Glutamine ameliorates Bungarus multicinctus venom-induced lung and heart injury through HSP70: NF-κB p65 and P53/PUMA signaling pathways involved

Background: Bungarus multicinctus is one of the most dangerous venomous snakes prone to cardiopulmonary damage with extremely high mortality. In our previous work, we found that glutamine (Gln) and glutamine synthetase (GS) in pig serum were significantly reduced after Bungarus multicinctus bite. In the present study, to explore whether there is a link between the pathogenesis of cardiopulmonary injury and Gln metabolic changes induced by Bungarus multicinctus venom. We investigated the effect of Gln supplementation on the lung and heart function after snakebite. Methods: We supplemented different concentrations of Gln to mice that were envenomated by Bungarus multicinctus to observe the biological behavior, survival rate, hematological and pathological changes. Gln was supplemented immediately or one hour after the venom injection, and then changes in Gln metabolism were analyzed. Subsequently, to further explore the protective mechanism of glutamine on tissue damage, we measured the expression of heat-shock protein70 (HSP70), NF-κB P65, P53/PUMA by western blotting and real-time polymerase in the lung and heart. Results: Gln supplementation delayed the envenoming symptoms, reduced mortality, and alleviated the histopathological changes in the heart and lung of mice bitten by Bungarus multicinctus. Additionally, Gln increased the activity of glutamine synthetase (GS), glutamate dehydrogenase (GDH) and glutaminase (GLS) in serum. It also balanced the transporter SLC7A11 expression in heart and lung tissues. Bungarus multicinctus venom induced the NF-κB nuclear translocation in the lung, while the HO-1 expression was suppressed. At the same time, venom activated the P53/PUMA signaling pathway and the BAX expression in the heart. Gln treatment reversed the above phenomenon and increased HSP70 expression. Conclusion: Gln alleviated the glutamine metabolism disorder and cardiopulmonary damage caused by Bungarus multicinctus venom. It may protect lungs and heart against venom by promoting the expression of HSP70, inhibiting the activation of NF-κB and P53/PUMA, thereby delaying the process of snake venom and reducing mortality. The present results indicate that Gln could be a potential treatment for Bungarus multicinctus bite.

Molecular characterization of Giardia lamblia and risk factors for giardiasis among immunocompromised patients in southern Brazil / Caracterização molecular de Giardia lamblia e fatores de risco para giardíase em pacientes imunocomprometidos no sul do Brasil

Acute Giardia infections often cause diarrhea and stomach upset. Chronic infections can lead to malnutrition, micronutrient deficiencies, malabsorption and weight loss. This study assessed the prevalence of G. lambia infection and assessed associated risk factors among immunocompomised patients undergoing chemotherapeutic treatment in southern Brazil. A total of 110 immunocompromised patients in Pelotas, RS, Brazil, consented to participate in this study and were recruited. Socioeconomic and epidemiological profile of patients was collected by questionnaire. The prevalence for Giardia were determined through microscopy by the centrifugation-flotation technique using stool samples of every patient. In addition, the genetic characterization of the parasite was carried out by amplifying and sequencing the glutamate dehydrogenase (gdh) gene. By microscopy, the prevalence of giardiasis was 17.3% (19/110). Furthermore, the DNA sequences revealed that 7 (36.8%) out of 19 isolates belonged to assemblage B, while 6 of them (31.6%) belonged to assemblage C, 5 (26.3%) to assemblage A and 1 (5.3%) to assemblage D. Risk factors (p ≤ 0.05) for giardiasis were schooling level (OR=8.0 (1.02 ­ 62.91) sharing a house with more than three people (OR=14.1 (3.77 ­ 52.51), water sources (OR=38.9 (10.4 ­ 145.7), sewage treatment (OR=14.2 (3.1 ­ 65.5), waste destination (OR=7.44 (2.0 ­ 27.3), owning pets (OR=4.6 (1.0 ­ 21.2) and cultivating a vegetable garden (OR=4.2 (1.3 ­ 13.6). The prevalence of G. lamblia in immunocompromised patients was considered elevate with the identification of four assemblage of the parasite (A, B, C and D).

