Selection and characterization of peptides mimetic to Campylobacter fetus subsp. venerealis using phage display / Seleção e caracterização de peptídeos miméticos a Campylobacter fetus subsp. venerealis usando phage display

ABSTRACT: Bovine genital campylobacteriosis (BGC) is a venereal and subclinical disease that affects the fertility of cattle herds, and it is caused by Campylobacter fetus subsp. venerealis . This study selected peptides mimetic to the BGC-causing agent from a phage library. Phage display is a technique that applies bacteriophage libraries that reveal peptides fused to the viral capsid in biological selections against target proteins. Biopannings were performed for biological selection in the phage library using rabbit hyperimmune serum and C. fetus subsp. venerealis protein extract. Five selected heptapeptides were considered mimetic to Cfv-NCTC 10354 based on the results of bioinformatics analysis and assays with hyperimmune serum and cervicovaginal mucus obtained from heifers. ALASLPL and LSYLFPP were the most reactive peptides and considered promising as possible mimetic immunogens for C. fetus subsp. venerealis.

RESUMO: Campilobacteriose Genital Bovina (CGB) é uma doença venérea e subclínica que causa problemas reprodutivos em rebanhos, causada por Campylobacter fetus subsp. venerealis. Este trabalho teve como objetivo selecionar peptídeos miméticos ao agente da CGB de uma biblioteca de fagos. Phage display é uma técnica que aplica bibliotecas de bacteriófagos que expõem peptídeos fusionados ao capsídeo viral em seleções biológicas contra proteínas alvo. Biopannings foram realizados para seleção biológica na biblioteca de fagos por meio de soro hiperimune de coelho e extrato proteico de C. fetus subsp. venerealis. Cinco heptapeptídeos selecionados foram considerados miméticos para Cfv-NCTC 10354 a partir de análises de bioinformática e ensaios com soro hiperimune e muco cérvico-vaginal de novilhas. ALASLPL e LSYLFPP foram os peptídeos mais reativos e considerados promissores como possíveis imunógenos miméticos para C. fetus subsp. venerealis.

Selection and characterization of peptides mimetic to Campylobacter fetus subsp. venerealis using phage display / Seleção e caracterização de peptídeos miméticos a Campylobacter fetus subsp. venerealis usando phage display

Bovine genital campylobacteriosis (BGC) is a venereal and subclinical disease that affects the fertility of cattle herds, and it is caused by Campylobacter fetus subsp. venerealis . This study selected peptides mimetic to the BGC-causing agent from a phage library. Phage display is a technique that applies bacteriophage libraries that reveal peptides fused to the viral capsid in biological selections against target proteins. Biopannings were performed for biological selection in the phage library using rabbit hyperimmune serum and C. fetus subsp. venerealis protein extract. Five selected heptapeptides were considered mimetic to Cfv-NCTC 10354 based on the results of bioinformatics analysis and assays with hyperimmune serum and cervicovaginal mucus obtained from heifers. ALASLPL and LSYLFPP were the most reactive peptides and considered promising as possible mimetic immunogens for C. fetus subsp. venerealis.

Campilobacteriose Genital Bovina (CGB) é uma doença venérea e subclínica que causa problemas reprodutivos em rebanhos, causada por Campylobacter fetus subsp. venerealis. Este trabalho teve como objetivo selecionar peptídeos miméticos ao agente da CGB de uma biblioteca de fagos. Phage display é uma técnica que aplica bibliotecas de bacteriófagos que expõem peptídeos fusionados ao capsídeo viral em seleções biológicas contra proteínas alvo. Biopannings foram realizados para seleção biológica na biblioteca de fagos por meio de soro hiperimune de coelho e extrato proteico de C. fetus subsp. venerealis. Cinco heptapeptídeos selecionados foram considerados miméticos para Cfv-NCTC 10354 a partir de análises de bioinformática e ensaios com soro hiperimune e muco cérvico-vaginal de novilhas. ALASLPL e LSYLFPP foram os peptídeos mais reativos e considerados promissores como possíveis imunógenos miméticos para C. fetus subsp. venerealis.

Selection and characterization of peptides mimetic to Campylobacter fetus subsp. venerealis using phage display / Seleção e caracterização de peptídeos miméticos a Campylobacter fetus subsp. venerealis usando phage display

Bovine genital campylobacteriosis (BGC) is a venereal and subclinical disease that affects the fertility of cattle herds, and it is caused by Campylobacter fetus subsp. venerealis . This study selected peptides mimetic to the BGC-causing agent from a phage library. Phage display is a technique that applies bacteriophage libraries that reveal peptides fused to the viral capsid in biological selections against target proteins. Biopannings were performed for biological selection in the phage library using rabbit hyperimmune serum and C. fetus subsp. venerealis protein extract. Five selected heptapeptides were considered mimetic to Cfv-NCTC 10354 based on the results of bioinformatics analysis and assays with hyperimmune serum and cervicovaginal mucus obtained from heifers. ALASLPL and LSYLFPP were the most reactive peptides and considered promising as possible mimetic immunogens for C. fetus subsp. venerealis.(AU)

Campilobacteriose Genital Bovina (CGB) é uma doença venérea e subclínica que causa problemas reprodutivos em rebanhos, causada por Campylobacter fetus subsp. venerealis. Este trabalho teve como objetivo selecionar peptídeos miméticos ao agente da CGB de uma biblioteca de fagos. Phage display é uma técnica que aplica bibliotecas de bacteriófagos que expõem peptídeos fusionados ao capsídeo viral em seleções biológicas contra proteínas alvo. Biopannings foram realizados para seleção biológica na biblioteca de fagos por meio de soro hiperimune de coelho e extrato proteico de C. fetus subsp. venerealis. Cinco heptapeptídeos selecionados foram considerados miméticos para Cfv-NCTC 10354 a partir de análises de bioinformática e ensaios com soro hiperimune e muco cérvico-vaginal de novilhas. ALASLPL e LSYLFPP foram os peptídeos mais reativos e considerados promissores como possíveis imunógenos miméticos para C. fetus subsp. venerealis.(AU)

Bovine genital campylobacteriosis: main features and perspectives for diagnosis and control / Campilobacteriose genital bovina: principais características e perspectivas para o diagnóstico e controle

