Clostridium perfringens α and ß recombinant toxoids in equine immunization / Toxóides recombinantes α e ß de Clostridium perfringens na imunização de equinos

Clostridium perfringens is considered one of the main causative agents of superacute enterocolitis, usually fatal in the equine species, due to the action of the ß toxin, and is responsible for causing severe myonecrosis, by the action of the α toxin. The great importance of this agent in the equine economy is due to high mortality and lack of vaccines, which are the main form of prevention, which guarantee the immunization of this animal species. The aim of this study was to evaluate three different concentrations (100, 200 and 400µg) of C. perfringens α and ß recombinant toxoids in equine immunization and to compare with a group vaccinated with a commercial toxoid. The commercial vaccine was not able to stimulate an immune response and the recombinant vaccine was able to induce satisfactory humoral immune response in vaccinated horses, proving to be an alternative prophylactic for C. perfringens infection.(AU)

Clostridium perfringens é considerado um dos principais agentes causadores de enterocolites superagudas, geralmente fatais na espécie equina, devido à ação da toxina ß, além de ser responsável por causar quadros graves de mionecrose, pela ação da toxina α. A grande importância desses agentes na equinocultura, deve-se a elevada mortalidade e a inexistência de vacinas, principal forma de prevenção, que garantam a imunização dessa espécie animal. O objetivo deste trabalho foi avaliar três diferentes concentrações (100, 200 e 400µg) dos toxóides recombinantes α e ß de C. perfringens na imunização de equinos, bem como comparar com um grupo vacinado com um toxóide comercial. A vacina comercial não se mostrou capaz de estimular uma resposta imune e a vacina recombinante foi capaz de induzir resposta imune humoral satisfatória em equinos vacinados, provando ser uma alternativa profilática para infecção por C. Perfringens.(AU)

Clostridium perfringens α and ß recombinant toxoids in equine immunization / Toxóides recombinantes α e ß de Clostridium perfringens na imunização de equinos

Clostridium perfringens is considered one of the main causative agents of superacute enterocolitis, usually fatal in the equine species, due to the action of the ß toxin, and is responsible for causing severe myonecrosis, by the action of the α toxin. The great importance of this agent in the equine economy is due to high mortality and lack of vaccines, which are the main form of prevention, which guarantee the immunization of this animal species. The aim of this study was to evaluate three different concentrations (100, 200 and 400µg) of C. perfringens α and ß recombinant toxoids in equine immunization and to compare with a group vaccinated with a commercial toxoid. The commercial vaccine was not able to stimulate an immune response and the recombinant vaccine was able to induce satisfactory humoral immune response in vaccinated horses, proving to be an alternative prophylactic for C. perfringens infection.(AU)

Clostridium perfringens é considerado um dos principais agentes causadores de enterocolites superagudas, geralmente fatais na espécie equina, devido à ação da toxina ß, além de ser responsável por causar quadros graves de mionecrose, pela ação da toxina α. A grande importância desses agentes na equinocultura, deve-se a elevada mortalidade e a inexistência de vacinas, principal forma de prevenção, que garantam a imunização dessa espécie animal. O objetivo deste trabalho foi avaliar três diferentes concentrações (100, 200 e 400µg) dos toxóides recombinantes α e ß de C. perfringens na imunização de equinos, bem como comparar com um grupo vacinado com um toxóide comercial. A vacina comercial não se mostrou capaz de estimular uma resposta imune e a vacina recombinante foi capaz de induzir resposta imune humoral satisfatória em equinos vacinados, provando ser uma alternativa profilática para infecção por C. Perfringens.(AU)

Clostridial diseases diagnosed in cattle from the South of Rio Grande do Sul, Brazil. A forty-year survey (1978-2018) and a brief review of the literature

ABSTRACT: Clostridial diseases are important causes of livestock losses in the southern Rio Grande do Sul. Since 1978 annual surveys conducted at the Laboratório Regional de Diagnóstico of the Universidade Federal de Pelotas (LRD-UFPel) have shown that clostridial diseases represent 10.40% of the bacterial diseases diagnosed in cattle and 1.65% of all diseases diagnosis in cattle over a 40-year period. The purpose of this study is to review the clinical, epidemiological and pathological aspects of the clostridial diseases diagnosed in cattle from January 1978 to December 2018 at the LRD-UFPel in the hopes that it will constitute a useful guide for field veterinary practitioners and interested farmers. We assessed and review the necropsy protocols of 6,736 cattle; these necropsies were performed either by LRD-UFPel faculty or by field veterinary practitioners; 111 outbreaks (1.65%) were diagnosed as clostridial disease, distributed as follows: 35 outbreaks of tetanus, 34 of blackleg, 23 of bacillary hemoglobinuria, 11 of malignant edema (gas gangrene), and eight of botulism. Approximately 904, from a total of 42,480 cattle at risk, died in these outbreaks.

RESUMO: Clostridioses são doenças produzidas por alguma das espécies do gênero Clostridium e são importantes causas de perdas pecuárias no sul do Rio Grande do Sul. Pesquisas anuais realizadas no Laboratório Regional de Diagnóstico da Faculdade de Veterinária da Universidade Federal de Pelotas (LRD-UFPel) desde 1978 demonstraram que as clostridioses representaram 11,1% das doenças bacterianas diagnosticadas em bovinos e 1,65% de todos os diagnósticos de doenças em bovinos ao longo de 40 anos. O objetivo deste estudo é revisar os aspectos clínicos, epidemiológicos e patológicos das clostridioses diagnosticadas de janeiro de 1978 a dezembro de 2018, pelo LRD/UFPel com a intenção de que esse trabalho possa servir de guia útil para os veterinários de campo e fazendeiros interessados. Foram avaliados e revisados os protocolos de necropsia de 6.736 bovinos; essas necropsias foram realizadas pelo pessoal do LRD/UFPel ou por veterinários de campo. Cento e quatro (1,16%) casos foram diagnosticados como clostridioses, distribuídos da seguinte forma: 35 surtos de tétano, 34 de cartbúnculo sintomático, 23 de hemoglobinúria bacilar, 11 de edema maligno (gangrena gasosa) e oito de botulismo. Aproximadamente 904, de um total de 42.480 bovinos sob-risco, morreram nesses surtos.

