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1.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 71(4): 1428-1432, jul.-ago. 2019. tab, ilus
Artigo em Inglês | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1038620

Resumo

A vacinação é a forma mais utilizada para prevenir a bronquite infecciosa causada pelo vírus da bronquite infecciosa das galinhas (IBV). Contudo, as vacinas convencionais são incapazes de diferenciar aves infectadas de vacinadas. No presente trabalho foi construído, caracterizado, e avaliado como candidato vacinal, um adenovírus recombinante expressando o gene N do IBV. O gene N foi clonado em um adenovírus humano tipo 5 defectivo e transfectado para as células HEK-293A para gerar rAd5_N. Após o vetor ser obtido como esperado e a confirmação da expressão da proteína N em HEK-293ª, foi realizada inoculação pela via oculo-nasal na dose de 10 7 TCID 50 /0,1mL para imunização de galinhas livres de patógenos específicos (SPF). A resposta imunológica do Ad5_N e a proteção contra o desafio ao IBV foram avaliadas e comparadas com uma vacina viva comercial. Não foram detectados anticorpos anti-IBV em aves vacinadas com o Ad5_N. A vacina comercial induziu anticorpos detectáveis a partir do 7º dia pós-vacinal. Em aves vacinadas com o Ad5_N não houve aumento na expressão de IFNγ. Neste estudo, o rAd5_N obtido não conferiu proteção contra desafio com IBV-M41. Os resultados indicam a necessidade de avaliar adenovírus recombinantes expressando outros genes do IBV.(AU)


Assuntos
Animais , Vacinas Sintéticas , Galinhas , Infecções por Coronavirus/prevenção & controle , Vírus da Bronquite Infecciosa , Nucleoproteínas , Proteínas do Nucleocapsídeo
2.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 71(4): 1428-1432, jul.-ago. 2019. tab, ilus
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-25192

Resumo

A vacinação é a forma mais utilizada para prevenir a bronquite infecciosa causada pelo vírus da bronquite infecciosa das galinhas (IBV). Contudo, as vacinas convencionais são incapazes de diferenciar aves infectadas de vacinadas. No presente trabalho foi construído, caracterizado, e avaliado como candidato vacinal, um adenovírus recombinante expressando o gene N do IBV. O gene N foi clonado em um adenovírus humano tipo 5 defectivo e transfectado para as células HEK-293A para gerar rAd5_N. Após o vetor ser obtido como esperado e a confirmação da expressão da proteína N em HEK-293ª, foi realizada inoculação pela via oculo-nasal na dose de 10 7 TCID 50 /0,1mL para imunização de galinhas livres de patógenos específicos (SPF). A resposta imunológica do Ad5_N e a proteção contra o desafio ao IBV foram avaliadas e comparadas com uma vacina viva comercial. Não foram detectados anticorpos anti-IBV em aves vacinadas com o Ad5_N. A vacina comercial induziu anticorpos detectáveis a partir do 7º dia pós-vacinal. Em aves vacinadas com o Ad5_N não houve aumento na expressão de IFNγ. Neste estudo, o rAd5_N obtido não conferiu proteção contra desafio com IBV-M41. Os resultados indicam a necessidade de avaliar adenovírus recombinantes expressando outros genes do IBV.(AU)


Assuntos
Animais , Vacinas Sintéticas , Galinhas , Infecções por Coronavirus/prevenção & controle , Vírus da Bronquite Infecciosa , Nucleoproteínas , Proteínas do Nucleocapsídeo
3.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 70(1): 205-212, Jan.-Feb. 2018. tab, graf
Artigo em Português | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-888098

Resumo

O presente trabalho avaliou o papel do baço no armazenamento e na reativação das linhagens de células B, representadas por células IgM positivas imunomarcadas no tecido esplênico, bem como a funcionalidade dessas células, sobre a cinética dos linfócitos e na produção sistêmica de anticorpos em tilápias-do-nilo (Oreochromis niloticus). Foram separados dois grupos: grupo memória, constituído por peixes previamente imunizados com hemácia de carneiro a 2,5%, para a geração da memória imune, e o grupo naive, que recebeu o mesmo volume de solução salina a 0,65%. Após 32 dias, os dois grupos foram submetidos a uma nova dose do antígeno na mesma concentração, volume e via de inoculação. A reativação dos clones de memória foi evidenciada pelo aumento do número de células IgM positivas no baço do grupo memória no dia zero/pré-imune. Além disso, o mesmo grupo apresentou aumento dos títulos de anticorpos séricos no 14º dia e no número absoluto de linfócitos no 21º dia em relação ao grupo naive. Esses resultados sugerem que o baço não seja apenas um local de armazenamento, mas também de reativação de células B de memória em tilápia-do-nilo.(AU)


This work aimed to evaluate the role of the spleen in storage and reactivation of the memory B cells, represented by IgM positive cells and the systemic production of sheep antibodies anti-red cell in Nile tilapia (Oreochromis niloticus). Two groups were established: the memory group, containing fish previously immunized with a 2,5% sheep anti-red cell, to generate the immune memory; and the naive group, containing fish that received a 0,65% saline solution. After 32 days, both groups were subjected to a new dose of the same antigen at the same concentration, volume, and inoculation via. The memory clones reactivation was correlated to the increase of the IgM positive cells in the spleen in the memory group at 0 day. The memory group showed an increase in the absolute number of lymphocytes at 21 days and an increase in the antibodies at 14 days after inoculation when compared to the naive group. The results suggest that the spleen may be a storage and reactivation place of memory B cells in Nile tilapia.(AU)


Assuntos
Animais , Imunoglobulina M/análise , Ciclídeos/imunologia , Ciclídeos/sangue , Formação de Anticorpos , Imunoglobulinas/administração & dosagem
4.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 70(1): 205-212, jan.-fev. 2018. tab, graf
Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-18368

Resumo

O presente trabalho avaliou o papel do baço no armazenamento e na reativação das linhagens de células B, representadas por células IgM positivas imunomarcadas no tecido esplênico, bem como a funcionalidade dessas células, sobre a cinética dos linfócitos e na produção sistêmica de anticorpos em tilápias-do-nilo (Oreochromis niloticus). Foram separados dois grupos: grupo memória, constituído por peixes previamente imunizados com hemácia de carneiro a 2,5%, para a geração da memória imune, e o grupo naive, que recebeu o mesmo volume de solução salina a 0,65%. Após 32 dias, os dois grupos foram submetidos a uma nova dose do antígeno na mesma concentração, volume e via de inoculação. A reativação dos clones de memória foi evidenciada pelo aumento do número de células IgM positivas no baço do grupo memória no dia zero/pré-imune. Além disso, o mesmo grupo apresentou aumento dos títulos de anticorpos séricos no 14º dia e no número absoluto de linfócitos no 21º dia em relação ao grupo naive. Esses resultados sugerem que o baço não seja apenas um local de armazenamento, mas também de reativação de células B de memória em tilápia-do-nilo.(AU)


This work aimed to evaluate the role of the spleen in storage and reactivation of the memory B cells, represented by IgM positive cells and the systemic production of sheep antibodies anti-red cell in Nile tilapia (Oreochromis niloticus). Two groups were established: the memory group, containing fish previously immunized with a 2,5% sheep anti-red cell, to generate the immune memory; and the naive group, containing fish that received a 0,65% saline solution. After 32 days, both groups were subjected to a new dose of the same antigen at the same concentration, volume, and inoculation via. The memory clones reactivation was correlated to the increase of the IgM positive cells in the spleen in the memory group at 0 day. The memory group showed an increase in the absolute number of lymphocytes at 21 days and an increase in the antibodies at 14 days after inoculation when compared to the naive group. The results suggest that the spleen may be a storage and reactivation place of memory B cells in Nile tilapia.(AU)


