Resumo

Nanopartículas de prata (AgNPs) destacam-se nas áreas da medicina e da indústria por suas propriedades antibacterianas, antifúngicas e antivirais. O alto grau de comercialização aumenta a preocupação quanto a sua potencial toxicidade sobre os diversos sistemas incluindo o reprodutivo. Este trabalho teve como objetivo avaliar a toxicidade reprodutiva das AgNPs sobre os parâmetros selecionados numa curva de dose-resposta, onde a dose mais alta correspondeu à LOAEL (menor dose com efeito adverso observado) previamente estabelecida (15 g/kg) em ratos Wistar pré-púberes como modelo experimental. Avaliou-se a produção espermática, as reservas espermáticas, o tempo de trânsito espermático, a funcionalidade espermática (integridades acrossômica e da membrana plasmática, atividade mitocondrial e morfologia espermática). A expressão de mRNA nos testículos foi avaliada por PCR quantitativo em tempo real a partir da transcrição reversa (RT-qPCR) para os genes do receptor de andrógenos (Ar), receptor de estradiol (Esr1), receptor de estradiol (Esr2), receptor de estrógeno 1 acoplado a proteína G (Gper) e aromatase (Cyp19a1). Foram dosadas as concentrações séricas de testosterona e estradiol. Os resultados foram analisados estatisticamente pela análise de variância seguida do pós-teste de Dunnet, considerando-se diferenças estatísticas quando p<0,05. A exposição às AgNPs durante a fase pré-púbere resultou na alteração da expressão de genes Ar, Gper e Esr1 relacionados ao controle da espermatogênese, bem como nos níveis de hormônios, reserva, tempo de trânsito e funcionalidade espermáticas. Pode-se concluir que as AgNPs possuem efeitos dose-resposta não lineares agindo como um potencial desregulador endócrino químico e causando decréscimo na fertilidade masculina.

Silver nanoparticles (AgNPs) stand out in the medicine and industry areas by their antibacterial, antifungical and antiviral properties. The high degree of commercialization increases the concerns about potential toxicity in various systems including the reproductive tract. This study aimed to evaluate the reproductive toxicity of AgNPs in the selected parameters in a dose response curve on which the higher dose corresponded to LOAEL (lowest observed adverse effect level) previously established (15 g/kg) in prepubertal Wistar rats as experimental model. It was evaluated the sperm production, the sperm reserves, the sperm transit time, the sperm functionality (acrosome and plasma membrane integrities, mitochondrial activity and sperm morphology). The mRNA expression in the testis was evaluated by reverse transcription followed by real-time polymerase chain reaction (RTqPCR) for androgen receptor (Ar), estradiol receptor (Esr1), estradiol receptor (Esr2), estrogen receptor 1 coupled to the G-protein (Gper) and aromatase (Cyp19a1) genes. It was measured the serum concentrations of testosterone and estradiol. The results were statistically analyzed by analysis of variance followed by Dunnets post-hoc test considering statistical differences when p<0,05. The exposure to AgNPs during the prepubertal period resulted in altered expression of the genes Ar, Gper and Esr1 related to the spermatogenesis control, and in the hormones levels. The sperm parameters were also altered. It is possible to concluded that AgNPs has non-linear dose-response effects acting as a potential endocrine disrupting chemical and causing reduction in male fertility.

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The correct identification of Candida species is of great importance, as it presents prognostic and therapeutical significance, allowing an early and appropriate antifungical therapy. The purpose of this study was to identify isolates of Candida spp. from oral mucosa of 38 patients with oral candidosis evaluated in 2004 by phenotypic methods and PCR, discriminating C. albicans from the other Candida species. The tests used for phenotypic analysis were germ-tube and chlamydoconidia production, culture in CHROMAgarTM Candida, carbohydrate assimilation test, growth at 45ºC and culture in Tween 80 agar. Genotypic confirmation was performed by PCR. Phenotypic tests showed that 63.2 percent strains formed germ-tubes, 73.7 percent produced chlamydoconidia, and 63.2 percent showed green colonies in chromogenic medium, presumptively indicating C. albicans or C. dubliniensis. The carbohydrate assimilation test confirmed these results. A total of 21 percent strains were identified as C. krusei and 13.2 percent were indicative of C. tropicalis. Of these later strains, three produced chlamydoconidia. The association of other phenotypic tests with culture in Tween 80 agar identified 95.8 percent of strains as C. albicans and 4.2 percent as C. dubliniensis. All 24 strains indicative of C. albicans and C. dubliniensis were confirmed by PCR as C. albicans.

