Phagocytotic activity and gene expression of leukocytes isolated from Astyanax lacustris / Atividade fagocítica e expressão gênica de leucócitos isolados de Astyanax lacustris

The constant intensification of aquaculture has considerable increased the stress levels of farmed fish and, consequently, the number and intensity of diseases outbreaks. Thus, studies on fish immune response, especially regarding the interaction of fish leukocytes with potential pathogens and xenobiotics are of great importance in order to develop new prophylactic and curative strategies. We isolated leukocytes from the head kidney of Astyanax lacustris­an important Neotropical fish species for aquaculture and a potential model for Neotropical aquaculture research­using a Percoll centrifugation protocol. The isolated leukocytes were incubated with lipopolysaccharide (LPS), and the expression of genes IL-1ß, IL-8, LysC, and LysG were measured. We assessed the phagocytotic activity of leukocytes using Congo red-dyed yeast, a novel and cost-effective protocol that has been developed in this study. The isolated leukocytes responded to LPS induction, exhibiting strong IL-1ß and IL-8 upregulation, two of the most important pro-inflammatory interleukins for vertebrates immune reponse. The optimal concentration of yeast for the phagocytic assay was 106 cells mL-1, resulting in acceptable phagocytic capacity (PC) but without excess of yeasts during the counting process, ensuring a high precision and accuracy of the method. To the best of our knowledge, the present study is the first to investigate the in vitro gene expression and phagocytic activity of leukocytes isolated from A. lacustris. Our findings will serve as a reference for future studies on the immunology and toxicology of Neotropical fish.

A constante intensificação da aquicultura tem aumentado consideravelmente os níveis de estresse dos animais cultivados e, consequentemente, o número e a intensidade dos surtos de doenças. Logo, estudos sobre a resposta imune dos peixes, especialmente relacionados com a interação dos leucócitos de peixes com potenciais patógenos e xenobióticos, são de grande importância para o desenvolvimento de novas estratégias profiláticas e curativas. No presente trabalho, nós obtivemos sucesso ao isolar leucócitos oriundos do rim cranial de Astyanax lacustris ­ uma importante espécie de peixe Neotropical para a aquicultura e um modelo em potencial para pesquisas em aquicultura Neotropical ­ usando um protocolo de centrifugação com Percoll. Os leucócitos isolados foram incubados com lipossacarídeo (LPS) e, a expressão dos genes IL-1ß, IL-8, LysC, e LysG foi avaliada. Ainda, um novo protocolo para avaliação da atividade fagocítica dos leucócitos utilizando leveduras coradas com Vermelho Congo foi estabelecido. Os leucócitos isolados responderam à indução com LPS, exibindo up regulation dos genes IL-1ß e IL-8, duas das interleucinas pró-inflamatórias mais importantes para a resposta imune de vertebrados. Além do mais, a concentração ótima de leveduras para a avaliação da fagocitose foi de 106 células mL-1, resultando em uma capacidade fagocítica (PC) aceitável, mas sem excesso de leveduras durante o processo de contagem, garantindo maior precisão e eficácia do método. Até o presente momento, o presente estudo é o primeiro a investigar a expressão gênica e atividade fagocítica de leucócitos isolados de A. lacustris através da abordagem in vitro. Ainda, nossos resultados servirão de referência para futuros estudos em imunologia e toxicologia de peixes Neotropicais.

Effect of flunixin or ketoprofen in caudectomy by elastration in lambs: pain and neutrophil function

ABSTRACT: Painful procedures can affect the function of innate immune cells, such as neutrophils and macrophages, increasing the risk of infectious diseases. The present work aimed to verify if the analgesics flunixin meglumine or ketoprofen can attenuate the pain/discomfort of newborn lambs submitted by elastration tail docking and thereby avoid the impairment of blood granulocytes function. Twenty-one neonate lambs were divided into three treatments: the control group (n=7), not subjected to caudectomy; the flunixin group (n=7), subjected to caudectomy under local anesthesia and analgesia with two doses of flunixin meglumine; and the ketoprofen group (n=7), subjected to caudectomy under local anesthesia and two doses of ketoprofen. Pain indicators were observed by pain posture score (PS), the number of vocalizations (V), frequency of the movement of the ears (EF), and respiratory rates (RR), observed by a 10 minutes videos for each time points: -15min, 6h, 48h, and 144h. At the same time points, the reactive oxygen species (ROS) production and phagocytosis of blood granulocytes were measured by flow cytometry. At 6h after caudectomy, there was a pain indicator increase (RR, V, and PS), a blood granulocyte percentage increase, and a granulocytes phagocytosis reduction for both groups. At 48h, the ketoprofen group spend more time in pain posture and, at 144h, they exhibited a ROS production granulocyte reduction without signs of pain. We conclude the flunixin meglumine and ketoprofen did not prevent the acute pain/discomfort caused by caudectomy, because the groups showed a pain behavior and impaired of the innate immune response however, the flunixin meglumine was effective in controlling the chronic pain and their effects on blood granulocytes function in compare ketoprofen.

RESUMO: Procedimentos dolorosos podem afetar a função das células imunes inatas como neutrófilos e macrófagos, aumentando o risco de ocorrer doenças infeciosas. Desta maneira, o presente trabalho pretendeu verificar se os analgésicos flunixin meglumine ou cetoprofeno conseguem atenuar a dor/desconforto de cordeiros neonatos submetidos a caudectomia por elastração, evitando assim o comprometimento da função dos granulócitos sanguíneos. Para tanto 21 cordeiras foram aleatoriamente divididas em três tratamentos: grupo controle (n=7) não submetido a caudectomia, grupo flunixin (n=7) submetido a caudectomia precedida por anestesia local e duas doses de flunixin meglumine, e cetoprofeno (n=7) submetido a caudectomia precedida por anestesia local e duas doses de cetoprofeno. Mensurou-se os indicadores de dor/desconforto após caudectomia por observações de escore de postura de dor (EP), número de vocalizações (V), frequência de movimentar as orelhas (FO) e frequência respiratória (FR), observados em vídeos de 10 minutos nos momentos -15 min e 6, 48 e 144h. Nos mesmos momentos, avaliou-se a as funções de produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e de fagocitose por granulócitos sanguineos em citometria de fluxo. Notou-se aumento dos indicadores de dor (FR, de V e de EP), da porcentagem dos granulócitos sanguíneos e redução da eficiência de fagocitose em ambos os grupos as 6h. As 48h, os animais do grupo cetoprofeno ainda apresentava mais tempo em postura de dor que os demais grupos e as 144h, apresentou redução da produção ERO por granulócitos. Tais achados permitem concluir que tanto o flunexin meglumine como o cetoprofeno não preveniram dor/desconforto agudo promovido pela elastração, pois os dois grupos manifestaram comportamento de dor e redução da resposta imune inata. Ainda, o analgésico flunixin meglumine foi efetivo em controlar a dor mais tardia e seus efeitos na função de granulócitos sanguíneos em comparação ao cetoprofeno.