Bovine genital campylobacteriosis (BGC) is a venereal disease caused by Campylobacter fetus subsp. venerealis. In countries with large cattle herds, such as Brazil, where the use of natural breeding as a reproductive strategy is a common practice, BGC is considered an important cause of reproductive failure and economic losses. In these cases, the bull is the asymptomatic carrier of the bacterium and the infected females can have infertility and even abortions. The techniques for the diagnosis of C. fetus are isolation in culture medium and identification by biochemical tests, immunofluorescence, immunoenzymatic assays and molecular techniques. Disease control is based on vaccination with bacterins. This review described the epidemiology, etiology, pathogenesis, and advances in the diagnosis and control of BGC.(AU)

A campilobacteriose genital bovina (CGB) é uma importante enfermidade de caráter venéreo causada por Campylobacter fetus subsp. venerealis. Em países com grandes rebanhos bovinos, como o Brasil, onde o uso da monta natural como estratégia reprodutiva é uma prática corrente, a CGB é considerada uma importante causa de falhas reprodutivas e perdas econômicas. Nestes casos, o touro é o portador assintomático da bactéria e as fêmeas infectadas podem apresentar infertilidade e até mesmo abortos. As técnicas para o diagnóstico de C. fetus são o isolamento em meio de cultura e identificação por testes bioquímicos; imunofluorescência; ensaios imunoenzimáticos e técnicas moleculares. O controle da doença é baseado em vacinação. Neste sentido, esta revisão consiste em uma abordagem sobre a epidemiologia, a etiologia, a patogenia, os avanços no diagnóstico e controle da CGB.(AU)

Ocorrência da infecção por Campylobacter fetus subsp. venerealis e Tritrichomonas foetus em búfalos no estado de Pernambuco, Brasil / Infection occurrence of Campylobacter fetus subsp. venerealis and Tritrichomonas foetus in buffaloes in the state of Pernambuco, Brazil

Objetivou-se com estudo determinar a ocorrência da infecção por Campylobacter fetus subsp. venerealis e Tritrichomonas foetus em búfalos no estado de Pernambuco, Brasil. Foram coletadas 133 amostras biológicas (muco cervicovaginal e raspado prepucial) de animais, procedentes de oito propriedades, de diferentes regiões do estado. O material biológico coletado foi transferido para solução salina tamponada (PBS) e, posteriormente, inoculado em meios de transporte específicos, Lander para diagnóstico de C. fetus subsp. venerealis e Diamond para T. foetus. Para o diagnóstico das infecções por Campylobacter fetus subsp. venerealis e Tritrichomonas foetus, as amostras foram submetidas à reação em cadeia da polimerase (PCR) e cultivadas em meio ágar Columbia acrescido de antibiótico e Diamond, respectivamente. Para pesquisa de C. fetus subsp. venerealis, observou-se uma ocorrência de 1,8% (2/113) de animais positivos no exame microbiológico com confirmação pela PCR. Em relação à procedência, observou-se que 100% das amostras positivas pertenciam a dois machos do mesmo rebanho. Nenhum animal foi positivo na pesquisa de T. foetus. Este é o primeiro registro da infecção por C. fetus subsp. venerealis em búfalos no Brasil. Apesar da baixa ocorrência, recomenda-se adoção de medidas de controle, com o intuito de se evitar a disseminação do agente para outros rebanhos.(AU)

The objective this study was to determine the occurrence of infection with Campylobacter fetus subsp. venerealis and Tritrichomonas foetus in buffaloes in the State of Pernambuco, Brazil. Biological samples were collected (cervico vaginal mucus and shaved prepucial) of 113 animals, coming from 8 properties in different regions of the state. The biological material collected was transferred into phosphate buffered saline (PBS) and inoculated in the specific transport, Lander for diagnosis of C. fetus subsp. venerealis and Diamond for T. fetus subsequently. For the diagnosis of infection by Campylobacter fetus subsp. venrealis and Tritrichomonas foetus the samples were submitted to Polymerase Chain Reaction (PCR) grown in Columbia agar plus antibiotics and Diamond, respectively. There was an occurrence of 1.8% (2/113) of positive animals in the microbiological examination with confirmation by PCR, for C. fetus subsp. venerealis. We observed that 100% of positive samples were from two (2) males from the same herd. No animals were positive for T. foetus. This is the first report of infection with C. fetus subsp. venerealis in buffaloes in Brazil. Despite rare occurrence, control measures are recommended in order to prevent the spread of the agent to other herds.(AU)

Ocorrência da infecção por Campylobacter fetus subsp. venerealis e Tritrichomonas foetus em búfalos no estado de Pernambuco, Brasil / Infection occurrence of Campylobacter fetus subsp. venerealis and Tritrichomonas foetus in buffaloes in the state of Pernambuco, Brazil

Objetivou-se com estudo determinar a ocorrência da infecção por Campylobacter fetus subsp. venerealis e Tritrichomonas foetus em búfalos no estado de Pernambuco, Brasil. Foram coletadas 133 amostras biológicas (muco cervicovaginal e raspado prepucial) de animais, procedentes de oito propriedades, de diferentes regiões do estado. O material biológico coletado foi transferido para solução salina tamponada (PBS) e, posteriormente, inoculado em meios de transporte específicos, Lander para diagnóstico de C. fetus subsp. venerealis e Diamond para T. foetus. Para o diagnóstico das infecções por Campylobacter fetus subsp. venerealis e Tritrichomonas foetus, as amostras foram submetidas à reação em cadeia da polimerase (PCR) e cultivadas em meio ágar Columbia acrescido de antibiótico e Diamond, respectivamente. Para pesquisa de C. fetus subsp. venerealis, observou-se uma ocorrência de 1,8% (2/113) de animais positivos no exame microbiológico com confirmação pela PCR. Em relação à procedência, observou-se que 100% das amostras positivas pertenciam a dois machos do mesmo rebanho. Nenhum animal foi positivo na pesquisa de T. foetus. Este é o primeiro registro da infecção por C. fetus subsp. venerealis em búfalos no Brasil. Apesar da baixa ocorrência, recomenda-se adoção de medidas de controle, com o intuito de se evitar a disseminação do agente para outros rebanhos.(AU)

