The effect of 1-methyl-4-phenyl-1, 2, 3, 6-tetrahydropyridine (MPTP) on mice myocardial morphology / O efeito do 1-metil-4-fenil-1, 2, 3, 6 tetrahidropiridina (MPTP) na morfologia do miocárdio de camundongo

Studies have demonstrated sympathetic cardiac denervation in the MPTP mouse model. MPTP toxicity causes sympathetic nerve damage and depletion of heart norepinephrine. Previous evaluations of impairments in heart innervation have been based on imaging, electrophysiological and biochemical methods. However, these studies lacked information that can be obtained from morphoquantitative analyses. Thus, this study aimed to apply a design-based stereological method for evaluating the morphoquantitative alterations of myocardium following treatment with the neurotoxin MPTP in the C57/BL mouse. Our results showed that MPTP reduced the number of cardiomyocytes in the left ventricle.(AU)

Estudos têm demonstrado a desnervação simpática cardíaca no modelo da administração do MPTP em camundongo. A toxicidade do MPTP causa lesão ao nervo simpático e depleção da norepinefrina. As avaliações dos danos na inervação do coração são baseadas em métodos de imagem, eletrofisiológico e bioquímico. Contudo, estes estudos carecem de informações provenientes de análises morfoquantitativas. Assim, objetivou-se aplicar métodos estereológicos para avaliar as alterações morfoquantitativas do miocárdio após o tratamento com a neurotoxina MPTP no camundongo C57/BL. Nossos resultados mostraram que o MPTP causa redução no número de cardiomiócitos no ventrículo esquerdo.(AU)

The effect of 1-methyl-4-phenyl-1, 2, 3, 6-tetrahydropyridine (MPTP) on mice myocardial morphology / O efeito do 1-metil-4-fenil-1, 2, 3, 6 tetrahidropiridina (MPTP) na morfologia do miocárdio de camundongo

Studies have demonstrated sympathetic cardiac denervation in the MPTP mouse model. MPTP toxicity causes sympathetic nerve damage and depletion of heart norepinephrine. Previous evaluations of impairments in heart innervation have been based on imaging, electrophysiological and biochemical methods. However, these studies lacked information that can be obtained from morphoquantitative analyses. Thus, this study aimed to apply a design-based stereological method for evaluating the morphoquantitative alterations of myocardium following treatment with the neurotoxin MPTP in the C57/BL mouse. Our results showed that MPTP reduced the number of cardiomyocytes in the left ventricle.(AU)

Estudos têm demonstrado a desnervação simpática cardíaca no modelo da administração do MPTP em camundongo. A toxicidade do MPTP causa lesão ao nervo simpático e depleção da norepinefrina. As avaliações dos danos na inervação do coração são baseadas em métodos de imagem, eletrofisiológico e bioquímico. Contudo, estes estudos carecem de informações provenientes de análises morfoquantitativas. Assim, objetivou-se aplicar métodos estereológicos para avaliar as alterações morfoquantitativas do miocárdio após o tratamento com a neurotoxina MPTP no camundongo C57/BL. Nossos resultados mostraram que o MPTP causa redução no número de cardiomiócitos no ventrículo esquerdo.(AU)

Método imunomagnético associado ao meio MesenCult® na obtenção de células mononucleares da medula óssea de coelhos negativas para o anticorpo monoclonal CD45 / Immunomagnetic method associated with MesenCult® medium to obtain bone marrow mononuclear cells from rabbits negative for CD45 monoclonal antibody

O objetivo detse artigo é de descrever um protocolo de isolamento das células mononucleares da medula óssea de coelhos, seguido de purificação celular por depleção negativa com o anticorpo monoclonal CD45 e posterior expansão em meio de cultura MesenCult®. Dez coelhos machos adultos, da raça Nova Zelândia, com idade média de 1,0±0,2 anos e peso médio 3,5±0,24kg, foram utilizados para padronização da metodologia. O isolamento das células mononuclares da medula óssea foi realizado pelo gradiente de densidade Ficoll-paque® e a purificação e obtenção das células- pela depleção negativa com o anticorpo monoclonal CD45 em base imunomagnética. A população celular obtida foi expandida posteriormente em meio de cultura MesenCult®. No isolamento pelo gradiente de icoll-Paque® foi obtido um rendimento médio de 7,31x106 células/mL. Após purificação e obtenção das possíveis células-tronco mesenquimais pela base imunomagnética, houve um decréscimo do rendimento para 2,28x106 células/mL, mas o processo de expansão foi incrementado pelo cultivo celular. Os resultados indicaram que as células obtidas da fração mononuclear da medula óssea, cultivadas in vitro foram capazes de gerar células aderentes 24 horas após o cultivo, com predominância de células fibroblastóides sugestivas de células-tronco mesenquimais. Concluiu-se que a obtenção de células-tronco mesenquimais pode ser alcançada após purificação das células mononucleares da medula óssea de coelhos pelo método imunomagético, o meio de cultura MesenCult® proporciona um ambiente adequado para a rápida expansão in vitro e o número de passagens exerce influência negativa sobre as características morfológicas das células.(AU)

The objective of this study was to describe guidelines for the isolation of bone marrow mononuclear cells from rabbits, followed by cell purification by negative depletion with CD45 monoclonal antibody, and further expansion in MesenCult® medium. Ten adult male New Zealand White rabbits, age average of 1.0±0.2 years and weighting 3.5±0.24kg, were used to obtain a standardized method. The mononuclear cells of the bone marrow were isolated with Ficoll-paque® density gradient centrifugation, and the cell purification and acquisition was completed by negative depletion with CD45 monoclonal antibody in immunomagnetic base. The cell population obtained was expanded in MesenCult® medium. Through isolation with Ficoll-paque® density gradient was possible to obtain an average yield of 7.31x106 cells/mL. After purification and acquisiton of potential mesenchymal stem cells by the immunomagnetic base, there was a yield decrease to 2.28x106 cells/mL; however the expansion process was increased in cell culture. The results indicated that cells obtained from the mononuclear fraction of bone marrow and cultivated in vitro were capable to generate adherent cells 24 hours after culture, with predominance of fibroblastoid cells suggestive of mesenchymal stem cells. It can be concluded that mesenchymal stem cells can be achieved with purified rabbit bone marrow mononuclear cells through the immunomagnetic method, as the MesenCult® medium provides a suitable environment for a quick in vitro expansion, and the number of passages exerts negative influence on the morphological characteristics.(AU)

Mycobacterium paratuberculosis detection in cow's milk in Argentina by immunomagnetic separation-PCR

The aim of this study was to standardize a diagnosis procedure to detect Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map) DNA in raw cow milk samples under field conditions. A procedure that combines both immunomagnetic separation and IS900 -PCR detection (IMS-IS1 PCR) was employed on milk samples from 265 lactating Holstein cows from Map infected and uninfected herds in Argentina. IMS-IS1 PCR results were analyzed and compared with those obtained from milk and fecal culture and serum ELISA. The extent of agreement between both tests was determined by the Kappa test. IMS-IS1 PCR showed a detection limit of 101 CFU of Map/mL of milk, when 50:50 mix of monoclonal and polyclonal antibodies were used to coat magnetic beads. All of the 118 samples from the Map uninfected herds were negative for the set of the tests. In Map infected herds, 80 out of 147 cows tested positive by milk IMS-IS1 PCR (55%), of which 2 (1.4%) were also positive by milk culture, 15 (10%) by fecal culture, and 20 (14%) by serum ELISA. Kappa statistics (95% CI) showed a slight agreement between the different tests ( 0.20), and the proportions of agreement were 0.55. The IMS-IS1 PCR method detected Map in milk of the cows that were not positive in other techniques. This is the first report dealing with the application of IMS-IS1 PCR in the detection of Map in raw milk samples under field conditions in Argentina.(AU)

AUTOTRANSPLANTE HETEROTÓPICO DE TECIDO OVARIANO EQUINO

O tecido ovariano quando coletado por procedimentos de biópsia permite a realização de diversos estudos com aplicações clínicas no campo da preservação da fertilidade feminina. O objetivo do presente estudo foi avaliar a influência da idade da doadora e dos sítios de transplante intramuscular (IM) e subvulvar (SVU) sobre a qualidade, ativação e densidade folicular em fragmentos de tecido ovariano equino autotransplantados após 3 e 7 dias. Fragmentos de tecido ovariano foram obtidos (n = 8) por meio de biópsia e, em seguida, autotransplantados aleatoriamente nos sítios IM e SVU e recuperados após 3 e 7 dias. Os principais achados foram: (i) a viabilidade e ativação folicular foram menores nos fragmentos transplantados no sítio SVU; (ii) a depleção folicular pós-transplante variou entre animais e não foi influenciada pela idade e; (iii) a presença de estruturas ovarianas (folículos antrais e corpo lúteo) no momento da biópsia tem associação com a densidade folicular nos fragmentos obtidos.