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ABSTRACT There have been various recent studies concerning the use of medicinal extracts of medicinal plants for the control of phytopathogens. The present study was therefore aimed to evaluate, in vitro, fungitoxicity of aqueous crude extracts (ACEs) of Achillea millefolium, Artemisia camphorata, Cymbopogon citratus and Rosmarinus officinalis against Cladosporium fulvum, and the protective effect of these extracts in tomato plants under greenhouse conditions. To evaluate antifungical activity, ACEs were incorporated to PDA (potato-dextrose-agar), with observation of inhibition of mycelial growth, sporulation and spores germination. The plant protection was verified by preventive spraying 72 hours before inoculation of ACEs, in 10% and 20% concentration, in the first pair of leaves. The severity was evaluated 20 days after inoculation, which occurred in both the first and second pair of leaves. Theactivity of the plant-defense enzyme peroxidase was evaluated spectrophotometrically in leaves 72 hours after treatments. It was verified that ACEs inhibit the mycelial growth and had significant reduction in sporulation and spore germination, mainly by ACEs of A. camphorata and R. officinalis, in concentration of 20% and 40%, which reduced the sporulation 85.72% and 93.49%, respectively. In relation to the in-vivo treatments there was observed a reduction in the number of lesions along with a possible resistance induction, mainly to A. camphorata and R. officinalis extracts. The peroxidase activity had no significant increment in relation to the control treatment.

RESUMO Atualmente, tem-se estudado a utilização de extratos de plantas medicinais no controle de fitopatógenos. Assim, este trabalho objetivou avaliar a fungitoxidade in vitrodos extratos brutos aquosos (EBAs) de Achillea millefolium, Artemisia camphorata, Cymbopogon citratus e Rosmarinus officinalis contra Cladosporium fulvum e o efeito protetor destes extratos para a cladosporiose em plantas de tomateiro em casa-de-vegetação. Para avaliar a atividade antifúngica, os EBAs foram incorporados ao meio de cultura BDA (batata-dextrose e ágar) e avaliada a inibição do crescimento micelial, a esporulação e a germinação de esporos. O efeito protetor em plantas foi verificado através da pulverização preventiva dos EBAs, 72h antes da inoculação, nas concentrações de 10% e 20%, no primeiro par de folhas. A severidade da doença foi verificada 20 dias após a inoculação, que ocorreu no 1 o e 2o par de folhas. A atividade ativação da enzima de defesa peroxidase foi avaliada por método espectrofotométrico direto em folhas coletadas 72h após a inoculação. Verificou-se que os EBAs inibiram o crescimento micelial e tiveram efeitos significativos na redução da esporulação e da germinação de esporos, principalmente os EBAs de A. camphorata e R. officinalis, que nas concentrações de 20% e 40% reduziram 85,72% e 93,49% a esporulação, respectivamente. Verificou-se, in vivo, uma redução no número de lesões e uma possível indução resistência dos EBAs, principalmente para A. camphorata e R. officinalis. A atividade de peroxidase não teve incrementos significativos em relação à testemunha, no tempo analisado.

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This research had the objective to evaluate microbiological and physical-chemical parameters of deactivated soybean grain (Glycine max L.) treated with three different dosages (2, 4 and 6L t-1) of organic acids and their salts mixture (AOS), as an antifungical additive. The assay had a duration of 90 days, where executed fungi count (UFC g-1), fungi specie identification, humidity (U), activity of water (AA), peroxide value (IP) and acidity value (IA). The analyses were carried out in triplicate, in intervals of 15 days among analysis, until 60th day of evaluation and, at the 90th day of evaluation. There were increases in the UFC g-1 in dosages of 2 and 4L t-1, as well a change in fungi species found in these treatment at each evaluation, distinguished of low UFC g-1 and fungi species in dosage of 6L t-1. The values of U and AA were above of recommended patterns of 14% and 0.70, respectively for all treatments and evaluations. The IP increased significative from 45th day of evaluation in control and from 60th day in other treatments. The IA had no significative variation during the period of evaluation. The dosage of 6L t-1 was efficient in the antifungical protection of this raw material.

