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1.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 72(3): 655-663, May-June, 2020. tab, graf
Artigo em Inglês | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1128611

Resumo

This study was designed to evaluate the extent of the protection for bovine viral diarrhea virus type 2 (BVDV-2) infection, afforded by vaccination with a combo inactivated vaccine, which contains bovine viral diarrhea virus type 1 (BVDV-1) and infectious bovine rhinotracheitis virus (IBRV). Five 3-4-month-old calves were intramuscularly vaccinated with a single dose of the combo vaccine and boosted with same dose three weeks after the first vaccination, with five mock immunized calves serving as a control group. Twenty-one days after the second vaccination, all calves were challenged with BVDV-2 SX08 strain by spray into nostril. The unvaccinated animals developed typical clinical signs of high rectal temperature, diarrhoea with erosions and a dramatic drop in leukocyte counts. These signs occured markedly less in all vaccinated animals, the rectal temperature, leukopenia and virarmia of which, were significantly less than the mock immunized calves. It can be concluded that vaccination with the combo inactivated vaccine affords cross-protection against clinical effects of a challenge-infection with BVDV-2 SX08 strain, although it was part protection.(AU)


Este estudo foi desenvolvido para avaliar a extensão da proteção contra a infecção pelo vírus da diarréia viral bovina tipo 2 (BVDV-2) através da vacinação com uma vacina combinada inativada contendo o vírus da diarréia viral bovina tipo 1 (BVDV-1) e vírus da rinotraqueíte de bovinos infecciosos (IBRV). Cinco bezerros com 3 a 4 meses de idade foram vacinados via intramuscular com uma dose única da vacina combinada e reforçados com a mesma dose três semanas após a primeira vacinação, com cinco bezerros imunizados em simulação servindo como grupo controle. Vinte e um dias após a segunda vacinação, todos os bezerros foram desafiados com a cepa BVDV-2 SX08 por spray na narina. Os animais não vacinados desenvolveram sinais clínicos típicos, como alta temperatura retal, diarréia com erosões e queda drástica na contagem de leucócitos. Estes sinais tiveram ocorrência significativamente menor em todos os animais vacinados, cuja temperatura retal, leucopenia e virarmia eram significativamente menores do que os bezerros simulados. É possível concluir que a vacinação com a vacina combinada inativada proporciona proteção cruzada contra os efeitos clínicos de uma infecção provocada pela cepa BVDV-2 SX08, embora tenha sido parcialmente protegida.(AU)


Assuntos
Animais , Bovinos , Vacinação , Vacinas Combinadas/análise , Vírus da Diarreia Viral Bovina Tipo 1/imunologia , Vírus da Diarreia Viral Bovina Tipo 2/imunologia , Proteção Cruzada , Vacinas de Produtos Inativados , Contagem de Leucócitos
2.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 72(3): 655-663, May-June, 2020. tab, graf
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-29771

Resumo

This study was designed to evaluate the extent of the protection for bovine viral diarrhea virus type 2 (BVDV-2) infection, afforded by vaccination with a combo inactivated vaccine, which contains bovine viral diarrhea virus type 1 (BVDV-1) and infectious bovine rhinotracheitis virus (IBRV). Five 3-4-month-old calves were intramuscularly vaccinated with a single dose of the combo vaccine and boosted with same dose three weeks after the first vaccination, with five mock immunized calves serving as a control group. Twenty-one days after the second vaccination, all calves were challenged with BVDV-2 SX08 strain by spray into nostril. The unvaccinated animals developed typical clinical signs of high rectal temperature, diarrhoea with erosions and a dramatic drop in leukocyte counts. These signs occured markedly less in all vaccinated animals, the rectal temperature, leukopenia and virarmia of which, were significantly less than the mock immunized calves. It can be concluded that vaccination with the combo inactivated vaccine affords cross-protection against clinical effects of a challenge-infection with BVDV-2 SX08 strain, although it was part protection.(AU)


Este estudo foi desenvolvido para avaliar a extensão da proteção contra a infecção pelo vírus da diarréia viral bovina tipo 2 (BVDV-2) através da vacinação com uma vacina combinada inativada contendo o vírus da diarréia viral bovina tipo 1 (BVDV-1) e vírus da rinotraqueíte de bovinos infecciosos (IBRV). Cinco bezerros com 3 a 4 meses de idade foram vacinados via intramuscular com uma dose única da vacina combinada e reforçados com a mesma dose três semanas após a primeira vacinação, com cinco bezerros imunizados em simulação servindo como grupo controle. Vinte e um dias após a segunda vacinação, todos os bezerros foram desafiados com a cepa BVDV-2 SX08 por spray na narina. Os animais não vacinados desenvolveram sinais clínicos típicos, como alta temperatura retal, diarréia com erosões e queda drástica na contagem de leucócitos. Estes sinais tiveram ocorrência significativamente menor em todos os animais vacinados, cuja temperatura retal, leucopenia e virarmia eram significativamente menores do que os bezerros simulados. É possível concluir que a vacinação com a vacina combinada inativada proporciona proteção cruzada contra os efeitos clínicos de uma infecção provocada pela cepa BVDV-2 SX08, embora tenha sido parcialmente protegida.(AU)


Assuntos
Animais , Bovinos , Vacinação , Vacinas Combinadas/análise , Vírus da Diarreia Viral Bovina Tipo 1/imunologia , Vírus da Diarreia Viral Bovina Tipo 2/imunologia , Proteção Cruzada , Vacinas de Produtos Inativados , Contagem de Leucócitos
3.
Ciênc. Anim. (Impr.) ; 28(2,supl.2): 1-3, 2018. tab
Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-19450

Resumo

The immunization process is an important practice in the veterinary clinical routine, being dependent on the immune system and influenced by several factors, such as the presence of ectoparasites. Therefore, the objective of the present study was to evaluate the pre-vaccination leukocyte parameters in puppies with ticks. A retrospective study was carried out through the evaluation of clinical files and hematological data of 30 clinically healthy puppies divided into two groups, G1 (n=15) composed of animals without ticks and G2 (n=15) by dogs with ticks. The G2 group had significant changes in total leukocytes and neutrophils. Therefore, it was concluded that the presence of ticks induced leukocyte alterations in dogs submitted to pre-vaccine clinical evaluation.(AU)


Assuntos
Animais , Recém-Nascido , Cães , Ectoparasitoses/sangue , Ectoparasitoses/veterinária , Ectoparasitoses/imunologia , Contagem de Leucócitos/veterinária , Vacinas , Imunogenicidade da Vacina , Carrapatos , Testes Hematológicos/veterinária
4.
Ciênc. Anim. (Impr.) ; 28(2,supl.2): 1-3, 2018. tab
Artigo em Português | VETINDEX | ID: biblio-1472382

Resumo

The immunization process is an important practice in the veterinary clinical routine, being dependent on the immune system and influenced by several factors, such as the presence of ectoparasites. Therefore, the objective of the present study was to evaluate the pre-vaccination leukocyte parameters in puppies with ticks. A retrospective study was carried out through the evaluation of clinical files and hematological data of 30 clinically healthy puppies divided into two groups, G1 (n=15) composed of animals without ticks and G2 (n=15) by dogs with ticks. The G2 group had significant changes in total leukocytes and neutrophils. Therefore, it was concluded that the presence of ticks induced leukocyte alterations in dogs submitted to pre-vaccine clinical evaluation.


Assuntos
Animais , Recém-Nascido , Cães , Contagem de Leucócitos/veterinária , Ectoparasitoses/imunologia , Ectoparasitoses/sangue , Ectoparasitoses/veterinária , Vacinas , Carrapatos , Imunogenicidade da Vacina , Testes Hematológicos/veterinária
5.
Pesqui. vet. bras ; 36(11): 1067-1074, nov. 2016. tab, graf
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-15585

Resumo

A glycoprotein E-deleted Brazilian bovine herpesvirus 1 (BoHV-1gE) was tested regarding to safety and immunogenicity. Intramuscular inoculation of young calves with a high virus dose did not result in clinical signs or virus shedding during acute infection or after dexamethasone administration. Calves vaccinated once IM (group I) or subcutaneously (group II) with live BoHV-1gE or twice with inactivated virus plus aluminum hydroxide (group IV) or Montanide (group V) developed VN titers of 2 to 8 (GMT:2); 2 to 4 (GMT:1.65); 2 to 16 (GMT:2.45) and 2 to 128 (GMT:3.9), respectively. All BoHV-1gE vaccinated calves remained negative in an anti-gE ELISA. Lastly, six young calves vaccinated with live BoHV-1gE and subsequently challenged with a virulent BoHV-1 strain shed less virus and developed only mild and transient nasal signs comparing to unvaccinated calves. Thus, the recombinant BoHV-1gE is safe and immunogenic for calves and allows for serological differentiation by a gE-ELISA test.(AU)


Um isolado brasileiro de herpesvírus bovino tipo 1, contendo uma deleção na glicoproteína E (gE - BoHV-1gE) foi submetido a testes para avaliar a sua segurança e imunogenicidade em bovinos. Bezerros foram submetidos à inoculação intramuscular com uma alta dose viral e não demonstraram sinais clínicos ou excreção viral durante a fase aguda ou após tentativa de reativação viral pela administração de dexametasona. Bezerros que receberam uma dose do vírus vivo, contendo a deleção na gE, pela via intramuscular (grupo I) ou pela via subcutânea (grupo II) ou duas doses do vírus inativado utilizando o adjuvante hidróxido de alumínio (grupo IV) ou Montanide (grupo V), desenvolveram títulos de anticorpos neutralizantes de 2 a 8 (GMT: 2); 2 a 4 (GMT: 1,65); 2 a 16 (GMT: 2,25) e de 2 a 128 (GMT: 3,9), respectivamente. Todos os bezerros vacinados se mantiveram soronegativos quando utilizado um kit ELISA específico para a gE. Para o teste de segurança, seis bezerros foram vacinados com o vírus vivo BoHV-1gE, sendo estes posteriormente desafiados com uma cepa virulenta de BoHV-1. Estes bezerros excretaram menos vírus e desenvolveram apenas sinais clínicos moderados e transitórios quando comparados com dados coletados de quatro animais não-vacinados. Com base nestes resultados, podemos confirmar que o vírus do BoHV-1 que contém a deleção na gE (BoHV-1gE) é seguro e suficientemente imunogênico para bezerros e permite a diferenciação sorológica entre os animais vacinados e infectados perante a a um teste ELISA commercial específico para a gE.(AU)


Assuntos
Animais , Bovinos , Herpesvirus Bovino 1/genética , Vacinas Sintéticas , Glicoproteínas , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática
6.
Pesqui. vet. bras ; 36(11): 1067-1074, Nov. 2016. tab, graf
Artigo em Inglês | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-842009