The objective this study was to determine the occurrence of infection with Campylobacter fetus subsp. venerealis and Tritrichomonas foetus in buffaloes in the State of Pernambuco, Brazil. Biological samples were collected (cervico vaginal mucus and shaved prepucial) of 113 animals, coming from 8 properties in different regions of the state. The biological material collected was transferred into phosphate buffered saline (PBS) and inoculated in the specific transport, Lander for diagnosis of C. fetus subsp. venerealis and Diamond for T. fetus subsequently. For the diagnosis of infection by Campylobacter fetus subsp. venrealis and Tritrichomonas foetus the samples were submitted to Polymerase Chain Reaction (PCR) grown in Columbia agar plus antibiotics and Diamond, respectively. There was an occurrence of 1.8% (2/113) of positive animals in the microbiological examination with confirmation by PCR, for C. fetus subsp. venerealis. We observed that 100% of positive samples were from two (2) males from the same herd. No animals were positive for T. foetus. This is the first report of infection with C. fetus subsp. venerealis in buffaloes in Brazil. Despite rare occurrence, control measures are recommended in order to prevent the spread of the agent to other herds.(AU)

Prevalence of Tritrichomonas foetus and Campylobacter fetus subsp. venerealis among bulls slaughtered in the state of Minas Gerais, Brazil / Prevalência de Tritrichomonas foetus, Campylobacter fetus subsp. venerealis e de Campylobacter fetus subsp. fetus em touros abatidos no Estado de Minas Gerais, Brasil

Bovine genital campylobacteriosis (BGC) and bovine genital trichomonosis (BGT) are globally widespread, predominantly sexually transmitted diseases that mainly affect herds in which natural mating takes place. Bulls serve as good epidemiological indicators for studying the causative agents of these diseases in cattle herds. The objective of the present work was to determine the prevalence of BGC and BGT among bulls sent to slaughterhouses in southern Minas Gerais, Brazil. Samples of preputial smegma from 200 sexually mature, non-castrated bulls of several ancestries were collected in 2013 from four regional slaughterhouses. The polymerase chain reaction (PCR) was employed to detect Tritrichomonas foetus, Campylobacter fetus subsp. fetus, and C. fetus subsp. venerealis. Isolation also was used aiming to diagnosis of BGT. All smegma samples were negative in culture for T. foetus. Molecular tests revealed 8% (16/200) of animals to be positive for T. foetus, 17.5% (35/200) for Campylobacter. fetus subsp. fetus, and 13.5% (27/200) for C. fetus subsp. venerealis. The results of the present study indicate that T. foetus, C. fetus subsp. venerealis, and C. fetus subsp. fetus are present among bulls slaughtered in southern Minas Gerais, and that BGC and BGT occur in this region. These diseases therefore need to be considered during differential diagnosis of reproductive diseases affecting cattle herds in which natural mating is employed.(AU)

A Campilobacteriose Genital Bovina (CGB) e a Tricomonose Genital Bovina (TGB) são doenças de transmissão predominantemente venérea, de ampla disseminação mundial, acometendo principalmente rebanhos submetidos à monta natural. Touros constituem bons indicadores epidemiológicos para a pesquisa destes agentes nos rebanhos. O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência da CGB e da TGB em touros encaminhados a abatedouros da região sul de Minas Gerais, Brasil. Amostras de esmegma prepucial de 200 touros (machos não castrados em idade compatível com a monta) de diversas genealogias foram coletadas em quatro abatedouros da região, no ano de 2013. A reação em cadeia da polimerase (PCR) foi utilizada para detecção dos patógenos Tritrichomonas foetus, Campylobacter fetus subsp. fetus e Campylobacter fetus subsp. venerealis. O isolamento também foi utilizado para o diagnóstico da TGB. Todas as amostras analisadas apresentaram resultado negativo na cultura para isolamento de T. foetus. Por meio dos testes moleculares, verificaram-se prevalências de 8% (16/200) de animais positivos para T. foetus; 17,5% (35/200) para C. fetus subsp. fetus e de 13,5% (27/200) para C. fetus subsp. venerealis. Os dados do presente estudo apontaram a presença de T. foetus, C. fetus subsp. venerealis e C. fetus subsp. fetus em touros abatidos na região sul de Minas Gerais, evidenciando a ocorrência da TGB e da CGB nesta região e a necessidade de inclusão destas enfermidades no diagnóstico diferencial das doenças da reprodução em rebanhos bovinos submetidos à monta natural.(AU)

PESQUISA DE Campylobacter fetus e Tritrichomonas foetus EM REPRODUTORES BOVINOS DO ESTADO DE MATO GROSSO DO SUL

A Campilobacteriose e a Trichomonose genital bovina são doenças infectocontagiosas, de transmissão sexual, que causam graves problemas reprodutivos. O objetivo do trabalho foi pesquisar a presença de Campylobacter fetus e Tritrichomonas foetus em touros utilizados na monta natural em rebanhos de alta genética. Foram selecionadas 10 fazendas do Estado de Mato Grosso do Sul e coletado esmegma dos reprodutores utilizados na última estação de monta por meio da introdução de swab estéril acoplado a uma pipeta de inseminação. Estes animais estavam em repouso sexual a 20 dias e foram realizadas três coletas, com intervalo de 15 dias. Para cultivo de Campylobacter fetus, o material foi colocado em meio de transporte de Lander, incubado por 72 horas a 37C e filtrado. Alíquotas de 0,1mL do material filtrado e não filtrado foram inoculadas em ágar BHI acrescido de 10% de sangue desfibrinado de equino com suplemento seletivo para Campylobacter e incubadas em jarras Gaspack, em microaerofilia, a 37ºC por 72 horas. Em seguida, foi realizado esfregaço e coloração de Gram nas colônias suspeitas, as quais foram submetidas a testes bioquímicos. Para o cultivo de Tritrichomonas foetus, a amostra coletada foi colocada em tubo tipo Falcon contendo 10 ml de meio Lactopep e incubado a 37 C, por 10 dias, com observação diária em microscópio de contraste de fase, e em casos suspeitos foi realizada a

Campylobacter fetus em bovinos no estado do Rio Grande do Sul / Campylobacter fetus in cattle from Rio Grande do Sul state, Brazil