Assuntos
Animais , Ciclídeos/sangue , Ciclídeos/imunologia , Formação de Anticorpos , Imunoglobulina M/análise , Imunoglobulinas/administração & dosagem
5.
Arq. bras. med. vet. zootec ; 68(4): 853-857, jul.-ago. 2016. mapas
Artigo em Inglês | LILACS, VETINDEX | ID: lil-792480

Resumo

Bacteria of the genus Brucella are widespread in many countries. These microorganisms can infect humans and many wild and domestic animal species. These bacteria have zoonotic potential, and can cause economic and public health problems since they can be transmitted by direct contact with sick animals, through consumption of contaminated milk, raw meat and its derivatives (Soares et al., 2015). Brucellosis is considered a chronic evolving disease, unusual in horses, predominantly caused by Brucella abortus. However, it is not characterized by reproductive disorders in horses, but primarily by abscess in the cervical region, bursa, tendons, and joints. Transmission is likely to occur via ingestion of contaminated water and pastures, especially in areas endemic for bovine brucellosis (Ribeiro et al., 2008). The slaughterhouse is a strategic point for obtaining information about the animal and animal products, edible or not. This study investigated the presence of anti-Brucella spp. immunoglobulins in the serum samples from horses slaughtered in a slaughterhouse in southern Brazil, to estimate the frequency of Brucella spp. antibodies and determine the spatial distribution of the cases.(AU)


Objetivou-se investigar a presença de imunoglobulinas anti-Brucella spp. em amostras de soros sanguíneos de equídeos abatidos em matadouro-frigorífico, sob Serviço de Inspeção Federal, localizado na região Sul do Brasil. Utilizaram-se 767 amostras de sangue de equídeos adultos abatidos no período de abril a maio de 2013. Os animais foram provenientes de 45 municípios dos estados do Rio Grande do Sul, Santa Catarina e Paraná. Para diagnóstico, foram utilizados os testes do antígeno acidificado tamponado (AAT), sendo os resultados positivos confirmados pelos testes de polarização fluorescente (TPF), reação de fixação de complemento (RFC) e 2-mercaptoetanol (2-ME). Foram sororreagentes no AAT 65 (8,47%) animais. Destes, apenas dois (3,07%) foram positivos também na RFC e três (4,62%) animais foram positivos no TPF. Apesar da baixa frequência de animais positivos para Brucella spp., pode-se afirmar que a infecção em equinos está presente na área estudada, o que é demonstrado pela presença de animais sororreatores. No âmbito da saúde animal, pública e ocupacional, sugere-se a atenção a essa doença, visando diminuir o risco de infecção.(AU)


Assuntos
Animais , Masculino , Feminino , Abate de Animais , Brucelose/veterinária , Equidae , Doenças dos Cavalos , Polarização de Fluorescência/veterinária
6.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 68(4): 853-857, jul.-ago. 2016. ilus
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-340783

Resumo

Bacteria of the genus Brucella are widespread in many countries. These microorganisms can infect humans and many wild and domestic animal species. These bacteria have zoonotic potential, and can cause economic and public health problems since they can be transmitted by direct contact with sick animals, through consumption of contaminated milk, raw meat and its derivatives (Soares et al., 2015). Brucellosis is considered a chronic evolving disease, unusual in horses, predominantly caused by Brucella abortus. However, it is not characterized by reproductive disorders in horses, but primarily by abscess in the cervical region, bursa, tendons, and joints. Transmission is likely to occur via ingestion of contaminated water and pastures, especially in areas endemic for bovine brucellosis (Ribeiro et al., 2008). The slaughterhouse is a strategic point for obtaining information about the animal and animal products, edible or not. This study investigated the presence of anti-Brucella spp. immunoglobulins in the serum samples from horses slaughtered in a slaughterhouse in southern Brazil, to estimate the frequency of Brucella spp. antibodies and determine the spatial distribution of the cases.(AU)


Objetivou-se investigar a presença de imunoglobulinas anti-Brucella spp. em amostras de soros sanguíneos de equídeos abatidos em matadouro-frigorífico, sob Serviço de Inspeção Federal, localizado na região Sul do Brasil. Utilizaram-se 767 amostras de sangue de equídeos adultos abatidos no período de abril a maio de 2013. Os animais foram provenientes de 45 municípios dos estados do Rio Grande do Sul, Santa Catarina e Paraná. Para diagnóstico, foram utilizados os testes do antígeno acidificado tamponado (AAT), sendo os resultados positivos confirmados pelos testes de polarização fluorescente (TPF), reação de fixação de complemento (RFC) e 2-mercaptoetanol (2-ME). Foram sororreagentes no AAT 65 (8,47%) animais. Destes, apenas dois (3,07%) foram positivos também na RFC e três (4,62%) animais foram positivos no TPF. Apesar da baixa frequência de animais positivos para Brucella spp., pode-se afirmar que a infecção em equinos está presente na área estudada, o que é demonstrado pela presença de animais sororreatores. No âmbito da saúde animal, pública e ocupacional, sugere-se a atenção a essa doença, visando diminuir o risco de infecção.(AU)


Assuntos
Animais , Masculino , Feminino , Adulto , Doenças dos Cavalos , Brucelose/veterinária , Abate de Animais , Equidae , Polarização de Fluorescência/veterinária
7.
Pesqui. vet. bras ; 36(11): 1067-1074, nov. 2016. tab, graf
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-15585

Resumo

A glycoprotein E-deleted Brazilian bovine herpesvirus 1 (BoHV-1gE) was tested regarding to safety and immunogenicity. Intramuscular inoculation of young calves with a high virus dose did not result in clinical signs or virus shedding during acute infection or after dexamethasone administration. Calves vaccinated once IM (group I) or subcutaneously (group II) with live BoHV-1gE or twice with inactivated virus plus aluminum hydroxide (group IV) or Montanide (group V) developed VN titers of 2 to 8 (GMT:2); 2 to 4 (GMT:1.65); 2 to 16 (GMT:2.45) and 2 to 128 (GMT:3.9), respectively. All BoHV-1gE vaccinated calves remained negative in an anti-gE ELISA. Lastly, six young calves vaccinated with live BoHV-1gE and subsequently challenged with a virulent BoHV-1 strain shed less virus and developed only mild and transient nasal signs comparing to unvaccinated calves. Thus, the recombinant BoHV-1gE is safe and immunogenic for calves and allows for serological differentiation by a gE-ELISA test.(AU)


Um isolado brasileiro de herpesvírus bovino tipo 1, contendo uma deleção na glicoproteína E (gE - BoHV-1gE) foi submetido a testes para avaliar a sua segurança e imunogenicidade em bovinos. Bezerros foram submetidos à inoculação intramuscular com uma alta dose viral e não demonstraram sinais clínicos ou excreção viral durante a fase aguda ou após tentativa de reativação viral pela administração de dexametasona. Bezerros que receberam uma dose do vírus vivo, contendo a deleção na gE, pela via intramuscular (grupo I) ou pela via subcutânea (grupo II) ou duas doses do vírus inativado utilizando o adjuvante hidróxido de alumínio (grupo IV) ou Montanide (grupo V), desenvolveram títulos de anticorpos neutralizantes de 2 a 8 (GMT: 2); 2 a 4 (GMT: 1,65); 2 a 16 (GMT: 2,25) e de 2 a 128 (GMT: 3,9), respectivamente. Todos os bezerros vacinados se mantiveram soronegativos quando utilizado um kit ELISA específico para a gE. Para o teste de segurança, seis bezerros foram vacinados com o vírus vivo BoHV-1gE, sendo estes posteriormente desafiados com uma cepa virulenta de BoHV-1. Estes bezerros excretaram menos vírus e desenvolveram apenas sinais clínicos moderados e transitórios quando comparados com dados coletados de quatro animais não-vacinados. Com base nestes resultados, podemos confirmar que o vírus do BoHV-1 que contém a deleção na gE (BoHV-1gE) é seguro e suficientemente imunogênico para bezerros e permite a diferenciação sorológica entre os animais vacinados e infectados perante a a um teste ELISA commercial específico para a gE.(AU)