Effect of flunixin or ketoprofen in caudectomy by elastration in lambs: pain and neutrophil function / Efeito de flunixin ou cetoprofeno em cordeiras submetidas a caudectomia por elastração: dor e função neutrofílica

Painful procedures can affect the function of innate immune cells, such as neutrophils and macrophages, increasing the risk of infectious diseases. The present work aimed to verify if the analgesics flunixin meglumine or ketoprofen can attenuate the pain/discomfort of newborn lambs submitted by elastration tail docking and thereby avoid the impairment of blood granulocytes function. Twenty-one neonate lambs were divided into three treatments: the control group (n=7), not subjected to caudectomy; the flunixin group (n=7), subjected to caudectomy under local anesthesia and analgesia with two doses of flunixin meglumine; and the ketoprofen group (n=7), subjected to caudectomy under local anesthesia and two doses of ketoprofen. Pain indicators were observed by pain posture score (PS), the number of vocalizations (V), frequency of the movement of the ears (EF), and respiratory rates (RR), observed by a 10 minutes videos for each time points: -15min, 6h, 48h, and 144h. At the same time points, the reactive oxygen species (ROS) production and phagocytosis of blood granulocytes were measured by flow cytometry. At 6h after caudectomy, there was a pain indicator increase (RR, V, and PS), a blood granulocyte percentage increase, and a granulocytes phagocytosis reduction for both groups. At 48h, the ketoprofen group spend more time in pain posture and, at 144h, they exhibited a ROS production granulocyte reduction without signs of pain. We conclude the flunixin meglumine and ketoprofen did not prevent the acute pain/discomfort caused by caudectomy, because the groups showed a pain behavior and impaired of the innate immune response however, the flunixin meglumine was effective in controlling the chronic pain and their effects on blood granulocytes function in compare ketoprofen.(AU)

Procedimentos dolorosos podem afetar a função das células imunes inatas como neutrófilos e macrófagos, aumentando o risco de ocorrer doenças infeciosas. Desta maneira, o presente trabalho pretendeu verificar se os analgésicos flunixin meglumine ou cetoprofeno conseguem atenuar a dor/desconforto de cordeiros neonatos submetidos a caudectomia por elastração, evitando assim o comprometimento da função dos granulócitos sanguíneos. Para tanto 21 cordeiras foram aleatoriamente divididas em três tratamentos: grupo controle (n=7) não submetido a caudectomia, grupo flunixin (n=7) submetido a caudectomia precedida por anestesia local e duas doses de flunixin meglumine, e cetoprofeno (n=7) submetido a caudectomia precedida por anestesia local e duas doses de cetoprofeno. Mensurou-se os indicadores de dor/desconforto após caudectomia por observações de escore de postura de dor (EP), número de vocalizações (V), frequência de movimentar as orelhas (FO) e frequência respiratória (FR), observados em vídeos de 10 minutos nos momentos -15 min e 6, 48 e 144h. Nos mesmos momentos, avaliou-se a as funções de produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e de fagocitose por granulócitos sanguineos em citometria de fluxo. Notou-se aumento dos indicadores de dor (FR, de V e de EP), da porcentagem dos granulócitos sanguíneos e redução da eficiência de fagocitose em ambos os grupos as 6h. As 48h, os animais do grupo cetoprofeno ainda apresentava mais tempo em postura de dor que os demais grupos e as 144h, apresentou redução da produção ERO por granulócitos. Tais achados permitem concluir que tanto o flunexin meglumine como o cetoprofeno não preveniram dor/desconforto agudo promovido pela elastração, pois os dois grupos manifestaram comportamento de dor e redução da resposta imune inata. Ainda, o analgésico flunixin meglumine foi efetivo em controlar a dor mais tardia e seus efeitos na função de granulócitos sanguíneos em comparação ao cetoprofeno.(AU)

Effect of flunixin or ketoprofen in caudectomy by elastration in lambs: pain and neutrophil function / Efeito de flunixin ou cetoprofeno em cordeiras submetidas a caudectomia por elastração: dor e função neutrofílica

Painful procedures can affect the function of innate immune cells, such as neutrophils and macrophages, increasing the risk of infectious diseases. The present work aimed to verify if the analgesics flunixin meglumine or ketoprofen can attenuate the pain/discomfort of newborn lambs submitted by elastration tail docking and thereby avoid the impairment of blood granulocytes function. Twenty-one neonate lambs were divided into three treatments: the control group (n=7), not subjected to caudectomy; the flunixin group (n=7), subjected to caudectomy under local anesthesia and analgesia with two doses of flunixin meglumine; and the ketoprofen group (n=7), subjected to caudectomy under local anesthesia and two doses of ketoprofen. Pain indicators were observed by pain posture score (PS), the number of vocalizations (V), frequency of the movement of the ears (EF), and respiratory rates (RR), observed by a 10 minutes videos for each time points: -15min, 6h, 48h, and 144h. At the same time points, the reactive oxygen species (ROS) production and phagocytosis of blood granulocytes were measured by flow cytometry. At 6h after caudectomy, there was a pain indicator increase (RR, V, and PS), a blood granulocyte percentage increase, and a granulocytes phagocytosis reduction for both groups. At 48h, the ketoprofen group spend more time in pain posture and, at 144h, they exhibited a ROS production granulocyte reduction without signs of pain. We conclude the flunixin meglumine and ketoprofen did not prevent the acute pain/discomfort caused by caudectomy, because the groups showed a pain behavior and impaired of the innate immune response however, the flunixin meglumine was effective in controlling the chronic pain and their effects on blood granulocytes function in compare ketoprofen.(AU)

