Laparoscopic ovum pick-up in spotted paca (Cuniculus pacas) / Aspiração folicular por laparoscopia em paca (Cuniculus pacas)

The aim of this work is study the laparoscopic ovum pick-up (LapOPU) technique in spotted paca, describing surgery details, complications and oocyte recovery rate. Nine healthy adult non-pregnant captive females were used, in a total of 39 procedures. When the surgical plane of anaesthesia was achieved, the females were positioned at 20º Trendelenburg. Three 6mm trocars were placed on right and left inguinal and hypogastric regions. Abdomen was inflated with CO2 and the intra-abdominal pressure was stablished in 10mmHg. Follicular punctures were performed moving the ovaries with atraumatic forceps. For punctures, an 18-gauge 3.5 inch long needle attached to a vacuum system with pressure not exceeding 65mmHg was used. Oocytes were recovered into 50mL centrifuge tubes with media composed of PBS supplemented with 10 IU/mL of heparin and kept at 36°C. R Software was used for statistical analysis. Data normality distribution (Shapiro test) and variances homoscedasticity (Bartlett test) were tested and descriptive statistics (mean±SD) was used to present the results. It was only possible to perform LapOPU in 30 of 39 laparoscopies (76.92%). The surgical total time was 37.34 ± 18.53 minutes. The total number of visualized follicles, aspirated follicles, and retrieved oocytes were 502, 415, and 155, respectively. And the same parameters per animal were: 14.34 ± 12.23, 11.86 ± 10.03, and 4.43 ± 4.69 respectively. Oocyte recovery rate was 32.56 ± 27.32%. In conclusion, caudal positioning of portals with slight triangulation allows good viewing of the abdominal cavity and eases the manipulation of the ovaries. Thus this described LapOPU technique is feasible in spotted paca and easy to perform.(AU)

Objetiva-se, com este trabalho, estudar a técnica de aspiração folicular por videolaparoscopia (LapOPU) em pacas, descrevendo detalhes do procedimento cirúrgico, complicações e taxa de recuperação oocitária. Para isso, foram utilizadas nove fêmeas, saudáveis, adultas, não gestantes e mantidas em cativeiro, totalizando 39 procedimentos. Quandoo plano anestésico cirúrgico foi alcançado, as fêmeas foram posicionadas em Trendelenburg com 20º de angulação. Três trocáteres foram colocados nas regiões inguinais direita e esquerda e hipogástrica. O Abdômen foi insuflado com CO2, e a pressão intra-abdominal foi mantida em 10mmHg. Punções foliculares foram realizadas manipulando-se os ovários com pinças atraumáticas. Para aspirações foliculares, usou-se agulha de 18G com bisel curto acoplado ao sistema de vácuo com pressão não excedendo 65mmHg. Oócitos foram recuperados em tubos de centrifugação de 50mL contendo meio composto de PBS suplementado com 10UI/mL de heparina e mantidos a 36ºC. Usou-se software R para análise estatística. Testaram-se a distribuição normal dos dados (teste de Shapiro) e a homocedasticidade das variâncias (teste de Barlett) e se usaram estatísticas descritivas (média±DP) para apresentar os resultados. Das 39 videolaparoscopias, só foi possível realizar LapOPUem 30 delas (76,92%). O tempo cirúrgico total das LapOPU foi de 37,34 ± 18,53 minutos. Os números totais de folículos visualizados, folículos aspirados e oócitos recuperados foram: 502, 415 e 155, respectivamente. E os mesmos parâmetros por animal foram: 14,34 ± 12,23, 11,86 ± 10,03 e 4,43 ± 4,69, respectivamente. A taxa de recuperação foi de 32,56 ± 27,32%. Assim, conclui-se que o posicionamento caudal de portais, com ligeira triangulação, permite uma boa visualização da cavidade abdominal e facilita a manipulação dos ovários, sendo essa técnica de LapOPU viável em pacas e de fácil execução.(AU)

Laparoscopic ovum pick-up in spotted paca ( Cuniculus pacas ) / Aspiração folicular por laparoscopia em paca (Cuniculus pacas)