Clostridial diseases diagnosed in cattle from the South of Rio Grande do Sul, Brazil. A forty-year survey (1978-2018) and a brief review of the literature / Clostridioses diagnosticadas em bovinos no sul do Rio Grande do Sul. Uma pesquisa de quarenta anos (1978-2018) e breve revisão da literatura

Clostridial diseases are important causes of livestock losses in the southern Rio Grande do Sul. Since 1978 annual surveys conducted at the "Laboratório Regional de Diagnóstico" of the "Universidade Federal de Pelotas" (LRD-UFPel) have shown that clostridial diseases represent 10.40% of the bacterial diseases diagnosed in cattle and 1.65% of all diseases diagnosis in cattle over a 40-year period. The purpose of this study is to review the clinical, epidemiological and pathological aspects of the clostridial diseases diagnosed in cattle from January 1978 to December 2018 at the LRD-UFPel in the hopes that it will constitute a useful guide for field veterinary practitioners and interested farmers. We assessed and review the necropsy protocols of 6,736 cattle; these necropsies were performed either by LRD-UFPel faculty or by field veterinary practitioners; 111 outbreaks (1.65%) were diagnosed as clostridial disease, distributed as follows: 35 outbreaks of tetanus, 34 of blackleg, 23 of bacillary hemoglobinuria, 11 of malignant edema (gas gangrene), and eight of botulism. Approximately 904, from a total of 42,480 cattle at risk, died in these outbreaks.(AU)

Clostridioses são doenças produzidas por alguma das espécies do gênero Clostridium e são importantes causas de perdas pecuárias no sul do Rio Grande do Sul. Pesquisas anuais realizadas no Laboratório Regional de Diagnóstico da Faculdade de Veterinária da Universidade Federal de Pelotas (LRD-UFPel) desde 1978 demonstraram que as clostridioses representaram 11,1% das doenças bacterianas diagnosticadas em bovinos e 1,65% de todos os diagnósticos de doenças em bovinos ao longo de 40 anos. O objetivo deste estudo é revisar os aspectos clínicos, epidemiológicos e patológicos das clostridioses diagnosticadas de janeiro de 1978 a dezembro de 2018, pelo LRD/UFPel com a intenção de que esse trabalho possa servir de guia útil para os veterinários de campo e fazendeiros interessados. Foram avaliados e revisados os protocolos de necropsia de 6.736 bovinos; essas necropsias foram realizadas pelo pessoal do LRD/UFPel ou por veterinários de campo. Cento e quatro (1,16%) casos foram diagnosticados como clostridioses, distribuídos da seguinte forma: 35 surtos de tétano, 34 de carbúnculo sintomático, 23 de hemoglobinúria bacilar, 11 de edema maligno (gangrena gasosa) e oito de botulismo. Aproximadamente 904, de um total de 42.480 bovinos sob-risco, morreram nesses surtos.(AU)

Clostridial diseases diagnosed in cattle from the South of Rio Grande do Sul, Brazil. A forty-year survey (1978-2018) and a brief review of the literature / Clostridioses diagnosticadas em bovinos no sul do Rio Grande do Sul. Uma pesquisa de quarenta anos (1978-2018) e breve revisão da literatura

Clostridial diseases are important causes of livestock losses in the southern Rio Grande do Sul. Since 1978 annual surveys conducted at the "Laboratório Regional de Diagnóstico" of the "Universidade Federal de Pelotas" (LRD-UFPel) have shown that clostridial diseases represent 10.40% of the bacterial diseases diagnosed in cattle and 1.65% of all diseases diagnosis in cattle over a 40-year period. The purpose of this study is to review the clinical, epidemiological and pathological aspects of the clostridial diseases diagnosed in cattle from January 1978 to December 2018 at the LRD-UFPel in the hopes that it will constitute a useful guide for field veterinary practitioners and interested farmers. We assessed and review the necropsy protocols of 6,736 cattle; these necropsies were performed either by LRD-UFPel faculty or by field veterinary practitioners; 111 outbreaks (1.65%) were diagnosed as clostridial disease, distributed as follows: 35 outbreaks of tetanus, 34 of blackleg, 23 of bacillary hemoglobinuria, 11 of malignant edema (gas gangrene), and eight of botulism. Approximately 904, from a total of 42,480 cattle at risk, died in these outbreaks.(AU)