Procedimentos dolorosos podem afetar a função das células imunes inatas como neutrófilos e macrófagos, aumentando o risco de ocorrer doenças infeciosas. Desta maneira, o presente trabalho pretendeu verificar se os analgésicos flunixin meglumine ou cetoprofeno conseguem atenuar a dor/desconforto de cordeiros neonatos submetidos a caudectomia por elastração, evitando assim o comprometimento da função dos granulócitos sanguíneos. Para tanto 21 cordeiras foram aleatoriamente divididas em três tratamentos: grupo controle (n=7) não submetido a caudectomia, grupo flunixin (n=7) submetido a caudectomia precedida por anestesia local e duas doses de flunixin meglumine, e cetoprofeno (n=7) submetido a caudectomia precedida por anestesia local e duas doses de cetoprofeno. Mensurou-se os indicadores de dor/desconforto após caudectomia por observações de escore de postura de dor (EP), número de vocalizações (V), frequência de movimentar as orelhas (FO) e frequência respiratória (FR), observados em vídeos de 10 minutos nos momentos -15 min e 6, 48 e 144h. Nos mesmos momentos, avaliou-se a as funções de produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e de fagocitose por granulócitos sanguineos em citometria de fluxo. Notou-se aumento dos indicadores de dor (FR, de V e de EP), da porcentagem dos granulócitos sanguíneos e redução da eficiência de fagocitose em ambos os grupos as 6h. As 48h, os animais do grupo cetoprofeno ainda apresentava mais tempo em postura de dor que os demais grupos e as 144h, apresentou redução da produção ERO por granulócitos. Tais achados permitem concluir que tanto o flunexin meglumine como o cetoprofeno não preveniram dor/desconforto agudo promovido pela elastração, pois os dois grupos manifestaram comportamento de dor e redução da resposta imune inata. Ainda, o analgésico flunixin meglumine foi efetivo em controlar a dor mais tardia e seus efeitos na função de granulócitos sanguíneos em comparação ao cetoprofeno.(AU)

Salinomycin intoxication in pigs associated with the use of tiamulin in the State of Santa Catarina, Brazil / Intoxicação por salinomicina em suínos associado ao uso de tiamulina no Estado de Santa Catarina

This paper describes a spontaneous outbreak of toxic myopathy in finishing pigs due to the ingestion of feed with salinomycin associated with tiamulin and addresses the control methods performed during the outbreak to minimize economic losses resulting from the intoxication. A lot of 940 pigs fed feed containing 30 ppm salinomycin received 100 ppm tiamulin (via water) to control recurrent respiratory diseases on the farm. After ingesting tiamulin, some animals manifested clinical signs of motor incoordination, stiff gait, reluctance to move, muscle weakness and tremors, dyspnea, depression, and decubitus, remaining in "sitting-dog position" or with the abduction of the pelvic limbs, and rested on tip-toes when in a standing position. Two animals were euthanized for macro-and microscopic evaluation. The other sick animals received supportive anti-inflammatory treatment. The most relevant macroscopic finding observed during necropsy was the slight pallor of the pelvic limb muscles. The main histopathological findings consisted of multifocal areas of hyaline degeneration and marked necrosis of skeletal myofibers, with macrophage infiltrate associated with cell regeneration and skeletal fiber phagocytosis. These lesions were more intense in the longissimus dorsi, diaphragm, and masseter muscles. The definitive diagnosis was based on epidemiological aspects and clinical lesional conditions compatible with toxic myopathy secondary to ionophore intoxication.(AU)

Este trabalho descreve um surto espontâneo de miopatia tóxica em suínos na fase de terminação, decorrente da ingestão de ração contendo salinomicina associada a tiamulina e aborda os métodos de controle realizados durante o surto, para minimizar os prejuízos econômicos decorrentes da intoxicação. Um lote de 940 suínos alimentados com ração contendo 30 ppm de salinomicina recebeu tiamulina na dose de 100 ppm (via água) para controle de doenças respiratórias recorrentes na granja. Após a ingestão da tiamulina, alguns animais manifestaram sinais clínicos de incoordenação motora, andar rígido, relutância ao movimento, fraqueza e tremores musculares, dispneia, depressão e decúbito, permanecendo em "posição de cão sentado" ou com abdução dos membros pélvicos, e quando em estação, apoiavam-se nas pinças dos cascos. Dois animais foram eutanasiados para avaliação macro e microscópica. Os demais animais doentes receberam tratamento suporte com anti-inflamatório. O achado macroscópico mais relevante observado durante a necropsia foi palidez leve dos músculos dos membros pélvicos. Os principais achados histopatológicos foram áreas multifocais de degeneração hialina e necrose acentuada de miofibras esqueléticas, com infiltrado de macrófagos associado às figuras de regeneração celular e à fagocitose de fibras esqueléticas. Essas lesões foram mais intensas nos músculos longissimus dorsi, diafragma e masseter. O diagnóstico definitivo baseou-se nos aspectos epidemiológicos e no quadro clínico-lesional compatíveis com miopatia tóxica secundária a intoxicação por ionóforo.(AU)

Once upon a time, inflammation

Inflammation has accompanied humans since their first ancestors appeared on Earth. Aulus Cornelius Celsus (25 BC-50 AD), a Roman encyclopedist, offered a still valid statement about inflammation: "Notae vero inflammationis sunt quatuor: rubor et tumor cum calore and dolore", defining the four cardinal signs of inflammation as redness and swelling with heat and pain. While inflammation has long been considered as a morbid phenomenon, John Hunter (18th century) and Elie Metchnikoff (19th century) understood that it was a natural and beneficial event that aims to address a sterile or an infectious insult. Many other famous scientists and some forgotten ones have identified the different cellular and molecular players, and deciphered the different mechanisms of inflammation. This review pays tribute to some of the giants who made major contributions, from Hippocrates to the late 19th and first half of the 20th century. We particularly address the discoveries related to phagocytes, diapedesis, chemotactism, and fever. We also mention the findings of the various inflammatory mediators and the different approaches designed to treat inflammatory disorders.(AU)

Primary culture macrophages from fish as potential experimental model in toxicity studies with multiwalled carbon nanotubes

Multiwalled carbon nanotube (MWCNT) has been broadly used in several sectors of society. This material when exposed to the environment might reach the aquatic animals and cause toxic effects. Here, it was evaluated the MWCNTs toxicity in melanomacrophages primary culture that was submitted to 1 µ gm L-1 MWCNTs for 24 hours. After exposition to MWCNT, 48 and 59% liver and spleen melanomacrophages were healthy, respectively. The control group presented 85% viability. Phagocytosis activity of melanomacrophages was observed by presence of black inclusions in cytoplasm. The findings indicate MWCNT was cytotoxic to melanomacrophages, where its release and effect into aquatic environment must be more studied. Finally, the melanomacrophages present large potential as experimental model for evaluation of carbon-based nanomaterial toxicity.

