividade biológica dos anticorpos verificada por ELISA. Cento e trinta e quatro embriões foram produzidos in vitro e quando atingiram o estádio de mórula foram incubados em meio de cultivo contendo 5% de anticorpos anti H-Y a 38,5 °C com 5% de CO2, 5% de O2 e 90% de N2 , por um período de 24 horas. Os embriões do grupo controle foram cultivados nas mesmas condições, sem adição de anticorpos anti H-Y. Após o cultivo com anticorpos anti H-Y, os embriões foram classificados em dois grupos: 1) embriões inibidos que permaneceram no estádio de mórula (classificados como machos) e 2) embriões que se desenvolveram e houve a formação de blastocele (classificados como fêmeas). Conseguimos produzir anticorpos anti H-Y com títulos de até 1:2048. Dos 134 embriões produzidos, 79 embriões (58,96%) tiveram o desenvolvimento inibido, e 55 embriões (41,04%) não sofreram inibição. O sexo de 124 embriões pode ser verificado com a PCR para confirmação dos resultados. Das 78 mórulas, 49 (62,82%) eram do sexo masculino e dos 46 blastocistos, 22 (47,83%) eram do sexo feminino. No grupo controle a proporção sexual foi de 55,57% de embriões fêmeas e 44,43% de embriões machos, totalizando 70 embriões. O teste do Qui-quadrado indicou que somente na sexagem de mórulas obteve-se desvio da proporção sexual (P<0,05) em relação ao grupo controle. Os resultados da sexagem foram diferentes dos apresentados na literatura o que pode ser devido à qualidade morfológica inferior dos embriões produzidos in vitro comparada aos embriões produzidos in vivo, ou também, a influência do meio de cultivo

Anti-H-Y antibodies were produced in female rats of the isogenic strain Wistar Furth, immunized with spleen leukocytes of males of the same strain, and the biological activity of the antibody was verified by ELISA. One hundred and thirty four embryos were produced in vitro and when they reached the morula stage they were incubated with anti-H-Y antibodies at 38.5°C under 5% CO2, 5% O2 and 90% N2 , for a period 24 hours. The embryos in the control group were cultured under same conditions, without addition of the anti-H-Y antibodies. After culture of the embryos in the medium containing anti H-Y antibodies, they were classified in two groups: 1) arrested embryos that remained in morula stage (classified as male) and 2) embryos that developed and formaed a blastocoele (classified as female). With the isogenic rats used, had been antibodies were obtained with titers up to 1:2048. Of the 124 embryos, 79 of them (58.96%) were arrested, and 55 embryos (41.04%) were not. The sex of 124 embryos was identified by PCR. Of the 78 morulas, 49 (62.82%) were confirmed as being male sex and of the 46 blastocysts, 22 (47.83%) were confirmed as being of the female sex. In the control group the sexual ratio was of 55.57% of femle embryos and 44.43% of male embryos, totalizing 70 embryos. Using the Chi-Square Test it was possible to observe that in the sexing of morulas it was obtained only statistical difference (P<0.05) in relation to the sexual ratio of the control group, while for sexed blastocysts no statistical difference was detected. The different results found compared with those reported in the literature could be due to the poor morphogical quality of the in vitro produced embryos when compared with the in vivo produced ones, or also, to the influence of the culture medium used during the in vitro production of embryos with anti-H-Y antibodies

Estudo da inibição do desenvolvimento de embriões murinos por anticorpos anti H-Y

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