Clostridioses são doenças produzidas por alguma das espécies do gênero Clostridium e são importantes causas de perdas pecuárias no sul do Rio Grande do Sul. Pesquisas anuais realizadas no Laboratório Regional de Diagnóstico da Faculdade de Veterinária da Universidade Federal de Pelotas (LRD-UFPel) desde 1978 demonstraram que as clostridioses representaram 11,1% das doenças bacterianas diagnosticadas em bovinos e 1,65% de todos os diagnósticos de doenças em bovinos ao longo de 40 anos. O objetivo deste estudo é revisar os aspectos clínicos, epidemiológicos e patológicos das clostridioses diagnosticadas de janeiro de 1978 a dezembro de 2018, pelo LRD/UFPel com a intenção de que esse trabalho possa servir de guia útil para os veterinários de campo e fazendeiros interessados. Foram avaliados e revisados os protocolos de necropsia de 6.736 bovinos; essas necropsias foram realizadas pelo pessoal do LRD/UFPel ou por veterinários de campo. Cento e quatro (1,16%) casos foram diagnosticados como clostridioses, distribuídos da seguinte forma: 35 surtos de tétano, 34 de carbúnculo sintomático, 23 de hemoglobinúria bacilar, 11 de edema maligno (gangrena gasosa) e oito de botulismo. Aproximadamente 904, de um total de 42.480 bovinos sob-risco, morreram nesses surtos.(AU)

Ozonioterapia: um tratamento clínico em ascensão na medicina veterinária - revisão de literatura

Em 1840, Christian Friedrich Schõnbein, ao submeter água a uma descarga elétrica, sentiu um cheiro estranho, que ele chamou de ozon. O ozônio é constituído por uma molécula formada por três átomos de oxigênio. A ozonioterapia é uma técnica terapêutica utilizada há séculos, como forma de tratamento, em alguns países, a utilização do ozônio na forma de gás se deu na primeira guerra mundial, nos tratamentos degangrena gasosa. Atualmente a ozonioterapia é muito estudada e utilizada na medicina veterinária, devido ao seu baixo custo e relativa facilidade em sua aplicação comparada a outras técnicas e fármacos.(AU)

In 1840, Christian Friedrich Schõnbein, by submitting water electrical discharge, felt a strange smell, which he called ozon. Ozone is a molecule composed of three oxygen atoms. The ozonioterapia is a therapeutic technique used a long time, as a form of treatment in some countries, the use of ozone in the form of gas in World War I, in gas gangrene. Currently ozonioterapia is very studied and used in veterinary medicine, due to your low cost and relative ease in your application compared to other techniques and drugs.(AU)

Ozonioterapia: um tratamento clínico em ascensão na medicina veterinária - revisão de literatura

Em 1840, Christian Friedrich Schõnbein, ao submeter água a uma descarga elétrica, sentiu um cheiro estranho, que ele chamou de ozon. O ozônio é constituído por uma molécula formada por três átomos de oxigênio. A ozonioterapia é uma técnica terapêutica utilizada há séculos, como forma de tratamento, em alguns países, a utilização do ozônio na forma de gás se deu na primeira guerra mundial, nos tratamentos degangrena gasosa. Atualmente a ozonioterapia é muito estudada e utilizada na medicina veterinária, devido ao seu baixo custo e relativa facilidade em sua aplicação comparada a outras técnicas e fármacos.

In 1840, Christian Friedrich Schõnbein, by submitting water electrical discharge, felt a strange smell, which he called ozon. Ozone is a molecule composed of three oxygen atoms. The ozonioterapia is a therapeutic technique used a long time, as a form of treatment in some countries, the use of ozone in the form of gas in World War I, in gas gangrene. Currently ozonioterapia is very studied and used in veterinary medicine, due to your low cost and relative ease in your application compared to other techniques and drugs.

A retrospective study on the diagnosis of clostridial myonecrosis in ruminants in Brazil / Estudo retrospectivo sobre o diagnóstico de mionecroses clostridiais em ruminantes no Brasil

A standardized immunochemistry method for the diagnosis of clostridial myonecrosis was applied to 38 formalized tissue samples from ruminants with clinical and post mortem history suggestive of blackleg or gas gangrene. The diagnosis of clostridial myonecrosis was confirmed in 37 out of 38 (97.4%) samples tested. Clostridium chauvoei and Clostridium perfringens type A were the most common agents found alone, being detected in ten (26.3%) and six (15.8%) samples, respectively. The other cases showed an association of two or three clostridia, with C. perfringens type A detected in 11 (29%) cases. Based on the findings of the present study, polyvalent vaccines against clostridial infections of animals incorporating C. perfringens would be more adequate for preventative purposes in the endemic areas.

Imuno-istoquímica padronizada para avaliar o diagnóstico etiológico de mionecrose por agentes do gênero Clostridium foi utilizada em 38 tecidos formalizados de ruminantes com suspeita clínica e macroscópica, além de histopatologia compatível com carbúnculo sintomático ou gangrena gasosa. O diagnóstico de mionecrose foi confirmado em 37 das 38 (97,4%) amostras avaliadas. Clostridium chauvoei e Clostridium perfringens tipo A foram os únicos agentes encontrados sozinhos, sendo detectados em dez (26,3%) e seis (15,8%) amostras, respectivamente. Os outros casos foram causados por combinações de dois ou mais agentes, sendo que C. perfringens type A foi detectado em dez (29,9%) dessas amostras. Baseado nos resultados obtidos, sugere-se que vacinas polivalentes contendo C. perfringens seriam mais adequadas para prevenção de mionecrose causada por clostrídios.