Assuntos
Animais , Bovinos , Herpesvirus Bovino 1/genética , Vacinas Sintéticas , Glicoproteínas , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática
8.
Pesqui. vet. bras ; 36(11): 1067-1074, Nov. 2016. tab, graf
Artigo em Inglês | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-842009

Resumo

A glycoprotein E-deleted Brazilian bovine herpesvirus 1 (BoHV-1gEΔ) was tested regarding to safety and immunogenicity. Intramuscular inoculation of young calves with a high virus dose did not result in clinical signs or virus shedding during acute infection or after dexamethasone administration. Calves vaccinated once IM (group I) or subcutaneously (group II) with live BoHV-1gEΔ or twice with inactivated virus plus aluminum hydroxide (group IV) or Montanide™ (group V) developed VN titers of 2 to 8 (GMT:2); 2 to 4 (GMT:1.65); 2 to 16 (GMT:2.45) and 2 to 128 (GMT:3.9), respectively. All BoHV-1gEΔ vaccinated calves remained negative in an anti-gE ELISA. Lastly, six young calves vaccinated with live BoHV-1gEΔ and subsequently challenged with a virulent BoHV-1 strain shed less virus and developed only mild and transient nasal signs comparing to unvaccinated calves. Thus, the recombinant BoHV-1gEΔ is safe and immunogenic for calves and allows for serological differentiation by a gE-ELISA test.(AU)


Um isolado brasileiro de herpesvírus bovino tipo 1, contendo uma deleção na glicoproteína E (gE - BoHV-1gEΔ) foi submetido a testes para avaliar a sua segurança e imunogenicidade em bovinos. Bezerros foram submetidos à inoculação intramuscular com uma alta dose viral e não demonstraram sinais clínicos ou excreção viral durante a fase aguda ou após tentativa de reativação viral pela administração de dexametasona. Bezerros que receberam uma dose do vírus vivo, contendo a deleção na gE, pela via intramuscular (grupo I) ou pela via subcutânea (grupo II) ou duas doses do vírus inativado utilizando o adjuvante hidróxido de alumínio (grupo IV) ou Montanide™ (grupo V), desenvolveram títulos de anticorpos neutralizantes de 2 a 8 (GMT: 2); 2 a 4 (GMT: 1,65); 2 a 16 (GMT: 2,25) e de 2 a 128 (GMT: 3,9), respectivamente. Todos os bezerros vacinados se mantiveram soronegativos quando utilizado um kit ELISA específico para a gE. Para o teste de segurança, seis bezerros foram vacinados com o vírus vivo BoHV-1gEΔ, sendo estes posteriormente desafiados com uma cepa virulenta de BoHV-1. Estes bezerros excretaram menos vírus e desenvolveram apenas sinais clínicos moderados e transitórios quando comparados com dados coletados de quatro animais não-vacinados. Com base nestes resultados, podemos confirmar que o vírus do BoHV-1 que contém a deleção na gE (BoHV-1gEΔ) é seguro e suficientemente imunogênico para bezerros e permite a diferenciação sorológica entre os animais vacinados e infectados perante a a um teste ELISA commercial específico para a gE.(AU)


Assuntos
Animais , Bovinos , Glicoproteínas , Herpesvirus Bovino 1/genética , Herpesvirus Bovino 1/imunologia , Vacinas Sintéticas , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática
9.
Ars vet ; 31(2)2015.
Artigo em Português | LILACS-Express | VETINDEX | ID: biblio-1463346

Resumo

Os objetivos foram: (i) produzir anticorpos policlonais IgY contra o antígeno total de promastigotas (ATPro) de Leishmania amazonensis; (ii) purificar anticorpos da gema do ovo de galinhas imunizadas; (iii) avaliar a qualidade da purificação; e (iv) diagnosticar as alterações macroscópicas pós-imunização. Três galinhas da linhagem HiSex foram imunizadas com 100 µg de ATPro/250 µL de PBS (pH 7,2) emulsionado em 250 µL de adjuvante completo (imunização primária) e incompleto (2º e 3º booster) de Freund, pela via intramuscular e com intervalo de 14 dias. O volume final (500 µL) foi inoculado em quatro locais do músculo peitoral. Os ovos foram colhidos diariamente e as gemas foram armazenadas a -20ºC. A fração solúvel em água (FSA) foi obtida da gema total, por meio de precipitação em água acidificada (pH 5,0-5,2), seguida de salting-out da FSA com sulfato de sódio (19% e 14%). A purificação foi avaliada por meio de eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) 12% e pelo teste de dot-blot com anticorpos anti-IgY. O diagnóstico das alterações macroscópicas foi realizado durante a necropsia das aves imunizadas, por inspeção do músculo peitoral. Obteve-se um sobrenadante translúcido (FSA) e um precipitado denso de cor amarela. O salting-out da FSA resultou em um precipitado de cor branca (PY). O SDS-PAGE demonstrou a progressiva remoção de contaminantes, a cada etapa da purificaçã

10.
R. bras. Parasitol. Vet. ; 23(2): 237-240, 06/2014. graf
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-27124

Resumo

There is little information on the humoral response of sheep experimentally infected with Echinococcus granulosus. Thus, the objective of this study was to evaluate this response and measure its evolution. Doses of 10, 100, 1000 and 10000 E. granulosus eggs were prepared and inoculated via intraruminal puncture. Blood samples were obtained before inoculation and every 48 h after inoculation, until they became seropositive. Thereafter, they were taken monthly for the first year and then every three months until 1700 days of observation had been completed. An ELISA test, with total hydatid fluid antigen, was used for immunodiagnosis. The average optical density of the 12 inoculated sheep was found to be above the mean cutoff value 10 days after inoculation, went on increasing until 180 days after inoculation and remained above the cutoff level until the end of the observation period. This confirms that the antibody response of sheep to E. granulosus infection occurs before production of hydatid fluid and that activation, mobilization and establishment of oncospheres in the tissues generates a persistent response from the host's immune system.


Existe pouca informação sobre a resposta imune humoral de ovinos experimentalmente infectados por Echinococcus granulosus. O objetivo deste estudo é avaliar a resposta imune por anticorpos em ovinos infectados. Os ovinos receberam doses de 10, 100, 1.000 e 10.000 ovos de E. granulosus por via intrarruminal. Amostras de sangue foram colhidas antes e após infecção, a cada 48 horas, até a detecção de anticorpos anti-E. granulosus e após, colheram-se amostras mensal e trimestralmente, no primeiro ano até 1.700 dias de infecção. No imunodiagnóstico, utilizou-se o ensaio imunoenzimático indireto (ELISA-teste) e como antígeno total, líquido hidático. Na detecção de anticorpos anti-E. granulosus no soro das 12 ovelhas, a densidade ótica esteve acima do ponto de corte, após 10 dias de infecção, aumentando até 180 dias pós-infecção, e permanecendo acima desses dias até o final do experimento. Isso confirma que a resposta por anticorpos em ovinos infectados por E. granulosus antecede a produção de líquido hidático, e que a ativação, mobilidade e permanência das oncosferas nos tecidos possibilita a resposta imune dos hospedeiros.