The aim of this work is study the laparoscopic ovum pick-up (LapOPU) technique in spotted paca, describing surgery details, complications and oocyte recovery rate. Nine healthy adult non-pregnant captive females were used, in a total of 39 procedures. When the surgical plane of anaesthesia was achieved, the females were positioned at 20º Trendelenburg. Three 6mm trocars were placed on right and left inguinal and hypogastric regions. Abdomen was inflated with CO2 and the intra-abdominal pressure was stablished in 10mmHg. Follicular punctures were performed moving the ovaries with atraumatic forceps. For punctures, an 18-gauge 3.5 inch long needle attached to a vacuum system with pressure not exceeding 65mmHg was used. Oocytes were recovered into 50mL centrifuge tubes with media composed of PBS supplemented with 10 IU/mL of heparin and kept at 36°C. R Software was used for statistical analysis. Data normality distribution (Shapiro test) and variances homoscedasticity (Bartlett test) were tested and descriptive statistics (mean±SD) was used to present the results. It was only possible to perform LapOPU in 30 of 39 laparoscopies (76.92%). The surgical total time was 37.34 ± 18.53 minutes. The total number of visualized follicles, aspirated follicles, and retrieved oocytes were 502, 415, and 155, respectively. And the same parameters per animal were: 14.34 ± 12.23, 11.86 ± 10.03, and 4.43 ± 4.69 respectively. Oocyte recovery rate was 32.56 ± 27.32%. In conclusion, caudal positioning of portals with slight triangulation allows good viewing of the abdominal cavity and eases the manipulation of the ovaries. Thus this described LapOPU technique is feasible in spotted paca and easy to perform.(AU)

Objetiva-se, com este trabalho, estudar a técnica de aspiração folicular por videolaparoscopia (LapOPU) em pacas, descrevendo detalhes do procedimento cirúrgico, complicações e taxa de recuperação oocitária. Para isso, foram utilizadas nove fêmeas, saudáveis, adultas, não gestantes e mantidas em cativeiro, totalizando 39 procedimentos. Quandoo plano anestésico cirúrgico foi alcançado, as fêmeas foram posicionadas em Trendelenburg com 20º de angulação. Três trocáteres foram colocados nas regiões inguinais direita e esquerda e hipogástrica. O Abdômen foi insuflado com CO2, e a pressão intra-abdominal foi mantida em 10mmHg. Punções foliculares foram realizadas manipulando-se os ovários com pinças atraumáticas. Para aspirações foliculares, usou-se agulha de 18G com bisel curto acoplado ao sistema de vácuo com pressão não excedendo 65mmHg. Oócitos foram recuperados em tubos de centrifugação de 50mL contendo meio composto de PBS suplementado com 10UI/mL de heparina e mantidos a 36ºC. Usou-se software R para análise estatística. Testaram-se a distribuição normal dos dados (teste de Shapiro) e a homocedasticidade das variâncias (teste de Barlett) e se usaram estatísticas descritivas (média±DP) para apresentar os resultados. Das 39 videolaparoscopias, só foi possível realizar LapOPUem 30 delas (76,92%). O tempo cirúrgico total das LapOPU foi de 37,34 ± 18,53 minutos. Os números totais de folículos visualizados, folículos aspirados e oócitos recuperados foram: 502, 415 e 155, respectivamente. E os mesmos parâmetros por animal foram: 14,34 ± 12,23, 11,86 ± 10,03 e 4,43 ± 4,69, respectivamente. A taxa de recuperação foi de 32,56 ± 27,32%. Assim, conclui-se que o posicionamento caudal de portais, com ligeira triangulação, permite uma boa visualização da cavidade abdominal e facilita a manipulação dos ovários, sendo essa técnica de LapOPU viável em pacas e de fácil execução.(AU)

AUTOTRANSPLANTE HETEROTÓPICO DE TECIDO OVARIANO EQUINO

O tecido ovariano quando coletado por procedimentos de biópsia permite a realização de diversos estudos com aplicações clínicas no campo da preservação da fertilidade feminina. O objetivo do presente estudo foi avaliar a influência da idade da doadora e dos sítios de transplante intramuscular (IM) e subvulvar (SVU) sobre a qualidade, ativação e densidade folicular em fragmentos de tecido ovariano equino autotransplantados após 3 e 7 dias. Fragmentos de tecido ovariano foram obtidos (n = 8) por meio de biópsia e, em seguida, autotransplantados aleatoriamente nos sítios IM e SVU e recuperados após 3 e 7 dias. Os principais achados foram: (i) a viabilidade e ativação folicular foram menores nos fragmentos transplantados no sítio SVU; (ii) a depleção folicular pós-transplante variou entre animais e não foi influenciada pela idade e; (iii) a presença de estruturas ovarianas (folículos antrais e corpo lúteo) no momento da biópsia tem associação com a densidade folicular nos fragmentos obtidos.

