Meningoencephalitis caused by Bovine alphaherpesvirus 5 in Pernambuco, Brazil / [Meningoencefalite causada pelo Bovine alphaherpesvirus 5 em Pernambuco, Brasil]

Objetivou-se descrever a ocorrência do Bovine alphaherpesvirus 5 (BoHV5) como causa de meningoencefalite não supurativa em bovinos do estado de Pernambuco, Brasil. Para tanto, 32 amostras de sistema nervoso embebidas em parafina foram obtidas de animais acometidos por doenças neurológicas atendidos na Clínica de Bovinos de Garanhuns da Universidade Federal Rural de Pernambuco (CBG-UFRPE), entre 2012 e 2016. As amostras foram analisadas quanto à presença do gene da glicoproteína C do BoHV5 por reação em cadeia da polimerase (PCR). Dois animais (6,25%) tiveram resultado positivo à PCR, e sua análise de sequenciamento indicou 100% de similaridade para o BoHV5. Os resultados histopatológicos desses dois animais revelaram lesões multifocais de meningoencefalite não supurativa associada à polioencefalomalácia, presença de corpúsculos de inclusão basofílicos, infiltração de células de Gitter e presença de manguitos perivasculares. A PCR se mostra uma importante ferramenta para diferenciação das infecções por BoHV5 de outras enfermidades neurológicas de bovinos, especialmente a raiva.(AU)

Immunogenicity in sheep of Uruguayan commercial vaccines against bovine alphaherpesvirus 1, 5 and bovine pestiviruses / Imunogenicidade em ovelhas de vacinas comerciais Uruguaias para alfaherpesvírus bovino 1, 5 e pestivírus de bovinos

The serological responses induced by four commercial inactivated Uruguayan vaccines against bovine alphaherpesviruses (BoHV)-1 and -5 and bovine pestiviruses (BVDV-1, BVDV-2, and HoBiPeV) were evaluated in sheep. Thirty-seven sheep were immunized twice (day 0 and 25) and their serum samples were tested at different intervals (days 0, 25, 40, 60, and 90) post-vaccination (PV). Among the four vaccines tested, only one (G4) could induce the production of moderate neutralizing antibody titers against BoHV-1 and -5 and BVDV-1 and -2. The G3 vaccine showed a neutralizing serological response against the bovine alphaherpesviruses only. The G1 and G2 vaccines produced extremely low levels of antibodies in a few vaccinated animals only (geometric mean titers (GMT) 2.2). Similar levels of immunological responses were induced by the G4 vaccine against BoHV-1 and -5, and titers of neutralizing antibodies induced in approximately 70% of the animals are known to confer protection (GMT > 8). For bovine pestiviruses, the vaccine stimulated response of G4 against BVDV-2 was higher compared to that against BVDV-1, and extremely low for HoBiPeV. The peak of neutralizing antibodies to BoHV-1 and BVDV-1 was observed on days 40 and 60 PV, respectively. Thereafter, a remarkably decrease in neutralizing antibody response was observed at day 90 PV. These results demonstrated that tested commercial Uruguayan vaccines did not induce a serological response of adequate magnitude and duration. Thus, it is important to periodically review formulations and compositions of commercial vaccines against bovine alphaherpesviruses and pestiviruses.(AU)

A resposta sorológica induzida por quatro vacinas comerciais uruguaias inativadas contra os alfaherpesvírus bovinos (BoHV-1 e -5) e pestivírus de bovinos (BVDV-1, BVDV-2 e HoBiPeV) foi avaliada em ovinos. Os animais foram imunizados duas vezes (dia 0 e dia 25) e o soro testado em diferentes intervalos (dias 0, 25, 40, 60 e 90) após a vacinação (PV). Dentre as quatro vacinas testadas, apenas uma (G4) apresentou títulos de anticorpos neutralizantes moderados para os BoHV-1 e -5, BVDV-1 e 2. A vacina G3 apresentou resposta somente para alfaherpesvírus bovinos. As vacinas G1 e G2 estimularam resposta somente em alguns animais vacinados. Para a vacina G4, observou-se que a resposta imunológica frente ao BoHV-1 e 5 foi semelhante e pelo menos 70% dos animais apresentaram níveis protetivos de anticorpos neutralizantes. Para os pestivírus bovinos, a vacina G4 estimulou resposta para o BVDV-2 mais elevada quando comparada com o BVDV-1, e quase que indetectável para HoBiPeV. O pico de anticorpos neutralizantes para o BoHV-1 foi observado no dia 40 PV e no dia 60 PV para o BVDV-1. Após isso, observou-se um decréscimo considerável na resposta de anticorpos neutralizantes. Os resultados demonstraram que vacinas comerciais uruguaias testadas não induziram resposta sorológica de magnitude e duração adequadas. Assim, ressalva-se a importância de rever periodicamente a formulação e composição das vacinas comerciais para alfaherpesvírus e pestivírus bovinos.(AU)

Bovine alphaherpesvirus 1 and 5 in semen from bulls presenting genital lesions under field conditions in Brazil / Alfaherpesvírus bovino 1 e 5 em sêmen de touros com lesões genitais, sob condições a campo no Brasil

Bovine alphaherpesviruses 1 and 5 (BoHV-1/5) are main pathogens of respiratory, reproductive and neurological diseases in cattle. The aim of this study was to investigate the frequency of neutralizing antibodies against BoHV-1/5 in serum samples and to detect viral DNA in semen of bulls from beef cattle farms located in RS. A total of 372 serum and semen sample from bulls were collected in eighteen farms. Serum samples were submitted to virus neutralization (VN) assay, while semen samples were used to detect BoHV-1 and BoHV-5 DNA by PCR. VN results showed that BoHV-1/5 antibodies were detected in bulls of 66.7% (12/18) of the farms, 295 (79.5%) BoHV positive bulls, 287 for BoHV-1 and 234 for BoHV-; at 43 vaccinated bulls 72.1% (31/43) showing serology negative. BoHV-1/5 DNA was detected in the semen of three bulls; one of the them presenting BoHV-1, one out three presenting BoHV-5 and one BoHV-1/5.co-infection All BoHV DNA positive samples came from animals presenting posthitis and other genital lesions at sampling. Results showed a high seroprevalence of BoHV-1/5 antibodies in bulls as well as strong evidence that these viruses are actively circulating in the cattle farms. A remarkable finding is that in the presence of clinically evident lesions in the genital tract, both BoHV-1 and 5 may found in semen.(AU)

Os alfa-herpesvírus bovinos 1 e 5 (BoHV-1/5) são importantes patógenos de doença respiratória, reprodutiva e neurológica em bovinos. O objetivo deste estudo foi investigar a frequência de detecção de anticorpos neutralizantes contra BoHV-1/5 em amostra de soro e detectar DNA viral em sêmen de touros do rebanho bovino localizado nas fazendas de gado de corte do RS. Um total de 371 amostras de soro e sêmen foi coletado de touros em 18 fazendas, 325 das quais são provenientes de touros não vacinados e 43 de vacinados. Amostras de soro foram submetidas à técnica de vírus-neutralização (VN), enquanto as amostras de sêmen foram submetidas à extração de DNA e posterior PCR (polymerase chain reaction) para detecção de BoHV-1 e 5. Os resultados da VN demostraram que anticorpos contra BoHV-1/5 foram detectados nos touros não vacinados em 66,7% (12/18) das fazendas, 295 (79,5%) touros mostraram-se positivos para BoHV, 287 para BoHV-1 e 234 para BoHV-5; e para 43 touros vacinados, observou-se que 72,1% (31/43) foram negativos na sorologia DNA de BoHV-1/5, detectado no sêmen de três touros: um deles apresentava BoHV-1, outro BoHV-5 e em um foi detectada coinfecção por BoHV-1/5. Todas as amostras positivas para o DNA viral eram provenientes de animais que apresentavam lesões de postite e outras lesões genitais. Esses resultados demonstram que há uma alta soroprevalência de BoHV-1/5 em touros, bem como uma forte evidência de que esses vírus estão circulando ativamente no rebanho bovino dessas fazendas. Um achado interessante foi a detecção de BoHV-1 e 5 em touros com lesões na região do trato genital.(AU)

Bovine alphaherpesvirus 1 and 5 in semen from bulls presenting genital lesions under field conditions in Brazil / Alfaherpesvírus bovino 1 e 5 em sêmen de touros com lesões genitais, sob condições a campo no Brasil

Bovine alphaherpesviruses 1 and 5 (BoHV-1/5) are main pathogens of respiratory, reproductive and neurological diseases in cattle. The aim of this study was to investigate the frequency of neutralizing antibodies against BoHV-1/5 in serum samples and to detect viral DNA in semen of bulls from beef cattle farms located in RS. A total of 372 serum and semen sample from bulls were collected in eighteen farms. Serum samples were submitted to virus neutralization (VN) assay, while semen samples were used to detect BoHV-1 and BoHV-5 DNA by PCR. VN results showed that BoHV-1/5 antibodies were detected in bulls of 66.7% (12/18) of the farms, 295 (79.5%) BoHV positive bulls, 287 for BoHV-1 and 234 for BoHV-; at 43 vaccinated bulls 72.1% (31/43) showing serology negative. BoHV-1/5 DNA was detected in the semen of three bulls; one of the them presenting BoHV-1, one out three presenting BoHV-5 and one BoHV-1/5.co-infection All BoHV DNA positive samples came from animals presenting posthitis and other genital lesions at sampling. Results showed a high seroprevalence of BoHV-1/5 antibodies in bulls as well as strong evidence that these viruses are actively circulating in the cattle farms. A remarkable finding is that in the presence of clinically evident lesions in the genital tract, both BoHV-1 and 5 may found in semen.(AU)