Resumo

A glycoprotein E-deleted Brazilian bovine herpesvirus 1 (BoHV-1gEΔ) was tested regarding to safety and immunogenicity. Intramuscular inoculation of young calves with a high virus dose did not result in clinical signs or virus shedding during acute infection or after dexamethasone administration. Calves vaccinated once IM (group I) or subcutaneously (group II) with live BoHV-1gEΔ or twice with inactivated virus plus aluminum hydroxide (group IV) or Montanide™ (group V) developed VN titers of 2 to 8 (GMT:2); 2 to 4 (GMT:1.65); 2 to 16 (GMT:2.45) and 2 to 128 (GMT:3.9), respectively. All BoHV-1gEΔ vaccinated calves remained negative in an anti-gE ELISA. Lastly, six young calves vaccinated with live BoHV-1gEΔ and subsequently challenged with a virulent BoHV-1 strain shed less virus and developed only mild and transient nasal signs comparing to unvaccinated calves. Thus, the recombinant BoHV-1gEΔ is safe and immunogenic for calves and allows for serological differentiation by a gE-ELISA test.(AU)


Um isolado brasileiro de herpesvírus bovino tipo 1, contendo uma deleção na glicoproteína E (gE - BoHV-1gEΔ) foi submetido a testes para avaliar a sua segurança e imunogenicidade em bovinos. Bezerros foram submetidos à inoculação intramuscular com uma alta dose viral e não demonstraram sinais clínicos ou excreção viral durante a fase aguda ou após tentativa de reativação viral pela administração de dexametasona. Bezerros que receberam uma dose do vírus vivo, contendo a deleção na gE, pela via intramuscular (grupo I) ou pela via subcutânea (grupo II) ou duas doses do vírus inativado utilizando o adjuvante hidróxido de alumínio (grupo IV) ou Montanide™ (grupo V), desenvolveram títulos de anticorpos neutralizantes de 2 a 8 (GMT: 2); 2 a 4 (GMT: 1,65); 2 a 16 (GMT: 2,25) e de 2 a 128 (GMT: 3,9), respectivamente. Todos os bezerros vacinados se mantiveram soronegativos quando utilizado um kit ELISA específico para a gE. Para o teste de segurança, seis bezerros foram vacinados com o vírus vivo BoHV-1gEΔ, sendo estes posteriormente desafiados com uma cepa virulenta de BoHV-1. Estes bezerros excretaram menos vírus e desenvolveram apenas sinais clínicos moderados e transitórios quando comparados com dados coletados de quatro animais não-vacinados. Com base nestes resultados, podemos confirmar que o vírus do BoHV-1 que contém a deleção na gE (BoHV-1gEΔ) é seguro e suficientemente imunogênico para bezerros e permite a diferenciação sorológica entre os animais vacinados e infectados perante a a um teste ELISA commercial específico para a gE.(AU)


Assuntos
Animais , Bovinos , Glicoproteínas , Herpesvirus Bovino 1/genética , Herpesvirus Bovino 1/imunologia , Vacinas Sintéticas , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática
7.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-218910

Resumo

O estresse térmico proporciona muitos prejuízos na avicultura industrial e com o objetivo de minimizá-los, estratégias nutricionais vêm sendo adotadas, com ênfase, principalmente aos alimentos naturais. O objetivo desse trabalho foi estudar o efeito da suplementação de óleo da semente de maracujá (OSM) na imunidade e respostas imunes, qualidade de carne e sistema antioxidante de frangos de corte. Para isso foram utilizados 450 pintainhos de 1 dia de idade, machos, da linhagem Cobb® 500, alojados em gaiolas de arame galvanizado, em duas câmaras com 45 gaiolas cada. O delineamento foi inteiramente casualizado, em esquema fatorial 2 x 5, sendo duas temperaturas (termoneutra e estresse cíclico pelo calor) e cinco tratamentos (controle sem inclusão de OSM + quatro níveis de inclusão de OSM (0,30; 0,50; 0,70; 0,90%) com nove repetições de cinco aves cada. A ração foi desprovida de antibióticos como melhorador de desempenho, porém acrescida de anticoccidiano em todos os tratamentos. Os dados foram analisados utilizando-se análise de variância com auxílio do SAS 9.3 (SAS Institute, 2008) e, sendo significativas a (P<0,05) no teste de média pelo teste de Tukey. Houve efeito significativo para o peso vivo ao abate e peso de cortes comerciais, para frangos criados em ambiente termoneutro, que apresentaram maiores valores em relação ao estresse por calor, e a gordura abdominal apresentou menor valor para aves desafiadas por calor. O OSM influenciou no maior peso (em gramas) das pernas. Frangos de corte criados em estresse por calor apresentaram menores valores de a* na musculatura do peito do que os frangos criados em ambiente termoneutro. Em relação a análise proteômica eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida (2D-PAGE) do plasma sanguíneo para resultados voltados a qualidade de carne, a proteína Actin alpha skeletal muscle, apresentou diferença significativa nos tratamentos com inclusão de 0,9% de OSM em ambas as temperaturas (estresse por calor e termoneutra) e, Neuropilin-1, no tratamento termoneutro com 0% de inclusão de OSM. Com 21 dias de idade foi observado uma interação significativa para titulação de anticorpos, sendo que frangos criados em ambiente de estresse que receberam o nível de 0,90% de OSM, apresentaram maior valor de titulação vacinal. Aos 28 dias de idade, novamente os animais que receberam 0,90% de inclusão de OSM e, independente do ambiente de criação, apresentaram maiores valores de títulos de anticorpos. Na análise proteômica do plasma sanguíneo (2D-PAGE) foram encontradas diversas proteínas que 11 estão relacionadas com o sistema imunológico dos frangos de corte: Complement factor B-like protease (Fragment); Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase; Mannose-binding protein; Zinc finger protein ubi-d4; Ig lambda chain C region; Ig lambda chain V-1 region; Apolipoprotein A-I. A análise proteômica também apresentou resultados referentes a manutenção do epitélio gastrointestinal, com a expressão diferencial de Retinol-binding protein 4 e, Homeodomain-only protein. Houve maior % de redução de DPPH com a maior inclusão do OSM, assim como maior expressão de Alcohol dehydrogenase 1, nos tratamentos com maior inclusão de OSM. Também houve diferença significativa para o efeito temperatura sobre a atividade da enzima catalase que se apresentou maior em ambiente termoneutro. Assim como, Nuclear receptor coactivator 7 que foi diferencialmente expresso no tratamento 0% de frangos de corte criados em ambiente termoneutro. Hemoglobin subunit epsilon teve sua expressão diferenciada no tratamento 0,9% de frangos de corte criados em ambiente de estresse. Além disso, vários spots proteicos relacionados as chaperonas moleculares foram diferencialmente expressas nos tratamentos 0,5% e 0,9% de inclusão de OSM em ambas as temperaturas de criação. Membrane-associated progesterone receptor component 1 foi diferencialmente expresso nos tratamentos de 0,9% de inclusão de OSM em ambos os ambientes de criação.


Heat stress causes many damages in industrial poultry farming and in order to minimize them, nutritional strategies have been adopted, with emphasis, mainly on natural foods. The objective of this work was to study the effect of passion fruit seed oil (OSM) supplementation on immunity and immune responses, meat quality and antioxidant system of broiler chickens. For this, 450 1-day-old male chicks of the Cobb® 500 strain were used, housed in galvanized wire cages, in two chambers with 45 cages each. The design was completely randomized, in a 2 x 5 factorial scheme, with two temperatures (thermoneutral and cyclic heat stress) and five treatments (control without inclusion of OSM + four levels of inclusion of OSM (0.30; 0.50; 0) .70; 0.90%) with nine replicates of five birds each.The ration was devoid of antibiotics as a performance enhancer, but added anticoccidial in all treatments. Data were analyzed using analysis of variance with the aid of SAS 9.3 (SAS Institute, 2008) and, being significant (P<0.05) in the mean test by the Tukey test. which had higher values in relation to heat stress, and abdominal fat had lower value for heat challenged birds. OSM influenced the higher weight (in grams) of the legs. Broilers reared under heat stress had lower value a* in the breast musculature than broilers raised in a thermoneutral environment. Regarding proteomic two-dimensional electrophoresis analysis in polyacrylamide gel (2D-PAGE) of blood plasma for meat quality results, the protein Actin alpha skeletal muscle showed a significant difference in treatments with inclusion of 0.9% OSM in both temperatures (heat stress and thermoneutral) and, Neuropilin-1, in thermoneutral treatment with 0% inclusion of OSM. At 21 days of age, a significant interaction for antibody titration was observed, and broilers reared in a stress environment that received the level of 0.90% of OSM had a higher value of vaccine titration. At 28 days of age, again the animals that received 0.90% inclusion of OSM and, regardless of the rearing environment, had higher antibody titers. In the proteomic analysis of blood plasma (2D-PAGE) several proteins that are related to the immune system of broiler chickens were found: Complement factor B-like protease (Fragment); Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase; Mannose-binding protein; Zinc finger protein ubi-d4; Ig lambda chain C region; Ig lambda chain V-1 region; Apolipoprotein A-I. Proteomic analysis also showed results regarding the maintenance of the gastrointestinal epithelium, with the differential expression of Retinol-binding protein 4 and Homeodomain-only protein. There was a greater % reduction of DPPH with the 13 greater inclusion of OSM, as well as greater expression of Alcohol dehydrogenase 1, in treatments with greater inclusion of OSM. There was also a significant difference for the temperature effect on the catalase enzyme activity, which was higher in a thermoneutral environment. As well as, Nuclear receptor coactivator 7 which was differentially expressed in the 0% treatment of broilers reared in thermoneutral environment. Hemoglobin subunit epsilon had its expression differentiated in the treatment of 0.9% of broilers reared in stress environment. Furthermore, several protein spots related to molecular chaperones were differentially expressed in the 0.5% and 0.9% OSM inclusion treatments at both rearing temperatures. Membrane-associated progesterone receptor component 1 was differentially expressed in treatments of 0.9% inclusion of OSM in both rearing environments.

