Morphology and molecular phylogeny of trypanorhynchid metacestodes infecting commercial fish of the Mediterranean Sea / Morfologia e filogenia molecular das metacestodes de tripanorhynchid que infectam os peixes comerciais do Mar Mediterrâneo

Members of the order Trypanorhyncha are cestode parasites that are frequently found infecting the muscles of several marine fish species, affecting fish health, and resulting in consumers' rejection of fish. Fifty-two specimens of marine fish were freshly caught throughout the year 2020 from boat landing sites at the Alexandria coast along the Mediterranean Sea in Egypt, including the grey trigger fish Balistes carolinensis (F: Balistidae); the mottled grouper Mycteroperca rubra (F: Serranidae) and the common sole Solea vulgaris (F: Soleidae). Blastocysts were isolated and ruptured; the generated pleurocerci were described morphologically and morphometrically by light and scanning electron microscopy. Also, multiple-sequence alignment was performed, and a phylogenetic tree was constructed following maximum likelihood analysis of the 18s and 28s ribosomal RNA sequences of the recovered worms. Thirty fish were infected; the infection was recorded as blastocysts embedded in fish flesh. Three different parasitic species were recovered and classified morphologically as Gymnorhynchus isuri, Pseudotobothrium dipsacum and Heteronybelinia estigmena. The taxonomic position of these parasites was justified by molecular analysis of their 18s and 28s rRNAs, which revealed high percentages of homology with species recovered from the GenBank. The accession numbers ON157059, ON139663 and ON139662 were respectively assigned to the recovered parasites after their deposition in GenBank. The results obtained from the molecular analyses confirmed the morphological records of the recovered parasites. Since metacestodes are found in the musculature of infected fish specimens, it is necessary to remove these areas in the commercialization of fish.

Os membros da ordem Trypanorhyncha são parasitas de cestóides que são freqüentemente encontrados infectando os músculos de várias espécies de peixes marinhos, afetando a saúde dos peixes e resultando na rejeição do peixe por parte dos consumidores. Cinqüenta e dois espécimes de peixes marinhos foram capturados recentemente durante todo o ano de 2020 nos locais de desembarque de barcos na costa de Alexandria ao longo do Mar Mediterrâneo, no Egito, incluindo o peixe de gatilho cinzento Balistes carolinensis (F: Balistidae); a garoupa mosqueada Mycteroperca rubra (F: Serranidae) e o linguado comum Solea vulgaris (F: Soleidae). Os blastocistos foram isolados e rompidos; os pleurocistos gerados foram descritos morfologicamente e morfometricamente por microscopia eletrônica de luz e varredura. Além disso, foi realizado o alinhamento de sequências múltiplas e uma árvore filogenética foi construída seguindo a análise de máxima probabilidade das sequências de RNA ribossômico de 18s e 28s dos vermes recuperados. Trinta peixes foram infectados; a infecção foi registrada como blastocistos embutidos na carne do peixe. Três espécies diferentes de parasitas foram recuperadas e classificadas morfologicamente como Gymnorhynchus isuri, Pseudotobothrium dipsacum e Heteronybelinia estigmena. A posição taxonômica desses parasitas foi justificada pela análise molecular de seus rRNAs de 18 e 28 anos, que revelou altas porcentagens de homologia com espécies recuperadas do GenBank. Os números de acesso ON157059, ON139663 e ON139662 foram respectivamente atribuídos aos parasitas recuperados após sua deposição no GenBank. Os resultados obtidos a partir das análises moleculares confirmaram os registros morfológicos dos parasitas recuperados. Como as metacestodes são encontradas na musculatura dos espécimes de peixes infectados, é necessário remover estas áreas na comercialização dos peixes.

Hemiurid and lecithasterid digenean trematodes and camallanid and cucullanid nematodes parasitizing flounders collected off the coast of Rio de Janeiro State, Brazil / Trematodeos digeneticos hemiurideos e lecitasterideos e nematoides camalanideos e cuculanideos parasitando linguados coletados na costa do Estado do Rio de Janeiro, Brasil

Abstract A total of 132 flounder specimens (60 Paralichthys isosceles, 36 Paralichthys patagonicus and 36 Xystreurys rasile) were collected off the coast of the state of Rio de Janeiro, Brazil. The fish were measured, necropsied, and had their organs investigated for hemiurid and lecithasterid digenean trematodes and camallanid and cucullanid nematodes. Taxonomic identification of the parasites was based on morphological and morphometric characters and was conducted using bright-field and scanning electron microscopies. The trematodes Lecithochirium monticellii and Aponurus laguncula were found parasitizing P. isosceles, P. patagonicus and X. rasile while the nematodes Procamallanus (Spirocamallanus) halitrophus and Cucullanus bonaerensis were found parasitizing P. isosceles and X. rasile and P. isosceles, P. patagonicus and X. rasile, respectively. Parasite indices of prevalence, mean intensity, mean abundance, and range of infection, as well as infection site, were evaluated for each parasite species. This study allowed to evidence the first occurrence of P. patagonicus by L. monticellii; X. rasile by A. laguncula and P. (S.) halitrophus; and P. isosceles and P. patagonicus by C. bonaerensis in the Western South Atlantic Ocean.

Resumo Um total de 132 espécimes de linguados (60 Paralichthys isosceles, 36 Paralichthys patagonicus e 36 Xystreurys rasile) foram coletados na costa do Estado do Rio de Janeiro, Brasil. Os peixes foram medidos, necropsiados e tiveram seus órgãos investigados para o encontro de trematodeos digenéticos, das famílias Hemiuridae e Lecithasteridae, e nematoides das famílias Camallanidae e Cucullanidae. A identificação taxonômica dos parasitos foi baseada nos caracteres morfológicos e morfométricos, usando-se as microscopias de campo claro e eletrônica de varredura. Os trematódeos, Lecithochirium monticellii e Aponurus laguncula, foram encontrados parasitando P. isosceles, P. patagonicus e X. rasile, enquanto os nematoides, Procamallanus (Spirocamallanus) halitrophus e Cucullanus bonaerensis, foram encontrados parasitando P. isosceles e X. rasile e P. isosceles, P. patagonicus e X. rasile, respectivamente. Os índices parasitários de prevalência, intensidade média, abundância média e amplitude de variação da intensidade de infeção, bem como os sítios de infecção foram avaliados para cada espécie de parasito. Este é o primeiro registro de P. patagonicus por L. monticellii; X. rasile por A. laguncula e P. (S.) halitrophus; e de P. isosceles e P. patagonicus por C. bonaerensis no Oceano Atlântico Sul Ocidental.