Os alfa-herpesvírus bovinos 1 e 5 (BoHV-1/5) são importantes patógenos de doença respiratória, reprodutiva e neurológica em bovinos. O objetivo deste estudo foi investigar a frequência de detecção de anticorpos neutralizantes contra BoHV-1/5 em amostra de soro e detectar DNA viral em sêmen de touros do rebanho bovino localizado nas fazendas de gado de corte do RS. Um total de 371 amostras de soro e sêmen foi coletado de touros em 18 fazendas, 325 das quais são provenientes de touros não vacinados e 43 de vacinados. Amostras de soro foram submetidas à técnica de vírus-neutralização (VN), enquanto as amostras de sêmen foram submetidas à extração de DNA e posterior PCR (polymerase chain reaction) para detecção de BoHV-1 e 5. Os resultados da VN demostraram que anticorpos contra BoHV-1/5 foram detectados nos touros não vacinados em 66,7% (12/18) das fazendas, 295 (79,5%) touros mostraram-se positivos para BoHV, 287 para BoHV-1 e 234 para BoHV-5; e para 43 touros vacinados, observou-se que 72,1% (31/43) foram negativos na sorologia DNA de BoHV-1/5, detectado no sêmen de três touros: um deles apresentava BoHV-1, outro BoHV-5 e em um foi detectada coinfecção por BoHV-1/5. Todas as amostras positivas para o DNA viral eram provenientes de animais que apresentavam lesões de postite e outras lesões genitais. Esses resultados demonstram que há uma alta soroprevalência de BoHV-1/5 em touros, bem como uma forte evidência de que esses vírus estão circulando ativamente no rebanho bovino dessas fazendas. Um achado interessante foi a detecção de BoHV-1 e 5 em touros com lesões na região do trato genital.(AU)

Spatiotemporal expression pattern of alpha, beta, and gamma genes during BoHV-5 infection / Expressão temporal de genes alfa, beta e gama durante ainfecção pelo BoHV-5

Bovine herpesvirus 5 is an alphaherpesvirus that causes nonsuppurative meningoencephalitis in cattle. This disease occurs naturally in either outbreaks or isolated cases, and exhibits low morbidity and high lethality. Although previous studies elucidated crucial aspects involved in the pathogenesis of the disease, there is a paucity of information regarding the molecular events contributing to infection and replication of BoHV-5. The objective of the present study was to determine the in vitro gene expression pattern of BoHV-5 (e.g., alpha, beta, and gamma genes) and host cells genes (GAPDH and 18S) over time utilizing different quantities of inoculated virus. Three BoHV-5 genes (bICP0, UL9, US4) and one structural bovine cell gene had their expression accessed by real-time PCR. While the expression of BoHV-5 genes increased during the course of infection, GAPDH gene expression decreased in the host cells, evidencing the effect of viral infection on the expression of bovine cell genes. The 18S ribosomal RNA (rRNA) gene was constitutively expressed throughout BoHV-5 infection. Our data clearly demonstrates that GAPDH gene should not be used as a reference gene in studies of BoHV-5 infection because it was influenced by viral infection. However, 18S rRNA was constitutively expressed and, therefore, is recommended for normalization of BoHV-5 infection studies in bovine cells. The expression of viral genes transcripts was not altered by increasing number of viral particles added to the culture. All viral genes included here demonstrated the same expression pattern over time and there was no difference in the expression of viral genes among the various time points. Our data show important differences comparing to classical studies regarding herpesvirus alpha, beta, and gamma genes expression. More research is necessary to improve our understanding about the BoHV-5 biology during infection. Studies employing next-generation sequencing (i.e., RNA-seq), using both in vitro and in vivo models, would be the next logical step to grasp the virus and host cell's transcriptome changes over the course of infection.(AU)

Herpesvirus bovino 5 é um alfaherpesvírus causador de meningoencefalite não supurativa em bovinos. Esta doença possui ocorrência natural em surtos ou casos isolados, associadas a baixa morbidade e alta letalidade. Embora estudos anteriores tenham elucidado aspectos relacionados a patogenia da doença, há uma lacuna de conhecimento relacionado aos eventos moleculares que contribuem para a infecção e replicação do BoHV-5. O objetivo do presente estudo foi determinar a expressão gênica in vitro de genes virais (i.e., alfa, beta e gama) e das células hospedeiras (GAPDH e 18S) durante a infecção considerando diferentes momentos de infecção e quantidade de vírus utilizado. Três genes do BoHV-5 (bICP0, UL9, US4), um gene estrutural (GAPDH) e um gene constitutivo (18S) da célula bovina tiveram suas expressões avaliadas por PCR quantitativa (qPCR). Enquanto os genes virais tiveram sua expressão aumentada ao longo do tempo de infecção, o gene hospedeiro teve sua expressão diminuída, demonstrando a ação do vírus na expressão gênica de células bovinas in vitro. O gene constitutivo 18S teve sua expressão mantida durante todos os momentos do experimento. Nossos resultados claramente demonstraram que o GAPDH não deve ser usado como gene de referência em estudos com infecção por BoHV-5 pois é influenciado pela infecção viral. Entretanto, o 18S rRNA foi constitutivamente expresso e pode ser recomendado para normalização em células bovinas infectadas pelo vírus. A expressão de mRNA viral não foi alterada pela quantidade de vírus usada. Todos os genes virais demonstraram o mesmo padrão de expressão ao longo do tempo de infecção. Nossos resultados trazem importantes diferenças comparando aos estudos clássicos que avaliaram a expressão de genes alfa, beta e gama. Mais estudos são necessários para aumentar o conhecimento da biologia molecular do BoHV-5. Estudo utilizando sequenciamento de última geração (i.e., RNA-seq), usando modelos in vitro e in vivo, aparentam ser o próximo passo lógico para acessar as alterações do transcriptoma do hospedeiro e viral ao longo do curso da infecção.(AU)

Spatiotemporal expression pattern of alpha, beta, and gamma genes during BoHV-5 infection / Expressão temporal de genes alfa, beta e gama durante ainfecção pelo BoHV-5

Bovine herpesvirus 5 is an alphaherpesvirus that causes nonsuppurative meningoencephalitis in cattle. This disease occurs naturally in either outbreaks or isolated cases, and exhibits low morbidity and high lethality. Although previous studies elucidated crucial aspects involved in the pathogenesis of the disease, there is a paucity of information regarding the molecular events contributing to infection and replication of BoHV-5. The objective of the present study was to determine the in vitro gene expression pattern of BoHV-5 (e.g., alpha, beta, and gamma genes) and host cells genes (GAPDH and 18S) over time utilizing different quantities of inoculated virus. Three BoHV-5 genes (bICP0, UL9, US4) and one structural bovine cell gene had their expression accessed by real-time PCR. While the expression of BoHV-5 genes increased during the course of infection, GAPDH gene expression decreased in the host cells, evidencing the effect of viral infection on the expression of bovine cell genes. The 18S ribosomal RNA (rRNA) gene was constitutively expressed throughout BoHV-5 infection. Our data clearly demonstrates that GAPDH gene should not be used as a reference gene in studies of BoHV-5 infection because it was influenced by viral infection. However, 18S rRNA was constitutively expressed and, therefore, is recommended for normalization of BoHV-5 infection studies in bovine cells. The expression of viral genes transcripts was not altered by increasing number of viral particles added to the culture. All viral genes included here demonstrated the same expression pattern over time and there was no difference in the expression of viral genes among the various time points. Our data show important differences comparing to classical studies regarding herpesvirus alpha, beta, and gamma genes expression. More research is necessary to improve our understanding about the BoHV-5 biology during infection. Studies employing next-generation sequencing (i.e., RNA-seq), using both in vitro and in vivo models, would be the next logical step to grasp the virus and host cell's transcriptome changes over the course of infection.(AU)

