Resumo
Abstract Hyperhydricity is a serious physiological disorder and affects In vitro propagation of many plants and as well of Salvia santolinifolia. The donor material to initiate the in vitro culture was the callus taken from the in vitro shoots produced on Murashig and Skoogs (MS) medium at 4.0 mg/l BA. This callus formed numerous hyperhydric shoots on culturing upon the medium of the same composition. The aim was to systematically evaluate the effect of cytokinins (Benzyladnine (BA) and N6-(-2-isopentenyl) adenine (2iP), culture vessels magnitude, medium solidification, source of nitrogen and calcium chloride for the alleviation of hyperhydricity. In the tissue cultures of S. santolinifolia BA and 2iP induced severe hyperhydricity, when other factors i.e. culture vessels magnitude and a suitable concentration of agar, ammonium nitrate (NH4NO3), potassium nitrate (KNO3) & calcium chloride (CaCl2.2H2O) were not optimized. After 30 days' culture, we observed 83.82% hyperhydric shoots at increased level (1.5 mg/l 2iP) and 81.59% at decreased levels (1.0 mg/l 2iP). On the other hand, hyperhydricity percentage at decreased (0.4%) and at increased (0.8%) levels of agar were 72.37% and 39.08%, respectively. MS medium modification with NH4NO3 (412 mg/l), KNO3 (475 mg/l) and CaCl2.2H2O (880 mg/l) was found the best medium to reduced hyperhydricity (23.6%).
Resumo A hiperidricidade é um distúrbio fisiológico sério e afeta a propagação in vitro de muitas plantas e também da Salvia santolinifolia. O material doador para iniciar a cultura in vitro foi o calo retirado dos brotos in vitro produzidos em meio Murashig e Skoogs (MS) a 4,0 mg / l BA. Esse calo formou numerosos rebentos hiperídricos em cultura no meio da mesma composição. O objetivo foi avaliar sistematicamente o efeito das citocininas (Benziladnina (BA) e N6 - (- 2-isopentenil) adenina (2iP), magnitude dos vasos de cultura, solidificação do meio, fonte de nitrogênio e cloreto de cálcio para o alívio da hiperidricidade. culturas de tecidos de S. santolinifolia BA e 2iP induziram hiperidricidade severa, quando outros fatores, como magnitude dos vasos de cultura e uma concentração adequada de ágar, nitrato de amônio (NH4NO3), nitrato de potássio (KNO3) e cloreto de cálcio (CaCl2.2H2O), não foram otimizados. Após 30 dias de cultura, observamos 83,82% de brotos hiperídricos em níveis aumentados (1,5 mg / l 2iP) e 81,59% em níveis reduzidos (1,0 mg / l 2iP). Por outro lado, a porcentagem de hiperidricidade diminuiu (0,4%) e em níveis aumentados (0,8%) de ágar foram 72,37% e 39,08%, respectivamente. A modificação do meio MS com NH4NO3 (412 mg / l), KNO3 (475 mg / l) e CaCl2.2H2O (880 mg / l) foi encontrada melhor hiperidricidade média a reduzida (23,6%).
Assuntos
Salvia , Brotos de Planta , Meios de CulturaResumo
Abstract Hyperhydricity is a serious physiological disorder and affects In vitro propagation of many plants and as well of Salvia santolinifolia. The donor material to initiate the in vitro culture was the callus taken from the in vitro shoots produced on Murashig and Skoogs (MS) medium at 4.0 mg/l BA. This callus formed numerous hyperhydric shoots on culturing upon the medium of the same composition. The aim was to systematically evaluate the effect of cytokinins (Benzyladnine (BA) and N6-(-2-isopentenyl) adenine (2iP), culture vessels magnitude, medium solidification, source of nitrogen and calcium chloride for the alleviation of hyperhydricity. In the tissue cultures of S. santolinifolia BA and 2iP induced severe hyperhydricity, when other factors i.e. culture vessels magnitude and a suitable concentration of agar, ammonium nitrate (NH4NO3), potassium nitrate (KNO3) & calcium chloride (CaCl2.2H2O) were not optimized. After 30 days culture, we observed 83.82% hyperhydric shoots at increased level (1.5 mg/l 2iP) and 81.59% at decreased levels (1.0 mg/l 2iP). On the other hand, hyperhydricity percentage at decreased (0.4%) and at increased (0.8%) levels of agar were 72.37% and 39.08%, respectively. MS medium modification with NH4NO3 (412 mg/l), KNO3 (475 mg/l) and CaCl2.2H2O (880 mg/l) was found the best medium to reduced hyperhydricity (23.6%).
Resumo A hiperidricidade é um distúrbio fisiológico sério e afeta a propagação in vitro de muitas plantas e também da Salvia santolinifolia. O material doador para iniciar a cultura in vitro foi o calo retirado dos brotos in vitro produzidos em meio Murashig e Skoogs (MS) a 4,0 mg / l BA. Esse calo formou numerosos rebentos hiperídricos em cultura no meio da mesma composição. O objetivo foi avaliar sistematicamente o efeito das citocininas (Benziladnina (BA) e N6 - (- 2-isopentenil) adenina (2iP), magnitude dos vasos de cultura, solidificação do meio, fonte de nitrogênio e cloreto de cálcio para o alívio da hiperidricidade. culturas de tecidos de S. santolinifolia BA e 2iP induziram hiperidricidade severa, quando outros fatores, como magnitude dos vasos de cultura e uma concentração adequada de ágar, nitrato de amônio (NH4NO3), nitrato de potássio (KNO3) e cloreto de cálcio (CaCl2.2H2O), não foram otimizados. Após 30 dias de cultura, observamos 83,82% de brotos hiperídricos em níveis aumentados (1,5 mg / l 2iP) e 81,59% em níveis reduzidos (1,0 mg / l 2iP). Por outro lado, a porcentagem de hiperidricidade diminuiu (0,4%) e em níveis aumentados (0,8%) de ágar foram 72,37% e 39,08%, respectivamente. A modificação do meio MS com NH4NO3 (412 mg / l), KNO3 (475 mg / l) e CaCl2.2H2O (880 mg / l) foi encontrada melhor hiperidricidade média a reduzida (23,6%).
Resumo
ABSTRACT: The state of Santa Catarina is the second-largest producer of rice seeds in Brazil. Research on phytopathogenicbacterias in this crop is scarce and the high frequency of panicle diseases leads to the hypothesis that seeds may be infected by bacteria. This research quantified the incidence of bacteria in the seeds, verified the bacteria viability during the storage period and characterized the associated bacteria. Seeds from the 2018/19 and 2019/20 seasons were analyzed. To check the incidence, the seeds were disinfected, plated on a nutrient agar + fungicide culture medium, and incubated for seven days at 27 °C. To assess viability, every 45 days, three cultivars stored in a processing unit were subjected to the same detection methodology. To characterize, prevalent colonies were isolated on semi-selective culture medium Pantoea genus-specific agar (PGSA), where the ones that showed growth were subjected to deoxyribonucleic acid (DNA) extraction and Polymerase Chain Reaction (PCR), DNA sequencing, and sequence comparison on GenBank. The hypersensitivity reaction (HR) in tobacco was performed using a bacterial suspension of each isolate. All seed samples had an average incidence of 83%. During storage, the seeds maintained stable bacterial viability, with an average incidence of 95% at the beginning of storage and 99% at the end of it. All isolates that grew in PGSA culture medium were identified by molecular characterization with 100% identity with two specimens of Pantoeaananatis and one of them induced RH in tobacco.
