Use of antioxidants and time of cold storage: effects over viability parameters and enzymatic levels in semen of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum, 1792)

Abstract The cold storage of milt implies potentials alterations in its quality because the storage generates as main process, free radicals that produce spermatozoa membrane lipids damage with the consequent motility and fertilising capacity disruptions. To decrease the damage generated by free radicals the cells have antioxidant defences (proteins, enzymes, and low molecular weight substances). The objective of the present study evaluated the time storage effect and different antioxidants prepared in spermatic diluents on sperm viability of O. mykiss milt stored at 4°C. The two-way ANOVA denoted that the time storage and antioxidant influence have significant effects separated or combined on viability parameters (sperm motility and viability, proteins concentrations and superoxide dismutase enzymatic activity in seminal plasma). In contrast, only the storage time affected the fertilising capacity and catalase enzymatic activity in seminal plasma. The resulting analysis can conclude that the antioxidant presence improves the viability of cold stored milt, especially the transport conditions and the antioxidants allow the fecundity despite motility decrease.

Resumo O armazenamento a frio de leite implica potenciais alterações em sua qualidade, pois gera como processo principal radicais livres que provocam danos aos lipídios da membrana dos espermatozoides, com as consequentes alterações na motilidade e na capacidade de fertilização. Para diminuir os danos causados pelos radicais livres, as células têm defesas antioxidantes (proteínas, enzimas e substâncias de baixo peso molecular). O presente estudo avaliou o efeito do tempo de armazenamento e diferentes antioxidantes preparados em diluentes espermáticos no armazenamento de viabilidade de O. mykiss milt a 4°C. A ANOVA de duas vias denotou que o armazenamento no tempo e a influência antioxidante têm efeitos significativos separados ou combinados nos parâmetros de viabilidade (motilidade espermática, viabilidade espermática, concentrações de proteínas e atividade enzimática da superóxido dismutase no plasma seminal), enquanto apenas o tempo de armazenamento afetou a capacidade de fertilização e atividade enzimática da catalase no plasma seminal. A análise resultante pode concluir que a presença de antioxidante melhora a viabilidade do leite frio, especialmente as condições de transporte, e os antioxidantes permitem a fecundidade apesar da diminuição da motilidade.

Eficiência de três diluidores inespecíficos na refrigeração do sêmen de coelho (Oryctolagus cuniculus f. domesticus) / Efficiency of three unspecific diluents in refrigeration of rabbit (Oryctolagus cuniculus f. domesticus) semen / Eficiencia de tres diluyentes inespecíficos en la refrigeración de semen de conejo (Oryctolagus cuniculus f. domesticus)

Objetivou-se com este trabalho avaliar a viabilidade seminal de coelhos após refrigeração a 5°C utilizando três diluentes comerciais, indicados para refrigeração de sêmen de outras espécies monogástricas. Foram realizadas dez colheitas de sêmen de cada reprodutor. Os ejaculados de cada coelho eram misturados, obtendo-se um pool de sêmen. Em seguida, o pool heterospérmico foi dividido em três tratamentos, de acordo com o diluente utilizado: BotuDogⓇ (cães); BotuSemen® (equinos); e Beltsville Thawing Solution - BTS (suínos). As amostras foram avaliadas quanto aos parâmetros macroscópicos, microscópicos e funcionais em quatro momentos: sêmen fresco (0 h) e refrigerado (16, 24 e 48 h). Os valores médios de motilidade, vigor e defeitos totais do sêmen fresco foram de 86,0%, 3,05 e 11,5%, respectivamente. Após o início do resfriamento, observou-se comportamento linear decrescente para a motilidade e vigor espermático do sêmen em função do tempo, diferindo (P < 0,05) entre os tratamentos. Destaca-se que o tratamento diluído em BTS apresentou redução na manutenção dos parâmetros avaliados de forma mais pronunciada (P < 0.05) ao longo do tempo, apresentando os menores valores para motilidade e vigor espermático dentro de cada tempo avaliado: 16h [20,6 ± 7,28 e 0,75 (0,375 1,5)], 24h [12,0 ± 6,80 e 0 (0 - 1,0)] e 48h [3,0 ± 2,13 e 0 (0 - 0,125)]. Após 48 h de resfriamento, o BotuDogⓇ foi o que apresentou maior valor para motilidade espermática (71,0 ± 2,08) e, juntamente, com o BotuSemenⓇ apresentaram maior valor para vigor espermático (2,5). De acordo com os dados obtidos os diluentes BotuDogⓇ e BotuSemenⓇ mostraram-se eficientes em manter parâmetros espermáticos adequados, apresentando boa viabilidade espermática em até 48h pós refrigeração a 5°C. Foram obtidos, resultados inéditos quanto a parâmetros espermáticos do sêmen de coelho refrigerado que podem ser utilizados como valores de referência para o manejo reprodutivo e processamento do semen desses animais, visto a inexistênca dessas recomendações técnicas.

The objective of this work was to evaluate the seminal viability of rabbits after refrigeration at 5°C using three commercial diluents, indicated for refrigeration of semen from other monogastric species. Ten semen collections were performed from each breeder. The ejaculates of each rabbit were mixed, obtaining a pool of semen. Then, the heterospermic pool was divided into three treatments, according to the diluent used: BotuDog (dogs); BotuSemenⓇ (horses); and Beltsville Thawing Solution - BTS (pigs). The samples were evaluated for macroscopic, microscopic, and functional parameters in four moments: fresh (0 h) and refrigerated (16, 24, and 48 h) semen. The average values of motility, vigor, and total defects of fresh semen were 86.0%, 3.05 and 11.5%, respectively. After the beginning of cooling, a decreasing linear behavior was observed for motility and sperm vigor of semen as a function of time, differing (P < 0.05) between treatments. It is noteworthy that the treatment diluted in BTS® showed a more pronounced reduction in the maintenance of the evaluated parameters (P < 0.05) over time, with the lowest values for sperm motility and vigor within each evaluated time: 16h [20.6 +7.28 and 0.75 (0.375 - 1.5)], 24h [12.0± 6.80 and 0 (0 - 1.0)] and 48h [3.0±2.13 and 0 (0 - 0.125)]. After 48 h of cooling, BotuDog presented the highest value for sperm motility (71.0 ± 2.08) and, together with BotuSemenⓇ, presented the highest value for sperm vigor (2.5). According to the data obtained, BotuDog and BotuSemenⓇ diluents were efficient in maintaining adequate sperm parameters, showing good sperm viability in up to 48 hours after refrigeration at 5°C. Through this work, unpublished results were obtained regarding spermatic parameters of refrigerated rabbit semen that can be used as reference values for reproductive management and semen processing of these animals, given the lack of these technical recommendations.