Herpesvirus bovino 5 é um alfaherpesvírus causador de meningoencefalite não supurativa em bovinos. Esta doença possui ocorrência natural em surtos ou casos isolados, associadas a baixa morbidade e alta letalidade. Embora estudos anteriores tenham elucidado aspectos relacionados a patogenia da doença, há uma lacuna de conhecimento relacionado aos eventos moleculares que contribuem para a infecção e replicação do BoHV-5. O objetivo do presente estudo foi determinar a expressão gênica in vitro de genes virais (i.e., alfa, beta e gama) e das células hospedeiras (GAPDH e 18S) durante a infecção considerando diferentes momentos de infecção e quantidade de vírus utilizado. Três genes do BoHV-5 (bICP0, UL9, US4), um gene estrutural (GAPDH) e um gene constitutivo (18S) da célula bovina tiveram suas expressões avaliadas por PCR quantitativa (qPCR). Enquanto os genes virais tiveram sua expressão aumentada ao longo do tempo de infecção, o gene hospedeiro teve sua expressão diminuída, demonstrando a ação do vírus na expressão gênica de células bovinas in vitro. O gene constitutivo 18S teve sua expressão mantida durante todos os momentos do experimento. Nossos resultados claramente demonstraram que o GAPDH não deve ser usado como gene de referência em estudos com infecção por BoHV-5 pois é influenciado pela infecção viral. Entretanto, o 18S rRNA foi constitutivamente expresso e pode ser recomendado para normalização em células bovinas infectadas pelo vírus. A expressão de mRNA viral não foi alterada pela quantidade de vírus usada. Todos os genes virais demonstraram o mesmo padrão de expressão ao longo do tempo de infecção. Nossos resultados trazem importantes diferenças comparando aos estudos clássicos que avaliaram a expressão de genes alfa, beta e gama. Mais estudos são necessários para aumentar o conhecimento da biologia molecular do BoHV-5. Estudo utilizando sequenciamento de última geração (i.e., RNA-seq), usando modelos in vitro e in vivo, aparentam ser o próximo passo lógico para acessar as alterações do transcriptoma do hospedeiro e viral ao longo do curso da infecção.(AU)

Infecção latente pelo herpesvírus bovino tipo 1 em búfalos (Bubalus bubalis) no Rio Grande do Sul / Bovine herpesvirus type 1 latent infection in buffalo (Bubalus bubalis) in Rio Grande do Sul

Apesar dos bovinos serem considerados os hospedeiros naturais do BoHV-1, estudos sorológicos têm sugerido que búfalos podem ser suscetíveis ao BoHV-1 e a outros alfa-herpesvírus geneticamente relacionados. O objetivo deste estudo foi detectar a presença de DNA viral de BoHV-1 em 202 amostras de gânglios trigêmeos de búfalos, pela técnica de semi-nested PCR, para detecção de um segmento do gene codificante da glicoproteína D (gD) do BoHV-1. Além disso, 242 amostras de soro foram analisadas pela técnica de soroneutralização (SN) para a detecção de anticorpos neutralizantes contra BoHV-1, BoHV-5 e BuHV. Todas as amostras clínicas foram coletadas em um matadouro na cidade de Pelotas, RS, Brasil. O DNA de BoHV-1 foi detectado em 61 (30,1%) gânglios, e os resultados da SN demonstraram que 27,6% dos animais apresentaram anticorpos contra, pelo menos, um dos vírus testados. O sequenciamento genômico e a análise de 14 amplicons confirmaram a presença do DNA do BoHV-1 nos tecidos analisados. Em resumo, os resultados indicam que o BoHV-1 está distribuído em rebanhos bubalinos provenientes da região Sul do Brasil. Entretanto, são necessárias investigações adicionais, no sentido de elucidar o papel exato dos búfalos na epidemiologia das infecções pelo BoHV-1.(AU)

Although bovines are natural hosts for BoHV-1, serologic studies in several countries have suggested that buffaloes (Bubalus bubalis) may be susceptible to BoHV-1 and other genetically related alphaherpesvirus. This study aimed to investigate the presence of BoHV-1 DNA in trigeminal ganglia from 202 buffaloes by a semi-nested PCR to amplify partially the glycoprotein D (gD) gene of BoHV-1. Additionally, 242 serum samples were tested by serum neutralization (SN) for the detection of antibodies against BoHV-1, BoHV-5 and BuHV. All clinical samples were collected in a slaughterhouse located in Pelotas, RS, Brazil. BoHV-1 DNA was detected in 61 (30.1%) of the samples and SN revealed 27.6% of the animals with neutralizing antibodies against at least one of the tested viruses. Nucleotide sequencing of 15 amplicons followed by BLAST analysis confirmed the presence of BoHV-1 DNA in the analyzed tissues. Taken together, these data indicate that BoHV-1 infection is distributed in buffaloes in southern Brazil. However, the role of buffaloes in the BoHV-1 epidemiology needs further investigation.(AU)

Infecção latente pelo herpesvírus bovino tipo 1 em búfalos (Bubalus bubalis) no Rio Grande do Sul / Bovine herpesvirus type 1 latent infection in buffalo (Bubalus bubalis) in Rio Grande do Sul

Apesar dos bovinos serem considerados os hospedeiros naturais do BoHV-1, estudos sorológicos têm sugerido que búfalos podem ser suscetíveis ao BoHV-1 e a outros alfa-herpesvírus geneticamente relacionados. O objetivo deste estudo foi detectar a presença de DNA viral de BoHV-1 em 202 amostras de gânglios trigêmeos de búfalos, pela técnica de semi-nested PCR, para detecção de um segmento do gene codificante da glicoproteína D (gD) do BoHV-1. Além disso, 242 amostras de soro foram analisadas pela técnica de soroneutralização (SN) para a detecção de anticorpos neutralizantes contra BoHV-1, BoHV-5 e BuHV. Todas as amostras clínicas foram coletadas em um matadouro na cidade de Pelotas, RS, Brasil. O DNA de BoHV-1 foi detectado em 61 (30,1%) gânglios, e os resultados da SN demonstraram que 27,6% dos animais apresentaram anticorpos contra, pelo menos, um dos vírus testados. O sequenciamento genômico e a análise de 14 amplicons confirmaram a presença do DNA do BoHV-1 nos tecidos analisados. Em resumo, os resultados indicam que o BoHV-1 está distribuído em rebanhos bubalinos provenientes da região Sul do Brasil. Entretanto, são necessárias investigações adicionais, no sentido de elucidar o papel exato dos búfalos na epidemiologia das infecções pelo BoHV-1.(AU)

Although bovines are natural hosts for BoHV-1, serologic studies in several countries have suggested that buffaloes (Bubalus bubalis) may be susceptible to BoHV-1 and other genetically related alphaherpesvirus. This study aimed to investigate the presence of BoHV-1 DNA in trigeminal ganglia from 202 buffaloes by a semi-nested PCR to amplify partially the glycoprotein D (gD) gene of BoHV-1. Additionally, 242 serum samples were tested by serum neutralization (SN) for the detection of antibodies against BoHV-1, BoHV-5 and BuHV. All clinical samples were collected in a slaughterhouse located in Pelotas, RS, Brazil. BoHV-1 DNA was detected in 61 (30.1%) of the samples and SN revealed 27.6% of the animals with neutralizing antibodies against at least one of the tested viruses. Nucleotide sequencing of 15 amplicons followed by BLAST analysis confirmed the presence of BoHV-1 DNA in the analyzed tissues. Taken together, these data indicate that BoHV-1 infection is distributed in buffaloes in southern Brazil. However, the role of buffaloes in the BoHV-1 epidemiology needs further investigation.(AU)

Outbreak of bovine herpetic meningoencephalomyelitis in Southern Brazil

Background: Herpetic meningoencephalitis is an infectious contagious disease worldwide distributed, most often caused by bovine alphaherpesvirus type 5 (BoHV-5), although bovine alphaherpesvirus type 1 (BoHV-1) may occasionally be the causative agent. The disease is characterized by subacute to acute clinical onset, often affecting animals submitted to stressful situations. Clinical signs are mainly neurologic due to meningoencephalitis and cortical necrosis. The involvement of the spinal cord has also been reported, however in BoHV-1 associated disease only. The aim of this report is to describe an outbreak of bovine meningoencephalomyelitis associated to BoHV-5.Case: In August 2017, nine 1-year-old calves died in a beef cattle farm with a flock of approximately 400 bovines. The animals presented neurological clinical signs characterized by excessive salivation, nasal and ocular discharges, incoordination, apathy, head tremors, head pressing, wide-based stance, recumbency followed by convulsions and paddling. According to the owner and referring veterinarian, affected animals displayed severe clinical signs with rapid progression and often leading to death in up to seven days. Four of these calves were submitted for necropsy, and gross lesions were present in the brain, characterized by mild to moderate multifocal hemorrhagic and soft areas. On cut surface, extensive areas of dark brown discoloration and malacia were observed. Histologically, lesions were characterized by extensive areas of liquefactive necrosis in the cerebral cortex grey matter, associated with inflammatory infiltrates composed of neutrophils, lymphocytes, plasma cells and foamy macrophages, as well as multifocal to coalescing areas of hemorrhage and fibrin deposition. Intranuclear eosinophilic inclusion bodies were rarely observed in neurons and astrocytes. On leptomeninges, there was diffuse inflammatory infiltrates of lymphocytes and plasma cells.[...](AU)

Outbreak of bovine herpetic meningoencephalomyelitis in Southern Brazil

Background: Herpetic meningoencephalitis is an infectious contagious disease worldwide distributed, most often caused by bovine alphaherpesvirus type 5 (BoHV-5), although bovine alphaherpesvirus type 1 (BoHV-1) may occasionally be the causative agent. The disease is characterized by subacute to acute clinical onset, often affecting animals submitted to stressful situations. Clinical signs are mainly neurologic due to meningoencephalitis and cortical necrosis. The involvement of the spinal cord has also been reported, however in BoHV-1 associated disease only. The aim of this report is to describe an outbreak of bovine meningoencephalomyelitis associated to BoHV-5.Case: In August 2017, nine 1-year-old calves died in a beef cattle farm with a flock of approximately 400 bovines. The animals presented neurological clinical signs characterized by excessive salivation, nasal and ocular discharges, incoordination, apathy, head tremors, head pressing, wide-based stance, recumbency followed by convulsions and paddling. According to the owner and referring veterinarian, affected animals displayed severe clinical signs with rapid progression and often leading to death in up to seven days. Four of these calves were submitted for necropsy, and gross lesions were present in the brain, characterized by mild to moderate multifocal hemorrhagic and soft areas. On cut surface, extensive areas of dark brown discoloration and malacia were observed. Histologically, lesions were characterized by extensive areas of liquefactive necrosis in the cerebral cortex grey matter, associated with inflammatory infiltrates composed of neutrophils, lymphocytes, plasma cells and foamy macrophages, as well as multifocal to coalescing areas of hemorrhage and fibrin deposition. Intranuclear eosinophilic inclusion bodies were rarely observed in neurons and astrocytes. On leptomeninges, there was diffuse inflammatory infiltrates of lymphocytes and plasma cells.[...]