A campilobacteriose genital bovina (CGB) é uma doença infectocontagiosa causada por Campylobacter fetus, determina infertilidade temporária, endometrite leve e aborto em fêmeas, além de aumentar o intervalo entre partos. A ocorrência de CGB entre rebanhos no Brasil tem variado muito entre as diferentes regiões. Com isso, o objetivo deste trabalho foi identificar, por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR), a ocorrência de amostras positivas para C. fetus, oriundas de bovinos, no período de 1999 a 2010, no Rio Grande do Sul, e analisar a positividade em machos e fêmeas. Foram utilizadas 816 amostras procedentes de 37 municípios, localizados predominantemente nas mesorregiões sudoeste e centro ocidental rio-grandense, das quais 480 aspirados prepuciais (92 provenientes de duas centrais de inseminação artificial e 388 de estabelecimentos de criação - monta natural), 324 aspirados cervicais e conteúdo abomasal de 12 fetos bovinos abortados. Como resultado, 10,9% das amostras (89/816) foram positivas para C. fetus. Quando analisados os resultados em relação à origem das amostras, 6,5% (6/92) das coletadas de machos de centrais de inseminação foram positivas, e das obtidas de touros utilizados em monta natural, 9% (35/388). Já entre as fêmeas, esse percentual foi de 13,6% (44/324) e, nas amostras obtidas de fetos abortados, 33,3% (4/12) foram positivas. Quando analisados os 91 estabelecimentos de criação com monta natural e os 37 municípios, foram positivos 44,0% (40/91) e 63,2% (24/37), respectivamente. Com isso, foi demonstrada a importância da CGB para os rebanhos bovinos, e uma maior ocorrência de amostras positivas em fêmeas, quando comparadas às amostras provenientes de machos.(AU)

Bovine genital campylobacteriosis (BGC) is an infectious disease caused by Campylobacter fetus, which determines temporary infertility, mild endometritis, miscarriage in females and also increases the calving interval. The occurrence of BGC in the Brazilian herds has varied widely among regions. The aim of this study was to identify by polymerase chain reaction (PCR) the occurrence of C. fetus in bovines from Rio Grande do Sul (RS), Brazil using samples collected from1999 to 2010. A total of 816 samples from 37 counties localized predominantly in the Southwest and Central Western regions of the RS state were analyzed. Four hundred eighty preputial aspirated samples (92 from artificial insemination centers and 388 from farms that use natural mating) and 324 cervical aspirates and abomasal contents of 12 aborted fetuses were analyzed. As result, 10.9% (89/816) were positive for C. fetus. When the results were analyzed in relation to its origin, 6.5% (6/92) of the males samples from insemination centers were positive, and the ones from natural mating 9% (35/388) were positives. For the females, this percentage was 13.6% (44/324) of positivity, and the samples from the aborted fetuses 33.3% (4/12) were positive. When the 91 farms that used natural mating and the 37 counties were analyzed, it showed a positivity rate of 44.0% (40/91) and 63.2% (24/37), respectively. This study shows the importance of BGC for bovine herds, and a larger occurrence of positive samples among females when compared to male.(AU)

Prevalência da campilobacteriose e da tricomonose genitais bovinas no Distrito Federal e em seu entorno / Prevalence of bovine genital Campylobacteriosis and Trichomoniasis in the Federal District and its surroundings

Objetivou-se estudar a prevalência da campilobacteriose genital bovina (CGB) e da tricomonose genital bovina (TGB) no Distrito Federal e em seu entorno. A estimativa da prevalência de cada doença foi realizada com base no exame de útero e vagina ou prepúcio de 385 animais abatidos em frigoríficos no DF e em seu entorno. O diagnóstico de C. fetus foi feito por imunofluorescência direta (IFD). Para diagnóstico de T. foetus, swabs de útero e vagina ou prepúcio foram lavados em meio de Diamond, mantidos em temperatura ambiente e protegidos da luz até a incubação a 37ºC por até oito dias e examinados diariamente ao microscópio utilizando-se objetiva de 40X. Dos 398 animais testados (258 fêmeas e 140 machos), 44 foram positivos ao teste de IFD, o que corresponde a uma prevalência de 11,1% de animais positivos para CGB, com intervalo de confiança (95%) de 7,97 a 14,14%. Não foi isolado T. foetus de nenhuma das amostras. Os resultados confirmam a presença da infecção por C. fetus em rebanhos bovinos do Distrito Federal e de seu entorno.(AU)

The aim of this study was to investigate the prevalence of bovine genital campylobacteriosis (BGC) and bovine genital trichomoniasis (TGB) in Federal District and surroundings. The estimated prevalence of each disease was based on examination of the uterus and vagina or prepuce of 385 animals at slaughterhouses in Federal District and its surroundings. The diagnosis of C. fetus was done by direct immunofluorescence (DIF). For diagnosis of T. fetus swabs from vagina and uterus/prepuce were washed in Diamonds medium, kept at room temperature and protected from light until incubation at 37°C for 8 days and examined daily by microscopy using a 40x objective. Of the 398 animals tested (258 females and 140 males), 44 were positive by DIF test, corresponding to a prevalence of 11.1% of animals positive for CGB, (95% probability interval: 7.97 - 14.14%). T. fetus was not isolated from any of the samples. The results confirm the presence of infection by C. fetus in cattle herds in the Federal District and surrounding areas. (AU)

Prevalência da campilobacteriose e da tricomonose genitais bovinas no Distrito Federal e em seu entorno / Prevalence of bovine genital Campylobacteriosis and Trichomoniasis in the Federal District and its surroundings

Objetivou-se estudar a prevalência da campilobacteriose genital bovina (CGB) e da tricomonose genital bovina (TGB) no Distrito Federal e em seu entorno. A estimativa da prevalência de cada doença foi realizada com base no exame de útero e vagina ou prepúcio de 385 animais abatidos em frigoríficos no DF e em seu entorno. O diagnóstico de C. fetus foi feito por imunofluorescência direta (IFD). Para diagnóstico de T. foetus, swabs de útero e vagina ou prepúcio foram lavados em meio de Diamond, mantidos em temperatura ambiente e protegidos da luz até a incubação a 37ºC por até oito dias e examinados diariamente ao microscópio utilizando-se objetiva de 40X. Dos 398 animais testados (258 fêmeas e 140 machos), 44 foram positivos ao teste de IFD, o que corresponde a uma prevalência de 11,1% de animais positivos para CGB, com intervalo de confiança (95%) de 7,97 a 14,14%. Não foi isolado T. foetus de nenhuma das amostras. Os resultados confirmam a presença da infecção por C. fetus em rebanhos bovinos do Distrito Federal e de seu entorno.

