Resumo

Calf diarrhea causes substantial economic losses in the cattle industry worldwide. Bovine rotavirus A (RVA) is the main viral agent that leads to enteric infection and diarrhea outbreaks in calves throughout the world. The aim of this retrospective (2006-2015) study was to determine the frequency of RVA detection in diarrheic fecal samples from beef and dairy calves from the three main cattle-producing regions of Brazil. Diarrheic fecal samples (n=1,498) of 124 beef and 56 dairy cattle herds from the Midwest, South, and Southeast geographical regions of Brazil were evaluated using the silver-stained polyacrylamide gel electrophoresis (ss-PAGE) technique. RVA double stranded-RNA was identified by the ss-PAGE technique in 410 (27.4%) fecal samples. The frequency of positive samples found in beef calves (31.9%; 328/1,027) was higher than the frequency found in diarrheic fecal samples from dairy calves (17.4%; 82/471). RVA infection was identified in calves from the three Brazilian geographical regions analyzed. However, the frequency of positive diarrheic calves in the Midwest region (39.4%), predominantly beef calves, was higher than in the South (19.4%) and Southeast (17.6%) regions. The temporal distribution of RVA-infected calves evaluated by two five-year periods (2006-2010, 24.5%; 2011-2015, 28.8%) demonstrated a very similar frequency of RVA in both periods. Considering the wide regional and temporal scope of this study, it can be concluded that RVA remains an important etiology of neonatal diarrhea in calves of Brazilian cattle herds.(AU)

A diarreia neonatal ocasiona perdas econômicas importantes na pecuária bovina em todo o mundo. Rotavírus A (RVA) é o principal agente etiológico viral de infecções entéricas e surtos de diarreia em bezerros de rebanhos de corte e leite. O objetivo deste estudo retrospectivo (2006-2015) foi determinar a frequência de detecção de RVA em amostras de fezes diarreicas de bezerros de corte e leite das três principais regiões produtoras de bovinos do Brasil. Amostras de fezes diarreicas (n=1.498) de 124 rebanhos bovinos de corte e 56 rebanhos bovinos de leite das regiões Centro-Oeste, Sul e Sudeste do Brasil foram avaliadas utilizando a técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA). O genoma segmentado de RVA foi identificado pela técnica de EGPA em 410 (27,4%) amostras de fezes. A frequência de amostras positivas encontrada em bezerros de rebanhos de corte (31,9%; 328/1.027) foi maior que a frequência identificada em amostras de fezes diarreicas de bezerros de rebanhos leiteiros (17,4%; 82/471). A infecção por RVA foi identificada em bezerros das três regiões geográficas brasileiras analisadas. No entanto, a frequência de bezerros com diarreia positivos para RVA na região Centro-Oeste (39,4%), predominantemente de bezerros de rebanhos de corte, foi maior que nas regiões Sul (19,4%) e Sudeste (17,6%). A distribuição temporal dos bezerros infectados com RVA avaliados por dois períodos de cinco anos (2006-2010, 24,5%; 2011-2015, 28,8%) demonstrou uma frequência muito semelhante em ambos os períodos. Considerando a amplitude regional e temporal deste estudo, pode-se concluir que RVA continua sendo uma importante etiologia de diarreia neonatal em bezerros de rebanhos bovinos brasileiros.(AU)

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The early use of antimicrobial therapy has been introduced in many farms to prevent diarrhea and respiratory disease in young calves; however, there is controversy about whether this practice has a beneficial effect on the health of these animals. This study evaluated the influence of the early use of antimicrobials on the health and performance of neonatal Holstein calves. Twenty-six Holstein calves were screened and divided into two groups, according to the administration (ATB+), or not (ATB-) of tulathromycin (2.5mg/kg, subcutaneously) within the first 12 hours of life. Calves were evaluated by general clinical examination, fecal score, respiratory score, and external palpation of the umbilical region, besides fecal output of dry matter. Anemia was determined by using an automatic system and, also, using a commercial kit for iron dosage. Diarrhea was diagnosed by a centrifuge-flotation technique using a sugar solution (Cryptosporidium) and multiplex semi-nested RT-PCR (rotavirus/coronavirus). The performance of the calves was estimated by Daily Weight Gain (DWG). The young dairy calves were evaluated within 12 hours of birth (≤12h) and at 3-5th (D3-5), 7-9th (D7-9), 13-15th (D13-15), 20-23rd (D20-23), and 27-30th (D27-30) days of life. No difference was noted between the ATB+ and ATB- groups concerning heart rate, respiratory frequency, and rectal temperature. Erythrogram showed a higher frequency of anemia in ATB- group (P=0.016) at the D3-5 check-up; lower values of serum iron were also observed simultaneously (P=0.051). Thirteen cases of respiratory disease were detected during this study; however, no significant difference was observed between the groups in this regard. The frequency of diarrhea (fecal score 2-3) was high in both groups, peaking at D13-D15. No differences were noted between the groups regarding the frequency of diarrhea when considering the dry fecal matter. The predominant etiological agent for diarrhea was Cryptosporidium spp.. The DWG was similar between groups, with maximum weight reduction on D13-15. The administration of tulathromycin in prophylactic dose (2.5mg/kg) at birth decreased the frequency of anemia but did not influence weight gain or the prevalence of diarrhea.(AU)

O uso precoce de antimicrobianos tem sido adotado em muitas fazendas para profilaxia das diarreias e doença respiratória em bezerras, no entanto existem controvérsias sobre os beneficios desta prática na saúde desses animais. Esta pesquisa avaliou a influência do uso precoce de antimicrobiano na sanidade e desempenho de bezerras holandesas recém-nascidas. Para tanto foram selecionadas 26 bezerras Holandesas distribuídas de acordo com a aplicação (ATB+) ou não (ATB-) de tulatromicina (2,5mg/Kg) por via subcutânea até 12h de vida. As bezerras foram examinadas por meio de exame clínico geral, escore fecal, escore respiratório e palpação externa da região umbilical, além da matéria seca fecal. A presença de anemias foi determinada pelo eritrograma utilizando sistema automático e além da dosagem de ferro utilizando kit comercial. O diagnóstico etiológico das diarreias foi investigado por meio da técnica de flutuação em solução saturada de sacarose (Cryptosporidium) e multiplex semi-nested RT-PCR (rotavírus/coronavírus). O desempenho das bezerras foi estimado pelo ganho de peso. As bezerras foram avaliadas até doze horas após o nascimento (≤12h); 3-5º (D3-5); 7-9º (D7-9); 13-15º (D13-15); 20-23º (D20-23); e 27-30º dias de vida (D27-30). Não foram encontradas diferenças entre os grupos ATB+ e ATB- em relação à frequência cardíaca, frequência respiratória e temperatura retal. O eritrograma revelou maior frequência de anemias no grupo ATB- (P=0,016) no D3-5. Neste momento também foram observados menores valores de ferro sérico (P=0,051). Foram detectados treze casos de doença respiratória durante o estudo, no entanto não foi possível detectar diferença entre os grupos. A frequência de diarreias (escore fecal 2 e 3) foi alta em ambos os grupos, observando-se pico no D13-15 (ATB+=92,3%; ATB-=92,3%). Não observamos diferenças entre os grupos em relação a frequência de diarreia considerando-se a matéria seca fecal. O agente etiológico predominante nas diarreias foi o Cryptosporidium. O ganho de peso diário foi igual entre grupos, com intensa redução no GPD no D13-15. A administração de tulatromicina na dose profilática (2,5mg/Kg) ao nascimento diminuiu a frequência de anemias e não influenciou no ganho de peso e prevalência de diarreias.(AU)