Transferência de imunidade passiva (TIP) e dinâmica de anticorpos específicos em bezerros naturalmente expostos para as viroses respiratórias / Passive immune transfer (PIT) and dynamics of specific antibodies in calves naturally exposed to the respiratory viruses

Esta pesquisa avaliou a TIP e a dinâmica de anticorpos (ACs) específicos em bezerros naturalmente expostos aos agentes causadores da doença respiratória bovina (DRB). Foram selecionados 19 bezerros Holandeses alimentados com colostro proveniente de doadoras vacinadas para DRB. Amostras de soro foram obtidas antes e após a ingestão do colostro (48h) para a soroneutralização (SN). Os valores médios (log2) detectados após colostragem foram de 11,5±1,6 (BVDV), 8,8±1,3 (BoHV-1), 5,5±1,6 (BRSV) e 8,4±1,5 (BPIV-3). Cinco bezerros foram criados do nascimento aos 240 dias de vida, observando-se decréscimo nos títulos de ACs para BVDV, BoHV-1 e BPIV-3 ao longo do tempo (P≤0,001). As taxas de infecções detectadas entre o D14 e o D240 foram de 40% (2/5), 20% (1/5), 80% (4/5), e 60% (3/5), respectivamente, para BVDV, BoHV-1, BRSV e BPIV-3. A maioria dos bezerros manifestou broncopneumonia após as infecções virais. Os bezerros apresentaram ACs para todas as viroses às 48 horas de vida, porém os títulos adquiridos para o BRSV foram baixos. A susceptibilidade para as infecções variou de acordo com os níveis e a duração dos títulos de ACs maternos.(AU)

This research evaluated the PIT and the dynamics of specific antibody (Ab) for calves naturally exposed to the viral agents involved in Bovine Respiratory Disease (BRD). Nineteen Holstein calves fed colostrum from vaccinated donors for DRB. Serum samples were obtained before and after colostrum intake (48h) for serum neutralization (SN). Mean values (log2) detected after colostrum feeding were 11.5±1.6 (BVDV), 8.8 ±1.3 (BoHV-1) 5.5±1.6 (BRSV) and 8.4±1.5 (BPIV-3). Five calves were raised from birth to 240 days of life and presented a decrease in Ab titers for BVDV, BoHV-1 and BPIV-3 over time (P≤ 0.001). Infection rates from D14 to D240 were of 40% (2/5), 20% (1/5), 80% (4/5) and 60% (3/5), respectively for BVDV, BoHV-1, BRSV and BPIV-3. Most of the calves presented bronchopneumonia after seroconversion to the virus. Calves presented Ab for all viruses at 48 hours of life, however BRSV Ab titer were low. Levels and persistence of maternal antibody titers determined the susceptibility to viral infections.(AU)

Transferência de imunidade passiva (TIP) e dinâmica de anticorpos específicos em bezerros naturalmente expostos para as viroses respiratórias / Passive immune transfer (PIT) and dynamics of specific antibodies in calves naturally exposed to the respiratory viruses

Esta pesquisa avaliou a TIP e a dinâmica de anticorpos (ACs) específicos em bezerros naturalmente expostos aos agentes causadores da doença respiratória bovina (DRB). Foram selecionados 19 bezerros Holandeses alimentados com colostro proveniente de doadoras vacinadas para DRB. Amostras de soro foram obtidas antes e após a ingestão do colostro (48h) para a soroneutralização (SN). Os valores médios (log2) detectados após colostragem foram de 11,5±1,6 (BVDV), 8,8±1,3 (BoHV-1), 5,5±1,6 (BRSV) e 8,4±1,5 (BPIV-3). Cinco bezerros foram criados do nascimento aos 240 dias de vida, observando-se decréscimo nos títulos de ACs para BVDV, BoHV-1 e BPIV-3 ao longo do tempo (P≤0,001). As taxas de infecções detectadas entre o D14 e o D240 foram de 40% (2/5), 20% (1/5), 80% (4/5), e 60% (3/5), respectivamente, para BVDV, BoHV-1, BRSV e BPIV-3. A maioria dos bezerros manifestou broncopneumonia após as infecções virais. Os bezerros apresentaram ACs para todas as viroses às 48 horas de vida, porém os títulos adquiridos para o BRSV foram baixos. A susceptibilidade para as infecções variou de acordo com os níveis e a duração dos títulos de ACs maternos.(AU)

This research evaluated the PIT and the dynamics of specific antibody (Ab) for calves naturally exposed to the viral agents involved in Bovine Respiratory Disease (BRD). Nineteen Holstein calves fed colostrum from vaccinated donors for DRB. Serum samples were obtained before and after colostrum intake (48h) for serum neutralization (SN). Mean values (log2) detected after colostrum feeding were 11.5±1.6 (BVDV), 8.8 ±1.3 (BoHV-1) 5.5±1.6 (BRSV) and 8.4±1.5 (BPIV-3). Five calves were raised from birth to 240 days of life and presented a decrease in Ab titers for BVDV, BoHV-1 and BPIV-3 over time (P≤ 0.001). Infection rates from D14 to D240 were of 40% (2/5), 20% (1/5), 80% (4/5) and 60% (3/5), respectively for BVDV, BoHV-1, BRSV and BPIV-3. Most of the calves presented bronchopneumonia after seroconversion to the virus. Calves presented Ab for all viruses at 48 hours of life, however BRSV Ab titer were low. Levels and persistence of maternal antibody titers determined the susceptibility to viral infections.(AU)

Use of metaphylactic protocols based on the risk to develop bovine respiratory diseases in feedlot cattle / Efeito do uso de protocolos metafiláticos segundo o risco de doença respiratória bovina em confinamentos

ABSTRACT: Bovine respiratory diseases (BRD) affect production rates negatively because it compromise health and well-being of the affected animal. The hypothesis of this study was that the use of metaphylactic protocols based on the risk to develop BRD would reduce morbidity and pulmonary lesions. For this purpose, the aims of this study were to evaluate the effect of two metaphylactic protocols on the morbidity of feedlot cattle with a known sanitary history, occurrence of pulmonary lesions at slaughter, and the possible participation of Mannheimia haemolytica, Histophilus somni, Bovine alphaherpesvirus 1 (BoHV-1) and bovine respiratory syncytial virus (BRSV) in the development of BRD. An experimental study was designed in which 3,094 adult, male, cattle, were grouped according to the risk to develop BRD: a) group without metaphylaxis (n=2,104), low-risk animals; b) metaphylaxis group with oxytetracycline (n=789), moderate-risk animals; c) metaphylaxis group with tildipirosin (n=201), high-risk animals. All cattle were immunized against pathogens associated with BRD (BoHV-1, BVDV, BRSV, PI3). The morbidity for BRD was 8.2% (253/3,094); cattle within the moderate-risk group for BRD had the lowest frequency (6.1%), followed by high-risk animals with tildipirosin metaphylaxis (6.5%) and low-risk without metaphylaxis (9.1%) (P=0.019). At the abattoir, 1.2% of lungs with lesions were found. There was a difference (P=0.036) in the frequency of pulmonary lesions between healthy animals (1.1%) and those diagnosed with BRD (2.8%). Two agents associated with BRD were identified by PCR assays in the lungs (n=37) of cattle: M. haemolytica (16.2%) and H. somni (5.4%). In addition, concomitant infections involving these pathogens were identified in the lungs of two steers.