A retrospective study on the diagnosis of clostridial myonecrosis in ruminants in Brazil / Estudo retrospectivo sobre o diagnóstico de mionecroses clostridiais em ruminantes no Brasil

A standardized immunochemistry method for the diagnosis of clostridial myonecrosis was applied to 38 formalized tissue samples from ruminants with clinical and post mortem history suggestive of blackleg or gas gangrene. The diagnosis of clostridial myonecrosis was confirmed in 37 out of 38 (97.4%) samples tested. Clostridium chauvoei and Clostridium perfringens type A were the most common agents found alone, being detected in ten (26.3%) and six (15.8%) samples, respectively. The other cases showed an association of two or three clostridia, with C. perfringens type A detected in 11 (29%) cases. Based on the findings of the present study, polyvalent vaccines against clostridial infections of animals incorporating C. perfringens would be more adequate for preventative purposes in the endemic areas.(AU)

Imuno-istoquímica padronizada para avaliar o diagnóstico etiológico de mionecrose por agentes do gênero Clostridium foi utilizada em 38 tecidos formalizados de ruminantes com suspeita clínica e macroscópica, além de histopatologia compatível com carbúnculo sintomático ou gangrena gasosa. O diagnóstico de mionecrose foi confirmado em 37 das 38 (97,4%) amostras avaliadas. Clostridium chauvoei e Clostridium perfringens tipo A foram os únicos agentes encontrados sozinhos, sendo detectados em dez (26,3%) e seis (15,8%) amostras, respectivamente. Os outros casos foram causados por combinações de dois ou mais agentes, sendo que C. perfringens type A foi detectado em dez (29,9%) dessas amostras. Baseado nos resultados obtidos, sugere-se que vacinas polivalentes contendo C. perfringens seriam mais adequadas para prevenção de mionecrose causada por clostrídios.(AU)

Epidemiologia da raiva e das clostridioses no sul do Rio Grande do Sul

As doenças infecciosas são as mais importantes causas de morbidade e mortalidade entre bovinos na área de influência do Laboratório Regional de Diagnóstico da Faculdade de Veterinária da Universidade Federal de Pelotas (LRD/UFPel), representando 57,2% de todas as mortes diagnosticadas nesta espécie. Dentre estas enfermidades destacam-se a raiva e as clostridioses. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi estudar a epidemiologia dos surtos de raiva observados em bovinos de janeiro de 2008 a dezembro de 2017, por meio de sua distribuição no espaço e no tempo na região sul do Rio Grande do Sul. Foi realizado um estudo observacional e ecológico retrospectivo, por meio da análise de dados registrados nos protocolos de necropsias realizadas em bovinos no LRD. Foi feita análise descritiva dos dados para avaliar a distribuição dos casos ao longo do tempo. Para a análise temporal foi utilizado o software estatístico Gretl 1.9.12 (GNU Regression, Econometricand Time-series Library). Para verificar a existência da estacionariedade utilizou-se o teste de Dickey-Fuller aumentado, considerando um valor de p<0,05. No período de janeiro de 2008 a dezembro de 2017, foram recebidos no LRD/UFPel 1418 materiais de bovinos para diagnóstico, sendo confirmados 160 surtos de raiva em 160 propriedades situadas nos 24 municípios da área de influência do LRD/UFPel. O número de animais infectados pelo vírus foi de 591 bovinos de um total de 25.886. O presente estudo permitiu concluir que a raiva não tem sazonalidade na região do estudo, tendo tendência de queda na frequência nos próximos anos. A doença tem característica epidêmica na maioria dos meses analisados (2012-2014), mantendo-se endêmica no período restante (2011, 2015 e 2016) com episódios esporádicos de epidemias nestes anos. Observou-se ainda, que a medida em que aumentou a incidência da doença nos animais e nas propriedades, houve disseminação geográfica do vírus para a maioria (54,16%) dos municípios da área de influência do LRD/UFPel. Nesta tese descreveu-se, também, um estudo epidemiológico dos casos de clostridioses ocorridos na região sul do Rio Grande do Sul, correspondente a área de influência do LRD/UFPel, entre janeiro 1978 e dezembro de 2018. De um total de 6.736 materiais de bovinos provenientes de necropsias realizadas ou órgãos enviados 104 (1,54%) ocorreram em consequência de alguma clostridiose, 34 surtos de carbúnculo sintomático (32,7%), 23 de hemoglobinúria bacilar (22,1%), oito de botulismo (7,7%), 11 de edema maligno (10,6%) e 35 de tétano (34,6%). Concluiu-se que as clostridioses mais importantes da região Sul do Rio Grande do Sul são carbúnculo sintomático e hemoglobinúria bacilar e que a vacinação associada a um protocolo sanitário adequado às condições epidemiológicas nas quais essas doenças ocorrem na região do estudo é fundamental.

Infectious diseases are the most important causes of morbidity and mortality among cattle in the area of influence of the Regional Diagnostic Laboratory of the Veterinary Faculty of the Federal University of Pelotas (LRD/UFPel), representing 57.2% of all deaths diagnosed in this species. Amidst these diseases, rabies and clostridioses stand out. In this context, the aim of this thesis was to study the spatio-temporal epidemiology of rabies outbreaks observed in cattle from January 2008 to December 2017 in southern Rio Grande do Sul. An observational and ecological retrospective study was made through the analysis of data recorded in the necropsy protocols performed in cattle in LRD/UFPel. A descriptive analysis of the data was performed to evaluate the distribution of the cases over time. For temporal statistical analysis, the software Gretl 1.9.12 (GNU Regression, Econometric and Time-series Library) was used. To verify the existence of stationarity, the Dickey-Fuller test was used, considering a value of p <0.05. From January 2008 to December 2017, 1,418 bovine materials were received at the LRD / UFPel, and 160 outbreaks of rabies were confirmed in 160 farms located in the 24 municipalities in southern Rio Grande do Sul. Five hundred-ninety-one animals were infected out of 25,886. This study demonstrated that rabies does not have seasonality in the region, and it´s frequency tends to decrease in the next years. Additionally, the disease has an epidemic characteristic in most of the analyzed years (2012-2014), remaining endemic in the remaining period (2011, 2015 and 2016) with sporadic episodes of epidemics in these years. It was also observed that as the incidence of the disease increased in animals and in the properties, a geographical spread of the virus for the majority (54.16%) of the municipalities in the area of influence of the LRD / UFPel occurred. This thesis also describes an epidemiological study of clostridiosis in southern Rio Grande do Sul between January 1978 and December 2018. From a total of 6,736 bovine material obtained from necropsies or organs received, 104 (1.54%) were from clostridiosis: 34 outbreaks of blackleg (32.7%), 23 of bacillary hemoglobinuria (22.1%), eight of botulism (7.7%), 11 of gas gangrene (10.6%) and 35 of tetanus (34.6%). It was concluded that the most important clostridiosies in southern Rio Grande do Sul are blackleg and bacillary hemoglobinuria. Vaccination associated with an adequate sanitary protocol to the epidemiological conditions in which such diseases occurs is fundamental to control them.