The aim of this study was to investigate the prevalence of bovine genital campylobacteriosis (BGC) and bovine genital trichomoniasis (TGB) in Federal District and surroundings. The estimated prevalence of each disease was based on examination of the uterus and vagina or prepuce of 385 animals at slaughterhouses in Federal District and its surroundings. The diagnosis of C. fetus was done by direct immunofluorescence (DIF). For diagnosis of T. fetus swabs from vagina and uterus/prepuce were washed in Diamond’s medium, kept at room temperature and protected from light until incubation at 37°C for 8 days and examined daily by microscopy using a 40x objective. Of the 398 animals tested (258 females and 140 males), 44 were positive by DIF test, corresponding to a prevalence of 11.1% of animals positive for CGB, (95% probability interval: 7.97 - 14.14%). T. fetus was not isolated from any of the samples. The results confirm the presence of infection by C. fetus in cattle herds in the Federal District and surrounding areas.

Impacto das doenças da esfera reprodutiva sobre a reprodução em rebanhos da região sudeste de Minas Gerais

ROSA, Adriane Garcia. Doenças da esfera reprodutiva em bovinos leiteiros em Itamonte, microrregião de São Lourenço, Minas Gerais., Seropédica: UFRRJ, 2017. 90p. (Tese, Doutorado em Medicina Veterinária). Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, 2017. O objetivo deste estudo foi caracterizar o impacto das doenças da esfera reprodutiva sobre a reprodução e verificar sua associação a possíveis distúrbios reprodutivos em propriedades de agricultura familiar, no município de Itamonte, no Estado de Minas Gerais. Foram examinadas fêmeas em reprodução e os reprodutores em monta natural, pela equipe técnica do Laboratório de Patologia da Reprodução, Anexo I do Instituto de Veterinária da UFRRJ, no período de março de 2006 a dezembro de 2007. Durante a visita técnica foram avaliadas no rebanho, as variáveis: sexo, tamanho do rebanho, tipo de manejo reprodutivo, e feito o diagnóstico das doenças ligadas a reprodução (Brucelose, Tricomonose Genital Bovina (TGB) e Campilobacteriose Genital Bovina (CGB), Rinotraqueite Infecciosa Bovina (IBR), Doenças das Mucosas (BVD)e Leptospirose, bem como registrados os distúrbios reprodutivos das fêmeas durante a coleta de muco vaginal. Dos 265 animais examinados detectou-se uma frequência de 5,10%, 67,16%, 34,33% e 49,4% positividade para as fêmeas, referente a TGB, IBR, BVD e Leptospirose respectivamente. Para os machos uma positividade de 50,0 % para TGB e CGB, 16,6% e 66,6% para BVD e Leptospirose respectivamente. A resposta sorológica mais frequente para Leptospira pela técnica se Microaglutinação foi o sorovar Hardjo, e com referência aos distúrbios reprodutivos proporciona maior ocorrência de abortamento, retenção de placenta e repetições de cio. A vulvovaginite e muco purulento vaginal estava associada a alta frequência de IBR. O uso de touro comunitário contribui para a maior frequência da TGB e CBG entre os reprodutores e fêmeas em monta natural. Não foi relatado nenhum caso teratogênico atribuído ao BVD, mas este estava associado aos abortamentos e repetições de cio. Estes distúrbios relacionados e a frequência relatada evidencia a importância destas doenças sobre a fertilidade dos rebanhos, e a importância de elucidar o produtor sobre o manejo sanitário voltado a saúde e reprodução do animal.

ROSA, Adriane Garcia, Diseases of the reproductive in dairy cattle in Itamonte, São Lourenço microregion, Minas Gerais, Seropédica: UFRRJ, 2017. 90p. (Thesis, Doctor in Veterinary Medicine). Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ, 2017. The objective of this study was to characterize the impact of reproductive diseases on reproduction and to verify their association with possible reproductive disorders in family farms in the municipality of Itamonte, State of Minas Gerais. Breeding females and the natural males were examined by the technical staff of the Laboratory of Reproductive Pathology, Annex I of the Veterinary Institute of UFRRJ, from March 2006 to December 2007. During the technical visit they were evaluated in the herd (Brucellosis, Bovine Genital Trichomoniasis (TGB) and Bovine Genital Campylobacteriosis (BGC), Bovine Infectious Rhinotracheitis (IBR), Mucosal diseases (BVD), in the 265 animals examined, a frequency of the 5.10%, 67.16%, 34.33% and 49.4% of the samples was recorded. A positive positivity of 50% for TGB and CGB, 16.6% and 66.6% for BVD and Leptospirosis, respectively. May s frequent for Leptospira by the technique microagglutination was the Hardjo serovar, and with reference to the reproductive disorders provides greater occurrence of abortion, retention of placenta and repetitions of estrus. Vulvovaginitis and purulent vaginal mucus were associated with high frequency of IBR. The use of community bulls contributes to the greater frequency of TGB and CBG among breeders and females in natural mounts. No teratogenic cases attributed to BVD were reported, but this was associated with abortions and heat repetitions. These related disorders and frequency reported evidence the importance of these diseases on the fertility of the herds, and the importance of elucidating the producer on the sanitary management directed to the health and reproduction of the animal.

SITUAÇÃO EPIDEMIOLÓGICA DAS INFECÇÕES POR Tritrichomonas foetus E Campylobacter fetus subsp. venerealis EM BOVINOS NA MICRORREGIÃO GEOGRÁFICA DO BREJO PARAIBANO