As infecções agudas por Giardia geralmente causam diarreia e dores de estômago. As infecções crônicas podem levar à desnutrição, deficiências de micronutrientes, má absorção e perda de peso. Este estudo avaliou a prevalência da infecção por G. lambia e os fatores de risco associados em pacientes imunocomprometidos em tratamento quimioterápico no sul do Brasil. Um total de 110 pacientes imunocomprometidos de Pelotas, RS, Brasil, consentiram em participar deste estudo e foram recrutados. O perfil socioeconômico e epidemiológico dos pacientes foi coletado por meio de questionário. A prevalência de Giardia foi determinada através de microscopia pela técnica de centrifugação-flutuação utilizando amostras de fezes de cada paciente. Além disso, a caracterização genética do parasita foi realizada pela amplificação e sequenciamento do gene da glutamato desidrogenase (gdh). À microscopia, a prevalência de giardíase foi de 17,3% (19/110). Além disso, as sequências de DNA revelaram que 7 (36,8%) dos 19 isolados pertenciam ao agrupamento B, enquanto 6 deles (31,6%) pertenciam ao agrupamento C, 5 (26,3%) ao agrupamento A e 1 (5,3%) ao agrupamento D. Os fatores de risco (p ≤ 0,05) para giardíase foram, escolaridade (OR=8,0 (1,02 ­ 62,91), dividir casa com mais de três pessoas (OR=14,1 (3,77 ­ 52,51), fontes de água (OR=38,9 (10,4 ­ 145,7), tratamento de esgoto (OR=14,2 (3,1 ­ 65,5), destinação do lixo (OR=7,44 (2,0 ­ 27,3), possuir animais de estimação (OR=4,6 (1,0 ­ 21,2) e cultivar horta (OR=4,2 (1,3 ­ 13.6). A prevalência de G. lamblia em pacientes imunocomprometidos foi considerada elevada com a identificação de quatro conjuntos do parasito (A, B, C e D).

Babesia bovis in large ruminants in Pakistan - molecular detection and haemato-biochemical alterations

Background: Babesiosis is endemic in Pakistan and is one of the most important bovine diseases that causes huge economic losses and high mortality in young animals. A hematobiochemical study was conducted to unveil the difference between diseased and healthy animals in selected districts i.e., Faisalabad (31° 25' 7.3740'' N and 73° 4' 44.7924'' E), Toba Tek Singh (30° 58' 9.7392'' N and 72° 27' 40.7484'' E) and Jhang (31° 16' 40.9656'' N and 72° 18' 42.3360'' E) of Punjab, Pakistan. Materials, Methods & Results: A total of 518 (Cattle = 360, Buffalo = 158) blood samples were collected. The samples were analyzed by polymerase chain reaction (PCR) targeting apocytochrome b-gene (Babesia bovis-gene) (CYTb) followed by haemato-biochemical analysis. Chi-square test for univariate analysis was used to analyze the data. In summer the PCR-based prevalence was 29.4 (53/180) and 24.05% (19/79) in cows and buffaloes, respectively. On the other hand, in winter results showed that 12.7 (23/180), 13.92 % (11/79) samples positive for Babesia genus from cows and buffaloes, respectively. The positive samples were further investigated for hematological and biochemical analysis. The results revealed that, the mean value of hematological parameters like RBCs, Hb, PCV, MCV and MCHC was significantly (P < 0.05) decreased in infected animals (cows and buffaloes) as compared to the non-infected ones. While the biochemical parameters like Alanine aminotransferase (ALT), Aspartate aminotransferase (AST), cholesterol and Lactate dehydrogenase were significantly (P < 0.05) increased in infected animals as compared to healthy animals. This study is the first molecular and hematobiochemical evidence of Babesia bovis in dairy herds of Punjab province, Pakistan. Discussion: Bovine babesiosis is one of the important tick-borne diseases (TBD) affecting dairy industry. In bovines, among 3 Babesia species that cause the disease B. bovis is more pathogenic with high mortality and morbidity. Pakistan is situated in tropical and sub-tropical region where the humidity is high in some part of countries. This high humidity mostly favors the reproduction of the ticks thus higher prevalence of TBDs in this region. Initially the babesiosis was diagnosed by light microscopy using thin blood smear stained with Giemsa stain. Many studies verified that PCR is a more specific and sensitive tool than conventional techniques for the detection of carrier / asymptomatic ruminants. The haemato-biochemical profile is another valuable footprint to track the disease. Keeping in view the above-mentioned fact the present project has been planned to evaluate the haemato-biochemical alteration between health and Babesia infected cattle along with the molecular detection of Babesia species involved in bovine babesiosis. The mean values of haematobiochemical parameters in clinically ill and healthy animals revealed that the mean values of hematological parameters like RBCs, Hb, PCV, and HCT were significantly decreased in diseased animals as compared to the healthy ones. All these might be due the fact that the parasite is intra-erythrocytic in nature and destruction of red blood cells results in significant (P < 0.05) decrease level of all the hematological parameters. The mean value of ALT in babesiosis infected cattle was significantly higher as compared to healthy cattle. The mean values of AST and LDH in babesiosis infected cows was significantly higher as compared to that in healthy cows. The elevation in liver enzymes in babesiosis may be due to the hepatic damage and lesions induced by the parasite during its multiplication in the blood followed by disturbed liver function. These enzymes are present in high concentrations in the muscles and liver. High level of these enzymes in the blood is indicator of organ necrosis or damage.