Ovarian tissue samples collected by biopsy pick-up method can be used to perform several studies related to fertility preservation. The aim of this study was to evaluate the effects of donor age and intramuscular (IM) and subvulvar (SVU) sites on the follicular viability, activation, and density in ovarian fragments autotransplanted. Biopsy pick-up was performed in mares (n = 7) and ovarian tissue samples were autotransplanted at IM and SVU sites by 3 or 7 days. In summary, our findings indicate that: (i) follicular viability and activation were lower in the ovarian fragments grafted at SVU site; (ii) the follicular depletion post-graft differed among animals and was not influenced by donor age; and (iii) the area of ovarian structures (antral follicles and corpus luteum) presents in the ovary at biopsy procedure had a positive effect on follicular density.

Effect of nitrate depletion on lipid accumulation by the marine microalga Nannochloropsis oculata / Efeito da depleção de nitrato no acúmulo lipídico da microalga marinha Nannochloropsis oculata

Nannochloropsis oculata is a marine algae with high lipid content, being a promising species for biofuel production. It is also used as food in aquaculture for larval fish and crustaceans due to its high nutritional value and compatible size with the larvae feeding. This study evaluated the lipid content in the biomass of N. oculata under nitrate depletion. The cultivation was carried out in 8 L bottles with three replications, at salinity 27, illuminance of 60 E cm-2 s-1 and temperature 28 C. The levels of sodium nitrate used were 15; 30; 45; 60 and 75 mg L-1, while maintaining constant the levels of all other nutrients of the Guillard f/2 medium. The growth curve was monitored every two days by spectrophotometry at 680 nm (DO680nm) and cell counting in a Neubauer chamber. For separation of the culture medium from the cells, we used chemical flocculation method, adding 2N NaOH. The higher lipid content in the biomass was obtained at the lowest level of nitrate in the culture medium.(AU)

Nannochloropsis oculata é uma microalga marinha que possui alto teor lipídico, sendo uma promissora espécie para a produção de biocombustível. É utilizada também como alimento na aquicultura na fase larval de peixes e crustáceos devido ao seu elevado valor nutricional e por possuir tamanho compatível com o mecanismo alimentar das larvas. O objetivo do trabalho foi avaliar o rendimento lipídico da N. oculata com depleção de nitrato. Os cultivos foram realizados em frascos de 8 L com três repetições, na salinidade de 27, iluminância de 60 E cm-2 s-1 e temperatura de 28 ºC. As quantidades de nitrato de sódio utilizadas foram 15; 30; 45; 60 e 75 mg L-1, mantendo constantes as quantidades dos outros nutrientes do meio Guillard f/2. A curva de crescimento foi acompanhada a cada dois dias por espectrofotometria a 680 nm (DO680nm) e contagem celular em uma câmara de Neubauer. Para separação do meio de cultivo das células foi utilizado o método de floculação química, adicionando NaOH 2N. O melhor rendimento lipídico foi obtido na menor quantidade de nitrato no meio de cultura.(AU)

Effect of nitrate depletion on lipid accumulation by the marine microalga Nannochloropsis oculata / Efeito da depleção de nitrato no acúmulo lipídico da microalga marinha Nannochloropsis oculata

Nannochloropsis oculata is a marine algae with high lipid content, being a promising species for biofuel production. It is also used as food in aquaculture for larval fish and crustaceans due to its high nutritional value and compatible size with the larvae feeding. This study evaluated the lipid content in the biomass of N. oculata under nitrate depletion. The cultivation was carried out in 8 L bottles with three replications, at salinity 27, illuminance of 60 E cm-2 s-1 and temperature 28 C. The levels of sodium nitrate used were 15; 30; 45; 60 and 75 mg L-1, while maintaining constant the levels of all other nutrients of the Guillard f/2 medium. The growth curve was monitored every two days by spectrophotometry at 680 nm (DO680nm) and cell counting in a Neubauer chamber. For separation of the culture medium from the cells, we used chemical flocculation method, adding 2N NaOH. The higher lipid content in the biomass was obtained at the lowest level of nitrate in the culture medium.

Nannochloropsis oculata é uma microalga marinha que possui alto teor lipídico, sendo uma promissora espécie para a produção de biocombustível. É utilizada também como alimento na aquicultura na fase larval de peixes e crustáceos devido ao seu elevado valor nutricional e por possuir tamanho compatível com o mecanismo alimentar das larvas. O objetivo do trabalho foi avaliar o rendimento lipídico da N. oculata com depleção de nitrato. Os cultivos foram realizados em frascos de 8 L com três repetições, na salinidade de 27, iluminância de 60 E cm-2 s-1 e temperatura de 28 ºC. As quantidades de nitrato de sódio utilizadas foram 15; 30; 45; 60 e 75 mg L-1, mantendo constantes as quantidades dos outros nutrientes do meio Guillard f/2. A curva de crescimento foi acompanhada a cada dois dias por espectrofotometria a 680 nm (DO680nm) e contagem celular em uma câmara de Neubauer. Para separação do meio de cultivo das células foi utilizado o método de floculação química, adicionando NaOH 2N. O melhor rendimento lipídico foi obtido na menor quantidade de nitrato no meio de cultura.

PROTEÔMICA DO FLUIDO FOLICULAR OVARIANO DE OVELHAS

A interação que existe do líquido folicular com oócito serve para manter o mesmo e contribuir com o desenvolvimento oocitário. O objetivo deste estudo foi descrever o perfil de proteínas do líquido folicular ovariano de ovelhas em duas categorias de desenvolvimento dos folículos. Os ovários foram colhidos de um abatedouro e transportados até o laboratório. No laboratório, os ovários foram lavados com solução 0,9% NaCl, os folículos foram mensurados e classificados em duas categorias, folículos pequenos com diâmetro de < 4 mm e médios de 4 a 6 mm. O líquido folicular foi colhido por aspiração centrifugados a 800g por 10 minutos para retirada dos debris celulares e recentrifugados a 10.000g, durante 30 minutos a 4º C. A depleção de albumina foi conduzida e a concentração de proteínas totais foi mensurada pelo método de Bradford. Uma alíquota contendo 50 µg de proteína foi preparada para eletroforese unidimensional SDS-PAGE. A corrida foi interrompida quando as amostras atingiram o gel de separação e a digestão tríptica in gel foi realizada. Então, as amostras foram submetidas a espectrometria de massa com abordagem shotgun ESI-Q-TOF MS/MS. Os resultados foram submetidos à análise multivariada, por análise de componente principal (PCA), análise discriminante por mínimos quadrados parciais (PLS-DA) indicada pela pontuação VIP (projeção de importância variável VIP score), dendrograma e ontologia gênica (função molecular, processo biológico e componente celular). Foi encontrado um total de 55 proteínas nos dois grupos, sendo 02 apenas no grupo < 4 mm e 13 no grupo 4 a 6 mm. A PCA identificou 2 grupos distintos, sendo a somatória de PC1 e PC2 > 50%. No VIP score foram encontradas 12 proteínas com 1,5, sendo 2 mais abundantes no folículos com diâmetro < 4 mm e 10 nos folículos entre 4 a 6 mm. Concluindo-se que as proteínas descritas estão ligadas diretamente com o funcionamento do metabolismo folicular e desenvolvimento dos oócitos, participando do processo de ovulação e qualidade dos oócitos.