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Calf diarrhea causes substantial economic losses to beef cattle production worldwide. It is a complex multifactorial pathological condition influenced by infectious, nutritional and environmental factors. The present study focused on analyzing the pathological and molecular characterization of bovine rotavirus A (BoRVA) during a diarrhea outbreak in a beef cattle herd located in the state of Mato Grosso, central-western region, Brazil. The outbreak caused high morbidity (80%) and mortality (12%) among 1,100 calves up to 30 days of age. The BoRVA was identified in 53.3% (16/30) of the diarrheic fecal samples analyzed using the silver-stained polyacrylamide gel electrophoresis (ss-PAGE) technique. The nucleotide sequence analysis of VP7 (G genotype) and VP4 (P genotype) via RT-PCR from eight BoRVA-positive fecal samples showed the genotypes G6P[5] (n = 6), G6P[11] (n = 1) and G6P[X] (n = 1). Three calves were necropsied and the gross findings included edema and thickened, wrinkled bowel mucosa in the small intestine. Microscopic lesions were confined to the villi of the small intestine, characterized mainly by villus fusion and moderate multifocal lymphoplasmacytic enteritis. Immunohistochemical examination of three cases was positive for BoRVA. The 53.3% of the diarrheic fecal samples that were positive for BoRVA in this study suggested that RV was the etiological agent involved in this neonatal calf diarrhea outbreak.(AU)

A diarreia neonatal provoca perdas econômicas substanciais na produção de bovinos em todo o mundo. É uma condição patológica multifatorial complexa influenciada por fatores infecciosos, nutricionais e ambientais. O presente estudo teve por objetivo caracterizar o rotavírus tipo A (BoRVA) através da análise patológica e molecular durante um surto de diarreia em um rebanho bovino localizado no estado de Mato Grosso, região centro-oeste, no Brasil. O surto causou alta morbidade (80%) e letalidade (12%) em um rebanho composto 1.100 bezerros até 30 dias de idade. O BoRVA foi identificado em 53,3% (16/30) das amostras fecais diarreicas analisadas usando a técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida corada com prata (ss-PAGE). A análise da sequência nucleotídica de VP7 (genótipo G) e VP4 (genótipo P) via RT-PCR a partir de oito amostras fecais BoRVA-positivas mostrou os genótipos G6P [5] (n = 6), G6P [11] (n = 1) e G6P [X] (n = 1). Três bezerros foram submetidos à necropsia e os achados macroscópicos incluíram edema e espessamento da mucosa do intestino delgado. As lesões microscópicas foram observadas nas vilosidades do intestino delgado, sendo caracterizadas principalmente por fusiosamento de vilosidades e enterite linfoplasmocitária multifocal moderada. O exame imunohistoquímico dos três casos foram positivos para o BoRVA. As 53,3% das amostras fecais diarreicas positivas para o BoRVA sugeriram que o rotavírus é o agente etiológico envolvido neste surto de diarreia neonatal em bezerros.(AU)

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O objetivo deste estudo foi detectar rotavírus em fezes de bezerros com diarreia em Uberaba, MG, e caracterizar os genes VP7 e VP4 por meio da genotipagem e da análise filogenética. Setenta e quatro amostras foram coletadas entre novembro de 2008 e setembro de 2009. A detecção do vírus foi feita por teste de aglutinação e as amostras positivas foram submetidas à transcrição reversa, seguida de reação em cadeia da polimerase (RT-PCR), tipagem por PCR e sequenciamento. A taxa de detecção de rotavírus foi de 6,8% e todas as amostras apresentaram o genótipo G6P[5]. A análise filogenética mostrou que as amostras do genótipo G6 pertencem à linhagem IV e que, para ambos os genes (VP7 e VP4), as amostras deste estudo compõem um sub-cluster à parte daquele das cepas referências e das amostras campo mais similares. O alinhamento das sequências de aminoácidos deduzidas mostrou substituições em regiões antigênicas quando comparadas com as sequências das cepas bovinas UK e NCDV, presentes nas vacinas disponíveis no Brasil. Uma nova sublinhagem genética de G6P[5] foi evidenciada neste estudo. Substituições de aminoácidos nas regiões antigênicas dos rotavírus e a circulação de novas variantes podem representar desafios para as vacinas utilizadas atualmente. O presente estudo contribui para a compreensão da epidemiologia dos rotavírus bovinos no Brasil.(AU)

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The aim of the present study was to characterize changes in acute phase protein levels according to the occurrence of rotavirus diarrhea in calves in the first month of life. Blood and fecal samples were taken before colostrum intake and at 1, 2, 7, 15, 21 and 30 days of age from 24 Holstein calves allotted in three experimental groups: calves that did not present diarrhea (group A), calves that presented diarrhea, but tested negative for rotavirus in feces (group B), and calves that presented diarrhea and tested positive for rotavirus in feces (group C) (experiment 1). When the animals presented episodes of diarrhea, blood and fecal samples were taken at 24-hour intervals until the end of clinical signs (experiment 2). Serum proteins were separated by SDS-PAGE technique and rotavirus in feces was detected by PAGE. Data of experiment 1 were analyzed by ANOVA and Tukey's test, considered significant at P<0.05. Data of experiment 2 were subjected to the HSD test. Total protein, globulins, and IgG concentrations were lower in group C than in groups A and B. Ceruloplasmin and transferrin levels were higher in group C than in groups A and B. Serum concentrations of haptoglobin and α1-acid glycoprotein did not differ significantly between groups throughout the experimental period. Calves presented diarrhea between 10.4 and 14.6 days of age in group B, and between 10.3 and 14.6 days of age in group C. In the moments of diarrhea manifestation, least square means of IgA, haptoglobin and α1-acid glycoprotein concentrations did not differ significantly between groups B and C, but ceruloplasmin and transferrin concentrations were higher in group C than in group B, as opposed to what occurred with IgG levels. These findings show that optimizing passive immunity transfer of immunoglobulins decrease the likelihood of calves developing diarrhea caused by rotavirus. In addition, ceruloplasmin presents characteristics of a biomarker of rotavirus infection in calves.(AU)