Pterobothrium sp. parasitando linguado, Xystreurys rasile (Jordan, 1891), coletados no litoral do Estado do Rio de Janeiro, Brasil e sua importância na inspeção do pescado / Pterobothrium sp. parasitizing flounders, Xystreurys rasile (Jordan, 1891), collected off the coast the State of Rio de Janeiro, Brazil and its fishing inspection importance

Alguns parasitos, podem conferir aspecto repugnante ao pescado, sendo condenados pelo Serviço de Inspeção, quando na indústria de beneficiamento. Entre novembro de 2010 e maio de 2018 foram adquiridos 36 espécimes de Xystreurys rasile em mercados de pescados no município do Rio de Janeiro, Brasil. Os peixes foram identificados, medidos, pesados e necropsiados. Os cestoides foram processados segundo as técnicas usuais em helmintologia. Cinco linguados estavam parasitados por 29 cestoides do gênero Pterobothrium, os índices parasitários foram: prevalência (14%), intensidade média (5,8), abundância média (0,8) e amplitude de infecção (2-12) e os sítios de infecção foram estômago, intestino, rim, fígado, serosas do estômago, baço e fígado e cavidade abdominal. Este é o primeiro registro de Pterobothrium sp. parasitando X. rasile.(AU)

Pterobothrium sp. parasitando linguado, Xystreurys rasile (Jordan, 1891), coletados no litoral do Estado do Rio de Janeiro, Brasil e sua importância na inspeção do pescado / Pterobothrium sp. parasitizing flounders, Xystreurys rasile (Jordan, 1891), collected off the coast the State of Rio de Janeiro, Brazil and its fishing inspection importance

Alguns parasitos, podem conferir aspecto repugnante ao pescado, sendo condenados pelo Serviço de Inspeção, quando na indústria de beneficiamento. Entre novembro de 2010 e maio de 2018 foram adquiridos 36 espécimes de Xystreurys rasile em mercados de pescados no município do Rio de Janeiro, Brasil. Os peixes foram identificados, medidos, pesados e necropsiados. Os cestoides foram processados segundo as técnicas usuais em helmintologia. Cinco linguados estavam parasitados por 29 cestoides do gênero Pterobothrium, os índices parasitários foram: prevalência (14%), intensidade média (5,8), abundância média (0,8) e amplitude de infecção (2-12) e os sítios de infecção foram estômago, intestino, rim, fígado, serosas do estômago, baço e fígado e cavidade abdominal. Este é o primeiro registro de Pterobothrium sp. parasitando X. rasile.

Acanthocephalan parasites of the flounder species Paralichthys isosceles, Paralichthys patagonicus and Xystreurys rasile from Brazil / Acantocéfalos parasitos de espécies de linguados Paralichthys isosceles, Paralichthys patagonicus e Xystreurys rasile no Brasil

Flounders are commercially and economically important fish. A total of 120 specimens of flounders (60 Paralichthys isosceles, 30 Paralichthys patagonicus and 30 Xystreurys rasile) were collected off the coast of the state of Rio de Janeiro, Brazil. The fish were measured, necropsied and filleted, and then had their organs investigated for acanthocephalans. Taxonomic identification of the parasites was based on morphological, morphometric and genetic characters. Paralichthys isosceles and P. patagonicus were parasitized by juveniles of Serrasentis sagittifer, Bolbosoma turbinella, Corynosoma australe and C. cetaceum; Xystreurys rasile was parasitized by C. australe. Genetic characterization confirmed the identification of specimens of Bolbosoma turbinella and Corynosoma australe, as demonstrated by phylogenetic analyses using both ITS and cox1 molecular targets. Parasite indices of prevalence, intensity, mean intensity, abundance, mean abundance, and range of infection, as well as infection site, were evaluated for each parasite species. This is the first report of S. sagittifer parasitizing P. isosceles and P. patagonicus, and B. turbinella parasitizing P. patagonicus.(AU)

Os linguados são peixes comercial e economicamente importantes. Um total de 120 espécimes de linguados (60 Paralichthys isosceles, 30 P. patagonicus e 30 Xystreurys rasile) foram coletados no litoral do estado do Rio de Janeiro, Brasil. Os peixes foram medidos, necropsiados, filetados e tiveram seus órgãos investigados para a presença de acantocéfalos. A identificação taxonômica foi baseada em caracteres morfológicos, morfométricos e genéticos. Paralichthys isosceles e P. patagonicus estavam parasitados por acantocéfalos juvenis de Serrasentis sagittifer, Bolbosoma turbinella, Corynosoma australe e C. cetaceum; Xystreurys rasile estava parasitado com C. australe. A caracterização genética confirmou a identificação dos espécimes de Bolbosoma turbinella e Corynosoma australe, como demonstrado por análises filogenéticas usando ambos marcadores moleculares ITS e cox1. Foram analisados os índices parasitários: prevalência, intensidade, intensidade média, abundância, abundância média, amplitude de variação da infecção e sítio de infecção de cada espécie de parasito. Este é o primeiro registro de S. sagittifer parasitando P. isosceles e P. patagonicus, e de B. turbinella parasitando P. patagonicus.(AU)

Characterization of digestive enzymes from captive Brazilian flounder Paralichthys orbignyanus / Caracterização de enzimas digestivas do linguado brasileiro de cativeiro Paralichthys orbignyanus

Knowledge of specific enzyme activity, along with animal habits and digestive capacity is essential in formulating an appropriate diet for any species. In this study, we evaluated and characterized the activity of digestive enzymes present in the liver, intestine, and stomach of Paralichthys orbignyanus. The effects of pH and temperature on enzyme activity were also evaluated via the use of specific substrates. The use of specific substrates and inhibitors showed strong evidence of the presence of trypsin (BApNA= 0.51 ± 0.2 mU mg-¹), chimotrypsin (SApNA= 2.62 ± 1.8 mU mg-¹), and aminopeptidases (Leu-p-Nan =0.9709 ± 0.83 mU mg-¹) in the intestine. Optimum pH for the activity of trypsin, chemotrypsin, leucino aminopeptidase, amilase, and pepsin were 9.5, 9.0, 8.0, 7.5, and 3.5, respectively, while optimum temperatures were 50, 50, 50, 40, and 45 °C, respectively. These results provide additional information regarding the biology of Brazilian flounder and can be used as a basis for further studies regarding fish feeding physiology.(AU)

