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1.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-203454

Resumo

Membro da família Herpesviridae, subfamília Alphaherpesvirinae, gênero Varicellovirus, herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV1) tem sido associado a diferentes condições clínicas em bovinos (doenças respiratórias, genitais e falhas reprodutivas). Não existe um procedimento padrão para medidas de controle e profilaxia das infecções causadas por herpesvírus. Uma abordagem alternativa para seleção de novos antígenos vacinais ou para diagnóstico é a seleção de mimetopos recombinantes por meio da sua interação com anticorpos específicos. Foi realizado um experimento de phage display utilizando uma biblioteca de peptídeos randômicos e lineares composta de 12 resíduos de aminoácidos fusionada à pIII de fagos M13, contra IgGs específicas para o BoHV1, purificadas em coluna de cromatografia por afinidade, a partir de bovinos soropositivos. Foram realizados três ciclos de seleção e amplificação para o enriquecimento dos alvos ligantes às proteínas totais de BoHV1. A reatividade dos clones selecionados foi confirmada por ELISA, demonstrando a eficiência da seleção a partir dos anticorpos específicos. Dentre os 27 clones selecionados por phage-display e biopanning, três apresentaram os melhores resultados no ensaio imunoezimático. Um destes, o E, apresentou potencial antigênico na detecção de anticorpos para o diagnostico sorológico do BoHV1. Nos testes de imunização em coelhos, os peptídeos (B, C e E) não induziram a produção de anticorpos soroneutralizantes pelo sistema imune dos animais testados. A utilização de peptídeos como um imunógeno a base de epitopo não apresentou resultados satisfatórios com indução de anticorpos soroneutralizantes do BoHV1. A análise in silico do dodecapeptídeo 1 DRALYGPTVIDH 12 possibilitou a identificação de um novo epitopo descontínuo na glicoproteína B de envelope (Env gB) do herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV1). Há um curto motivo (338 YKRD 341) dentro de uma região do gene Env gB do BoHV1, com alta similaridade com os motivos compartilhados pelo dodecapeptídio da região N-terminal (5YxARD1) da gB e do HSV-1 (326YARD329), em que o resíduo 328Arg é descrito como um alvo para anticorpos neutralizantes. Concluindo, além da caracterização de um sítio de ligação ao anticorpo na Env gB (BoHV1), demonstramos que o peptídeo expresso pelo fago tem potencial para ser usado como reagente para o diagnóstico virológico por ensaio ELISA-fago, que discrimina amostras de soro positivas e negativas para o BoHV1.


Member of the Herpesviridae family, subfamily Alphaherpesvirinae, gender Varicellovirus, bovine herpesvirus type 1 (BoHV1) has been associated with different clinical conditions in cattle (respiratory and genital/reproductive diseases). There is no standard procedure to control measures and prophylaxis of infections caused by herpesviruses. An alternative approach for the selection of new vaccine or diagnostic antigens is the selection of recombinant mimetopes through their interaction with specific antibodies. We realized a phage display experiment using a linear random peptide library that consists of 12 amino acid residues fused to the III of M13 protein phage against specific BoHV1 IgGs, purified by column chromatography by affinity, from seropositive cattles. Three cycles of selection and amplification for enrichment of target ligands to total BoHV1 proteins were performed. The reactivity of selected clones was confirmed by ELISA, demonstrating the efficiency of selection from the specific antibodies. Out of the 27 clones selected by phage-display and biopanning, three presented the good results in ELISA assay, and the E, showed to be potential antigen for antibodies detection for the serological diagnosis of BoHV1. In immunization tests on rabbits, the obtained peptides (B, C and E) did not induce detectable serum neutralizing antibodies in tested animals. The use of peptides as an immunogen based epitope did not show satisfactory results. The in silico analysis of the dodecapeptide 1DRALYGPTVIDH12 enabled the identification of a new discontinuous epitope on the envelope glycoprotein B (gB Env) of bovine herpesvirus type 1 (BoHV1). There is a short motif (338YKRD341) within a region of the env gB BoHV1 with high similarity to motifs shared by dodecapeptide the N-terminal region (5YxARD1) of gB and HSV-1 (326YARD329), wherein the 328Arg residue is described to be a neutralizing antibody target. Besides the characterization of an antibody-binding site of the BoHV-1 Env gB, we have demonstrated that the phage-fused peptide has potential use as a reagent for virus diagnosis by phage-ELISA assay, discriminating BoHV-1 positive serum samples from negative ones.