O objetivo do presente estudo foi avaliar alterações nos teores de proteínas de fase aguda de acordo com a ocorrência de diarreia por rotavírus em bezerros no decorrer do primeiro mês de vida. Amostras de sangue e fezes de 24 bezerros da raça Holandesa foram coletadas antes da ingestão de colostro e com um, dois, sete, quinze, vinte um e trinta dias de idade, sendo os bezerros alocados em três grupos: bezerros que não apresentaram diarreia (grupo A), bezerros que apresentaram diarreia, mas foram negativos para a detecção de rotavírus nas fezes (grupo B) e bezerros que apresentaram diarreia e foram positivos para detecção de rotavírus nas fezes (grupo C) (experimento 1). Sempre que os animais apresentavam episódio de diarreia, amostras de sangue e fezes eram coletadas em intervalos de 24 horas até o término dos sinais clínicos (experimento 2). As proteínas séricas foram separadas por meio da técnica de SDS-PAGE e a pesquisa de rotavírus nas fezes foi realizada por meio da técnica de PAGE. Os resultados do experimento 1 foram analisados por meio de ANOVA e do teste de Tukey, considerado significativo quando P<0,05. Os dados do experimento 2 foram submetidos ao teste HSD. Os teores de proteína total, globulinas e IgG foram menores no grupo C que nos grupos A e B, os teores de ceruloplasmina e transferrina foram maiores no grupo C que nos grupos A e B e as concentrações séricas de haptoglobina e α1-glicoproteína ácida não diferiram significativamente entre grupos. Os bezerros manifestaram diarreia, em média, com 10,4 a 14,6 dias de idade no grupo B e com 10,3 a 14,6 dias de idade no grupo C. Nos momentos de manifestação de diarreia, os teores de IgA, haptoglobina e α1-glicoproteína ácida não diferiram significativamente entre os grupos B e C, mas os teores de ceruloplasmina e transferrina foram maiores no grupo C que no grupo B, oposto ao verificado para o teor de IgG. Esses achados mostram que a otimização da transferência de imunidade passiva de imunoglobulinas reduz a probabilidade de os animais apresentarem diarreia por rotavírus. Adicionalmente, a ceruloplasmina apresenta características de um biomarcador da infecção por rotavírus em bezerros.(AU)

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A diarreia neonatal dos bezerros (DNB) é um dos eventos de saúde mais importantes durante o período de criação de bezerros de corte, sendo responsável por grande parte da morbidade e mortalidade nesta fase. Entre as medidas para mitigar o risco de surtos de DNB, a vacinação da vaca na última fase da gestação é uma das mais importantes. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a eficácia da vacinação pré-parto contra DNB, especialmente Rotavírus Bovino tipo A (BoRVA) e Coronavírus Bovino (BCoV), em animais da raça Nelore. Um total de 117 animais, divididos em vacas (n=81) e novilhas (n=36) foram distribuídos em dois grupos experimentais, sendo estes: grupo de animais vacinados (VAC: vacas=40; novilhas=19) e grupo de animais não vacinados (NVAC: vacas=41; novilhas=17). O tratamento dos animais ocorreu entre 60 a 50 dias antes da data prevista para o parto, sendo aplicado no grupo VAC uma única dose de uma vacina comercial (2mL), administrado por via intramuscular, e no grupo NVAC uma dose de solução salina 0,9%. Amostras de sangue foram coletadas imediatamente antes da vacinação e após 30 dias, para avaliar a resposta de anticorpos específicos (IgG1) contra BoRVA e BCoV. O nascimento dos bezerros foi monitorado e a transferência de imunidade passiva foi avaliada entre o segundo e o terceiro dias de vida. A diarreia foi monitorada nos primeiros 30 dias de idade, e amostras de fezes foram coletadas para identificação do agente etiológico em animais com diarreia. Como controle, amostras de fezes de bezerros saudáveis com idade semelhante à dos animais com diarreia, também foram coletadas. Os anticorpos específicos (IgG1) contra BoRVA e BCoV foram medidos usando a técnica Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA). A comparação de médias pelo teste T de Student mostrou títulos mais elevados de IgG1 contra BoRVA e BCoV no grupo VAC quando comparado ao grupo NVAC na categoria de vacas (P<0,0001) e no total de animais (P<0,0001). Em relação aos bezerros, não houve diferenças (P>0,05) entre os grupos para a concentração de proteína total sérica (PTS) e taxa (%) de falha da transferência imune passiva (FTIP). O título de IgG1 específico no soro de bezerros refletiu a resposta das mães, observando títulos mais elevados de IgG1 para BoRVA (P<0,0016) e BCoV (P<0,0095) nos bezerros nascidos da categoria de vacas do grupo VAC; e títulos mais elevados de IgG1 para BoRVA (P<0,0171) e BCoV (P<0,0200) nos bezerros nascidos do total de animais do grupo VAC. A incidência geral de diarreia observada foi de 18,6% (11/59) e 29,3% (17/58) nos bezerros nascidos do grupo VAC e NVAC, respectivamente. Apesar da diferença observada, o pequeno tamanho amostral não permitiu detectar diferenças estatísticas entre os grupos experimentais para diarreia (P>0,05). Entre bezerros com diarreia, o agente mais prevalente foi o BoRVA. A vacinação pré-parto com uma única dose da vacina testada aumentou os títulos de IgG1 contra BCoV e BoRVA, podendo ser utilizada como estratégia preventiva para diminuir a ocorrência de DNB em animais da raça Nelore.

Neonatal calf diarrhea (NCD) is one of the most important health events during the rearing period of beef calves, accounting for much of the morbidity and mortality at this stage. Among the measures to mitigate the risk of NCD outbreaks, cow vaccination in the last stage of pregnancy is one of the most important. The objective of this research was to evaluate the effectiveness of prepartum vaccination against NCD, especially Bovine Rotavirus type A (BoRVA) and Bovine Coronavirus (BCoV), in Nelore animals. A total of 117 animals, divided into cows (n=81) and heifers (n=36) were divided into two experimental groups, namely: vaccinated animal group (VAC: cows=40; heifers=19) and animal group unvaccinated (NVAC: cows=41; heifers=17). The treatment of the animals occurred between 60 to 50 days before the expected date of calving, with a single dose of a commercial vaccine (2mL) being applied to the VAC group, administered intramuscularly, and to the NVAC group a dose of saline solution 0, 9%. Blood samples were collected immediately before vaccination and after 30 days to assess the specific antibody response (IgG1) against BoRVA and BCoV. The calf birth was monitored and the transfer of passive immunity was evaluated between the second and third days of life. Diarrhea was monitored in the first 30 days of age, and stool samples were collected to identify the etiologic agent in animals with diarrhea. As a control, fecal samples from healthy calves with age similar to that of animals with diarrhea were also collected. Specific antibodies (IgG1) against BoRVA and BCoV were measured using the Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA) technique. Comparison of means by Student's t test showed higher IgG1 titers against BoRVA and BCoV in the VAC group when compared to the NVAC group in the cows category (P<0.0001) and in total animals (P<0.0001) . In relation to calves, there were no differences (P>0.05) between groups for serum total protein concentration (STP) and rate (%) of passive immune transfer failure (PITF). The specific IgG1 titer in the serum of calves reflected the response of the dams, observing higher IgG1 titers for BoRVA (P<0.0016) and BCoV (P<0.0095) in calves born from the category of cows in the VAC group; and higher IgG1 titers for BoRVA (P<0.0171) and BCoV (P<0.0200) in calves born from the total number of animals in the VAC group. The overall incidence of diarrhea observed was 18.6% (11/59) and 29.3% (17/58) in calves born in the VAC and NVAC groups, respectively. Despite the observed difference, the small sample size did not allow detecting statistical differences between the experimental groups for diarrhea (P>0.05). Among calves with diarrhea, the most prevalent agent was BoRVA. Prepartum vaccination with a single dose of the tested vaccine increased IgG1 titers against BCoV and BoRVA, and can be used as a preventive strategy to reduce the occurrence of NCD in Nelore animals.