El objetivo de este trabajo fue evaluar la viabilidad seminal de conejos después de refrigeración a 5°C utilizando tres diluyentes comerciales, indicados para la refrigeración de semen de otras especies monogástricas. Se realizaron diez colectas de semen de cada reproductora. Se mezclaron los eyaculados de cada conejo, obteniendo un pool de semen. Luego, el pool heterospérmico se dividió en tres tratamientos, según el diluyente utilizado: BotuDogⓇ (perros); BotuSemenⓇ (caballos); y Beltsville Thawing Solution - BTS® (cerdos). Las muestras fueron evaluadas para parámetros macroscópicos, microscópicos y funcionales en cuatro momentos: semen fresco (0 h) y refrigerado (16, 24 y 48 h). Los valores promedio de motilidad, vigor y defectos totales del semen fresco fueron 86,0%, 3,05 y 11,5%, respectivamente. Después del inicio del enfriamiento, se observó un comportamiento lineal decreciente para la motilidad y el vigor espermático del semen en función del tiempo, difiriendo (P < 0.05) entre tratamientos. Cabe destacar que el tratamiento diluido en BTS® mostró una reducción más pronunciada en el mantenimiento de los parámetros evaluados (P<0,05) a lo largo del tiempo, con los valores más bajos de motilidad espermática y vigor dentro de cada tiempo evaluado: 16h [20,6 ± 7,28 y 0,75 (0,375 -1.5)], 24h [12,0 ± 6,80 y 0 (0 - 1,0)] y 48h [3,0±2,13 y 0 (0 - 0,125)]. Después de 48 h de enfriamiento, BotuDogⓇ presentó el valor más alto de motilidad espermática (71,0 +2,08) y, junto con BotuSemenⓇ, presentó el valor más alto de vigor espermático (2,5). De acuerdo con los datos obtenidos, los diluyentes BotuDogⓇ y BotuSemenⓇ fueron eficientes en mantener parámetros espermáticos adecuados, mostrando buena viabilidad espermática hasta 48 horas después de la refrigeración a 5°C. A través de este trabajo se obtuvieron resultados inéditos respecto a parámetros espermáticos de semen de conejo refrigerado que pueden ser utilizados como valores de referencia para el manejo reproductivo y procesamiento de semen de estos animales, dada la falta de estas recomendaciones técnicas.

Use of antioxidants and time of cold storage: effects over viability parameters and enzymatic levels in semen of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum, 1792) / Uso de antioxidantes e tempo de armazenamento a frio: efeitos sobre parâmetros de viabilidade e níveis enzimáticos no sêmen da truta arco-íris (Oncorhynchus mykiss, Walbaum, 1792)

Abstract The cold storage of milt implies potentials alterations in its quality because the storage generates as main process, free radicals that produce spermatozoa membrane lipids damage with the consequent motility and fertilising capacity disruptions. To decrease the damage generated by free radicals the cells have antioxidant defences (proteins, enzymes, and low molecular weight substances). The objective of the present study evaluated the time storage effect and different antioxidants prepared in spermatic diluents on sperm viability of O. mykiss milt stored at 4°C. The two-way ANOVA denoted that the time storage and antioxidant influence have significant effects separated or combined on viability parameters (sperm motility and viability, proteins concentrations and superoxide dismutase enzymatic activity in seminal plasma). In contrast, only the storage time affected the fertilising capacity and catalase enzymatic activity in seminal plasma. The resulting analysis can conclude that the antioxidant presence improves the viability of cold stored milt, especially the transport conditions and the antioxidants allow the fecundity despite motility decrease.

Resumo O armazenamento a frio de leite implica potenciais alterações em sua qualidade, pois gera como processo principal radicais livres que provocam danos aos lipídios da membrana dos espermatozoides, com as consequentes alterações na motilidade e na capacidade de fertilização. Para diminuir os danos causados pelos radicais livres, as células têm defesas antioxidantes (proteínas, enzimas e substâncias de baixo peso molecular). O presente estudo avaliou o efeito do tempo de armazenamento e diferentes antioxidantes preparados em diluentes espermáticos no armazenamento de viabilidade de O. mykiss milt a 4°C. A ANOVA de duas vias denotou que o armazenamento no tempo e a influência antioxidante têm efeitos significativos separados ou combinados nos parâmetros de viabilidade (motilidade espermática, viabilidade espermática, concentrações de proteínas e atividade enzimática da superóxido dismutase no plasma seminal), enquanto apenas o tempo de armazenamento afetou a capacidade de fertilização e atividade enzimática da catalase no plasma seminal. A análise resultante pode concluir que a presença de antioxidante melhora a viabilidade do leite frio, especialmente as condições de transporte, e os antioxidantes permitem a fecundidade apesar da diminuição da motilidade.

Dimethyl acetamide and dimethyl sulfoxide associated at glucose and egg yolk for cryopreservation of Pseudoplatystoma corruscans semen

This study aimed to develop a protocol for the cryopreservation of Pseudoplatystoma corruscans semen. For this, mature males were hormonally induced with a single dose of carp pituitary extract (5 mg/kg body weight). Semen was collected and evaluated. Two cryoprotectants were tested to compose the diluents: dimethyl acetamide (DMA) and dimethyl sulfoxide (Me2SO), in two concentrations (8% and 10%), + 5.0% glucose + 10% egg yolk. The semen was diluted in a 1: 4 ratio (semen: extender), packed in 0.5 mL straws and frozen in a dry shipper container in liquid nitrogen vapors. After thawing, sperm kinetics, sperm morphology and DNA integrity of cryopreserved sperm were evaluated. Pseudoplatystoma corruscans males produced semen with sperm motility > 80%. After thawing, all treatments provided semen with total sperm motility > 40%, with no significant difference (P < 0.05) between them, as well as between the other sperm kinetic parameters evaluated. The treatments with DMA provided a smaller fragmentation of the DNA of the gametes. Sperm malformations were identified in both fresh and cryopreserved semen, with a slight increase in these malformations being identified in sperm from thawed P. corruscans semen samples.(AU)

Este estudo teve como objetivo desenvolver um protocolo para a criopreservação do sêmen de Pseudoplatystoma corruscans. Para tal, machos maduros foram induzidos hormonalmente com uma dose única de extrato de hipófise de carpa (5 mg/kg de peso vivo). O sêmen foi coletado e avaliado. Sendo testados para compor os diluentes, dois crioprotetores: dimetil acetamida (DMA) e dimetil sulfóxido (Me2SO), em duas concentrações (8% e 10%), + 5,0% glicose + 10% gema de ovo. O sêmen foi diluído na proporção 1: 4 (sêmen: extensor), embalado em palhetas de 0,5 mL e congelado em container dryshipper em vapores de nitrogênio líquido. Após o descongelamento, foram avaliados os aspectos cinéticos espermáticos, a morfologia espermática e a integridade do DNA dos espermatozoides criopreservados. Os machos de P. corruscans produziram sêmen com motilidade espermática > 80%. Todos os tratamentos proporcionaram após o descongelamento sêmen com motilidade espermática total > 40%, sem diferença significativa (P < 0,05) entre eles, como também entre os demais parâmetros cinéticos espermáticos avaliados. Os tratamentos com DMA proporcionaram uma menor fragmentação do DNA dos gametas. Malformações espermáticas foram identificadas, tanto no sêmen fresco, como no criopreservado, sendo identificado um aumento discreto dessas malformações nos espermatozoides das amostras de sêmen descongeladas de P. corruscans.(AU)

Use of antioxidants and time of cold storage: effects over viability parameters and enzymatic levels in semen of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum, 1792) / Uso de antioxidantes e tempo de armazenamento a frio: efeitos sobre parâmetros de viabilidade e níveis enzimáticos no sêmen da truta arco-íris (Oncorhynchus mykiss, Walbaum, 1792)

The cold storage of milt implies potentials alterations in its quality because the storage generates as main process, free radicals that produce spermatozoa membrane lipids damage with the consequent motility and fertilising capacity disruptions. To decrease the damage generated by free radicals the cells have antioxidant defences (proteins, enzymes, and low molecular weight substances). The objective of the present study evaluated the time storage effect and different antioxidants prepared in spermatic diluents on sperm viability of O. mykiss milt stored at 4°C. The two-way ANOVA denoted that the time storage and antioxidant influence have significant effects separated or combined on viability parameters (sperm motility and viability, proteins concentrations and superoxide dismutase enzymatic activity in seminal plasma). In contrast, only the storage time affected the fertilising capacity and catalase enzymatic activity in seminal plasma. The resulting analysis can conclude that the antioxidant presence improves the viability of cold stored milt, especially the transport conditions and the antioxidants allow the fecundity despite motility decrease.