8.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-220043

Resumo

O objetivo neste estudo foi avaliar a utilização dos nucleotídeos adenosina-5-monofosfato (AMP), guanosina-5-monofosfato (GMP) e inosina-5-monofosfato (IMP) como fonte energética na dieta de frangos de corte sobre desempenho animal, perfil bioquímico, sistema imunológico, morfologia intestinal, rendimento de carcaças e cortes e qualidade da carne de frangos de corte. Experimento 1: O período experimental foi de 21 a 42 dias de idade, 896 pintos de corte machos, da linhagem Cobb-Vantress®. O delineamento experimental foi inteiramente ao acaso, em arranjo fatorial (2 x 3) +1+1 (AMP e GMP 3 níveis de suplementação, + controle positivo (CP), + controle negativo (CN)), totalizando 8 tratamentos, sendo o CP uma dieta convencional à base de milho e farelo de soja; controle CN com 100 kcal abaixo dos valores da dieta convencional, e suplementados nesta dieta com redução de energia 3 níveis de inclusão para AMP e GMP (0,07%, 0,14% e 0,21%), 7 repetições com 16 aves por unidade experimental. Uma interação foi observada para triglicerídeos (P<0,05), em que os níveis de suplementação de AMP com 0,07% e 0,14% apresentaram menores valores quando comparados ao nível de 0,21% de AMP e todos os níveis de GMP. Houve efeito crescente de níveis (P<0,05) para AMP e quanto maior a suplementação de AMP, maiores foram os títulos de anticorpos. A partir de 0,21% de suplementação de AMP houve diferenças quando comparado ao tratamento CN. Para os demais parâmetros avaliados as variáveis não diferenciaram (P>0,05). Conclui-se que com 0,21% de suplementação de AMP houve melhora do sistema imune sem comprometer o desempenho, rendimento de carcaça e qualidade de carne. Experimento 2: Foram utilizados 960 pintos de frangos de corte de um dia de idade em um delineamento experimental inteiramente ao acaso, com seis tratamentos e oito repetições de 20 aves por unidade experimental. Os tratamentos consistiram em: uma dieta convencional controle positivo (CP), uma dieta controle negativo (CN) com redução de 100 kcal/kg abaixo dos valores da formulação da CP e quatro níveis de suplementação do nucleotídeo inosina-5-monofosfato (IMP) em dieta CN (0; 0,07; 0,12; 0,17 e 0,22%) de 1 a 42 dias. Aos 21 dias de idade dos frangos de corte houve efeito linear decrescente (P<0,05) para a conversão alimentar (CA). No período de 1-21 dias de idade dos frangos de corte houve efeito linear decrescente (P<0,05) para a conversão alimentar (CA) sem influenciar (P>0,05) no ganho de peso (GP) e consumo de ração (CR). Houve efeito linear decrescente (P<0,05) para contagem de heterofilos, monócitos e basófilos aos 21 dias de idade. Pode ser observado aos 21 dias de idade efeito linear crescente (P<0,05) para contagem celular de linfócitos e para os títulos de anticorpos. Aos 42 dias de idade, pode ser observado efeito linear crescente (P<0,05) para o CR e GP. Aos 42 dias de idade pode ser observado efeito linear crescente (P<0,05) para a contagem de linfócitos e efeito linear decrescente (P<0,05) para os parâmetros de contagem de heterofilos e glicose. A suplementação de IMP pode suprir a necessidade energética de dietas com redução de energia melhorando as variáveis de desempenho no nível de suplementação de 0,22% para fase inicial e 0,17% para fase crescimento, e contribuindo na modulação de células leucocitárias e produção de anticorpos a partir de 0,12% de suplementação sem influenciar negativamente no rendimento de carcaças e cortes, na qualidade da carne e na eliminação de amônia pelas excretas. Experimento 3:Foram utilizados 1000 frangos de corte de um dia de idade, machos, da linhagem comercial Cobb-Vantress®, distribuídos em um delineamento experimental inteiramente ao acaso, em um esquema fatorial 5 x 2 (IMP x desafiados ou não com a vacina contra coccidiose) com cinco tratamentos e dez repetições de 20 aves por unidade experimental. Os tratamentos consistiram em uma dieta controle e quatro níveis de suplementação do nucleotídeo inosina-5-monofosfato na forma pura (IMP) (0,12; 0,17; 0,24 e 0,32%). No terceiro dia de idade, foi realizado um desafio sanitário com vacina viva atenuada de Eimeria spp. Houve interação (P<0,05) entre os níveis de IMP e o desafio vacinal para GP e CA para os frangos de corte. Desdobrando a interação para o GP, verifica-se que suplementando o IMP na dieta as aves desafiadas com 0,24% e 0,32% não foram observadas diferenças de GP quando comparada as aves não desafiadas. Altura de vilo, relação vilo:cripta de duodeno e altura de vilo, profundidade de cripta e relação vilo:cripta apresentaram interação (P<0,05) e desdobrando a interação pode ser observado maior altura de vilo das aves desaviadas nos níveis de suplementação 0%, 0,24% e 0,32% de IMP. Desdobrando a interação da relação vilo:cripta de jejuno pode ser bservado que as aves desafiadas apresentaram menores relações das aves não desafiadas nos níveis 0%, 0,17%, 0,24% e 0,32% de suplementação de IMP. Pode ser observado um efeito de níveis (P<0,05) para a contagem de heterofilo, e quanto maior a suplementação de IMP, maior é a população desta célula, como também para desafio sanitário para a contagem de heterofilos, linfócitos, monócitos, eosinófilos, basófilos e H:L dos frangos de corte suplementados com IMP e o aumento de contagem de heterofilos, eosinófilos, basófilos e H:L e a diminuição de linfócitos e monócitos. Para a contagem de oocistos de Eimeria spp. Nos dias pós-infecção 11 e 14 pode ser observado efeito para níveis de suplementação de IMP (P<0,05) e mesmo com o grupo desafiado apresentar maior quantidade de oocistos, pode-se observar menor quantidade conforme houve aumento dos níveis de suplementação. A imunoglobulina A (IgA) apresentou efeito para níveis de suplementação (P<0,05), e pode ser observado aumento de IgA tanto para as aves desafiadas como as não desafiados com o aumento da suplementação de IMP na dieta. A suplementação de IMP em dietas de frangos de corte influenciou positivamente no desempenho de aves desafiadas a partir de 0,24% para o GP e 0,12% para a CA e redução de oocistos a partir de 0,12% de suplementação, melhorando o sistema imune independente do desafio sanitário. Assim, pode-se concluir que os nucleotídeos AMP, GMP e IMP podem proporcionar melhoras nos índices zootécnicos, sistema imunológico e saúde intestinal.


The aim of this study was to evaluate the use of adenosine-5-monophosphate (AMP), guanosine-5-monophosphate (GMP) and inosine-5-monophosphate (IMP) nucleotides as energy source in broilers diet on animal performance, biochemical profile, immune system, intestinal morphology, carcass yield, cut yield and meat quality of broiler chickens. Experiment 1: The experimental period was from 21 to 42 days of age and 896 male broiler chicks of the Cobb-Vantress® strain were used. The experimental design was completely randomized, in a factorial arrangement (2 x 3) +1+1 (AMP and GMP in 3 levels of supplementation, + positive control (PC), + negative control (NC)), totaling 8 treatments, being the PC a conventional diet based on corn and soybean meal; NC control with 100 kcal below the values of the conventional diet, and supplemented in this diet with reduced energy 3 incluion levels of AMP and GMP (0.07%, 0.14% and 0.21%), 7 repetitions with 16 birds per experimental unit. An interaction was observed for triglycerides (P<0.05), where the AMP supplementation levels with 0.07% and 0.14% had lower values when compared to the level of 0.21% of AMP and all levels of GMP. There was an increasing effect of levels (P<0.05) for AMP where the highest is the AMP supplementation, the highest is the antibody titers. From 0.21% of AMP supplementation there were differences when compared to the NC treatment. For other parameters evaluated, the variables did not differ (P>0.05). It was concluded that with 0.21% of AMP supplementation there was an improvement in the immune system without compromising performance, carcass yield and meat quality. Experiment 2: 960-day-old broiler chicks were used in a completely randomized experimental design, with six treatments and eight replications of 20 birds per experimental unit. The treatments consisted of: a conventional positive control diet (PC), a negative control diet (NC) with a reduction of 100 kcal / kg below the values of the PC formulation and four supplementation levels of nucleoside inosine-5-monophosphate (IMP) in NC diet (0, 0.07, 0.12, 0.17 and 0.22%) from 1 to 42 days. At 21 days of age of broilers there was a linear decreasing effect (P <0.05) for feed conversion (FC). In the period of 1-21 days of age of broilers there was a linear decreasing effect (P <0.05) of FC without influencing (P> 0.05) in weight gain (WG) and feed intake (FI). There was a linear decreasing effect (P <0.05) for counting heterophiles, monocytes and basophils at 21 days of age. At 21 days of age, an increasing linear effect (P <0.05) can be observed for lymphocyte cell count and for antibody titers. At 42 days of age, an increasing linear effect (P <0.05) can be observed for FI and WG. The IMP levels presented higher averages in relation to the PC diet (P <0.05) for FI. The NC diet showed lower averages when compared to the IMP levels (P <0.05) for serum glucose, lymphocyte count, antibody titers and volatile NH3 at 21 days. At 42 days of age, an increasing linear effect (P <0.05) can be observed for lymphocyte count and a decreasing linear effect (P <0.05) for heterophile and glucose count parameters. The IMP levels presented higher averages in relation to PC diet (P <0.05) for FI, pancreas relative weight and differential leukocyte count. The NC diet showed lower averages when compared to the levels of IMP (P <0.05) at 42 days for FI, relative pancreas weight and lymphocyte count. IMP supplementation can supply the energy requirement of diets with reduced metabolizable energy by improving performance parameters at the supplementation level of 0.22% for initial phase and 0.17% and 0.22% for the growth phase, and contributing to the modulation of leukocyte cells and antibodies production from 0.12% supplementation without negatively influencing the yield of carcasses and cuts, meat quality and the elimination of ammonia by excreta. Experiment 3: 1000 one-day-old male broiler chickens of the Cobb-Vantress® commercial strain were used, distributed in a completely randomized experimental design, in a 5 x 2 factorial scheme (nucleotide levels x challenged or not with the vaccine against coccidiosis) with five treatments and ten replicates of 20 birds per experimental unit. The treatments consisted of a control diet and four supplementation levels of the nucleotide inosine-5-monophosphate in pure form (IMP) (0.12, 0.17, 0.24 and 0.32%). On the third day of age, a sanitary challenge with live attenuated Eimeria spp were carried out. There was interaction (P<0.05) between IMP levels and the vaccine challenge for WG and FC for broilers. Breaking down the interaction for WG, it is verified that supplementing IMP in diet, challenged birds with 0.24% and 0.32% did not show differences in WG when compared to unchallenged birds. Villus height, villus:duodenal crypt ratio and villus height, crypt depth and villus:crypt ratio showed interaction (P<0.05) where, unfolding the interaction, higher villus height of deviated birds can be observed in the supplementation levels 0%, 0.24% and 0.32% IMP. Unfolding the interaction of the villus:jejunal crypt ratio it can be observed that challenged birds had lower ratios than unchallenged birds at the 0%, 0.17%, 0.24% and 0.32% IMP supplementation levels. An effect of levels (P<0.05) can be observed for heterophyll count, where the highest is the IMP supplementation, the highest is the population of this cell, as well as for sanitary challenge for the count of heterophils, lymphocytes, monocytes, eosinophils, basophils and H:L of broiler chickens supplemented with IMP where the increase in the count of heterophils, eosinophils, basophils and H:L and the decrease of lymphocytes and monocytes were observed. For the count of Eimeria spp. On days 11 and 14 post-infection, an effect can be observed for IMP supplementation levels (P<0.05) where even with the challenged group presenting a greater number of oocysts, a smaller amount can be observed as there was an increase in supplementation levels. Immunoglobulin A (IgA) showed an effect for supplementation levels (P<0.05), where an increase in IgA can be observed for both challenged and unchallenged birds with the increase of IMP supplementation in diet. IMP supplementation in broiler diets positively influenced the performance of challenged birds from 0.24% for WG and 0.12% for FC and oocyst reduction from 0.12% of supplementation, improving the immune system independent of the health challenge. Thus, it can be concluded that the nucleotides AMP, GMP and IMP can provide improvements in zootechnical indices, immune system and intestinal health.