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Group A Rotavirus (RVA) is one of the most common causes of diarrhea in humans and several animal species. A SYBR-Green Real-Time polymerase chain reaction (PCR) was developed to diagnose RVA from porcine fecal samples, targeting amplification of a 137-bp fragment of nonstructural protein 5 (NSP5) gene using mRNA of bovine NADH-desidrogenase-5 as exogenous internal control. Sixty-five samples were tested (25 tested positive for conventional PCR and genetic sequencing). The overall agreement (kappa) was 0.843, indicating 'very good' concordance between tests, presenting 100% of relative sensitivity (25+ Real Time PCR/25+ Conventional PCR) and 87.5% of relative sensitivity (35- Real Time PCR/40- Conventional PCR). The results also demonstrated high intra- and inter-assay reproducibility (coefficient of variation ≤1.42%); thus, this method proved to be a fast and sensitive approach for the diagnosis of RVA in pigs...

Rotavírus do grupo A (RVA) é uma das causas mais frequentes de diarreias em humanos e várias espécies animais. Um teste de PCR em Tempo Real com SYBR-Green foi desenvolvido visando o diagnóstico de RVA a partir de fezes suínas, através da amplificação de um fragmento de 137 pares de bases do gene da proteína não estrutural 5 (NSP5) viral e de mRNA de NADH-desidrogenase-5 bovina como controle interno exógeno. Foram testadas 65 amostras (25 delas positivas por PCR convencional e sequenciamento nucleotídico). A concordância entre os testes foi de 0,843, considerada "muito boa", apresentando 100% de sensibilidade relativa (25+ PCR Tempo Real/25+ PCR convencional) e 87,5% de sensibilidade relativa (35- PCR Tempo Real/40- PCR convencional). Os resultados também demonstraram elevada reprodutibilidade inter e intra-ensaio (coeficiente de variação ≤ 1,42%); portanto, este método demonstrou ser uma rápida e sensível alternativa para o diagnóstico de RVA em suínos...

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This report describes the clinical manifestation of different Salmonella serovars in dairy calves. S. typhimurium was identified in faecal samples of a calf with rectal prolapse and in faecal samples and mesenteric lymph nodes of a calf with necrosis at the tip of the tail. S. agona was identified in faecal samples of a calf with diarrhoea but no other clinical manifestation, and S. dublin was observed in faecal and organ samples from a calf with neurological symptoms. Assays to differentiate between the main enteric pathogens (Enteropathogenic E. coli, rotavirus and coronavirus) were performed and were negative. Due to the negative impact of salmonellosis and occurrence of different serovars and clinical manifestations in calves, the correct diagnosis is important to identify control and prophylactic measures in a dairy herd.

Este relato de caso descreve a manifestação clínica de diferentes sorovares de Salmonella em bezerros leiteiros. A S. typhimurium foi identificado em amostras fecais de um bezerro com prolapso rectal e em amostras fecais e linfonodos mesentéricos de um bezerro com necrose na ponta da cauda. Já a S. agona foi identificada em amostras de fezes de um bezerro com diarréia, mas sem nenhuma outra manifestação clínica, e a S. dublin foi observada em amostras de fezes e de órgãos a partir de um bezerro com sinais clínicos neurológicos. Diagnóstico diferencial para os principais patógenos entéricos (E. coli enteropatogênica, rotavirus e coronavirus) foram realizados e foram negativos. Devido ao impacto negativo da salmonelose e a ocorrência de diferentes sorotipos e manifestações clínicas em bezerros, o diagnóstico correto é importante para identificar formas de controle e medidas profiláticas no rebanho leiteiro.

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The episodes of diarrhea caused by neonatal bovine rotavirus group A (BoRVA) constitute one of the major health problems in the calf rearing worldwide. The main G (VP7) and P (VP4) genotypes of BoRVA strains involved in the etiology of diarrhea in calves are G6P[1], G10P[11], G6P[5], and G8P[1]. However, less frequently, other G and P genotypes have been described in BoRVA strains identified in diarrheic fecal samples of calves. This study describes the identification and molecular characterization of an emerging genotype (G6P[11]) in BoRVA strains involved in the etiology of a diarrhea outbreak in beef calves in a cattle herd of high production in extensive management system. The diarrhea outbreak, which showed high morbidity (60%) and lethality (7%) rates, occurred in calves (n= 384) Nelore (Bos indicus) up to 30-day-old from the State of Mato Grosso do Sul, Brazil. BoRVA was identified in 80% (16/20) of the fecal samples analyzed by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) technique. In all PAGE-positive fecal samples were amplified products with 1,062-bp and 876-bp in the RT-PCR assays for VP7 (G type) and VP4 (VP8*) (P type) of BoRVA, respectively. The nucleotide sequence analysis of VP7 and VP4 genes of four wild-type BoRVA strains showed G6-III P[11]-III genotype/lineage. The G6P[11] genotype has been described in RVA strains of human and animal hosts, however, in calves this genotype was only identified in some cross-sectional studies and not as a single cause of diarrhea outbreaks in calves with high morbidity and lethality rates as described in this study...

Os episódios de diarreia neonatal ocasionados pelo rotavírus bovino grupo A (BoRVA) constituem-se em um dos principais problemas sanitários na criação de bezerros em todo o mundo. Os principais genotipos G (VP7) e P (VP4) de cepas de BoRVA envolvidos na etiologia da diarreia em bezerros são G6P[1], G10P[11], G6P[5] e G8P[1]. No entanto, com menor frequência, outros genotipos G e P têm sido descritos em cepas de BoRVA identificadas em amostras de fezes diarreicas de bezerros. Este estudo descreve a identificação e caracterização molecular de um genotipo emergente (G6P[11]) em cepas de BoRVA envolvidas na etiologia de um surto de diarreia em bezerros de um rebanho bovino de corte de alta produção em sistema de manejo extensivo. O surto, que apresentou altas taxas de morbidade (60%) e de letalidade (7%), ocorreu em bezerros (n=384) da raça Nelore (Bos indicus) com até 30 dias de idade, provenientes do estado do Mato Grosso do Sul, Brasil. O BoRVA foi identificado em 80% (16/20) das amostras fecais analisadas pela técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE). Em todas as amostras fecais PAGE-positivas foi possível a amplificação por RT-PCR de produtos com 1.062 pb e 876 pb referentes aos genes VP7 (G tipo) e VP4 (VP8*) (P tipo), respectivamente, de BoRVA. A análise da sequência de nucleotídeos dos genes VP7 e VP4 de quatro cepas de BoRVA demonstrou a presença do genotipo/linhagem G6-III P[11]-III. O genotipo G6P[11] tem sido descrito em cepas de RVA de hospedeiros humanos e animais. Contudo, em bezerros, este genotipo foi apenas identificado em alguns estudos transversais e não como a única causa de surtos de diarreia em bezerros com altas taxas de morbidade e...