Desenvolvimento de bacterinas de Escherichia coli recombinante contendo as toxinas alfa, beta e épsilon de Clostridium perfringens

Clostridium perfringens é um bacilo Gram-positivo, formador de esporo e produtor de ao menos 17 toxinas, das quais, quatro são consideradas principais, a toxina alfa (CPA), beta (CPB), épsilon (ETX) e iota (CPI) utilizadas para classificar a espécie em cinco toxinotipos (A, B, C, D e E). A toxinfecção nos animais ocorre por via iatrogênica/traumática ou gastrointestinal. As principais enfermidades causadas por C. perfringens são gangrena gasosa, enterotoxemias, enterite necrótica/hemorrágica e enterocolite. As vacinas contra as toxinas de C. perfringens são extensivamente utilizadas em medicina veterinária, tornando-se a principal medida de controle e profilaxia nos rebanhos. Tem crescido o número de estudos visando à utilização de vacinas recombinantes contra as principais toxinas de C. perfringens (CPA, CPB e ETX). Com isso, o objetivo do presente estudo foi avaliar os títulos de anticorpos neutralizantes antitoxinas CPA, CPB e ETX em coelhos vacinados com células inteiras inativadas de Escherichia coli (bacterinas recombinantes), assim como, a fração celular solúvel ou insolúvel, contendo tais antígenos. Após a expressão das proteínas, as células foram inativadas com formaldeído na concentração final 0,2% (v/v). Em seguida, a eficiência da inativação foi avaliada por plaqueamento de uma alíquota do cultivo em placas de LB ágar. Confirmada a inativação, as bactérias foram centrifugadas e lavadas com PBS estéril para remoção de formaldeído residual. Nas vacinas compostas por frações celulares solúveis e insolúveis, a presença dos antígenos rCPA, rCPB e rETX foi confirmada através de SDS-PAGE e western blot. As proteínas, nas duas formulações, foram quantificadas por SDSPAGE juntamente com uma curva com diferentes concentrações de albumina sérica bovina (BSA) e analisadas no software TotalLab quant®. As características de solubilidade dos antígenos recombinantes foram idênticas em ambos os vetores utilizados, pAE e pET28a, onde rCPA e rCPB foram expressas em corpos de inclusão e rETX na forma solúvel. Não foram detectados títulos de anticorpos neutralizantes antitoxinas CPA, CPB ou ETX no soro dos animais vacinados com ambas as formulações vacinais contendo 50 µg de cada antígeno expresso no vetor pAE. Entretanto, no segundo experimento com 200 µg de cada antígeno expresso em vetor pET28a, em ambas as formulações, geraram títulos de anticorpos neutralizantes antitoxina ETX de 10 UI/mL-1 , cinco vezes superior ao valor mínimo preconizado pelo Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento (MAPA). Não foram detectados títulos de anticorpos neutralizantes antitoxina CPB. A titulação de anticorpos neutralizantes antitoxina CPA não foi realizada. Os resultados do presente estudo, não apenas sustentam a potencial utilização de antígenos recombinantes, mas também fornecem dados adicionais quanto à vacinação com células inteiras inativadas de E. coli ou fração celular solúvel e insolúvel contendo proteínas recombinantes. Essa forma alternativa de produção de vacinas recombinantes visa à disponibilização de antígenos de alta qualidade e baixo custo para utilização pela indústria veterinária

Clostridium perfringens is a spore-forming, Gram-positive bacillus that produces at least 17 alpha (CPA), beta (CPB), epsilon (ETX), and iota (CPI) toxins are used to classify this bacterium into five toxinotypes (A, B, C, D, and E). Animal toxinfection occurs via either the iatrogenic/traumatic or the gastrointestinal route. The main illnesses caused by C. perfringens are gas gangrene, enterotoxemias, haemorrhagic/necrotic enteritis and enterocolitis. Vaccines against C. perfringens toxins are largely used in veterinary medicine, rendering them the main prophylactic control measure in farm animals. The number of studies aiming to develop recombinant vaccines against C. perfringens alpha, beta, and epsilon toxins is on the rise. Studies looking for alternatives to diminish time and production costs are also gaining ground. Therefore, the present study aims to evaluate neutralizing antibody titers against CPA, CPB, and ETX in rabbits immunized with whole, inactivated de E. coli cells (recombinant bacterins) and with post-lysis cell fractions containing such antigens. After protein expression, E. coli cells were inactivated with formaldehyde 0,2% (v/v). Inactivation efficiency was assessed by plating sterile LB agar plates. Once inactivation was confirmed, bacteria were washed with sterile PBS to remove residual formaldehyde. The presence of rCPA, rCPB and rETX in vaccines comprised by both soluble and insoluble cell fractions was confirmed by means of SDS-PAGE and western blot. Proteins in both formulations were quantified by SDSPAGE using different BSA concentrations using TotalLab quant® software. Solubility characteristic were identical in both pAE and pET28a expression vectors: rCPA and rCPB were expressed in inclusion bodies and rETX was soluble. No neutralizing antibody titers against CPA, CPB or ETX were detected in the sera of animals immunized with either formulation containing 50 µg of each antigen when pAE was used. However, when pET28a was used, 200 µg of each antigen in either formulation were able to generate up to 10 UI/mL-1 of anti ETX neutralizing antibodies, which is five-fold the minimum required by the Brazilian Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply. Neutralizing antibodies against CPB were not detected. A toxoid-based commercial vaccine induced 10-20 UI/mL-1of neutralizing antibodies against CPB. Anti-CPA neutralizing antibodies titration was not performed. These results, not only support the use of recombinant antigens, but also provide data about immunization using whole, inactivated E. coli cells or both their soluble and not soluble fractions containing recombinant antigens as vaccines. This alternative recombinant vaccine production method yields high quality antigens with low production costs to be used in veterinary medicine.