9.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-213882

Resumo

Mycoplasma hyopneumoniae é uma bactéria patogênica ao sistema respiratório de suínos sendo uns dos menores organismos de vida livre devido seu genoma extremamente reduzido. É uma das maiores preocupações para a indústria de sanidade suína, já que as medidas de contenção da infecção levam a altos custos financeiros com aumento de uso de antibióticos e uso de vacinas. Essas medidas são passivas de melhorias vistas à emergência de novos isolados patogênicos e da resistência a antimicrobianos. Nesse sentido um melhor entendimento dos mecanismos moleculares envolvidos na infecção se mostram essenciais para melhor racionalização de intervenções terapêuticas e de prevenção. Nessa tese avaliou-se isolados selvagens de Mycoplasma hyopneumoniae, sendo três capítulos que se complementam, indo da avaliação do genoma completo ao perfil proteômico em condições de crescimento in vitro. Além disso, demonstra-se a capacidade de produção de vesículas extracelulares em isolado J e cepa de campo, característica com potencial a ser explorado em estudos sobre patogenicidade e vacinologia. Foi possível constatar que a patogênese é de fato um processo multifatorial, dependente de variáveis intraespécies, interespécies, interação com comunidade bacteriana local, susceptibilidade do hospedeiro e fatores ambientais. Assim, essa tese servirá como base do estudo desses e de outros isolados em nível do genoma completo e do perfil proteômico diferencial, assim como poderá nortear o desenvolvimento de candidatos vacinais e de novas drogas.


Mycoplasma hyopneumoniae is an etiologial agent to the respiratory system of swine being one of the reduced-genome organisms of free life due to its extremely reduced genome. The biggest concern for the healthcare industry is the fight for debt restraint and rising demand for antibiotics and the use of vaccines. These measures are passive protagonists for the emergence of new pathogens and antimicrobial resistance. This content has not been consistent enough with the proteomic and the proteomic has on the presence of the essential and integrated conservation of the protection. At that time M.hyopneumoniae field strain was evaluated, being three chapters that complement each other, going from the evaluation of the genome to the proteomics analysis in laboratory conditions. In addition, the ability to produce extracellular vesicles was demonstrated, with can be usefull for pathogenicity studies and as delivery systems for vaccines. It was possible to verify that a pathogenic process is multifactorial, depending on intraspecies variables, interspecies, interaction with the local bacterial community, host susceptibility and environmental factors. Thus, this is the basis of studies and other plans at the level of complete genome and differential protein profile, as well as the development of the development of new drugs and vaccines.

10.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-212986

Resumo

FARIAS, D.K. Aspectos soroepidemiológicos e laboratoriais da leptospirose em equinos. 2019. 57 p. Tese (Doutorado) Universidade do Estado de Santa Catarina, Doutorado em Ciência Animal, Lages, 2019. A leptospirose é uma doença infectocontagiosa que acomete os animais domésticos, selvagens e o homem, sendo considerada uma zoonose, com grande impacto na saúde pública mundial. A infecção é causada pela Leptospira spp., por representantes do sorogrupo Leptospira interrogans (L. interrogans). Os equinos podem atuar como reservatórios dessa bactéria, disseminando o agente principalmente pela da urina. Clinicamente, a infecção pode se apresentar de forma aguda ou inaparente, causando abortamentos, uveíte recorrente e nascimento de potros debilitados. A inespecificidade clínica dificulta o diagnóstico diferencial e possivelmente traduz o subdiagnóstico da infecção. Além disso, as rotinas de diagnóstico sorológico geralmente contemplam apenas sorogrupos clássicos ou vacinais. Neste contexto, o objetivo do presente trabalho foi realizar um estudo soroepidemiológico para os principais sorogrupos de Leptospira spp. circulantes no rebanho de equinos de Santa Catarina e avaliar aspectos da patologia clínica (hematologia, bioquímica, fragilidade osmótica e marcadores de metabolismo oxidativo) em animais positivos para leptospirose. Para tal, amostras de sangue das cinco mesorregiões do estado, considerando proporcionalmente a concentração de animais nas mesmas, foram submetidas à análise sorológica por meio do ensaio de soroaglutinação microscópica (MAT), conforme recomendação da Organização Internacional de Epizootias (OIE). Na região Serrana de Santa Catarina foram colhidas amostras de animais sem sintomatologia ou histórico de doença recente, não vacinados, sendo estas amostras submetidas à sorologia para sorovares não convencionais e avaliação de parâmetros hematológicos e bioquímicos. Foram avaliados também os fatores de risco relacionados a doença. Para os animais com histórico de distúrbios reprodutivos foi observada uma prevalência de 22,6% (248/1095) das amostras coletadas, sendo os sorogrupos Icterohaemorrhagiae (24%), Grippotyphosa (20,90%) e Canicola (15,70%) os mais prevalentes. Já nos animais da região Serrana, verificou-se uma prevalência de 45,4% (94/207), sendo os sorovares Bratislava 16,9% (35/207), Icterohaemorrhagiae 10,6% (22/207) e Grippotyphosa 5,31% (11/207) com maior frequência. Demonstrou-se que podem estar relacionados a leptospirose fatores de risco como: sistema de criação (OR=1,27; p<0,05), histórico de doença (OR=2,56; p<0,01) e presença de outras espécies animais na propriedade. As avaliações hematológicas e bioquímicas mostraram que animais positivos para Leptospira spp. não apresentaram prejuízos sistêmicos capazes de serem detectados em exames sanguíneos de rotina. Com base nos achados deste trabalho, podemos concluir que, apesar da alta prevalência da infecção e circulação de sorovares não convencionais nos rebanhos de equinos, a leptospirose é uma doença infectocontagiosa complexa, de difícil diagnóstico e controle, uma vez que se mantém de forma subclínica e encontra uma grande diversidade de reservatórios na natureza. Além disso, a ausência de medidas específicas de controle da infecção remete a sua importância para a saúde pública.


FARIAS, D.K. Seroepidemiological and laboratory aspects of leptospirosis in horses. 2019. 57 p. Tese (Doutorado) Universidade do Estado de Santa Catarina, Doutorado em Ciência Animal, Lages, 2019. Leptospirosis is an infectious disease that affects domestic animals, wild animals and human, considered a zoonosis, with impact on the world public health. The infection is caused by Leptospira spp., by representatives of the serogroup Leptospira interrogans (L. interrogans). Equines can act as reservoirs of this bacterium, disseminating the agent mainly through the urine. Clinically, the infection may present acute or unapparent, causing abortion, recurrent uveitis, and birth of weakened foals. Clinical non-specificity makes differential diagnosis difficult and possibly translates into underdiagnosis of infection. In addition, the serological diagnostic routines generally only contemplate classic or vaccine serogroups. In this context, the objective of the present study was to perform a seroepidemiological study for the main serogroups of Leptospira spp. (hematology, biochemistry, osmotic fragility and markers of oxidative metabolism) in non - vaccinated animals. Blood samples from the five mesoregions of the state, proportionally considering the concentration of animals in them, were submitted to serological analysis through the microscopic serum agglutination test (MAT), as recommended by the International Organization of Epizootics (OIE). In the Serrana region of Santa Catarina, non-vaccinated healthy animal samples were collected, and these samples were submitted to serology for non-conventional serovars and evaluation of hematological and biochemical parameters. Risk factors related to the disease were evaluated. For the animals with a history of reproductive disorders, a prevalence of 22.6% (248/1095) of the collected samples was observed, the serogroups Icterohaemorrhagiae (24%), Grippotyphosa (20.90%) and Canicola (15.70%) the most prevalent. In the non-vaccinated healthy animals of the Serrana region, a prevalence of 45.4% (94/207) was observed, with serovars Bratislava 16.9% (35/207), Icterohaemorrhagiae 10.6% (22/207) and Grippotyphosa 5.31% (11/207) with higher frequency. They have been shown to be related to leptospirosis, risk factors as a system of creation (OR = 1.27, p <0.05), disease history (OR = 2.56, p <0.01) and presence of other animal species on the farm. Hematological and biochemical evaluations showed that animals positive for Leptospira spp. do not present systemic damage capable of being detected in routine blood tests. Based on the findings of this study, we can conclude that in spite of the high prevalence of infection and circulation including non-conventional serovars, leptospirosis is a complex infectious contagious disease, difficult to diagnosis and control, since it remains subclinically and finds a great diversity of reservoirs in nature. In addition, the absence of specific infection control measures points to its importance for public health.