O armazenamento a frio de leite implica potenciais alterações em sua qualidade, pois gera como processo principal radicais livres que provocam danos aos lipídios da membrana dos espermatozoides, com as consequentes alterações na motilidade e na capacidade de fertilização. Para diminuir os danos causados pelos radicais livres, as células têm defesas antioxidantes (proteínas, enzimas e substâncias de baixo peso molecular). O presente estudo avaliou o efeito do tempo de armazenamento e diferentes antioxidantes preparados em diluentes espermáticos no armazenamento de viabilidade de O. mykiss milt a 4°C. A ANOVA de duas vias denotou que o armazenamento no tempo e a influência antioxidante têm efeitos significativos separados ou combinados nos parâmetros de viabilidade (motilidade espermática, viabilidade espermática, concentrações de proteínas e atividade enzimática da superóxido dismutase no plasma seminal), enquanto apenas o tempo de armazenamento afetou a capacidade de fertilização e atividade enzimática da catalase no plasma seminal. A análise resultante pode concluir que a presença de antioxidante melhora a viabilidade do leite frio, especialmente as condições de transporte, e os antioxidantes permitem a fecundidade apesar da diminuição da motilidade.

Use of antioxidants and time of cold storage: effects over viability parameters and enzymatic levels in semen of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum, 1792) / Uso de antioxidantes e tempo de armazenamento a frio: efeitos sobre parâmetros de viabilidade e níveis enzimáticos no sêmen da truta arco-íris (Oncorhynchus mykiss, Walbaum, 1792)

The cold storage of milt implies potentials alterations in its quality because the storage generates as main process, free radicals that produce spermatozoa membrane lipids damage with the consequent motility and fertilising capacity disruptions. To decrease the damage generated by free radicals the cells have antioxidant defences (proteins, enzymes, and low molecular weight substances). The objective of the present study evaluated the time storage effect and different antioxidants prepared in spermatic diluents on sperm viability of O. mykiss milt stored at 4°C. The two-way ANOVA denoted that the time storage and antioxidant influence have significant effects separated or combined on viability parameters (sperm motility and viability, proteins concentrations and superoxide dismutase enzymatic activity in seminal plasma). In contrast, only the storage time affected the fertilising capacity and catalase enzymatic activity in seminal plasma. The resulting analysis can conclude that the antioxidant presence improves the viability of cold stored milt, especially the transport conditions and the antioxidants allow the fecundity despite motility decrease.(AU)

O armazenamento a frio de leite implica potenciais alterações em sua qualidade, pois gera como processo principal radicais livres que provocam danos aos lipídios da membrana dos espermatozoides, com as consequentes alterações na motilidade e na capacidade de fertilização. Para diminuir os danos causados pelos radicais livres, as células têm defesas antioxidantes (proteínas, enzimas e substâncias de baixo peso molecular). O presente estudo avaliou o efeito do tempo de armazenamento e diferentes antioxidantes preparados em diluentes espermáticos no armazenamento de viabilidade de O. mykiss milt a 4°C. A ANOVA de duas vias denotou que o armazenamento no tempo e a influência antioxidante têm efeitos significativos separados ou combinados nos parâmetros de viabilidade (motilidade espermática, viabilidade espermática, concentrações de proteínas e atividade enzimática da superóxido dismutase no plasma seminal), enquanto apenas o tempo de armazenamento afetou a capacidade de fertilização e atividade enzimática da catalase no plasma seminal. A análise resultante pode concluir que a presença de antioxidante melhora a viabilidade do leite frio, especialmente as condições de transporte, e os antioxidantes permitem a fecundidade apesar da diminuição da motilidade.(AU)

Effect of Different Extenders on Sperm Motility and Vitality in Goose Semen Cryopreservation

This study aimed to investigate the usability of different diluents containing 6% Dimethylformamide (DMF) for cryo-preservation of the semen of geese (Anser cygnoides). The diluents of Glucose (G), Tris-Glucose (T), Lactated Ringer's-Glucose (LG), and Lactated Ringer's (L), all of which contained 6% DMF, were used as cryoprotectants. The researchers collected semen samples from four geese, twice a week over a four-week period, by means of abdominal massage; they then calculated how much sperm each goose ejaculated. Next, the semen samples were pooled and their spermatological parameters were determined. Their volume (4x (mL)), concentration (×108/mL), pH, motility (%), and vitality (%) rates were 0.31±0.01, 3.49±0.32, 7.13±1.06, 67.75±1.28, and 70.00±2.03, respectively. Then, these pooled semen samples were equally divided into four groups. Once they were frozen and thawed, the researchers discovered that the diluent L had the highest motility rate: 40.12% ± 1.35. The motility rates of the other diluents were as follows: LG (28.25%± 1.48), G (21.50% ± 1.41), and T (5.12% ± 0.83). Likewise, the vitality rates (%) of the diluents were as follows: L (41.93% ±1.87), LG (31.50%±1.88), G (29.43% ±1.45), and T (10.56%±1.34), respectively. Freezing and thawing appeared to lower each diluent's vitality and motility rates. However, for the Lactated Ringer's (L), this decrease was predictable. Therefore, Lactated Ringer's diluent containing 6% DMF can be used in cryo-preservation of goose semen.(AU)

Biotecnologias na preservação de espermatozoides felinos / Biotechnologies in the preservation of feline sperm

O gato doméstico é a única espécie da família Felídea sem risco ou iminência de extinção, diferente da maior parte dos felinos selvagens. Desta forma, o desenvolvimento e aprimoramento de diferentes biotécnicas reprodutivas, são essenciais para a manutenção da qualidade reprodutiva, tendo em vista a preservação de espécies mais vulneráveis. Além disso, as biotécnicas do sêmen são para as tecnologias reprodutivas, como a inseminação artificial (IA) e a fertilização in vitro (FIV). Sendo assim, o objetivo deste compilado bibliográfico foi abordar as principais técnicas de colheita, análise e preservação de sêmen/espermatozoides felino, assim como o uso dessas células em IA e FIV. Para a colheita do sêmen felino, diferentes métodos têm sido aplicados: ejaculação farmacológica, eletroejaculação e vagina artificial. Em caso de óbito do reprodutor, os espermatozoides recuperados do epidídimo também apresentam viabilidade reprodutiva. Ademais, a cinética espermática avaliada pelo sistema CASA, a morfologia e a morfometria são as principais análises que demonstram a qualidade espermática e refletem na fertilidade do ejaculado. O sistema CASA também avalia a trajetória individual de cada espermatozoide, que ao se agrupar em clusters, demonstra a heterogeneidade do ejaculado nas subpopulações. Contudo, os diluentes para a conservação e refrigeração dos espermatozoides felinos e as curvas de congelação ainda não estão totalmente estabelecidos e influenciam diretamente a viabilidade dos espermatozoides criopreservados. Diante disso, os resultados da utilização do sêmen felino após criopreservação são inconsistentes, sendo necessários mais estudos para elucidar melhores curvas de congelação e meios de diluentes para viabilizar a preservação do material genético dos gatos.