The interaction that exists between the follicular fluid and the oocyte serves to maintain it and contribute to oocyte development. The objective of this study was to describe the protein profile of the ovarian follicular fluid of sheep in two categories of follicle development. The ovaries were harvested from a slaughterhouse and transported to the laboratory. In the laboratory, the ovaries were washed with 0.9% NaCl solution, the follicles were measured and classified into two categories, small follicles with a diameter of < 4 mm and medium from 4 to -6 mm. The follicular fluid was collected by centrifuged aspiration at 800g for 10 minutes to remove the cellular debris and refocused at 10,000g for 30 minutes at 4ºC. Albumin depletion was conducted and the total protein concentration was measured by the Bradford method. An aliquot containing 50 µg of protein was prepared for SDS-PAGE unidimensional electrophoresis. The run was stopped when the samples reached the separation gel and tryptic digestion in gel was performed. Then, the samples were submitted to mass spectrometry with shotgun approach ESI-Q-TOF MS/MS. The results were submitted to multivariate analysis, by principal component analysis (PCA), discriminant analysis by partial least squares (PLS-DA) indicated by VIP score (projection of variable importance - VIP score), dendrogram and gene ontology (molecular function, biological process and cellular component). A total of 55 proteins were found in both groups, 02 only in the group < 4 mm and 13 in the group 4 to 6 mm. The PCA identified 2 distinct groups, being the sum of PC1 and PC2 > 50%. In the VIP score were found 12 proteins with 1.5, being 2 more abundant in follicles with diameter < 4 mm and 10 in follicles between 4 and 6 mm. It was concluded that the proteins are directly linked to the functioning of the follicular metabolism and development of the oocytes, participating in the ovulation process and oocyte quality.

Evaluation of bursal lymphoid depletion: comparison between the conventional histology method and digital lymphocyte depletion evaluation system

Abstract: Fifty-five bursa of Fabricius (BF) were evaluated by optical microscopy for three different avian histopathologists (H1, H3 and H4) to determine the degree of lymphoid depletion. One histologist evaluated the same slides at two different times (H1 and H2) with four-months interval between the observations. The same BFs were evaluated using the system of Digital Lymphocyte Depletion Evaluation (ADDL), being performed by three differents operators of the system, not histopathologists. The results showed was a significant difference between the histopathologists and between the scores established by the same expert (H1 and H2). However, there were not significant differences between the scores with the ADDL system, obtained using ADDL. The results make clear the fragility of the subjective lymphocyte depletion score classification by the traditional histologic method, while the ADDL system proves to be more appropriated for the assessment of the lymphoid loss in the BF.

Resumo: Cinquenta e cinco bursas de Fabricius (BF) foram avaliadas através da microscopia óptica por três diferentes histopatologistas aviários (H1, H3 e H4) para determinar o grau de depleção linfóide. Um histopatologista avaliou as amostras em dois momentos distintos (H1 e H2) com quatro meses de intervalo entre as observações. As mesmas BF foram avaliadas utilizando-se o sistema de Avaliação Digital da Depleção Linfocitária (ADDL), sendo realizadas por três diferentes operadores do sistema, não histopatologistas. Os resultados mostraram diferenças significativas entre os histopatologistas e entre um mesmo histopatologista (H1 e H2). Contudo, não houve diferenças significativas entre os escores obtidos utilizando-se ADDL. Estes resultados caracterizam a fragilidade da classificação subjetiva em escores de depleção linfóide, enquanto o sistema ADDL prova ser um sistema robusto de avaliação da perda linfocitária na BF.

Evaluation of bursal lymphoid depletion: comparison between the conventional histology method and digital lymphocyte depletion evaluation system / Avaliação da depleção linfóide bursal: comparação entre a histologia convencional e o sistema de avaliação digital da depleção linfocitária

Fifty-five bursa of Fabricius (BF) were evaluated by optical microscopy for three different avian histopathologists (H1, H3 and H4) to determine the degree of lymphoid depletion. One histologist evaluated the same slides at two different times (H1 and H2) with four-months interval between the observations. The same BFs were evaluated using the system of Digital Lymphocyte Depletion Evaluation (ADDL), being performed by three differents operators of the system, not histopathologists. The results showed was a significant difference between the histopathologists and between the scores established by the same expert (H1 and H2). However, there were not significant differences between the scores with the ADDL system, obtained using ADDL. The results make clear the fragility of the subjective lymphocyte depletion score classification by the traditional histologic method, while the ADDL system proves to be more appropriated for the assessment of the lymphoid loss in the BF.(AU)

Cinquenta e cinco bursas de Fabricius (BF) foram avaliadas através da microscopia óptica por três diferentes histopatologistas aviários (H1, H3 e H4) para determinar o grau de depleção linfóide. Um histopatologista avaliou as amostras em dois momentos distintos (H1 e H2) com quatro meses de intervalo entre as observações. As mesmas BF foram avaliadas utilizando-se o sistema de Avaliação Digital da Depleção Linfocitária (ADDL), sendo realizadas por três diferentes operadores do sistema, não histopatologistas. Os resultados mostraram diferenças significativas entre os histopatologistas e entre um mesmo histopatologista (H1 e H2). Contudo, não houve diferenças significativas entre os escores obtidos utilizando-se ADDL. Estes resultados caracterizam a fragilidade da classificação subjetiva em escores de depleção linfóide, enquanto o sistema ADDL prova ser um sistema robusto de avaliação da perda linfocitária na BF.(AU)

An evaluation and partial characterization of a bacteriocin produced by Lactococcus lactis subsp lactis ST1 isolated from goat milk

A bacteriocin-like inhibitory substance producing Lactococcus lactis subsp lactis strain, ST1, isolated from goat milk of Iranian origin and with broad spectrum of activity and desirable technical properties was used for evaluating some futures of bacteriocin inhibitory activity. Cell growth and bacteriocin production studies were carried out in MRS medium incubated statically under uncontrolled pH condition. The antibacterial activity presented a primary metabolite pattern and showed a rapid decrease at the stationary phase. Microaerobiosis and capnophily growth conditions resulted in higher bacteriocin production while aerobiosis showed negative effect on both cell growth and bacteriocin production. Bacteriocin production, on the other hand, was favored in MRS broth (pH; 6.5) inoculated with 0.1 ml l-1 fresh culture when incubation was carried out at 30 °C. This indicated that the conditions resulted in higher levels of growth were frequently favoring bacteriocin production by ST1 as well. Decrease in activity, at the stationary growth phase, was much pronounced in favored growth condition. Nutrient depletion, deferent effect of low pH on bacteriocin production and/or protein degradation seemed more responsible for this phenomenon. The study also provided further data on new method for bacteriocin release from the cell wall of producer. It was clearly shown that both heating and ultrasound shock for 5 min at pH 2 could increase bacteriocin activity significantly. The release was more pronounced in the presence of 0.5% Tween80.(AU)

Estudo de depleção de fluorquinolonas e tetraciclinas em frangos de corte empregando LC-MS/MS