11.
Tese em Inglês | VETTESES | ID: vtt-217483

Resumo

A infecção por Streptococcus agalactiae (GBS) é uma das principais doenças detectadas na piscicultura mundial. Essa bactéria é o principal patógeno de tilápias, uma commodity global do setor aquícola, causando surtos de septicemia e meningoencefalite. Os isolados brasileiros de GBS oriundos de peixes possuem diferentes genótipos quando avaliados pela técnica de MLST, predominando os ST-260, ST-927 e as linhagens não tipáveis. Considerando o relacionamento evolutivo entre esses genótipos e por eles representarem as principais linhagens que infectam peixes no país, se torna necessário entender as características de metabolismo, adaptação e patogenicidade destes grupos genéticos e o seu relacionamento com o hospedeiro aquático. Para avaliar a expressão de transcritos e proteínas dos isolados de GBS, dois experimentos foram conduzidos. O primeiro experimento avaliou o pan-proteoma destes mesmos genótipos, comparou a expressão diferencial de proteínas entre os isolados obtidos de peixes e ser humano usando LC-UDMSE e identificou in silico proteínas antigênicas conservadas que poderiam ser usadas como possíveis alvos para a produção de vacinas. Enquanto que o segundo experimento objetivou avaliar o transcriptoma e o proteoma de uma linhagem de GBS obtido de peixe no Brasil, sendo o experimento conduzido em diferentes temperaturas de cultivo e analisados usando as técnicas de microarranjos e cromatografia líquida associada com espectrometria de massa (LC-HDMSE). No primeiro experimento, um total de 1065 proteínas corresponderam ao pan-proteoma dos isolados de GBS oriundos de peixes, sendo 989 identificadas em todos os isolados simultaneamente (core proteoma), 62 compartilhadas em pelo menos 2 isolados (proteoma acessório) e 14 exclusivamente expressas entre cada amostra. O alto grau de conservação de proteínas entre os isolados avaliados com diferentes STs sugerem que utilização de vacinas monovalentes podem ser efetivas contra as diferentes variantes genéticas circulantes no país. Nós observamos que as proteínas identificadas no pan-proteoma refletem na habilidade adaptativa dos isolados de peixes em responder aos fatores estressantes impostos pelo ambiente aquático e que permitem a sobrevivência e multiplicação bacteriana em peixes. Um total de 215 e 269 proteínas foram up- e down-reguladas, respectivamente, em isolados obtidos de peixes em comparação ao isolado de ser humano. Por fim, independente da similaridade do conteúdo de proteínas, a expressão global de proteínas entre os isolados de GBS obtidos de peixes e ser humano foram diferentes, sugerindo uma distinta adaptação em mamíferos e hospedeiros aquáticos na regulação do proteoma. No segundo experimento, a análise de transcriptoma detectou um total de 107 genes diferencialmente expressos no isolado SA53 a 32 ºC quando comparado com 22 ºC. Enquanto que na análise de proteoma foram detectadas 81 proteínas diferencialmente expressas. Os resultados demonstraram que a temperatura é capaz de regular a expressão diferencial de genes e proteínas, principalmente daquelas envolvidas com a expressão de fatores de virulência, metabolismo, adaptação e resistência ao estresse térmico. Em conjunto os dois experimentos providenciaram novos conhecimentos sobre diversidade, adaptação e virulência de isolados patogênicos de GBS obtidos de peixes através das análises de transcriptoma e proteoma.


Streptococcus agalactiae (GBS) infection is one the main diseases diagnosed in worldwide fish farming. This bacterium is a major pathogen for the Nile tilapia, a global commodity of the aquaculture sector, causing outbreaks of septicemia and meningoencephalitis. The Brazilian GBS fish strains have distinct known genotypes, when evaluated by the MLST technique, predominantly the ST-260, ST-927 and the non-typeable lineage. Considering the evolutionary relationship between these genotypes and for representing the major lineages that infects fish in Brazil, it becomes necessary to understand the specific characteristics of metabolism, adaptation and pathogenicity of these genetic groups as well as their relationships with the aquatic host. In order to evaluate the transcript and protein expression on GBS strains, two experiment trials were performed. The first trial evaluated the pan-proteome of these same genotypes, compared the differential expression of proteins identified between isolates from fish and human using a LC-UDMSE, and identified in silico conserved antigenic proteins that can be used as target in vaccine design. The second trial aimed to evaluate the transcriptome and proteome of a Brazilian fish-adapted GBS strain, being cultured in vitro under different temperatures and analyzed using microarray and liquid chromatography-mass spectrometry label-free shotgun (LC-HDMSE) approaches. In the first trial, a total of 1,065 protein clusters corresponded to pan-proteome of GBS fish strains, being 989 identified in all GBS fish strains (core proteome), 62 shared by at least two strains (accessory proteome) and 14 were exclusively expressed to each strain. The high degree of conservation among strains with different STs suggests that monovalent vaccines may be effective against different genetic variants. We also observed that the identified proteins in pan-proteome reflect the adaptive ability of the GBS fish strains in the response to stress factors imposed by the aquatic environment allowing the bacterial survival and multiplication in the fish host. A total of 215 and 269 proteins from GBS fish strains were up- and down-regulated, respectively, in comparison to human isolate. Regardless of the similarities in protein content, the global protein expression of the GBS human strain was different from the GBS fish strains suggesting distinct adaptations to mammal and fish host at the proteome level. In the second trial, the transcriptomic analysis detected 107 genes as being differentially expressed in SA53 at 32 ºC when compared with 22 ºC. While in proteomic analysis were detected 81 differentially expressed proteins. The results demonstrated that the temperature regulates the differential expression of genes and proteins, mainly those involved with the expression of virulence factors, metabolism, adaptation and bacterial resistance to thermal stress. Together, the two experiments provided news insights into the diversity, adaptation and virulence of fish-pathogenic GBS strains through transcriptomic and proteomic analysis.

12.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-216350

Resumo

O objetivo do experimento foi avaliar se a suplementação de vacas em lactação com produtos contendo diferentes tipos de cepa de Saccharomyces cerevisiae induziria uma resposta diferente no desempenho lactacional, digestibilidade, concentração de niacina plasmática, perda de calor evaporativo e imunidade durante o verão brasileiro (ITU > 68 para 86,4 % do tempo). Trinta vacas da raça Holandês (169 ± 87 DEL) foram alimentadas individualmente em dieta padronizada por duas semanas, correspondendo ao período de covariável, blocadas por paridade antes do tratamento por 56 dias. Os tratamentos foram produtos contendo SC 47 ou NCYC 996 (Phileo Lesaffre) ou Controle (CTL). Os constrastes pré-planejados foram: C1) CTL vs. SC 47 + NCYC 996 e C2) SC 47 vs. NCYC 996. Os produtos de leveduras (10 g/vaca/dia) foram misturados à uma medida de milho moído e fornecido em cima do trato da manhã. As células viáveis e não-viáveis em células/grama foram: : 1,00 x 1010 e 1,03 x 1010 para SC 47 e 1,76 x 1010 e 0,93 x 1010 para NCYC 996, respectivamente. Os produtos de levedura não afetaram a produção de leite (35,8 kg/d), sólidos (1,048 proteína, 0,953 gordura e 1,572 lactose em kg/d) e CMS (19,4 kg/d). A concentração de niacina não diferiu. A temperatura retal às 19 horas tendeu ser menor no tratamento NCYC 996 que no SC 47 (39,1 vs. 39,4°C), e a frequência da temperatura retal 39,2oC foi reduzida às 13 horas (37,5 vs. 48,1%) e às 19 horas (41,8 vs. 58,1%) no tratamento NCYC 996 comparado ao CTL. A frequência respiratória e a taxa de sudorese não mudaram com o tratamento. Os escores de CCS Linear foram 4,94 para o CTL (384.000 células/mL), 4,17 para SC 47 (225.000 células /mL) e 4,37 para NCYC 996 (258.000 células /mL) (P < 0,01 para C1). A resposta imune celular foi avaliada nos dias -1, 7 e 15 e a resposta humoral nos dias - 1, 7 e 23 relativos à vacinação com vacina anti-rábica inativada no dia 35. O título de anticorpos antirrábicos no soro e Interleucina-4 (IL-4) aumentaram e Interferon gama (IFN) foi reduzido em resposta à vacinação. Os monócitos do sangue foram reduzidos por NCYC 996 comparado ao SC 47 no dia -1 e aumentaram no dia 15. Comparado ao SC47, NCYC 996 também tendeu aumentar IL-4 no dia -1 e reduziu IL-4 no dia 15. Os títulos de anticorpos anti-rábicos e IFN não foram afetados pelo tratamento. A digestibilidade aparente do trato total dos nutrientes e a excreção diária de alantoína não tiveram diferença. Os produtos de leveduras aumentaram o tempo de ingestão por dia e por unidade de CMS e o tempo de duração de refeição relativo ao CTL, com similar CMS. As vacas no tratamento NCYC 996 apresentaram seleção a favor de partículas > 19 mm a noite (118%) e SC 47 induziu rejeição de partículas longas. As concentrações de glicose e N-ureico do plasma não diferiram entre os tratamentos. A suplementação com produtos de levedura não teve impacto no desempenho animal e digestibilidade mas reduziu a CCS do leite. O efeito na resposta imune celular e termorregulação diferiram entre os produtos de levedura avaliados. A suplementação com levedura tendeu aumentar IL-4 após a vacinação, tendeu reduzir os monócitos do sangue antes da vacinação e reduziu a CCS do leite.


This experiment evaluated if the supplementation of lactating dairy cows with products containing different strains of live Saccharomyces cerevisiae would induce differential response in lactation performance, digestibility, plasma niacin concentration, evaporative heat loss, and immunity during Brazilian summer (THI > 68 for 86.4% of time). Thirty Holsteins (169 ± 87 DIM) were individually fed on TMR for a 2-week covariate period and then paired blocked before assignment to a treatment for 56 d. Treatments were products containing strains SC 47 or NCYC 996 (Phileo Lesaffre) or Control (CTL). Pre-planned contrasts were: C1) CTL vs. SC 47 + NCYC 996 and C2) SC 47 vs. NCYC 996. Yeast products (10 g/cow/d) were mixed to a cup of ground corn and top dressed to the TMR in the morning. Viable and non-viable cells/g were: 1.00 x 1010 and 1.03 x 1010 for SC 47 and 1.76 x 1010 and 0.93 x 1010 for NCYC 996, respectively. Yeast products did not affect the yields of milk (35.8 kg/d) and solids (1.048 kg/d protein, 0.953 kg/d fat and 1.572 lactose) and DMI (19.4 kg/d). Plasma niacin concentration did not differ. The rectal temperature at 1900 h tended to be lower (39.1 vs. 39.4oC) on NCYC 996 relative to SC 47 and the frequency of rectal temperature 39.2oC was reduced at 1300 h (37.5 vs. 48.1%) and 1900 h (41.8 vs. 58.1%) on NCYC 996 relative to CTL. The respiratory frequency and sweating rate did not change. The Linear SCC scores were 4.94 for CTL (384,000 cells/mL), 4.17 for SC 47 (225,000 cells/mL), and 4.37 for NCYC 996 (258,000 cells/mL) (P < 0.01 for C1). The cell-mediated immune response was evaluated on days - 1, 7, and 15 and the humoral response on days - 1, 7, and 23 relative to vaccination with an inactivated rabies vaccine on d 35. The titer of rabies antibodies in serum and Interleukin-4 (IL-4) were increased and Interferon Gamma (IFN) was reduced in response to vaccination. Monocytes in blood were reduced by NCYC 996 relative to SC 47 on d - 1 and were increased on d 15. Compared to SC 47, NCYC 996 also tended to increase IL-4 on d - 1 and reduced IL-4 on d 15. The titer of rabies antibodies and IFN were not affected by treatment. The total tract apparent digestibility of nutrients and the daily urinary allantoin excretion did not differ. Yeast products increased ingestion time per day and per unit of DMI and meal duration relative to CTL, at similar DMI. Cows on NCYC 996 showed selective sorting behavior in favor of feed particles > 19 mm at night and SC 47 induced rejection of long feed particles. Glucose and urea-N concentrations in plasma did not differ. Yeast supplementation had no impact on animal performance and diet digestibility, but reduced milk SCC. The effect on cell-mediated immune response and thermoregulation differed between the yeast products evaluated. Yeast supplementation tended to increase IL-4 after vaccination, tended to reduce blood monocytes before vaccination, and reduced milk SCC.