Este trabalho teve por objetivo avaliar os parâmetros microbiológicos e físico-químicos do grão de soja (Glycine max L.) desativado, tratado com três diferentes dosagens (2, 4 e 6L t-1) de uma mistura de ácidos orgânicos e seus sais (AOS), com a função de aditivo antifúngico. O ensaio teve uma duração de 90 dias, em que foram feitas a contagem de bolores e leveduras (UFC g-1), e a identificação dos gêneros fúngicos, da umidade (U), da atividade de água (AA), do índice de peróxido (IP) e do índice de acidez (IA). As análises foram realizadas em triplicata, em intervalos de 15 dias entre cada análise, até o 60o dia de avaliação e depois no 90o dia do experimento. Verificou-se aumento na UFC g-1 nas doses de 2 e 4L t-1, bem como mudança nos gêneros fúngicos encontradas nestes tratamentos a cada avaliação, diferentemente da baixa UFC g-1 e da identificação de gêneros na dose de 6L t-1. Os valores de U e AA mantiveram-se acima dos padrões recomendados de 14% e 0,70, respectivamente em todos os tratamentos e avaliações. O IP aumentou significativamente a partir do 45o dia de avaliação no controle e a partir do 60o dia nos demais tratamentos. O IA não variou significativamente durante o período de avaliação. Conclui-se que a dosagem de 6L t-1 foi eficiente na proteção antifúngica desta matéria-prima.

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(O objetivo do trabalho foi avaliar a atividade como antifúngico, antibacteriano e indutor da produção de fitoalexinas dos hidrolatos de Helietta apiculata (canela-de-veado) (HA), Conyza canadensis (buva) (CC) e Cymbopogon nardus (citronela) (CN) nas concentrações de 1, 5, 10, 15, 20 e 25%, buscando seu uso no controle alternativo de doenças em plantas. Para o ensaio de fitoalexinas foram utilizados mesocótilos estiolados de sorgo. Para o efeito antibacteriano foi avaliado o crescimento da bactéria Xanthomonas campestris pv. campestris em meio caldo nutriente suplementado com os tratamentos, tendo como testemunha mistura de antibióticos (22,5 mg/L de oxitetraciclina + 225 mg/L de estreptomicina). O efeito antifúngico foi avaliado através da mensuração do crescimento vegetativo, esporulação, germinação de esporos e desenvolvimento do tubo germinativo de Alternaria brassicae, sendo o fungicida azoxystrobin (0,08 g i.a./L) usado como controle. Foi observado acréscimo na síntese de fitoalexinas com o aumento na concentração dos hidrolatos, sendo o melhor resultado obtido com CN, o qual promoveu aumento de cerca de 4,3 vezes mais, seguido de HA (2,5 vezes) e CC (2,1 vezes), em relação a testemunha água. Resultados semelhantes foram obtidos para crescimento bacteriano com os seguintes resultados de inibição (em %) no desenvolvimento da bactéria: CN: 29,8, HA: 14,9, CC: 14,6 e antibióticos: 97,7. Com relação à ação antifúngica foi observada inibição do desenvolvimento dos tubos germinativos, sendo que os hidrolatos de CC e HA inibiram 69,2 e 56,2%, respectivamente, resultado semelhante ao fungicida. O hidrolato de CN não apresentou efeito antifúngico. Estes resultados indicam a presença de compostos indutores de fitoalexinas, antibacterianos e antifúngicos nesses hidrolatos, porém em baixas concentrações.

The aim of this work was to evaluate the antifungical, antibacterial and phytoalexins elicitors activities ofhydrolates, for using in the alternative control of plant diseases. The hydrolates of Helietta apiculata(HA), Conyza canadensis (CC) and Cymbopogon nardus (CN) were used in the concentrations of 1, 5,10, 15, 20 and 25%. In the phytoalexins assay, sorghum etiolated mesocotyls were used. The antibacterialeffect was evaluated on the growth of the bacterium Xanthomonas campestris pv. campestris in liquidnutrient medium and antibiotic (oxytetraciclin 22.5 mg/L + streptomycin 225 mg/L) was used as controltreatment. The antifungical effect was evaluated on the micelial growth, esporulation, conidia germinationand development of germinative tubes of Alternaria brassicae. The fungicide azoxystrobin (0.08 g a.i./L) was used as control treatment. There was increment in the phytoalexins synthesis with the increase inhydrolates concentration. The better result was obtained with CN that promoted increase 4.3 times largerin relation to the value of the control treatment with water, followed by HA (2.5 times) and CC (2.1 times).Similar results were obtained to the antibacterial activity with the following inhibition results (%) in the development of the bacterium: CN: 29.8, HA: 14.9, CC: 14.6 and antibiotic: 97.7. The main antifungicaleffect was observed on the development of the germinative tubes. Hydrolates of CC and HA showedinhibition of up to 69.2 and 56.2%, respectively, being similar to the fungicide azoxystrobin. The hydrolateof CN did not show antifungical effect. These results indicate the presence of phytoalexins elicitors, and antibacterial and antifungical compounds in those hydrolates, however in low concentrations