Dentro da cadeia produtiva de frangos de corte, antibióticos têm sido empregados no tratamento profilático e terapêutico, visando melhorar o desempenho zootécnico dos animais. Porém, o uso indiscriminado desses fármacos pode acarretar a presença de resíduos na carne e, assim, representar riscos à saúde do consumidor. Fluorquinolonas e tetraciclinas são duas classes de antibióticos amplamente utilizadas na avicultura. Para tanto, neste trabalho, desenvolveu-se e validou-se uma metodologia analítica baseada em cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (LC-MS/MS), a fim de analisar resíduos de 7 antibióticos das classes citadas, em músculo de frangos. Além disso, foram realizados estudos de depleção destes fármacos em frangos de corte, a fim de quantificar os resíduos na carne. Os resultados encontrados foram comparados com os limites máximos de resíduos (LMRs) estabelecidos pelas legislações brasileira e internacionais. Como método de extração, utilizou-se um procedimento com acetonitrila acidificada e purificação por centrifugação e precipitação a baixa temperatura, sem a necessidade de utilização da etapa de extração em fase sólida (SPE). O método foi validado de acordo com a diretiva 2002/657/CE da União Europeia, avaliando parâmetros de seletividade, linearidade, especificidade, limites de detecção e quantificação, exatidão, precisão, efeito matriz, limite de decisão (CC), capacidade de detecção (CC), robustez e aplicabilidade do método. Para os estudos de depleção, foram administrados, oralmente, clortetraciclina (CTC), doxiciclina (DOX) e oxitetraciclina (OTC) durante 5 dias consecutivos e ciprofloxacina (CIP), enrofloxacina (ENR) e norfloxacina (NOR) por 3 dias. Após 6, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168, 192, 216 e 240 h da última dose administrada, foram coletadas amostras de músculo (peito) de 4 animais de cada grupo tratado e 2 do grupo controle, a fim de avaliar a concentração residual dos fármacos. O método validado apresentou-se dentro dos valores aceitáveis pela diretiva 2002/657/CE. Das 65 amostras de músculo de frango avaliadas para parâmetro de aplicabilidade, 3 apresentaram resíduos de ENR. No estudo de depleção das tetraciclinas, considerando as legislações brasileira e europeia, os resultados mostraram que foram encontrados resíduos abaixo dos LMRs após 1 dia para CTC e 3 dias para DOX. Para OTC, este período foi de 2 e 3 dias, respectivamente, de acordo com as legislações brasileira e europeia. Segundo a legislação japonesa, períodos de carência de 1, 5 e 2 dias, respectivamente, para CTC, DOX e OTC seriam necessários. No estudo das fluorquinolonas, foi possível detectar traços de ENR até 9 dias após o fim do tratamento, o que inviabilizaria a exportação desta carne para Estados Unidos e Canadá. Após 1 dia da última dose administrada, os resíduos de CIP ficaram abaixo do LMR estabelecido pelas legislações brasileira, europeia e japonesa e, após 4 dias, para Estados Unidos e Canadá. No caso da NOR, o período de carência seria de 1 dia para todos os países citados. Os resultados deste trabalho colaboram com a busca da inocuidade dos alimentos para os consumidores, bem como para a utilização de métodos analíticos capazes de serem aplicados na determinação de medicamentos a comporem estudos de depleção residual em frangos de corte.

Antibiotics have been widely used for prophylactic and therapeutic treatment within the broiler supply chain in order to improve animal production performance. The indiscriminate use of these drugs can, however, lead to the presence of residues in the meat and thus be a risk to the health of consumers. Fluoroquinolones and tetracyclines are two antibiotic classes that are commonly used in poultry. In this study, a liquid chromatography-based analytical method coupled with mass spectrometry was developed and validated in order to analyze residues of 7 antibiotics from the aforementioned classes in chicken muscle. Furthermore, antibiotic depletion studies were performed in broiler chickens in order to quantify the residues in the meat. The results were compared to maximum residue limits (MRLs) established by Brazilian and international laws. A procedure that employs acidified acetonitrile and purification by centrifugation and low temperature precipitation was used as the extraction method, with no need to perform a solid phase extraction (SPE) step. The method was validated in accordance with the Directive 2002/657/EC from the European Union by assessing selectivity, linearity and specificity parameters, detection and quantification limits, accuracy, precision, matrix effect, decision limit (CC), detection capability (CC), robustness and applicability of the technique. For depletion studies, chlortetracycline (CTC), doxycycline (DOX) and oxytetracycline (OTC) were administered orally for 5 consecutive days and ciprofloxacin (CIP), enrofloxacin (ENR) and norfloxacin (NOR) for 3 days. After 6, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168, 192, 216 and 240 h after the last dose, muscle samples (chest) were collected from 4 animals from each treated group and from 2 from the control group in order to assess the residual concentration of the drugs. The validated method presented values within acceptable parameters according to Directive 2002/657/EC. From 65 chicken muscle samples evaluated for the applicability parameter, 3 presented residues of ENR. In the tetracyclines depletion studies, results showed that residues were under the MRLs considering Brazilian and European laws after 1 day for CTC and after 3 days for DOX. For OCT, this period was of 2 and 3 days according to Brazilian and European laws respectively. According to Japanese law, withdrawal time of 1, 5 and 2 days would be needed for CTC, DOX and OCT respectively. In the fluoroquinolones study, it was possible to detect traces of ENR even 9 days after treatment, which would make the export of meat to the United States and Canada infeasible. After 1 day at the last dose administrated, CIP residues were under MRLs established by Brazilian, European and Japanese laws, and after 4 days they were under limits determined by the Unites States and Canada. In the case of NOR, the withdrawal time would be of 1 day for all countries mentioned here. The results presented cooperate with the pursuit of food safety to consumers, as well as with the employment of analytical methods capable of determining drugs to comprise residue depletion studies in broilers.

Albendazol na piscicultura: estudo de incorporação do fármaco na ração e estimativa do período de carência para a espécie de peixe pacu (Piaractus mesopotamicus)

BUSATTO, Z. Albendazol na piscicultura: estudo de incorporação do fármaco na ração e estimativa do período de carência para a espécie de peixe pacu (Piaractus mesopotamicus). 2016. 95 f. Dissertação (Mestrado). Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2016. O albendazol (ABZ) é um antiparasitário amplamente utilizado na medicina veterinária para tratar infecções causadas por parasitas helmínticos, devido ao seu baixo custo de aquisição, alta eficácia e facilidade de administração. Apesar, de sua eficácia ser mundialmente conhecida, seu uso não é regulamentado em espécies aquícolas. Diante da demanda nacional por uma maior variedade de medicamentos veterinários regulamentados para uso na aquicultura, o presente projeto visou estimar o período de carência para o ABZ. Para tanto, foi necessário: (i) incorporar o ABZ na ração através da técnica de revestimento polimérico em equipamento de leito fluidizado; (ii) desenvolver e avaliar os métodos analíticos para a determinação do ABZ na ração e do ABZ e seus metabólitos em filé de pacu empregando cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas (LC-MS/MS) e (iii) realizar um ensaio com pacu para avaliar a depleção do ABZ e seus metabólitos no filé desses peixes. O revestimento da ração com 1,5% de etilcelulose permitiu incorporar o ABZ na ração sem alterar a estrutura física da mesma, o que torna o processo vantajoso, visto que, a ração mantém suas características de flutuabilidade. Além disso, o processo foi homogêneo e diminuiu a lixiviação do fármaco para a água, garantindo a segurança da dose administrada e do meio ambiente. O ABZ foi isolado da ração por extração líquido-líquido. O ABZ e seus metabólitos foram extraídos do filé de pacu pelo método de QuEChERS modificado. Para os dois métodos desenvolvidos, a separação cromatográfica foi realizada em coluna de fase reversa octadecil híbrida. Os métodos foram avaliados mediante os seguintes parâmetros: seletividade, curva analítica, linearidade, precisão e exatidão. Para o método do filé de peixe avaliou-se também o CC e o CC. Todos os parâmetros avaliados se encontram de acordo com os guias de validação, o que torna os métodos adequados para os objetivos propostos no presente trabalho. Para avaliar a depleção do ABZ e seus metabólitos no filé de pacu, os peixes receberam o fármaco via ração em dose única de 10 mg de ABZ (kg peso vivo)-1. As curvas de depleção residual do ABZ e seus metabólitos se ajustaram ao modelo exponencial de primeira ordem. Tomando como referência as recomendações da EMA, o período de carência foi estimado em sete dias.