RESUMO: O estado de Santa Catarina é o segundo maior produtor de sementes de arroz do Brasil. As pesquisas com bactérias fitopatogênicas nesta cultura são escassas e a alta frequência de doenças da panícula leva à hipótese de que sementes podem estar infectadas por bactérias. O objetivo desta pesquisa foi quantificar a incidência de bactérias nas sementes, verificar a viabilidade das bactérias durante o período de armazenamento e caracterizar as bactérias associadas. Foram analisadas sementes das safras 2018/19 e 2019/20. Para verificar a incidência, as sementes foram desinfestadas, plaqueadas em meio de cultura ágar nutriente + fungicida e incubadas por sete dias a 27 °C. Para avaliar a viabilidade, a cada 45 dias, três cultivares armazenadas em uma unidade de beneficiamento foram submetidas à mesma metodologia de detecção. Para caracterizar, colônias prevalentes foram isoladas em meio de cultura semisseletivo Pantoea genus-specific ágar (PGSA), onde as que apresentaram crescimento foram submetidas à extração do ácido desoxirribonucléico (DNA) e Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), sequenciamento do DNA e comparação de sequências no GenBank. A reação de hipersensibilidade (HR) em tabaco foi realizada utilizando uma suspensão bacteriana de cada isolado. Todas as amostras de sementes apresentaram incidência média de 83%. Durante o armazenamento, as sementes mantiveram viabilidade bacteriana estável, com incidência média de 95% no início do armazenamento e 99% ao fim. Todos os isolados que cresceram no meio de cultura PGSA, foram identificados por caracterização molecular com 100% de identidade com dois espécimes de Pantoea ananatis e um deles induziu HR em tabaco.
Resumo
Abstract Mesenchymal stem cells (MSCs) have great potential for application in cell therapy and tissue engineering procedures because of their plasticity and capacity to differentiate into different cell types. Given the widespread use of MSCs, it is necessary to better understand some properties related to osteogenic differentiation, particularly those linked to biomaterials used in tissue engineering. The aim of this study was to develop an analysis method using FT-Raman spectroscopy for the identification and quantification of biochemical components present in conditioned culture media derived from MSCs with or without induction of osteogenic differentiation. All experiments were performed between passages 3 and 5. For this analysis, MSCs were cultured on scaffolds composed of bioresorbable poly(hydroxybutyrate-co-hydroxyvalerate) (PHBV) and poly(-caprolactone) (PCL) polymers. MSCs (GIBCO®) were inoculated onto the pure polymers and 75:25 PHBV/PCL blend (dense and porous samples). The plate itself was used as control. The cells were maintained in DMEM (with low glucose) containing GlutaMAX® and 10% FBS at 37oC with 5% CO2 for 21 days. The conditioned culture media were collected and analyzed to probe for functional groups, as well as possible molecular variations associated with cell differentiation and metabolism. The method permitted to identify functional groups of specific molecules in the conditioned medium such as cholesterol, phosphatidylinositol, triglycerides, beta-subunit polypeptides, amide regions and hydrogen bonds of proteins, in addition to DNA expression. In the present study, FT-Raman spectroscopy exhibited limited resolution since different molecules can express similar or even the same stretching vibrations, a fact that makes analysis difficult. There were no variations in the readings between the samples studied. In conclusion, FT-Raman spectroscopy did not meet expectations under the conditions studied.
Resumo As células-tronco mesenquimais (MSCs) possuem grande potencial para aplicação em procedimentos terapêuticos ligados a terapia celular e engenharia de tecidos, considerando-se a plasticidade e capacidade de formação em diferentes tipos celulares por elas. Dada a abrangência no emprego das MSCs, há necessidade de se compreender melhor algumas propriedades relacionadas à diferenciação osteogênica, particularmente liga à biomateriais usados em engenharia de tecidos. Este projeto objetiva o desenvolvimento de uma metodologia de análise empregando-se a FT-Raman para identificação e quantificação de componentes bioquímicos presentes em meios de cultura condicionados por MSCs, com ou sem indução à diferenciação osteogênica. Todos os experimentos foram realizados entre as passagens 3 e 5. Para essas análises, as MSCs foram cultivadas sobre arcabouços de polímeros biorreabsorvíveis de poli (hidroxibutirato-co-hidroxivalerato) (PHBV) e o poli (-caprolactona) (PCL). As MSCs (GIBCO®) foram inoculadas nos polímeros puros e na mistura 75:25 de PHBV / PCL (amostras densas e porosas). As células foram mantidas em DMEM (com baixa glicose) contendo GlutaMAX® e 10% de SFB a 37oC com 5% de CO2 por 21 dias. A própria placa foi usada como controle. Os meios de cultura condicionados foram coletados e analisadas em FT-Raman para sondagem de grupos funcionais, bem como possíveis variações moleculares associadas com a diferenciação e metabolismo celular. Foi possível discernir grupos funcionais de moléculas específicas no meio condicionado, como colesterol, fosfatidilinositol, triglicerídeos, forma Beta de polipeptídeos, regiões de amida e ligações de hidrogênio de proteínas, além da expressão de DNA. Na presente avaliação, a FT-Raman apresentou como uma técnica de resolução limitada, uma vez que modos vibracionais de estiramento próximos ou mesmo iguais podem ser expressos por moléculas diferente, dificultando a análise. Não houve variações nas leituras entre as amostras estudadas, concluindo-se que a FT-Raman não atendeu às expectativas nas condições estudadas.
Resumo
Abstract Mesenchymal stem cells (MSCs) have great potential for application in cell therapy and tissue engineering procedures because of their plasticity and capacity to differentiate into different cell types. Given the widespread use of MSCs, it is necessary to better understand some properties related to osteogenic differentiation, particularly those linked to biomaterials used in tissue engineering. The aim of this study was to develop an analysis method using FT-Raman spectroscopy for the identification and quantification of biochemical components present in conditioned culture media derived from MSCs with or without induction of osteogenic differentiation. All experiments were performed between passages 3 and 5. For this analysis, MSCs were cultured on scaffolds composed of bioresorbable poly(hydroxybutyrate-co-hydroxyvalerate) (PHBV) and poly(ε-caprolactone) (PCL) polymers. MSCs (GIBCO®) were inoculated onto the pure polymers and 75:25 PHBV/PCL blend (dense and porous samples). The plate itself was used as control. The cells were maintained in DMEM (with low glucose) containing GlutaMAX® and 10% FBS at 37oC with 5% CO2 for 21 days. The conditioned culture media were collected and analyzed to probe for functional groups, as well as possible molecular variations associated with cell differentiation and metabolism. The method permitted to identify functional groups of specific molecules in the conditioned medium such as cholesterol, phosphatidylinositol, triglycerides, beta-subunit polypeptides, amide regions and hydrogen bonds of proteins, in addition to DNA expression. In the present study, FT-Raman spectroscopy exhibited limited resolution since different molecules can express similar or even the same stretching vibrations, a fact that makes analysis difficult. There were no variations in the readings between the samples studied. In conclusion, FT-Raman spectroscopy did not meet expectations under the conditions studied.