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The antifungal drugs are classified in classic and current chemical agents and in antibiotics. The chemists classic agents are those medicines that present in a general way reduced action spectrum against fungi, having a fungistatic effect in an indirect way when modifying the local conditions, as for instance the iodine, acids fat and derived, acid salicilic, tolnaftate and tolciclate. The current chemical agents are represented by imidazole and triazole, flucytosine and allylamines and the antibiotics represented by the polyene (amphotericin B, nystatin and natamycin) and the griseofulvin. The discretion of each antifungal drug will be presented in the work.

As drogas antifúngicas são classificadas em agentes químicos clássicos e atuais e em antibióticos. Os agentes químicos clássicos são aqueles medicamentos que apresentam de maneira geral espectro de ação reduzido contra fungos, atuando como fungistático de modo indireto ao modificar as condições locais, como por exemplo o iodo, os ácidos graxos e derivados, ácido salicílico, tolnaftato e tolciclato. Os agentes químicos atuais são representados pelos imidazóis e triazóis, flucitosina e alilaminas e os antibióticos representados pelos poliênicos (anfotericina B, nistatina e natamicina) e a griseofulvina. A descrição de cada antifúngico considerado será apresentada no trabalho.

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ABSTRACT Polymnia sonchifolia is used popularly in the control of diabetes mellitus and also should contain some antifungical and pesticidal compounds. Thus the ethanolic extract (EE) from P. sonchifolia leaves and its hexanic (HE), chloroformic (CL), ethyl acetate (EA) and methanolic (ME) fractions were tested to investigate the inhibitory activity on growth of Aspergillus flavus and on production of aflatoxin B1 (AFB1) and B2 (AFB2). The cytotoxicity of EE, EA and ME on Vero cells was also performed. Suspensions of A. flavus spores were inoculated into YES medium together with different concentrations of the EE, HE, CL, EA and ME. The aflatoxin B1 and B2 were extracted and analyzed by thin layer chromatography. All the concentrations of EE, EA and ME inhibited the aflatoxin B1 and B2 production and the fungal growth. The HE fraction inhibited the aflatoxin B1 production and the fungal growth at 100µg/mL, and all the concentrations used inhibited the aflatoxin B2 production. The CL fraction did not inhibit the aflatoxin B1 and B2 production and the fungal growth. Polymnia sonchifolia leaves have inhibitory activity in aflatoxin B1 and B2 production and that can be an important step for the development of agents to control aflatoxins production.

RESUMO Polymnia sonchifolia é utilizada popularmente no controle da diabetes mellitus e, também, apresenta componentes com atividade antifungica e pesticida. O extrato etanólico (EE) das folhas e suas frações hexânica (HE), clorofórmica (CL), acetato de etila (EA) e metanólica (ME) foram testados para avaliar a atividade inibitória no crescimento e na produção de aflatoxinas B1 (AFB1) e B2 (AFB2) pelo fungo Aspergillus flavus. A citotoxicidade de EE, EA e ME foi avaliada em células Vero. Suspensões de esporos de A. flavus foram inoculados em meio YES juntamente com diferentes concentrações de EE, HE, CL, EA e ME. As aflatoxinas B1 e B2 foram extraídas e analisadas por cromatografia de camada delgada. Todas as concentrações de EE, EA e ME inibiram a produção de aflatoxinas B1 e B2. A fração HE inibiu a produção de aflatoxina B1 e o crescimento somente na concentração de 100µg/mL, enquanto que a produção de AFB2 foi inibida por todas as concentrações. A fração CL não produziu efeito sobre A. flavus nas concentrações testadas. As folhas de Polymnia sonchifolia possuem substâncias com capacidade de inibir a produção de aflatoxinas B1 e B2, podendo ser utilizada para o desenvolvimento de métodos de controle da produção de aflatoxinas.