Objetivou-se com este estudo determinar a situação epidemiológica das infecções por Tritrichomonas foetus e Campylobacter fetus subsp. venerealis em bovinos na microrregião do Brejo Paraibano, região Nordeste do Brasil, identificando os possíveis fatores de risco associados à infecção por T. foetus. Para pesquisa de T. foetus foram coletadas 349 amostras de muco cérvico vaginal e esmegma em bovinos de corte e leite (290 fêmeas e 59 machos) em 31 propriedades e para pesquisa de C. fetus subsp. venerealis foram coletadas 273 amostras de muco cérvico vaginal de vacas leiteiras procedentes de 19 propriedades. Para a pesquisa do DNA dos agentes utilizou-se a Reação em Cadeia da Polimerase e cultivo com meio Diamond Modificado para isolamento de T. foetus. Para análise dos fatores de risco associados à infecção por Tritrichomonas foetus na espécie bovina, foi realizada uma análise univariada das variáveis de interesse pelo teste qui-quadrado de Pearson, ou Exato de Fisher, quando necessário. Posteriormente foi realizada uma regressão logística considerando como variável dependente para Tricomonose a PCR (positivo ou negativo). Foram elaborados mapas temáticos com as distribuições das prevalências na área estudada. A prevalência da infecção por C. fetus subsp. venerealis em vacas foi 7,7% (21/273) (I.C. 95%; 4,8 - 11,5%) e 31,6% (6/19) das propriedades apresentaram ao menos um animal positivo. A prevalência da infecção por T. foetus foi 3,7% (13/349) (I.C. 95%; 2,1 6,4%). Em relação ao sexo, observou-se uma prevalência da infecção por T. foetus de 4,5% (fêmeas) e 0,0% (machos). A porcentagem de propriedades que apresentaram ao menos um animal positivo para T. foetus foi de 19,3% (6/31). No cultivo, nenhuma amostra foi positiva para T. foetus. O fator de risco associado à infecção por T. foetus identificado neste estudo foi contato de fêmeas com touros de outras propriedades (OR 5,9; I.C. 1,5 22,4). Este é o primeiro relato da infecção por C. fetus subsp. venerealis em vacas leiteiras nesta região do Brasil e o primeiro na microrregião do Brejo Paraibano a analisar a infecção por T. foetus em bovinos. Para diminuir os riscos de infecção, recomenda-se a adoção de um programa de inseminação artificial nas propriedades com sêmen de touros negativos, bem como um programa de vacinação contra a Campilobacteriose Genital Bovina para estimular a imunidade, com o intuito de reduzir a ocorrência da infecção e possíveis problemas reprodutivos. O contato das fêmeas com machos de outras propriedades deve ser evitado, principalmente quando não se conhece o status sanitário desses touros em relação a estas duas infecções.

The objective of this study was to determine the epidemiological situation of infection by Tritrichomonas foetus and Campylobacter fetus subsp. venerealis in cattle at Brejo Paraibano microregion, Northeastern Brazil, identifying the possible risk factors associated with T. foetus infection. For the study of T. foetus, 349 samples of cervico-vaginal mucus and smegma were collected in beef and dairy cattle (290 females and 59 males) in 31 farms and for C. fetus subsp. venerealis, 273 samples of cervico-vaginal mucus from dairy cows from 19 farms were collected. Polymerase Chain Reaction was used to identify the DNA of the agents and culture with Modified Diamond medium for isolation of T. foetus. For analysis of risk factors associated with Tritrichomonas foetus infection in bovine species, univariate analysis of the variables of interest was performed by the Pearson chi-squared test, or Fisher's exact test, when necessary. Subsequently, logistic regression was performed considering PCR (positive or negative) as the dependent variable for trichomoniasis. Thematic maps were prepared with prevalence distributions in the studied area. The prevalence of C. fetus subsp. venerealis infection in cows was 7.7% (21/273) (CI 95% 4.8% 11.5%), and 31.6% (6/19) of the farms showed at least one positive animal. The prevalence of T. foetus infection was 3.7% (13/349) (CI 95%, 2.1 - 6.4%). Regarding the gender, a prevalence of T. foetus infection of 4.5% (females) and 0.0% (males) was observed. The percentage of farms that had at least one positive animal for T. foetus was 19.3% (6/31). In culture, no samples were positive for T. foetus. The risk factor associated with T. foetus infection identified in this study was contact of females with bulls of other farms (OR 5.9; CI 1.5 - 22.4). This is the first report of C. fetus subsp. venerealis infection in dairy cows in this region of Brazil and the first in Brejo Paraibano microregion that analyzed T. foetus infection in cattle. To reduce risk of infection, it is recommended to adopt an artificial insemination program on the farms with negative bull semen, as well as a vaccination program against Bovine Genital Campylobacteriosis to stimulate immunity to reduce the occurrence of infection and possible reproductive problems. Contact of females with males of other farms should be avoided, especially when the health status of these bulls is not known regarding these two infections.

Production and characterization of monoclonal antibodies against Campylobacter fetus subsp. venerealis / Produção e caracterização de anticorpos monoespecíficos contra Campylobacter fetus subsp. venerealis

Myeloma cells Sp2/0-Ag14 and spleen cells from BALB/c mouse immunized with sonicated Campylobacter fetus subsp. venerealis NCTC 10354 were fused with polyethylene glycol (PEG) for the selection of clones producing antibodies. Clones were obtained by limiting dilution and screened for the production of specific antibodies to C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 by indirect ELISA and western blot against a panel of bacteria: C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354, C. fetus subsp fetus ADRI 1812, C. sputorum biovar sputorum LMG 6647, C. lari NCTC 11352, and Arcobacter skirrowii LMG 6621 for the ELISA and C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 and C. sputorum biovar sputorum LMG 6647 for the western blotting. Fifteen clones producing monoclonal antibodies (MAbs) anti-C. fetus subsp. venerealis of the IgM (1) and IgG (14) classes were further screened for species-specificity. Four clones of the 15 obtained were producers of species-specific monoclonal antibodies (MAbs): two were specific for C. fetus subsp. venerealis and two were specific for C. fetus subsp. fetus. None of the clones were reactive against C. sputorum biovar sputorum LMG 6647. All clones recognized a protein with molecular mass of approximately 148 kDa from lysed C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354.(AU)

Para a produção de anticorpos monoclonais contra Campylobacter fetus subsp. venerealis foram utilizadas as linhagens de células de mieloma Sp2/0-Ag14 e células de baço de camundongos BALB/c imunizados com sonicado de C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354. A detecção dos anticorpos monoclonais foi realizada por ELISA indireto utilizando antígeno sonicado de C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354. A clonagem foi realizada por diluição limitante e os clones foram caracterizados por ELISA indireto utilizando um painel de bactérias escolhidas em função da prevalência e habitats: C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354, C. fetus subsp. fetus ADRI 1812, C. sputorum biovar sputorum LMG 6647, C. lari NCTC 11352 e Arcobacter skirrowii LMG 6621; e no "western blotting" utilizando antígenos sonicados de C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 e C. sputorum biovar sputorum LMG 6647. Foram obtidos 15 clones produtores de anticorpos anti- C. fetus subsp. venerealis das classes IgM (1) e IgG (14). Quatro clones dentre os 15 clones obtidos foram produtores de anticorpos monoclonais espécie-específicos: dois clones reagiram com maior especificidade contra C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 e dois clones reagiram com maior especificidade contra C. fetus subsp. fetus ADRI 1812. Nenhum dos clones reagiu contra C. sputorum biovar sputorum LMG 6647, comprovando a especificidade dos anticorpos monoclonais testados. Todos os clones reconheceram uma proteína de massa molecular de aproximadamente 148 kDa no sonicado de C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354.(AU)