O conhecimento da atividade enzimática é essencial para formular uma correta dieta específica para espécie, além de estarem correlacionadas com o hábito da alimentação e capacidade digestive. Neste estudo determinamos e caracterizamos a atividade enzimática presente no intestino, estômago e fígado do linguado Paralichthys orbignyanus. Os efeitos da temperatura e pH sobre a atividade enzimática também foram avaliados utilizando substratos específicos. O uso de substratos e inibidores específicos mostrou uma forte evidência da presença da tripsina (BApNA = 0,51 ± 0,2 mU mg-¹), quimotripsina (SAPNA = 2,62 ± 1,8 mU mg-¹), e as aminopeptidases (Leu-p-Nan = 0,97 ± 0,83 mU mg-¹) no intestino. O pH ótimo observado para a atividade de tripsina, quimotripsina, leucino aminopeptidase, amilase e pepsina foi 9,5, 9,0, 8,0, 7,5 e 3,5, respectivamente. A temperatura ótima observada foi 50, 50, 50, 40 e 45 °C, respectivamente. Estes resultados fornecem informações adicionais sobre a biologia do linguado brasileiro e pode ser usado como base para novos estudos sobre fisiologia alimentar.(AU)

The feeding habits of the endemic Remo flounder, Oncopterus darwinii (Actinopterygii: Pleuronectidae), in an exposed sandy beach's surf zone in southern Brazil

The Remo flounder, Oncopterus darwinii Steindachner, 1874 is a small Pleuronectidae (~ 250 mm TL) distributed in the warm-temperate zone from Santa Catarina (28°S - Brazil) to the Gulf of San Matías (42°S - Argentina). We studied the occurrence and diet of juveniles of this flatfish (85% < 100 mm TL) for one year (August 2009 to July 2010) in a southern Brazilian sandy beach. Individuals were much more common in spring and early summer than in the other seasons. Of the 758 individuals analyzed, only 69 (9.1%) were found with empty stomachs. The Remo flounder fed predominantly on small crustaceans (gammarid amphipods, mysids and the hipiidae Emerita brasiliensis Schmitt, 1935) and no seasonal differences were found in the composition of the diet of this flatfish. However, variations in the Index of Relative Importance (IRI) were found among seasons, which most likely can be explained by a decrease in the availability of favored food items throughout the year. The pattern of distribution of O. darwinii indicates that southern Brazilian sandy beaches are used as nursery ground for this species.(AU)

The feeding habits of the endemic Remo flounder, Oncopterus darwinii (Actinopterygii: Pleuronectidae), in an exposed sandy beach's surf zone in southern Brazil

The Remo flounder, Oncopterus darwinii Steindachner, 1874 is a small Pleuronectidae (~ 250 mm TL) distributed in the warm-temperate zone from Santa Catarina (28°S - Brazil) to the Gulf of San Matías (42°S - Argentina). We studied the occurrence and diet of juveniles of this flatfish (85% < 100 mm TL) for one year (August 2009 to July 2010) in a southern Brazilian sandy beach. Individuals were much more common in spring and early summer than in the other seasons. Of the 758 individuals analyzed, only 69 (9.1%) were found with empty stomachs. The Remo flounder fed predominantly on small crustaceans (gammarid amphipods, mysids and the hipiidae Emerita brasiliensis Schmitt, 1935) and no seasonal differences were found in the composition of the diet of this flatfish. However, variations in the Index of Relative Importance (IRI) were found among seasons, which most likely can be explained by a decrease in the availability of favored food items throughout the year. The pattern of distribution of O. darwinii indicates that southern Brazilian sandy beaches are used as nursery ground for this species.

Hemangioma esclerosante mandibular em Paralichthys orbignyanus: relato de caso / Sclerosing hemangioma mandibular in Paralichthys orbignyanus: case report

Neste trabalho, descreveu-se o primeiro caso de hemangioma esclerosante registrado em um exemplar adulto do linguado Paralichthys orbignyanus. Produzido a partir de reprodução artificial, o peixe em questão tinha aproximadamente 10 anos de idade e fazia parte de um plantel de reprodutores. Ao ser retirado do tanque, notou-se a presença de lesão mandibular com escoriações e focos hemorrágicos. Amostras do tumor foram coletadas da mandíbula para análise histopatológica. Microscopicamente foi observada uma proliferação de numerosos vasos sanguíneos rodeados por um estroma conectivo denso. A etiologia dessa neoplasia é desconhecida, mas o fato de o exemplar ter permanecido por muitos anos em cativeiro pode ter contribuído para o surgimento desse tipo de lesão, devido aos choques mecânicos contra a parede do tanque que acontecem esporadicamente.(AU)

In this study, we described the first case of sclerosing haemangioma in an adult Brazilian flounder Paralichthys orbignyanus. Produced by artificial reproduction, the fish was approximately 10 years old and was maintained at a breeding stock. When removed from the tank, mandibular lesion with excoriations and hemorrhagic foci were noted. Tumor samples were collected from the mandible for histopathological analysis. Proliferation of numerous blood vessels surrounded by dense connective stroma was observed microscopically. The etiology of this neoplasia is unknown, but the fact that the specimen remained in captivity for many years, may have contributed to the appearance of this type of lesion, due to sporadic mechanical shocks to the tank wall.(AU)

Hemangioma esclerosante mandibular em Paralichthys orbignyanus: relato de caso / Sclerosing hemangioma mandibular in Paralichthys orbignyanus: case report

Neste trabalho, descreveu-se o primeiro caso de hemangioma esclerosante registrado em um exemplar adulto do linguado Paralichthys orbignyanus. Produzido a partir de reprodução artificial, o peixe em questão tinha aproximadamente 10 anos de idade e fazia parte de um plantel de reprodutores. Ao ser retirado do tanque, notou-se a presença de lesão mandibular com escoriações e focos hemorrágicos. Amostras do tumor foram coletadas da mandíbula para análise histopatológica. Microscopicamente foi observada uma proliferação de numerosos vasos sanguíneos rodeados por um estroma conectivo denso. A etiologia dessa neoplasia é desconhecida, mas o fato de o exemplar ter permanecido por muitos anos em cativeiro pode ter contribuído para o surgimento desse tipo de lesão, devido aos choques mecânicos contra a parede do tanque que acontecem esporadicamente.(AU)

