Resumo
This study was performed to evaluate a protocol for sperm cryopreservation of the marine shrimp Litopenaeus schmitti, an important species in Brazilian commercial fisheries. No studies or protocols were found for cryopreservation of its spermatic mass. This paper provides information about the technique of semen storage based on protocols applied to other penaeids species. Two cryoprotectants, glycerol and dimetilsulfoxide (DMSO), were tested for sperm cells toxicity in two concentrations (5 and 10%), and two exposure times (10 and 30 minutes). Influence of liquid nitrogen storage in apparent sperm viability (ASV) was also tested in 1, 15 and 30 days of storage. The cryopreservation was performed in a two-step (2 and 0.5ºC min-1) freezing protocol. After freezing until the temperature -32C, sperm mass was immersed in liquid nitrogen (-196ºC). Thus, glycerol and DMSO was not toxic to sperm in both concentrations and equilibration times. For all toxicity tests ASV was up to 79.8% after exposure. Liquid nitrogen storage tests indicated no significant difference between glycerol 5 and 10%. Results were significantly different over timebetween days 15 and 30 of storage in liquid nitrogen, in which ASV was around 42.8% and 16.3%respectively. Thus, it is suggested glycerol 5% (10 minutes) as cryoprotectant for L. schmittispermatic mass cryopreservation. It is also suggested that the L. schmitti spermatic mass can be stored during 15 days in liquid nitrogen, using a two-step (2 and 0.5ºC min-1) freezing protocol.(AU)
Este estudo foi realizado ara avaliar um protocolo de criopreservação do sêmen do camarão marinho Litopenaeus schmitti, uma espécie importante para a pesca comercial no Brasil. Não foram encontrados estudos ou protocolos de criopreservação de sua massa espermática. Este estudo fornece informações sobre a técnica de armazenamento de sêmen com base em protocolos aplicados a outras espécies de peneídeos. Dois agentes crioprotectores, glicerol e dimetilsulfóxido (DMSO), foram testados quanto à toxicidade para as células espermáticas em duas concentrações (5 e 10%) e dois tempos de exposição (10 e 30 minutos). A influência da manutenção em nitrogênio líquido sobre a viabilidade espermática aparente (VEA) foi também testada em 1, 15 e 30 dias de armazenamento. Para criopreservação, utilizou-se um protocolo de congelamento em duas etapas (2 e 0,5ºC min-1). Após o resfriamento até a temperatura de -32°C, a massa espermática foi imersaem nitrogênio líquido (-196°C). Assim, glicerol e DMSO não foram tóxicos para o esperma em ambas as concentrações e tempos de equilíbrio. Para todos os testes de toxicidade a VEA foi de até79,8% após a exposição. Os testes de armazenamento em nitrogênio líquido não indicaram diferença significativa utilizando glicerol 5 e 10%, mas houve diferença significativa entre os dias 15(42,8%) e 30 (16,3%), para a VEA. Assim, sugere-se a utilização do glicerol 5 ou 10% (10 minutos) como crioprotetor para a criopreservação de massa espermática do camarão L. schmitti. Também é sugerido que a massa espermática do L. schmitti pode ser armazenada durante 15 dias emnitrogênio líquido, utilizando-se um protocolo de congelamento em duas etapas (2 e 0,5ºC min-1).(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Penaeidae , Criopreservação , Preservação do Sêmen , Bancos de Esperma , Dimetil Sulfóxido , GlicerolResumo
This study was performed to evaluate a protocol for sperm cryopreservation of the marine shrimp Litopenaeus schmitti, an important species in Brazilian commercial fisheries. No studies or protocols were found for cryopreservation of its spermatic mass. This paper provides information about the technique of semen storage based on protocols applied to other penaeids species. Two cryoprotectants, glycerol and dimetilsulfoxide (DMSO), were tested for sperm cells toxicity in two concentrations (5 and 10%), and two exposure times (10 and 30 minutes). Influence of liquid nitrogen storage in apparent sperm viability (ASV) was also tested in 1, 15 and 30 days of storage. The cryopreservation was performed in a two-step (2 and 0.5ºC min-1) freezing protocol. After freezing until the temperature -32C, sperm mass was immersed in liquid nitrogen (-196ºC). Thus, glycerol and DMSO was not toxic to sperm in both concentrations and equilibration times. For all toxicity tests ASV was up to 79.8% after exposure. Liquid nitrogen storage tests indicated no significant difference between glycerol 5 and 10%. Results were significantly different over timebetween days 15 and 30 of storage in liquid nitrogen, in which ASV was around 42.8% and 16.3%respectively. Thus, it is suggested glycerol 5% (10 minutes) as cryoprotectant for L. schmittispermatic mass cryopreservation. It is also suggested that the L. schmitti spermatic mass can be stored during 15 days in liquid nitrogen, using a two-step (2 and 0.5ºC min-1) freezing protocol.
Este estudo foi realizado ara avaliar um protocolo de criopreservação do sêmen do camarão marinho Litopenaeus schmitti, uma espécie importante para a pesca comercial no Brasil. Não foram encontrados estudos ou protocolos de criopreservação de sua massa espermática. Este estudo fornece informações sobre a técnica de armazenamento de sêmen com base em protocolos aplicados a outras espécies de peneídeos. Dois agentes crioprotectores, glicerol e dimetilsulfóxido (DMSO), foram testados quanto à toxicidade para as células espermáticas em duas concentrações (5 e 10%) e dois tempos de exposição (10 e 30 minutos). A influência da manutenção em nitrogênio líquido sobre a viabilidade espermática aparente (VEA) foi também testada em 1, 15 e 30 dias de armazenamento. Para criopreservação, utilizou-se um protocolo de congelamento em duas etapas (2 e 0,5ºC min-1). Após o resfriamento até a temperatura de -32°C, a massa espermática foi imersaem nitrogênio líquido (-196°C). Assim, glicerol e DMSO não foram tóxicos para o esperma em ambas as concentrações e tempos de equilíbrio. Para todos os testes de toxicidade a VEA foi de até79,8% após a exposição. Os testes de armazenamento em nitrogênio líquido não indicaram diferença significativa utilizando glicerol 5 e 10%, mas houve diferença significativa entre os dias 15(42,8%) e 30 (16,3%), para a VEA. Assim, sugere-se a utilização do glicerol 5 ou 10% (10 minutos) como crioprotetor para a criopreservação de massa espermática do camarão L. schmitti. Também é sugerido que a massa espermática do L. schmitti pode ser armazenada durante 15 dias emnitrogênio líquido, utilizando-se um protocolo de congelamento em duas etapas (2 e 0,5ºC min-1).