The domestic cat is the only species of the Felidea family without risk or imminence of extinction, unlike most wild cats. Therefore, the development and improvement of different reproductive biotechnologies are essential for the maintenance of reproductive quality for the preservation of the most vulnerable species. Furthermore, semen biotechnologies are the basis for reproductive technologies such as artificial insemination (AI) and in vitro fertilization (IVF). Thus, the objective of this bibliographic compilation was to approach the main techniques of collection, analysis, and preservation of feline semen/sperm, as well as the use of these cells in AI and IVF. For feline semen collection, different methods have been applied: pharmacological ejaculation, electroejaculation, and artificial vagina. In case of death of the sire, sperm recovered from the epididymis also show reproductive viability. Moreover, the sperm kinetics evaluated by the CASA system, the morphology, and the morphometry are the main analyzes that demonstrate sperm quality and reflect on ejaculate fertility. The CASA system also evaluates the individual path of each sperm, which, when grouped into clusters, demonstrates the heterogeneity of the ejaculate in the subpopulations. However, diluents for the conservation and refrigeration of feline sperm and freezing curves are not yet fully established and directly influence the viability of cryopreserved sperm. Therefore, the results of using feline semen after cryopreservation are inconsistent, and further studies are needed to elucidate better freezing curves and diluents to enable the preservation of the genetic material of cats.

Uso de quercetina em meio de refrigeração de sêmen equino a base de leite em pó desnatado / Use of quercetin in equine semen cooling medium based on skimded milk poder

A biotécnica de refrigeração de sêmen equino para o trasporte de material genético está amplamente distribuida. Com a necessidade da manutenção da viabilidade espermática é indispensável a autilização e diluentes para este fim. O objetivo deste estudo foi avaliar se a adição de quercetina, que é um flavonóide antioxidante, em diluentes espermáticos altera a viabilidade dos espermatozoides equinos refrigerados. Foram avaliados cinco ejaculados de um garanhão, por meio da análise de motilidade e vigor espermático, em diferentes períodos de refrigeração em quatro meios de diluição: BotuSêmen®; BotuSêmen® adicionado de 20 µg/mL de quercetina (SIGMA®); Solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) ou Solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) adicionado de 20 µg/mL de quercetina (SIGMA®). Por meio dos resultados obtidos no presente estudo, foi possível verificar que não há diferença estatística entre a motilidade espermática de sêmen de garanhão diluído em BotuSêmen® em relação ao diluído solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) pelo período de refrigeração avaliado (36h).

The biotechnique of equine semen cooling for the transfer of genetic material is widely distributed. With the need to maintain sperm viability, it is indispensable to use and thinners for this purpose. The aim of this study was to evaluate whether the addition of quercetin, which is an anti-oxidant flavonoid, in spermatic diluents alters the viability of refrigerated equine spermatozoa. Five ejaculates of a stallion were evaluated by analysis of motility and spermatic vigor in different cooling periods in four dilution media: BotuSêmen® ; BotuSêmen® added 20 µg/mL of quercetin (SIGMA® ); Aqueous solution with 10% skimmilk powder (Molico® ) or Aqueous solution with 10% skimmilk powder (Molico® ) added 20 µg/mL quercetin (SIGMA® ). Through the data obtained, it was possible to verify that there is no statistical difference between the sperm motility of diluted stallion semen in BotuSêmen® in relation to the diluted aqueous solution with 10% skimmed milk powder (Molico® ) for the evaluated refrigeration period (36h).

Uso de quercetina em meio de refrigeração de sêmen equino a base de leite em pó desnatado / Use of quercetin in equine semen cooling medium based on skimded milk poder

A biotécnica de refrigeração de sêmen equino para o trasporte de material genético está amplamente distribuida. Com a necessidade da manutenção da viabilidade espermática é indispensável a autilização e diluentes para este fim. O objetivo deste estudo foi avaliar se a adição de quercetina, que é um flavonóide antioxidante, em diluentes espermáticos altera a viabilidade dos espermatozoides equinos refrigerados. Foram avaliados cinco ejaculados de um garanhão, por meio da análise de motilidade e vigor espermático, em diferentes períodos de refrigeração em quatro meios de diluição: BotuSêmen®; BotuSêmen® adicionado de 20 µg/mL de quercetina (SIGMA®); Solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) ou Solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) adicionado de 20 µg/mL de quercetina (SIGMA®). Por meio dos resultados obtidos no presente estudo, foi possível verificar que não há diferença estatística entre a motilidade espermática de sêmen de garanhão diluído em BotuSêmen® em relação ao diluído solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) pelo período de refrigeração avaliado (36h).(AU)

The biotechnique of equine semen cooling for the transfer of genetic material is widely distributed. With the need to maintain sperm viability, it is indispensable to use and thinners for this purpose. The aim of this study was to evaluate whether the addition of quercetin, which is an anti-oxidant flavonoid, in spermatic diluents alters the viability of refrigerated equine spermatozoa. Five ejaculates of a stallion were evaluated by analysis of motility and spermatic vigor in different cooling periods in four dilution media: BotuSêmen® ; BotuSêmen® added 20 µg/mL of quercetin (SIGMA® ); Aqueous solution with 10% skimmilk powder (Molico® ) or Aqueous solution with 10% skimmilk powder (Molico® ) added 20 µg/mL quercetin (SIGMA® ). Through the data obtained, it was possible to verify that there is no statistical difference between the sperm motility of diluted stallion semen in BotuSêmen® in relation to the diluted aqueous solution with 10% skimmed milk powder (Molico® ) for the evaluated refrigeration period (36h).(AU)

Trehalose addition to a Tris-fructose egg yolk extender on quality of ram sperm preserved at 0 °C

The present study investigated the effects of various concentrations of trehalose in Tris-fructose egg yolk diluent on ram semen preservation at 0 ℃. Semen was collected by artificial vagina ejaculation from six rams of proven fertility. High-quality ejaculates were diluted with 0 (control), 5, 10, 15, and 20 mM trehalose of Tris-fructose egg yolk extender and control (tris-fructose egg yolk extender without trehalose), respectively. Then, the ejaculates were diluted to a concentration of 5×108 sperm/mL, cooled to 0 ℃ for 90 min, and maintained at that temperature for twelve days. The diluted semen samples were examined, and their sperm progressive motility, membrane functionality, and acrosome integrity recorded at 0, 24, 72, 144, 216, and 288 h. Two hundred ninety-six ewes were transcervically inseminated with the 216-h control (without trehalose) or the optimal trehalose concentration group semen, and the pregnancy and lambing rates were measured. No significant differences were established in the sperm progressive motility and membrane functionality among the control and 5, 10, 15, and 20 mM groups. The sperm samples of trehalose addition groups had no significant difference in the acrosome integrity of sperm, but they were, nonetheless, significantly higher than those in the control. No significant difference was detected in the lambing and pregnancy rates between the 5 mM and control groups. These results suggest that ram sperm is capable of fertilization after cooling and preservation at 0 ℃ by the use of 5 mM trehalose for Tris-fructose egg yolk diluent. Under these conditions, ram sperm can be more effectively preserved than under other four concentrations of diluents.(AU)