Mionecroses clostridiais bovinas / Bovine clostridial myonecrosis

As mionecroses são enfermidades altamente fatais, representadas pelo carbúnculo sintomático e edema maligno. Com o objetivo de determinar a ocorrência dos diferentes clostrídios envolvidos nas mionecroses em bovinos no Brasil, foi realizado um estudo retrospectivo a partir de 30 casos suspeitos de carbúnculo sintomático e edema maligno. Empregou-se a técnica de estreptavidina biotina peroxidase em tecidos de bovinos fixados em formol e incluídos em parafina de arquivos de patologia de diferentes estados do país. Foram detectados 21 Clostridium chauvoei (70%), cincoClostridium septicum(17%), seguidos de doisC. chauvoeiassociado aoC. septicum (7%), um C. chauvoei mais Clostridium sordellii (3%) e um C. chauvoei mais Clostridium novyi tipo A (3%). Este é o primeiro diagnóstico de C. novyi tipo A no Brasil, e o primeiro relato da ocorrência de C. chauvoei associado à lesão no miocárdio. Os achados da maior ocorrência de C. chauvoei e C. septicum corroboram com estudos anteriores no país. Estes dados sobre a ocorrência dos agentes responsáveis pelas mionecroses em diferentes estados do país são de extrema importância frente às decisões relativas ao controle dessas enfermidades.

Clostridial myonecroses are highly fatal diseases, characterized by black leg and malignant oedema. In order to determine the occurrence of the different agents involved in Brazilian clostridial myonecrosis, a retrospective study was conducted concerning 30 suspected cases of blackleg and gas gangrene using a streptavidin-biotin peroxidase technique in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues of cattle from the archives of pathology of different states of Brazil. The clostridia predominantly detected wereClostridium chauvoei(70%), followed by Clostridium septicum (5 cases or 17%), C. chauvoei plus C. septicum (2 cases or 7%), C. chauvoei plus Clostridium sordellii (1 case or 3%), C. chauvoei plus Clostridium novyi type A (1 case or 3%). This is the first diagnosis of C. novyi type A in Brazil. The findings of the higher occurrence of C. chauvoei and C. septicum concur with previous works in Brazil. This article also includes the first report in Brazil of the occurrence of C. chauvoei associated with a lesion in the myocardium. Thus, this study supplies important data about the occurrence of the agents responsible for clostridial myonecrosis in different states of Brazil, these data being important for decisions relative to control of these diseases.

MIONECROSES CLOSTRIDIAIS BOVINAS

ABSTRACT Clostridial myonecroses are highly fatal diseases, characterized by black leg and malignant oedema. In order to determine the occurrence of the different agents involved in Brazilian clostridial myonecrosis, a retrospective study was conducted concerning 30 suspected cases of blackleg and gas gangrene using a streptavidin-biotin peroxidase technique in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues of cattle from the archives of pathology of different states of Brazil. The clostridia predominantly detected wereClostridium chauvoei(70%), followed by Clostridium septicum (5 cases or 17%), C. chauvoei plus C. septicum (2 cases or 7%), C. chauvoei plus Clostridium sordellii (1 case or 3%), C. chauvoei plus Clostridium novyi type A (1 case or 3%). This is the first diagnosis of C. novyi type A in Brazil. The findings of the higher occurrence of C. chauvoei and C. septicum concur with previous works in Brazil. This article also includes the first report in Brazil of the occurrence of C. chauvoei associated with a lesion in the myocardium. Thus, this study supplies important data about the occurrence of the agents responsible for clostridial myonecrosis in different states of Brazil, these data being important for decisions relative to control of these diseases.

RESUMO As mionecroses são enfermidades altamente fatais, representadas pelo carbúnculo sintomático e edema maligno. Com o objetivo de determinar a ocorrência dos diferentes clostrídios envolvidos nas mionecroses em bovinos no Brasil, foi realizado um estudo retrospectivo a partir de 30 casos suspeitos de carbúnculo sintomático e edema maligno. Empregou-se a técnica de estreptavidina biotina peroxidase em tecidos de bovinos fixados em formol e incluídos em parafina de arquivos de patologia de diferentes estados do país. Foram detectados 21 Clostridium chauvoei (70%), cincoClostridium septicum(17%), seguidos de doisC. chauvoeiassociado aoC. septicum (7%), um C. chauvoei mais Clostridium sordellii (3%) e um C. chauvoei mais Clostridium novyi tipo A (3%). Este é o primeiro diagnóstico de C. novyi tipo A no Brasil, e o primeiro relato da ocorrência de C. chauvoei associado à lesão no miocárdio. Os achados da maior ocorrência de C. chauvoei e C. septicum corroboram com estudos anteriores no país. Estes dados sobre a ocorrência dos agentes responsáveis pelas mionecroses em diferentes estados do país são de extrema importância frente às decisões relativas ao controle dessas enfermidades.