Ovarian tissue samples collected by biopsy pick-up method can be used to perform several studies related to fertility preservation. The aim of this study was to evaluate the effects of donor age and intramuscular (IM) and subvulvar (SVU) sites on the follicular viability, activation, and density in ovarian fragments autotransplanted. Biopsy pick-up was performed in mares (n = 7) and ovarian tissue samples were autotransplanted at IM and SVU sites by 3 or 7 days. In summary, our findings indicate that: (i) follicular viability and activation were lower in the ovarian fragments grafted at SVU site; (ii) the follicular depletion post-graft differed among animals and was not influenced by donor age; and (iii) the area of ovarian structures (antral follicles and corpus luteum) presents in the ovary at biopsy procedure had a positive effect on follicular density.

Equine preantral follicle harvesting, processing, and in vitro culture: the journey has already started

Preantral follicles are of great abundance in mammalian ovaries and the vast majority (>99.9%) never become ovulatory; therefore, the ability to rescue these otherwise wasted follicles seems very aooealing. Considering there are striking similarities in antral follicle dynamics between mares and women, the mare might become a good model to study early (preantral and antral) folliculogenesis in women, with several advantages related to using an animal model. Studies in our laboratory recently validated the use of a transvaginal ultrasound-guided ovarian. Biopsy Pick-Up (BPU) method to harvest preantral follicles using the mare as a model to study early folliculogenesis (Haag et al., 2013a, b, c). This article will review some of the important findings of our recent studies related to the harvesting, processing, and culture of equine preantral follicles and discuss those with the limited information availeble in the literature.

Equine preantral follicle harvesting, processing, and in vitro culture: the journey has already started

Preantral follicles are of great abundance in mammalian ovaries and the vast majority (>99.9%) never become ovulatory; therefore, the ability to rescue these otherwise wasted follicles seems very aooealing. Considering there are striking similarities in antral follicle dynamics between mares and women, the mare might become a good model to study early (preantral and antral) folliculogenesis in women, with several advantages related to using an animal model. Studies in our laboratory recently validated the use of a transvaginal ultrasound-guided ovarian. Biopsy Pick-Up (BPU) method to harvest preantral follicles using the mare as a model to study early folliculogenesis (Haag et al., 2013a, b, c). This article will review some of the important findings of our recent studies related to the harvesting, processing, and culture of equine preantral follicles and discuss those with the limited information availeble in the literature.(AU)

DESENVOLVIMENTO DE TÉCNICA DE BIÓPSIA OVARIANA PARA CAPRINOS (Capra hircus)

Recentemente, o método de biopsy pick-up (BPU) tem sido considerado uma metodologia segura e apropriada para coletar fragmentos ovarianos in vivo de grandes animais (ex., bovinos e equinos). No entanto o uso de BPU para coletar tecido ovariano in vivo em cabras ainda não foi reportado. Os objetivos deste estudo foram: (i) testar diferentes tamanhos de agulha de biópsia para coletar o tecido ovariano in situ usando o método BPU (Experimento 1), e (ii) estudar características do tecido ovariano, como densidade, morfologia, distribuição de classe folicular pré-antral e densidade celular estromal em fragmentos de ovário obtidos in vivo através de um método de BPU laparoscópico (Experimento 2). No Experimento 1, os ovários de cabra (n = 20) foram coletados em um abatedouro e submetidos a BPU in situ. Foram testadas três agulhas (16, 18 e 20G). No Experimento 2, a agulha de biópsia mais eficiente do Experimento1 foi utilizada para realizar a BPU laparoscópica em cabras (n = 8). No Experimento 1, a taxa de recuperação foi maior (P < 0,05; variação de 50 a 62%) com agulhas 16G e 18G do que a agulha 20G (17%). O peso médio de fragmentos de ovário coletados pela agulha 16G foi maior (P < 0,05) do que a 18G e a 20G. No Experimento 2, 62 tentativas de BPU in vivo foram realizadas e 52 fragmentos de ovário foram coletados (taxa de sucesso de 90%). No total, 2.054 folículos pré-antrais foram registrados em 5.882 seções histológicas analisadas. A densidade folicular pré-antral média foi de 28,4 ± 1,3 folículos por cm2. A densidade folicular diferiu (P < 0,05) entre os animais e fragmentos ovarianos no mesmo animal. A densidade média das células do estroma nos fragmentos de ovário foi de 37,1 ± 0,5 células por 2500 m2 e diferiu (P < 0,05) entre os animais. Além disso, a densidade de folículos pré-antrais e a densidade de células do estroma foram associadas (P < 0,001). A porcentagem de folículos morfologicamente normais foi de 70,1 ± 1,2 e diferiu (P < 0,05) entre os animais. A maioria (79%) dos folículos morfologicamente normais foi classificada como folículo primordial e diferiu (P < 0,05) entre os animais e entre os ovários. Em resumo, um método de BPU laparoscópico foi desenvolvido para recuperar tecido ovariano in vivo em cabras com uma taxa de sucesso satisfatória. Além disso, este estudo descreveu pela primeira vez que fragmentos de biópsia de ovários de cabra apresentam alta heterogeneidade na densidade folicular, morfologia folicular, distribuição de classes foliculares e densidade de células estromais.

