Caracterização de leite em pó, soro de leite em pó e suas misturas por eletroforese em gel de poliacrilamida / Characterization of milk powder, whey powder and its blends by polyacrylamide gel electrophoresis

Pela legislação brasileira o leite em pó não pode conter sólidos de soro de leite. As autoridades competentes enfrentam dificuldades no controle desse tipo de fraude, apesar de diversos métodos terem sido estudados e propostos para detectar a adulteração. Neste estudo foi realizada a caracterização do leite em pó, utilizando-se a técnica de eletroforese adaptada, para determinar adulteração em amostras de leite em pó contendo diferentes concentrações de soro (2 por cento, 4 por cento, 6 por cento, 8 por cento e 10 por cento) e pelos perfis protéicos. Foi empregada a técnica de SDS-PAGE com modificações nos procedimentos de conservação dos géis após preparo, tempo entre preparo e aplicação, voltagem e corrente na fonte eletroforética, tempos de revelação e secagem, obtendo-se géis com resultados satisfatórios quando analisados por meio de software Image Quant TL. A técnica de SDS-PAGE adaptada foi eficiente para avaliar as características das amostras de leite em pó e de soro em pó separadamente. Houve possibilidade de identificar a adição de soro de leite, porém sem discernimento da correlação entre o nível de adição e a quantidade de soro adicionada. ASDS-PAGE modificada mostrou bom desempenho na caracterização de proteínas de leite em pó, de soro de leite em pó e de suas misturas. (AU)

PERFIL SANITÁRIO DOS TRABALHADORES E CONTACTANTES DE GRANJAS SUINÍCOLAS DO OESTE DO PARANÁ, BRASIL

O presente trabalho teve como objetivo determinar o perfil sanitário dos trabalhadores e contactantes de 138 granjas suinícolas dos municípios de Palotina, Nova Santa Rosa e Maripá,Paraná, Brasil, a partir da prevalência da leptospirose, brucelose, toxoplasmose, leishmaniose, enteroparasitoses e picobirnaviroses e caracterizar as variáveis associadas a essas doenças. Foram avaliadas amostras de soros de 410 indivíduos pela soroaglutinação microscópica (SAM) para pesquisa de anticorpos IgG anti-Leptospira, teste de aglutinação bacteriana para pesquisa de anticorpos IgG anti-Brucella, imunoensaio de micropartículas por quimioluminescência (CMIA) para pesquisa de anticorpos IgG anti-Toxoplasma gondii e imunofluorescência indireta (IFI) para pesquisa de anticorpos IgG anti- Leishmania e nested-PCR para as amostras reagentes para Leishmania. A pesquisa de enteroparasitos foi realizada em amostras de fezes de 346 indivíduos pelos métodos de sedimentação espontânea, flutuação em sulfato de zinco e coloração de Ziehl-Neelsen modificada; e a pesquisa de Picobirnavírus (PBV) foi realizada em 258 amostras de fezes pela técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida e RT-PCR nas amostras com perfil eletroforético característico. Todos os participantes responderam a um questionário epidemiológico, para análise das variáveis associadas ao risco da infecção pelos agentes pesquisados. A prevalência da infecção da leptospirose e da brucelose foi de 2,4%, a toxoplasmose foi de 55,6%, a leishmaniose foi de 3,4% e três amostras foram positivas na nested-PCR para Leishmania. Foi verificada associação significativa entre o sexo masculino e a ocorrência de infecção por Leptospira spp. Os individuos com idade igual ou maior de 21 anos apresentaram maior risco de infecção pelo T. gondii. Outras variáveis estudadas como renda familiar, tempo de trabalho e tempo de moradia, não influenciaram na ocorrência desses agentes. A prevalência geral de enteroparasitoses foi de 23%. Os protozoários mais frequentes foram Endolimax nana (17,3%) e Entamoeba coli (6,9%). Outros protozoários encontrados foram E. histolytica/dispar (0,3%), Iodamoeba bustschlii (1,2%) e Giardia spp. (1,5%). Entre os helmintos foram observados o Hymenolepis nana (0,9%) e Ancilostomídeo (0,6%). Na análise estatística, a presença de Entamoeba coli foi associada ao risco da infecção por Endolimax nana (p<0,001; OR=8,4; IC 95%= 3,52 - 20,03). A prevalência de PBV foi de 11,2% (29/258). Não foi observada relação estatística significativa da co-infecção do PBV com os enteroparasitos encontrados. Verificouse que os trabalhadores e contactantes das granjas suinícolas foram expostos aos agentes da leptospirose, brucelose, toxoplasmose e leishmaniose, mas não houve associação entre a ocorrência das infecções e o trabalho com suinos. Os resultados demonstraram a ocorrência do PBV na região e novas pesquisas são necessárias para verificar o perfil epidemiológico desse vírus. Para controlar as infecções pelos agentes pesquisados é preciso instituir as ações preventivas, como a educação sanitária, para a população estudada