BUSATTO, Z. Albendazole in pisciculture: study for drug incorporation in fish feed and estimation of the withdrawal time for the species of pacu fish (Piaractus mesopotamicus). 2016. 95 f. Dissertação (Mestrado). Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2016. Albendazole (ABZ) is an antiparasitic widely used in veterinary medicine to treat infections caused by parasites anthelmintic, due to its low cost, high efficiency and ease of administration. Regardless of its world widely known effectiveness, its use is not regulated in aquaculture species. Faced with national demand for a greater variety of regulated veterinary drugs for use in aquaculture, this project aimed to estimate the withdrawal time for the ABZ. Therefore, it was necessary to (i) incorporate ABZ the feed through the polymeric coating by spouted bed technique; (Ii) develop and evaluate analytical methods for determining the ABZ in feed and ABZ and its metabolites in pacu fillet using high-performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry (LC-MS / MS) and (iii) conduct a test with pacu to evaluate the depletion of ABZ and its metabolites in the fillet of these fish. The ration with 1.5% coating of ethylcellulose allowed incorporate ABZ the feed without altering the physical structure of the same, which makes the process advantageous, since the feed maintains its buoyancy characteristics. Furthermore, the process was homogeneous and reduced leaching of the drug into the water, ensuring the safety of the administered dose and the environment. The ABZ ration was isolated by liquid-liquid extraction. The ABZ and its metabolites were extracted from pacu fillet the modified QuEChERS method. For both developed methods, chromatographic separation was performed in a hybrid octadecyl reverse phase column. The methods were evaluated by the following parameters: selectivity, analytical curve, linearity, precision and accuracy. For fish fillet method also assessed whether it CC and CC. All parameters are according to the validation guides, which makes the appropriate methods for the objectives proposed in this paper. To evaluate the depletion of ABZ and its metabolites in pacu fillet, the fish were dosed via single dose in feed 10 mg ABZ (kg body weight)-1. The curves of residual depletion ABZ and its metabolites adjusted to the exponential model of the first order. With reference to the recommendations of the EMA, the withdrawal time was estimated at seven days.

MÉTODOS DE CONTROLE PARASITÁRIO, PRODUTIVIDADE E RESÍDUOS DE MOXIDECTINA EM TECIDOS DE CORDEIROS Tese apresentada ao Programa

O uso indiscriminado dos anti-helmínticos, além de favorecer a seleção de populações de parasitas resistentes, está diretamente relacionado com a presença de resíduos dos fármacos na carne e subprodutos dos ruminantes. A tese está composta por quatro estudos. O primeiro estudo teve como objetivo determinar a sensibilidade e a especificidade do método FAMACHA (FMC), usado para detectar a anemia causada por Haemonchus contortus, a partir dos dados coletados da avaliação da conjuntiva ocular de 42 cordeiros lactentes e 35 ovelhas em lactação, em intervalos de 14 dias, durante 5 meses. Para tanto, o hematócrito (Ht) foi utilizado como padrão-ouro na avaliação clínica da anemia dos animais. Três valores de corte para Ht (22, 19 ou 15%) foram utilizados para confirmar a anemia. Os resultados obtidos indicam que o FMC pode ser utilizado para identificar os cordeiros lactentes e ovelhas em fase de lactação com sinais clínicos de anemia decorrentes da infecção por H. contortus, sendo necessária a inclusão do FMC 3 como positivo para aumentar a sensibilidade do método, reduzindo o risco de morte de animais anêmicos não diagnosticados (falsos negativos). O segundo estudo teve como objetivo determinar o tempo mínimo para que as concentrações de moxidectina (MOX) atingissem níveis inferiores ao limite máximo de resíduo (LMR), no músculo próximo ao local de aplicação (50 g/kg) e gordura (500 g/kg). Foram utilizados 22 cordeiros, machos e fêmeas, abatidos 2; 4; 7; 14; 28 e 42 dias após o tratamento (DPT) com dose única de MOX (0,2 mg/kg de PC). A curva de depleção da MOX obtida para o músculo demonstrou alta concentração do fármaco 2 DPT (1854,2 g/kg), seguida por rápida absorção no local de administração, atingindo concentração abaixo do LMR 5 DPT. A gordura apresentou longo período de persistência do resíduo de MOX em alta concentração, atingindo níveis inferiores ao LMR 17 DPT. No terceiro e quarto estudo avaliou-se a produtividade animal, o estado sanitário e a concentração de resíduos de MOX nos tecidos (músculo e gordura), órgãos (rim e fígado) e soro, no momento do abate, de cordeiros submetidos a três programas para controle de endoparasitas: (T1) tratamento preventivo a cada 28 dias; (T2) tratamento após contagem de ovos por grama de fezes (OPG) igual ou superior a 700 e (T3) tratamento seletivo pelo método FMC. Para ambos os estudos (terceiro e quarto), 42 cordeiros foram mantidos com suas mães em pastagem de verão (Tifton-85) até o abate e avaliados a cada 14 dias para as variáveis: ganho médio diário de peso (GMD), OPG e FMC. Ao final do período experimental obteve-se o número total de aplicações do anti-helmíntico por cordeiro. No momento do abate foram realizadas as avaliações das carcaças (peso e rendimento) e coleta das amostras para determinação de resíduos de MOX. A quantificação de MOX no soro, tecidos e órgãos dos cordeiros foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrometria de massas (LC-MS/MS). Entre os gêneros de nematódeos observados nas coproculturas, o Haemonchus spp. (61,5%) e Ostertagia spp. (21,3%) foram os mais prevalentes. A implantação de programas seletivos, OPG e FMC, no controle de endoparasitas para cordeiros terminados em pastagem permitiu a obtenção de desempenho individual e por área semelhantes (P>0,05) aos dos animais submetidos ao tratamento preventivo a cada 28 dias. As características de peso, rendimento e deposição de gordura também não diferiram (P>0,05) entre os animais submetidos aos três programas para controle de endoparasitas. Das 756 amostras analisadas a partir das coletas realizadas no momento do abate dos cordeiros terminados em pastagem, submetidos a três métodos para controle de endoparasitas, apenas uma amostra de gordura proveniente do tratamento seletivo apresentou concentração (586,3 g/kg) acima do LMR. Em nenhuma das amostras de soro avaliadas foi detectado resíduo do fármaco. Houve correlação significativa da concentração de resíduo de MOX na gordura com o peso de gordura omental (P<0,05; r=0,5310), indicando que animais com maior deposição de gordura podem apresentar maior persistência de resíduo no organismo. Os resultados obtidos indicam que os métodos seletivos, OPG e FMC, podem ser indicados no controle de endoparasitas para cordeiros não desmamados e terminados em pastagem de verão, em substituição ao método preventivo de tratamento a cada 28 dias, sem prejuízos na produtividade animal e características da carcaça, com mínimo risco de ocorrência de violação do LMR quando o tempo de carência é respeitado.