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The identification of pathogens of viral (Rotavirus, Coronavirus), parasitic (Toxocara spp.) and bacterial (Escherichia coli, Salmonella spp., Rhodococcus equi) origin shed in feces, and the virulence profile of R. equi and E. coli isolates were investigated in 200 samples of sand obtained from 40 parks, located in central region of state of Sao Paulo, Brazil, using different diagnostic methods. From 200 samples analyzed, 23 (11.5%) strains of R. equi were isolated. None of the R. equi isolates showed a virulent (vapA gene) or intermediately virulent (vapB gene) profiles. Sixty-three (31.5%) strains of E. coli were identified. The following genes encoding virulence factors were identified in E. coli: eae, bfp, saa, iucD, papGI, sfa and hly. Phylogenetic classification showed that 63 E. coli isolates belonged to groups B1 (52.4%), A (25.4%) and B2 (22.2%). No E. coli serotype O157:H7 was identified. Eggs of Toxocara sp. were found in three parks and genetic material of bovine Coronavirus was identified in one sample of one park. No Salmonella spp. and Rotavirus isolates were identified in the samples of sand. The presence of R. equi, Toxocara sp, bovine Coronavirus and virulent E. coli isolates in the environment of parks indicates that the sanitary conditions of the sand should be improved in order to reduce the risks of fecal transmission of pathogens of zoonotic potential to humans in these places.

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Rotavirus is an important cause of neonatal diarrhea in humans and several animal species, including calves. A study was conducted to examine 792 fecal samples collected from calves among 65 dairy and beef herds distributed in two of Brazil's major livestock producing regions, aiming to detect the occurrence of rotavirus and perform a molecular characterization of the rotavirus according to G and P genotypes in these regions. A total of 40 (5.05%) samples tested positive for rotavirus by the polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) technique. The molecular characterization was performed by multiplex semi-nested RT-PCR reactions, which indicated that the associations of genotypes circulating in herds in Brazil's southeastern region were G6P[11], G10P[11], G[-]P[5] + [11], G[-]P[6] in the state of São Paulo and G6P[11], G8P[5], G11P[11], G10P[11] in the state of Minas Gerais. In the central-western region, the genotypes G6P[5] + [11], G6P[5], G8P[-], G6P[11], G [-] P[1], G[-] P[11], and G[-] P[5] were detected in the state of Goiás, while the genotypes G6P[5], G8[P11], G6[P11], G8[P1], G8[P5], G6[P1] were circulating in herds in the state of Mato Grosso do Sul. The genotypic diversity of bovine rotavirus found in each region under study underlines the importance of characterizing the circulating samples in order to devise the most effective prophylactic measures.

Rotavírus é uma importante causa de diarreia neonatal em humanos e várias espécies animais, incluindo bezerros. Foi realizado um estudo a partir de 792 amostras fecais colhidas de bezerros, provenientes de 65 rebanhos de leite e corte distribuídos em duas das maiores regiões produtoras no Brasil, com o objetivo de se detectar a ocorrência de rotavírus e realizar a sua caracterização molecular quanto aos genotipos G e P nestas regiões. Um total de 40 (5,05%) de amostras testadas foram positivas para rotavírus pela técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE). A caracterização molecular foi realizada através de reações do tipo Multiplex semi-nested RT-PCR demonstrando que as associações de genotipos circulantes em rebanhos da região Sudeste foram G6P[11], G10[P11], G[-]P[5]+[11], G[-]P[6] no Estado de São Paulo e G6P[11], G8P[5], G11P[11], G10P[11] no Estado de Minas Gerais. Na região Centro-Oeste, foram detectados no Estado de Goiás os genotipos G6P[5]+[11], G6P[5], G8P[-], G6P[11], G[-]P[1], G[-]P[11], G[-]P[5] enquanto os genotipos G6P[5], G8[P11], G6[P11], G8[P1], G8[P5], G6[P1] eram circulantes em rebanhos do Estado do Mato Grosso do Sul. A diversidade genotípica de rotavírus bovino encontrada em cada região estudada justifica a importância da caracterização das amostras circulantes para medidas profiláticas mais efetivas.

Resumo

A diarreia em bezerros causa prejuízos econômicos substanciais à produção de bovinos de corte em todo o mundo. Trata-se de uma condição patológica multifatorial complexa, influenciada por fatores infecciosos, nutricionais e ambientais. O presente estudo teve por objetivo analisar a caracterização patológica e molecular do rotavírus bovino tipo A (BoRVA) durante um surto de diarreia neonatal em um rebanho de bovinos de corte localizado no estado de Mato Grosso, região centro-oeste do Brasil. Dos 1.100 bezerros de até 30 dias presentes na propriedade, o vírus ocasionou uma morbidade e letalidade de 80 e 12% respectivamente. O BoRVA foi identificado em 53,3% (16/30) das amostras fecais diarreicas analisadas utilizando a técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida corada com prata (EGPA). A análise da sequência de nucleotídeos de VP7 (genótipo G) e VP4 (genótipo P) por RT-PCR de oito amostras fecais positivas para BoRVA identificou os genótipos G6P [5] (n = 6), G6P [11] (n = 1) e G6P [X] (n = 1). Necropsia de três bezerros foi realizada e os achados macroscópicos incluíram edema, espessamento da mucosa e aparência enrugada no intestino delgado. As lesões microscópicas foram confinadas às vilosidades do intestino delgado, caracterizadas principalmente por atrofia e lesões inflamatórias não supurativas. O exame imunohistoquímico dos três casos foi positivo para BoRVA. As 53,3% das amostras fecais diarreicas que foram positivas para o BoRVA neste estudo sugeriram que o rotavírus (RV) foi o agente etiológico envolvido neste surto de diarreia neonatal (DN) bovina. O RV apresenta variabilidade e complexidade genômicas, e somente através da caracterização molecular das cepas de BoRVA que circulam nos rebanhos, os genótipos mais frequentes poderão ser determinados e assim contribuir com o desenvolvimento de vacinas para DN e melhorias de programas de controle e profilaxia eficientes.

Calf diarrhea causes substantial economic losses to beef cattle production worldwide. It is a complex multifactorial pathological condition influenced by infectious, nutritional and environmental factors. The present study focused on analyzing the pathological and molecular characterization of bovine rotavirus A (BoRVA) during a diarrhea outbreak in a beef cattle herd located in the state of Mato Grosso, central-western region, Brazil. The outbreak caused high morbidity (80%) and lethality (12%) among 1,100 calves up to 30 days of age. The BoRVA was identified in 53.3% (16/30) of the diarrheic fecal samples analyzed using the silver-stained polyacrylamide gel electrophoresis (ss-PAGE) technique. The nucleotide sequence analysis of VP7 (G genotype) and VP4 (P genotype) via RT-PCR from eight BoRVA-positive fecal samples showed the genotypes G6P[5] (n = 6), G6P[11] (n = 1) and G6P[X] (n = 1). Three calves were necropsied and the gross findings included edema and thickened, wrinkled bowel mucosa in the small intestine. Microscopic lesions were confined to the villi of the small intestine, characterized mainly by atrophy and non-suppurative inflammatory lesions. Immunohistochemical examination of three cases was positive for BoRVA. The 53.3% of the diarrheic fecal samples that were positive for BoRVA in this study suggested that RV was the etiological agent involved in this neonatal calf diarrhea outbreak. Rotavirus shows genomic variability and complexity, and only through molecular characterization of BoRVA strains circulating in cattle herds can the most frequent genotypes be determined and help improving vaccines for calf diarrhea and implement efficient control and prophylaxis program.