Clostridioides difficile: achados epidemiológicos em animais domésticos em um Hospital Veterinário Universitário em ­ Teresina, PI / Clostridioides difficile: epidemiological findings in domestic animals in a University Veterinary Hospital in Teresina, PI

O objetivo deste estudo foi analisar a prevalência de Clostridioides difficile e suas toxinas (A/B) nas fezes de animais domésticos de um Hospital Veterinário Universitário de Teresina - PI. A detecção de C. difficile e suas toxinas foi realizada por meio de um ensaio imunoenzimático, denominado C. Diff Quik Chek Complete® (TECHLAB), capaz de detectar antígeno Glutamato Desidrogenase (GDH) e as toxinas A/B produzidas pelo bacilo, realizado em amostras fecais de cães (C. lupus) e e gatos (Felis catus) coletadas entre agosto de 2019 a setembro de 2020. Um total de 54 amostras fecais foram analisadas, das quais 16 foram positivas para C. difficile (29,63%). 68,75% (11/16) pertenciam a caninos, enquanto 31,25% (5/16) a felinos. Amostras diarreicas e não diarreicas foram utilizadas para o estudo e uma maior prevalência do bacilo pôde ser identificada em amostras diarreicas (33%). Nenhuma das amostras apresentou toxinas do patógeno. Os achados deste estudo evidenciam que C.difficile está presente no estado do Piauí. Foi possível identificá-lo em todas as espécies e em amostras diarreicas ou não, demonstrando que essa infecção pode se manifestar de formasintomática e assintomática, levantando a possibilidade de infecção cruzada entre o animal e seu tutor.

The aim of this study was to analyze the prevalence of Clostridioides difficile and its toxins (A/B) in the feces of domestic animals at a University Veterinary Hospital in Teresina - PI. The detection of C. difficile and its toxins was performed by an immunogenic enzyme, called C. Diff Quik Chek Complete® (TECHLAB), capable of detecting antigen glutamate dehydrogenase (GDH) and A/B toxins produced by this bacillus, performed in fecal samples of dogs (C. lupus) and cats (Felis catus) collected between August 2019 and September 2020.:54 stools were analyzed, of which 16 were positive for C. difficile (29.63%). 68.75% (11/16) belonged to canines, while 3.25% (5/16) to felines. Diarrheal and non-diarrheal diseases are used for the study and a higher prevalence of bacillus can be identified in diarrheal diseases (33%). None of the samples present pathogen toxins. The results of this study show that C. difficile is present in the state of Piauí. It can be identified in all species and in diarrheal or non-diarrheic samples, demonstrating that this infection can be symptomatic and asymptomatic, giving the possibility of cross-infection between the animal and its owner.

Clinical and laboratory findings in sheep experimentally poisoned by Palicourea marcgravii and the use of magnesium chloride with possible therapeutic effect on poisoning

ABSTRACT: This study aimed to examine the efficacy of magnesium chloride therapy in sheep experimentally poisoned by Palicourea marcgravii and describe the clinical and laboratory findings that may aid in early ante mortem diagnosis of this poisoning. P. marcgravii is an important plant within a group of 22 species in Brazil that cause sudden death. Its toxic component is sodium monofluoroacetate. It was observed that a time for evolution of poisoning was longer in our study compared to other studies that used the same dose of P. marcgravii in sheep. However, all animals that were poisoned and subsequently treated with magnesium chloride died. The sheep presented characteristic clinical signs before death in addition to other signs that have not been previously described for this type of poisoning, such as abdominal breathing, coughing, head pressing, and nystagmus. This is the first evaluation of hematological parameters of sheep poisoned by P. marcgravii. Leukocytosis with neutrophilia, hyperfibrinogenemia, and hyperglycemia, associated with hypophosphatemia and elevated levels of serum aspartato aminotransferase (AST), glutamate dehydrogenase (GLDH), urea, creatinine, creatine kinase (CK) and lactate dehydrogenase (LDH), were observed. Additionally, changes were noted in necropsy, such as engorged jugular, large vessel congestion, pulmonary edema. Histological examination revealed vacuolar hydropic degeneration in the distal twisted uriniferous tubules in the kidneys, similar to those reported in previous studies on P. marcgravii poisoning.