Assuntos
Animais , Echinococcus granulosus , Equinococose/veterinária , Imunidade Humoral , Doenças dos Ovinos/imunologia , Doenças dos Ovinos/parasitologia , Experimentação Animal , Equinococose/imunologia , Distribuição Aleatória , Ovinos
11.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-212839

Resumo

Autor: Rafaela Luiza Klein Orientador: Rafael Frandoloso A pneumonia enzoótica suína (PES) é uma doença infectocontagiosa que há longa data é destaque na cadeia suinícola. A PES é causada pelo Mycoplasma hyopneumoniae (Mhyo), uma bactéria específica de suínos que pode ser transmitida através de contato direto e indireto. A doença acomete suínos de todas as idades, porém a clínica é comumente observada na fase de crescimento e terminação de suínos. Mhyo pode produzir doença pulmonar de forma independente, no entanto, sua infecção facilita a ocorrência de inúmeras outras infecções secundárias causadoras de pneumonias e de doenças sistêmicas. O diagnóstico da circulação de Mhyo é realizada através de testes sorológicos em combinação com técnicas moleculares, e a prevenção, mediante o uso de vacinas clássicas aplicadas pela via intramuscular ou intradérmica. Em razão do diagnóstico sorológico ser de vital importância para o posicionamento correto de vacinas a partir do entendimento da cinética de anticorpos naturais adquiridos através do colostro, ou mesmo, desenvolvidos após um processo de infecção, desenvolver insumos imunológicos genuínos e capazes de detectar indiretamente ou diretamente o Mhyo são indispensáveis para o Brasil. Nesta dissertação, apresentamos o desenvolvimento e a caracterização de um anticorpo monoclonal (AcMo) contra Mycoplasma hyopneumoniae. Posteriormente, o AcMo foi utilizado para desenvolver um ELISA moderno, baseado em células inteiras de M. hyopneumoniae corretamente orientadas no interior da placa de ELISA pelo AcMo. Brevemente, células de mieloma murino P3x63Ag8.653 foram fusionadas com esplenócitos obtidos de camundongos BALB/c imunizados com uma suspensão de M. hyopneumoniae cepa ATCC25095. O AcMo obtido, nomeado de MAb 4A2, foi caracterizado por meio de Western Blot, Dot Assay, Citometria de Fluxo e Teste de Avidez. O MAb 4A2 é uma imunoglobulina da subclasse IgG1 com duas cadeias leves do tipo lambda que reconhece um epitopo linear comum presente na estrutura de duas proteínas superficiais de M. hyopnuemoniae, as quais possuem pesos moleculares de 46 e 100 kDa. O índice de avidez do MAb 4A2 foi de 0.5 M de tiocionato de amônia e reações cruzadas com Glaesserella parasuis não foram evidenciadas pelo ensaio de Dot Assay. A análise de citometria de fluxo mostrou a capacidade do MAb 4A2 de reconhecer três diferentes cepas de M. hyopneumoniae, no entanto, a cepa ATCC®25617TM foi significativamente (p<0.01) menos reconhecidas que as cepas ATCC®25095TM e ATCC 25088. Posteriormente, utilizamos o MAb 4A2 para desenhar um moderno ELISA baseado em antígenos corretamente orientados para detectar IgG de suínos contra M. hyopneumoniae. Nossos resultados preliminares monstraram que este ELISA tem maior sensibilidade em comparação com um ELISA comercial globalmente utilizado para a detecção sorológia de IgGs anti M. hyopneumoniae; consequentemente, nosso ELISA possui melhor capacidade de detectar animais com baixos niveis de IgG reativas ao microrganismo. Este novo ELISA consiste numa promissora plataforma de diagnóstico ultra-sensível para detectar anticorpos contra Mycoplasma hyopneumoniae.


Development of a novel antigen-oriented ELISA for Mycoplasma hyopneumoniae diagnosis Author: Rafaela Luiza Klein Advisor: Rafael Frandoloso Swine enzootic pneumonia (EP) is an infectious disease globally disseminated in the pig industry. EP is caused by Mycoplasma hyopneumoniae, a pig-specific bacterium that can be transmitted through direct and indirect. The disease affects pigs of all ages, but the clinical manifestation is commonly observed in the pig growth and finishing phase. M. hyopnuemoniae can produce pulmonary disease independently, however, its infection facilitates the occurrence of other secondary infections that can causing pneumonia and systemic diseases. The diagnosis of M. hyopneumoniae circulation is performed through serological tests in combination with molecular techniques, and the its prevention is carrying out mainly by the use of classic vaccines applied by the intramuscular or intradermal route. Serological diagnosis has a pivotal role for the correct positioning of vaccines based on the understanding of the kinetics of natural antibodies acquired through colostrum, or even, developed after an infection process. So, develop a genuine immunological test capable of detecting M. hyopenumoniae is essential for Brazil. In this dissertation, we present the development, characterization and use of a new monoclonal antibody to design a novel ELISA based on oriented-antigen to detect antibodies reactive to Mycoplasma hyopneumoniae. Monoclonal antibody (MAb) against Mycoplasma hyopneumoniae was obtained by the fusion of P3x63Ag8.653 murine myeloma cells and spleen cells from BALB/c mice immunized with a suspension of M. hyopneumoniae strain ATCC®25095TM. One MAb showed strong reactivity in ELISA and was further characterized using Western blot, Dot Assay, Flow Cytometry and Avidity test. MAb 4A2 is an IgG1 paired with a lambda light chain molecule that recognize a common linear epitope displayed on the structure of two proteins with a molecular mass of 46 and 100 kDa expressed on the surface of M. hyopneumoniae. The avidity index of MAb 4A2 was 0.5 M of ammonium thiocyanate and cross-reactivity with Glaesserella parasuis by Dot Assay was not observed. Flow cytometry analysis showed the capacity of MAb to recognize three different strains of M. hyopneumoniae, however, the strain ATCC®25617TM was significantly less recognized than ATCC®25095TM and ATCC 25088. Further we used the MAb 4A2 to designing a novel antigen-oriented ELISA to detect pig IgG against M. hyopneumoniae. Our preliminary results showed that this ELISA has higher sensitivity than a current commercial ELISA Kit and consequently, better capacity to detect animals with low level of IgG against this microorganism. This novel ELISA is a promising and reliable serological diagnostic for M. hyopneumoniae.

12.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-217212

Resumo

O Pantanal é considerado uma das maiores planícies inundáveis do mundo e possui uma rica biodiversidade. Das onze espécies de tatus registradas no Brasil, sete ocorrem no Pantanal. Os tatus dividem suas áreas de vida com diversas outras espécies silvestres e com o gado, pois a produção extensiva de bovinos de corte é a principal atividade econômica da região. Estudos anteriores demonstraram exposição à Brucella abortus e Leptospira interrogans em diversas espécies silvestres no Pantanal, porém sabe-se pouco quanto à exposição e/ou presença desses agentes em tatus neste bioma. Dessa forma, o presente estudo teve por objetivo determinar a prevalência de anticorpos anti-Brucella e anti-Leptospira interrogans através do teste do Antígeno Acidificado Tamponado (AAT) e Soroaglutinação Microscópica (SAM) em amostras de soro de tatus de vida livre, provenientes do Pantanal da Nhecolândia e realizar a pesquisa direta do DNA dos agentes através do emprego da técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) em amostras de sangue. Foram testados 48 indivíduos de quatro espécies, sendo Dasypus novemcinctus (n=2), Cabassous unicinctus (n=8), Euphractus sexcinctus (n=16) e Priodontes maximus (n=22). Não foi observado produto amplificado pela PCR em nenhum animal testado, da mesma forma, nenhum tatu apresentou anticorpos anti-Brucella pelo AAT. Na sorologia para L. Interrogans foi encontrada prevalência de 31,25 % (5/16) em E. sexcinctus e 18,18% (4/22) em P. maximus. Esses indivíduos foram positivos para os sorovares Autumnalis/Butembo, Cynopteri/Cynopteri e Pomona/Pomona, com títulos variando de 1: 200 a 1: 1600. Os resultados obtidos reforçam a importância da vigilância de patógenos em populações de vida livre, especialmente quando existe contato com animais de produção, além de contribuir para o conhecimento de agentes infecciosos em tatus da região do Pantanal.