The indiscriminate use of anthelmintics has been promoted the selection of resists parasites populations and is directly related to the presence of drugs residues in meat and ruminants products. This thesis is divided in four studies. The first study aimed to determine the sensitivity and specificity of the FAMACHA method (FMC) to detect clinical anemia caused by Haemonchus spp. in lambs and sheep. Ocular conjunctivae of 42 suckling lambs and 35 lactating ewes was evaluated in intervals of 14 days during five months. Hematocrit (Ht) served as the gold standard for anemia evaluation. Three standard values of Ht (22, 19 or 15%) were used to confirm anemia. The results indicate that the FMC is a safe method to be used in lambs and lactating ewes with clinical anemia from Haemonchus spp infection and need treatment. For both categories, it was necessary to include FMC 3 as a positive to increase the sensitivity of the method and to reduce the risk of death of undiagnosed anemic animals (false negatives). The second study aimed to determine the time it took for concentration of moxidectin (MOX) to reach levels below the maximum residue limit (MRL) in the muscle near the site of application (50 g/kg) and fat (500 g/kg). Twenty-two lambs, males and females, used in the study, were slaughtered 2; 4; 7; 14; 28 and 42 days after treatment (DAT) with a single dose of MOX (0.2 mg kg-1/body weight). The depletion curve for MOX obtained for the muscle showed a high drug concentration at 2 DAT (1854.2 g/kg) followed a rapid absorption of the drug at the site of administration, reaching a concentration below MRL of 5 DAT. The fat had a long persistence of MOX with high concentration, reaching levels below the MRL 17 DAT. The third and fourth studies evaluated the animal productivity, health status and the concentration of MOX residues in tissues (muscle and fat), organs (kidney and liver) and serum at slaughtered lambs submitted to three programs for control of nematode parasites: (T1) preventive treatment every 28 days; (T2) treatment after fecal egg count (EPG) equal or higher than 700; and (T3) selective treatment with FMC. For both studies, 42 lambs were kept with the ewes in summer pastures (Tifton-85) until slaughter (30 kg) and evaluated every 14 days for the values of: average daily gain (ADG), EPG and FMC. At the end of the experiment, the number of anthelmintic applications was calculated per lamb. Samples for determination of MOX residue were collected at slaughter, as well as the measurement of weight and carcass. MOX residue was determined using liquid chromatography ultra-high pressure with mass spectrometry (LCMS/ MS). Among the prevalent genera of helminths, Haemonchus spp. (61.5%) and Ostertagia sp. (21.3%) were the most predominant in the coproculture. The implementation of selective programs, EPG and FMC, to endoparasites control of lambs finished in pasture allowed to obtained similar productive (P>0.05) individual and per area when compared to preventive treatment every 28 days. The carcass traits (weight, yield and fat deposition) also did not differ (P>0.05) among the programs. Of the 756 samples analyzed for MOX residues of slaughtered lambs submitted to three methods of endoparasites control, just one sample of fat from the selective treatment group showed a concentration (586.3 ml kg-1) above the MRL. No sample of serum showed MOX residue levels above the LOQ of the analytical method. A significant correlation was observed with MOX residue and omental fat (P<0.05; r=0.5310), suggesting that animals with more fat deposition may have increased residue persistence in their body. The results indicate that selective methods, EPG and FMC, may be used to control endoparasites in suckling lambs in summer pastures, replacing the preventive method of treatment every 28 days without losses in animal productivity and carcass characteristics, with low risk of violation of the maximum residue limit when the lack of time is regarded.

Atividade antifúngica de óleo essencial de limão (Citrus aurantifolia) frente a fungos filamentosos isolados de pães

Os óleos essenciais (OE) constituem os elementos voláteis contidos em muitos órgãos vegetais, e estão relacionados com diversas funções necessárias à sobrevivência vegetal, exercendo papel fundamental na defesa contra micro-organismos. O objetivo do presente trabalho foi isolar e identificar fungos presentes em pães de forma, assim como, avaliar in vitro a atividade antifúngica de óleo essencial de limão frente a estes fungos. O isolamento e a identificação dos fungos foram realizados pelas técnicas de esgotamento por estriamento e pela técnica de microcultivo, respectivamente. A atividade antifúngica do OE de limão (Citrus aurantifolia) nas concentrações de 0; 100; 200; 400; 600; 800; 1200 µg/mL, do meio, foram testadas sobre A. niger, A. flavus, Rhizopus sp. e Penicillium sp. pelo método de diluição em ágar, acrescido do OE, onde fez-se um orifício de 5mm e adicionou-se 1mL do inoculo dos fungos incubando a 30º/72h. Após o período de incubação, para as espécies de A. niger e A. flavus, com o OE analisado nas concentrações a partir de 800µ/mL, e para Penicillium sp. e Rhizopus sp. com a concentração de 1200 µg/mL., os resultados mostraram um efeito superior ao da amostra controle em 80% do diâmetro do halo de crescimento. Pode-se concluir que a maior incidência de fungos nos pães avaliados foi de A. flavus, A. niger, Rhizopus sp. e Penicillium sp. sendo o A. flavus e A. niger mais sensíveis ao uso de OE de Citrus aurantifolia. No entanto, a concentração de 1200 µg/ml. de OE mostrou um efeito expressivo sobre todos os fungos avaliados.(AU)

Essential oils (EO) are volatile elements contained in many plant organs, and are related to various functions necessary for plant survival, playing a key role in the defense against microorganisms. The goal of this study was to isolate and identify fungi present in pan breads, as well as to evaluate "in vitro'' antifungal activity of lemon essential oil against these fungi. The isolation and identification of the fungi were performed by depletion induced by stretching as well as by microcultive technique, respectively. The antifungal activity of the lemon essential oil (Citrus aurantifolia), at concentrations of 0; 100; 200; 400; 600; 800; 1200 mcg/ml of the medium, were tested on A. niger, A. flavus, Rhiropus sp. and Penicillium sp. by the agar dilution method plus the lemon essential oil, where it was made a hole of 5 mm, in which was added 1 mL of the inoculum of the fungi incubating at 30º/72h. Afier the incubation period, for the species A. flavus and A. niger, with the EO examined at concentrations of 800 mcg/ml, andfor Penicillium sp. and Rhizopus sp., with the OE at the concentration of 1200 g/ml, the results showed a superior effect to the control sample by 80% of the diameter of the halo of growth. It is possible to conclude that the higher incidence of fungi in the evaluated bread were of the species A. flavus, A. niger, Rhizopussp. and Penicillium sp., being A. flavus and A. niger more sensitive to the use of the EO of Citrus aurantifolia. However, the concentration of 1200 mcg/ml of EO showed a substantial effect on all fungi analyzed.(AU)

Bioavailability comparison of free and esterified lutein for layer hens

Lutein supplements are often used to pigment and enrich layer chicken eggs. This experiment was conduced to compare the bioavailability of free and esterified lutein, by depletion method. Forty chickens were randomly divided into two groups. After 2 weeks of washout period, when all birds were fed the same low lutein basal diet, the two groups were fed for another 2 weeks with diets supplemented with free lutein or esterified lutein. Two experimental diets were supplemented with the same amount of 15 mg lutein/kg. On day 0 (baseline) and days 3, 7, and 14, birds fasting morning plasma samples were collected and stored for lutein analysis by high performance liquid chromatography method (HPLC). Results showed that: 1) Plasma lutein concentration increased dramatically after feeding free or esterified lutein; 2) Plasma lutein level in birds fed the diet supplemented with free lutein significantly differed from those fed esterified lutein on day 3. 3) There were no significant differences in plasma lutein levels between free lutein and esterified lutein on days 7 and 14. In conclusion, the lutein bioavailability from free lutein or esterified lutein supplements was comparable.