RESUMO: O presente estudo objetivou verificar a eficácia terapêutica do cloreto de magnésio em ovinos intoxicados experimentalmente por Palicourea marcgravii e descrever os achados clínicos e laboratoriais que possam auxiliar no diagnóstico precoce ante mortem dessa intoxicação. P. marcgravii é a principal planta dentro de um grupo de 22 espécies que causam morte súbita no Brasil e seu princípio tóxico é o monofluoracetato de sódio. Durante o procedimento, observou-se maior tempo de evolução em relação a outros trabalhos utilizando-se a mesma dose da P. marcgravii em ovinos, entretanto todos os animais intoxicados e posteriormente tratados com cloreto de magnésio vieram a óbito. Os ovinos apresentaram sinais clínicos característicos antes da morte, associados a sinais nunca antes descritos nesse tipo de intoxicação, como respiração abdominal, tosse, head pressing e nistagmo. Trata-se da primeira avaliação dos parâmetros hematológicos de ovinos intoxicados por P. marcgravi. Foi observado leucocitose com neutrofilia, hiperfibrinogemia e hiperglicemia, associado a elevação dos valores séricos de AST, GLDH, ureia, creatinina, CK, LDH e hipofosfatemia. À necropsia foram notadas alterações como jugular ingurgitada, congestão de grandes vasos, edema pulmonar. Histologicamente havia degeneração hidrópica vacuolar nos túbulos uriníferos contorcidos distais no rim, semelhantes às já relatadas em estudos anteriores, na intoxicação por P. marcgravii.

Clinical and laboratory findings in sheep experimentally poisoned by Palicourea marcgravii and the use of magnesium chloride with possible therapeutic effect on poisoning / Achados clínicos e laboratoriais em ovinos experimentalmente intoxicados por Palicourea marcgravii e o uso do cloreto de magnésio com possível efeito terapêutico na intoxicação

This study aimed to examine the efficacy of magnesium chloride therapy in sheep experimentally poisoned by Palicourea marcgravii and describe the clinical and laboratory findings that may aid in early ante mortem diagnosis of this poisoning. P. marcgravii is an important plant within a group of 22 species in Brazil that cause "sudden death." Its toxic component is sodium monofluoroacetate. It was observed that a time for evolution of poisoning was longer in our study compared to other studies that used the same dose of P. marcgravii in sheep. However, all animals that were poisoned and subsequently treated with magnesium chloride died. The sheep presented characteristic clinical signs before death in addition to other signs that have not been previously described for this type of poisoning, such as abdominal breathing, coughing, head pressing, and nystagmus. This is the first evaluation of hematological parameters of sheep poisoned by P. marcgravii. Leukocytosis with neutrophilia, hyperfibrinogenemia, and hyperglycemia, associated with hypophosphatemia and elevated levels of serum aspartato aminotransferase (AST), glutamate dehydrogenase (GLDH), urea, creatinine, creatine kinase (CK) and lactate dehydrogenase (LDH), were observed. Additionally, changes were noted in necropsy, such as engorged jugular, large vessel congestion, pulmonary edema. Histological examination revealed vacuolar hydropic degeneration in the distal twisted uriniferous tubules in the kidneys, similar to those reported in previous studies on P. marcgravii poisoning.(AU)

O presente estudo objetivou verificar a eficácia terapêutica do cloreto de magnésio em ovinos intoxicados experimentalmente por Palicourea marcgravii e descrever os achados clínicos e laboratoriais que possam auxiliar no diagnóstico precoce ante mortem dessa intoxicação. P. marcgravii é a principal planta dentro de um grupo de 22 espécies que causam "morte súbita" no Brasil e seu princípio tóxico é o monofluoracetato de sódio. Durante o procedimento, observou-se maior tempo de evolução em relação a outros trabalhos utilizando-se a mesma dose da P. marcgravii em ovinos, entretanto todos os animais intoxicados e posteriormente tratados com cloreto de magnésio vieram a óbito. Os ovinos apresentaram sinais clínicos característicos antes da morte, associados a sinais nunca antes descritos nesse tipo de intoxicação, como respiração abdominal, tosse, "head pressing" e nistagmo. Trata-se da primeira avaliação dos parâmetros hematológicos de ovinos intoxicados por P. marcgravi. Foi observado leucocitose com neutrofilia, hiperfibrinogemia e hiperglicemia, associado a elevação dos valores séricos de AST, GLDH, ureia, creatinina, CK, LDH e hipofosfatemia. À necropsia foram notadas alterações como jugular ingurgitada, congestão de grandes vasos, edema pulmonar. Histologicamente havia degeneração hidrópica vacuolar nos túbulos uriníferos contorcidos distais no rim, semelhantes às já relatadas em estudos anteriores, na intoxicação por P. marcgravii.(AU)