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Mexican oregano (Lippia graveolens) is a plant found in Mexico and Central America that is traditionally used as a medicinal herb. In the present study, we investigated the antiviral activity of the essential oil of Mexican oregano and its major component, carvacrol, against different human and animal viruses. The MTT test (3-4,5-dimethythiazol-2yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide) was conducted to determine the selectivity index (SI) of the essential oil, which was equal to 13.1, 7.4, 10.8, 9.7, and 7.2 for acyclovir-resistant herpes simplex virus type 1 (ACVR-HHV-1), acyclovir-sensitive HHV-1, human respiratory syncytial virus (HRSV), bovine herpesvirus type 2 (BoHV-2), and bovine viral diarrhoea virus (BVDV), respectively. The human rotavirus (RV) and BoHV-1 and 5 were not inhibited by the essential oil. Carvacrol alone exhibited high antiviral activity against RV with a SI of 33, but it was less efficient than the oil for the other viruses. Thus, Mexican oregano oil and its main component, carvacrol, are able to inhibit different human and animal viruses in vitro. Specifically, the antiviral effects of Mexican oregano oil on ACVR-HHV-1 and HRSV and of carvacrol on RV justify more detailed studies.

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Cryptosporidium spp. é um coccídeo pertencente ao filo Apicomplexa responsável por infectar e causar doença em ampla variedade de hospedeiros, incluindo o homem. Em bovinos, a maior prevalência é registrada nos animais com até um mês de idade que apresentam intensa diarreia aquosa, desidratação e apatia, apesar de se tratar de uma doença auto limitante. O objetivo deste trabalho foi estudar a dinâmica da criptosporidiose em bezerros neonatos e avaliar a eficácia do toltrazuril na metafilaxia da doença. Em uma propriedade rural leiteira localizada no estado de Minas Gerais, foram acompanhados 36 bezerras do nascimento aos 28 dias de idade e criados em sistema de casinha individual. As bezerras foram aleatoriamente divididas em três grupos, sendo o G1 o grupo controle, o G2 o grupo de animais que receberam via oral tratamento de 20 mg/Kg de p.v. de toltrazuril ao nascimento e o G3 o grupo de bezerros que receberam via oral dois tratamentos de 20 mg/Kg de p.v. da droga ao nascimento e ao quinto dia de idade. Amostras de fezes foram coletadas nos dias 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 21 e 28 e processadas pela técnica de Ziehl-Neelsen modificada a fim de determinar a ocorrência e a intensidade da infecção por Cryptosporidium spp. Além disso, todas as amostras de fezes foram avaliadas quanto à presença de rotavírus bovino em associação com o parasita. A frequência de criptosporiodiose nos bezerros do experimento foi de 91,66% e os animais do grupo controle excretaram oocistos a partir do dia 7, o pico de eliminação ocorreu nos dias 9 a 15 e no dia 28 não foram identificados animais com fezes positivas para o Cryptosporidium spp. O rotavírus bovino foi identificado em 11,12% dos animais em momentos em que não havia excreção de oocistos nas fezes e, portanto, não foi observada associação entre os dois enteropatógenos, o que foi reforçado pela alta correlação entre ocorrência de diarreia e a infecção por Cryptosporidium spp. O toltrazuril administrado tanto em um como em dois momentos não foi capaz de inibir ou reduzir a excreção de oocistos e a intensidade da diarreia. Os animais tratados dos grupos G2 e G3 apresentaram o mesmo padrão de eliminação de oocisto que os bezerros do grupo controle. Conclui-se que o toltrazuril não foi eficaz na metafilaxia da criptosporidiose em bezerros neonatos quando administrado na dose de 20 mg/Kg de p. v. ao nascimento e aos cinco dias de idade

Cryptosporidium spp. is a coccidian of the phylum Apicomplexa responsible for infect and cause disease in a wide variety of hosts, including man. In cattle, the highest prevalence is recorded in animals up to one month of age demonstrating severe watery diarrhea, dehydration and apathy, even though it is a self-limiting disease. The objective of this work was to study the dynamics of cryptosporidiosis in newborn calves and evaluate the efficacy of toltrazuril in diseases metaphylaxis. On a dairy farm in the state of Minas Gerais, were followed 36 calves from birth to 28 days of age and reared in individual house system. The calves were randomly divided into three groups: the control group G1, G2 the group of animals that received oral treatment with 20 mg/kg b.w. toltrazuril birth and G3 group of calves received two treatments orally 20 mg / kg P.V. drug the birth and five days old. Fecal samples were collected on days 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 21 and 28 and processed by the Ziehl-Neelsen stain modified to determine the occurrence and intensity of infection by Cryptosporidium spp. Moreover, all stool specimens were evaluated for the presence of bovine rotavirus in association with the parasite. The frequency criptosporiodiose the experimental calves was 91.66% and animals excreted oocysts control group from day 7, the peak deletion occurred on days 9 to 15 and on day 28 animals with positive stool were identified for Cryptosporidium spp. The bovine rotavirus was identified in 11-12% of animals in times when there was no excretion of oocysts in the feces and therefore, no association was observed between the two enteropathogens, which was reinforced by the high correlation between the occurrence of diarrhea and infection Cryptosporidium spp. Toltrazuril administered both in one as in two times was not able to inhibit or reduce the excretion of oocysts and intensity of diarrhea. Treated animals of G2 and G3 showed the same pattern oocyst elimination of calves in the control group. It is concluded that toltrazuril was not effective in metafilaxia of cryptosporidiosis in neonatal calves when administered at a dose of 20 mg / kg p. v. at birth and at five days of age