Pantanal is considered one of the worlds largest wetlands. Seven of the eleven species of armadillos that occur in Brazil, from a total of 21 recognized species in the world, have been recorded in this area. The main local economic activity is beef cattle production, which leads to intense wildlife-livestock contact, potentially increasing wildlife exposure to several pathogens, including those with zoonotic and economic relevance. Previous studies demonstrated that several wildlife species have been exposed to Brucella abortus and Leptospira interrogans in Pantanal; however, the exposure and/or presence of zoonotic pathogens in armadillos in this biome is still poorly understood. In order to address this question, we employed conventional polymerase chain reaction (PCR), the Rose Bengal Test (RBT) and the Microscopic Agglutination Test (MAT) to investigate the exposure and/or infection by Brucella abortus and Leptospira interrogans in blood samples of four armadillos species: nine-banded armadillo (Dasypus novemcinctus) (n=2), southern nakedtailed armadillo (Cabassous unicinctus) (n=8), yellow armadillo (Euphractus sexcinctus) (n=16) and giant armadillo (Priodontes maximus) (n=22) caught at Nhecolândia, Pantanal, Brazil. We did not detect Brucella abortus by PCR or exposure to this pathogen via the RBT in the evaluated armadillos. On the other hand, the Microscopic Agglutination Test (MAT) detected Leptospira interrogans exposure in 31.25 % (5/16) of E. sexcinctus and 18.18% (4/22) P. maximus specimens. These individuals were positive to serovars Autumnalis/Butembo, Cynopteri/Cynopteri and Pomona/Pomona, this latter with titers ranging from 1:200 to 1:1600. Our results reinforce the importance of pathogen surveillance in wildlife living in areas of livestock production and further contribute to the study of zoonotic pathogens in armadillos in the Pantanal region.

13.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-216416

Resumo

Tripanossomíases são doenças causadas por agentes do gênero Trypanosoma, que infectam humanos, animais domésticos e silvestres nos continentes Africano, Asiático, Américas do Sul e Central. Os sinais clínicos da enfermidade, como anemia e emagrecimento, são genéricos e também devido à presença de intervalos aparasitêmicos, o diagnóstico da doença torna-se desafiador. Quimioterápicos como aceturato de diminazeno (AD) e cloridrato de isometamidium (ISM) estão disponíveis para o tratamento da doença no Brasil, muito embora existam relatos e indícios de resistência aos princípios. Este trabalho teve como objetivo utilizar a amplificação circular isotérmica do DNA (LAMP) no diagnóstico e avaliar a cura parasitológica de bovinos naturalmente infectados por Trypanosoma vivax após o tratamento com ISM. Foram utilizados 30 bovinos naturalmente infectados com T. vivax, que foram tratados com duas aplicações de ISM, na dosagem de 1,0 mg/Kg por via intramuscular profunda nos dias 0 e 150. Amostras de sangue e soro colhidas nos 0, 7, 15, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 e 240 dias após o tratamento, foram submetidas ao diagnóstico de T. vivax pelas técnicas da reação em cadeia da polimerase (PCR) objetivando o gene alvo CatL-Like, LAMP visando o gene alvo DNA satélite e ensaio de imunoabsorção enzimático (ELISA) com antígeno bruto solúvel de T. vivax. Também, foi realizada uma PCR adicional para diagnóstico de infecção por T. theileri direcionado ao gene CATL. Houve persistência na detecção de DNA de T. vivax na PCR e LAMP bem como detecção contínua de anticorpos anti-T. vivax pelo método de ELISA após o tratamento instituído, sugerindo a presença de resistência do parasita ao ISM. Todas as amostras testadas para o diagnóstico de T. theileri pela PCR foram negativas.A LAMP se mostrou de grande utilidade no diagnóstico de animais naturalmente infectados, porém a combinação dos testes LAMP e ELISA podem evitar falsos diagnósticos, contribuindo para um melhor controle da doença. Os dados indicam que a PCR não é indicada para diagnóstico de T. vivax em animais apresentando baixa parasitemia, sendo, portanto não recomendada para promover o acompanhamento de animais após o tratamento com drogas tripanocidas.


Trypanosomiasis is disease caused by agents of the Trypanosoma genus, which infect humans, domestic and wild animals on the African, Asian, South and Central Americans continents. The clinical signs of the disease, such as anemia and weight loss, are generic and also due to the presence of parasitic intervals, the diagnosis of the disease becomes challenging. Chemotherapics such as diminazineaceturate(AD) and isomethemidumhydrochloride (ISM) are available for the treatment of the disease in Brazil, although there are reports and indications of resistance to the principles. This work aimed to use loop-mediated isothermal amplification (LAMP) in the diagnosis and to evaluate the parasitological cure of cattle naturally infected by Trypanosomavivax after treatment with ISM. Thirty bovines naturally infected with T. vivax were treated with two ISM applications at a dose of 1.0 mg / kg intramuscularly on days 0 and 150. Blood and serum samples were collected on 0, 7, 15, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 and 240 days after treatment and were submitted to T. vivax diagnosis by polymerase chain reaction (PCR) targeting the CatL-Like, LAMP targeting the satellite DNA geneand enzyme immunoabsorption assay (ELISA) with soluble T. vivax antigen. Also, an additional PCR for diagnosis of T. theileri infection directed to the CATL gene was performed. There was persistence in the detection of T. vivax DNA in PCR and LAMP as well as continuous detection of anti-T. vivax antibodies by the ELISA method after the treatment, suggesting the presence of resistance of the parasite to the ISM.All samples tested for the diagnosis of T. theileri by PCR were negative. LAMP proved to be very useful in the diagnosis of naturally infected animals, but the combination of the LAMP and ELISA tests can avoid false diagnoses, contributing to a better control of the disease. The data indicate that PCR is not indicated for diagnosis in animals with low parasitemia, therefore is not recommended to promote the follow-up of animals after treatment with trypanocidal drugs.

14.
Tese em Inglês | VETTESES | ID: vtt-208280

Resumo

Neospora caninum é um parasita formador de cistos teciduais que pertence ao filo Apicomplexa. O cão doméstico e outros canídeos são os hospedeiros definitivos de N. caninum, pois podem excretar nas fezes os oocistos, o estágio ambientalmente resistente do parasita. Parasitas viáveis foram isolados de diversas espécies, principalmente herbívoros, confirmando seu papel como hospedeiros intermediários. A importância das aves no ciclo biológico de N. caninum ainda não está bem definida. Vários experimentos, utilizando taquizoítas como inóculo, foram realizados em aves domésticas e silvestres e os resultados não foram conclusivos. Na natureza, a via de transmissão mais provável para as galinhas é a ingestão de oocistos. Este trabalho teve como objetivo avaliar a infecção por N. caninum em galináceos infectados por via oral com oocistos de um novo isolado de referência de N. caninum. Inicialmente, 400g de cérebro de um bovino adulto naturalmente infectado, apresentando anticorpos anti-N. caninum por meio da reação de imunofluorescência indireta - RIFI (título = 200), foram oferecidos para um cão de 2 meses de idade. Oocistos Neospora-like foram visualizados 7 dias pós inoculação (p.i.). A sequência final obtida a partir do DNA extraído dos oocistos, baseada no marcador ITS-1, teve 99% de similaridade com sequências homólogas de N. caninum. Gerbilos (Meriones unguiculatus) foram inoculados com diferentes doses de oocistos (10, 100 e 1000 oocistos) por via oral, e todos eles permaneceram clinicamente normais e anticorpos contra N. caninum foram detectados 14 dias p.i. por meio da RIFI (título 50). O homogenado do cérebro de um gerbilo infectado foi inoculado em uma monocamada de células da linhagem celular Vero e taquizoítas foram observados no cultivo celular 24 dias p.i.. A genotipagem por microssatélites do DNA extraído desses taquizoítas revelou um perfil genético único ao novo isolado de referência, designado NC-SP1. Trinta galináceos (Gallus gallus domesticus) da linhagem White Leghorn foram então inoculados via papo aos 21 dias de idade com oocistos de NC-SP1 (200 oocistos por ave). As eutanásias foram realizadas em intervalos de 7 dias para cada grupo de três aves, durante 9 semanas, e um grupo foi desafiado com a mesma dose de oocistos aos 37 dias p.i. e acompanhado por 11 semanas. Amostras de sangue foram colhidas semanalmente, e os soros testados por meio da RIFI. Os tecidos das aves foram analisados por meio da PCR, PCR quantitativa (qPCR) e imunohistoquímica (IHQ). Dois grupos de aves foram eutanasiados aos 138 e 159 dias p.i. e os tecidos foram oferecidos para dois cães sem raça definida com aproximadamente 45 dias de idade. Os galináceos não soroconverteram (título < 5), e o DNA (PCR e qPCR) e o antígeno (IHQ) de N. caninum não foram detectados nos tecidos das aves. Oocistos de N. caninum não foram excretados pelos cães. Nestas condições experimentais, os galináceos foram resistentes à infecção por N. caninum.