Primary culture macrophages from fish as potential experimental model in toxicity studies with multiwalled carbon nanotubes

Multiwalled carbon nanotube (MWCNT) has been broadly used in several sectors of society. This material when exposed to the environment might reach the aquatic animals and cause toxic effects. Here, it was evaluated the MWCNTs toxicity in melanomacrophages primary culture that was submitted to 1 µ gm L-1 MWCNTs for 24 hours. After exposition to MWCNT, 48 and 59% liver and spleen melanomacrophages were healthy, respectively. The control group presented 85% viability. Phagocytosis activity of melanomacrophages was observed by presence of black inclusions in cytoplasm. The findings indicate MWCNT was cytotoxic to melanomacrophages, where its release and effect into aquatic environment must be more studied. Finally, the melanomacrophages present large potential as experimental model for evaluation of carbon-based nanomaterial toxicity.(AU)

Once upon a time, inflammation

Inflammation has accompanied humans since their first ancestors appeared on Earth. Aulus Cornelius Celsus (25 BC-50 AD), a Roman encyclopedist, offered a still valid statement about inflammation: "Notae vero inflammationis sunt quatuor: rubor et tumor cum calore and dolore", defining the four cardinal signs of inflammation as redness and swelling with heat and pain. While inflammation has long been considered as a morbid phenomenon, John Hunter (18th century) and Elie Metchnikoff (19th century) understood that it was a natural and beneficial event that aims to address a sterile or an infectious insult. Many other famous scientists and some forgotten ones have identified the different cellular and molecular players, and deciphered the different mechanisms of inflammation. This review pays tribute to some of the giants who made major contributions, from Hippocrates to the late 19th and first half of the 20th century. We particularly address the discoveries related to phagocytes, diapedesis, chemotactism, and fever. We also mention the findings of the various inflammatory mediators and the different approaches designed to treat inflammatory disorders.(AU)

In vivo phagocytosis and hematology in Astyanax altiparanae, a potential model for surrogate technology

Although the potential of surrogate propagation technology for aquaculture and conservation of Neotropical fish, the poor understanding of the host immune system may results in rejection and destruction of the donor material. Thus, it is necessary to study and to develop methods to evaluate the effects of immunosuppressive drugs employment and to evaluate the immunocompatibility between donor and receptor. Thus, the present study aimed to optimize a methodology to assess in vivo phagocytosis in Astyanax altiparanae using Saccharomyces cerevisiae and to evaluate their hematological response resultant from the inflammatory induction. To this, S. cerevisiae were labeled with Congo red and injected in the coelomic cavity of A. altiparanae at the concentration of 2.5 x 106 cells mL-1. A PBS solution and a non-injected group were kept as control. Fish blood was sampled and the phagocytic capacity and index were determined at 1, 2, 3 and 6 h post-injection (hpi). The yeast injection successfully stimulated phagocytosis, with the best result for phagocytosis assessment after 2 hpi. Moreover, it was achieved a high traceability of phagocytized and non-phagocytized yeast under optic microscopy analysis due to the Congo red labeling. The hematological profile was similar to usually observed in early infections, indicating lymphocyte migration to inflammatory site and increase in number of circulating phagocytes due to natural response to inflammatory stimulus. In conclusion, our method was efficient to assess in vivo phagocytosis in A. altiparanae and will be an important tool to evaluate the efficacy of immunosuppressive drugs in this species. Additionally, these results may serve as support for further studies in fish immunocompetence, both in laboratory and in field conditions.(AU)

Apesar do potencial apresentado pela tecnologia de propagação mediada para a aquicultura e conservação de peixes Neotropicais, o pobre entendimento do sistema imune do hospedeiro pode resultar na rejeição e destruição do material do doador. Com isso, se fazem necessários o estudo e o desenvolvimento de métodos para análise tanto dos efeitos de drogas imunossupressoras quanto para a avaliação da imunocompatibilidade entre doadores e receptores. Logo, o presente estudo teve como objetivo aperfeiçoar um método para analisar a fagocitose in vivo em Astyanax altiparanae usando Saccharomyces cerevisiae marcado e avaliar seu perfil hematológico resultante da indução inflamatória. Para isso, S. cerevisiae foram marcados com vermelho Congo e injetados na cavidade celomática dos A. altiparanae na concentração de 2,5 x 106 células.mL-1. Peixes injetados com PBS e peixes não injetados foram mantidos como controle. Sangue foi colhido e a capacidade fagocítica e o índice fagocítico foram determinados após 1, 2, 3 e 6 horas após à injeção (hpi). A injeção de levedura estimulou a fagocitose com sucesso, com o melhor resultado atingido após 2 hpi. Ainda, foi observada uma alta rastreabilidade das leveduras fagocitadas e não fagocitadas sob microscopia óptica devido à marcação com vermelho Congo. O perfil hematológico foi similar ao observado usualmente em infecções recém-induzidas, indicando migração de linfócitos ao sítio inflamatório e aumento no número de fagócitos circulantes devido à resposta natural ao estímulo inflamatório. Como conclusão, nosso método foi eficiente para analisar a fagocitose in vivo em A. altiparanae e será uma ferramenta importante para a avaliação de eficácia de drogas imunossopressoras para esta espécie. Em adição, estes resultados podem contribuir para futuros estudos em imunocompetência em peixes, tanto em âmbito laboratorial quanto a campo.(AU)

Avaliação da atividade funcional dos neutrófilos sanguíneos em ovelhas primíparas e pluríparas da raça Lacaune / [Functional evaluation of blood neutrophils in primiparous and pluriparous Lacaune ewes]

This study aimed to evaluate the neutrophil oxidative metabolism and phagocytosis of Zymonsan particles of primiparous and pluriparous Lacaune ewes during the first 30 days after lambing. A total of 20 ewes were evaluated, 10 primiparous (GPR) and 10 pluriparous (GPL). Evaluation of basal oxidative metabolism was performed using the nitroblue tetrazolium (NBT) technique, stimulating neutrophil phagocytosis with Zymosan particles. Blood samples were collected at parturition day (M1) and 1, 3, 7, 15 and 30 days after parturition, corresponding to M2, M3, M4, M5 and M6, respectively. In relation to the groups, GPR presented lower oxidative basal metabolism neutrophils in M1 compared to M4, in M3 with M1, M2, M4 and M5. In M4 and M5 differences were found at all times and in M6 with M4 and M5. Higher percentage of neutrophils than phagocytes were found in M4, M5 and M6 than in M1 and M2 in GPL animals. At all times GPR presented a lower percentage of phagocytosis than GPL. Thus it is concluded that the immune response in pluriparous sheep was more efficient than in primiparous sheep.(AU)

Influência do vírus da leucemia bovina sobre a atividade imunológica por meio da função neutrofílica / Influence of the bovine leukemia virus on the immunological activity by the neutrophilic function