Resumo As células-tronco mesenquimais (MSCs) possuem grande potencial para aplicação em procedimentos terapêuticos ligados a terapia celular e engenharia de tecidos, considerando-se a plasticidade e capacidade de formação em diferentes tipos celulares por elas. Dada a abrangência no emprego das MSCs, há necessidade de se compreender melhor algumas propriedades relacionadas à diferenciação osteogênica, particularmente liga à biomateriais usados em engenharia de tecidos. Este projeto objetiva o desenvolvimento de uma metodologia de análise empregando-se a FT-Raman para identificação e quantificação de componentes bioquímicos presentes em meios de cultura condicionados por MSCs, com ou sem indução à diferenciação osteogênica. Todos os experimentos foram realizados entre as passagens 3 e 5. Para essas análises, as MSCs foram cultivadas sobre arcabouços de polímeros biorreabsorvíveis de poli (hidroxibutirato-co-hidroxivalerato) (PHBV) e o poli (ε-caprolactona) (PCL). As MSCs (GIBCO®) foram inoculadas nos polímeros puros e na mistura 75:25 de PHBV / PCL (amostras densas e porosas). As células foram mantidas em DMEM (com baixa glicose) contendo GlutaMAX® e 10% de SFB a 37oC com 5% de CO2 por 21 dias. A própria placa foi usada como controle. Os meios de cultura condicionados foram coletados e analisadas em FT-Raman para sondagem de grupos funcionais, bem como possíveis variações moleculares associadas com a diferenciação e metabolismo celular. Foi possível discernir grupos funcionais de moléculas específicas no meio condicionado, como colesterol, fosfatidilinositol, triglicerídeos, forma Beta de polipeptídeos, regiões de amida e ligações de hidrogênio de proteínas, além da expressão de DNA. Na presente avaliação, a FT-Raman apresentou como uma técnica de resolução limitada, uma vez que modos vibracionais de estiramento próximos ou mesmo iguais podem ser expressos por moléculas diferente, dificultando a análise. Não houve variações nas leituras entre as amostras estudadas, concluindo-se que a FT-Raman não atendeu às expectativas nas condições estudadas.
Assuntos
Animais , Ratos , Células-Tronco Mesenquimais , Osteogênese , Poliésteres , Análise Espectral Raman , Meios de Cultivo Condicionados , Proliferação de Células , Alicerces TeciduaisResumo
The success of in vitro cultivation of plant species depends on factors associated with the induction and control of morphogenesis regarding the regeneration of shoots and roots in the organogenesis process, such as the culture medium composition. Thus, the objective of this study was to investigate if theconcentration of growth regulators in culture medium interferes with the in vitro morphogenesis of gypsophila. 'Golan' cultivar was subjected to three culture media (M), which constituted the study treatments: M1) Murashige and Skoog (MS) medium without the addition of growth regulators; M2) MS + 1 mg L-1of benzylaminopurine (BAP) + 0.05 mg L-1of naphthaleneacetic acid (NAA); M3) MS + 0.05 mg L-1BAP + 1 mg L-1NAA. After 45 days, the multiplication rate, plant height and root length were evaluated. The results showed that plantlets produced in M2 medium had a higher multiplication rate. Also, plantlets produced in M1 and M3 media showed higher shoot height and root length. It is concluded that there is a difference in the in vitromorphogenesis of gypsophila according to the concentration of growth regulators in the micropropagation medium.(AU)
O sucesso do cultivo in vitro de espécies vegetais depende de fatores associados à indução e ao controle da morfogênese quanto à regeneração de brotos e raízes no processo de organogênese, a exemplo da composição de meio de cultura. Assim, o objetivo do estudo foi investigar se a concentração de reguladores de crescimento em meio de cultura interfere na morfogênese in vitrode gipsofila. A cultivar 'Golan' foi submetida a três meios de cultura (M), que constituíram os tratamentos do estudo: M1) meio Murashige e Skoog (MS) sem adição de reguladores de crescimento; M2) MS + 1 mg.L-1de benzilaminopurina (BAP) + 0.05 mg.L-1de ácido naftalenoacético (ANA); M3) MS + 0.05 mg.L-1BAP + 1 mg.L-1de ANA. Após 45 dias avaliou-se a taxa de multiplicação, altura de plantas e comprimento de raízes. Os resultados mostraram que plântulas produzidas no meio M2 tiveram maior taxa de multiplicação. Ainda, plântulas produzidas nos meios M1 e M3 apresentaram maior altura de parte aérea e comprimento de raízes. Conclui-se que há diferença na morfogênese in vitrode gipsofila de acordo com a concentração de reguladores de crescimento em meio de cultura na micropropagação.(AU)
Assuntos
Reguladores de Crescimento de Plantas/análise , Caryophyllaceae/crescimento & desenvolvimento , Morfogênese , Técnicas In Vitro/métodosResumo
The study aim was to evaluate the cytotoxic activity, using the MTT test [3-(4,5-Dimethilthiazol-2-yl)-2,5-diphenil tetrazolium bromide], from the crude extract of Picrasma crenata (Pau Tenente) and its isolated compounds, quassin and parain, in culture of rat liver tumor cells (HTC). The test was carried out exposing the cells for 24, 48 and 72 hours to concentrations of 5, 10, 50, 100, 200, 300, 400, 500 and 1000 µg of crude extract of Pau Tenente/mL of culture medium and 1, 5, 10, 15, 20, 40, 60, 80 and 100 µg of quassin or parain compounds/mL of culture medium. The absorbances averages results obtained showed that the crude extract did not present cytotoxicity for the HTC cells in all the concentrations and evaluated times. For quassin, the concentrations of 80 and 100 µg/mL were cytotoxic, after 72 hours of treatment. For parain, the concentrations of 1, 5, 20, 40, 60, 80 and 100 µg/mL, in 72 hours, were cytotoxic, revealing a new activity for this compound. Thus, the results demonstrate a first indication of the cytotoxic activity of compounds quassin and parain, adding an important social and economic value to them, and may have application in future research and in pharmaceutical industry.