Bioavailability comparison of free and esterified lutein for layer hens

Lutein supplements are often used to pigment and enrich layer chicken eggs. This experiment was conduced to compare the bioavailability of free and esterified lutein, by depletion method. Forty chickens were randomly divided into two groups. After 2 weeks of washout period, when all birds were fed the same low lutein basal diet, the two groups were fed for another 2 weeks with diets supplemented with free lutein or esterified lutein. Two experimental diets were supplemented with the same amount of 15 mg lutein/kg. On day 0 (baseline) and days 3, 7, and 14, birds fasting morning plasma samples were collected and stored for lutein analysis by high performance liquid chromatography method (HPLC). Results showed that: 1) Plasma lutein concentration increased dramatically after feeding free or esterified lutein; 2) Plasma lutein level in birds fed the diet supplemented with free lutein significantly differed from those fed esterified lutein on day 3. 3) There were no significant differences in plasma lutein levels between free lutein and esterified lutein on days 7 and 14. In conclusion, the lutein bioavailability from free lutein or esterified lutein supplements was comparable.

Repercussões morfológicas dos efeitos da subnutrição protéica pré e pós-natal e da renutrição pós-natal sobre a mucosa palatina de ratos Wistar na fase púbere: avaliações morfométricas e da expressão do IGF-I e IGF-IR e da insulina e seu receptor / Morphologic repercussions of the protein malnutrition pre and postnatal and postnatal refeeding on the palatal mucosa of Wistar rats in the pubescent phase: structural evaluations and the expressions of the IGF-I and IGF-IR, Insulin and your receptor

Atualmente reagrupou-se sob o nome de subnutrição calórico-protéica uma série de afecções de carência antigamente descritas com diversos nomes e que tinham uma etiologia comum, a insuficiência alimentar, acarretando, ao mesmo tempo um emagrecimento e um esgotamento progressivo do estoque de proteínas do organismo. A partir de alterações na quantidade e qualidades dos alimentos ingeridos, o organismo busca regular seu metabolismo visando atingir a homeostase, na qual os hormônios desempenham papel fundamental. Dessa maneira, a desnutrição protéica e a secreção de insulina foram aqui correlacionados na avaliação morfológica e funcional do epitélio oral, representando, respectivamente, grave alteração nutricional (à semelhança da que acomete a população, especialmente, de países subdesenvolvidos e em desenvolvimento) e resposta produzida pela alteração do metabolismo energético das células. Os fatores de crescimento insulino-símile tipos 1 e 2 (IGF-I e IGF-II) são os principais fatores endócrinos determinantes do crescimento fetal. A maioria das ações conhecidas do IGF-I é mediada via um receptor tirosina-quinase, conhecido como IGF-IR. Recentemente, a insensibilidade ao IGF-I foi identificada como uma das causas de retardo de crescimento sem recuperação espontânea do desenvolvimento na vida pós-natal. Sendo assim, o presente trabalho tem o objetivo de estudar, através de métodos morfométricos, na mucosa palatina de ratos Wistar na fase púbere submetidos à desnutrição protéica pré e pós-natal e a renutrição pós-natal, o padrão celular e o componente colágeno da lâmina própria, bem como a expressão do IGF-I, do IGF-IR e da insulina e seu receptor, no intuito de encontrar possível correspondência entre as alterações metabólicas e morfofuncionais, decorrentes da depleção protéica. Para tanto, foram formados os seguintes grupos experimentais constituídos por animais heterogênicos (n=3) de acordo com a ração oferecida, protéica ou hipoprotéica: nutridos (N) e desnutridos (D) com 60 dias de idade, por ser essa a fase do final do período púbere, e renutridos (R), formado por animais do grupo D que, a partir do 21º dia (época do desmame) foram submetidos à ração protéica até atingirem 60 dias de idade. Os espécimes foram processados rotineiramente para microscopia de luz (HE, Azo-carmin e Pircro-sírius) e para imunohistoquímica (IGF-I, IGF-IR e insulina e seu receptor) e os dados morfoquantitativos analisados estatisticamente. Os resultados demonstraram que os parâmetros metabólicos tais como: alimentar, massa corporal, excreção de fezes, urina e ingestão de água, diferiram em todos os grupos semana após semana (S1≠S2≠S3≠S4≠S5≠S6). A densidade de células epiteliais fora constatada pelo método de coloração H.E. e imunomarcadas com insulina e IGF-I e seus respectivos receptores. A subnutrição determinou...

Currently it has been grouped and named protein-caloric under nutrition a series of deficiency described in the past under several denominations with similar etiology, the food deficiency which leads simultaneously to a weight loss and progressive decrease of protein storage in the body. From the changes in the quantity and quality of ingested food, the organism tries to regulate its metabolism in order to homeostasis, in which the hormones play a fundamental role. This way, the protein under nutrition and the insulin secretion were here correlated in the morphological and functional evaluation of the oral epithelium representing high nutritional change (similarly to one which affect people specially from under developed countries) and response produced by changes in the energetic metabolism of the cells respectively. The grown factors insuline-símile type 1 and 2 (IGF-I and IGF-II) are the principal endocrine factors which determine the fetal growth. Many known actions of the IGF-I are mediated via tyrosine-kinase receptor known as IGF-IR. Recently, the insensibility to IGF-I was identified as one of the reason for the regrowth without abrupt recovery of the development in the post-natal life. Therefore, the present work aims to study, the cellular standard and the collagen of lamina propria, as well as the expression of the IGF-I, of the IGF-IR and the insulin and its receptor, using morphometric methods in the palatine mucosa of wistar rats in the pubertal phase subject to protein under nutrition pre and post natal and post-natal re-feeding with the objective of finding possible association between metabolic and morph functional changes coming from protein depletion. For this purpose, the following experimental groups were formed: heterogenic animals (n=3) according to the diet offered protein or hyperprotein diet: nourished (N) and undernourished (D) with 60 days of age (finish of pubertal phase), and re-nourished (R), formed by animals of D group that, from the 21st day (weaning day) were subject to protein diet up to 60 days of age. The specimens were processed routinely for light microscopy (HE, Azo-carmin and Pircro-sírius) and for immunohistochemistry (IGF-I, IGF-IR and insulin and its receptor) and the morph quantitative data statistically analyzed. The results demonstrate that the metabolic parameters such as: food, body mass, feces excretion, urine and water ingestion differ in all groups weekly (S1≠S2≠S3≠S4≠S5≠S6). The density of epithelial was observed by HE method and immune-marked with insulin and IGF-I and their respective receptors. The under nutrition determined a significant increase of the cells reacting to insulin (I) and its receptor (IR) in relation to re-nourished and nourished groups (I: S ≠R; p<0.05) and (IR: S≠N; S≠R; p<0.05). No significant increase of immune...

Repercussões morfológicas dos efeitos da subnutrição protéica pré e pós-natal e da renutrição pós-natal sobre a mucosa palatina de ratos Wistar na fase púbere: avaliações morfométricas e da expressão do IGF-I e IGF-IR e da insulina e seu receptor / Morphologic repercussions of the protein malnutrition pre and postnatal and postnatal refeeding on the palatal mucosa of Wistar rats in the pubescent phase: structural evaluations and the expressions of the IGF-I and IGF-IR, Insulin and your receptor