Clinical and laboratory findings in sheep experimentally poisoned by Palicourea marcgravii and the use of magnesium chloride with possible therapeutic effect on poisoning / Achados clínicos e laboratoriais em ovinos experimentalmente intoxicados por Palicourea marcgravii e o uso do cloreto de magnésio com possível efeito terapêutico na intoxicação

This study aimed to examine the efficacy of magnesium chloride therapy in sheep experimentally poisoned by Palicourea marcgravii and describe the clinical and laboratory findings that may aid in early ante mortem diagnosis of this poisoning. P. marcgravii is an important plant within a group of 22 species in Brazil that cause "sudden death." Its toxic component is sodium monofluoroacetate. It was observed that a time for evolution of poisoning was longer in our study compared to other studies that used the same dose of P. marcgravii in sheep. However, all animals that were poisoned and subsequently treated with magnesium chloride died. The sheep presented characteristic clinical signs before death in addition to other signs that have not been previously described for this type of poisoning, such as abdominal breathing, coughing, head pressing, and nystagmus. This is the first evaluation of hematological parameters of sheep poisoned by P. marcgravii. Leukocytosis with neutrophilia, hyperfibrinogenemia, and hyperglycemia, associated with hypophosphatemia and elevated levels of serum aspartato aminotransferase (AST), glutamate dehydrogenase (GLDH), urea, creatinine, creatine kinase (CK) and lactate dehydrogenase (LDH), were observed. Additionally, changes were noted in necropsy, such as engorged jugular, large vessel congestion, pulmonary edema. Histological examination revealed vacuolar hydropic degeneration in the distal twisted uriniferous tubules in the kidneys, similar to those reported in previous studies on P. marcgravii poisoning.(AU)

O presente estudo objetivou verificar a eficácia terapêutica do cloreto de magnésio em ovinos intoxicados experimentalmente por Palicourea marcgravii e descrever os achados clínicos e laboratoriais que possam auxiliar no diagnóstico precoce ante mortem dessa intoxicação. P. marcgravii é a principal planta dentro de um grupo de 22 espécies que causam "morte súbita" no Brasil e seu princípio tóxico é o monofluoracetato de sódio. Durante o procedimento, observou-se maior tempo de evolução em relação a outros trabalhos utilizando-se a mesma dose da P. marcgravii em ovinos, entretanto todos os animais intoxicados e posteriormente tratados com cloreto de magnésio vieram a óbito. Os ovinos apresentaram sinais clínicos característicos antes da morte, associados a sinais nunca antes descritos nesse tipo de intoxicação, como respiração abdominal, tosse, "head pressing" e nistagmo. Trata-se da primeira avaliação dos parâmetros hematológicos de ovinos intoxicados por P. marcgravi. Foi observado leucocitose com neutrofilia, hiperfibrinogemia e hiperglicemia, associado a elevação dos valores séricos de AST, GLDH, ureia, creatinina, CK, LDH e hipofosfatemia. À necropsia foram notadas alterações como jugular ingurgitada, congestão de grandes vasos, edema pulmonar. Histologicamente havia degeneração hidrópica vacuolar nos túbulos uriníferos contorcidos distais no rim, semelhantes às já relatadas em estudos anteriores, na intoxicação por P. marcgravii.(AU)

Photosynthetic index and nitrogen assimilation in rapeseed seedlings transplanted in soil with ammonium glufosinate / Índice fotossintético e assimilação de nitrogênio em plântulas de colza transplantadas em resposta a resíduos de glufosinato presentes no solo