Diluente Tris suplementado com óleo de Mauritia flexuoxa sobre a qualidade do sêmen caprino após a criopreservação / Tris diluent supplemented with Mauritia flexuoxa oil on the quality of goat semen after cryopreservation

Objetivou-se verificar os efeitos, nos parâmetros espermáticos, na integridade mitocondrial, acrossomal e de membrana em células espermáticas, desencadeados pelo uso do Tris (Tris hidroximetil aminometano) suplementado com óleo de Mauritia flexuoxacomo diluente para criopreservação de sêmen caprino. Quatro caprinos clinicamente saudáveis foram utilizados. Os animais eram alimentados diariamente com volumoso (Pennisetum purpureum, Schum.), concentrado (ração peletizada com teor de 20% proteína, 300 g/animal/dia) e sal mineral específico para Caprinos (Caprinofós®), à vontade. Dois ensaios foram realizados: I ­ Teste de toxicidade; II ­ Criopreservação do sêmen com concentrações ideais. No teste de toxicidade as concentrações avaliadas foram: 5%, 10%, 15% e 20% de diluente a base de óleo de Mauritia flexuoxa. Após o teste de toxicidade, foi escolhido a concentraçãoque apresentou o melhor resultado (5%). Logo após, foram realizadas mais 32 coletas, que foram diluídas em Tris-gema-glicerol (grupo controle) ou diluente contendo óleo vegetal (Mauritia flexuoxa). As amostras foram criopreservadas com auxílio do aparelho Tk3000®. Após o período mínimo de uma semana as palhetas foram descongeladas em banho-maria a 37 °C por 30 segundos, acondicionadas em microtubos de centrifugação e homogeneizadas para a análise imediata de motilidade, vigor espermático e morfologia. Em seguida, por meio de sondas fluorescentes foram avaliadas a integridade de acrossomo, membrana plasmática (Diacetato de Carboxifluresceína e Iodeto de Propídeo) e função mitocondrial sob microscopia de epifluorescência. Quanto a motilidade e vigor, integridade mitocondrial e acrossomal, o grupo buriti foi inferior ao grupo controle. O Tris suplementado com óleo de Mauritia flexuoxa na concentração de 5% não influenciou significativamente a qualidade espermática, porém, observou-se morfologia e integridade de membrana favoráveis. Dessa forma, sendo uma alternativa para substituição de diluentes a base de produtos de origem animal.

The objective was to verify the effects, sperm parameters, mitochondrial, acrosomal and membrane integrity in sperm cells, triggered by the use of Tris (Tris hydroxymethyl aminomethane) supplemented with Mauritia flexuoxa oil as a diluent for cryopreservation of goat semen. Four goats clinically healthy were used. The animals were fed daily with bulky (Pennisetum purpureum, Schum.), concentrate (pelleted feed with 20% protein content, 300 g / animal / day) and mineral salt Specific for Goats (Caprinofós®), ad libitum. Two tests were carried out: I - Toxicity test; II - Semen cryopreservation with ideal concentrations. In the toxicity test as selected were: 5%, 10%, 15% and 20% of Mauritia flexuoxa oil-based diluent. After the toxicity test, the concentration that showed the best result (5%) was chosen. Soon after, a further 32 samples were obtained, which were diluted in Tris-glycerol (control group) or diluent containing vegetable oil (Mauritia flexuoxa). The samples were cryopreserved using the Tk3000® machine. After a minimum of one week, the samples were thawed in a 37 ° C water bath for 30 seconds, packed in centrifugation microtubes and homogenized for immediate analysis of motility, sperm vigor and morphology. Then, by means of fluorescent probes, the integrity of the acrosome, plasma membrane (Carboxyflurescein diacetate and Propidium Iodide) and mitochondrial function under epifluorescence microscopy were evaluated. As for motility and vigor, mitochondrial and acrosomal integrity, the buriti group was inferior to the control group. Tris supplemented with Mauritia flexuoxa oil at a concentration of 5% did not significantly influence sperm quality, however, favorable motility, morphology and membrane integrity were observed. Thus, being an alternative to replace diluents based on products of animal origin.

Efeito do ácido docosa-hexaenoico e do Trolox® no diluidor de refrigeração de sêmen de garanhões da raça Mangalarga Marchador / Effect of docosahexaenoic acid and Trolox® in extenders for cooling semen from Mangalarga Marchador stallion

Objetivou-se avaliar o efeito do ácido docosa-hexaenoico (DHA), associado ou não ao Trolox®, na refrigeração de sêmen de garanhões da raça Mangalarga Marchador. Foram refrigerados 10 ejaculados nos diluidores: D1) BotuSêmen® (BS; controle); D2) BS + 30ngmL-1 de DHA (BS30DHA); D3) BS30DHA + 40µM de Trolox® (BS30DHA40T); D4) BS + 50ngmL-1 de DHA (BS50DHA); D5) BS50DHA + 40µM de Trolox® (BS50DHA40T). Após 48 horas de refrigeração, foram avaliados os parâmetros de movimento espermático, a integridade estrutural e funcional da membrana plasmática e a longevidade espermática. Todos os diluidores testados preservaram, de forma semelhante, a motilidade, a linearidade, a retilinearidade, a amplitude do deslocamento lateral da cabeça, a frequência do batimento flagelar cruzado, o percentual de hiperativos e a integridade estrutural e funcional da membrana espermática (P>0,05). O diluidor BS50DHA foi superior ao BS30DHA40T em preservar a VCL e a VSL e foi superior ao BS30DHA40T e ao BS50DHA40T em preservar a VAP e o índice de oscilação (P<0,05). Conclui-se que o uso do Trolox® em diluidores utilizados para refrigeração de sêmen de garanhões contendo ácido docosa-hexaenoico, nas concentrações propostas, não é indicado por alterar parâmetros de movimento espermático considerados importantes para a fertilidade.(AU)

The objective of this study was to evaluate the effect of docosahexaenoic acid (DHA), associated or not with Trolox®, in extenders for cooling semen from Mangalarga Marchador stallions. Ten ejaculates were cooled in the following diluents: D1) BotuSemen® (BS; control); D2) BS + 30ngmL-1 DHA (BS30DHA); D3) BS30DHA + 40µM Trolox® (BS30DHA40T); D4) BS + 50ngmL-1 DHA (BS50DHA); D5) BS50DHA + 40µM Trolox® (BS50DHA40T). After 48 hours of refrigeration, the sperm movement, structural and functional integrity of the plasma membrane and sperm longevity were evaluated. All extenders tested similarly preserved motility, linearity, straightness of trajectory, amplitude of lateral head displacement, beat cross frequency, hyperactive, the structural and functional integrity of the sperm membrane (P> 0.05). The BS50DHA extender was superior to BS30DHA40T in preserving VCL and VSL and was superior to BS30DHA40T and BS50DHA40T in preserving VAP and oscillation index (P< 0.05). It is concluded that the use of Trolox® in extenders for cooling stallion sperm containing docosahexaenoic acid at the proposed concentrations is not indicated because it alters sperm movement parameters considered important for fertility.(AU)