The biopsy pick-up (BPU) method has been considered a safe technique for collecting ovarian fragments from live animals. However, no studies have been reported on the use of BPU to collect ovarian tissue in vivo in goats. The objectives of this study were: (i) to test different sizes of biopsy needle to collect ovarian tissue in situ using the BPU method (Experiment 1), and (ii) to study characteristics of ovarian tissue such as density, morphology, class distribution preantral follicular and stromal cell density in ovary fragments obtained in vivo using a laparoscopic BPU method (Experiment 2). In Experiment 1, goat ovaries (n = 20) were collected in a slaughterhouse and submitted to BPU in situ. Three needles (16, 18 and 20G) were tested. In Experiment 2, the most efficient biopsy needle from Experiment 1 was used to perform laparoscopic BPU in goats (n = 8). In Experiment 1, the recovery rate was higher (P < 0.05, range 50-62%) with 16G and 18G needles than the 20G needle (17%). The mean weight of ovary fragments collected by the 16G needle was greater (P < 0.05) than the 18G and the 20G needle. In Experiment 2, 62 biopsy attempts were performed and 52 ovarian fragments were collected (90% success rate). Overall, 2,054 preantral follicles were recorded in 5,882 histological sections analyzed. The mean preantral follicular density was 28.4 ± 1.3 follicles per cm2. The follicular density differed (P < 0.05) between the animals and ovarian fragments in the same animal. The mean density of the stromal cells in the ovarian fragments was 37.1 ± 0.5 cells per 2500 m2, and differed (P < 0.05) between the animals. In addition, the preantral follicle density and the stromal cell density were associated (P < 0.001). The percentage of morphologically normal follicles was 70.1 ± 1.2 and differed (P < 0.05) among the animals. The majority (79%) of the morphologically normal follicles was classified as primordial follicles and differed (P < 0.05) between the animals and between the ovaries. In summary, a laparoscopic BPU method was developed to recover ovarian tissue in vivo with a satisfactory success rate in goats. In addition, this study described for the first time that goat ovarian biopsy fragments have high heterogeneity in follicular density, morphology, class distribution, and stromal cell density.

Aumento da qualidade de ovócitos recuperados por punção folicular de vacas submetidas previamente à superovulação / Increasing of oocytes quality retrieved by ovum pick-up from cows previously superovulated

O objetivo deste estudo foi avaliar a qualidade de ovócitos obtidos por meio de punção folicular de vacas doadoras submetidas à superovulação após a coleta de embriões. Foram utilizadas 22 vacas mestiças (Bos taurus x Bos indicus), que foram divididas em dois grupos: 1) grupo-controle (GC; n = 11), composto por vacas em fase aleatória do ciclo estral, pois não sofreram nenhum tratamento hormonal, e 2) grupo corpos lúteos (GCL; n = 11), vacas que haviam sido utilizadas em um programa de superovulação e coleta de embriões. Todas as vacas foram submetidas à punção folicular ovariana a cada sete dias após a coleta de embriões do GCL, totalizando cinco seções de punção por grupo. Houve uma maior taxa de recuperação de ovócitos de qualidade I e II no GCL do que no GC (28,6 e 6,4%, respectivamente; P < 0,001). Os resultados indicam que ovócitos recuperados após um programa de superovulação e coleta de embriões apresentam melhor qualidade do que ovócitos coletados em fase aleatória do ciclo estral.

The aim of this study was to evaluate the oocyte quality retrieved by ovum pick-up (OPU) after the embryo collection in cows subjected to superovulation procedure. Twenty two crossbred cows were separated into two groups; 1) Control Group (CG; n = 11), cows in random stage of the estrous cycle that did not received any hormonal treatment and 2) Corpus Luteum Group (CLG; n = 11), cows that had been used in a superovulation protocol and embryo collection. All cows were subjected to OPU procedure every 7 days after embryo collection of the CLG. The CLG had higher rate of oocytes quality I and II retrieved than the CG (28.6 e 6.4%, respectively; P < 0.001). The results indicate that oocytes retrieved from cows subjected to protocols of superovulation and embryo collection are of better quality than oocytes collected in random stage of the estrous cycle.