O objetivo do estudo foi avaliar a atividade citotóxica, por meio do teste MTT [brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazólio], do extrato bruto de Picrasma crenata (Pau Tenente) e seus compostos isolados, quassina e paraína, em cultura de células tumorais de fígado de rato (HTC). O teste foi realizado expondo as células por 24, 48 e 72 horas às concentrações de 5, 10, 50, 100, 200, 300, 400, 500 e 1000 µg de extrato bruto de Pau Tenente/mL de meio de cultura e 1, 5, 10, 15, 20, 40, 60, 80 e 100 µg de compostos de quassina ou paraína/mL de meio de cultura. Os resultados das médias de absorbâncias obtidos mostraram que o extrato bruto não apresentou citotoxicidade para as células HTC em todas as concentrações e tempos avaliados. Para quassina, as concentrações de 80 e 100 µg/mL foram citotóxicas, após 72 horas de tratamento. Para a paraína, as concentrações de 1, 5, 20, 40, 60, 80 e 100 µg/mL, em 72 horas, foram citotóxicas, revelando uma nova atividade para este composto. Assim, os resultados demonstram uma primeira indicação da atividade citotóxica dos compostos quassina e paraína, agregando-lhes importante valor social e econômico, podendo ter aplicação em pesquisas futuras e na indústria farmacêutica.
Assuntos
Animais , Ratos , Extratos Vegetais , Picrasma/toxicidade , Quassinas , NeoplasiasResumo
Hyperhydricity is a serious physiological disorder and affects In vitro propagation of many plants and as well of Salvia santolinifolia. The donor material to initiate the in vitro culture was the callus taken from the in vitro shoots produced on Murashig and Skoogs (MS) medium at 4.0 mg/l BA. This callus formed numerous hyperhydric shoots on culturing upon the medium of the same composition. The aim was to systematically evaluate the effect of cytokinins (Benzyladnine (BA) and N6-(-2-isopentenyl) adenine (2iP), culture vessels magnitude, medium solidification, source of nitrogen and calcium chloride for the alleviation of hyperhydricity. In the tissue cultures of S. santolinifolia BA and 2iP induced severe hyperhydricity, when other factors i.e. culture vessels magnitude and a suitable concentration of agar, ammonium nitrate (NH4NO3), potassium nitrate (KNO3) & calcium chloride (CaCl2.2H2O) were not optimized. After 30 days' culture, we observed 83.82% hyperhydric shoots at increased level (1.5 mg/l 2iP) and 81.59% at decreased levels (1.0 mg/l 2iP). On the other hand, hyperhydricity percentage at decreased (0.4%) and at increased (0.8%) levels of agar were 72.37% and 39.08%, respectively. MS medium modification with NH4NO3 (412 mg/l), KNO3 (475 mg/l) and CaCl2.2H2O (880 mg/l) was found the best medium to reduced hyperhydricity (23.6%).
A hiperidricidade é um distúrbio fisiológico sério e afeta a propagação in vitro de muitas plantas e também da Salvia santolinifolia. O material doador para iniciar a cultura in vitro foi o calo retirado dos brotos in vitro produzidos em meio Murashig e Skoogs (MS) a 4,0 mg / l BA. Esse calo formou numerosos rebentos hiperídricos em cultura no meio da mesma composição. O objetivo foi avaliar sistematicamente o efeito das citocininas (Benziladnina (BA) e N6 - (- 2-isopentenil) adenina (2iP), magnitude dos vasos de cultura, solidificação do meio, fonte de nitrogênio e cloreto de cálcio para o alívio da hiperidricidade. culturas de tecidos de S. santolinifolia BA e 2iP induziram hiperidricidade severa, quando outros fatores, como magnitude dos vasos de cultura e uma concentração adequada de ágar, nitrato de amônio (NH4NO3), nitrato de potássio (KNO3) e cloreto de cálcio (CaCl2.2H2O), não foram otimizados. Após 30 dias de cultura, observamos 83,82% de brotos hiperídricos em níveis aumentados (1,5 mg / l 2iP) e 81,59% em níveis reduzidos (1,0 mg / l 2iP). Por outro lado, a porcentagem de hiperidricidade diminuiu (0,4%) e em níveis aumentados (0,8%) de ágar foram 72,37% e 39,08%, respectivamente. A modificação do meio MS com NH4NO3 (412 mg / l), KNO3 (475 mg / l) e CaCl2.2H2O (880 mg / l) foi encontrada melhor hiperidricidade média a reduzida (23,6%).
Assuntos
Reguladores de Crescimento de Plantas/análise , Salvia/efeitos dos fármacos , Salvia/fisiologiaResumo
Hyperhydricity is a serious physiological disorder and affects In vitro propagation of many plants and as well of Salvia santolinifolia. The donor material to initiate the in vitro culture was the callus taken from the in vitro shoots produced on Murashig and Skoogs (MS) medium at 4.0 mg/l BA. This callus formed numerous hyperhydric shoots on culturing upon the medium of the same composition. The aim was to systematically evaluate the effect of cytokinins (Benzyladnine (BA) and N6-(-2-isopentenyl) adenine (2iP), culture vessels magnitude, medium solidification, source of nitrogen and calcium chloride for the alleviation of hyperhydricity. In the tissue cultures of S. santolinifolia BA and 2iP induced severe hyperhydricity, when other factors i.e. culture vessels magnitude and a suitable concentration of agar, ammonium nitrate (NH4NO3), potassium nitrate (KNO3) & calcium chloride (CaCl2.2H2O) were not optimized. After 30 days' culture, we observed 83.82% hyperhydric shoots at increased level (1.5 mg/l 2iP) and 81.59% at decreased levels (1.0 mg/l 2iP). On the other hand, hyperhydricity percentage at decreased (0.4%) and at increased (0.8%) levels of agar were 72.37% and 39.08%, respectively. MS medium modification with NH4NO3 (412 mg/l), KNO3 (475 mg/l) and CaCl2.2H2O (880 mg/l) was found the best medium to reduced hyperhydricity (23.6%).(AU)
A hiperidricidade é um distúrbio fisiológico sério e afeta a propagação in vitro de muitas plantas e também da Salvia santolinifolia. O material doador para iniciar a cultura in vitro foi o calo retirado dos brotos in vitro produzidos em meio Murashig e Skoogs (MS) a 4,0 mg / l BA. Esse calo formou numerosos rebentos hiperídricos em cultura no meio da mesma composição. O objetivo foi avaliar sistematicamente o efeito das citocininas (Benziladnina (BA) e N6 - (- 2-isopentenil) adenina (2iP), magnitude dos vasos de cultura, solidificação do meio, fonte de nitrogênio e cloreto de cálcio para o alívio da hiperidricidade. culturas de tecidos de S. santolinifolia BA e 2iP induziram hiperidricidade severa, quando outros fatores, como magnitude dos vasos de cultura e uma concentração adequada de ágar, nitrato de amônio (NH4NO3), nitrato de potássio (KNO3) e cloreto de cálcio (CaCl2.2H2O), não foram otimizados. Após 30 dias de cultura, observamos 83,82% de brotos hiperídricos em níveis aumentados (1,5 mg / l 2iP) e 81,59% em níveis reduzidos (1,0 mg / l 2iP). Por outro lado, a porcentagem de hiperidricidade diminuiu (0,4%) e em níveis aumentados (0,8%) de ágar foram 72,37% e 39,08%, respectivamente. A modificação do meio MS com NH4NO3 (412 mg / l), KNO3 (475 mg / l) e CaCl2.2H2O (880 mg / l) foi encontrada melhor hiperidricidade média a reduzida (23,6%).(AU)
Assuntos
Salvia/efeitos dos fármacos , Salvia/fisiologia , Reguladores de Crescimento de Plantas/análiseResumo
The state of Santa Catarina is the second-largest producer of rice seeds in Brazil. Research on phytopathogenicbacterias in this crop is scarce and the high frequency of panicle diseases leads to the hypothesis that seeds may be infected by bacteria. This research quantified the incidence of bacteria in the seeds, verified the bacteria viability during the storage period and characterized the associated bacteria. Seeds from the 2018/19 and 2019/20 seasons were analyzed. To check the incidence, the seeds were disinfected, plated on a nutrient agar + fungicide culture medium, and incubated for seven days at 27 °C. To assess viability, every 45 days, three cultivars stored in a processing unit were subjected to the same detection methodology. To characterize, prevalent colonies were isolated on semi-selective culture medium Pantoea genus-specific agar (PGSA), where the ones that showed growth were subjected to deoxyribonucleic acid (DNA) extraction and Polymerase Chain Reaction (PCR), DNA sequencing, and sequence comparison on GenBank. The hypersensitivity reaction (HR) in tobacco was performed using a bacterial suspension of each isolate. All seed samples had an average incidence of 83%. During storage, the seeds maintained stable bacterial viability, with an average incidence of 95% at the beginning of storage and 99% at the end of it. All isolates that grew in PGSA culture medium were identified by molecular characterization with 100% identity with two specimens of Pantoeaananatis and one of them induced RH in tobacco.