13.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-206399

Resumo

A Bronquite Infecciosa das Galinhas (BIG), é uma doença causada por um vírus RNA de fita simples pertencente a Família coronaviridae, do gênero Gammacoranavirus.. A BIG é uma doença de alta importância econômica para a avicultura mundial, não só por causar prejuízos aos plantéis acometidos pela doença como também por ser diagnóstico diferencial de diversas patologias importantes na sanidade avícola. Os objetivos da presente pesquisa foi desenvolver uma técnica de RT-PCR RFLP capaz de detectar e discriminar com segurança as cepas do vBIG do sorotipo massachusetts e BR a partir de tecidos da traqueia, rim e intestino em granjas de frango de corte e postura no Estado do Rio de Janeiro. Neste estudo, foram coletadas 117 amostras de Intestino, rim e/ou traqueia de um total de 50 aves provenientes de 4 granjas (três granjas de corte e uma granja de postura) no estado do Rio de Janeiro. O RNA total foi extraído de todas as amostras e submetidos a uma reação de transcrição reversa, para realizar a síntese do cDNA. As amostras de cDNA foram submetidas a técnica de RT-qPCR. Constatou-se que 92% das aves (n = 46/50) foram positivas em pelo menos um dos órgãos para o vírus da bronquite das galinhas (vBIG). A técnica de RT-PCR RFLP desenvolvido por esse trabalho foi capaz de detectar uma frequência de 94,64% (n = 53/56) das amostras pertencentes ao sorotipo BR-I, 3,57% (n = 2/56) das amostras apresentaram fragmentos com padrão semelhante ao esperado do Sorotipo massachusetts e 1,78%(1/56) apresentou padrão para ambos os sorotipos (Massachusettsachusetts e BR). Não houve diferença significativa entre a frequência da detecção molecular do vBIG nos tecidos da traquéia, rim e intestino de frangos de corte e galinhas de postura de granjas no estado do Rio de Janeiro. A técnica de RT-PCR RFLP foi capaz de detectar e diferenciar com segurança os sorotipos massachusetts e BR.A alta frequência do sorotipo BR demonstra que apesar de vacinadas, as aves desenvolveram a doença, sugerindo, que um novo protocolo vacinal deva ser abordado, já que a maioria das cepas encontradas pertencem a um sorotipo geneticamente distinto.


The avian infectious bronchitis (AIB) is a disease caused by a single-stranded RNA virus pertaining to the coronaviridae family of the Gammacoranavirus genera. AIB is a disease of great economic significance to aviculture worldwide, not only because of the injury it causes to the breeders, but also because it is a differential diagnosis for several important pathologies that may affect poultry. The goals of the present research were to develop a RT-PCR RFLP technique capable of safely detecting and discriminating the strains of the IBV of themassachusetts and BR serotypes from the trachea, kidney and intestines issues in poultry farms of broilers and layers in the estate of Rio de Janeiro. In this study, 117 samples of intestines, kidneys and/or tracheae were collected from a total of 50 birds originating from 4 farms (three broiler farms and one layer farm) in the estate of Rio de Janeiro. The total RNA was extracted from all the samples and subjected to a reverse transcription process for the cDNA synthesis. The cDNA samples were subjected to the RT-qPCR technique. It was found that 92% of the birds (n= 46/50) were positive in at least one of the organs for the chicken bronchitis virus (vBIG). The RT-PCR RFLP techinique developed in this work was able to detect a frequency of 94,64% (n= 53/56) of the samples belonging to the BR-I serotype, 3,7% (n= 2/56) of the samples showed fragments with patterns similar to what is expected from themassachusetts Serotype and 1,78% (n= 1/56) showed patterns from both serotypes (Massachusettsachusetts and BR). There was no significant difference in the frequency of molecular detection of vBIG in the tissues of the trachea, kidney and intestines of the broiler and layer poultries from farms in the estate of Rio de Janeiro. The RT-PCR RFLP technique was able to safely detect and distinguish themassachusetts and BR serotypes. The high frequency of the BR serotype demonstrates that, although vaccinated, the birds developed the disease, indicating that a new vaccine protocol must be addressed, since the majority of the strains found belong to a genetically distinct serotype.

14.
Pesqui. vet. bras ; 31(1): 23-30, 2011.
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-1005

Resumo

Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) is an important pathogen of cattle in South America and efforts have been made to produce safer and more effective vaccines. In addition to afford protection, herpesvirus vaccines should allow serological differentiation of vaccinated from naturally, latently infected animals. We previously reported the construction and characterization in vitro of a double mutant BoHV-5 (BoHV-5gE/TK􀀀Δ) lacking the genes encoding thymidine kinase (tk) for attenuation, and glycoprotein E (gE) as the antigenic marker, as a vaccine candidate strain (Brum et al. 2010a). The present article reports an investigation on the attenuation and immunogenicity of this recombinant in calves. In a first experiment, 80 to 90-day-old seronegative calves (n=6) inoculated intranasally with the recombinant (titer of 107.5TCID50) shed virus in low to moderate titers in nasal secretions for up to 6 days, yet did not develop any respiratory, systemic or neurological signs of infection. At day 30 post-infection (pi) all calves had BoHV-5 specific neutralizing (VN) antibodies in titers of 4 to 8 and were negative for anti-gE antibodies in a commercial ELISA test. Administration of dexamethasone (0.1mg/kg/day during 5 days) to four of these calves at day 42 pi did not result in virus shedding or increase in VN titers, indicating lack of viral reactivation. Secondly, a group of 8-month-old calves (n=9) vaccinated intramuscularly (IM) with the recombinant virus (107.5TCID50/animal) did not shed virus in nasal secretions, remained healthy and developed VN titers from 2 to 8 at day 42 post-vaccination (pv), remaining negative for gE antibodies. Lastly, 21 calves (around 10 months old) maintained under field conditions were vaccinated IM with the recombinant virus (titer of 107.3TCID50). All vaccinated animals developed VN titers from 2 to 16 at day 30 pv. A boost vaccination performed at day 240 pv resulted in a rapid and strong anamnestic antibody response, with VN titers reaching from 16 to 256 at day 14 post-booster. Again, serum samples remained negative for gE antibodies. Selected serum samples from vaccinated animals showed a broad VN activity against nine BoHV-5 and eight BoHV-1 field isolates. These results show that the recombinant virus is attenuated, immunogenic for calves and induces an antibody response differentiable from that induced by natural infection. Thus, the recombinant BoHV-5gE/TKΔ is an adequate candidate strain for a modified live vaccine.(AU)


Assuntos
Animais , Herpesvirus Bovino 5/fisiologia , Timidina Quinase , Herpesvirus Bovino 5/genética , Glicoproteínas/síntese química
15.
Pesqui. vet. bras ; 30(1): 57-62, Jan. 2010. graf, tab
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-7946

Resumo

The immunogenicity of an inactivated, experimental vaccine based on a bovine herpesvirus type 5 strain defective in thymidine kinase and glycoprotein E (BoHV-5 gE/TKΔ) was evaluated in cattle and the results were compared with a vaccine containing the parental BoHV-5 strain (SV507/99). To formulate the vaccines, each virus (wildtype SV507/99 and BoHV-5 gE/TK∆) was multiplied in cell culture and inactivated with binary ethyleneimine (BEI). Each vaccine dose contained approximately of 107.5 TCID50 of inactivated virus mixed with an oil-based adjuvant (46:54). Forty calves, 6 to 9-months-old, were allocated into two groups of 20 animals each and vaccinated twice (days 0 and 22pv) by the subcutaneous route with either vaccine. Serum samples collected at day 0 and at different intervals after vaccination were tested for virus neutralizing (VN) antibodies against the parental virus and against heterologous BoHV-5 and BoHV-1 isolates. The VN assays demonstrated seroconversion to the respective homologous viruses in all vaccinated animals after the second vaccine dose (mean titers of 17.5 for the wildtype vaccine; 24.1 for the recombinant virus). All animals remained reagents up to day 116 pv, yet showing a gradual reduction in VN titers. Animals from both vaccine groups reacted in similar VN titers to different BoHV-1 and BoHV-5 isolates, yet the magnitude of serological response of both groups was higher against BoHV-5 field isolates. Calves vaccinated with the recombinant virus did not develop antibodies to gE as verified by negative results in a gE-specific ELISA, what would allow serological differentiation from naturally infected animals. Taken together, these results indicate that inactivated antigens of BoHV-5 gE/TK recombinant virus induced an adequate serological response against BoHV-5 and BoHV-1 and thus can be used as an alternative, differential vaccine candidate.(AU)


A imunogenicidade de vacina experimental inativada, produzida com uma cepa do herpesvírus bovino tipo 5 defectiva nos genes da timidina quinase e glicoproteína E (BoHV-5 gE/TKΔ) foi avaliada em bovinos e o resultado foi comparado com a resposta induzida pela cepa parental do BoHV-5 (SV507/99). Para a formulação da vacina, cultivos de células infectados com cada um dos vírus (SV507/99 ou BoHV-5 gE/TKΔ) foram inativados com etilenamina binária. Cada dose de vacina continha aproximadamente 107,5 TCID50 de um dos vírus inativados emulsionado em adjuvante oleoso (46:54). Quarenta bezerros de raças cruzadas, com idade entre seis a nove meses, foram alocados em dois grupos de 20 animais cada e vacinados duas vezes (dia 0 e 22 pv) pela via subcutânea com uma das vacinas. Amostras de soro foram coletadas no dia 0 e a vários intervalos após vacinação para a pesquisa de anticorpos neutralizantes frente ao vírus homólogo ou frente a isolados de BoHV-5 e BoHV-1. Os testes de soroneutralização (SN) demonstraram que todos os animais soroconverteram após a segunda dose da vacina (títulos médios de 17,5 para o grupo SV507/99; 24,1 para o grupo BoHV-5 gE/TKΔ). Todos os animais mantiveram níveis de anticorpos neutralizantes até o dia 116 pv, no entanto foi observada uma redução gradual no títulos. A sorologia cruzada com amostras heterólogas do BoHV-5 e BoHV-1 indicou que ambos os grupos vacinais reagiram em níveis similares frente ao mesmo vírus, no entanto a magnitude da resposta sorológica foi maior frente a amostras de BoHV-5. Os animais vacinados com a cepa recombinante não desenvolveram anticorpos contra a gE detectáveis por um ELISA específico, o que permitiria a sua diferenciação sorológica de animais infectados naturalmente. Esses resultados demonstram que a vacina contendo antígenos inativados do vírus recombinante BoHV-5 gE/TKΔ induziu resposta sorológica em níveis satisfatórios, constituindo-se, assim, em alternativa a cepa vacinal diferencial.(AU)