Background: Bovine leukemia virus (VLB) is an oncogenic deltaretrovirus associated with the development of persistent lymphocytosis (LP) and lymphosarcomas in cattle. LP is characterized by chronic elevation of the number of circulating lymphocytes, in the case of B lymphocytes. Several studies have described functional changes in various leukocyte populations in both blood and milk in VLB-infected animals. The impact of some chronic diseases of low lethality is aggravated by the emergence of comorbidities.The objective of the present study was to evaluate the oxidative metabolism and neutrophil phagocytosis of bovines of the Holtein breed naturally infected with the bovine leukemia virus (VLB). Materials, Methods & Results: In this study, 20 cows were divided into three groups: (NG) seven non-seroreagent animals for VLB and without hematological alterations; (GAL) eight seroreagent animals for VLB and without hematological alterations; and (GLP) five seroreagent animals for VLB with persistent lymphocytosis (LP). The oxidative metabolism of neutrophils was determined by the tetrazolium nitroblast reduction test stimulated or not with Zymosan particles. The percentage of neutrophils that phagocytosed Zymosan particle (s) was also evaluated. The data were initially evaluated for normality and homoscedasticity by the Shapiro-Wilk test. Then the ANOVA test followed by the Student-Newman-Keuls test was applied for the comparison between the NG, GAL and GLP animals. Comparison between the NG animals and the seroreagent animals for the VLB (GVLB) was also performed through the unpaired Student’s t-test. The value of P < 0.05 was considered significant. No significant differences were observed in oxidative neutrophil metabolism in stimulated and non-stimulated samples with Zymosan particles nor in the percentage...

Marbofloxacin induces leishmanicidal activity and less inflammatory response in Leishmania chagasi infected macrophages / Marbofloxacina induz atividade leishmanicida e menos resposta inflamatória em macrófagos infectados por Leishmania chagasi / Marbofloxacino induce actividad leishmanicida y menor respuesta inflamatoria en macrófagos infectados con Leishmania chagasi

Marbofloxacin has promising leishmanicidal activity due to the direct action on the Leishmania chagasi amastigotes. It was developed only for veterinary medicine uses, and it could be used as an drug for the treatment of Canine Visceral Leishmaniasis (CVL).In the present study, we evaluated the leishmanicidal effect and macrophage modulation of marbofloxacin in macrophages infected with amastigotes of L. chagasi. Macrophages were collected from peritoneum of BALB/c mice and infected with promastigotes of L. chagasi. After internalization and transformation into amastigotes forms, cells were treated with marbofloxacinin concentration of100, 500 and 750 μg/mL for 18 hours. The leishmanicidal effect was evaluated by morphological spects of amastigotes inside of macrophages by phagocytosis assay and detection of death amastigotes and macrophages by TUNEL assay. Macrophage modulation was evaluated by release of cytotoxic metabolites and cytokine production. The results showed that L. chagasi-infected macrophages treated with the highest concentration of the drug showed lower amount of amastigotes into the macrophages (p<0,0632) than untreated infected cells. There was pronounced presence of cellular vacuoles in the treated infected-cells, and more apoptotic amastigotes in alive macrophages. It was observed decreased levels of H2O2, IL-1β, IL-6, and TNF-αdose-dependent of marbofloxacin in infected macrophages. The results indicate the leishmanicidal effect of marbofloxacin in infected macrophages and immunomodulation actions in these cells.

A marbofloxacina tem promissora atividade leishmanicida devido à ação direta sobre as amastigotas de Leishmania chagasi. Foi desenvolvido apenas para uso em medicina veterinária, podendo ser utilizado no tratamento da Leishmaniose Visceral Canina (LVC). No presente estudo, avaliamos o efeito leishmanicida e a modulação macrofágica da marbofloxacina em macrófagos infectados com amastigotas de L. chagasi. Os macrófagos foram coletados do peritônio de camundongos BALB/c infectados com promastigotas de L. chagasi. Após internalização e transformação em formas amastigotas, as células foram tratadas com marbofloxacina nas concentrações 100, 500 e 750μg / mL por 18 horas. O efeito leishmanicida foi avaliado pelos aspectos morfológicos de amastigotas dentro de macrófagos, por ensaio de fagocitose e detecção de amastigotas e macrófagos mortos por ensaio TUNEL. A modulação dos macrófagos foi avaliada pela liberação de metabólitos citotóxicos e produção de citocinas. Os resultados mostraram que macrófagos infectados com L. chagasi tratados com a maior concentração da droga apresentaram menor quantidade de amastigotas nos macrófagos (p <0,0632) do que células infectadas não tratadas. Houve a presença pronunciada de vacúolos celulares nas células infectadas tratadas, e mais amastigotas apoptóticas em macrófagos vivos. Observou-se diminuição dos níveis de H2O2, IL-1β, IL-6 e TNF-αdependente da dose de marbofloxacina em macrófagos infectados. Os resultados indicam o efeito leishmanicida da marbofloxacina em macrófagos infectados e ações imunomoduladoras nessas células.

El marbofloxacino tiene una actividad leishmanicida prometedora debido a la acción directa sobre amastigotes de Leishmania chagasi. Fue desarrollado solo para uso en medicina veterinaria y puede usarse en el tratamiento de la leishmaniasis visceral canina (LVC). En el presente estudio, evaluamos el efecto leishmanicida y la modulación de macrófagosde marbofloxacino en macrófagos infectados con amastigotes de L. chagasi. Se recogieron macrófagos del peritoneo de ratones BALB/c infectados con promastigotes de L. chagasi. Despuésde la internalizacion y transformacion en formas amastigotes, las células se trataron con marbofloxacina a concentraciones de 100, 500 y 750 μg / ml durante 18 horas. El efecto leishmanicida se evaluó mediante los aspectos morfológicosde amastigotes dentro de macrófagos, mediante ensayo de fagocitosis y detección de amastigotes y macrófagos muertos mediante ensayo TUNEL. La modulación de los macrófagos se evaluó mediante la liberación de metabolitos citotóxicos y la producción de citocinas. Los resultados mostraron que los macrófagos infectados con L. chagasi tratados con la concentración más altas del fármaco tenían una menor cantidad de amastigotes en los macrófagos (p <0,0632) que las células infectadas no tratadas. Hubo una presencia pronunciada de vacuolas celulares en las células infectadas tratadas y más amastigotes apoptóticas en macrófagos vivos. Se observó una disminuicón en los niveles de H2O2, IL-1β, IL-6 y TNF-α dependiendo de la dosis de marbofloxacino en macrófagos infectados. Los resultados indican el efecto leishmanicida de el marbofloxacino en macrófagos infectados y acciones inmunomoduladoras en estas células.