Effectiveness of tes-tris or tris association with low density lipoprotein on in vitro longevity of refrigerated buffalo semen / Eficácia da associação TES-TRIS ou TRIS com lipoproteína de baixa densidade sobre a longevidade in vitro de sêmen refrigerado de búfalos

This study investigated in vitro the efficacy of four different extenders (TES-TRIS and TRIS with LDL low-density lipoprotein at concentrations of 10 or 5%) on the longevity of buffalo sperm in the refrigeration process at 5ºC. Sperm motility was assessed every 24 hours up to 72 hours of incubation using computer assisted sperm analysis and sperm membrane integrity was examined by the hypoosmotic test (HOST) at T1, T24, T48 and T72 hours. Eleven buffaloes (1 ejaculate per buffalo) of the Murrah breed were used, ranging in age from 4 to 5 years. Immediately after collection, each ejaculate was fractionated into 4 aliquots, and each aliquot was diluted in one of four diluents to obtain 50x106SPTZ/mL. The samples were packed in 0.5mL straws and refrigerated (-0.25°C/min) to 5°C and maintained at this temperature until evaluation. Prior to evaluation the samples were heated at 37°C for 30 seconds. The statistical package used for analysis was STATA 12.0 "Statistical Analysis Software" and means were compared by the Friedman test (P<0.05). The results of sperm kinetics and HOST indicate that the TRIS diluent with 10% LDL could be a promising alternative for semen refrigeration at 5ºC, to be used in conventional and fixed time artificial insemination.(AU)

Este estudo investigou in vitro a eficácia de quatro diferentes extensores (TES-TRIS e TRIS com lipoproteína de baixa densidade - LDL, nas concentrações de 10 ou 5%) sobre a longevidade espermática de búfalos no processo de refrigeração a 5ºC. A motilidade espermática foi avaliada a cada 24 horas até 72 horas de incubação, por sistema computadorizado "CASA", e a integridade de membrana espermática foi examinada pelo teste hiposmótico (HOST) em T1, T24, T48 e T72 horas. Foram utilizados 11 búfalos (um ejaculado por búfalo) da raça Murrah, com idade variando de quatro a cinco anos. Imediatamente após a coleta, cada ejaculado foi fracionado em quatro alíquotas, e cada alíquota foi diluída em um dos quatro diluidores para a obtenção de 50x106 SPTZ/mL. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 mL, refrigeradas (-0,25oC/minuto) até 5oC e mantidas nessa temperatura até a avaliação. Previamente à avaliação, as amostras foram aquecidas a 37oC por 30 segundos. O pacote estatístico utilizado para as análises foi o STATA 12.0 "Statistical Analysis Software", e as médias foram comparadas pelo teste de Friedman (P<0,05). Os resultados de cinética e HOST até o tempo de 48 horas indicam que o diluidor TRIS com 10% LDL seria uma alternativa promissora para a refrigeração do sêmen a 5ºC, a ser utilizado na inseminação artificial e na inseminação artificial em tempo fixo.(AU)

Efeito do ácido docosa-hexaenoico e do Trolox® no diluidor de refrigeração de sêmen de garanhões da raça Mangalarga Marchador / Effect of docosahexaenoic acid and Trolox® in extenders for cooling semen from Mangalarga Marchador stallion

Objetivou-se avaliar o efeito do ácido docosa-hexaenoico (DHA), associado ou não ao Trolox®, na refrigeração de sêmen de garanhões da raça Mangalarga Marchador. Foram refrigerados 10 ejaculados nos diluidores: D1) BotuSêmen® (BS; controle); D2) BS + 30ngmL-1 de DHA (BS30DHA); D3) BS30DHA + 40µM de Trolox® (BS30DHA40T); D4) BS + 50ngmL-1 de DHA (BS50DHA); D5) BS50DHA + 40µM de Trolox® (BS50DHA40T). Após 48 horas de refrigeração, foram avaliados os parâmetros de movimento espermático, a integridade estrutural e funcional da membrana plasmática e a longevidade espermática. Todos os diluidores testados preservaram, de forma semelhante, a motilidade, a linearidade, a retilinearidade, a amplitude do deslocamento lateral da cabeça, a frequência do batimento flagelar cruzado, o percentual de hiperativos e a integridade estrutural e funcional da membrana espermática (P>0,05). O diluidor BS50DHA foi superior ao BS30DHA40T em preservar a VCL e a VSL e foi superior ao BS30DHA40T e ao BS50DHA40T em preservar a VAP e o índice de oscilação (P<0,05). Conclui-se que o uso do Trolox® em diluidores utilizados para refrigeração de sêmen de garanhões contendo ácido docosa-hexaenoico, nas concentrações propostas, não é indicado por alterar parâmetros de movimento espermático considerados importantes para a fertilidade.(AU)

The objective of this study was to evaluate the effect of docosahexaenoic acid (DHA), associated or not with Trolox®, in extenders for cooling semen from Mangalarga Marchador stallions. Ten ejaculates were cooled in the following diluents: D1) BotuSemen® (BS; control); D2) BS + 30ngmL-1 DHA (BS30DHA); D3) BS30DHA + 40µM Trolox® (BS30DHA40T); D4) BS + 50ngmL-1 DHA (BS50DHA); D5) BS50DHA + 40µM Trolox® (BS50DHA40T). After 48 hours of refrigeration, the sperm movement, structural and functional integrity of the plasma membrane and sperm longevity were evaluated. All extenders tested similarly preserved motility, linearity, straightness of trajectory, amplitude of lateral head displacement, beat cross frequency, hyperactive, the structural and functional integrity of the sperm membrane (P> 0.05). The BS50DHA extender was superior to BS30DHA40T in preserving VCL and VSL and was superior to BS30DHA40T and BS50DHA40T in preserving VAP and oscillation index (P< 0.05). It is concluded that the use of Trolox® in extenders for cooling stallion sperm containing docosahexaenoic acid at the proposed concentrations is not indicated because it alters sperm movement parameters considered important for fertility.(AU)

Effectiveness of tes-tris or tris association with low density lipoprotein on in vitro longevity of refrigerated buffalo semen / Eficácia da associação TES-TRIS ou TRIS com lipoproteína de baixa densidade sobre a longevidade in vitro de sêmen refrigerado de búfalos

This study investigated in vitro the efficacy of four different extenders (TES-TRIS and TRIS with LDL low-density lipoprotein at concentrations of 10 or 5%) on the longevity of buffalo sperm in the refrigeration process at 5ºC. Sperm motility was assessed every 24 hours up to 72 hours of incubation using computer assisted sperm analysis and sperm membrane integrity was examined by the hypoosmotic test (HOST) at T1, T24, T48 and T72 hours. Eleven buffaloes (1 ejaculate per buffalo) of the Murrah breed were used, ranging in age from 4 to 5 years. Immediately after collection, each ejaculate was fractionated into 4 aliquots, and each aliquot was diluted in one of four diluents to obtain 50x106SPTZ/mL. The samples were packed in 0.5mL straws and refrigerated (-0.25°C/min) to 5°C and maintained at this temperature until evaluation. Prior to evaluation the samples were heated at 37°C for 30 seconds. The statistical package used for analysis was STATA 12.0 "Statistical Analysis Software" and means were compared by the Friedman test (P<0.05). The results of sperm kinetics and HOST indicate that the TRIS diluent with 10% LDL could be a promising alternative for semen refrigeration at 5ºC, to be used in conventional and fixed time artificial insemination.(AU)