This study aimed to determine the health profile of workers and contactants from the 138 of pig farms Palotina, Nova Santa Rosa and Maripá, Paraná, Brazil, by the prevalence of leptospirosis, brucellosis, toxoplasmosis, leishmaniasis, enteroparasites and picobirnaviruses and also characterize variables associated with those diseases. We evaluated serum samples of 410 individuals for the microscopic agglutination test (SAM) for anti-Leptospira IgG antibodies, bacterial agglutination test for detection of anti-Brucella IgG antibodies, immunoassay microparticle chemiluminescence (CMIA) for detection of anti-Toxoplasma gondii IgG antibodies and indirect immunofluorescence (IIF) for anti-Leishmania IgG antibodies and nested-PCR the reagent samples to Leishmania. The enteroparasites research were conducted in stool samples form 346 individuals by the methods of spontaneous sedimentation, flotation in zinc sulphate and Ziehl-Neelsen modified; in 258 stool samples we performed electrophoresis in polyacrylamide gel to Picobrinavirus (PBV) and RT-PCR in the samples with electrophoretic profile distinctive. All participants answered an epidemiological questionnaire, to analyze the variables associated with risk of infection regarding the agents surveyed. The prevalence of infection of leptospirosis and brucellosis was 2,4%, toxoplasmosis was 55,6% and leishmaniasis 3,4% and three samples were positive in the nested-PCR for Leishmania. Significant association was found between male and the infection with Leptospira spp. Individuals aged equal to or greater than 21 years had a higher risk of infection with T. gondii. Other variables such as family income, working time and residence time, did not influence the occurrence of these agents. The overall prevalence of intestinal parasites was 23%. The most common protozoa were Endolimax nana (17,3%) and Entamoeba coli (6,9%). Other protozoans were found: E. histolytica / dispar (0,3%), Iodamoeba bustschlii (1,2%) and Giardia spp. (1,5%). Regarding the helminths we found Hymenolepis nana (0,9%) and ancilostomideo (0.6%). In the statistical analysis the presence of Entamoeba coli was associated with a risk of infection by Endolimax nana (p<0,001; OR = 8,4; 95% CI 3,52 to 20,03). The prevalence of PBV was 11,2% (29/258). There was no significant statistical relationship of co-infection with PBV and enteroparasites. Workers and contactants of pig farms were exposed to agents of leptospirosis, brucellosis, toxoplasmosis and leishmaniasis, but there was no association between the occurrence of infections and working with pigs. The results showed the occurrence of PBV in the region and further research is needed to verify the epidemiological profile of this virus. To control these infections we need to increase preventive actions, such as health education, for the population studied.