Herbicide application is an effective weed control method for mitigating crop yield loss; however, herbicide overuse can cause toxicity in non-target plants. The present study evaluated the effects of glufosinate at recommended dose for agricultural application (0.45 kg ha-1) and at overuse dose (0.90 kg ha-1) glufosinate application on photosynthetic performance and nitrogen assimilation of the rapeseed varieties D148 and Zhongshuang 11 (ZS11). Both glufosinate concentrations significantly decreased the content of chlorophyll and nitrogenous compounds, except free proline, and the activity of glutamine synthetase and glutamate synthase, and increased the activity of glutamic acid dehydrogenase in both varieties. When the concentration of glyphosate was 0.45kg ha-1, the nitrogen assimilation of the two varieties decreased, which indicated that the recommended dosage inhibited the nitrogen assimilation of the two varieties; however, the increase of net photosynthetic rate of D148 and the decrease of that of ZS11 mean that D148 is more tolerant to the recommended dose of glyphosate than ZS11. The 0.90 kg ha-1 dosage was toxic to both rapeseed varieties. Overall, our results indicated that herbicide overuse inhibited the photosynthetic rate and nitrogen assimilation in rapeseed seedlings, and it is essential to apply a suitable glufosinate dose based on the variety grown to minimize adverse effects on crops and environment.(AU)

A aplicação de herbicidas é um método eficaz de controle de ervas daninhas para mitigar a perda de produtividade das culturas. No entanto, o uso excessivo de herbicidas pode causar toxicidade em plantas não alvo. O presente estudo avaliou os efeitos da dose recomendada para aplicação agrícola (0.45 kg ha-1) e dose excessiva (0.90 kg ha-1) de glufosinato no desempenho fotossintético e assimilação de nitrogênio das variedades de colza D148 e Zhongshuang 11 (ZS11). Ambas as concentrações de glutamato diminuíram significativamente o teor de clorofila e compostos azotados, exceto a prolina livre, e a atividade de síntese da glutamina e de síntese de glutamato, e aumentaram a atividade de desidrogenase do ácido glutâmico em ambas as variedades. Quando a concentração de glifosato foi 0.45 kg ha-1, a assimilação de azoto das duas variedades diminuiu, o que indicou que a dosagem recomendada de glifosato inibiu a assimilação de azoto das duas variedades de colza. Entretanto, a taxa fotosintética líquida do D148 aumentou enquanto o do ZS11 diminuiu, o que significa que o D148 é mais tolerante a dose recomendada de glifosato do que o ZS11. A dose de 0.90 kg ha-1 de glifosato foi prejudicial para as mudas de duas variedades de colza. Em geral, os nossos resultados indicam que o uso excessivo de glufosinato inibe a taxa fotossintética e a assimilação de nitrogênio em mudas de colza, sendo essencial aplicar uma dose adequada deste herbicida com base na variedade cultivada para minimizar os efeitos adversos nas culturas e no meio ambiente.(AU)

Changes induced by co-inoculation in nitrogencarbon metabolism in cowpea under salinity stress

To mitigate the deleterious effects of abiotic stress, the use of plant growth-promoting bacteria along with diazotrophic bacteria has been increasing. The objectives of this study were to investigate the key enzymes related to nitrogen and carbon metabolism in the biological nitrogen fixation process and to elucidate the activities of these enzymes by the synergistic interaction between Bradyrhizobium and plant growth-promoting bacteria in the absence and presence of salt stress. Cowpea plants were cultivated under axenic conditions, inoculated with Bradyrhizobium and co-inoculated with Bradyrhizobium sp. and Actinomadura sp., Bradyrhizobium sp. and Bacillus sp., Bradyrhizobium sp. and Paenibacillus graminis, and Bradyrhizobium sp. and Streptomycessp.; the plants were also maintained in the absence (control) and presence of salt stress (50 mmolL-1 NaCl). Salinity reduced the amino acids, free ammonia, ureides, proteins and total nitrogen content in nodules and increased the levels of sucrose and soluble sugars. The co-inoculations responded differently to the activity of glutamine synthetase enzymes under salt stress, as well as glutamate synthase, glutamate dehydrogenase aminating, and acid invertase in the control and salt stress. Considering the development conditions of this experiment, co-inoculation with Bradyrhizobium sp. and Bacillus sp. in cowpea provided better symbiotic performance, mitigating the deleterious effects of salt stress.(AU)

Aplicação de silício no solo: efeito na expressão enzimática de sementes oriundas de plantas de arroz sob estresse salino / Application of silicon to the soil: effect on enzymatic expression in rice seed produced under salt stress