Este estudo investigou in vitro a eficácia de quatro diferentes extensores (TES-TRIS e TRIS com lipoproteína de baixa densidade - LDL, nas concentrações de 10 ou 5%) sobre a longevidade espermática de búfalos no processo de refrigeração a 5ºC. A motilidade espermática foi avaliada a cada 24 horas até 72 horas de incubação, por sistema computadorizado "CASA", e a integridade de membrana espermática foi examinada pelo teste hiposmótico (HOST) em T1, T24, T48 e T72 horas. Foram utilizados 11 búfalos (um ejaculado por búfalo) da raça Murrah, com idade variando de quatro a cinco anos. Imediatamente após a coleta, cada ejaculado foi fracionado em quatro alíquotas, e cada alíquota foi diluída em um dos quatro diluidores para a obtenção de 50x106 SPTZ/mL. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 mL, refrigeradas (-0,25oC/minuto) até 5oC e mantidas nessa temperatura até a avaliação. Previamente à avaliação, as amostras foram aquecidas a 37oC por 30 segundos. O pacote estatístico utilizado para as análises foi o STATA 12.0 "Statistical Analysis Software", e as médias foram comparadas pelo teste de Friedman (P<0,05). Os resultados de cinética e HOST até o tempo de 48 horas indicam que o diluidor TRIS com 10% LDL seria uma alternativa promissora para a refrigeração do sêmen a 5ºC, a ser utilizado na inseminação artificial e na inseminação artificial em tempo fixo.(AU)

Diluente Tris suplementado com óleo de Mauritia flexuoxa sobre a qualidade do sêmen caprino após a criopreservação / Tris diluent supplemented with Mauritia flexuoxa oil on the quality of goat semen after cryopreservation

Objetivou-se verificar os efeitos, nos parâmetros espermáticos, na integridade mitocondrial, acrossomal e de membrana em células espermáticas, desencadeados pelo uso do Tris (Tris hidroximetil aminometano) suplementado com óleo de Mauritia flexuoxa como diluente para criopreservação de sêmen caprino. Quatro caprinos clinicamente saudáveis foram utilizados. Os animais eram alimentados diariamente com volumoso (Pennisetum purpureum, Schum.), concentrado (ração peletizada com teor de 20% proteína, 300 g/animal/dia) e sal mineral específico para Caprinos (Caprinofós®), à vontade. Dois ensaios foram realizados: I Teste de toxicidade; II Criopreservação do sêmen com concentrações ideais. No teste de toxicidade as concentrações avaliadas foram: 5%, 10%, 15% e 20% de diluente a base de óleo de Mauritia flexuoxa. Após o teste de toxicidade, foi escolhido a concentração que apresentou o melhor resultado (5%). Logo após, foram realizadas mais 32 coletas, que foram diluídas em Tris-gema-glicerol (grupo controle) ou diluente contendo óleo vegetal (Mauritia flexuoxa). As amostras foram criopreservadas com auxílio do aparelho Tk3000®. Após o período mínimo de uma semana as palhetas foram descongeladas em banho-maria a 37 °C por 30 segundos, acondicionadas em microtubos de centrifugação e homogeneizadas para a análise imediata de motilidade, vigor espermático e morfologia. Em seguida, por meio de sondas fluorescentes foram avaliadas a integridade de acrossomo, membrana plasmática (Diacetato de Carboxifluresceína e Iodeto de Propídeo) e função mitocondrial sob microscopia de epifluorescência. Quanto a motilidade e vigor, integridade mitocondrial e acrossomal, o grupo buriti foi inferior ao grupo controle. O Tris suplementado com óleo de Mauritia flexuoxa na concentração de 5% não influenciou significativamente a qualidade espermática, porém, observouse morfologia e integridade de membrana favoráveis. Dessa forma, sendo uma alternativa para substituição de diluentes a base de produtos de origem animal.(AU)

The objective was to verify the effects, sperm parameters, mitochondrial, acrosomal and membrane integrity in sperm cells, triggered by the use of Tris (Tris hydroxymethyl aminomethane) supplemented with Mauritia flexuoxa oil as a diluent for cryopreservation of goat semen. Four goats clinically healthy were used. The animals were fed daily with bulky (Pennisetum purpureum, Schum.), concentrate (pelleted feed with 20% protein content, 300 g / animal / day) and mineral salt Specific for Goats (Caprinofós®), ad libitum. Two tests were carried out: I - Toxicity test; II - Semen cryopreservation with ideal concentrations. In the toxicity test as selected were: 5%, 10%, 15% and 20% of Mauritia flexuoxa oil-based diluent. After the toxicity test, the concentration that showed the best result (5%) was chosen. Soon after, a further 32 samples were obtained, which were diluted in Tris-glycerol (control group) or diluent containing vegetable oil (Mauritia flexuoxa). The samples were cryopreserved using the Tk3000® machine. After a minimum of one week, the samples were thawed in a 37 ° C water bath for 30 seconds, packed in centrifugation microtubes and homogenized for immediate analysis of motility, sperm vigor and morphology. Then, by means of fluorescent probes, the integrity of the acrosome, plasma membrane (Carboxyflurescein diacetate and Propidium Iodide) and mitochondrial function under epifluorescence microscopy were evaluated. As for motility and vigor, mitochondrial and acrosomal integrity, the buriti group was inferior to the control group. Tris supplemented with Mauritia flexuoxa oil at a concentration of 5% did not significantly influence sperm quality, however, favorable motility, morphology and membrane integrity were observed. Thus, being an alternative to replace diluents based on products of animal origin.(AU)

Diluente Tris suplementado com óleo de Mauritia flexuoxa sobre a qualidade do sêmen caprino após a criopreservação / Tris diluent supplemented with Mauritia flexuoxa oil on the quality of goat semen after cryopreservation