In this study, we described the first case of sclerosing haemangioma in an adult Brazilian flounder Paralichthys orbignyanus. Produced by artificial reproduction, the fish was approximately 10 years old and was maintained at a breeding stock. When removed from the tank, mandibular lesion with excoriations and hemorrhagic foci were noted. Tumor samples were collected from the mandible for histopathological analysis. Proliferation of numerous blood vessels surrounded by dense connective stroma was observed microscopically. The etiology of this neoplasia is unknown, but the fact that the specimen remained in captivity for many years, may have contributed to the appearance of this type of lesion, due to sporadic mechanical shocks to the tank wall.(AU)

Characterization of digestive enzymes from captive Brazilian flounder Paralichthys orbignyanus

Abstract Knowledge of specific enzyme activity, along with animal habits and digestive capacity is essential in formulating an appropriate diet for any species. In this study, we evaluated and characterized the activity of digestive enzymes present in the liver, intestine, and stomach of Paralichthys orbignyanus. The effects of pH and temperature on enzyme activity were also evaluated via the use of specific substrates. The use of specific substrates and inhibitors showed strong evidence of the presence of trypsin (BApNA= 0.51 ± 0.2 mU mg-1), chimotrypsin (SApNA= 2.62 ± 1.8 mU mg-1), and aminopeptidases (Leu-p-Nan =0.9709 ± 0.83 mU mg-1) in the intestine. Optimum pH for the activity of trypsin, chemotrypsin, leucino aminopeptidase, amilase, and pepsin were 9.5, 9.0, 8.0, 7.5, and 3.5, respectively, while optimum temperatures were 50, 50, 50, 40, and 45 °C, respectively. These results provide additional information regarding the biology of Brazilian flounder and can be used as a basis for further studies regarding fish feeding physiology.

Resumo O conhecimento da atividade enzimática é essencial para formular uma correta dieta específica para espécie, além de estarem correlacionadas com o hábito da alimentação e capacidade digestive. Neste estudo determinamos e caracterizamos a atividade enzimática presente no intestino, estômago e fígado do linguado Paralichthys orbignyanus. Os efeitos da temperatura e pH sobre a atividade enzimática também foram avaliados utilizando substratos específicos. O uso de substratos e inibidores específicos mostrou uma forte evidência da presença da tripsina (BApNA = 0,51 ± 0,2 mU mg-1), quimotripsina (SAPNA = 2,62 ± 1,8 mU mg-1), e as aminopeptidases (Leu-p-Nan = 0,97 ± 0,83 mU mg-1) no intestino. O pH ótimo observado para a atividade de tripsina, quimotripsina, leucino aminopeptidase, amilase e pepsina foi 9,5, 9,0, 8,0, 7,5 e 3,5, respectivamente. A temperatura ótima observada foi 50, 50, 50, 40 e 45 °C, respectivamente. Estes resultados fornecem informações adicionais sobre a biologia do linguado brasileiro e pode ser usado como base para novos estudos sobre fisiologia alimentar.

Characterization of digestive enzymes from captive Brazilian flounder Paralichthys orbignyanus

Abstract Knowledge of specific enzyme activity, along with animal habits and digestive capacity is essential in formulating an appropriate diet for any species. In this study, we evaluated and characterized the activity of digestive enzymes present in the liver, intestine, and stomach of Paralichthys orbignyanus. The effects of pH and temperature on enzyme activity were also evaluated via the use of specific substrates. The use of specific substrates and inhibitors showed strong evidence of the presence of trypsin (BApNA= 0.51 ± 0.2 mU mg-1), chimotrypsin (SApNA= 2.62 ± 1.8 mU mg-1), and aminopeptidases (Leu-p-Nan =0.9709 ± 0.83 mU mg-1) in the intestine. Optimum pH for the activity of trypsin, chemotrypsin, leucino aminopeptidase, amilase, and pepsin were 9.5, 9.0, 8.0, 7.5, and 3.5, respectively, while optimum temperatures were 50, 50, 50, 40, and 45 °C, respectively. These results provide additional information regarding the biology of Brazilian flounder and can be used as a basis for further studies regarding fish feeding physiology.

Resumo O conhecimento da atividade enzimática é essencial para formular uma correta dieta específica para espécie, além de estarem correlacionadas com o hábito da alimentação e capacidade digestive. Neste estudo determinamos e caracterizamos a atividade enzimática presente no intestino, estômago e fígado do linguado Paralichthys orbignyanus. Os efeitos da temperatura e pH sobre a atividade enzimática também foram avaliados utilizando substratos específicos. O uso de substratos e inibidores específicos mostrou uma forte evidência da presença da tripsina (BApNA = 0,51 ± 0,2 mU mg-1), quimotripsina (SAPNA = 2,62 ± 1,8 mU mg-1), e as aminopeptidases (Leu-p-Nan = 0,97 ± 0,83 mU mg-1) no intestino. O pH ótimo observado para a atividade de tripsina, quimotripsina, leucino aminopeptidase, amilase e pepsina foi 9,5, 9,0, 8,0, 7,5 e 3,5, respectivamente. A temperatura ótima observada foi 50, 50, 50, 40 e 45 °C, respectivamente. Estes resultados fornecem informações adicionais sobre a biologia do linguado brasileiro e pode ser usado como base para novos estudos sobre fisiologia alimentar.