2.
Botucatu; s.n; 12/04/2010. 145 p.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-4631

Resumo

Bezerros nascidos de vacas revacinadas contra raiva no terço final de gestação foram vacinados aos dois, quatro e seis meses de idade e revacinados 30 dias após. Os títulos de anticorpos (Ac) foram mensurados nas mães e em seus descendentes 48 horas após o parto. Os bezerros foram separados em quatro lotes com dez animais, sendo representados por bezerros não vacinados, vacinados com dois meses, quatro meses e seis meses de idade. O título de Ac antirrábicos nos bezerros dos diferentes grupos foi avaliado mensalmente e 15 dias pós vacinação e revacinação até completarem 12 meses de vida. Todas as vacas apresentaram titulo de anticorpos antirrábicos soroneutralizantes (AcSN) superiores a 0,5UI/mL 48 horas após o parto. Anticorpos transferidos pelo colostro com títulos semelhantes ao materno foram observados em todos os bezerros estudados 48 horas após o nascimento. Títulos de AcSN superiores a 0,5UI/mL se mantiveram até o 5º mês nos bezerros vacinados aos dois meses sendo que nos demais lotes houve queda nos títulos a partir do 3º mês de vida apresentando um período de desproteção decorrente de queda de anticorpos colostrais superior ao grupo vacinado aos dois meses de idade. Nenhum dos grupos de bezerros estudados apresentou resposta sorológica satisfatória a primo vacinação, porém, todos apresentaram resposta adequada após a revacinação. O estudo demonstrou que é recomendável a vacinação antirrábica em bezerros aos dois meses de idade independentemente do estado vacinal materno seguida de revacinação 30 dias após, e ao completarem 12 meses de vida


Calves born from cows revaccinated against rabies in the final third of pregnancy were vaccinated at two, four and six months of age and revaccinated 30 days later. Seraneutralizing antibody titers (AcSN) against rabies were measured in mothers and their calves 48 hours after delivery. The calves were separated into four groups of 10 animals, represented by non-vaccinated and vaccinated calves with two months, four months and six months of age. The AcSN titers was evaluated monthly and 15 days after vaccination and revaccination until 12 months of life in each group. All cows had AcSN greater than 0,5 UI/mL 48 hours after delivery. Antibodies trasnferred by colostrum with similar titers were observed in all calves studied 48 hours after birth. AcSN titers higher than 0,5UI/mL remained to the 5th month in calves vaccinated at two month of age in contrast to the others groups that presented decrease of AcSN begining at 3th month of age until 30 days after first vaccination representing a longer period of lack of protection comparatively to the group vaccinated at two month of age. Absence of satisfatory antibody response was observed in all groups after the first vaccination, however, all calves had an adequate response after revaccination. The study demonstrated that antirabies vaccination can be recommended in calves at two months of age regardless of vaccination status of mothers being mandatory the revaccination 30 days after and at 12 months of life

3.
Braz. j. vet. res. anim. sci ; 24(1): 35-40, 1987.
Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-727290

Resumo

Antibody against virus-infection-associated (VIA) antigen and neutralizing serum antibody to foot-and-mouth disease virus were studied in 32 non vaccinated Indian buffalo calves. Antibody levels against VIA antigen were detected by double immunodifusion in 76.5% of the animals at 3 + ½, 30% at 4 + ½ and 6.2% at 5 + ½ months of age. Antibody against VIA antigen was no longer detectable at 7 + ½, 8 + ½ and 9 + ½ months of age. Neutralizing serum antibody levels were studied in 12 of 32 animals. At 3 = ½ months of age neutralizing serum antibody for O1, A24, and C3 virus were found respectively in 83.3%m 83.3% ans 65.6% of samples. At 5 + ½ months of age neutralizing serum antibody was present against the three types only in 20% of the animals and was not detected at 7 + ½ months of age. Twenty one days after the outbreak in cattle when the buffalo calves were 12 + ½ months old antibody against VIA antigen was again detected in 20 of 32 (62.5%) of the animals. Neutralizing serum antibody was found in up to 63.3% of the animals against type A and 16.6% against type O1 and C3.