Atualmente reagrupou-se sob o nome de subnutrição calórico-protéica uma série de afecções de carência antigamente descritas com diversos nomes e que tinham uma etiologia comum, a insuficiência alimentar, acarretando, ao mesmo tempo um emagrecimento e um esgotamento progressivo do estoque de proteínas do organismo. A partir de alterações na quantidade e qualidades dos alimentos ingeridos, o organismo busca regular seu metabolismo visando atingir a homeostase, na qual os hormônios desempenham papel fundamental. Dessa maneira, a desnutrição protéica e a secreção de insulina foram aqui correlacionados na avaliação morfológica e funcional do epitélio oral, representando, respectivamente, grave alteração nutricional (à semelhança da que acomete a população, especialmente, de países subdesenvolvidos e em desenvolvimento) e resposta produzida pela alteração do metabolismo energético das células. Os fatores de crescimento insulino-símile tipos 1 e 2 (IGF-I e IGF-II) são os principais fatores endócrinos determinantes do crescimento fetal. A maioria das ações conhecidas do IGF-I é mediada via um receptor tirosina-quinase, conhecido como IGF-IR. Recentemente, a insensibilidade ao IGF-I foi identificada como uma das causas de retardo de crescimento sem recuperação espontânea do desenvolvimento na vida pós-natal. Sendo assim, o presente trabalho tem o objetivo de estudar, através de métodos morfométricos, na mucosa palatina de ratos Wistar na fase púbere submetidos à desnutrição protéica pré e pós-natal e a renutrição pós-natal, o padrão celular e o componente colágeno da lâmina própria, bem como a expressão do IGF-I, do IGF-IR e da insulina e seu receptor, no intuito de encontrar possível correspondência entre as alterações metabólicas e morfofuncionais, decorrentes da depleção protéica. Para tanto, foram formados os seguintes grupos experimentais constituídos por animais heterogênicos (n=3) de acordo com a ração oferecida, protéica ou hipoprotéica: nutridos (N) e desnutridos (D) com 60 dias de idade, por ser essa a fase do final do período púbere, e renutridos (R), formado por animais do grupo D que, a partir do 21º dia (época do desmame) foram submetidos à ração protéica até atingirem 60 dias de idade. Os espécimes foram processados rotineiramente para microscopia de luz (HE, Azo-carmin e Pircro-sírius) e para imunohistoquímica (IGF-I, IGF-IR e insulina e seu receptor) e os dados morfoquantitativos analisados estatisticamente. Os resultados demonstraram que os parâmetros metabólicos tais como: alimentar, massa corporal, excreção de fezes, urina e ingestão de água, diferiram em todos os grupos semana após semana (S1≠S2≠S3≠S4≠S5≠S6). A densidade de células epiteliais fora constatada pelo método de coloração H.E. e imunomarcadas com insulina e IGF-I e seus respectivos receptores. A subnutrição determinou... (AU)

Currently it has been grouped and named protein-caloric under nutrition a series of deficiency described in the past under several denominations with similar etiology, the food deficiency which leads simultaneously to a weight loss and progressive decrease of protein storage in the body. From the changes in the quantity and quality of ingested food, the organism tries to regulate its metabolism in order to homeostasis, in which the hormones play a fundamental role. This way, the protein under nutrition and the insulin secretion were here correlated in the morphological and functional evaluation of the oral epithelium representing high nutritional change (similarly to one which affect people specially from under developed countries) and response produced by changes in the energetic metabolism of the cells respectively. The grown factors insuline-símile type 1 and 2 (IGF-I and IGF-II) are the principal endocrine factors which determine the fetal growth. Many known actions of the IGF-I are mediated via tyrosine-kinase receptor known as IGF-IR. Recently, the insensibility to IGF-I was identified as one of the reason for the regrowth without abrupt recovery of the development in the post-natal life. Therefore, the present work aims to study, the cellular standard and the collagen of lamina propria, as well as the expression of the IGF-I, of the IGF-IR and the insulin and its receptor, using morphometric methods in the palatine mucosa of wistar rats in the pubertal phase subject to protein under nutrition pre and post natal and post-natal re-feeding with the objective of finding possible association between metabolic and morph functional changes coming from protein depletion. For this purpose, the following experimental groups were formed: heterogenic animals (n=3) according to the diet offered protein or hyperprotein diet: nourished (N) and undernourished (D) with 60 days of age (finish of pubertal phase), and re-nourished (R), formed by animals of D group that, from the 21st day (weaning day) were subject to protein diet up to 60 days of age. The specimens were processed routinely for light microscopy (HE, Azo-carmin and Pircro-sírius) and for immunohistochemistry (IGF-I, IGF-IR and insulin and its receptor) and the morph quantitative data statistically analyzed. The results demonstrate that the metabolic parameters such as: food, body mass, feces excretion, urine and water ingestion differ in all groups weekly (S1≠S2≠S3≠S4≠S5≠S6). The density of epithelial was observed by HE method and immune-marked with insulin and IGF-I and their respective receptors. The under nutrition determined a significant increase of the cells reacting to insulin (I) and its receptor (IR) in relation to re-nourished and nourished groups (I: S ≠R; p<0.05) and (IR: S≠N; S≠R; p<0.05). No significant increase of immune... (AU)

Streptococcus spp. e Aeromonas spp. na água e em tilápias do nilo (Oreochromis niloticus) e parâmetros físico-químicos da água de piscicultura em tanques-rede

A criação intensiva de peixes tem se tornado popular, mas a dependência de arraçoamento pode enriquecer o ambiente com nutrientes, comprometendo a qualidade da água e predispondo os peixes a doenças. Streptococcus e Aeromonas são bactérias que acometem peixe em criações intensivas, podendo ocasionar mortalidade. Nesse sentido, o presente trabalho objetivou avaliar a influência de uma criação de tilápias do nilo em tanques-rede nos parâmetros de qualidade da água e na ocorrência de Streptococcus spp. e Aeromonas spp. na água e nos peixes em uma lagoa na região Sudeste do Brasil. Foram definidos para as amostragens dois locais, a lagoa, para coleta de água e os tanques-rede, para coleta de água e peixes e dois períodos, seco e chuvoso. Os dados obtidos da qualidade da água foram avaliados por indicadores estabelecidos na Resolução Conama nº 357, para corpos de água doce de classe 2. A presença de Streptococcus spp. e Aeromonas spp. foi avaliada por identificação fenotípica e a identificação das espécies, por provas bioquímicas. Isolados foram avaliados para produção de hemolisina utilizando ágar sangue e teste de resistência a antimicrobianos conforme o método de difusão de discos. A atividade de criação intensiva de peixes aumentou a concentração de fósforo total da água no período seco, ocorrência de Streptococcus spp. no ambiente e a população de Aeromonas spp. na superfície dos peixes. No período chuvoso, houve maior isolamento das espécies potencialmente patogênicas, Aeromonas hydrophila na superfície e no rim dos peixes, A. caviae, A. sobria, A veronii, A. jandaei e Streptococcus agalactiae na superfície dos peixes, quando também ocorreu aumento da concentração de N-amoniacal e depleção acentuada da concentração de oxigênio dissolvido na água, e isso pode ter sido a causa da mortalidade de peixes nos tanquesrede...

Intensive fish farming is becoming more and more popular, but dependency on ration feeding increases nutrient load of the water, affects its quality and predisposes fish to diseases. Streptococcus and Aeromonas are bacteria that can affect fish in intensive farms and cause mortality. This study aims at evaluating the impact of a nile tilapia net-cage farm on the water quality parameters and the occurrence of Streptococcus spp. and Aeromonas spp. in the water and on the fish, in a pond in Southeastern Brazil. Two sampling sites were defined, one in the pond and another in the net cages to collect water, and water and fish, respectively. Sampling took place during two periods, dry and rainy. Water quality data were analyzed according to standards set by Conama resolution nº 357, for freshwater bodies class 2. Streptococcus spp. and Aeromonas spp. were determined by phenotypic and species identification using biochemical tests. Isolates were evaluated for hemolysin production using blood agar and antimicrobial resistance test according to disk diffusion method. Intensive fish farming increased the amount of phosphorus in water, Streptococcus spp. occurrence in the environment and Aeromonas spp. population on fish surface as well, during dry periods. During the rainy season, more potentially pathogenic bacteria were isolated such as, Aeromonas hydrophila on fish surface and kidneys, A. caviae, A. sobria, A veronii, A. jandaei and Streptococcus agalactiae on fish surface. An increase of N-ammoniacal was also observed together with severe depletion of dissolved oxygen, which may have caused fish mortality in the net-cages. Production of b-hemolysis was greater for aeromonas species isolated from the water and fish kidneys, while for streptococci it was higher in isolates from fish surface. The species Aeromonas veronii, A. hydrophila, A. jandaei, A. sobria A. caviae and Streptococcus agalactiae...