DETERMINAÇÃO DA EXIGÊNCIA PROTEICA PARA JUVENIS DO LINGUADO (Paralichthys orbignyanus)

A piscicultura marinha no Brasil é reconhecida como uma atividade incipiente, apesar de sua extensa zona litorânea e a grande variedade de espécies. Estas características tornam o Brasil um país com potencial para o desenvolvimento da atividade. Dentre as espécies com potencial para a piscicultura marinha, diversos estudos têm apontado o linguado Paralichthys orbignyanus como espécie promissora. No entanto, esta espécie carece de informações sobre suas necessidades nutricionais. Desta forma, o objetivo do estudo foi determinar a exigência proteica de juvenis de linguado. Foram formuladas cinco dietas experimentais isolipídica e isoenegética, contendo diferentes níveis de proteína bruta, 42,47, 52, 57 e 62%. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado com cinco tratamentos e três repetições, utilizando 15 tanques circulares de 50 L acoplados a um sistema de recirculação de água. A densidade de estocagem foi 13 peixes por tanque com peso médio 6,47±0,97g. O melhor nível de proteína bruta foi determinado por meio do modelo de regressão segmentada (broken-line) (P<0,05). O menor ganho de peso foi encontrado no tratamento de 42 % com 9,43 ± 0,24g e o maior no tratamento de 62 % com 16,29 ± 2,79g, sendo as diferenças significativas. Os melhores resultados de desempenhos zootécnicos foram obtidos com os peixes alimentados com as dietas com níveis 47 a 62 % de PB (p<0,05). O consumo total de ração não foi influenciado pelos diferentes tratamentos. A conversão alimentar foi diferente entre os tratamentos, sendo 57% com 0,85 ± 0,01 e 62% com 0,79 ± 0,05, diferentes de 42 com 1,19 ± 0,08 e 47% com 0,99 ± 0,04. A composição proximal da carcaça foi afetada pela dieta experimental na concentração de lipídeos (p<0,05), onde tratamento com dieta de 47% com 12,07 ± 0,40 foi maior que os tratamentos de 42% com 10,10 ± 0,31 e 57 % com 10,47 ± 0,85. O melhor nível proteico para produção de juvenis de linguado considerando a taxa de crescimento específico foi estimado em 50,08 % (r2 0,73). O nível ótimo sugerido para o linguado é 50 % de proteína bruta na dieta.

Marine fish farming in Brazil is recognized as an incipient activity, even Brazil with its extensive coastal zone and the wide variety of species, such characteristics make Brazil very promising for the growth of the activity. Among the species with potential for fish farming, several studies have shown the potential of brazilian flounder Paralichthys orbignyanus, however, the lack of information about their nutritional needs is a gap for this species. Thus, the aim of the study was to determine the protein requirement in the diet of Brazilian flounder juveniles. Five isolipid and isoenegetic experimental diets were formulated, containing different levels of crude protein (42, 47, 52, 57 and 62%). The experiment was carried out in a completely randomized design with five treatments and three replications, using 15 circular 50 L tanks coupled to a water recirculation system, with a density of 13 fish per tank with an average weight of 6.47±0.97g. The best level of crude protein was determined through the segmented regression model (broken-line) (P<0.05). The smallest weight gain was found in the 42 % treatment with 9.43 ± 0.24g and the largest in the 62 % treatment with 16.29 ± 2.79g, with significant differences. The best results of zootechnical performance were obtained with fish fed with 47 to 62% CP diets levels (p<0.05). The total feed intake was not influenced by the different treatments. Feed conversion was statistically different between treatments, being 57% with 0.85 ± 0.01 and 62% with 0.79 ± 0.05, different from 42 with 1.19 ± 0.08 and 47% with 0. 99 ± 0.04. The proximal composition of the carcass was affected by the experimental diet in lipid concentration (p<0.05), where treatment with 47% diet with 12.07 ± 0.40 was higher than treatments of 42% with 10.10 ± 0.31 and 57% with 10.47 ± 0.85. The best protein level for production of Brazilian flounder juveniles, considering the specific growth rate and average weight gain was estimated at 50.08% (r2 0.73) and 50.14% (r2 0.70), respectively. The optimal level suggested for Brazilian flounder is 50% of crude protein in the diet.

Oxidative stress parameters in juvenile Brazilian flounder Paralichthys orbignyanus (Valenciennes, 1839) (Pleuronectiformes: Paralichthyidae) exposed to cold and heat shocks

The aim of this study was to determine oxidative stress parameters in the liver and gill of Brazilian flounder juveniles (307.0 ± 16.0 g and 30.0 ± 4.0 cm) submitted to different water temperature (17.1, 23.0 and 28.8ºC) for 72 h and maintained at salinity 25‰. After the acclimation of 7 days, in 23ºC, fish were transferred to 200 L tanks containing seawater (salinity 25‰) at 28.8ºC (heat shock), 17.1ºC (cold shock) or 23.0ºC (control), five replicates (five fish tank-1). The sampled collection occurred in 0 (pre-challenge), 3, 24, 48 and 72 h after temperature shock. Flounder exposed to 17.1ºC and 28.8ºC showed significantly higher TBARS levels and GST activity in the liver post-exposition (PE) in relation to the control (23ºC). CAT activity in liver present a significantly increase at 17.1ºC, in first 48 h, and subsequently decrease in 72 h PE in relation to 28.8ºC. The gills of flounder showed significantly higher TBARS levels, GST and CAT activity when submitted at 17.1 and 28.8ºC in relation to 23.0ºC. There were observed changes in lipid peroxidation levels (LPO), CAT and GST activities in the liver and gill of Brazilian flounder in response to reactive oxygen species (ROS) produced by thermal shocks.(AU)

O objetivo deste estudo foi determinar os parâmetros de estresse oxidativo no fígado e brânquias de juvenis de linguado (307,0 ± 16,0 g e 30,0 ± 4,0 cm) submetidos a diferentes temperaturas da água (17,1, 23,0 e 28,8ºC) por 72 h e mantidos na salinidade de 25‰. Após uma aclimatação de sete dias, em 23ºC, os peixes foram transferidos para tanques de 200 L contendo água do mar (salinidade 25‰) em 28,8ºC (choque quente), 17,1ºC (choque frio) ou 23,0ºC (controle), cinco repetições (cinco peixes/tanque). A coleta de amostras ocorreu em 0 (pré-exposição), 3, 24, 48 e 72 h após o choque térmico. O linguado exposto a 17,1ºC e 28,8ºC apresentaram um significante aumento dos níveis de TBARS e atividade da GST no fígado pós-exposição (PE) em relação ao controle (23ºC). A atividade da CAT no fígado apresentou um aumento significativo em 17,1ºC, nas primeiras 48 h, e subsequente diminuição em 72 h PE em relação a 28,8ºC. As brânquias do linguado apresentaram significante aumento dos níveis de TBARS e atividade da GST e CAT quando submetidos a 17,1ºC e 28,8ºC em relação a 23,0ºC. Foram observadas alterações nos níveis de peroxidação lipídica (LPO) e atividade de GST e CAT no fígado e brânquias de linguado em resposta as espécies reativas de oxigênio (ROS) produzidas pelo choque térmico.(AU)