RESUMO: As doenças respiratórias dos bovinos (DRB) afetam negativamente as taxas de produção por comprometer a saúde e o bem-estar animal. A hipótese deste estudo foi que o uso de protocolos metafiláticos com base no risco de desenvolvimento de DRB reduziria a morbidade e as lesões pulmonares ao abate. Para tanto, objetivou-se avaliar o efeito de dois protocolos metafiláticos sobre a morbidade de bovinos confinados com histórico sanitário conhecido, ocorrência de lesões pulmonares no abate e possível participação de Mannheimia haemolytica, Histophilus somni, Alphaherpesvírus bovino 1 (BoHV-1) e Vírus respiratório sincicial bovino (BRSV) na DRB. Foram avaliados 3.094 bovinos adultos, machos, agrupados de acordo com o risco de desenvolvimento de DRB: a) grupo sem metafilaxia (n=2.104), animais de baixo risco; b) grupo metafilaxia com oxitetraciclina (n=789), animais de risco moderado; c) grupo metafilaxia com tildipirosina (n=201), animais de alto risco. Todos os animais foram previamente vacinados contra os principais agentes virais causadores das DRB (BoHV-1, BVDV, BRSV e PI3). A morbidade para DRB foi de 8,2% com menor frequência em animais com risco moderado e metafilaxia com oxitetraciclina (6,1%), seguido por animais com alto risco com metafilaxia com tildipirosina (6,5%) e animais com baixo risco sem metafilaxia (9,1%) (P=0,019). No frigorífico, foram encontrados 1,2% 1,2% de animais com lesões pulmonares. Houve diferença (P=0,036) na frequência de lesões pulmonares entre animais saudáveis (1,1%) e aqueles diagnosticados com DRB (2,8%). Foram identificados dois agentes associados à DRB pela técnica de PCR nos pulmões (n=37) dos bovinos: M. haemolytica (16,2%) e H. somni (5,4%). Adicionalmente, infecções concomitantes envolvendo estes potenciais patógenos foram identificadas nos pulmões de dois animais.

Use of metaphylactic protocols based on the risk to develop bovine respiratory diseases in feedlot cattle / Efeito do uso de protocolos metafiláticos segundo o risco de doença respiratória bovina em confinamentos

ABSTRACT: Bovine respiratory diseases (BRD) affect production rates negatively because it compromise health and well-being of the affected animal. The hypothesis of this study was that the use of metaphylactic protocols based on the risk to develop BRD would reduce morbidity and pulmonary lesions. For this purpose, the aims of this study were to evaluate the effect of two metaphylactic protocols on the morbidity of feedlot cattle with a known sanitary history, occurrence of pulmonary lesions at slaughter, and the possible participation of Mannheimia haemolytica, Histophilus somni, Bovine alphaherpesvirus 1 (BoHV-1) and bovine respiratory syncytial virus (BRSV) in the development of BRD. An experimental study was designed in which 3,094 adult, male, cattle, were grouped according to the risk to develop BRD: a) group without metaphylaxis (n=2,104), low-risk animals; b) metaphylaxis group with oxytetracycline (n=789), moderate-risk animals; c) metaphylaxis group with tildipirosin (n=201), high-risk animals. All cattle were immunized against pathogens associated with BRD (BoHV-1, BVDV, BRSV, PI3). The morbidity for BRD was 8.2% (253/3,094); cattle within the moderate-risk group for BRD had the lowest frequency (6.1%), followed by high-risk animals with tildipirosin metaphylaxis (6.5%) and low-risk without metaphylaxis (9.1%) (P=0.019). At the abattoir, 1.2% of lungs with lesions were found. There was a difference (P=0.036) in the frequency of pulmonary lesions between healthy animals (1.1%) and those diagnosed with BRD (2.8%). Two agents associated with BRD were identified by PCR assays in the lungs (n=37) of cattle: M. haemolytica (16.2%) and H. somni (5.4%). In addition, concomitant infections involving these pathogens were identified in the lungs of two steers.(AU)

RESUMO: As doenças respiratórias dos bovinos (DRB) afetam negativamente as taxas de produção por comprometer a saúde e o bem-estar animal. A hipótese deste estudo foi que o uso de protocolos metafiláticos com base no risco de desenvolvimento de DRB reduziria a morbidade e as lesões pulmonares ao abate. Para tanto, objetivou-se avaliar o efeito de dois protocolos metafiláticos sobre a morbidade de bovinos confinados com histórico sanitário conhecido, ocorrência de lesões pulmonares no abate e possível participação de Mannheimia haemolytica, Histophilus somni, Alphaherpesvírus bovino 1 (BoHV-1) e Vírus respiratório sincicial bovino (BRSV) na DRB. Foram avaliados 3.094 bovinos adultos, machos, agrupados de acordo com o risco de desenvolvimento de DRB: a) grupo sem metafilaxia (n=2.104), animais de baixo risco; b) grupo metafilaxia com oxitetraciclina (n=789), animais de risco moderado; c) grupo metafilaxia com tildipirosina (n=201), animais de alto risco. Todos os animais foram previamente vacinados contra os principais agentes virais causadores das DRB (BoHV-1, BVDV, BRSV e PI3). A morbidade para DRB foi de 8,2% com menor frequência em animais com risco moderado e metafilaxia com oxitetraciclina (6,1%), seguido por animais com alto risco com metafilaxia com tildipirosina (6,5%) e animais com baixo risco sem metafilaxia (9,1%) (P=0,019). No frigorífico, foram encontrados 1,2% 1,2% de animais com lesões pulmonares. Houve diferença (P=0,036) na frequência de lesões pulmonares entre animais saudáveis (1,1%) e aqueles diagnosticados com DRB (2,8%). Foram identificados dois agentes associados à DRB pela técnica de PCR nos pulmões (n=37) dos bovinos: M. haemolytica (16,2%) e H. somni (5,4%). Adicionalmente, infecções concomitantes envolvendo estes potenciais patógenos foram identificadas nos pulmões de dois animais.(AU)

Identificação e caracterização molecular do Bovine alphaherpesvirus 1 e Bovine alphaherpesvirus 5 em bovinos no estado de Pernambuco

Objetivou-se com esta pesquisa identificar e caracterizar molecularmente isolados de alfaherpesvírus bovino tipo 1 e 5 (BoAHV1 e BoAHV5, respectivamente) no estado de Pernambuco. A pesquisa foi dividida em duas etapas, na primeira etapa foram analisadas amostras de sistema nervoso central como cerebelo, rete mirabilis, tronco encefálico, telencéfalo e diencéfalo de 32 animais que foram a óbito na Clínica de Bovinos de Garanhuns (CBG/UFRPE), no período de 2012 a 2016, e tiveram os fragmentos de sistema nervoso emblocados em parafina por meio de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Na segunda etapa foram coletados, na CBG/UFRPE entre janeiro de 2017 a dezembro de 2020, fragmentos de sistema nervoso central de 81 bovinos submetidos à necropsia que foram a óbito apresentando sinais clínicos neurológicos. As amostras foram coletadas em tubos contendo Meio Essencial Mínimo (MEM) e inoculadas em cultivo celular e as que apresentaram efeito citopático foram caracterizadas molecularmente. Da primeira etapa foi encontrado DNA do BoAHV5 em 6,25% (2/32) das amostras conservadas em parafina, confirmado por sequenciamento. Das amostras preservadas em MEM, referentes à segunda etapa, inoculadas em cultivo celular, BoAHV1 foi isolado em 4,93% (4/81) das amostras. Os resultados da ocorrência do BoAHV5 em material parafinado bem como os isolados do BoAHV1 em animais com sinais clínicos neurológicos demonstra a importância de se considerar os alfaherpesvírus bovinos como diagnóstico diferencial para doenças neurológicas como raiva, enfermidade endêmica entre os bovinos na região nordeste. Além disso, destaca-se que BoAHV1 mostra-se como um importante patógeno responsável por abortos e, consequentemente, significativos impactos econômicos à pecuária, necessitando a implementação de políticas que abranjam desde campanhas educativas até um maior rigor sanitário no trânsito, comércio e necessidade de

The objective of this research was to identify and molecularly characterize bovine alphaherpesvirus types 1 and 5 (BoAHV1 and BoAHV5, respectively) in the state of Pernambuco. The research was divided into two stages, in the first stage were analyzed samples of central nervous system such as cerebellum, rete mirabilis, brain stem, telencephalon and diencephalon from 32 animals that died in the period from 2012 to 2016 attended at CBG / UFRPE and had the fragments of the nervous system embedded in paraffin using Polymerase Chain Reaction (PCR). In the second stage, fragments of the central nervous system of 81 cattle submitted to necropsy which died showing neurological clinical signs were collected at the CBG / UFRPE between January 2017 and December 2020. The samples were collected in tubes containing Minimum Essential Medium (MEM) and inoculated in cell culture, and those with cytopathic effect were characterized moleculary. From the first stage, BoAHV5 DNA was found in 6.25% (2/32) of the samples preserved in paraffin, confirmed by sequencing. From the samples preserved in MEM, referring to the second stage, inoculated in cell culture, BoAHV1 was isolated in 4.93% (4/81) of the samples. The results of the occurrence of BoAHV5 in paraffinized material as well as BoAHV1 isolates in animals with neurological clinical signs demonstrate the importance of considering bovine alphaherpesvirus as a differential diagnosis for neurological diseases such as rabies, an endemic disease among cattle in the northeast region. In addition, it is noteworthy that BoAHV1 is an important pathogen responsible for abortions and, consequently, significant economic impacts on livestock, requiring the implementation of policies that range from educational campaigns to greater sanitary rigor in traffic, trade and need for immunization of cattle.