Campilobacteriose genital bovina e tricomonose genital bovina: epidemiologia, diagnóstico e controle / Bovine genital campylobacteriosis and bovine genital trichomonosis: epidemiology, diagnosis and control

A presente atualização trata de duas das mais importantes doenças sexualmente transmitidas de bovinos, a campilobacteriose genital bovina e a tricomonose genital bovina. São abordados aspectos relacionados à epidemiologia destas doenças, principalmente em relação a sua distribuição no Brasil. Também são revisados aspectos importantes de diagnóstico, incluindo as técnicas e interpretação dos resultados, além de medidas de controle para ambas as doenças.(AU)

The present update deals with two of the most important sexually transmitted diseases of cattle: bovine genital campylobacteriosis and bovine genital trichomonosis. Epidemiological aspects, mainly their distribution in Brazil, alongside with their diagnosis in cattle are presented and commented. The main points in their diagnoses, including the description of the techniques and the interpretation of the results are also reviewed. Finally the control and prevention of both diseases are discussed.(AU)

Quantitative analysis of Campylobacter fetus venerealis adhesion to bovine reproductive tract cell cultures / Análise quantitativa da adesão de Campylobacter fetus venerealis em culturas de células do aparelho reprodutor bovino

Campylobacter fetus is the etiological agent of bovine genital campylobacteriosis, a sexually transmitted disease which is associated with reproductive losses in bovines. Campylobacter colonizes the vagina and the uterus and then infects the epithelial cells of the endometrium. The objective of this work was to develop an ex vivo model to quantify the adhesion of Campylobacter to its natural specific target cells; this is a key step for the establishment of infection and studies regarding the adherence and cytotoxicity on the natural host cells are not available. The assays were carried out by seeding Campylobacter fetus venerealis on bovine vaginal and uterine epithelial cell cultures. HeLa cells were used as control. Bacterial adhesion was corroborated by optical microscopy and determination of the percentage of adherent bacteria was performed on immunochemically-stained slides. Results are presented as percentage of cells with adherent Campylobacter and as number of bacteria per cell. In comparison to the control HeLa cells, the statistical analysis revealed that primary cultures show a higher percentage of infected cells and a lower variation of the evaluated parameters. This primary culture model might be useful for studies on cytopathogenicity and adhesion of different field strains of Campylobacter fetus. (AU)

Campylobacter fetus é o agente etiológico da campilobacteriose genital bovina, uma doença sexualmente transmissível que está associada com perdas reprodutivas em bovinos. Campylobacter coloniza a vagina e o útero e então infecta as células epiteliais do endométrio. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um modelo ex vivo para quantificar a adesão de Campylobacter às células-alvo naturais específicas; este é um passo fundamental para o estabelecimento da infecção e estudos acerca da adesão e citotoxicidade sobre as células do hospedeiro natural não estão disponíveis. Os ensaios foram realizados a través da semeadura de Campylobacter fetus venerealis em culturas celulares epiteliais vaginais e uterinas.Células HeLa foram utilizadas como controle.A aderência bacteriana foi confirmada por microscopia óptica e a determinação da porcentagem de bactérias aderidas foi realizada em lâminas tingidas imunoquimicamente. Os resultados são apresentados como porcentagem de células com Campylobacter aderente e como o número de bactérias por células. Em comparação com as células HeLa controle, a análise estatística revelou que as culturas primárias mostram uma maior porcentagem de células infectadas e uma menor variação dos parâmetros avaliados. Este modelo de cultura primária pode ser útil para estudos sobre citopatogenicidade e adesão de diferentes cepas de campo de Campylobacter fetus. (AU)

Produção e caracterização de uma quimera recombinante de proteína de superfície de Campylobacter fetus

A campilobacteriose genital bovina (CGB) é uma importante enfermidade de caráter venéreo, causada por Campylobacter fetus subsp. venerealis e que acarreta perdas econômicas por causar problemas reprodutivos nos rebanhos bovinos. Esse patógeno possui proteínas de superfície (SapA), as quais são consideradas importantes na patogenia desta enfermidade por apresentar variação antigênica e serem responsáveis pela persistência da infecção no trato genital bovino. O diagnóstico laboratorial da CGB envolve procedimentos fastidiosos de colheita de material e de seu processamento. Com o intuito de facilitar as análises laboratoriais, este estudo objetivou a padronização dos processos de produção e caracterização de uma proteína quimérica recombinante. Desenhou-se um gene sintético quimérico, denominado sapAN78 a partir de sequências da Sap de C. fetus disponíveis publicamente. O fragmento foi clonado no plasmídeo pAE e expresso em Escherichia coli BL21(DE3) pLySs. A quimera recombinante de aproximadamente 60 kDa foi obtida como corpos de inclusão, solubilizada em tampão contendo ureia e purificada por cromatografia de afinidade ao níquel (Ni+2). Após a proteína foi submetida à diálise lenta e realizada a sua caracterização. Esta foi reconhecida por Western blot com anticorpo monoclonal anti-polihistidina, por anticorpos presentes no soro de bovinos vacinados para CGB e por Dot blot a rSapAn78 foi reconhecida por soros de bovinos e soro hiperimune produzido em coelho. Assim, expressão e caracterização de uma proteína de superfície na sua forma recombinante para o diagnóstico desta enfermidade torna a análise das amostras mais prática e acessível. Considerando tais resultados, essa nova proteína possui potencial aplicação em métodos menos laboriosos de diagnóstico para a detecção de campilobacteriose em bovinos

Bovine genital campylobacteriosis (BGC) is an important venereal disease, caused by Campylobacter fetus subsp. venerealis and related economic losses since it cause reproductive problems in cattle herds. SapA is a surface protein important for the pathogenesis of this bacterium by presenting antigenic variation and be responsible for the persistence of the infection in bovine genital tract. In order to facilitate the laboratory diagnosis of BGC, which involves labor - intensive procedures for collecting and processing the samples, this study aimed to standardize the production of a recombinant chimeric protein and also evaluate their potential as a tool for enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for sorological diagnosis of BCG in herds. The conserved region of nine homologous sequences of C. fetus sapA gene publicly available was used to design a chimeric synthetic gene, called sapAN78, with 1587 base pairs. The fragment was cloned into pAE plasmid and expressed in Escherichia coli BL21(DE3) pLysS. The recombinant chimera (60 kDa) was obtained as inclusion bodies, solubilized in a buffer containing urea and purified by nickel affinity chromatography (Ni+2), solubilized in a buffer containing urea and purified by nickel affinity chromatography (Ni+2). The protein was recognized by Western blotting with monoclonal polyhistidine antibodies and with sera from CGB vaccinated cattle and by Dot blotting using bovine sera and hyperimmunesera produced in rabbits. Thus, the expression and characterization of the surface protein, recognized as important in the development and maintenance of the BCG in herds, in the recombinant form and use it to diagnose may become more practical and accessible. Considering these results, this new protein has potential application in less laborious diagnostic methods for the detection of bovine campylobacteriosis.