Padronização e avaliação de métodos moleculares para detecção de oocistos de Cryptosporidium spp. (Apicomplexa: Cryptosporiidae) em amostras fecais: extração de DNA genômico e PCR (reação em cadeia pela polimerase) / Standardization and evaluation of molecular methods to detect oocysts of Cryptosporidium spp. (Apicomplexa: Cryptosporiidae) in faecal samples: extraction of genomic DNA and PCR (polymerase chain reaction)

O protozoário parasita Cryptosporidium parvum tem sido reconhecido como um importante patógeno emergente. Para estudos moleculares, a maioria das técnicas para extração do DNA requer o uso de kits importados para concentrar, romper a parede muito resistente do oocisto e purificar o DNA das matrizes das amostras. O objetivo do estudo foi desenvolver um método simples e rápido, baseado na reação em cadeia pela polimerase (PCR) para detectar Cryptosporidium em fezes preservadas. Oocistos foram concentrados das amostras fecais pela flutuação em gradiente de sacarose. Dos oocistos purificados foi extraído o DNA genômico através de incubação em tampão de lise contendo 70 mM -mercaptoetanol, digerido com proteinase K e extraído com fenol-clorofórmio-álcool isoamílico. A padronização foi iniciada com a PCR única para detectar Cryptosporidium spp usando um par de primer genérico (AWA). Para identificar C. parvum foi realizada a PCR única com o par de primer especifico (LAX). Para aumentar a sensibilidade do método, foi testada a nested-PCR, usando o primer externo XIA. Foram analisadas 39 amostras de DNA do bezerro padrão, 52 amostras de 17 pacientes e 45 amostras de 14 animais. Os resultados foram: 54,28% de positividade na PCR AWA, e 71,42% na nested-PCR XIA/AWA, 67,74% na PCR LAX e 44,44% na nested-PCR XIA/LAX das amostras do bezerro. A positividade geral nas amostras de pacientes e

The protozoan parasite Cryptosporidium parvum has become recognised as important emerging human pathogens. For molecular studies, most of the techniques to extract genomic DNA require the use of imported kits to concentrate, rupture the very resistant oocyst wall, and purify the DNA from the samples matrix. The aim of this study was to develop a simple and rapid method based on polymerase chain reaction (PCR) to detect Cryptosporidium in preserved faeces. Oocysts were concentrated from faecal specimens by flotation on sucrose gradient. Genomic DNA was prepared from purified oocysts by adding a lysis buffer containing 70 mM -mercaptoethanol, digested with proteinase K and extracted with phenol-chlorophorm-isoamyl. The standardization was started by performing a one step PCR to detect Cryptosporidium spp. using a generic set of primer (AWA). To detect C. parvum a one step PCR was assayed using the specific primer (LAX). To increase the sensitivity of the method, were tested nested-PCR assays, using an outer primer (XIA). Thirty nine DNA samples were analysed from the standard calf, 52 samples from 17 patients and 45 samples from 14 animals. The results were: 54.28% positive samples by single PCR AWA, 71.42% by nested-PCR, 67.74% by single PCR LAX and 44.44% by nested-PCR for the standard calf. The overall positivity for human and animal samples were: 34.48% by single PCR and 54.

Estudo proteômico do efeito da atmosfera modificada na estabilidade da cor e na vida útil da carne suína acondicionada em embalagens de transporte tipo masterpack sob refrigeração / Proteomics study of the effect of modified atmosphere on colour estability and shelf life of pork meat wrapped in masterpack transport packages under refrigeration