Desenvolvimento e avaliação de uma vacina inativada de aplicação intravaginal contra o alphaherpesvirus bovino 5 (BoHV-5) em associação ao hidróxido de alumínio e aos polímeros mucoadesivos Polaxamer 407 e 2-hidroxietilcelulose

Os alphaherpesvirus bovinos BoHV - são patógenos que colonizam as células epiteliais das cavidades mucosas e causam doenças respiratória e reprodutiva em bovinos, além de casos de encefalite herpética bovina (BoHV-5) e persistência do genoma viral no organismo hospedeiro, com casos de reativação e excreção de progênie infecciosa. Mecanismos da imunidade inata e adaptativa conferem proteção frente a estes agentes, mas o estímulo da imunidade local, mediada por anticorpos das classes IgG e IgA, é essencial para a efetividade desta proteção. Desta forma, há a necessidade da formulação de vacinas que propiciem a imunidade adequada a estas mucosas. Neste estudo, 20 fêmeas bovinas das raças Jersey e Holandês foram divididas em três grupos (G1 (controle positivo BoHV-5+Al(OH)3), G2 (controle negativo PBS) e G3 (vacina experimental BoHV-5+Al(OH)3+2-Hidroxietilcelulose+Polaxamer 407) e inoculadas três vezes, com intervalos de vinte e um dias, pelas vias parenteral (G1 e G2) e vaginal (G3). A avaliação da resposta imunológica humoral foi realizada pelos testes de soroneutralização e ELISA. Não houve detecção de anticorpos neutralizantes no grupo tratado com a vacina experimental (G3), em nenhum dos períodos experimentais. Apenas no grupo 1 (controle positivo) foram observados títulos de anticorpos neutralizantes, a partir do dia 21 após a primeira vacinação. O teste de ELISA indireto demonstrou incremento na produção dos anticorpos IgG e IgA nas secreções nasal e vaginal (G3) e as vacinas demonstraram-se seguras e bem toleradas pelos animais. O incremento de IgG e IgA a níveis séricos não apresentou resultado satisfatório no tratamento experimental (G3). Conquanto, nosso estudo confirma a necessidade de pesquisas adicionais que avaliem a capacidade imunomoduladora e imunogênica de outras formulações que possam ser utilizadas na elaboração de um produto comercial seguro e eficaz.

Bovine alphaherpesviruses - BoHV - are pathogens that colonize epithelial cells in mucous cavities and cause respiratory and reproductive diseases in cattle, in addition to cases of bovine herpetic encephalitis (BoHV-5) and persistence of the viral genome in the host organism, with cases of reactivation and excretion of infectious progeny. Mechanisms of innate and adaptive immunity provide protection against these agents, but stimulating local immunity, mediated by antibodies of the IgG and IgA classes, is essential for the effectiveness of this protection. Thus, there is a need for the formulation of vaccines that provide adequate immunity to these mucous membranes. In this study, 20 bovine females of the Jersey and Dutch breeds were divided into three groups (G1 - (positive control - BoHV-5 + Al (OH) 3), G2 (negative control - PBS) and G3 (experimental vaccine - BoHV-5 + Al (OH) 3 + 2-Hydroxyethylcellulose + Polaxamer 407) and inoculated three times, at intervals of twenty-one days, by parenteral (G1 and G2) and vaginal (G3) routes. seroneutralization and ELISA tests There was no detection of neutralizing antibodies in the group treated with the experimental vaccine (G3), in any of the experimental periods Only in group 1 (positive control), neutralizing antibody titers were observed, starting on the 21st day after The indirect ELISA test showed an increase in the production of IgG and IgA antibodies in nasal and vaginal secretions (G3) and the vaccines were shown to be safe and well tolerated by the animals.The increase in IgG and IgA at serum levels did not show satisfactory result in t experimental treatment (G3). However, our study confirms the need for further research to assess the immunomodulatory and immunogenic capacity of other formulations that can be used in the development of a safe and effective commercial product.

Desenvolvimento e imunogenicidade de uma vacina de aplicação intravaginal contra o alphaherpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5) associada a subunidade B recombinante da enterotoxina termolábil de Escherichia coli (rLTB)

O sistema imune de mucosa representa a barreira inicial frente a diversos patógenos 13 que utilizam estas superfícies como porta de entrada no organismo, como é o caso 14 dos alphaherpesvírus bovinos (BoHV). Estes vírus utilizam as mucosas, 15 principalmente nasal e genital, como ponto inicial de replicação, seguido de 16 disseminação local, viremia sistêmica e disseminação neuronal. Devido à grande 17 importância das vias mucosas na transmissão dos BoHV, torna-se evidenciado o 18 interesse no desenvolvimento de vacinas que propiciem imunidade de mucosa 19 contra estes vírus. No presente estudo, 63 fêmeas bovinas da raça Braford foram 20 divididas em sete grupos de nove animais e foram inoculadas por via intravaginal 21 com BoHV-5 inativado, associado à subunidade B recombinante da enterotoxina 22 termolábil de E. coli (rLTB) como segue: G1 (2-hidroxietilcelulose + BoHV-5 + rLTB), 23 G2 (2-hidroxietilcelulose + BoHV-5), G3 (Poloxâmero 407 + BoHV-5 + rLTB), G4 24 (Poloxâmero 407 + BoHV-5), G5 (BoHV-5 + rLTB), G6 (Controle negativo) e G7 25 (Controle positivo). A resposta humoral local e sistêmica induzida nos animais 26 inoculados foi mensurada por meio do teste ELISA indireto (IgA e IgG) e de 27 soroneutralização, e a resposta celular por Elisa direto quantitativo (IL-2 e IFN-28 Gama). Como resultados, na mucosa vaginal, apesar do grupo G5 proporcionar os 29 maiores níveis de IgG, os grupos experimentais com polímeros (G1 e G3) 30 demonstraram-se superiores estatisticamente em relação ao grupo controle positivo 31 (G7), assim como, com relação aos níveis de IgA observados na mucosa vaginal 32 aos 30, 60 e 90 dias após a primeira inoculação. Os grupos G1 e G3 também 33 proporcionaram títulos superiores de anticorpos neutralizantes (log2) em relação aos 34 demais tratamentos (p<0,01) 90 dias pós inoculação, evidenciando a eficiência dos 35 polímeros testados como sistema de entrega do antígeno. Já na mucosa nasal, 36 houve incremento dos níveis de IgA e IgG com o uso das vacinas dos grupos G1 e 37 G3, em relação ao controle positivo, G7 (p<0,05) aos 60 e 90 dias após a primeira 38 inoculação, o que enfatiza a forte relação entre os sistemas de mucosa. A 39 inoculação das vacinas experimentais também resultou em aumento nos níveis de 40 IgA e IgG no soro dos animais, mensurado por ELISA indireto, além de 41 apresentarem títulos de anticorpos neutralizantes aos 60 e 90 dias, detectados 42 através de soroneutralização. Os maiores títulos de anticorpos neutralizantes foram 43 proporcionados pelo grupo G5 (sem polímeros e intramuscular), entretanto, os níveis 44 de IL-2 e IFN-Gama obtidos com o uso dos polímeros foram superiores aos demais 1 grupos aos 30, 60 e 90 dias após primeira inoculação. A vacina intravaginal 2 demonstrou-se capaz de incrementar os níveis de IgA e IgG e de interleucinas no 3 soro e nas mucosas nasal e vaginal dos bovinos imunizados. Estes dados 4 comprovam a capacidade da vacina de aplicação intravaginal em bovinos em 5 estimular uma resposta imune local e sistêmica, além de corroborar a atividade 6 imunoestimulante, em mucosas, da rLTB. Deste modo, esta via de administração de 7 vacinas torna-se uma alternativa interessante, principalmente quando se objetiva 8 gerar proteção local contra patógenos que utilizam as superfícies mucosas como 9 porta de entrada no organismo.