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Cryptosporidium spp. é um coccídeo pertencente ao filo Apicomplexa responsável por infectar e causar doença em ampla variedade de hospedeiros, incluindo o homem. Em bovinos, a maior prevalência é registrada nos animais com até um mês de idade que apresentam intensa diarreia aquosa, desidratação e apatia, apesar de se tratar de uma doença auto limitante. O objetivo deste trabalho foi estudar a dinâmica da criptosporidiose em bezerros neonatos e avaliar a eficácia do toltrazuril na metafilaxia da doença. Em uma propriedade rural leiteira localizada no estado de Minas Gerais, foram acompanhados 36 bezerras do nascimento aos 28 dias de idade e criados em sistema de casinha individual. As bezerras foram aleatoriamente divididas em três grupos, sendo o G1 o grupo controle, o G2 o grupo de animais que receberam via oral tratamento de 20 mg/Kg de p.v. de toltrazuril ao nascimento e o G3 o grupo de bezerros que receberam via oral dois tratamentos de 20 mg/Kg de p.v. da droga ao nascimento e ao quinto dia de idade. Amostras de fezes foram coletadas nos dias 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 21 e 28 e processadas pela técnica de Ziehl-Neelsen modificada a fim de determinar a ocorrência e a intensidade da infecção por Cryptosporidium spp. Além disso, todas as amostras de fezes foram avaliadas quanto à presença de rotavírus bovino em associação com o parasita. A frequência de criptosporiodiose nos bezerros do experimento foi de 91,66% e os animais do grupo controle excretaram oocistos a partir do dia 7, o pico de eliminação ocorreu nos dias 9 a 15 e no dia 28 não foram identificados animais com fezes positivas para o Cryptosporidium spp. O rotavírus bovino foi identificado em 11,12% dos animais em momentos em que não havia excreção de oocistos nas fezes e, portanto, não foi observada associação entre os dois enteropatógenos, o que foi reforçado pela alta correlação entre ocorrência de diarreia e a infecção por Cryptosporidium spp. O toltrazuril administrado tanto em um como em dois momentos não foi capaz de inibir ou reduzir a excreção de oocistos e a intensidade da diarreia. Os animais tratados dos grupos G2 e G3 apresentaram o mesmo padrão de eliminação de oocisto que os bezerros do grupo controle. Conclui-se que o toltrazuril não foi eficaz na metafilaxia da criptosporidiose em bezerros neonatos quando administrado na dose de 20 mg/Kg de p. v. ao nascimento e aos cinco dias de idade.

Cryptosporidium spp. is a coccidian of the phylum Apicomplexa responsible for infect and cause disease in a wide variety of hosts, including man. In cattle, the highest prevalence is recorded in animals up to one month of age demonstrating severe watery diarrhea, dehydration and apathy, even though it is a self-limiting disease. The objective of this work was to study the dynamics of cryptosporidiosis in newborn calves and evaluate the efficacy of toltrazuril in diseases metaphylaxis. On a dairy farm in the state of Minas Gerais, were followed 36 calves from birth to 28 days of age and reared in individual house system. The calves were randomly divided into three groups: the control group G1, G2 the group of animals that received oral treatment with 20 mg/kg b.w. toltrazuril birth and G3 group of calves received two treatments orally 20 mg / kg P.V. drug the birth and five days old. Fecal samples were collected on days 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 21 and 28 and processed by the Ziehl-Neelsen stain modified to determine the occurrence and intensity of infection by Cryptosporidium spp. Moreover, all stool specimens were evaluated for the presence of bovine rotavirus in association with the parasite. The frequency criptosporiodiose the experimental calves was 91.66% and animals excreted oocysts control group from day 7, the peak deletion occurred on days 9 to 15 and on day 28 animals with positive stool were identified for Cryptosporidium spp. The bovine rotavirus was identified in 11-12% of animals in times when there was no excretion of oocysts in the feces and therefore, no association was observed between the two enteropathogens, which was reinforced by the high correlation between the occurrence of diarrhea and infection Cryptosporidium spp. Toltrazuril administered both in one as in two times was not able to inhibit or reduce the excretion of oocysts and intensity of diarrhea. Treated animals of G2 and G3 showed the same pattern oocyst elimination of calves in the control group. It is concluded that toltrazuril was not effective in metafilaxia of cryptosporidiosis in neonatal calves when administered at a dose of 20 mg / kg p. v. at birth and at five days of age.

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Bezerros persistentemente infectados (PI) nascidos de vacas infectadas com amostras não-citopáticas do vírus da diarréia viral bovina (BVDV) se constituem nos principais reservatórios do vírus na natureza. Este trabalho relata uma investigação do padrão de excreção e transmissão viral por cinco bezerros PI produzidos experimentalmente pela inoculação de vacas prenhes com isolados brasileiros do BVDV. Cinco bezerros que sobreviveram a infecção intrauterina nasceram saudáveis, soronegativos e com a presença de vírus no sangue. Após o desmame - e desaparecimento dos anticorpos colostrais - os bezerros PI foram monitorados semanalmente durante 150 dias para a presença de vírus e títulos virais no soro e em secreções (ocular, oral, nasal e genital). Os títulos virais no soro de cada animal apresentaram pequenas variações durante o período (com exceção de um animal que apresentou um aumento de título tardiamente), mas os títulos variaram amplamente entre os animais (entre 10² e 10(6)TCID50/ml). O vírus também foi excretado continuamente nas secreções de todos os animais, com pequenas variações de título entre as coletas. Os maiores títulos virais foram geralmente detectados nas secreções nasais e oculares (títulos de 10(4) a 10(6)TCID50/mL), enquanto as secreções orais e genitais usualmente continham títulos virais baixos (10² a 10³TCID50/mL). Com o objetivo de avaliar a dinâmica de transmissão viral, um bezerro PI foi introduzido em um grupo de 10 bezerros soronegativos, mantido com uma alta densidade animal e submetido a manejo diário para simular as condições de manejo semi-intensivo. Após 30 dias de convívio com o bezerro PI, todos os demais animais haviam soroconvertido ao BVDV. Para investigar a transmissão viral sob condições extensivas, outro bezerro PI foi incorporado a um rebanho de 48 animais mantido a campo, com baixa densidade animal e submetido a manejo extensivo. Dentre estes animais, 8/48 (16,6 por cento) foram soropositivos ...

Persistently infected (PI) calves born to cows infected with non-cytopathic bovine virus diarrhea virus (BVDV) represent the main reservoir of the virus in nature. We herein report an investigation on the patterns of virus shedding and transmission by five PI calves produced experimentally through inoculation of pregnant cows with Brazilian BVDV isolates. Five calves that survived intrauterine infection were born healthy, lacking neutralizing antibodies to BVDV and harboring virus in the blood. After weaning - and following the disappearance of colostral antibodies - PI calves were monitored for virus in serum and body secretions (ocular, oral, nasal and genital) at weekly intervals for up to 150 days. For each animal, the virus titers in serum showed minor variations throughout the collections (with one exception that presented an increase late in infection), yet the titers varied widely among animals (from 10² to 10(6)TCID50/mL). Virus shedding in secretions was detected steadily during all the observation period with minor titer variations for each particular animal. The highest titers were generally detected in nasal and ocular secretions (titers 10(4) to 10(6)TCID50mL) whereas genital and oral secretions usually contained low amount of virus (10² to 10³TCID50mL). To evaluate the kinetics of virus transmission by these animals, one PI was introduced on a group of 10 seronegative calves maintained with a high animal density simulating the conditions of an intensive management. All 10 contact calves seroconverted to BVDV by day 30. Another PI calf was introduced into a 48-head herd kept under a low animal density, extensive grass management. Among these animals, 8/48 (16.6 percent) seroconverted by day 10, 26/48 (54.1 percent) by day 40 and 37/48 (77 percent) were seropositive at day 100, when the monitoring was discontinued. These results show that continuous viremia and virus shedding in high titers in secretions by PI animals assure ...

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ABSTRACT This article describes the role of bovine coronavirus, rotavirus and Cryptosporidium parvum in an outbreak of beef calf diarrhea in Presidente Epitácio, São Paulo State. Two out 9 fecal samples were positive to BCoV, 6 to C. parvum and 6 to rotavirus, with 4 rotavirus-C. parvumco-infections, 1 BCoV-C. parvumco-infection and 1 rotavirus-BCoV co-infection. These results show the need for a detailed survey of the etiology of diarrheas, aiming to evaluate the agents spread in a flock, allowing the design of prophylactic measures against gastroenteritis outbreaks.