Este trabalho teve como objetivo o estudo do efeito da atmosfera modificada associada a embalagens de transporte tipo \"masterpack, na vida útil da carne suína refrigerada. Foram realizadas análises microbiológicas, físico-químicas, bioquímicas e sensoriais visuais. Foram utilizados cortes de lombo suíno (Longissimus dorsi) acondicionados em bandejas de poliestireno expandido recobertas com filme de poli (cloreto de vinila). As bandejas foram acondicionadas em embalagens secundárias de transporte tipo masterpack (6 bandejas por embalagem). Foram utilizados 3 tipos de atmosfera modificada (Composições gasosas): A=75%O2+25%CO2; B= 50%O2+50%CO2 e C=100%CO2. As carnes foram armazenadas em câmara frigorífica por 22 dias. Em intervalos pré-determinados (1, 8, 15 e 22 dias) foram realizadas análises microbiológicas (psicrotróficos aeróbios e Pseudomonas sp.), físico-químicas (composição gasosa, pH, cor, perda de água por exsudação, perda de água por cocção e maciez), bioquímicas (oxidação lipídica, concentração de metamioglobina e eletroforese bi-dimensional) e sensoriais visuais (em balcão expositor). Observou-se que não houve crescimento de microrganismos psicrotróficos aeróbios e Pseudomonas sp. até 15 dias de armazenamento independente da composição gasosa. Houve efeito significativo (P<0,05) de Composição gasosa e de Tempo de armazenamento praticamente em todas as variáveis analisadas, com exceção da perda de água por exsudação, maciez e concentração de metamioglobina. As principais diferenças ocorreram com relação à cor das carnes. De maneira geral, os valores de L* aumentaram durante o armazenamento enquanto que os de a* diminuíram significando que ocorreu certa descoloração da carne. Os bifes das Composições A e B tiveram coloração mais rósea com valores de a* e c* superiores aos da Composição C. As amostras de carne da Composição C tiveram menores valores de TBARS que as demais. A análise sensorial indicou preferência do consumidor pelas amostras das Composições A e B e os resultados de cor determinados após a análise sensorial indicaram que após a abertura dos masterpacks, os bifes sofreram descoloração, sendo que os bifes da Composição A e B mantiveram a coloração rósea por mais tempo. Na análise de eletroforese bi-dimensional realizada com amostras de carne suína da Composição A em 3 tempos distintos, foram identificados média de 255 spots com ponto isoelétrico variando de 3 a 10 e peso molecular de 13 a 94 kDa. Concluiu-se que, do ponto de vista microbiológico, as três composições gasosas estudadas conservaram os bifes de lombo suíno por até 15 dias de armazenamento, porém, somente as atmosferas com altas concentrações de O2 (>50%) garantiram a preservação da cor e aparência geral dos bifes. A técnica da eletroforese bidimensional é promissora para o entendimento, em nível molecular, das mudanças, principalmente de cor, que ocorrem na carne embalada com atmosfera modificada durante o armazenamento. Porém, ainda há a necessidade de mais estudos

The aim of this work was to study the effect of modified atmosphere associated to \"masterpack\" transport packages in the shelf-life of refrigerated pork meat. Microbiological, physical-chemical, biochemical and visual analyses were made. Pork loin (Longissimus dorsi) cuts placed in trays of expanded polystyrene, covered with poly(vinyl chloride) films were used in this study. The trays were placed in a high gas barrier secondary masterpack (78.5 x 48.5 cm, 0.35m2, Cryovac) package, with six trays per masterpack (MP). Three modified atmosphere (gas compositions) were tested: A=75%O2+25%CO2; B= 50%O2+50%CO2 e C=100%CO2. The meat was kept in a refrigerated chamber for 22 days. At pre-established intervals (1, 8, 15 and 22 days) of storage, microbiological (aerobic psychrotrophic and Pseudomonas sp.), physical-chemical (gaseous composition, pH, colour, dripping loss, cooking loss and tenderness), biochemical (lipid oxidation, metmyoglobin concentration and bidimensional electrophoresis) and visual analyses were carried out. It was observed that for up to 15 days of storage there was neither growth of aerobic psychrotrophic microorganisms nor Pseudomonas sp. independent of the Gas composition. There was significant effect (P<0.05) of Gas composition and of Storage Time in almost all the analyzed variables, except for drip loss, tenderness and metmyoglobin concentration. The main differences found were related to the meat colour. In general, the values of L * increased during storage while a* decreased, meaning some discoloration of meat. The steaks of Gas compositions A and B had better coloration with values of the *a and c * greater than Treatment C. The samples of meat of Gas composition C had lower values for TBARS compared to other treatments. The sensory analysis indicated the panelists´ preference for the samples of Gas compositions A and B, and the colour tests made after the sensorial analysis indicated that the steaks of Treatment A and B maintained the pinky coloration for longer time. In the analysis of bi-dimensional electrophoresis applied to the samples of pork loin meat of Treatment A, carried out in 3 replicates, nearly 255 spots were identified with isoelectric point varying from 3 to 10 and molecular weight from 13 to 94 kDa. Based on the microbiological data, it was concluded that the three studied Gas combinations preserved the pork loin steaks for up to 15 days of storage, however, only the atmospheres with higher concentrations of O2 (>50%) guaranteed the preservation of the colour and the general appearance of the steaks. The bidimensional electrophoresis is a promising technique for the understanding, in molecular level, of the changes, mainly in colour, that happen in modified atmosphere packed meat. However, there is still need for further studies