Neospora caninum is a tissue-cyst forming parasite that belongs to the phylum Apicomplexa. Dogs and other canids are the definitive hosts of N. caninum and they are responsible to excrete oocysts, the environmentally resistant stage of the parasite. Viable parasites have been isolated from a variety of species, especially herbivorous, confirming their role as intermediate hosts. The importance of birds in the life cycle of N. caninum is not clear. Several experiments, using tachyzoites as inoculum, were conducted in domestic and wild birds and the results were not conclusive. In nature, the possible mode of transmission in chickens is the ingestion of oocysts. This work aimed to evaluate the infection by N. caninum in chickens orally inoculated with oocysts obtained from a new isolate of N. caninum. For that, approximately 400 g of brain from a naturally infected adult cattle, showing anti-N. caninum antibodies by means of the immunfluorescent antibody test - IFAT (titre = 200), were fed to a 2-month-old dog. Neospora-like oocysts were observed on day 7 post-inoculation (p.i.). The DNA obtained from oocysts was molecularly characterized using the ITS-1 marker and the final sequence was 99% identical to homologous sequences of N. caninum. Gerbils (Meriones unguiculatus) were orally inoculated with different doses of oocysts (10, 100 and 1000 oocysts), and all of them remained clinically normal and developed N. caninum antibodies 14 days p.i. (titre 50 by IFAT). Brain homogenate from an infected gerbil was seeded into a monolayer of Vero cells and tachyzoites were visualized at 24 days p.i.. Microsatellite genotyping using DNA from the tachyzoites revealed a unique genetic profile for this new reference isolate, named NC-SP1. Thirty White Leghorn chickens (Gallus gallus domesticus) were orally inoculated with viable N. caninum oocysts from the NC-SP1 isolate (200 oocysts per bird) via the crop at 21 days of age. Groups of three birds were euthanized at intervals of 7 days during 9 weeks; one group was challenged with the same oocysts dose at 37 days p.i. and observed for 11 weeks. Blood samples were collected weekly, and sera were tested by IFAT. Chicken tissues were analyzed using PCR, quantitative PCR and immunohistochemistry (IHC). Two mongrel dogs, approximately 45 days of age were fed with tissues from chickens euthanized at 138 and 159 days p.i.. The chickens did not seroconvert (titre < 5), and neither DNA (PCR and qPCR) nor antigen (IHC) of N. caninum was detected in inoculated chicken tissues. In addition, no oocyst excretion by the dogs was observed. In these experimental conditions, the chickens were resistant to N. caninum infection.

15.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-205427

Resumo

Clostridium perfringens é um bacilo Gram-positivo, formador de esporo e produtor de ao menos 17 toxinas, das quais, quatro são consideradas principais, a toxina alfa (CPA), beta (CPB), épsilon (ETX) e iota (CPI) utilizadas para classificar a espécie em cinco toxinotipos (A, B, C, D e E). A toxinfecção nos animais ocorre por via iatrogênica/traumática ou gastrointestinal. As principais enfermidades causadas por C. perfringens são gangrena gasosa, enterotoxemias, enterite necrótica/hemorrágica e enterocolite. As vacinas contra as toxinas de C. perfringens são extensivamente utilizadas em medicina veterinária, tornando-se a principal medida de controle e profilaxia nos rebanhos. Tem crescido o número de estudos visando à utilização de vacinas recombinantes contra as principais toxinas de C. perfringens (CPA, CPB e ETX). Com isso, o objetivo do presente estudo foi avaliar os títulos de anticorpos neutralizantes antitoxinas CPA, CPB e ETX em coelhos vacinados com células inteiras inativadas de Escherichia coli (bacterinas recombinantes), assim como, a fração celular solúvel ou insolúvel, contendo tais antígenos. Após a expressão das proteínas, as células foram inativadas com formaldeído na concentração final 0,2% (v/v). Em seguida, a eficiência da inativação foi avaliada por plaqueamento de uma alíquota do cultivo em placas de LB ágar. Confirmada a inativação, as bactérias foram centrifugadas e lavadas com PBS estéril para remoção de formaldeído residual. Nas vacinas compostas por frações celulares solúveis e insolúveis, a presença dos antígenos rCPA, rCPB e rETX foi confirmada através de SDS-PAGE e western blot. As proteínas, nas duas formulações, foram quantificadas por SDSPAGE juntamente com uma curva com diferentes concentrações de albumina sérica bovina (BSA) e analisadas no software TotalLab quant®. As características de solubilidade dos antígenos recombinantes foram idênticas em ambos os vetores utilizados, pAE e pET28a, onde rCPA e rCPB foram expressas em corpos de inclusão e rETX na forma solúvel. Não foram detectados títulos de anticorpos neutralizantes antitoxinas CPA, CPB ou ETX no soro dos animais vacinados com ambas as formulações vacinais contendo 50 µg de cada antígeno expresso no vetor pAE. Entretanto, no segundo experimento com 200 µg de cada antígeno expresso em vetor pET28a, em ambas as formulações, geraram títulos de anticorpos neutralizantes antitoxina ETX de 10 UI/mL-1 , cinco vezes superior ao valor mínimo preconizado pelo Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento (MAPA). Não foram detectados títulos de anticorpos neutralizantes antitoxina CPB. A titulação de anticorpos neutralizantes antitoxina CPA não foi realizada. Os resultados do presente estudo, não apenas sustentam a potencial utilização de antígenos recombinantes, mas também fornecem dados adicionais quanto à vacinação com células inteiras inativadas de E. coli ou fração celular solúvel e insolúvel contendo proteínas recombinantes. Essa forma alternativa de produção de vacinas recombinantes visa à disponibilização de antígenos de alta qualidade e baixo custo para utilização pela indústria veterinária