O estado de Santa Catarina é o segundo maior produtor de sementes de arroz do Brasil. As pesquisas com bactérias fitopatogênicas nesta cultura são escassas e a alta frequência de doenças da panícula leva à hipótese de que sementes podem estar infectadas por bactérias. O objetivo desta pesquisa foi quantificar a incidência de bactérias nas sementes, verificar a viabilidade das bactérias durante o período de armazenamento e caracterizar as bactérias associadas. Foram analisadas sementes das safras 2018/19 e 2019/20. Para verificar a incidência, as sementes foram desinfestadas, plaqueadas em meio de cultura ágar nutriente + fungicida e incubadas por sete dias a 27 °C. Para avaliar a viabilidade, a cada 45 dias, três cultivares armazenadas em uma unidade de beneficiamento foram submetidas à mesma metodologia de detecção. Para caracterizar, colônias prevalentes foram isoladas em meio de cultura semisseletivo Pantoea genus-specific ágar (PGSA), onde as que apresentaram crescimento foram submetidas à extração do ácido desoxirribonucléico (DNA) e Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), sequenciamento do DNA e comparação de sequências no GenBank. A reação de hipersensibilidade (HR) em tabaco foi realizada utilizando uma suspensão bacteriana de cada isolado. Todas as amostras de sementes apresentaram incidência média de 83%. Durante o armazenamento, as sementes mantiveram viabilidade bacteriana estável, com incidência média de 95% no início do armazenamento e 99% ao fim. Todos os isolados que cresceram no meio de cultura PGSA, foram identificados por caracterização molecular com 100% de identidade com dois espécimes de Pantoea ananatis e um deles induziu HR em tabaco.
Assuntos
Oryza/parasitologia , Sementes/parasitologia , Pantoea/patogenicidadeResumo
Starch processing industries use amylases, accounting for approximately 30% of the world's enzyme market. Previously, an amylase-producing strain of Epicoccum nigrumwas isolated from maize grains. Although E. nigrumamylase production is already reported in the literature, no published data on production optimization or characterization of the produced enzyme exists. The objectives of this work were to improve the amylase production by theE. nigrumPG 16 strain and to purify and characterize the produced enzyme. The E. nigrumPG 16 amylase production best conditions in submerged culture were: inoculum of 4% (v v-1) of a five-days-old stationary culture homogenate, agitation at 100 rpm, 25°C, natural light, 72 hours of incubation, starch as thecarbon source, and an initial medium pH of 7.0. A molecular exclusion chromatography profile has shown the production of only one amylase, which was partially purified with ammonium precipitation and dialysis. The enzyme optima pH and temperature are 6.0 and 50°C, respectively. The partially purified enzyme lostits activity when incubated for 30 min in temperatures above 40°C, presenting a T50of 46.25°C. The KMand Vmaxof the partially purified enzyme are 1.72 mg mL-1of starch and 0.15 mgmin-1of degraded starch, respectively. The ion Ca2+slightly activated the studied enzyme. The ions Cu2+, Zn2+, and Fe3+and the detergents SDS and Tween 80 acted as inhibitors of the studied enzyme. The partially purified enzyme released glucose from p-nitrophenyl α-D-glucopyranoside (p-NPG). Glucose was the enzyme's main product from starch hydrolysis, as evidenced by thin-layer chromatography. The E. nigrumPG 16 studied enzyme is a glucoamylase and represents an alternative for enzymatic starch hydrolysis.(AU)
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Ascomicetos/enzimologia , Amilases/isolamento & purificação , Zea mays/microbiologiaResumo
Abstract Pesticide residues that contaminate the environment circulate within the hydrological cycle can accumulate within the food chain and cause problems to both environmental and human health. Microbes, however, are well known for their metabolic versatility and the ability to degrade chemically stable substances, including recalcitrant xenobiotics. The current study focused on bio-prospecting within Amazonian rainforest soils to find novel strains fungi capable of efficiently degrading the agriculturally and environmentally ubiquitous herbicide, glyphosate. Of 50 fungal strains isolated (using culture media supplemented with glyphosate as the sole carbon-substrate), the majority were Penicillium strains (60%) and the others were Aspergillus and Trichoderma strains (26 and 8%, respectively). All 50 fungal isolates could use glyphosate as a phosphorous source. Eight of these isolates grew better on glyphosate-supplemented media than on regular Czapek Dox medium. LC-MS revealed that glyphosate degradation by Penicillium 4A21 resulted in sarcosine and aminomethylphosphonic acid.
Resumo Resíduos de agrotóxicos que contaminam o meio ambiente circulam no ciclo hidrológico, podendo se acumular na cadeia alimentar e causar problemas tanto à saúde ambiental quanto humana. Por sua vez, microrganismos são bem conhecidos por sua versatilidade metabólica e capacidade de degradar substâncias quimicamente estáveis, incluindo xenobióticos recalcitrantes. O estudo atual se concentrou na bioprospecção nos solos da floresta amazônica para encontrar novas linhagens de fungos capazes de degradar com eficiência o herbicida onipresente na agricultura e no meio ambiente, o glifosato. Entre os 50 fungos isolados (usando meio de cultura suplementado com glifosato como única fonte de carbono), a maioria eram isolados do gênero Penicillium (60%) e os outros eram isolados de Aspergillus e Trichoderma (26 e 8%, respectivamente). Todos os 50 isolados de fungos foram capazes de usar glifosato como fonte de fósforo. Oito desses isolados cresceram melhor em meio suplementado com glifosato do que em meio Czapek Dox regular. LC-MS revelou que a degradação do glifosato por Penicillium 4A21 resultou nos metabólitos sarcosina e ácido aminometilfosfônico.