A utilização de silício pode acarretar em aumento da capacidade biológica da planta em resistir às condições adversas do meio ambiente. Diante disso, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a expressão isoenzimática de sementes oriundas de plantas cultivadas com aplicação de cinza da casca de arroz, via solo, sob estresse salino. O delineamento utilizado foi em blocos casualizados, em esquema fatorial A x B (Fator A- Cinco doses de cinza da casca de arroz aplicada via solo: 0; 500; 1000; 1500 e 2000 kg ha-¹; Fator B- Três concentrações salinas: 0, 4 e 8 mM), com quatro repetições. Foram realizados os testes de primeira contagem de germinação e germinação, e expressão dos sistemas isoenzimáticos glutamato oxaloacetato transaminase, álcool desidrogenase, glutamato desidrogenase e sorbitol. Variações nos quatro sistemas eletroforéticos analisados podem estar associados ao estresse salino causado durante o crescimento e desenvolvimento de plantas de arroz. O sistema isoenzimático glutamato oxaloacetato transaminase é uma ferramenta complementar à avaliação do potencial fisiológico de sementes de arroz.

The silicon utilization may result in the increased biological ability of the plants to withstand the harsh conditions of the environment. In this sense, the study aimed to evaluate the effect of the application of rice husk ash to the soil in rice plants under salt stress on isoenzymes expression. The experimental design was a randomized block in factorial A x B (Factor A- Five doses of rice husk ash applied to soil: 0.0, 500, 1000, 1500, and 2000 kg ha-¹, Factor B- Three salt concentrations: 0, 4, and 8 mM), with four replications. Tests were the first count of germination and germination, and expression of isozyme systems glutamate oxaloacetate transaminase, alcohol dehydrogenase, glutamate dehydrogenase, and sorbitol. Variations in the all analyzed electrophoretic systems may be associated with salt stress caused during the growth and development of rice plants. The isoenzyme system glutamate oxaloacetate transaminase is a complementary tool to assess the physiological rice seed quality.

Aplicação de silício no solo: efeito na expressão enzimática de sementes oriundas de plantas de arroz sob estresse salino / Application of silicon to the soil: effect on enzymatic expression in rice seed produced under salt stress

A utilização de silício pode acarretar em aumento da capacidade biológica da planta em resistir às condições adversas do meio ambiente. Diante disso, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a expressão isoenzimática de sementes oriundas de plantas cultivadas com aplicação de cinza da casca de arroz, via solo, sob estresse salino. O delineamento utilizado foi em blocos casualizados, em esquema fatorial A x B (Fator A- Cinco doses de cinza da casca de arroz aplicada via solo: 0; 500; 1000; 1500 e 2000 kg ha-¹; Fator B- Três concentrações salinas: 0, 4 e 8 mM), com quatro repetições. Foram realizados os testes de primeira contagem de germinação e germinação, e expressão dos sistemas isoenzimáticos glutamato oxaloacetato transaminase, álcool desidrogenase, glutamato desidrogenase e sorbitol. Variações nos quatro sistemas eletroforéticos analisados podem estar associados ao estresse salino causado durante o crescimento e desenvolvimento de plantas de arroz. O sistema isoenzimático glutamato oxaloacetato transaminase é uma ferramenta complementar à avaliação do potencial fisiológico de sementes de arroz.(AU)

The silicon utilization may result in the increased biological ability of the plants to withstand the harsh conditions of the environment. In this sense, the study aimed to evaluate the effect of the application of rice husk ash to the soil in rice plants under salt stress on isoenzymes expression. The experimental design was a randomized block in factorial A x B (Factor A- Five doses of rice husk ash applied to soil: 0.0, 500, 1000, 1500, and 2000 kg ha-¹, Factor B- Three salt concentrations: 0, 4, and 8 mM), with four replications. Tests were the first count of germination and germination, and expression of isozyme systems glutamate oxaloacetate transaminase, alcohol dehydrogenase, glutamate dehydrogenase, and sorbitol. Variations in the all analyzed electrophoretic systems may be associated with salt stress caused during the growth and development of rice plants. The isoenzyme system glutamate oxaloacetate transaminase is a complementary tool to assess the physiological rice seed quality.(AU)

Aminotransferase and glutamate dehydrogenase activities in lactobacilli and streptococci

Aminotransferases and glutamate dehydrogenase are two main types of enzymes involved in the initial steps of amino acid catabolism, which plays a key role in the cheese flavor development. In the present work, glutamate dehydrogenase and aminotransferase activities were screened in twenty one strains of lactic acid bacteria of dairy interest, either cheese-isolated or commercial starters, including fifteen mesophilic lactobacilli, four thermophilic lactobacilli, and two streptococci. The strains of Streptococcus thermophilus showed the highest glutamate dehydrogenase activity, which was significantly elevated compared with the lactobacilli. Aspartate aminotransferase prevailed in most strains tested, while the levels and specificity of other aminotransferases were highly strain- and species-dependent. The knowledge of enzymatic profiles of these starter and cheese-isolated cultures is helpful in proposing appropriate combinations of strains for improved or increased cheese flavor.(AU)