Clostridium perfringens is a spore-forming, Gram-positive bacillus that produces at least 17 alpha (CPA), beta (CPB), epsilon (ETX), and iota (CPI) toxins are used to classify this bacterium into five toxinotypes (A, B, C, D, and E). Animal toxinfection occurs via either the iatrogenic/traumatic or the gastrointestinal route. The main illnesses caused by C. perfringens are gas gangrene, enterotoxemias, haemorrhagic/necrotic enteritis and enterocolitis. Vaccines against C. perfringens toxins are largely used in veterinary medicine, rendering them the main prophylactic control measure in farm animals. The number of studies aiming to develop recombinant vaccines against C. perfringens alpha, beta, and epsilon toxins is on the rise. Studies looking for alternatives to diminish time and production costs are also gaining ground. Therefore, the present study aims to evaluate neutralizing antibody titers against CPA, CPB, and ETX in rabbits immunized with whole, inactivated de E. coli cells (recombinant bacterins) and with post-lysis cell fractions containing such antigens. After protein expression, E. coli cells were inactivated with formaldehyde 0,2% (v/v). Inactivation efficiency was assessed by plating sterile LB agar plates. Once inactivation was confirmed, bacteria were washed with sterile PBS to remove residual formaldehyde. The presence of rCPA, rCPB and rETX in vaccines comprised by both soluble and insoluble cell fractions was confirmed by means of SDS-PAGE and western blot. Proteins in both formulations were quantified by SDSPAGE using different BSA concentrations using TotalLab quant® software. Solubility characteristic were identical in both pAE and pET28a expression vectors: rCPA and rCPB were expressed in inclusion bodies and rETX was soluble. No neutralizing antibody titers against CPA, CPB or ETX were detected in the sera of animals immunized with either formulation containing 50 µg of each antigen when pAE was used. However, when pET28a was used, 200 µg of each antigen in either formulation were able to generate up to 10 UI/mL-1 of anti ETX neutralizing antibodies, which is five-fold the minimum required by the Brazilian Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply. Neutralizing antibodies against CPB were not detected. A toxoid-based commercial vaccine induced 10-20 UI/mL-1of neutralizing antibodies against CPB. Anti-CPA neutralizing antibodies titration was not performed. These results, not only support the use of recombinant antigens, but also provide data about immunization using whole, inactivated E. coli cells or both their soluble and not soluble fractions containing recombinant antigens as vaccines. This alternative recombinant vaccine production method yields high quality antigens with low production costs to be used in veterinary medicine.

16.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-203758

Resumo

A seleção de nematoides gastrointestinais resistentes aos principais anti-helmínticos usados pelos produtores tem sido considerada como um dos principais entraves para o controle de verminoses de caprinos e ovinos. Esse estudo teve como objetivo avaliar o potencial imunoprofilático de protease derivada de Haemonchus contortus em caprinos. A protease de 52 KDa, obtida de lisados de vermes adultos de H. contortus do abomaso de caprinos foi purificada por cromatografia de afinidade e testada como antígeno vacinal em dez caprinos sem raça definida, com idade entre 60 e 120 dias e naturalmente infectados. Foram utilizados vinte caprinos divididos em dois grupos experimentais denominados G1 o grupo controle, no qual foi administrado 1 mL de solução salina e o grupo teste, G2, foi estimulado três vezes com 100µg de protease 1,5 mg adjuvante saponina, por via intramuscular a cada trinta dias. Foram realizadas coletas quinzenais de fezes e sangue para realização de exames parasitológico, hematológico, bioquímico e imunológico, avaliação clinica e pesagem como parâmetros de avaliação. A resposta imune humoral específica contra antígenos de H. contortus foi demonstrada através da produção de IgG específica após 0, 15, 30, 45, 60, 75 e 90 dias da estimulação. O G2 apresentou níveis de produção de anticorpos maior em relação ao G1, com diferenças estatísticas nos tempo T45 em relação aos tempos T75 e T90 (p<0,001). A contagem de ovos por grama de fezes de G2 e G1 foram equivalentes entre o período de T15 a T30 e a partir do T45 os valores do G1 tornaram-se maiores que o G2. A anemia monitorada e confirmada pelos valores de Ht do G2 revelou maiores valores em todos os intervalos de tempo em relação ao G1, sendo acompanhada pelo monitoramento clínico obtido através do método FAMACHA. A resposta celular mensurada pela contagem de eosinófilos do G2 foi superior ao G1 (p<0,05). Esse estudo evidenciou que proteases purificadas e utilizadas em ensaio imunoprofilático pode desencadear resposta imune em caprinos.


The selection of gastrointestinal nematodes resistant to the main anthelmintic used by farmers has been considered as one of the main obstacles to goat and sheep verminosis control. The goal of this paper was to evaluate the immunoprophylactic potential of a protease derived from Haemonchus contortus in goats. The 52-kDa protease obtained from lysates of adult H. contortus worms in the abomasum of goats was purified by affinity chromatography and tested as vaccine antigen in ten mixed breed goats, aged from 60 and 120 days and naturally infected. Twenty goats were divided into two experimental groups, named: G1 - the control group, which was given 1 mL of saline solution and G2 - test group, which were stimulated three times with 100 g of protease and 1.5 mg of saponin adjuvant via intramuscular every thirty days. Fortnightly faeces and blood sampling were made to perform parasitological, haematological, biochemical and immunological examinations, clinical evaluation and weighing as assessment parameters. The specific humoral immune response against H. contortus antigens was demonstrated by specific IgG production after 0, 15, 30, 45, 60, 75 and 90 days of stimulation. G2 showed higher antibody production levels as compared to G1, with statistical differences in T45 compared to T75 and T90 times (p<0.001). The faecal egg count for G2 and G1 were equivalent between T15 to T30 and from T45 the G1 values become higher than G2. Anaemia monitored and confirmed by haematocrit values in G2 showed higher values at all time intervals compared to G1, and it was accompanied by clinical monitoring obtained using FAMACHA method. The cellular responses measured by eosinophil count in G2 was superior to G1 (p<0.05). This study showed that purified proteases used in immunoprophylactic assay can trigger immune response in goats.

17.
Ciênc. anim. bras. (Impr.) ; 11(1): 194-200, 2010. ilus
Artigo em Português | VETINDEX | ID: biblio-1472911

Resumo

Comparou-se a resposta imune humoral em éguas da raça Brasileiro de Hipismo (BH) e Bretão, após a imunização com a vacina anti-Rhodococcus equi, bem como avaliou-se o efeito da imunoprofilaxia ativa materna na transferência de anticorpos pelo colostro em equinos recém-nascidos. Coletaram-se amostras sanguíneas de dezesseis éguas prenhes vacinadas contra R. equi, dezesseis potros filhos das éguas vacinadas, oito éguas prenhes não vacinadas e oito potros filhos das éguas não vacinadas. Determinou-se a titulação de anticorpos anti-R. equi utilizando-se o ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) com os dois diferentes antígenos, APTX e antígeno da vacina comercial. Não houve diferença quanto à produção de anticorpos entre as duas raças. Observou-se aumento significativo na titulação de anticorpos anti-R. equi nas éguas após a vacinação (p<0,01) sem variação com a raça, com pico no momento do parto, seguido de diminuição até sessenta dias após o parto, permanecendo constante até 150 dias do pós-parto. Houve transferência significativa de anticorpos (p<0,01) via colostro para os potros recém-nascidos das éguas vacinadas, nos quais detectou-se diminuição dos títulos aos sessenta dias após o nascimento, a qual se manteve constante até 150 dias. O antígeno comercial detectou títulos de anticorpos significativamente maiores do que o antígeno APTX (p<0,01).


The humoral immune response in ‘Brasileiro de Hipismo’ (BH) breed and Breton mares was compared after using the Rhodococcus equi vaccine, and the effect of maternal immunoprophylaxis on antibody transfer to newborn foals through the colostrum was evaluated. Blood samples were obtained from 16 pregnant mares vaccinated against R. equi, 16 foals (offspring from vaccinated mares), 8 unvaccinated pregnant mares and 8 foals (offspring from control mares). R equi serum antibody titers were determined by enzyme-linked immunosorbant assay (ELISA) after the immunization of pregnant mares using two different antigens, APTX and the commercial vaccine. There was no difference in antibody production between the two breeds. Significant increase in R. equi antibody titers was observed in mares after vaccination (p<0.01), reaching a peak at foaling. Afterward, titers tended to decrease for up to 60 days after birth (dab) and then remained constant until 150 dab. Significant antibody transfer to the vaccinated mares newborn foal occurred through the colostrum. A slight reduction in antibody titer was observed at 60 dab, after which titers remained constant for up to 150 dab. The commercial antigen detected significantly higher antibody titers than did APTX (p<0.01).