Marbofloxacin induces leishmanicidal activity and less inflammatory response in Leishmania chagasi infected macrophages / Marbofloxacina induz atividade leishmanicida e menos resposta inflamatória em macrófagos infectados por Leishmania chagasi / Marbofloxacino induce actividad leishmanicida y menor respuesta inflamatoria en macrófagos infectados con Leishmania chagasi

Marbofloxacin has promising leishmanicidal activity due to the direct action on the Leishmania chagasi amastigotes. It was developed only for veterinary medicine uses, and it could be used as an drug for the treatment of Canine Visceral Leishmaniasis (CVL).In the present study, we evaluated the leishmanicidal effect and macrophage modulation of marbofloxacin in macrophages infected with amastigotes of L. chagasi. Macrophages were collected from peritoneum of BALB/c mice and infected with promastigotes of L. chagasi. After internalization and transformation into amastigotes forms, cells were treated with marbofloxacinin concentration of100, 500 and 750 μg/mL for 18 hours. The leishmanicidal effect was evaluated by morphological spects of amastigotes inside of macrophages by phagocytosis assay and detection of death amastigotes and macrophages by TUNEL assay. Macrophage modulation was evaluated by release of cytotoxic metabolites and cytokine production. The results showed that L. chagasi-infected macrophages treated with the highest concentration of the drug showed lower amount of amastigotes into the macrophages (p<0,0632) than untreated infected cells. There was pronounced presence of cellular vacuoles in the treated infected-cells, and more apoptotic amastigotes in alive macrophages. It was observed decreased levels of H2O2, IL-1β, IL-6, and TNF-αdose-dependent of marbofloxacin in infected macrophages. The results indicate the leishmanicidal effect of marbofloxacin in infected macrophages and immunomodulation actions in these cells.(AU)

A marbofloxacina tem promissora atividade leishmanicida devido à ação direta sobre as amastigotas de Leishmania chagasi. Foi desenvolvido apenas para uso em medicina veterinária, podendo ser utilizado no tratamento da Leishmaniose Visceral Canina (LVC). No presente estudo, avaliamos o efeito leishmanicida e a modulação macrofágica da marbofloxacina em macrófagos infectados com amastigotas de L. chagasi. Os macrófagos foram coletados do peritônio de camundongos BALB/c infectados com promastigotas de L. chagasi. Após internalização e transformação em formas amastigotas, as células foram tratadas com marbofloxacina nas concentrações 100, 500 e 750μg / mL por 18 horas. O efeito leishmanicida foi avaliado pelos aspectos morfológicos de amastigotas dentro de macrófagos, por ensaio de fagocitose e detecção de amastigotas e macrófagos mortos por ensaio TUNEL. A modulação dos macrófagos foi avaliada pela liberação de metabólitos citotóxicos e produção de citocinas. Os resultados mostraram que macrófagos infectados com L. chagasi tratados com a maior concentração da droga apresentaram menor quantidade de amastigotas nos macrófagos (p <0,0632) do que células infectadas não tratadas. Houve a presença pronunciada de vacúolos celulares nas células infectadas tratadas, e mais amastigotas apoptóticas em macrófagos vivos. Observou-se diminuição dos níveis de H2O2, IL-1β, IL-6 e TNF-αdependente da dose de marbofloxacina em macrófagos infectados. Os resultados indicam o efeito leishmanicida da marbofloxacina em macrófagos infectados e ações imunomoduladoras nessas células.(AU)

El marbofloxacino tiene una actividad leishmanicida prometedora debido a la acción directa sobre amastigotes de Leishmania chagasi. Fue desarrollado solo para uso en medicina veterinaria y puede usarse en el tratamiento de la leishmaniasis visceral canina (LVC). En el presente estudio, evaluamos el efecto leishmanicida y la modulación de macrófagosde marbofloxacino en macrófagos infectados con amastigotes de L. chagasi. Se recogieron macrófagos del peritoneo de ratones BALB/c infectados con promastigotes de L. chagasi. Despuésde la internalizacion y transformacion en formas amastigotes, las células se trataron con marbofloxacina a concentraciones de 100, 500 y 750 μg / ml durante 18 horas. El efecto leishmanicida se evaluó mediante los aspectos morfológicosde amastigotes dentro de macrófagos, mediante ensayo de fagocitosis y detección de amastigotes y macrófagos muertos mediante ensayo TUNEL. La modulación de los macrófagos se evaluó mediante la liberación de metabolitos citotóxicos y la producción de citocinas. Los resultados mostraron que los macrófagos infectados con L. chagasi tratados con la concentración más altas del fármaco tenían una menor cantidad de amastigotes en los macrófagos (p <0,0632) que las células infectadas no tratadas. Hubo una presencia pronunciada de vacuolas celulares en las células infectadas tratadas y más amastigotes apoptóticas en macrófagos vivos. Se observó una disminuicón en los niveles de H2O2, IL-1β, IL-6 y TNF-α dependiendo de la dosis de marbofloxacino en macrófagos infectados. Los resultados indican el efecto leishmanicida de el marbofloxacino en macrófagos infectados y acciones inmunomoduladoras en estas células.(AU)

In vivo phagocytosis and hematology in Astyanax altiparanae, a potential model for surrogate technology

Abstract Although the potential of surrogate propagation technology for aquaculture and conservation of Neotropical fish, the poor understanding of the host immune system may results in rejection and destruction of the donor material. Thus, it is necessary to study and to develop methods to evaluate the effects of immunosuppressive drugs employment and to evaluate the immunocompatibility between donor and receptor. Thus, the present study aimed to optimize a methodology to assess in vivo phagocytosis in Astyanax altiparanae using Saccharomyces cerevisiae and to evaluate their hematological response resultant from the inflammatory induction. To this, S. cerevisiae were labeled with Congo red and injected in the coelomic cavity of A. altiparanae at the concentration of 2.5 x 106 cells mL-1. A PBS solution and a non-injected group were kept as control. Fish blood was sampled and the phagocytic capacity and index were determined at 1, 2, 3 and 6 h post-injection (hpi). The yeast injection successfully stimulated phagocytosis, with the best result for phagocytosis assessment after 2 hpi. Moreover, it was achieved a high traceability of phagocytized and non-phagocytized yeast under optic microscopy analysis due to the Congo red labeling. The hematological profile was similar to usually observed in early infections, indicating lymphocyte migration to inflammatory site and increase in number of circulating phagocytes due to natural response to inflammatory stimulus. In conclusion, our method was efficient to assess in vivo phagocytosis in A. altiparanae and will be an important tool to evaluate the efficacy of immunosuppressive drugs in this species. Additionally, these results may serve as support for further studies in fish immunocompetence, both in laboratory and in field conditions.