Resumo
Nidularium minutum is an ornamental bromeliad from the Brazilian Rainforest. The micropropagation of this species is essential for obtaining plants available for conservation programs or commercial use. Our study aimed to establish an efficient plant production method by in vitro sprouting. This bromeliad takes a long time to sprout in vitro, and 10% of the plants produce shoots in a culture medium without plant growth regulators (PGRs). When subcultured in a PGR-free medium, these individualized shoots can sprout like the mother plant. The Murashige and Skoog basal medium (MS) containing 1.0 mg L-1 of 6-benzylaminopurine (BAP) promoted the induction of adventitious shoots in greater than 90% of the plants after 240 days of culture with an average of more than eight shoots per plant. Approximately 100% of the in vitro-produced shoots survived after acclimatization, reaching the flowering stage. Therefore, our results showed that in vitro regeneration of N. minutum depends on the cultivation period and that plants with a higher sprouting capacity can be selected and used as micropropagation matrices, contributing to the production of this endangered bromeliad.(AU)
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Produtos Agrícolas/crescimento & desenvolvimento , Bromeliaceae/crescimento & desenvolvimento , Desenvolvimento Vegetal , Técnicas In VitroResumo
Abstract Vanillin is the major component which is responsible for flavor and aroma of vanilla extract and is produced by 3 ways: natural extraction from vanilla plant, chemical synthesis and from microbial transformation. Current research was aimed to study bacterial production of vanillin from native natural sources including sewage and soil from industrial areas. The main objective was vanillin bio-production by isolating bacteria from these native sources. Also to adapt methodologies to improve vanillin production by optimized fermentation media and growth conditions. 47 soil and 13 sewage samples were collected from different industrial regions of Lahore, Gujranwala, Faisalabad and Kasur. 67.7% bacterial isolates produced vanillin and 32.3% were non-producers. From these 279 producers, 4 bacterial isolates selected as significant producers were; A3, A4, A7 and A10. These isolates were identified by ribotyping as A3 Pseudomonas fluorescence (KF408302), A4 Enterococcus faecium (KT356807), A7 Alcaligenes faecalis (MW422815) and A10 Bacillus subtilis (KT962919). Vanillin producers were further tested for improved production of vanillin and were grown in different fermentation media under optimized growth conditions for enhanced production of vanillin. The fermentation media (FM) were; clove oil based, rice bran waste (residues oil) based, wheat bran based and modified isoeugenol based. In FM5, FM21, FM22, FM23, FM24, FM30, FM31, FM32, FM34, FM35, FM36, and FM37, the selected 4 bacterial strains produced significant amounts of vanillin. A10 B. subtilis produced maximum amount of vanillin. This strain produced 17.3 g/L vanillin in FM36. Cost of this fermentation medium 36 was 131.5 rupees/L. This fermentation medium was modified isoeugenol based medium with 1% of isoeugenol and 2.5 g/L soybean meal. ech gene was amplified in A3 P. fluorescence using ech specific primers. As vanillin use as flavor has increased tremendously, the bioproduction of vanillin must be focused.
Resumo A vanilina é o principal componente responsável pelo sabor e aroma do extrato de baunilha e é produzida de três formas: extração natural da planta da baunilha, síntese química e transformação microbiana. A pesquisa atual teve como objetivo estudar a produção bacteriana de vanilina a partir de fontes naturais nativas, incluindo esgoto e solo de áreas industriais. O objetivo principal era a bioprodução de vanilina por meio do isolamento de bactérias dessas fontes nativas. Também para adaptar metodologias para melhorar a produção de vanilina por meio de fermentação otimizada e condições de crescimento. Foram coletadas 47 amostras de solo e 13 de esgoto de diferentes regiões industriais de Lahore, Gujranwala, Faisalabad e Kasur; 67,7% dos isolados bacterianos produziram vanilina e 32,3% eram não produtores. Desses 279 produtores, 4 isolados bacterianos selecionados como produtores significativos foram: A3, A4, A7 e A10. Esses isolados foram identificados por ribotipagem como fluorescência A3 Pseudomonas (KF408302), A4 Enterococcus faecium (KT356807), A7 Alcaligenes faecalis (MW422815) e A10 Bacillus subtilis (KT962919). Os produtores de vanilina foram posteriormente testados para produção aprimorada de vanilina e foram cultivados em diferentes meios de fermentação sob condições de crescimento otimizadas para produção aprimorada de vanilina. Os meios de fermentação (FM) foram: à base de óleo de cravo, à base de resíduos de farelo de arroz (resíduos de óleo), à base de farelo de trigo e à base de isoeugenol modificado. Em FM5, FM21, FM22, FM23, FM24, FM30, FM31, FM32, FM34, FM35, FM36 e FM37, as 4 cepas bacterianas selecionadas produziram quantidades significativas de vanilina. A10 B. subtilis produziu quantidade máxima de vanilina. Essa cepa produziu 17,3 g / L de vanilina em FM36. O custo desse meio de fermentação 36 foi de 131,5 rúpias / L. Esse meio de fermentação foi um meio à base de isoeugenol modificado com 1% de isoeugenol e 2,5 g / L de farelo de soja. O gene ech foi amplificado em A3 P. fluorescence usando primers específicos para ech. Como o uso da vanilina como sabor aumentou tremendamente, a bioprodução da vanilina deve ser focada.