Objetivou-se verificar os efeitos, nos parâmetros espermáticos, na integridade mitocondrial, acrossomal e de membrana em células espermáticas, desencadeados pelo uso do Tris (Tris hidroximetil aminometano) suplementado com óleo de Mauritia flexuoxa como diluente para criopreservação de sêmen caprino. Quatro caprinos clinicamente saudáveis foram utilizados. Os animais eram alimentados diariamente com volumoso (Pennisetum purpureum, Schum.), concentrado (ração peletizada com teor de 20% proteína, 300 g/animal/dia) e sal mineral específico para Caprinos (Caprinofós®), à vontade. Dois ensaios foram realizados: I – Teste de toxicidade; II – Criopreservação do sêmen com concentrações ideais. No teste de toxicidade as concentrações avaliadas foram: 5%, 10%, 15% e 20% de diluente a base de óleo de Mauritia flexuoxa. Após o teste de toxicidade, foi escolhido a concentração que apresentou o melhor resultado (5%). Logo após, foram realizadas mais 32 coletas, que foram diluídas em Tris-gema-glicerol (grupo controle) ou diluente contendo óleo vegetal (Mauritia flexuoxa). As amostras foram criopreservadas com auxílio do aparelho Tk3000®. Após o período mínimo de uma semana as palhetas foram descongeladas em banho-maria a 37 °C por 30 segundos, acondicionadas em microtubos de centrifugação e homogeneizadas para a análise imediata de motilidade, vigor espermático e morfologia. Em seguida, por meio de sondas fluorescentes foram avaliadas a integridade de acrossomo, membrana plasmática (Diacetato de Carboxifluresceína e Iodeto de Propídeo) e função mitocondrial sob microscopia de epifluorescência. Quanto a motilidade e vigor, integridade mitocondrial e acrossomal, o grupo buriti foi inferior ao grupo controle. O Tris suplementado com óleo de Mauritia flexuoxa na concentração de 5% não influenciou significativamente a qualidade espermática, porém, observouse morfologia e integridade de membrana favoráveis. Dessa forma, sendo uma alternativa para substituição de diluentes a base de produtos de origem animal.

The objective was to verify the effects, sperm parameters, mitochondrial, acrosomal and membrane integrity in sperm cells, triggered by the use of Tris (Tris hydroxymethyl aminomethane) supplemented with Mauritia flexuoxa oil as a diluent for cryopreservation of goat semen. Four goats clinically healthy were used. The animals were fed daily with bulky (Pennisetum purpureum, Schum.), concentrate (pelleted feed with 20% protein content, 300 g / animal / day) and mineral salt Specific for Goats (Caprinofós®), ad libitum. Two tests were carried out: I - Toxicity test; II - Semen cryopreservation with ideal concentrations. In the toxicity test as selected were: 5%, 10%, 15% and 20% of Mauritia flexuoxa oil-based diluent. After the toxicity test, the concentration that showed the best result (5%) was chosen. Soon after, a further 32 samples were obtained, which were diluted in Tris-glycerol (control group) or diluent containing vegetable oil (Mauritia flexuoxa). The samples were cryopreserved using the Tk3000® machine. After a minimum of one week, the samples were thawed in a 37 ° C water bath for 30 seconds, packed in centrifugation microtubes and homogenized for immediate analysis of motility, sperm vigor and morphology. Then, by means of fluorescent probes, the integrity of the acrosome, plasma membrane (Carboxyflurescein diacetate and Propidium Iodide) and mitochondrial function under epifluorescence microscopy were evaluated. As for motility and vigor, mitochondrial and acrosomal integrity, the buriti group was inferior to the control group. Tris supplemented with Mauritia flexuoxa oil at a concentration of 5% did not significantly influence sperm quality, however, favorable motility, morphology and membrane integrity were observed. Thus, being an alternative to replace diluents based on products of animal origin.

Influência do meio de conservação à base de água de coco em pó (ACP-102c) na manutenção da atividade mitocondrial de espermatozoides ovinos criopreservados / Influence of coconut powder water-based conservation medium (APC-102c) for maintaining mitochondrial activity of cryopreserved ram sperm

Background: Semen extenders are required to protect and preserve semen, and the development of suitable extenders iskey for artificial insemination. Although the use of Tris-based diluent is widespread, new diluents such as powdered coconut water have been developed for better sperm protection. One way to evaluate the effectiveness of diluents is throughmicroscopic analyses that evaluate sperm motility, vigor, and concentration. However, these analyses are limited, and maynot provide accurate results. New evaluation techniques have been studied, and one of the tests that can be used to addreliability to these analyses is mitochondrial activity evaluation, which can sum all the parameters, and provide a moreaccurate evaluation. Thus, the present study aimed to evaluate the efficacy of ACP-102c in cryopreserved ram semen.Materials, Methods & Results: Five semen samples were collected from two ram breeders using artificial vagina (n = 10).Each ejaculate was divided into the following two treatments: T1 - ACP-102c + 20% egg yolk + 7% glycerol and T2 - TRIS+ 20% egg yolk + 7% glycerol. Extended semen samples were then packed in 0.5 mL plastic straws, subjected through therefrigeration curve up to 4°C (0.35°C/min), and equilibrated for 2 h at 4°C. Subsequently, the straws were placed at 4 cmabove liquid nitrogen level (-60°C) for 15 min, immersed, and then finally stored in the liquid nitrogen at -196°C. Bothfresh and thawed samples were evaluated for total and progressive sperm motility using conventional microscopy (40x),and the same evaluator on each occasion. For plasma membrane integrity (IMP), the smear staining technique with theEosin-Nigrosin staining was used; 200 sperms were counted and classified as whole (unstained) and unhealthy (stained).Mitochondrial activity was evaluated using a cytochemical technique based on the oxidation of 3,3’-diaminobenzidine(DAB); 200 sperms were counted, and classified into four...

Antimicrobial activity of propolis extract fractions against Staphylococcus spp. isolated from goat mastitis

ABSTRACT: The indiscriminate use of antibiotics in the treatment of caprine mastitis causes the appearance of resistant microorganisms, besides leaving residues in milk, putting at risk to human health. In this way, propolis is an alternative in the treatment of diseases because it has antimicrobial activity, mainly because of the presence of flavonoids in its composition. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial potential of propolis to Staphylococcus spp. Isolated from cases of goat mastitis and qualify the crude ethanoic extract by high performance liquid chromatography (HPLC). In this study, the minimum bactericidal concentration values of propolis extracts in ethanol, ethyl acetate and hexane showed that the best concentrations capable of promoting the highest mortality of the isolates of Staphylococcus spp. from mastitis in goats, were 6250, 3125 and 1562.5g/mL, respectively. By the microplate adherence test, it was found that 20.78% isolates were not able to form biofilm, 14.70% were classified as moderate and 64.70% were weak and none as a strong biofilm producer. Propolis in its different diluents was able to affect the formation of biofilm and showed a pronounced marked antimicrobial activity against Staphylococcus spp. strains and may be indicated for use in in vivo studies.

RESUMO: O uso indiscriminado de antibióticos no tratamento de mastite caprina leva ao desenvolvimento de micro-organismos resistentes que poderão estar presentes em alimentos, colocando em risco a saúde humana. Dessa forma, a própolis surge como uma alternativa para o tratamento de doenças por possuir uma ação antimicrobiana, principalmente pela presença de flavonoides em sua composição. O objetivo desse estudo foi avaliar o potencial antimicrobiano da própolis frente à Staphylococcus spp. isolados de casos de mastite caprina e qualificar o extrato etanoico bruto por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE-DAD). Neste estudo, os valores de concentração bactericida mínima (CBM) dos extratos de própolis em álcool etílico, acetato de etila e hexano nos isolados foram de 6250, 3125 e 1562,5g/mL, respectivamente. Pelo teste de aderência à microplacas, observou-se que 20,78% dos microorganismos, não foram capazes de formar biofilme, 14,70% foram classificados como moderados, 64,70% em fracos e nenhum como forte produtor de biofilme. A própolis em seus diferentes diluentes foi capaz de afetar a formação de biofilme e apresentou significativa atividade antimicrobiana frente a cepas de Staphylococcus spp., podendo ser indicada para utilização em estudos in vivo.