Assuntos
Animais , Anticorpos/imunologia , Cavalos/classificação , Colostro , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Vacinas/imunologia
18.
Ciênc. anim. bras. (Impr.) ; 11(1): 194-200, 2010. ilus
Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-3816

Resumo

Comparou-se a resposta imune humoral em éguas da raça Brasileiro de Hipismo (BH) e Bretão, após a imunização com a vacina anti-Rhodococcus equi, bem como avaliou-se o efeito da imunoprofilaxia ativa materna na transferência de anticorpos pelo colostro em equinos recém-nascidos. Coletaram-se amostras sanguíneas de dezesseis éguas prenhes vacinadas contra R. equi, dezesseis potros filhos das éguas vacinadas, oito éguas prenhes não vacinadas e oito potros filhos das éguas não vacinadas. Determinou-se a titulação de anticorpos anti-R. equi utilizando-se o ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) com os dois diferentes antígenos, APTX e antígeno da vacina comercial. Não houve diferença quanto à produção de anticorpos entre as duas raças. Observou-se aumento significativo na titulação de anticorpos anti-R. equi nas éguas após a vacinação (p<0,01) sem variação com a raça, com pico no momento do parto, seguido de diminuição até sessenta dias após o parto, permanecendo constante até 150 dias do pós-parto. Houve transferência significativa de anticorpos (p<0,01) via colostro para os potros recém-nascidos das éguas vacinadas, nos quais detectou-se diminuição dos títulos aos sessenta dias após o nascimento, a qual se manteve constante até 150 dias. O antígeno comercial detectou títulos de anticorpos significativamente maiores do que o antígeno APTX (p<0,01).(AU)


The humoral immune response in ‘Brasileiro de Hipismo (BH) breed and Breton mares was compared after using the Rhodococcus equi vaccine, and the effect of maternal immunoprophylaxis on antibody transfer to newborn foals through the colostrum was evaluated. Blood samples were obtained from 16 pregnant mares vaccinated against R. equi, 16 foals (offspring from vaccinated mares), 8 unvaccinated pregnant mares and 8 foals (offspring from control mares). R equi serum antibody titers were determined by enzyme-linked immunosorbant assay (ELISA) after the immunization of pregnant mares using two different antigens, APTX and the commercial vaccine. There was no difference in antibody production between the two breeds. Significant increase in R. equi antibody titers was observed in mares after vaccination (p<0.01), reaching a peak at foaling. Afterward, titers tended to decrease for up to 60 days after birth (dab) and then remained constant until 150 dab. Significant antibody transfer to the vaccinated mares newborn foal occurred through the colostrum. A slight reduction in antibody titer was observed at 60 dab, after which titers remained constant for up to 150 dab. The commercial antigen detected significantly higher antibody titers than did APTX (p<0.01).(AU)


Assuntos
Animais , Anticorpos/imunologia , Cavalos/classificação , Vacinas/imunologia , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Colostro
19.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-200247

Resumo

Neospora caninum, agente etiológico da neosporose, é um dos principais responsáveis por abortos em rebanhos bovinos, causando prejuízos econômicos para a agropecuária. Sendo assim, métodos de controle e diagnóstico devem ser aplicados para reduzir a disseminação do patógeno em propriedades rurais. A vacinação dos rebanhos seria uma alternativa importante, no entanto a falta de vacinas eficazes impede a aplicação deste método de controle. Diversos estudos vêm sendo realizados com o intuito de se obter vacinas mais eficazes. Vacinas recombinantes utilizando proteínas heterólogas são as mais estudas. As proteínas presentes nas roptrias (ROPs), devido a sua importância na infecção celular, formação do vacúolo parasitófago e suas características antigênicas e imunogênicas, são excelentes candidatas a antígeno vacinal. A utilização de lipoproteínas bacterianas tem recebido uma atenção especial como molécula adjuvante carreadora devido às suas propriedades imunomoduladoras. A lipoproteína Oprl de Pseudomonas aeruginosa possui a capacidade de modular a resposta imune para uma via Th1. Esta capacidade imunomoduladora quando associada a diferentes antígenos pode modular a resposta mista entre as vias Th1 e Th2. O presente estudo teve como objetivo clonar e expressar a região da NcROP2, descrita entre os aminoácidos 191 e 359, fusionada a OprI, resultando na quimera rROP2/OprI em Escherichia coli e caracterizá-la quanto a sua antigenicidade através da técnica de Western blot. A proteína recombinante produzida em Escherichia coli Rosetta (DE3) PlysS, apresentou um tamanho esperado de 50kDa. Sendo purificada e caracterizada por anticorpos monoclonais anti-histidina e sua antigenicidade reconhecida por soro de animais naturalmente infectados por N. caninum. O reconhecimento da quimera rROP2/OprI por anticorpos anti-N. caninum, revela a existência de determinantes antigênicos comuns entre a proteína recombinante e a forma nativa, sugerindo o seu uso para o desenvolvimento de uma vacina recombinante.


Neospora caninum, etiologic agent of neosporosis, is one of the main responsible for abortion in cattle herds, causing economic losses to Cattle-raising. Thus, control methods and diagnosis should be applied to reduce the spread of the pathogen among farms. Vaccination of cattle would be an important alternative; however the lack of effective vaccines prevents the application of this control method. Several studies have been conducted with the aim of develop more effective vaccines. Vaccines using recombinant heterologous proteins are the most studied. The proteins present in rhoptries (ROPs), due to its importance in cell infection, parasitófago vacuole formation and its antigenic and immunogenic characteristics, became excellent candidates for vaccine antigen. The use of bacterial lipoproteins has received particular attention as an adjuvant carrier molecule due to its immunomodulatory properties.The Pseudomonas aeruginosa Oprl lipoprotein has the ability to modulate the immune response into a Th1 pathway. This immunomodulatory capacity when associated with different antigens can modulate the mixed response between Th1 and Th2 pathways. This study aimed to clone and express the region of NcROP2 described between amino acids 191 and 359, fused OprI, producing the chimera rROP2/OprI in Escherichia coli and to characterize it its antigenicity by Western blot. Recombinant protein produced in E. coli Rosetta (DE3) pLysS, showed an expected size of ~50 kDa. The protein was purified and characterized by anti-histidine monoclonal antibodies and their antigenicity recognized by sera from animals naturally infected by N. caninum. The chimera rROP2/OprI was recognized by antibodies anti-N. caninum reviling common antigenic determinants of the recombinant protein and the its native form, suggesting its use for developing a recombinant vaccine.

20.
Braz. j. vet. res. anim. sci ; 42(1): 5-11, 2005. tab
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-5281

Resumo

Foram vacinados contra a raiva, dois grupos de macacos-pregos adultos, com a vacina inativada preparada em cérebros de camundongos lactentes, administrada pela via intramuscular, na Fundação Parque Zoológico de São Paulo. Os animais em momento algum haviam sido imunizados contra a raiva. O grupo I consistia de nove animais, que receberam três doses de 1,0 mL nos dias 0, 30 e uma dose de reforço aos 210 dias, e o grupo II continha 10 animais que receberam duas doses de 1,0 mL no dia 0 e uma dose de reforço aos 210 dias. As amostras de sangue foram colhidas aos 0,30°,60°,90°, 150°, 210°, 240°, 300° e 365° dias, e os anticorpos neutralizantes titulados pela técnica simplificada da inibição de focos fluorescentes. A vacina induziu uma resposta imune de curta duração com títulos de anticorpos neutralizantes acima de 0.5 UI/ mL em ambos os grupos; entretanto a resposta imune persistiu por apenas 54,9 mais ou menos 57,0 e 36,1 mais ou menos 60,2 dias nos Grupos I e II respectivamente após a primo vacinação, e, por apenas 62,6 mais ou menos 74,0 e 86,4 mais ou menos 61,5 dias nos Grupos I e II respectivamente após o reforço. Não houve diferença estatística significante entre os grupos estudados (p > 0,05).(AU)


Assuntos
Animais , Vacina Antirrábica/administração & dosagem , Raiva/induzido quimicamente , Antígenos de Histocompatibilidade Classe II/administração & dosagem , Anticorpos/isolamento & purificação , Haplorrinos/sangue
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