The mucosal immune system represents the initial barrier against several pathogens 13 that use these surfaces as a gateway to the organism, such as bovine 14 alphaherpesviruses (BoHV). These viruses use mucous membranes, mainly nasal 15 and genital, as the initial point of replication, followed by local dissemination, 16 systemic viremia and neuronal dissemination. Due to the great importance of the 17 mucous pathways in the transmission of BoHV, the interest in the development of 18 vaccines that provide mucosal immunity against these viruses becomes evident. In 19 the present study, 63 Braford bovine females were divided into seven groups of nine 20 animals and were inoculated intravaginally with inactivated BoHV-5, associated with 21 the recombinant B subunit of the E. coli thermolabile enterotoxin (rLTB) as follows: 22 G1 (2-hydroxyethylcellulose + BoHV-5 + rLTB), G2 (2-hydroxyethylcellulose + BoHV-23 5), G3 (Poloxamer 407 + BoHV-5 + rLTB), G4 (Poloxamer 407 + BoHV-5), G5 24 (BoHV-5 + rLTB), G6 (Negative control) and G7 (Positive control). The local and 25 systemic humoral response induced in the inoculated animals were measured using 26 the indirect ELISA test (IgA and IgG) and serum neutralization, and the cellular 27 response, direct quantitative Elisa (IL-2 and IFN-Gamma). As a result, in the vaginal 28 mucosa, despite the G5 group providing the highest levels of IgG, the experimental 29 groups with polymers (G1 and G3) showed to be statistically superior in relation to 30 the positive control group (G7), as well as, in relation to the levels of IgA observed in 31 the vaginal mucosa at 30, 60 and 90 days after the first inoculation. Groups G1 and 32 G3 also provided superior titers of neutralizing antibodies (log2) in relation to the 33 other treatments (p <0.01) 90 days after inoculation, showing the efficiency of the 34 tested polymers as an antigen delivery system. In the nasal mucosa, there was an 35 increase in IgA and IgG levels with the use of vaccines in groups G1 and G3, in 36 relation to the positive control, G7 (p<0.05) at 60 and 90 days after the first 37 inoculation, which emphasizes the strong relationship between mucosal systems. 38 The inoculation of experimental vaccines also resulted in increased levels of IgA and 39 IgG in the animals' serum, measured by indirect ELISA, in addition to presenting 40 neutralizing antibody titers at 60 and 90 days, detected through serum neutralization. 41 The highest titers of neutralizing antibodies were provided by the G5 group (without 42 polymers and intramuscular), however, the levels of IL-2 and IFN-Gamma obtained 43 with the use of polymers were higher than the other groups at 30, 60 and 90 days 44 after first inoculation. The intravaginal vaccine has been shown to increase the levels 45 of IgA and IgG and interleukins in the serum and in the nasal and vaginal mucosa of 46 immunized cattle. These data prove the capacity of the vaccine for intravaginal 1 application in cattle to stimulate a local and systemic immune response, in addition to 2 corroborating the immunostimulating activity in mucous membranes of rLTB. Thus, 3 this route of administration of vaccines becomes an interesting alternative, especially 4 when the objective is to generate local protection against pathogens that use mucous 5 surfaces as a gateway into the body.

Indução de anticorpos neutralizantes contra herpesvírus bovino e vírus da diarreia viral bovina por vacinas comerciais e vacina experimental associada com diferentes adjuvantes

O alfaherpesvírus bovino 1 (BoHV-1) e o vírus da diarreia viral bovina (BVDV) são patógenos importantes em bovinos cujas perdas podem ser reduzidas pela vacinação. Este estudo avaliou a resposta sorológica induzida por vacinas comerciais e por uma vacina experimental inativada associada com diferentes adjuvantes. Para isso, grupos de novilhas foram imunizados duas vezes (com intervalo de 30 dias), com nove vacinas comerciais. Amostras de soro foram testadas pela técnica de neutralização viral (VN), para avaliar a indução de anticorpos neutralizantes para seus respectivos vírus, 30 dias após a segunda dose (D60). Para o teste de adjuvante, antígenos de BoHV-1 e BVDV-1 inativados foram combinados com seis adjuvantes diferentes e submetidos ao mesmo protocolo de imunização e sorologia. Sete de nove vacinas comerciais induziram anticorpos contra o BoHV-1 no dia D60, mas apenas três induziram títulos considerados protetores ( 16). A frequência de soroconversão entre as vacinas variou de 0% (0/10 dos animais) a 100% (10/10) e os títulos médios geométricos (GMT) variaram de 0 a 43. A frequência de soroconversão em títulos protetores foi de 100%, 37,5% e 25% para BoHV-1, respectivamente. Somente quatro vacinas induziram títulos neutralizantes contra o BVDV-1 e três contra BVDV-2 no D60. A frequência de soroconversão para o BVDV variou de 0% (0/10 animais) a 100% (10/10) e os títulos médios geométricos (GMT) variaram de 0 a 202. Apenas três vacinas conferiram títulos compatíveis com proteção (> 60). A frequência de soroconversão em títulos protetores foi de 55,5%, 42,8% e 12,5% para BVDV-1, respectivamente. Todas as formulações vacinais experimentais induziram títulos neutralizantes contra BoHV-1 no D60 (a frequência de soroconversão variou de 0% a 100% e o GMT variou de 2 a 20), mas apenas quatro induziram títulos protetores. A frequência de soroconversão em títulos protetores foi de 100%, 33,3%, 30% e 20%, respectivamente. Por outro lado, nenhuma das vacinas experimentais foi capaz de induzir anticorpos neutralizantes para BVDV no D60. Nas condições do presente estudo, a maioria das vacinas comerciais induziu resposta sorológica insatisfatória contra os vírus testados, sendo mais evidente para o BVDV. Entre as vacinas experimentais, o adjuvante Emulsigen - DL90 (DDA) foi o mais eficaz na indução de anticorpos contra o BoHV-1, mas não contra o BVDV. Estes resultados indicam a necessidade de reformulação da composição das vacinas e / ou dos protocolos de imunização, para obter resposta sorológica mais consistente para o BoHV-1 e, principalmente, para o BVDV.

Bovine alphaherpesvirus 1 (BoHV-1) and Bovine viral diarrhea virus (BVDV) are important pathogens of cattle whose losses may be prevented by vaccination. This study evaluated the serological response induced by commercial vaccines and by an experimental vaccine associated with different adjuvants. For this, groups of seronegative heifers were immunized twice (30 days apart) with nine commercial vaccines and tested for virus neutralizing (VN) antibodies to the respective viruses 30 days after the second vaccine dose (D60). For the adjuvant test, inactivated BoHV-1 and BVDV-1 antigens were combined with six different adjuvants and submitted to the same immunization and serology protocol. Seven out of nine commercial vaccines induced VN antibodies to BoHV-1 at day D60, but only three induced titers considered protective ( 16). The frequency of seroconversion among the vaccines varied from 0% (0/10 animals) to 100% (10/10) and the geometric mean titers (GMT) ranged from 0 to 43. The frequency of seroconversion in protective titers was 100%, 37,5% and 25%, respectively. Only four vaccines induced neutralizing titers to BVDV-1 and three to BVDV-2 at D60. The frequency of seroconversion to BVDV among the vaccines varied from 0% (0/10 animals) to 100% (10/10) and the geometric mean titers (GMT) ranged from 0 to 202. Only three vaccines conferred titers compatible with protection (>60). The frequency of seroconversion in protective titers was 55,5%, 42,8% and 12,5% for BVDV-1, respectively. All experimental vaccine formulations induced VN titers against BoHV-1 at D60 (frequency of seroconversion varied from 0% to 100% and GMT= varied from 2 to 20) and four induced protective titers. The frequency of seroconversion in protective titers was 100%, 33,3%, 30% and 20%, respectively. On the other hand, none of the experimental vaccines was able to induce VN antibodies to BVDV at D60. Under the conditions of the present study, most commercial vaccines induced unsatisfactory VN response against the tested viruses, most noticeably to BVDV. Among the experimental vaccines, the adjuvant Emulsigen - DL90 (DDA) was more effective to induce VN antibodies against BoHV-1, but not to BVDV. These results indicate the need for reformulation of vaccine composition and/or immunization protocols as to achieve more consistent serological response to BoHV-1 and, especially, to BVDV.

Análise da atividade anti-apoptótica do gene US3 de alfaherpesvírus bovino tipo 5 em baculovírus

O Alphaherpesvirus bovino tipo 5 (BoHV-5) é um dos principais agentes responsáveis pela meningoencefalite em bovinos no Brasil, causando perdas econômicas significativas. Sabe-se que outros vírus da família Herpesviridae, como o Alphaherpesvirus bovino tipo 1, o Alphaherpesvirus suíno tipo 1 e o Alphaherpesvirus humano tipo 1 e 2, codificam genes homólogos ao BoHV-5, com reconhecida ação no controle da apoptose. O objetivo deste trabalho foi expressar o gene BoHV-5 US3 em um sistema de expressão baseado em baculovírus para a produção da proteína serina/treonina quinase e avaliar sua atividade no controle da apoptose in vitro. Um baculovírus recombinante derivado do Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) contendo o gene US3 e uma deleção no gene p35 anti-apoptótico de baculovírus foi construído usando o sistema Bac-to-BacTM. Este baculovírus recombinante foi utilizado para avaliar a atividade anti-apoptótica do gene US3 em células de inseto comparando-o com outros dois recombinantes de AcMNPV. Um vírus contendo uma cópia funcional do gene anti-apoptótico p35 de AcMNPV e outro AcMNPV p35 knockout com o gene iap-3anti-apoptótico do vírus Anticarsia gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus (AgMNPV). Descobrimos que o nível de caspase (indicador de apoptose) foi maior nas células de inseto infectadas com o vírus recombinante contendo o gene US3 do que nas células infectadas com os recombinantes AcMNPV com os genes p35 e iap-3.Além disso, o gene iap-3AgMNPV foi capaz de substituir eficientemente o gene p35 no controle da apoptose durante a infecção de células de insetos pelo recombinante AcMNPV contendo o gene iap-3. Estes resultados indicam que o gene da proteína quinase BoHV-5 US3 não é capaz de bloquear a apoptose em células de inseto induzidas pela infecção de um AcMNPV p35 knockout