RESUMO Estudou-se a participação de coronavírus bovino (BCoV) rotavírus e Cryptosporidium parvum em um surto de diarréia em bezerros de corte no Município de Presidente Epitácio, Estado de São Paulo. Das 9 amostras colhidas, 2 foram positivas para BCoV, 6 para C. parvum e 6 para rotavírus, sendo 4 co-infecções por rotavírus e C. parvum, 1 coinfecção por BCoV e C. parvume 1 co-infecção por rotavírus e coronavírus. Estes resultados reiteram a necessidade de que se pesquise de um modo abrangente a etiologia de diarréias, com o intuito de se avaliarem os agentes circulantes no rebanho, o que possibilita uma abordagem profilática mais exata para impedir o aparecimento de surtos epidêmicos de gastroenterites.

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Anticorpos monoclonais (AcM) para rotavírus bovino foram caracterizados para sua aplicação como ferramenta de diagnóstico, utilizando-se as técnicas de isotipificação, dot-blot, western-blot, imunofluorescência indireta (IFI) e ELISA de captura. A caracterização imunoquímica demonstrou que os cinco AcM 1G5, 4F7, 1E12, 4F3 e 3C12 foram do isótipo IgG2a. Pela técnica de dot-blot, os AcM 1G5, 4F7, 1E12, 4F3 detectaram antígenos do rotavírus, em diferentes concentrações, e dois AcM (1E12 e 4F3) reconheceram proteínas virais pela técnica de western-blot. Todos os AcM reagiram positivamente na técnica de IFI em cultivo celular e foram capazes de detectar antígeno viral em amostras fecais bovinas e humanas, pela técnica de ELISA de captura. Identificaram-se dois grupos de AcM, um deles formado pelos AcM 4F7, 1E12 e 1G5, para seu possível uso na detecção de antígeno viral em fezes por meio do ELISA de captura ou dot-blot e outro pelos 4F3 e 3C12, que podem ser usados para detectar antígeno viral em culturas de células por meio de IFI.

This work was carried out to characterize and evaluate five bovine rotavirus, monoclonal antibodies (MAbs), as a diagnosis tool, by isotyping, dot-blot, western-blot, indirect immunofluorescence (IFI) and ELISA techniques. The immunochemistry characterization showed that all five MAbs (4F7, 4F3, 1G5, 1E12 and 3C12) were IgG2a isotype. The dot-blot immunoassay showed that 1G5, 4F7, 1E12 and 4F3 detected viral antigen in different concentrations and two MAbs (1E12 and 4F3) recognized viral proteins by western-blot. All MAbs detected viral antigen in bovine and human fecal samples by capture ELISA technique and viral antigen in infected MA-104 cell culture by IFI. In conclusion, two groups of Mabs were indetified: one with Mabs 4F7, 1E12 and 1G5 showed the best results to detect rotavirus antigen in fecal samples by capture ELISA or dot-blot techniques assay and other with 4F3 and 3C12 which may be used to detect rotavirus antigens in cell culture by IFI. The results showed the potential use of these MAbs as diagnosis tools in diarrheas by rotavirus in bovines.

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Rotavírus é uma importante causa de diarreia neonatal em humanos e em várias espécies animais, incluindo bezerros. O presente estudo teve como objetivo verificar a ocorrência de rotavírus em bezerros de rebanhos leiteiros e de corte, durante o período de março de 2010 a agosto de 2011, em propriedades rurais situadas nos Estados de São Paulo, Minas Gerais, Goiás e Mato Grosso do Sul. Foram analisadas 765 amostras de fezes de bezerros, na faixa etária entre um e 60 dias, de 56 rebanhos bovinos, sendo 53 de exploração leiteira e três de gado de corte. Pela técnica da eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA), observou-se a ocorrência de rotavírus em 17,8% (10/56) dos rebanhos e em 3,0% (23/765) dos animais. A proporção de rebanhos leiteiros infectados foi de 16,9% (9/53), e no gado de corte o percentual de positividade foi de 33,3% (1/3). A maior ocorrência significativa de amostras positivas foi observada em animais na faixa etária de um a 15 dias, quando comparadas com as demais (p<0,01). Foram diagnosticados bezerros infectados por rotavírus tanto em animais com sinais clínicos de diarreia (9,3%: 16/171) quanto naqueles clinicamente normais (1,1%: 7/594), existindo porém uma correlação positiva entre a presença da infecção e a manifestação clínica da diarreia (p < 0,01). Ao analisar o perfil do RNA extraído das 23 amostras positivas pelo EGPA foi possível classificá-lo em 4 eletroferotipos distintos, indicando grande diversidade genômica na região estudada. Os resultados indicaram a participação do agente na etiologia da diarreia dos bezerros. A genotipagem G e P das amostras positivas foi realizada pela técnica de RT-PCR e demonstrou que separadamente as associações de genotipos circulantes...

Rotavirus is an important cause of neonatal diarrhea in humans and several animal species, including calves. The present study aimed at verifying rotavirus occurrence in calves belonging to dairy and beef cattle herds during the period from March 2010 and August 2011, in farms located in the states of São Paulo, Minas Gerais, Goiás and Mato Grosso do Sul. It was analyzed 765 fecal samples of calves, from 1 to 60 days of age, belonging to 56 cattle herds (from which 53 were dairy and 3 were beef cattle). By the technique of electrophoresis with polyacrylamide gel (PAGE), the occurrence of rotavirus was observed in 17.8% (10 / 56) of herds and 3.0% (23/765) of the animals. The proportion of infected dairy cattle was 16.9% (9/53), and the percentage of positivity in beef cattle was 33.3% (1 / 3). The highest incidence of positive samples was observed in animals aged 1-15 days, compared to the others (p <0.01). Calves infected by rotavirus were diagnosed not only in animals with clinical signals of diarrhea (9.3%: 16/171) but also in the clinically normal ones (1.1%: 7/594), although there is a correlation between the presence of infection and the clinical manifestation of diarrhea (p < 0. 01). By analyzing the profile of RNA extracted from 23 positive samples by EGPA it was possible classify it in four distinct electropherotypes, indicating a large genomic diversity in the analyzed region. The results indicate the agent?s participation in the etiology of diarrhea in calves. The polymerase chain reaction (PCR) preceded by reverse-transcription (RT) of viral RNA was employed to characterize the bovine rotavirus genotypes G and P, which indicated that the associations of genotypes circulating in herds in Brazil?s southeastern region were...

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Descreve-se a pesquisa de BCoV e rotavírus em 13 mostras fecais de vacas de surtos de disenteria utilizando uma nested PCR dirigida ao gene RdRp e PAGE, respectivamente. Todas as amostras fecais foram positivas para BCoV e nenhuma delas apresentou-se positiva para rotavírus em PAGE. O encontro de coronavírus bovino em amostras fecais de vacas com disenteria sugere que este vírus possa ser o agente primário envolvido na etiologia dos casos aqui relatados