Ocorrência de clorostrídios isolados entre 1988 a 2007 / Clostrídios isolates determination between 1988 and 2007 / Ocurrencia De Clostrídios Aislados Entre 1988 A 2007

Este estudo objetivou investigar a ocorrência de clostrídios, a partir de materiais provenientes de municípios do estado do Rio Grande do Sul, entre 1988 a 2007, encaminhados para análise microbiológica. Durante o período analisado, o gênero Clostridium foi isolado em 123 protocolos, destes, 61% foram caracterizados como Clostridium perfringens, 28,45% Clostridium chauvoei, 13,8% Clostridium septicum e 0,8% Clostridium sp. Toxina botulínica foi identificada em soros e conteúdo intestinal de 10 casos analisados. Os isolados foram relacionados, principalmente, a casos de enterotoxemia, gangrena gasosa, carbúnculo sintomático e botulismo. Os resultados demonstram significativo número de isolamento de clostrídios. Ressaltamos a importância do monitoramento das clostridioses em nível nacional devido principalmente, ao forte impacto econômico que estas enfermidades podem desencadear.(AU)

The aim of this study was to determinate the occurrence of Clostridium. The samples were from cities of Rio Grande do Sul state, between 1988 and 2007. During the analyzed period, Clostridium were isolates in 123 protocols. Clostridium perfringens were isolates in 61% of cases, 28.45% Clostridium chauvoei, 13.8% Clostridium septicum and 0.8% Clostridium sp. Botulinum toxin was detected in samples from intestinal contents and serum of 10 analyzed cases. The cases with clostridiuns isolates were related, mainly, enterotoxemia, gas gangrene, blackleg and botulism. Thus, this work demonstrated a significative clostridios occurrence. Is important the nationwide monitoring of clostridial, due mainly to strong economic impact that these diseases can trigger.(AU)

El objetivo de este estudio es la determinación de la ocurrencia del aislamiento de clostrídios a partir de materiales derivados de diversos municipios del estado de Rio Grande do Sul, entre 1988 a 2007. Durante el periodo analizado, el género Clostridium se aisló en 123 protocolos, 61% de los aislados fueron Clostridium perfringens, 28,45% Clostridium chauvoei, 13,8% Clostridium septicum y 0,8% Clostridium sp. La toxina botulínica fue indentificada en suero y contenido intestinal de 10 casos analizados. Los aislamientos se refieren principalmente a casos de enterotoxemia, gangrena gaseosa, botulismo y pierna negra. Los resultados demostraron la significativa ocurrencia de clostrídios. Hacemos hincapié en la importancia de la supervisión de clostridios debido principalmente al fuerte impacto económico que estas enfermedades pueden desencadenar. (AU)

Avaliação da potência de vacinas contra clostridium septicum comercializadas no brasil

ABSTRACT Clostridium septicum, a ubiquitous organism, is the main pathogen causing malignant edema. Because of its strong cytotoxic alpha toxin, infections are often lethal. Losses in livestock can be prevented through vaccination with alpha-toxoid vaccines. The antibody response to the C. septicum component of 12 commercial vaccines was evaluated by the mouse serum neutralization test using rabbit and bovine sera. The vaccines coded as T1, T2, T4, T10 and T11 induced titers of alpha antitoxin higher than the minimum test level of 2.5 IU/mL. None of the other vaccines induced the formation of antibodies. The majority of the C. septicum vaccines commercialized in Brazil were unable to induce an immune response as recommended for the control of this product.

RESUMO Clostridium septicum, um organismo ubiquitário, é o principal patógeno responsável pelo quadro de edema maligno. Devido à ação citotóxica da toxina alfa as infecções geralmente são fatais. Para o controle da doença é utilizada a vacinação com toxóide alfa. Neste trabalho, avaliouse a eficiência de 12 vacinas comerciais contra clostridioses, que continham em sua composição C. septicum, através da soroneutralização em camundongos com soros de coelhos e bovinos vacinados. As vacinas codificadas como T1, T2, T4, T10 e T11 apresentaram títulos de antitoxina alfa superiores ao nível mínimo exigido pelo teste de 2,5 UI/mL. As demais vacinas não induziram a formação de anticorpos. Em sua maioria, as vacinas comercializadas no Brasil, contra C. septicum, foram ineficientes em estimular resposta imune compatível com os níveis de teste recomendados para controle deste produto.

The role of hyperbaric oxygen therapy (HOT) as an otoprotection agent against cisplatin ototoxicity / Efeito otoprotetor da oxigenoterapia hiperbárica na toxicidade causada pela cisplatina

PURPOSE: Hyperbaric oxygen therapy (HOT) consists of intermittent inhalations of 100 percent oxygen at a pressure higher than 1 atm. It is an important adjuvant therapy in pathological processes like soft tissue infections, radiation injury, gas gangrene, osteomyelitis and decompressive diseases. Cisplatin, a potent antineoplastic drug, widely used in cancer therapy is highly ototoxic causing bilateral, irreversible damage to the hearing of high frequency sounds (4-8 KHz). OBJECTIVE:This experimental study conducted at the Faculty of Medicine of Ribeirao Preto, University of Sao Paulo aims to evaluate Hyperbaric Oxygen Therapy as an otoprotection agent against drug toxicity. METHODS: Albino guinea pigs were divided into two groups: in Group A, 5 animals (10 cochlea) received cisplatin, i. p., 8.0 mg/kg/day during three days and afterwards were submitted to HOT; in Group B, 3 animals (6cochlea) received cisplatin, i. p. 8.0mg/kg/day during three days. Guinea pigs were evaluated by acoustic otoemissions (AOE) and scanning electron microscopy (SEM). RESULTS: Group B animals showed loss of auditory functions as measured by AOE and distorted outer hair cells by SEM. In Group A, outer hair cells shown by SEM images were mostly preserved. CONCLUSION: It is presumed that Hyperbaric Oxygen Therapy has a protector effect against cisplatin ototoxicity.(AU)