Assuntos
Animais , Bovinos , Vacinas Sintéticas , Vacinas Sintéticas/uso terapêutico , Infecções por Herpesviridae/prevenção & controle , Infecções por Herpesviridae/veterinária , Meningoencefalite , Encefalite Viral , Herpesvirus Bovino 5 , Vacinação/veterinária , Bovinos
16.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-202521

Resumo

Vacinas com marcadores antigênicos também denominadas vacinas diferenciais tem sido amplamente utilizadas no controle e prevenção da infecção pelo herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1). Com este objetivo, uma amostra brasileira de BoHV-1 (SV56/90) foi submetida à deleção do gene da glicoproteína E (gE) para potencial uso em vacinas. A deleção do gene da gE foi realizada por recombinação homóloga, sendo o gene da gE substituído por um marcador para seleção (green fluorescent protein, GFP). Após co-transfecção de plasmídio de deleção e DNA genômico viral em células MDBK, três recombinantes expressando a GFP foram obtidos (e denominados BoHV-1gE). Os vírus recombinantes produziram placas menores em células MDBK, porém com cinética e em títulos semelhantes ao vírus parental, demonstrando que a deleção da gE não afetou negativamente a sua capacidade replicativa in vitro. Treze bezerros inoculados pela via intramuscular (IM) com o recombinante BoHV-1gE desenvolveram anticorpos neutralizantes (títulos entre 2 e 16), demonstrando a sua capacidade replicativa e imunogênica in vivo. Além disso, a resposta sorológica induzida pelo recombinante pode ser diferenciada daquela induzida pelo vírus parental pelo uso de um teste ELISA específico para anticorpos anti-gE. Posteriormente, o vírus recombinante foi submetido a testes de segurança/atenuação, de imunogenicidade e de proteção frente a desafio in vivo. No teste de segurança, cinco bezerros de três meses de idade foram inoculados pela via IM com o recombinante em uma dose aproximadamente 10-100 vezes a dose contida em vacinas comerciais (108,5TCID50 por animal). Os animais inoculados permaneceram saudáveis e não excretaram o vírus, confirmado pela ausência de vírus em secreções nasais e pela ausência de soroconversão em bezerros sentinelas mantidos em contato. O vírus recombinante também não foi excretado após administração de dexametasona (dia 42pi), demonstrando a incapacidade de reativar e/ou ser excretado após tentativa de reativação de infecção latente. No teste de imunogenicidade, bezerros com 8 a 10 meses de idade foram vacinados uma vez pela via IM (grupo I, n=8) ou subcutânea (SC, grupo II, n=9) com o recombinante BoHV-gE viável, ou duas vezes (30 dias de intervalo) com o vírus inativado, conjugado com hidróxido de alumínio (grupo IV, n= 13) ou com MontanideTM Gel 1 (Seppic - grupo V, n=14). Como controle, três animais (grupo III) foram vacinados com o vírus parental (uma dose pela via IM). Todos os bezerros vacinados com o vírus viável desenvolveram anticorpos neutralizantes em títulos de 2 a 8 (grupo I, GMT: 2; grupo II, GMT: 1,65; grupo III, GMT: 1,65) no dia 42pv. Os demais animais desenvolveram títulos de 2 a 16 (grupo IV, GMT: 2,45) e de 2 a 128 (grupo V, GMT: 3,9). Todos os animais vacinados com o BoHV-1gE permaneceram negativos no teste ELISA anti-gE. No teste de vacinação com desafio, seis bezerros (3-4 meses de idade) foram vacinados com o recombinante BoHV-1gE viável na dose de 107,3TCID50/animal e quatro foram mantidos como controle. No dia 47pv, os animais foram submetidos a desafio com uma cepa heteróloga do BoHV-1 (dose de 107,5TCID50/animal) pela via intranasal. Os animais vacinados desenvolveram sinais clínicos mais brandos e por período mais curto e, excretaram vírus em menores títulos e por menos tempo do que os controles. Esses resultados demonstram que o vírus recombinante BoHV-1gE é seguro/atenuado e imunogênico para bezerros, tanto na forma replicativa quanto na forma inativada. Além disso, induz resposta sorológica capaz de ser diferenciada daquela induzida pelo vírus parental. Sendo assim, o BoHV-1gE apresenta propriedades adequadas para ser usado em formulações vacinais.


Vaccines with antigenic markers also known as differential vaccines have been largely used for control and prevention of bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) infection. With this purpose, a Brazilian BoHV-1 isolate (SV56/90) was submitted to deletion of the glycoprotein E (gE) gene for a potential use in vaccines. BoHV-1 gE gene deletion was performed by homologous recombination, being the gE gene replaced by the green fluorescent protein (GFP) gene for selection. Upon co-transfection of MDBK cells with genomic viral DNA plus the GFP-bearing gE-deletion plasmid, three fluorescent recombinant clones were obtained (and nominated as BoHV-1gE). The recombinant viruses formed smaller plaques in MDBK cells yet with similar kinetics and grew to similar titers to those of the parental virus, showing that gE deletion had no deleterious effect on the replication efficiency in vitro. Thirteen calves inoculated intramuscularly (IM) with the recombinant BoHV-1gE developed virus neutralizing (VN) antibodies at day 42pi (titers from 2 to 16), demonstrating his ability to replicate and to induce a serological response in vivo. Furthermore, the serological response induced by the recombinant virus could be differentiated from that induced by wild-type BoHV-1 by the use of an anti-gE antibody ELISA kit. Experiments to determine the safety, immunogenicity and protection were performed with the BoHV-1gE candidate vaccine strain. In the safety test, five three months-old calves were inoculated with approximately 10-100 times the usual vaccine dose (108.5TCID50 per animal). The inoculated animals remained healthy and did not shed virus, confirmed by the absence of virus in nasal secretions and lack of seroconversion by sentinel calves kept in contact. In addition, the recombinant virus was not shed upon dexamethasone administration (at day 42pi) showing the inability of reactivation and/or shedding after attempts of reactivation of latent infection. In the immunogenicity test, calves (8 to 10 months-old) were vaccinated once IM (group I, n=8) or subcutaneously (group II, n=9) with live BoHV-1gE or twice (30 days apart) with inactivated virus plus aluminum hydroxide (group IV, n=13) or MontanideTM Gel 1 (Seppic - group V, n=14). As controls, three animals (group III) were vaccinated once IM with the parental virus. All calves vaccinated with live virus developed VN titers of 2 to 8 (group I, GMT: 2; group II, GMT: 1.65; group III, GMT: 1.65) at day 42pv. Animals of groups IV and V developed VN titers of 2 to 16 (GMT: 2.45) and 2 to 128 (GMT: 3.9), respectively. All calves vaccinated with the BoHV-1gE remained negative in the gE ELISA. In a vaccination-challenge experiment, six calves (three to four-months-old) were vaccinated with live virus (107.3TCID50/animal) and four calves were kept as controls. Forty-seven days after vaccination, the calves were challenged with a heterologous BoHV-1 strain (107.5TCID50/animal) by the intranasal route. Vaccinated animals developed only mild and transient nasal signs comparing with the control calves. Virus shedding by vaccinated animals was also significantly reduced compared to controls. These results demonstrate that the recombinant BoHV-1gE is safe/attenuated, immunogenic for calves both in a live or inactivated, adjuvanted vaccine formulation. Moreover, it induces a humoral response that can be distinguished from that induced by the wild type virus. Thus, the recombinant BoHV-1gE presents suitable properties to be used in vaccine formulations.

17.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-203056

Resumo

A formulação de vacinas efetivas frequentemente requer a adição de adjuvantes capazes de otimizar as respostas imunes humoral e celular. Com o objetivo principal de contribuir para o desenvolvimento de novos adjuvantes, este trabalho foi desenvolvido buscando aprofundar o conhecimento do mecanismo de ação imunoadjuvante de preparações de saponinas de Quillaja brasiliensis e suas formulações em complexos imunoestimulantes do tipo ISCOM. Como a toxicidade das saponinas é um fator crítico para seu uso em preparações vacinais, inicialmente foram realizados ensaios visando comparar a toxicidade in vitro e in vivo de saponinas extraídas de Quillaja brasiliensis com saponinas de ação imunoestimulante reconhecidas, extraídas de Quillaja saponaria (Quil A). O potencial imunoadjuvante das saponinas solúveis de Q. brasiliensis foi avaliado utilizando preparações com dois antígenos: ovalbumina (OVA) e vírus da diarreia viral bovina (BVDV). Numa etapa seguinte, a atividade imunoadjuvante de ISCOMs preparados com saponinas de Q. brasiliensis foram avaliadas em duas vias de administração. O potencial imunomodulador dessas saponinas foi verificado em experimentos de recrutamento celular in vivo e expressão de genes relacionados ao sistema imune. Os resultados mostraram que saponinas de Q. brasiliensis são menos tóxicas que as de Quil A e apresentam atividade adjuvante similar, caracterizada por um perfil Th1/Th2 balanceado. Q. brasiliensis promoveu uma forte resposta imune celular do tipo Th1 caracterizada por uma robusta reação de hipersensibilidade celular tardia (DTH) e pela produção de IFN- e IL-2. A resposta imune induzida pelos ISCOMs produzidos a partir de saponinas de Q. brasiliensis foram superiores às respostas induzidas pelas saponinas solúveis. Os testes in vivo mostraram que as saponinas de Q. brasiliensis promovem um ambiente imunocompetente no local da inoculação e nos linfonodos drenantes. Esse ambiente foi caracterizado pelo intenso influxo celular (neutrófilos, células NK, células dendríticas, linfócitos T e B), além da expressão diferencial de genes relacionados à ativação do sistema imune. Em suma, os resultados mostraram que saponinas de Q. brasiliensis são seguras e seus potencial adjuvante foi equivalente a saponinas com ação imunoadjuvante conhecida de Q. saponaria.