Polymerase chain reaction for the diagnosis of bovine genital campylobacteriosis / Reação em cadeia da polimerase para o diagnóstico de campilobacteriose genital bovina

Bovine genital campylobacteriosis is a common venereal disease of cattle; the prevalence of this disease can be underestimated mostly because of the nature of the etiological agent, the microaerobic Campylobacter fetus subspecies venerealis. The purpose of the current study was to evaluate the utilization of polymerase chain reaction (PCR) in the diagnosis of genital campylobacteriosis in samples obtained from bull prepuce aspirate, cow cervical mucus, and abomasum contents of aborted fetuses, collected into enrichment medium. Five different DNA extraction protocols were tested: thermal extraction, lysis with proteinase K, lysis with guanidine isothiocyanate, lysis with DNAzol, and lysis with hexadecyltrimethylammonium bromide (CTAB). The specificity, sensitivity, and technical application of the PCR assay were also evaluated with clinical samples and compared to bacterial isolation by standard culture. DNA extraction by the CTAB protocol provided better results in PCR, and it was able to detect 63 colony-forming units per ml of C. fetus. Out of 277 clinical samples tested, 68 (24 percent) were positive for Campylobacter fetus using PCR, while only 8 (2.8 percent) of the samples were positive by bacterial isolation in solid medium, proving the superiority of the PCR technique when compared to the standard isolation method, and providing evidence for its usefulness as a better screening test in cattle for the diagnosis of bovine genital campylobacteriosis.(AU)

Campilobacteriose genital bovina é uma doença venérea comum em bovinos. A prevalência desta doença pode ser subestimada na maioria das vezes pela natureza microaeróbica do agente etiológico, Campylobacter fetus subspecies venerealis. O propósito do presente estudo foi avaliar a utilização da reação de polimerase em cadeia (PCR) no diagnóstico de campilobacteriose genital em amostras obtidas de aspirado prepucial de touros, muco cervical de vacas e conteúdo abomasal de fetos abortados, coletados em meio enriquecido. Cinco protocolos diferentes de extração de DNA foram testados: termo extração, lise com proteinase K, lise com guanidine isothiocyanate, lise com DNAzol e lise com hexadeciltrimetilamônio brometo (CTAB). A especificidade, sensibilidade e a aplicação da técnica da PCR foram também avaliadas com amostras clínicas e comparadas com bactérias isoladas por cultura padrão. DNA extraído pelo protocolo de CTAB demonstrou os melhores resultados na PCR, e foi capaz de detectar 63 unidades formadoras de colônias de C. fetus por ml de meio. Das 277 amostras clínicas testadas, 68 (24 por cento) foram positivas para Campylobacter fetus pela PCR, enquanto 8 (2,8 por cento) das amostras foram positivas por isolamento bacteriológico, provando a superioridade da técnica de PCR quando comparada com métodos padrão de isolamento, e fornecendo evidências de sua utilização como um teste de melhor projeção para diagnóstico em campilobacteriose genital bovina.(AU)

Pesquisa de campilobacteriose genital bovina em touros do triângulo mineiro

A campilobacteriose genital bovina é uma enfermidade infecciosa venérea causada pela bactéria Campylobacter fetus subsp. veneralis, que leva a infertilidade temporária da vaca devido a repetições de cios e abortos. As perdas econômicas são decorrentes do descarte e da reposição de animais inférteis, abortos e mortes embrionárias que provocam queda na produção de bezerros. Além disso, as produções de leite e carne também são afetadas pelo aumento do intervalo entre partos. Este agente possui uma larga distribuição mundial e no Brasil foi observada uma prevalência de 18,8% nos principais estados produtores de bovinos de corte. As novilhas e vacas jovens são mais susceptíveis, pois ainda não entraram em contato com o agente ou com touros contaminados; já os touros com mais de 5 anos se infectam mais, pois possuem as criptas no epitélio do pênis mais desenvolvidas. A transmissão da campilobacterio-se genital bovina se dá através do coito, pois o microorganismo instala-se no prepúcio dos machos e no trato genital das fêmeas. Na vaca, o agente causa uma reação inflamatória na mucosa uterina impossibilitando a implantação do zigoto e provo-cando conseqüente morte do embrião; ao passo que no touro, não se observa lesões. O objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrência da cam-pilobacteriose genital bovina em touros da região do Triângulo Mineiro-MG uma vez que tal doença provoca

Envolvimento de micoplasmas em vacas com distúrbios reprodutivos

Microrganismos pertencentes ao gênero Mycoplasma têm sido isolados do trato genital e de sêmem bovino, podendo expressar patogenicidade ou não. O objetivo deste estudo foi verificar a presença de Mycoplasma spp., e comparar com o diagnóstico de três importantes doenças da reprodução, em 14 vacas que apresentavam distúrbios reprodutivos. Foram coletadas amostras de muco vaginal de cada animal, usando-se solução salina tamponada a 0,85% para as coletas, transferindo-se alíquotas simultaneamente para o meio de Hayflick modificado, para isolamento de Mycoplasma spp., e para o meio de Lactopep para diagnóstico da Tricomonose bovina. Também foram coletadas amostras para pesquisa de anticorpos: de muco vaginal em tampão de gaze para a prova de muco aglutinação lenta, para o diagnóstico de Campilobacteriose e amostras de sangue para o teste de soroaglutinação em placa, para o diagnóstico de Brucelose. Das 14 amostras examinadas, oito (57,1%) foram positivas para Mycoplasma spp., e todas (100%) foram negativas para Brucelose, Tricomonose e Campilobacteriose, principais doenças da reprodução, registrando-se a ocorrência de microrganismos do gênero Mycoplasma no trato genital de vacas com problemas reprodutivos, sugerindo-se seus envolvimentos como patógenos.