Resumo Apesar do potencial apresentado pela tecnologia de propagação mediada para a aquicultura e conservação de peixes Neotropicais, o pobre entendimento do sistema imune do hospedeiro pode resultar na rejeição e destruição do material do doador. Com isso, se fazem necessários o estudo e o desenvolvimento de métodos para análise tanto dos efeitos de drogas imunossupressoras quanto para a avaliação da imunocompatibilidade entre doadores e receptores. Logo, o presente estudo teve como objetivo aperfeiçoar um método para analisar a fagocitose in vivo em Astyanax altiparanae usando Saccharomyces cerevisiae marcado e avaliar seu perfil hematológico resultante da indução inflamatória. Para isso, S. cerevisiae foram marcados com vermelho Congo e injetados na cavidade celomática dos A. altiparanae na concentração de 2,5 x 106 células.mL-1. Peixes injetados com PBS e peixes não injetados foram mantidos como controle. Sangue foi colhido e a capacidade fagocítica e o índice fagocítico foram determinados após 1, 2, 3 e 6 horas após à injeção (hpi). A injeção de levedura estimulou a fagocitose com sucesso, com o melhor resultado atingido após 2 hpi. Ainda, foi observada uma alta rastreabilidade das leveduras fagocitadas e não fagocitadas sob microscopia óptica devido à marcação com vermelho Congo. O perfil hematológico foi similar ao observado usualmente em infecções recém-induzidas, indicando migração de linfócitos ao sítio inflamatório e aumento no número de fagócitos circulantes devido à resposta natural ao estímulo inflamatório. Como conclusão, nosso método foi eficiente para analisar a fagocitose in vivo em A. altiparanae e será uma ferramenta importante para a avaliação de eficácia de drogas imunossopressoras para esta espécie. Em adição, estes resultados podem contribuir para futuros estudos em imunocompetência em peixes, tanto em âmbito laboratorial quanto a campo.

Increased leishmanicidal activity of alveolar macrophages from mature horses with mild equine asthma / Aumento da atividade leishmanicida de macrófagos alveolares de equinos adultos com asma equina leve

Alveolar macrophages (AMs) are an essential part of defense mechanisms within the lungs and their phagocytic activity is important for organ homeostasis. The phagocytic ability of AMs obtained from bronchoalveolar lavage from 17 mature mixed-breed pleasure horses (8 healthy and 9 diagnosed with mild equine asthma) was studied through assays with Leishmania (Viannia) braziliensis promastigotes, which enabled the calculation of a phagocytic index (PI) and a survival index (SI). Results indicate that phagocytic activity of AMs in asthma affected horses is similar to healthy horses, while leishmanicidal activity is significantly increased in horses with asthma.(AU)

Os macrófagos alveolares (MAs) são uma parte essencial dos mecanismos de defesa dentro dos pulmões e sua atividade fagocítica é importante para a homeostase desse órgão. A capacidade fagocitária dos MAs obtidos do lavado broncoalveolar de 17 equinos adultos, sem raça definida (oito saudáveis e nove com diagnóstico de asma equina leve), foi estudada por meio de ensaios com promastigotas de Leishmania (Viannia) braziliensis. Foi calculado o índice fagocítico e o índice de sobrevivência. Os resultados indicam que a atividade fagocítica de MAs em cavalos com asma é semelhante a cavalos saudáveis, enquanto a atividade leishmanicida está significativamente aumentada em cavalos com essa enfermidade.(AU)

Increased leishmanicidal activity of alveolar macrophages from mature horses with mild equine asthma / Aumento da atividade leishmanicida de macrófagos alveolares de equinos adultos com asma equina leve

Alveolar macrophages (AMs) are an essential part of defense mechanisms within the lungs and their phagocytic activity is important for organ homeostasis. The phagocytic ability of AMs obtained from bronchoalveolar lavage from 17 mature mixed-breed pleasure horses (8 healthy and 9 diagnosed with mild equine asthma) was studied through assays with Leishmania (Viannia) braziliensis promastigotes, which enabled the calculation of a phagocytic index (PI) and a survival index (SI). Results indicate that phagocytic activity of AMs in asthma affected horses is similar to healthy horses, while leishmanicidal activity is significantly increased in horses with asthma.(AU)

Os macrófagos alveolares (MAs) são uma parte essencial dos mecanismos de defesa dentro dos pulmões e sua atividade fagocítica é importante para a homeostase desse órgão. A capacidade fagocitária dos MAs obtidos do lavado broncoalveolar de 17 equinos adultos, sem raça definida (oito saudáveis e nove com diagnóstico de asma equina leve), foi estudada por meio de ensaios com promastigotas de Leishmania (Viannia) braziliensis. Foi calculado o índice fagocítico e o índice de sobrevivência. Os resultados indicam que a atividade fagocítica de MAs em cavalos com asma é semelhante a cavalos saudáveis, enquanto a atividade leishmanicida está significativamente aumentada em cavalos com essa enfermidade.(AU)

Levamisole modulates the cell-mediated immunity of matrinxã, Brycon amazonicus / Levamisole modula a imunidade mediada por células de Matrinxã, Brycon amazonicus

The use of immunomodulators is an alternative to improve the immune system of fish and avoid the excessive use of antibiotics. Levamisole is a synthetic anthelmintic which promotes a potent immunostimulation on innate and acquired variables of fish. In order to access the levamisole effects on matrinxã, Brycon amazonicus, fish were fed levamisole at 500 mg kg-1 of diet for seven days. After this period fish were submitted to blood collection. Immunological variables, such as leukocytes respiratory burst, total serum protein, albumin, globulin, albumin:globulin index and hematological variables, such as hematocrit, hemoglobin, red and white blood cell (WBC) and Wintrobe indexes were evaluated. The levamisole administration increased the WBC counts indicating that the immunostimulant modulates the cell-mediated immunity. The increased WBC indicate that the fish fed levamisole were in a better body condition, and probable more resistant to disease due to potential for phagocytosis activation, degranulation of neutrophilic granules, and consequently production of antibodies and immunological memory. Besides, these findings are important for news projects regarding the production of vaccines and deeper understanding of fish cell-mediated immunity.