Effective vaccine formulations frequently require addition of adjuvants able to optimize the cellular and humoral immune responses. With the goal to contribute to the development of new classes of adjuvants, this work was developed in order to achieve deep knowledge on the imunoadjuvant mode of action for Quillaja brasiliensis saponins incorporated into immunostimulant complex (ISCOM). The toxicity of saponins is a critical factor for its usage as vaccine preparations. At first, in vivo and in vivo citoxicity assays were carried out to compare to the effects between saponins extracted from Quillaja brasiliensis and the immunostimulant saponins already known from Quillaja saponaria (Quil A). Imunoadjuvant potential of soluble saponins from Q. brasilienis was evaluated using preparations of two antigens: ovoalbumin (OVA) and bovine viral diarrhea (BVD). As a next step, imunoadjuvant activity of ISCOMS prepared with Q. brasiliensis saponins was evaluated using two routes of administration. The immunomodulatory potential of these saponins was tested during in vivo cell recruitment assays and gene expression related to immune system. Our results demonstrated that Q. brasilienis saponins are less toxic than those from Quil A and presenting similar adjuvant activity, characterized by a Th1/Th2 balance profile. Q.brasiliensis induced a strong Th1 cell-mediated immune responses indicated by a robust delayed type hypersensitivity (DTH) as well as IFN- and IL-2 production. The immune response induced by ISCOMs from Q. brasiliensis saponins was higher than the one induced by soluble saponins. In vivo experiments indicated that saponins from Q. brasiliensis generate an immunocompetent environment at the injection site and draining lymph nodes. This environment was characterized by an intense cell influx (neutrophils, NK cells, dendritic cells, B and T cells) as well as differential gene expression related to immune system activation. In essence, the results showed that saponins from are safe and their adjuvant potential was equivalent to saponins with imunoadjuvant activity of Q. saponaria.

18.
Pesqui. vet. bras ; 29(7): 545-551, 2009. graf, tab
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-571

Resumo

Bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) is recognized as a major cause of economic losses in cattle. Vaccination has been widely applied to minimize losses induced by BoHV-1 infections. We have previously reported the development of a differential BoHV-1 vaccine, based on a recombinant glycoprotein E (gE)-deleted virus (265gE-). In present paper the efficacy of such recombinant was evaluated as an inactivated vaccine. Five BoHV-1 seronegative calves were vaccinated intramuscularly on day 0 and boostered 30 days later with an inactivated, oil adjuvanted vaccine containing an antigenic mass equivalent to 10(7.0) fifty per cent cell culture infectious doses (CCID50) of 265gE-. Three calves were kept as non vaccinated controls. On day 60 post vaccination both vaccinated and controls were challenged with the virulent parental strain. No clinical signs or adverse effects were seen after or during vaccination. After challenge, 2/5 vaccinated calves showed mild clinical signs of infection, whereas all non vaccinated controls displayed intense rhinotracheitis and shed virus for longer and to higher titres than vaccinated calves. Serological responses were detected in all vaccinated animals after the second dose of vaccine, but not on control calves. Following corticosteroid administration in attempting to induce reactivation of the latent infection, no clinical signs were observed in vaccinated calves, whereas non vaccinated controls showed clinical signs of respiratory disease. In view of its immunogenicity and protective effect upon challenge with a virulent BoHV-1, the oil adjuvanted preparation with the inactivated 265gE- recombinant was shown to be suitable for use as a vaccine.(AU)


O Herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) é reconhecido como um importante agente de perdas econômicas em bovinos. Vacinação tem sido amplamente empregada para minimizar as perdas conseqüentes a infecções com o BoHV-1. Reportamos previamente o desenvolvimento de uma vacina diferencial para BoHV-1, baseada em um recombinante do qual a glicoproteína gE (gE) foi deletada (265gE-). No presente trabalho foi realizada a avaliação da eficácia de tal recombinante como vacina inativada. Cinco bovinos soronegativos para BoHV-1 foram vacinadas por via intramuscular no dia 0 e revacinadas 30 dias após com uma vacina inativada com adjuvante oleoso, contendo massa antigênica equivalente a 10(7.0) doses infectantes para 50 por cento dos cultivos celulares (DICC50) de 265gE-. Três animais foram mantidos como controles não vacinados. No dia 60 pós-vacinação, os animais vacinados e controles foram desafiados com a amostra virulenta parental. Nenhum sinal clínico ou efeito adverso foi observado após ou durante a vacinação. Após o desafio, 2 dos 5 animais vacinados apresentaram sinais leves de infecção, enquanto que todos os animais não vacinados apresentaram intensa rinotraqueíte e disseminaram vírus por mais tempo e em títulos mais elevados do que os animais vacinados. Respostas sorológicas foram detectadas em todos os animais vacinados depois da segunda dose de vacina, mas não nos animais do grupo controle. Após a administração de corticosteróide visando a reativação de infecções latentes, não foram observados sinais clínicos em nenhum dos 5 animais vacinados, enquanto os animais não vacinados apresentaram sinais leves de doença respiratória. Em vista de sua imunogenicidade e efeito protetor frente ao desafio com BoHV-1 virulento, a preparação oleosa com o recombinante 265gE- inativado foi demonstrada ser adequada para uso como vacina.(AU)


Assuntos
Animais , Bovinos , Vacinas Sintéticas , Herpesvirus Bovino 1/imunologia , Herpesvirus Bovino 1/isolamento & purificação , Glicoproteínas/isolamento & purificação , Corticosteroides/uso terapêutico
19.
São Paulo; s.n; 11/04/2012.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-6868

Resumo

Uma vacina liofilizada, em comparação a uma líquida, possui inúmeras vantagens, tais como: a melhora na estabilidade do produto às variações de temperatura aumentando sua vida de prateleira, possibilitando uma melhor logística do produto aos locais onde o acesso à rede refrigerada é difícil. O presente trabalho visou investigar as estratégias do processo para a conservação da potência da vacina rábica de uso veterinário por liofilização. O material testado foi a vacina rábica inativada (VRI). Ao total foram testados 13 excipientes com três concentrações diferentes. O processo de triagem utilizado para a escolha das melhores formulações (VRI + excipiente) foi liofilização em microplacas próprias para cultivo celular adaptadas ao liofilizador, sendo posteriormente verificada a preservação da antigenicidade da vacina por meio do teste de ELISA. A análise estatística foi realizada no programa SPSS® v.17, aplicando análise de regressão para dados categóricos. A arginina 0,5%, o PEG 3350 0,5%, a sacarose 2%, a maltose 1% e a trealose 1% foram os que deram melhores resultados, um alto \"score\" de antigenicidade em comparação à vacina liofilizada sem adição de excipientes. A temperatura de colapso da VRI e de suas diversas formulações foi determinada por meio de um microscópio acoplado a um módulo de liofilização. A análise térmica foi realizada em Calorimetria Exploratória Diferencial (Differential Scanning Calorimetry - DSC). Realizou-se os seguintes testes para avaliação da VRI liofilizada em frasco ampola: microscopia eletrônica de varredura (MEV) para análise da estrutura da pastilha e o antibody-binding test (ABT) - Teste de ligação do anticorpo modificado para determinação da potência da VRI e suas formulações. A umidade residual da VRI com PEG3350 0,5% liofilizada foi determinada em temperatura constante de 100ºC resultou em 1,60%. A pastilha da vacina rábica + PEG 3350 0,5% liofilizada em frasco ampola apresentou a elegância farmacêutica esperada de um produto liofilizado


A lyophilized vaccine, compared to a liquid form, has many advantages, such as the improvement in product stability to changes in temperature by increasing its shelf life, allowing better logistics for product to locations where access to chill is difficult to achieve. This work has investigated the strategies of the process for the conservation of the potency of rabies vaccine for veterinary use by lyophilization. The material tested is an inactivated rabies vaccine (VRI). Altogether 13 excipients were tested with three different concentrations. The screening process used to choose best formulation (s) (VRI + excipient) was lyophilization in microplates suitable for cell culture adapted to the lyophilizer, and subsequently verified the preservation of the antigenicity of the vaccine through the ELISA test. Statistical analysis was performed using SPSS® v.17, applying regression analysis for categorical data. Arginine 0.5%, PEG 3350 0.5%, Sucrose 2%, Maltose 1% and Trehalose 1% were those that gave better results, a high score of antigenicity compared to the lyophilized vaccine with no added excipients. The temperature of collapse of VRI and its various formulations was determined using a microscope coupled to a module of lyophilization. Thermal analysis was performed in Differential Scanning Calorimetry (DSC). The following tests were used for evaluation of freeze-dried VRI: Scanning electron microscopy (SEM), Antibody-binding test (ABT). The residual moisture of lyophilized samples were determined in the moisture analyzer at constant temperature of 100 °C and resulted in 1.60%. The cake of lyophilized rabies vaccine + 0.5% PEG 3350 in vial showed the pharmaceutical elegance expected of a lyophilized product

20.
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-444166

Resumo

Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) is a important cause of viral encephalitis in cattle in South America. Within the framework of developing a differential vaccine against BoHV-5, a deletion mutant was constructed based on a Brazilian BoHV-5 isolate. The target of the deletions were genes that code proteins implicated in the neurovirulence of BoHV-5, the glycoprotein I (gI), glycoprotein E (gE) and membrane protein US9. To construct the deletion mutant of BoHV-5, the flanking regions of all three genes were cloned in a prokaryotic plasmid. This deletion fragment was co-transfected with the viral DNA into bovine cells. Identification of deletion mutants was performed by immunostaining with an anti-gE monoclonal antibody. One of the gE negative viral populations found was purified, amplified and further examined by restriction endonuclesase analysis of its genomic DNA. The plaque sizes and penetration kinetics of the deletion mutant and wild type viruses were compared. The plaque sizes of the deletion mutant were significantly smaller than those of the parental strain (p = 0.05), but no statistical differences were observed in penetration kinetics. The results indicate that the gI/gE/US9 deletion mutant of BoHV-5 may have a reduced virulence in the host and is still viable enough to be a good candidate for the development of a BoHV-5 vaccine.


O herpesvírus bovino 5 (BoHV-5) é uma causa importante de encefalite viral em bovinos na América do Sul. Buscando o desenvolvimento de uma vacina diferencial contra o BoHV-5, um mutante deletado foi construído com base em um isolado brasileiro deste vírus. O alvo das deleções foram genes que codificam proteínas implicadas na neurovirulência do BoHV-5, a glicoproteína I (gI), a glicoproteína E (gE) e a proteína de membrana US9. Para construir o mutante deletado de BoHV-5, as regiões flanqueadoras dos três genes foram clonadas em um plasmídeo procarioto. Este fragmento de deleção foi co-transfectado com o DNA viral em células de bovinos. A identificação dos mutantes deletados foi feita por meio da técnica de imunoperoxidase com um anticorpo monoclonal anti-gE. Uma das populacões virais gE negativas encontradas foi purificada, amplificada e seu genoma foi examinado por análise de restrição enzimática. Os tamanhos de placas virais e taxas de penetração do vírus mutante foram determinados e comparados com os do vírus selvagem. As placas virais do vírus mutante deletado foram significativamente menores do que as do vírus selvagem (p = 0,05), mas não foram encontradas diferenças significativas quando comparadas as taxas de penetração dos dois vírus. Estes resultados indicam que o vírus mutante deletado gI/gE/US9 de BoHV-5 pode apresentar virulência reduzida e é viável o suficiente para ser um bom candidato para o desenvolvimento de uma vacina contra o BoHV-5.

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