Efeito da suplementação de lipídeos na dieta de reprodutores de linguado, Solea senegalensis, na quantidade e qualidade das posturas / The effect of dietary lipid suplementation to Solea senegalensis broodstock, on the quantity and quality of spawns

The aim of this study was to evaluate the influence of dietary supplementation with lipids of sole (Solea senegalensis) broodstock diets on the quantity and quality of spawns. One group (DE group) was fed daily with a diet supplemented with lipids (6.7% more than control diet (DC group)). The activities of cathepsins B and D were determined on the viable and nonviable fraction of the spawns from both of groups. The number of spawns and the quantity of eggs was higher for the breeders fed diet DE. The hatching rate was significantly higher (p 0,05) in the group fed with DE diet. Some differences were observed when comparing viable and nonviable eggs. Cathepsin D activities were significantly higher for nonviable fraction when compared with viable eggs. The use of DE diet resulted in a larger number of spawns, suggesting that this diet seems to increase fertility and the hatching rate.(AU)

A qualidade dos ovos de linguado (Solea senegalensis) alimentados com dietas com diferentes níveis de lipídeos foi avaliada (dieta controle (DC) e outra contendo 6,7% mais lipídeos (grupo DE)). Foi avaliada a quantidade e periodicidade de posturas e os níveis de atividade de catepsinas do tipo B e D na fração viável e inviável dos ovos de ambos os grupos. O número de posturas e a taxa de eclosão foram significativamente maiores (p 0,05) no grupo alimentado com a dieta DE. A catepsina D apresentou valores significativamente mais elevados de actividade nos ovos inviáveis do tratamento DE. O uso da dieta DE resultou num maior número de posturas, o que indica que esta dieta aumenta a fecundidade e a taxa de eclosão.(AU)

Effects of light intensity on growth of juvenile Brazilian flounder Paralichthys orbignyanus / Efeito da intensidade luminosa sobre o crescimento de juvenis do linguado Paralichthys orbignyanus

A maioria dos peixes necessita de um ambiente com uma intensidade luminosa mínima para o seu desenvolvimento e crescimento. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da intensidade luminosa sobre o crescimento de juvenis do linguado Paralichthys orbignyanus. Juvenis de 1,55 ± 0,03 g foram distribuídos aleatoriamente em 12 tanques de 50 L (75 peixes por tanque). As intensidades luminosas testadas foram 5 (5 ± 1 lux), 180 (176 ± 6 lux), 700 (712 ± 29 lux) e 2.000 lux (1.998 ± 64 lux), todas em três repetições. Durante 42 dias, os peixes foram alimentados com ração comercial até à saciedade. A salinidade foi mantida em 32 g L-1, a temperatura em 23 C, o oxigênio dissolvido em 6,6 mg L-1, o pH em 7,8 e a amônia não ionizada em 0,01 mg L-1 NH3-N. Ao final do experimento, os juvenis mantidos sob 5 e 180 lux apresentaram respectivamente 10,1 ± 0,3 e 9,44 ± 0,3 g, pesos superiores aos mantidos sob 700 lux (8,45 ± 0,3 g) e 2.000 lux (8,44 ± 0,3 g) (P 0,05). A taxa de crescimento específico diário foi maior sob 5 lux (4,6 ± 0,2%), quando comparada às obtidas sob 700 lux (4,0 ± 0,1%) e 2.000 lux (4,0 ± 0,1%) (P 0,05), enquanto que a obtida sob 180 lux (4,3 ± 0,1%) não diferiu de nenhuma (P>0,05). A sobrevivência foi de 100% em todos os tratamentos. De acordo com os resultados obtidos, juvenis de linguado devem ser criados entre 5 e 180 lux.(AU)

A maioria dos peixes necessita de um ambiente com uma intensidade luminosa mínima para o seu desenvolvimento e crescimento. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da intensidade luminosa sobre o crescimento de juvenis do linguado Paralichthys orbignyanus. Juvenis de 1,55 ± 0,03 g foram distribuídos aleatoriamente em 12 tanques de 50 L (75 peixes por tanque). As intensidades luminosas testadas foram 5 (5 ± 1 lux), 180 (176 ± 6 lux), 700 (712 ± 29 lux) e 2.000 lux (1.998 ± 64 lux), todas em três repetições. Durante 42 dias, os peixes foram alimentados com ração comercial até à saciedade. A salinidade foi mantida em 32 g L-1, a temperatura em 23 C, o oxigênio dissolvido em 6,6 mg L-1, o pH em 7,8 e a amônia não ionizada em 0,01 mg L-1 NH3-N. Ao final do experimento, os juvenis mantidos sob 5 e 180 lux apresentaram respectivamente 10,1 ± 0,3 e 9,44 ± 0,3 g, pesos superiores aos mantidos sob 700 lux (8,45 ± 0,3 g) e 2.000 lux (8,44 ± 0,3 g) (P 0,05). A taxa de crescimento específico diário foi maior sob 5 lux (4,6 ± 0,2%), quando comparada às obtidas sob 700 lux (4,0 ± 0,1%) e 2.000 lux (4,0 ± 0,1%) (P 0,05), enquanto que a obtida sob 180 lux (4,3 ± 0,1%) não diferiu de nenhuma (P>0,05). A sobrevivência foi de 100% em todos os tratamentos. De acordo com os resultados obtidos, juvenis de linguado devem ser criados entre 5 e 180 lux.(AU)

Efeito da suplementação de lipídeos na dieta de reprodutores de linguado, Solea senegalensis, na quantidade e qualidade das posturas / The effect of dietary lipid suplementation to Solea senegalensis broodstock, on the quantity and quality of spawns

The aim of this study was to evaluate the influence of dietary supplementation with lipids of sole (Solea senegalensis) broodstock diets on the quantity and quality of spawns. One group (DE group) was fed daily with a diet supplemented with lipids (6.7% more than control diet (DC group)). The activities of cathepsins B and D were determined on the viable and nonviable fraction of the spawns from both of groups. The number of spawns and the quantity of eggs was higher for the breeders fed diet DE. The hatching rate was significantly higher (p 0,05) in the group fed with DE diet. Some differences were observed when comparing viable and nonviable eggs. Cathepsin D activities were significantly higher for nonviable fraction when compared with viable eggs. The use of DE diet resulted in a larger number of spawns, suggesting that this diet seems to increase fertility and the hatching rate.