INTRODUÇÃO: A Oxigenoterapia hiperbárica (OHB) envolve a inalação de oxigênio a 100 por cento sob uma pressão maior que 1 atm. E um importante modo de terapia adjuvante para processos patológicos, tais como: infecção de partes moles, lesões actínicas, gangrena gasosa, osteomielite e doença descompressiva. A cisplatina e uma potente droga antineoplásica largamente utilizada para o tratamento de câncer. A ototoxicidade e um importante efeito colateral desta droga, causando dano irreversível, bilateral, na capacidade de ouvir sons de alta freqüência (4 - 8 KHz). Este estudo experimental, realizado na Faculdade de Medicina de Ribeirao Preto da Universidade de São Paulo nos anos de 2005 e 2006. Objetivo: Avaliar o papel da Oxigenoterapia Hiperbárica como agente otoprotector contra a toxicidade de drogas. MÉTODOS: Cobaias albinas divididas em 2 grupos Grupo A: com 5 cobaias (10 cócleas) que receberam cisplatina 8,0 mg/kg/dia, via intraperitoneal por 3 dias, submetidas posteriormente a OHB. Grupo B: com 3 cobaias (6 cócleas) que receberam cisplatina 8,0 mg/kg/dia, via intraperitoneal por 3 dias. As cobaias foram avaliadas através de otoemissões acústicas (OEA) e por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Resultados: Encontramos no grupo B perda da função auditiva medida pela OEA e distorção das células ciliares externas a MEV. No grupo A, a MEV as células ciliares externas foram preservadas em sua grande maioria. CONCLUSÃO: Assim podemos supor que a Oxigenoterapia Hiperbárica tem um efeito otoprotetor contra a ototoxicidade induzida pela cisplatina.(AU)

Detection of several clostridia by a direct fluorescent antibody test in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues / Detecção de clostrídios pela técnica de imunofluorescência direta em tecidos fixados em formol e incluídos em parafina

Descreve-se a aplicabilidade de uma técnica de imunofluorescência direta, para o diagnóstico de mionecroses causadas por clostrídios, a partir de tecidos fixados em formol e incluídos em parafina. Essa técnica pode auxiliar no diagnóstico do carbúnculo sintomático e da gangrena gasosa, contribuindo para determinar a real prevalência dessas doenças no país(AU)

Outbreak of gas gangrene in a flock of sheeps and goats / Surto de gangrena gasosa em rebanho de ovinos e caprinos

This report describes an occasion of gas gangrene in a flock of 1200 animals between sheeps and goats in the district of Campo Formoso, Bahia, Brazil. In the period of 24 hours to 5 days after having been vaccined against clostridiosis, 40 sheep and 20 goats came to death. Clostridium novyi and Clostridium septicum were detected by the technique of direct immunofluorescence (DIF) in impression of the muscle tissue of the inoculated area.

Este relato descreve um surto de gangrena gasosa em um rebanho de 1200 animais entre ovinos e caprinos em Campo Formoso, Bahia, Brasil. No período de 24 horas a 5 dias após terem sido vacinados contra clostridioses, 40 ovinos e 30 caprinos vieram a óbito. Clostridium novyi e Clostridium septicum foram detectados pela técnica de imunofluorescência direta (IFD) em impressão do tecido do músculo da área de inoculação.

Clostridial toxins: potent poisons, potent medicines

Clostridium is an anaerobic bacterial genus. The clostridia produce more protein toxins than any other bacterial genus and are a rich reservoir of toxins for research and medicinal uses. Clostridia are widely spread in the environment: soil, dust and water, presenting more than 120 described species, although few can cause diseases. Diseases can grossly be divided into neurotropic disorders (nervous system is primarily affected), enterotoxemias (affecting intestinal tract and parenchymatous organs), and gas gangrene (myonecrosis with toxemia). Undoubtedly the most widely recognized infection due to anaerobes was clostridial myonecrosis, but recently interest has arisen for the role of clostridia in intestinal diseases. This report describes the most important species, the diseases caused by them, and their occurrence in Brazil, focusing on cattle raising.

Outbreak of gas gangrene in a flock of sheeps and goats / Surto de gangrena gasosa em rebanho de ovinos e caprinos

This report describes an occasion of gas gangrene in a flock of 1200 animals between sheeps and goats in the district of Campo Formoso, Bahia, Brazil. In the period of 24 hours to 5 days after having been vaccined against clostridiosis, 40 sheep and 20 goats came to death. Clostridium novyi and Clostridium septicum were detected by the technique of direct immunofluorescence (DIF) in impression of the muscle tissue of the inoculated area.

Este relato descreve um surto de gangrena gasosa em um rebanho de 1200 animais entre ovinos e caprinos em Campo Formoso, Bahia, Brasil. No período de 24 horas a 5 dias após terem sido vacinados contra clostridioses, 40 ovinos e 30 caprinos vieram a óbito. Clostridium novyi e Clostridium septicum foram detectados pela técnica de imunofluorescência direta (IFD) em impressão do tecido do músculo da área de inoculação.