Anticorpos anti-antigeno VIA e anticorpos soroneutralizantes foram estudados em 32 bezerros búfalos indianos não vacinados, a partir de 3 + ½ meses de idade até 1 ano. Esses anticorpos foram detectados até os 5 = ½ meses de idade dos animais, até sofrerem infecção natural do vírus da febre aftosa, o que ocorreu aos 12 + ½ meses de idade. O significados destes achados em relação a susceptibilidade dos bubalinos a essa doença é discutido.

4.
Braz. j. vet. res. anim. sci ; 24(1): 35-40, 1987.
Artigo em Português | LILACS-Express | VETINDEX | ID: biblio-1470370

Resumo

Antibody against virus-infection-associated (VIA) antigen and neutralizing serum antibody to foot-and-mouth disease virus were studied in 32 non vaccinated Indian buffalo calves. Antibody levels against VIA antigen were detected by double immunodifusion in 76.5% of the animals at 3 + ½, 30% at 4 + ½ and 6.2% at 5 + ½ months of age. Antibody against VIA antigen was no longer detectable at 7 + ½, 8 + ½ and 9 + ½ months of age. Neutralizing serum antibody levels were studied in 12 of 32 animals. At 3 = ½ months of age neutralizing serum antibody for O1, A24, and C3 virus were found respectively in 83.3%m 83.3% ans 65.6% of samples. At 5 + ½ months of age neutralizing serum antibody was present against the three types only in 20% of the animals and was not detected at 7 + ½ months of age. Twenty one days after the outbreak in cattle when the buffalo calves were 12 + ½ months old antibody against VIA antigen was again detected in 20 of 32 (62.5%) of the animals. Neutralizing serum antibody was found in up to 63.3% of the animals against type A and 16.6% against type O1 and C3.


Anticorpos anti-antigeno VIA e anticorpos soroneutralizantes foram estudados em 32 bezerros búfalos indianos não vacinados, a partir de 3 + ½ meses de idade até 1 ano. Esses anticorpos foram detectados até os 5 = ½ meses de idade dos animais, até sofrerem infecção natural do vírus da febre aftosa, o que ocorreu aos 12 + ½ meses de idade. O significados destes achados em relação a susceptibilidade dos bubalinos a essa doença é discutido.

5.
Braz. j. vet. res. anim. sci ; 29(supl): 384-389, 1992.
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-710739

Resumo

The O1Campos strain of foot and mouth disease virus (FMDV) used as inducing agent in the pleurisy model was able to trigger a pro-inflammatory effect on normal and immune guinea pigs. The proinflammatory activity which was detected at two times of the pleurisy (24 and 48 hours) on normal guinea pigs was characterized only by mononuclear (MN) cell influx, during the first interval of the reaction and by edematogenic effect, MN and polimorphonuclcar (PMN) leucocyte migration, at the last time of the reaction. The inflammatory reaction profiles recorded on immune guinea pigs (vaccinated with anti-O1Campos oil adjuvanted vaccine), both after 7 and 30 days post vaccination (pv) have showed, in both interval, lower intensities than that observed in normal guinea pigs, although in the 7 days PV guinea pigs the accumulations of total leucocytes and PMN were similar to that displayed by normal animals, after 48 hours of the reaction. Besides, on thirty days PV guinea pigs the FMDV induced a significant increase in volume of exudate and MN cell infiltration, after 24 hours, and all of the inflammatory parameters values dropped to normal levels, during the second interval of the reaction. It was found a negative association between the increase in serum neutralizing antibody titer, from 7 to 30 days PV and the intensities of pleural inflammatory parameters on the immun