A qualidade dos ovos de linguado (Solea senegalensis) alimentados com dietas com diferentes níveis de lipídeos foi avaliada (dieta controle (DC) e outra contendo 6,7% mais lipídeos (grupo DE)). Foi avaliada a quantidade e periodicidade de posturas e os níveis de atividade de catepsinas do tipo B e D na fração viável e inviável dos ovos de ambos os grupos. O número de posturas e a taxa de eclosão foram significativamente maiores (p 0,05) no grupo alimentado com a dieta DE. A catepsina D apresentou valores significativamente mais elevados de actividade nos ovos inviáveis do tratamento DE. O uso da dieta DE resultou num maior número de posturas, o que indica que esta dieta aumenta a fecundidade e a taxa de eclosão.

Effects of light intensity on growth of juvenile Brazilian flounder Paralichthys orbignyanus / Efeito da intensidade luminosa sobre o crescimento de juvenis do linguado Paralichthys orbignyanus

A maioria dos peixes necessita de um ambiente com uma intensidade luminosa mínima para o seu desenvolvimento e crescimento. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da intensidade luminosa sobre o crescimento de juvenis do linguado Paralichthys orbignyanus. Juvenis de 1,55 ± 0,03 g foram distribuídos aleatoriamente em 12 tanques de 50 L (75 peixes por tanque). As intensidades luminosas testadas foram 5 (5 ± 1 lux), 180 (176 ± 6 lux), 700 (712 ± 29 lux) e 2.000 lux (1.998 ± 64 lux), todas em três repetições. Durante 42 dias, os peixes foram alimentados com ração comercial até à saciedade. A salinidade foi mantida em 32 g L-1, a temperatura em 23 C, o oxigênio dissolvido em 6,6 mg L-1, o pH em 7,8 e a amônia não ionizada em 0,01 mg L-1 NH3-N. Ao final do experimento, os juvenis mantidos sob 5 e 180 lux apresentaram respectivamente 10,1 ± 0,3 e 9,44 ± 0,3 g, pesos superiores aos mantidos sob 700 lux (8,45 ± 0,3 g) e 2.000 lux (8,44 ± 0,3 g) (P 0,05). A taxa de crescimento específico diário foi maior sob 5 lux (4,6 ± 0,2%), quando comparada às obtidas sob 700 lux (4,0 ± 0,1%) e 2.000 lux (4,0 ± 0,1%) (P 0,05), enquanto que a obtida sob 180 lux (4,3 ± 0,1%) não diferiu de nenhuma (P>0,05). A sobrevivência foi de 100% em todos os tratamentos. De acordo com os resultados obtidos, juvenis de linguado devem ser criados entre 5 e 180 lux.

A maioria dos peixes necessita de um ambiente com uma intensidade luminosa mínima para o seu desenvolvimento e crescimento. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da intensidade luminosa sobre o crescimento de juvenis do linguado Paralichthys orbignyanus. Juvenis de 1,55 ± 0,03 g foram distribuídos aleatoriamente em 12 tanques de 50 L (75 peixes por tanque). As intensidades luminosas testadas foram 5 (5 ± 1 lux), 180 (176 ± 6 lux), 700 (712 ± 29 lux) e 2.000 lux (1.998 ± 64 lux), todas em três repetições. Durante 42 dias, os peixes foram alimentados com ração comercial até à saciedade. A salinidade foi mantida em 32 g L-1, a temperatura em 23 C, o oxigênio dissolvido em 6,6 mg L-1, o pH em 7,8 e a amônia não ionizada em 0,01 mg L-1 NH3-N. Ao final do experimento, os juvenis mantidos sob 5 e 180 lux apresentaram respectivamente 10,1 ± 0,3 e 9,44 ± 0,3 g, pesos superiores aos mantidos sob 700 lux (8,45 ± 0,3 g) e 2.000 lux (8,44 ± 0,3 g) (P 0,05). A taxa de crescimento específico diário foi maior sob 5 lux (4,6 ± 0,2%), quando comparada às obtidas sob 700 lux (4,0 ± 0,1%) e 2.000 lux (4,0 ± 0,1%) (P 0,05), enquanto que a obtida sob 180 lux (4,3 ± 0,1%) não diferiu de nenhuma (P>0,05). A sobrevivência foi de 100% em todos os tratamentos. De acordo com os resultados obtidos, juvenis de linguado devem ser criados entre 5 e 180 lux.

EFEITO DA DENSIDADE DE ESTOCAGEM SOBRE O CRESCIMENTO E O ESTRESSE OXIDATIVO EM JUVENIS DE LINGUADO Paralichthys orbignyanus

A densidade de estocagem é considerada uma variável importante na aquicultura, já que afeta o crescimento e o bem-estar dos animais. O linguado Paralichthys orbignyanus é uma espécie de alto valor comercial, com potencial para piscicultura marinha. Seu hábito demersal faz com que sua densidade de estocagem seja avaliada em função da área e não do volume do tanque, conforme a maioria das espécies de peixes. Dado isso, o objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito de diferentes densidades de estocagem sobre o crescimento e o estresse oxidativo em juvenis de linguado, considerando o percentual de área ocupada (PCA) pelos peixes. Juvenis de linguado (1,58 g) foram distribuídos em 16 tanques de 50 L conectados em quatro sistemas de recirculação de água (RAS) e foram testadas quatro densidades (com quatro repetições cada): 50% PCA (82 peixes / tanque), 100% PCA (164 peixes / tanque), 150% PCA (246 peixes / tanque) e 200% PCA (328 peixes / tanque) durante 45 dias. Foram feitas biometrias no início e final do experimento (30 indivíduos por tanque). Amostras de cérebro, brânquias, fígado e músculo (12 peixes por tanque) também foram coletadas no final do experimento para as análises de estresse oxidativo. Nesse estudo, foi demonstrado o efeito negativo do incremento da densidade de estocagem sobre o crescimento e o sistema antioxidante dos linguados. O peso final no tratamento com 200% PCA foi significativamente menor (P <0,05) do que nos outros grupos, enquanto os juvenis de linguado criados em 50% PCA atingiram 8,36 ± 0,41 g, aqueles mantidos em 200% PCA cresceram apenas até 6,13 ± 0,2 g. Ao final do experimento, a taxa de crescimento específico (TCE) e a conversão alimentar (CA) também foram prejudicadas pela alta densidade populacional. O aumento da densidade de estocagem induziu alterações que comprometeram o sistema antioxidante (atividade reduzida de ACAP e GST) e aumentaram o dano oxidativo nos lipídios. Aumentos na atividade de GST e no conteúdo de PSH também foram demonstrados. Em conclusão, a densidade de estocagem de juvenis de linguados pode ser de até 100% PCA sem prejuízo do crescimento e do sistema de defesa antioxidante