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Benzaldeídos/metabolismo , Aromatizantes/metabolismo , Bacillus subtilis/metabolismo , Microbiologia Industrial , Pseudomonas fluorescens/metabolismo , Enterococcus faecium/metabolismo , Meios de Cultura , Alcaligenes faecalis/metabolismo , FermentaçãoResumo
Haemonchus contortus is a constraint to sheep production. Seeking to reduce the use of hosts and produce parasitic stages in large-scale, a 42-day in vitro culture protocol of H. contortus third-stage larvae was optimized using Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM). In cell-free culture, larvae were maintained at 39.6°C, in acidic media (pH 6.1) for 3 or 6 days with Δ4-dafachronic acid followed by DMEM pH 7.4 supplemented or not with Fildes' reagent. In DMEM pH 7.4 at 37°C, supplementation with Caco-2 cells was compared to Fildes. On Day 14, fourth-stage larvae (L4) development rates in acidic media supplemented (86.8-88.4%) or not (74.4-77.8%) with Fildes and in Caco-2 cell co-culture (92.6%) were similar, and superior to DMEM pH 7.4 with Fildes (0.0%). On Day 21, Caco-2 cell co-culture resulted in higher larvae differentiation (25.0%) and lower degeneration (13.9%) compared to acidic media (1.5-8.1% and 48.6-69.9%, respectively). This is the first report of prolonged in vitro culture of H. contortus larvae using commercial media in co-culture with Caco-2 cells. Although no progression to the adult stage, Caco-2 cell co-culture resulted in morphological differentiation of H. contortus L4 and larval viability for up to 28 days.(AU)
Haemonchus contortus provoca grandes prejuízos à ovinocultura. Visando reduzir a utilização de ovinos hospedeiros e produzir estágios parasitários em larga escala, um protocolo para o cultivo in vitro por 42 dias de larvas de terceiro estádio de H. contortus foi realizado em meio Eagle, modificado por Dulbecco (DMEM). No cultivo sem células, as larvas foram mantidas a 39,6°C e incubadas em DMEM ácido (pH 6,1) por 3 ou 6 dias com 4Δ-ácido dafacrônico seguido por DMEM pH 7,4 suplementado ou não com reagente de Fildes. Em DMEM pH 7,4 a 37°C, a suplementação com células Caco-2 foi comparada à suplementação com Fildes. No Dia 14, as taxas de desenvolvimento até o quarto estádio larvar (L4) foram similares em meio ácido sem células suplementado (86,8-88,4%) ou não (74,4-77,8%) com Fildes e em co-cultura com células Caco-2 (92,6%), e superiores ao desenvolvimento em DMEM pH 7,4 com Fildes (0,0%). No Dia 21, o co-cultivo com células Caco-2 resultou em maior diferenciação (25,0%) e menor degeneração (13,9%) das larvas em comparação ao meio ácido (1,5-8,1% e 48,6-69,9%, respectivamente). Este é o primeiro relato de cultivo in vitro prolongado de H. contortus em meio comercial em co-cultivo com células Caco-2. Apesar da ausência de progressão até o estágio adulto, o co-cultivo com células Caco-2 resultou em diferenciação de L4 e manutenção da viabilidade das larvas de H. contortus por até 28 dias in vitro.(AU)
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Animais , Doenças Parasitárias em Animais/diagnóstico , Ovinos/parasitologia , Haemonchus/parasitologia , Técnicas In Vitro/veterinária , Gastroenteropatias/parasitologiaResumo
This study describes a biotechnological strategy for producing and applying oxalic acid to solubilize phosphorus (P) from rock phosphate (RP). We evaluated six fungal species (Aspergillus niger FS1, Penicillium islandicum FS41, Pleurotus ostreatus PO1, Rhizoctonia solani Rhiz555, Sclerotium rolfsii Sr25, and Sclerotinia sclerotiorum Scl134) and three culture media (potato dextrose broth, Tsao and Strasser media) to maximize oxalic acid production. Among the fungal isolates tested and culture media, S. rolfsii Sr25 and Tsao medium showed efficient oxalic acid production. Tsao medium was optimized following a response surface methodology after initial screening of factors affecting RP solubilization. The optimized concentrations were 1 g L-1 NaNO3, 100 g L-1 glucose, 2 g L-1 KH2PO4, 4.5 g L-1 yeast extract, and 25 mg L-1 MgSO4·7H2O used for 20 days of incubation. Under these conditions, 71 mmol L-1 oxalic acid was obtained, representing a three-fold increase over production under non-optimized conditions (20 mmol L-1). Under optimized conditions, oxalic acid produced by S. rolfsii Sr25 reacted with low-solubility RP and solubilized 100 % of the P contained in ore. Thus, using S. rolfsii Sr25 to produce oxalic acid seems a promising biotechnological alternative for P solubilization from RP.(AU)
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Fósforo , Biotecnologia , Solanum tuberosum/crescimento & desenvolvimento , Ácido Oxálico/síntese química , Solubilidade , FungosResumo
Pesticide residues that contaminate the environment circulate within the hydrological cycle can accumulate within the food chain and cause problems to both environmental and human health. Microbes, however, are well known for their metabolic versatility and the ability to degrade chemically stable substances, including recalcitrant xenobiotics. The current study focused on bio-prospecting within Amazonian rainforest soils to find novel strains fungi capable of efficiently degrading the agriculturally and environmentally ubiquitous herbicide, glyphosate. Of 50 fungal strains isolated (using culture media supplemented with glyphosate as the sole carbon-substrate), the majority were Penicillium strains (60%) and the others were Aspergillus and Trichoderma strains (26 and 8%, respectively). All 50 fungal isolates could use glyphosate as a phosphorous source. Eight of these isolates grew better on glyphosate-supplemented media than on regular Czapek Dox medium. LC-MS revealed that glyphosate degradation by Penicillium 4A21 resulted in sarcosine and aminomethylphosphonic acid.
Resíduos de agrotóxicos que contaminam o meio ambiente circulam no ciclo hidrológico, podendo se acumular na cadeia alimentar e causar problemas tanto à saúde ambiental quanto humana. Por sua vez, microrganismos são bem conhecidos por sua versatilidade metabólica e capacidade de degradar substâncias quimicamente estáveis, incluindo xenobióticos recalcitrantes. O estudo atual se concentrou na bioprospecção nos solos da floresta amazônica para encontrar novas linhagens de fungos capazes de degradar com eficiência o herbicida onipresente na agricultura e no meio ambiente, o glifosato. Entre os 50 fungos isolados (usando meio de cultura suplementado com glifosato como única fonte de carbono), a maioria eram isolados do gênero Penicillium (60%) e os outros eram isolados de Aspergillus e Trichoderma (26 e 8%, respectivamente). Todos os 50 isolados de fungos foram capazes de usar glifosato como fonte de fósforo. Oito desses isolados cresceram melhor em meio suplementado com glifosato do que em meio Czapek Dox regular. LC-MS revelou que a degradação do glifosato por Penicillium 4A21 resultou nos metabólitos sarcosina e ácido aminometilfosfônico.
Assuntos
Animais , Aspergillus , Herbicidas/toxicidade , Microbiologia do Solo , Penicillium , TrichodermaResumo
ABSTRACT: Orchids are valued as ornamental plants, bioindicators, and medicinal plants, which implies that some species may be over-collected. Some inhabit very fragile environments and are under threat by the misuse of habitats and anthropogenic impacts. The search for beautiful plants and flowers has increased the number of facilities for micropropagation either by seeding or by cloning plants using in vitro techniques. However, not all species have appropriate media for growth and development that would help in conservation efforts. Cyrtopodium aliciae is an endemic species of rupestrian grassland in Brazil t. It has appeal as an ornamental plant or for use in hybridisation programs dueo its small size and white brownish-purple dotted flowers. This study compared three different media, namely ½ concentration Murashige and Skoog (MS), Vacin and Wendt, and Knudson C, during plant growth and their effect on the acclimatization of Cyrtopodium aliciae. The number and length of shoots and roots, increase in mass, and survival in vitro and ex vitro were analyzed. The experiment was conducted as completely random with a factorial arrangement of treatments (3 × 3) with 10 repetitions per treatment containing 10 plants for the in vitro experiment and 3 repetitions of 10 plants for the ex vitro experiment. Cyrtopodium aliciae performed better in the ½ concentration MS medium with a higher increase in mass, plant development, and survival under both in vitro and ex vitro conditions.