A estirpe O1Campos do vírus da febre aftosa (VFA) usada como agente indutor do teste de pleurisia foi capaz de desencadear um efeito pró-inflamatório em cobaias normais e imunes. A atividade pró-inflamatória do VFA, detectada em dois intervalos de pleurisia (24 e 48 horas) foi demonstrada, somente por quimiotaxia de leucócitos mononucleares (MN), no primeiro intervalo e por efeito edematogênico, migração de MN e polimorfonucleares (PMN), no último intervalo de reação. Os perfis de reação inflamatória induzida pelo VFA em cobaias imunes (imunizadas com vacinas oleosas anti-VFAO1Campos), aos 7 e aos 30 dias pós-vacinação (PV) apresentaram imensidades mais baixas do que as observadas em cobaias normais, embora nas cobaias com 7 dias de vacinação a quimiotaxia de leucócitos totais e de PMN tenha sido similar àquela encontrada nos animais normais, no intervalo de 48 horas de reação. Ademais, nas cobaias com 30 dias PV, o VFA induziu um aumento significante no volume de exsudato e na infiltração de MN, no intervalo de 24 horas, sendo que os valores de todos os parâmetros do exsudato inflamatório caíram a níveis normais, no segundo intervalo de reação. Nas cobaias imunes foi observada uma associação negativa entre o aumento no título de anticorpos soro-neutralizantes, de 7 para 30 dias PV e as intensidades dos parâmetros inflamatórios pleurais. O teste de pleurisia revelou-se um proce

6.
Braz. j. vet. res. anim. sci ; 37(6): 497-500, 2000.
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-710405

Resumo

The presence of antibodies against BHV-1 was evaluated in young bovines from fifteen different counties distributed along North, South and Central regions of the state of Bahia. Bovines with age ranged from 1 to 4 years old, non-vaccinated against BHV-1 and without diagnostic of BHV-1 infection were chosen for blood collection. A total of 558 serum samples were collected equivalent to 10% of the population in each farm. The sera were submitted to ELISA (HerdCheck-IDDEX) and Microserum neutralization (MSN) tests. The MSN was performed in monolayers of MDBK cells in microplates using Los Angeles BHV-1 strain. The results of serum samples by ELISA showed that 56% (314/558) were positive and 44% (244/558) were negative. The sera assayed by MSN showed that 48% (269/558) were negative and 52% (289/558) were positive. These positive sera demonstrated that 54% had serumneutralization titer between 4-16, 35% between 32-64 and 11% >; or = 64. Our results suggest that the virus is circulating actively in herds. Furthermore, the high diffusion of the BHV-1 in young bovines could represent a constant source of viral infection in the herd.


A presença de anticorpos contra Herpesvírus Bovino tipo 1 (HBV-1) foi avaliada em bovinos jovens provenientes de quinze municípios diferentes, distribuídos nas regiões Norte, Sul e Central do estado da Bahia. Foram coletadas amostras de sangue de bovinos de 1 a 4 anos de idade, não vacinados contra HBV-1 e sem prévio diagnóstico de infecção pelo vírus HBV-1. O total de amostras correspondeu a 558 soros, equivalente a 10% da população bovina de cada fazenda. Os 558 soros foram submetidos à técnica de Microssoroneutralização (MSN) em microplacas, utilizando-se monocamadas de células MDBK e a cepa de HBV-1 Los Angeles, e ao teste de ELISA comercialmente adquirido: HerdCheck-IDDEX. Os resultados da amostragem feito pelo teste de ELISA mostraram que 56% (314/558) dos soros foram positivos e 44% (244/558), negativos. A técnica de MSN mostrou que 48% (269/558) dos soros foram negativos e 52% (289/558) foram positivos. Destes soros positivos, 54% tiveram títulos soroneutralizantes entre 4-16, 35% entre 32-64, e 11% >; ou = 64. Os resultados sugerem que o HBV-1 esteja circulando ativamente na população bovina jovem. Por outra parte, a alta difusão do vírus em animais jovens representaria uma fonte contínua de infecção viral para o rebanho.

7.
Braz. j. vet. res. anim. sci ; 40(6): 424-430, 2003. tab
Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-595

Resumo

Nesta pesquisa analisamos a presença do vírus da Diarréia viral bovina em bovinos jovens através de um estudo sorológico e isolamento viral. A técnica de seroneutralização detectou de um total de 220 bovinos, 123 (56 por cento) animais sorologicamente positivos. A distribuição dos títulos de anticorpos soroneutralizantes(TSN), mostrou que 82 por cento das amostras apresentaram TSN de até 512, enquanto que 18 por cento apresentaram TSN maiores que 512. O isolamento viral a partir da fração leucocitaria desses bovinos, confirmou a presença do vírus em quatro bovinos aparentemente saudáveis e de um bezerro com sintomatologia respiratória. Os cinco isolados virais não apresentaram efeito citopático nos cultivos celulares.(AU)


Assuntos
Animais , Masculino , Feminino , Sorologia , Bovinos , Vírus da Diarreia Viral Bovina
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