Padronização e avaliação de métodos moleculares para detecção de oocistos de Cryptosporidium spp. (Apicomplexa: Cryptosporiidae) em amostras fecais: extração de DNA genômico e PCR (reação em cadeia pela polimerase) / Standardization and evaluation of molecular methods to detect oocysts of Cryptosporidium spp. (Apicomplexa: Cryptosporiidae) in faecal samples: extraction of genomic DNA and PCR (polymerase chain reaction)

O protozoário parasita Cryptosporidium parvum tem sido reconhecido como um importante patógeno emergente. Para estudos moleculares, a maioria das técnicas para extração do DNA requer o uso de kits importados para concentrar, romper a parede muito resistente do oocisto e purificar o DNA das matrizes das amostras. O objetivo do estudo foi desenvolver um método simples e rápido, baseado na reação em cadeia pela polimerase (PCR) para detectar Cryptosporidium em fezes preservadas. Oocistos foram concentrados das amostras fecais pela flutuação em gradiente de sacarose. Dos oocistos purificados foi extraído o DNA genômico através de incubação em tampão de lise contendo 70 mM -mercaptoetanol, digerido com proteinase K e extraído com fenol-clorofórmio-álcool isoamílico. A padronização foi iniciada com a PCR única para detectar Cryptosporidium spp usando um par de primer genérico (AWA). Para identificar C. parvum foi realizada a PCR única com o par de primer especifico (LAX). Para aumentar a sensibilidade do método, foi testada a nested-PCR, usando o primer externo XIA. Foram analisadas 39 amostras de DNA do bezerro padrão, 52 amostras de 17 pacientes e 45 amostras de 14 animais. Os resultados foram: 54,28% de positividade na PCR AWA, e 71,42% na nested-PCR XIA/AWA, 67,74% na PCR LAX e 44,44% na nested-PCR XIA/LAX das amostras do bezerro. A positividade geral nas amostras de pacientes e

The protozoan parasite Cryptosporidium parvum has become recognised as important emerging human pathogens. For molecular studies, most of the techniques to extract genomic DNA require the use of imported kits to concentrate, rupture the very resistant oocyst wall, and purify the DNA from the samples matrix. The aim of this study was to develop a simple and rapid method based on polymerase chain reaction (PCR) to detect Cryptosporidium in preserved faeces. Oocysts were concentrated from faecal specimens by flotation on sucrose gradient. Genomic DNA was prepared from purified oocysts by adding a lysis buffer containing 70 mM -mercaptoethanol, digested with proteinase K and extracted with phenol-chlorophorm-isoamyl. The standardization was started by performing a one step PCR to detect Cryptosporidium spp. using a generic set of primer (AWA). To detect C. parvum a one step PCR was assayed using the specific primer (LAX). To increase the sensitivity of the method, were tested nested-PCR assays, using an outer primer (XIA). Thirty nine DNA samples were analysed from the standard calf, 52 samples from 17 patients and 45 samples from 14 animals. The results were: 54.28% positive samples by single PCR AWA, 71.42% by nested-PCR, 67.74% by single PCR LAX and 44.44% by nested-PCR for the standard calf. The overall positivity for human and animal samples were: 34.48% by single PCR and 54.