Bovine alphaherpesvirus type 5 (BoHV-5) is one of the main agents responsible for meningoencephalitis in bovines in Brazil, causing significant economic losses. It is known that other viruses of the Herpesviridae family such as Bovine alphaherpesvirus type 1, Swine alphaherpesvirus type 1 and the Human alphaherpesvirus types 1 and 2 encode genes homologous to BoHV-5, with recognized action in the control of apoptosis. The objective of this work was to express the BoHV-5 US3 gene in a baculovirus based expression system for the production of the serine/threonine kinase protein and to evaluate its activity in the control of apoptosis in vitro. A recombinant baculovirus derived from the Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) containing the US3 gene and a deletion in the baculovirus anti-apoptotic gene p35 gene was constructed using the Bac-to-BacTMsystem. This recombinant baculovirus was used to evaluate the anti-apoptotic activity of the US3 gene in insect cells comparing with two other AcMNPV recombinants. One containing a functional copy of the AcMNPV anti-apoptotic p35 gene and an AcMNPV p35 knockout virus with the anti-apoptotic iap-3 gene from Anticarsia gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus (AgMNPV). We found that the caspase level (indicator of apoptosis) was higher in insect cells infected with the US3-contanining recombinant virus than in cells infected with the AcMNPV recombinants containing the p35 and iap-3 genes. Moreover, the AgMNPV iap-3 gene was able to efficiently substitute the p35 gene in the control of apoptosis during infection of insect cellsby the AcMNPV recombinant containing the iap-3 gene. These results indicate that the BoHV-5 US3 protein kinase gene is not able to block apoptosis in insect cells induced by the infection of a p35 knockout AcMNPV.

DERMATÓFITOS EM GATOS SEM DERMATOPATIAS NA REGIÃO METROPOLITANA DE FLORIANÓPOLIS SC

O alfaherpesvírus bubalino 1 (BuHV1) e os alfaherpesvírus bovinos 1 (BoHV1), 5 (BoHV5) e são membros da ordem Herpesvirales, família Herpesviridae, subfamília Alphaherpesvirinae, gênero Varicellovirus. O BoHV1 e o BoHV5 são subdivididos em subtipos (BoHV1.1, 1.2a, 1.2b; BoHV5a, b, c). No Brasil circulam BoHV1 e BoHV5 de todos os subtipos até o presente reconhecidos. Em vista dessa variedade de alfaherpesvírus potencialmente infecciosos para bovinos e bubalinos, o conhecimento sobre estes agentes é essencial para a implementação de medidas de controle ou erradicação. Com o objetivo de permitir algumas comparações entre estes agentes e as respostas por eles induzidas em seus hospedeiros, primeiramente foi realizado o sequenciamento do genoma completo de uma amostra de BuHV1 (b6), isolada a partir de prepúcio de búfalos (Bubalus bubalis) em 1972, na Austrália. O objetivo foi disponibilizar a primeira sequência completa de um alfaherpesvírus bubalino e avaliar o grau de similaridade entre o genoma desse vírus e os alfaherpesvírus de bovinos. O genoma sequenciado compreende 137.452 pares de bases (pb), com um nível de similaridade nucleotídica de 92,2% com BoHV5 (SV507/99) e 76,7% com BoHV1 (NVSL). Estes resultados permitirão estudos futuros buscando reconstruir a história evolutiva destes vírus, a importância de infecções interespécies na geração de variantes destes agentes e possíveis associações entre tais infecções e patogenicidade. Na segunda etapa dos estudos, foram realizados diversos testes sorológicos buscando definir uma metodologia de diagnóstico adequada para a identificação de anticorpos contra BuHV1 e todos os diferentes subtipos de BoHV1 e BoHV5. Inicialmente, 600 amostras de soros de bovinos de campo foram testadas através do teste de soroneutralização (SN), realizada frente aos sete alfaherpesvírus em estudo. Os resultados da SN foram influenciados pela escolha do vírus desafio utilizado no ensaio. Para obter a sensibilidade máxima do teste (259/600), foi necessário combinar resultados positivos frente a pelo menos cinco diferentes amostras virais. Em seguida, foram preparados ensaios do tipo ELISA para detecção de anticorpos utilizando antígenos preparados com cada um dos diferentes tipos/subtipos desses vírus (BuHV1; BoHV1.1, 1.2a, 1.2b; BoHV5a, b, c), individualmente (chamado single ELISA ou sAgELISA). Os resultados obtidos foram comparados com os resultados da soroneutralização (SN). A sensibilidade do sAgELISA variou significativamente conforme a amostra viral utilizada no preparo dos antígenos. Considerando os resultados frente a apenas um antígeno, a maior sensibilidade foi de 96,1% (249/259), obtida com apenas uma amostra de BoHV5c. Foram necessários pelo menos seis antígenos (BuHV1; BoHV1.2a, 1.2b; BoHV5a, b, c) para atingir a sensibilidade máxima do teste (263/259). Assim, foi desenvolvido um ELISA combinando vários antígenos em um mesmo teste (chamado multiple ELISA ou mAgELISA). O mAgELISA detectou 263 amostras positivas, resultando em uma concordância ótima entre sAgELISA e mAgELISA (=0,99). Frente a SN, o mAgELISA apresentou uma sensibilidade de 96,5% e especificidade de 96,1% (=0,93; VPP=95,0%; VPN=97,3%). Essas diferenças não foram estatisticamente significativas. Os resultados obtidos com a SN e mAgELISA foram comparados também a um ELISA comercial para a detecção de anticorpos contra BoHV1. O ELISA comercial utilizado nas comparações não apresentou resultados significativamente diferentes dos demais testes realizados, no entanto, revelou o maior número de resultados discrepantes em relação ao SN, considerado padrão-ouro. Estes resultados revelam que o mAgELISA aqui relatado é adequado para a detecção de anticorpos para BuHV1, BoHV1 e BoHV5, com sensibilidade e especificidade significativamente comparáveis às da SN.

Bubaline alphaherpesvirus 1 (BuHV1), Bovine alphaherpesviruses 1 (BoHV1) and 5 (BoHV5) are members of the order Herpesvirales family Herpesviridae, subfamily Alphaherpesvirinae, genus Varicellovirus. The BoHV1 and BoHV5 are divided into subtypes (BoHV1.1, 1.2a, 1.2b; BoHV5a, b, c). In Brazil, circulates BoHV 1 and BoHV 5 from all subtypes known to the present. In view of this variety of potentially infectious alphaherpesviruses for bovines and buffaloes, knowledge about these agents is essential for the implementation of control or eradication measures. In order to gain a deeper understanding about these agents and the responses induced by them in their hosts, initially , the complete genome sequence of BuHV1-b6, one of the first BuHV1 viruses isolated in Australia in 1972, is reported. The objective was to provide the first complete sequence of a buffalo alphaherpesvirus and to evaluate the degree of similarity between BuHV1 and bovine alphaherpesviruses genomes. The BuHV1-b6 genome is a linear double-stranded DNA molecule, 137,452 bp long, with overall sequence of the 92.2% similarity at the nucleotide level to the reference BoHV5 (SV507/99) strain and 76.7% with BoHV1 (NVSL) strain. These results are expected to be valuable for further studies involving evolutionary chain of these viruses, the interspecies infections importance in generation of variants and possible associations between such infections and pathogenicity. In the second stage of the study, several serological tests were performed in order to define a appropriate diagnostic methodology for the identification of antibodies against BuHV1 and all different subtypes of BoHV1 and BoHV5. Initially, 600 bovine field serum samples were screened in serum neutralization tests (SN) performed against all seven virus types/subtypes. The SN results were influenced by the choice of the challenge virus. The maximum number of positive sera (259/600) was detected by adding the positive results obtained with at least five different viruses. Seven enzyme linked immunoassays were prepared with each of the seven antigens (BuHV1; BoHV1.1, 1.2a, 1.2b; BoHV5a, b, c), individually (single antigen ELISAs; sAgELISAs). The results obtained were compared to the SN. The sensitivity of the sAgELISAs was also influenced by the choice of antigen. Considering the results against only one of them, the best sensitivity was 96.1% (249/259), obtained with BoHV5c. Maximum sAgELISA sensitivity (263/259) was achieved when positive results of at least six viruses (BuHV1; BoHV1.2a, 1.2b; BoHV5a, b, c) were combined. A multiple antigen ELISA (mAgELISA) was then prepared by combining of different viral antigens in the same test. The mAgELISA detected 263 positive samples, resulting an optimum concordance between sAgELISA and mAgELISA (=0.99). When compared to SN, the mAgELISA revealed 96.5% sensitivity and 96.1% specificity (=0.93; PPV=95.0%; NPV=97.3%). These differences were not statistically significant. The results of both SN and mAgELISA were compared to a commercially available (IBRgB) ELISA. The results of the commercial ELISA did not vary significantly in relation to others tests performed, however, revealed the highest number of discrepant results in relation to SN, taken as the gold standard. These results reveal that the mAgELISA reported here is suitable for the detection of antibodies to BuHV1, BoHV1 and BoHV5 with sensitivity and specificity significantly comparable to those of SN.