RESUMO: As orquídeas são valiosas como plantas ornamentais, bioindicadores ou medicinais, o que implica que algumas espécies podem ser coletadas em demasia. Algumas habitam ambientes muito frágeis e devido ao impacto antrópico, estão sob ameaça devido ao mau uso destes habitats. A busca por belas plantas e flores aumentou as facilidades para micropropagação, seja por semeadura ou por clonagem de plantas com técnicas in vitro. No entanto, nem todas as espécies possuem meios apropriados para crescimento e desenvolvimento que ajudem nos esforços de conservação. Cyrtopodium aliciae é uma bela espécie endêmica de campos rupestres do Brasil, apresenta bom apelo tanto como planta ornamental quanto como potencial para ser usada em programas de hibridização, devido ao seu pequeno tamanho de planta e belas flores brancas pontilhadas com marrom-púrpura. Este trabalho teve como objetivo comparar três meios diferentes, Murashige e Skoog à ½ concentração (MS); Vacin e Wendt (VW) e Knudson C (KC), durante o crescimento e na aclimatização. Foram analisadas as seguintes variáveis: número e comprimento de brotos e raízes, aumento de massa, sobrevivência in vitro e ex vitro. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado, com os tratamentos em um arranjo fatorial 3x3 (meios x tempo) com 10 repetições por tratamento contendo 10 plantas cada para a fase in vitro e três repetições com 10 plantas para a fase ex vitro. Cyrtopodium aliciae teve melhor desempenho na concentração de ½ MS com o maior aumento de massa, desenvolvimento da planta e sobrevivência tanto em condições in vitro quanto em condições ex vitro.
Resumo
ABSTRACT: Eurytrema coelomaticum are trematodes that parasitize cattle, buffaloes, goats, sheep, and camelids, and, accidentally, humans and cats. The affected animal usually has a subclinical pancreatic disease, but the damage caused to health and animal production is underestimated. Currently, praziquantel is the unique drug proven effective against this parasite, but no formulations containing this drug are available for ruminants in Brazilian market. The objective of the present study was to separately evaluate in vitro anthelmintic activity of praziquantel (PZQ) and nitazoxanide (NTZ) against E. coelomaticum by assessing motility after 3, 12, and, 15 hours of incubation and subsequent histopathological examination of the parasites. E. coelomaticum specimens were obtained from the pancreas of naturally infected cattle, collected from animals slaughtered in the city of Concordia-SC, Brazil. The specimens were incubated in plates with a culture medium (n = 60 per group), with 80µg/ml of PZQ (positive control group), or 61,5µg/ml of NTZ (treated group), or UNT (untreated control). After 12 hours of incubation all parasites of the NTZ and PZQ groups were motionless or dead, while in the negative control group, 91.67% (55/60) presented normal motility after 15 hours of incubation (P < 0.001). Histopathological examination showed severe damage in vitellogenic gland, intestine, parenchyma, integument, and testicle in both treated and positive control groups. It was concluded that PZQ and NTZ showed in vitro anthelmintic action against the parasite Eurytrema coelomaticum, as they caused significant lesions in the evaluated organs and reduced the parasite's motility.
RESUMO: Eurytrema coelomaticum são trematódeos que parasitam bovinos, bubalinos, caprinos, ovinos e camelídeos, e de forma acidental, humanos e felinos. O animal acometido geralmente apresenta doença pancreática subclínica, mas os danos causados à saúde e produção animal são subestimados. Atualmente, o praziquantel é o único medicamento comprovadamente eficaz contra este parasita, mas não há formulações contendo esse medicamento disponíveis para ruminantes no mercado brasileiro. O objetivo deste trabalho foi avaliar separadamente a atividade anti-helmíntica in vitro de praziquantel (PZQ) e nitazoxanida (NTZ) frente ao E. coelomaticum pela avaliação de motilidade após três, 12 e 15 horas de incubação e posterior exame histopatológico dos parasitos. Exemplares de E. coelomaticum foram obtidos do pâncreas de bovinos naturalmente infectados, coletados em animais abatidos na cidade de Concórdia, SC, Brasil. Incubados em placas com meio de cultura (n = 60 por grupo), adicionados de 80µg/ml de PZQ (grupo controle positivo) ou 61,5µg/ml de NTZ (grupo tratado) ou UNT (grupo controle sem tratamento). Em 12h de incubação todos os parasitos dos grupos NTZ e PZQ estavam imóveis ou mortos, enquanto no grupo controle negativo 91,67% (55/60) apresentaram motilidade normal após 15h de incubação (P < 0.001). Por exame histopatológico observou-se danos graves em glândula vitelogênica, intestino, parênquima, tegumento e testículo em ambos os grupos tratado e controle positivo. Concluiu-se que PZQ e NTZ apresentaram ação anti-helmíntica in vitro contra o parasito Eurytrema coelomaticum, pois causaram lesões significativas nos órgãos avaliados e diminuíram a motilidade do parasito.
Resumo
Pesticide residues that contaminate the environment circulate within the hydrological cycle can accumulate within the food chain and cause problems to both environmental and human health. Microbes, however, are well known for their metabolic versatility and the ability to degrade chemically stable substances, including recalcitrant xenobiotics. The current study focused on bio-prospecting within Amazonian rainforest soils to find novel strains fungi capable of efficiently degrading the agriculturally and environmentally ubiquitous herbicide, glyphosate. Of 50 fungal strains isolated (using culture media supplemented with glyphosate as the sole carbon-substrate), the majority were Penicillium strains (60%) and the others were Aspergillus and Trichoderma strains (26 and 8%, respectively). All 50 fungal isolates could use glyphosate as a phosphorous source. Eight of these isolates grew better on glyphosate-supplemented media than on regular Czapek Dox medium. LC-MS revealed that glyphosate degradation by Penicillium 4A21 resulted in sarcosine and aminomethylphosphonic acid.(AU)
Resíduos de agrotóxicos que contaminam o meio ambiente circulam no ciclo hidrológico, podendo se acumular na cadeia alimentar e causar problemas tanto à saúde ambiental quanto humana. Por sua vez, microrganismos são bem conhecidos por sua versatilidade metabólica e capacidade de degradar substâncias quimicamente estáveis, incluindo xenobióticos recalcitrantes. O estudo atual se concentrou na bioprospecção nos solos da floresta amazônica para encontrar novas linhagens de fungos capazes de degradar com eficiência o herbicida onipresente na agricultura e no meio ambiente, o glifosato. Entre os 50 fungos isolados (usando meio de cultura suplementado com glifosato como única fonte de carbono), a maioria eram isolados do gênero Penicillium (60%) e os outros eram isolados de Aspergillus e Trichoderma (26 e 8%, respectivamente). Todos os 50 isolados de fungos foram capazes de usar glifosato como fonte de fósforo. Oito desses isolados cresceram melhor em meio suplementado com glifosato do que em meio Czapek Dox regular. LC-MS revelou que a degradação do glifosato por Penicillium 4A21 resultou nos metabólitos sarcosina e ácido aminometilfosfônico.(AU)