Stocking density is considered an important variable in aquaculture as it affects fish growth and welfare. The Brazilian flounder Paralichthys orbignyanus is a species with a high commercial value and potential for marine fish culture. Given the demersal behavior of flounder, stocking density for these fish is to be studied considering area occupancy. Therefore, the objective of the presente study was to evaluate the effect of different stocking densities on growth and oxidative stress in juvenile flounder, considering the percentage of covered area (PCA) by fish. Juvenile Brazilian flounder (1.58 g) were distributed in 16 tanks (50 L each), connected to recirculating aquaculture systems and exposed to four stocking densities: 50, 100, 150, and 200% PCA for 45 days, with four replicates each one. Fish were measured and weighed at the beginning and end of the experiment. Samples of brain, gills, liver and muscle were collected at the end of the experiment for oxidative stress analyzes. Growth performance was hampered by increasing stocking density. The final weight in the 200% PCA treatment was significantly lower (P<0.05) than in other groups, flounder reared at 50% PCA reached 8.36 ± 0.41 g, while those reared at 200% PCA grew up to 6.13 ± 0.2 g. Similarly, increasing stocking density induced alterations which compromised the antioxidant system (reduced ACAP and GST activity) and enhanced oxidative damage in lipids. Increases in GST activity and PSH contents were also demonstrated. In conclusion, when the stocking density reached 150% PCA, growth performance and oxidative stress responses were adversely affected. Therefore, in order to enhance growth and minimize free radical production that could damage the antioxidant defense system, stocking density of juvenile Brazilian flounder should be limited to 100% PCA.

Efeitos da toxicidade aguda e níveis subletais do nitrito sobre os parâmetros de estresse oxidativo e histopatológicos em juvenis do linguado Paralichthys orbignyanus

O objetivo do presente trabalho foi verificar a toxicidade aguda e os efeitos subletais do nitrito nos parâmetros de estresse oxidativo e histopatológicos em juvenis do linguado Paralichthys orbignyanus (0,39 ± 0,13g e 3,15 ± 0,41cm). Os peixes (sete por unidade experimental) foram expostos em sete concentrações de nitrito (Controle sem adição de nitrito; 20, 40, 80, 160, 320 e 640mg NO2--N/L) em triplicata por um período de 96h. Os tanques foram monitorados a cada 24h para verificação de possível mortalidade e estimativa da CL50. Ao final do período experimental foram coletados peixes (exceto na concentração mais alta, onde houve mortalidade total) para as análises de estresse oxidativo e de histopatologia. Foram observadas mortalidades apenas nas concentrações a partir de 320mg NO2--N/L e os valores de CL50 variaram entre 427,8 a 393,1mg NO2 --N/L para 24 e 96h, respectivamente. A ACAP apresentou redução gradativa nos peixes expostos em níveis de nitrito a partir de 160mg NO2 --N/L. A atividade da GST foisignificativamente maior nos tratamentos de 80, 160 e 320mg NO2 --N/L. Na concentração de 320mg NO2 --N/L os níveis de TBARS foram maiores em relação ao Grupo Controle. Os níveis de NPSH foram maiores nos tratamentos de 160 e 320mg NO2 --N/L em comparação com o Controle, 20 e 40mg NO2 --N/L, assim como os níveis de PSH, que também foram maiores nos peixes expostos às concentrações de 160 e 320mg NO2 --N/L. Sendo assim, uma condição pró-oxidante foi induzida nos juvenis quando expostos em concentrações a partir de 80mg NO2 --N/L, a qual foi evidenciada por alterações no sistema antioxidante e aumento nos níveis de dano oxidativo. A exposição até 320mg NO2 --N/L por 96h não induziu nenhuma alteração histopatológica nas brânquias e fígado dos animais. Os presentes resultados demonstram que o linguado é uma espécie que apresenta elevada tolerância ao nitrito, porém recomenda-se que as concentrações deste composto no ambiente de criação não excedam 40mg NO2 --N/L.

This study evaluated the acute toxicity and sublethal effects of nitrite on oxidative stress and histopathological parameters of early juvenile Brazilian flounder Paralichthys orbignyanus. Fish were exposed to control, 20, 40, 80, 160, 320 and 640mg NO2 -N-L-1, in triplicate for 96h. Every 24h the tanks were monitored to check possible mortality to estimate the LC50. At the end of the experiment, fish were collected for stress oxidative and histopathological analysis. The LC50 ranged from 427.8 to 393.1mg NO2 -N-L-1 for 24 and 96h, respectively. ACAP showed gradual reduction in fish exposed to nitrite levels from 160mg NO2 -N-L-1. GST activity was higher in 80, 160 and 320mg NO2 -N-L- 1. NPSH and PSH levels were higher in 160 and 320mg NO2 -N-L-1 compared to the Control, 20 and 40mg NO2 -N-L-1. TBARS level was significantly higher in fish exposed to 320mg NO2 -N-L-1 than the Control and 20mg NO2 -N-L-1. No histopathological changes were evidenced in the gills and liver of exposed fish. Moreover, a pro-oxidantcondition was induced when P. orbignyanus were exposed to concentrations from 80mg NO2 -N-L-1, which was evidenced by alterations in the antioxidant system and increased levels of oxidative damage. Therefore, it is recommended that the concentrations in the environment do not exceed 40mg NO2 -N-L-1 in order to avoid oxidative stress in this species.