A utilização de imunoestimulante é uma alternativa para melhorar o sistema imune de peixes e evitar o uso excessivo de antibióticos. O levamisol é um anti-helmíntico sintético que promove uma potente estimulação imunológica em peixes, aumentando variáveis inatas e adquiridas de defesa. A fim de avaliar os efeitos do levamisol sobre matrinxã, Brycon amazonicus, os peixes foram alimentados com 500 mg kg-1 de levamisol na dieta durante sete dias. Após este período os peixes foram submetidos à colheita de sangue. Variáveis imunes, tais como a atividade respiratória de leucócitos, proteína total sérica, albumina, globulina, índice albumina:globulina e os parâmetros hematológicos, tais como hematócrito, hemograma completo, hemoglobina, número de eritrócitos e o volume corpuscular médio dos eritrócitos foram avaliados. A utilização do levamisol aumentou a contagem dos leucócitos do sangue indicando que o imunoestimulante modulou a imunidade mediada por células, entretanto, nenhuma alteração foi observada nas demais variáveis. O aumento dos leucócitos do sangue indica que os peixes alimentados com levamisol estão em uma condição corporal melhor, e em um possível surto terão mais resistência às doenças e potencial para ativação da fagocitose e degranulação de neutrófilos. Além disso, os resultados são importantes para novos projetos sobre a produção de vacinas, e sobre a compreensão mais profunda da imunidade mediada por células em peixes.

Levamisole modulates the cell-mediated immunity of matrinxã, Brycon amazonicus / Levamisole modula a imunidade mediada por células de Matrinxã, Brycon amazonicus

The use of immunomodulators is an alternative to improve the immune system of fish and avoid the excessive use of antibiotics. Levamisole is a synthetic anthelmintic which promotes a potent immunostimulation on innate and acquired variables of fish. In order to access the levamisole effects on matrinxã, Brycon amazonicus, fish were fed levamisole at 500 mg kg-1 of diet for seven days. After this period fish were submitted to blood collection. Immunological variables, such as leukocytes respiratory burst, total serum protein, albumin, globulin, albumin:globulin index and hematological variables, such as hematocrit, hemoglobin, red and white blood cell (WBC) and Wintrobe indexes were evaluated. The levamisole administration increased the WBC counts indicating that the immunostimulant modulates the cell-mediated immunity. The increased WBC indicate that the fish fed levamisole were in a better body condition, and probable more resistant to disease due to potential for phagocytosis activation, degranulation of neutrophilic granules, and consequently production of antibodies and immunological memory. Besides, these findings are important for news projects regarding the production of vaccines and deeper understanding of fish cell-mediated immunity.(AU)

A utilização de imunoestimulante é uma alternativa para melhorar o sistema imune de peixes e evitar o uso excessivo de antibióticos. O levamisol é um anti-helmíntico sintético que promove uma potente estimulação imunológica em peixes, aumentando variáveis inatas e adquiridas de defesa. A fim de avaliar os efeitos do levamisol sobre matrinxã, Brycon amazonicus, os peixes foram alimentados com 500 mg kg-1 de levamisol na dieta durante sete dias. Após este período os peixes foram submetidos à colheita de sangue. Variáveis imunes, tais como a atividade respiratória de leucócitos, proteína total sérica, albumina, globulina, índice albumina:globulina e os parâmetros hematológicos, tais como hematócrito, hemograma completo, hemoglobina, número de eritrócitos e o volume corpuscular médio dos eritrócitos foram avaliados. A utilização do levamisol aumentou a contagem dos leucócitos do sangue indicando que o imunoestimulante modulou a imunidade mediada por células, entretanto, nenhuma alteração foi observada nas demais variáveis. O aumento dos leucócitos do sangue indica que os peixes alimentados com levamisol estão em uma condição corporal melhor, e em um possível surto terão mais resistência às doenças e potencial para ativação da fagocitose e degranulação de neutrófilos. Além disso, os resultados são importantes para novos projetos sobre a produção de vacinas, e sobre a compreensão mais profunda da imunidade mediada por células em peixes.(AU)

Efeito do uso de minerais traços (cobre, zinco, selênio e manganês) e vitaminas (A e E) injetáveis sobre o estresse oxidativo e função de neutrófilos de fêmeas da raça Holandesa no período de transição / Effect of use of injected trace minerals (copper, zinc, selenium, and manganese) and vitamins (A and E) on oxidative stress and neutrophil function in females of Hostein cows during transitionl

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito metafilático de minerais traços e vitaminas A e E injetáveis, em parâmetros do estresse oxidativo e na função de neutrófilos em fêmeas da raça Holandesa no período de transição. Sessenta animais foram divididos em dois grupos: animais que receberam minerais traços e vitaminas A e E injetáveis (GMTV) (n= 30) e grupo controle (GC) (n= 30). Não houve diferença significativa entre os grupos nos parâmetros avaliados, porém observou-se diferença significativa entre tratamento e dia para os valores da SOD, com maior atividade dessa enzima em fêmeas GMTV, nas semanas próximas ao parto. Observou-se diferença de dia e para interação tratamento e dia para o TBARS, em que fêmeas GMTV mostraram menores valores de TBARS em todos os momentos, exceto sete dias após o parto. Houve efeito significativo de dia para leucócitos, interação tratamento e dia para neutrófilos e interação tratamento e dia para fagocitose de neutrófilos, em que as fêmeas GMTV apresentaram valores menores de leucócitos e neutrófilos próximo ao parto, além de maior fagocitose de neutrófilos. Pode-se observar que houve melhora no sistema oxidativo e imune de fêmeas GMTV, resposta que provavelmente está relacionada com a administração dos minerais traços e vitaminas A e E.(AU)

This study evaluates the metaphylactic of the subcutaneous administration of a trace minerals and vitamins A and E, on the oxidative stress and neutrophil function in Holsteins cows under the transition period. Sixty females were divided in two groups: group with trace minerals and vitamins (GMTV) (n= 30) and group control (GC) (n= 30). There was no significant difference between those groups; however, we find significant difference between treatment and day for Superoxide dismutase (SOD) values with higher activity of this enzyme in females GMTV on the weeks next to the parturition. Still, there was difference on day and, for interactions between treatment and day for TBARS, were females GMTV showed lower values of TBARS in all moments, except on day seven after the parturition. For leucocytes, there is a significant effect by day, interaction on treatment and day on neutrophils, and interaction treatment and day for neutrophil phagocytosis, were females GMTV showed lower values of leucocytes and neutrophils next to the parturition, and an increase of neutrophils phagocytosis. In summary, cows from the GMTV group had an improvement on the immune and oxidative systems, probably correlated with the administration of this supplement.(AU)