Efeitos da Ametrina na bioenergética de mitocôndrias isoladas de fígado de rato

O aumento na demanda de alimentos pela população associado com a exigência de maior produtividade por área faz com que, cada vez mais, os produtores optem pela utilização de praguicidas na lavoura. Sabe-se que o uso destes compostos é crescente em todo o mundo e, paralelo a isso, os riscos de contaminação de organismos não alvos (animais e humanos) tende a aumentar proporcionalmente. A Ametrina é um herbicida da classe das triazinas amplamente empregado em culturas como abacaxi, banana, café, cana-de-açúcar, citros e milho, extremamente móvel no ambiente e altamente persistente na água e solo. Há relatos da presença de resíduos e metabólitos da Ametrina encontrados em águas subterrâneas mesmo depois de longos períodos após sua aplicação. Dados na literatura indicam que o fígado é um órgão alvo da toxicidade da Ametrina, pois ela é capaz de desregular a morfologia e a fisiologia hepática. O fígado desempenha uma função central no metabolismo, pois recebe grandes quantidades de nutrientes e substâncias exógenas (xenobióticos) que são absorvidos por meio do trato digestório e conduzidos pela veia porta para a posterior metabolização e eliminação do organismo. Responsáveis pela síntese da quase totalidade do ATP necessário à manutenção da estrutura e função celular, as mitocôndrias representam um alvo crítico para a ação de drogas e toxinas. O objetivo do presente estudo foi caracterizar os efeitos da Ametrina em mitocôndrias isoladas de fígado de rato. A fração mitocondrial foi isolada por centrifugação diferencial e as concentrações do herbicida utilizadas foram de 25, 50, 100 e 150 µM. Os efeitos da Ametrina nas mitocôndrias foram avaliados pela determinação do consumo de oxigênio mitocondrial, atividades das enzimas relacionadas à cadeia respiratória mitocondrial (NADH desidrogenase e Succinato desidrogenase), potencial de membrana mitocondrial () e níveis de ATP mitocondriais. Quando energizadas com malato + glutamato (substratos do complexo I da cadeia de transporte de elétrons) a Ametrina promoveu uma redução significante no consumo de oxigênio nas concentrações a partir de 50 µM e quando energizadas com succinato (substrato do complexo II da cadeia de transporte de elétrons) não foram observadas alterações. Observou-se a dissipação do potencial de membrana a partir 50 µM em mitocôndrias energizadas com malato + glutamato e somente em 150 µM quando energizadas com succinato. Os níveis mitocondriais de ATP foram reduzidos de maneira dose-dependente a partir de 50 µM da Ametrina. O herbicida afetou a atividade da enzima NADH desidrogenase nas concentrações superiores a 50 µM e da Succinato desidrogenase somente na maior concentração testada (150 µM). Assim, os resultados desse estudo indicam que a toxicidade da Ametrina em hepatócitos pode estar relacionada às alterações na bioenergética mitocondrial.

The increase in the demand for food by the population associated with the demand for greater productivity by area means that, increasingly, producers opt for the use of pesticides in the fields. It is known that the use of these compounds is increasing worldwide and, in parallel, the risks of contamination from non-target organisms (animals and humans) tend to increase proportionately. Ametrine is a triazine herbicide widely used in cultures as pineapple, banana, coffee, sugar cane, citrus and corn, extremely mobile in the environment and highly persistent in water and soil. Ametrine residues and metabolites have been reported to be found in groundwater even after long periods after application. Data in the literature indicate that the liver is a target organ for Ametrine toxicity, as it is capable of deregulating liver morphology and physiology. The liver plays a central role in metabolism, as it receives large amounts of nutrients and exogenous substances (xenobiotics) that are absorbed through the digestive tract and conducted through the portal vein for further metabolism and elimination from the body. Responsible for the synthesis of almost all of the ATP necessary to maintain cellular structure and function, mitochondria represent a critical target for the action of drugs and toxins. The aim of the present study was to characterize the effects of Ametrine in isolated rat liver mitochondria. The mitochondrial fraction was isolated by differential centrifugation and the concentrations of the herbicide used were 25, 50, 100 and 150 µM. The effects of Ametrine on mitochondria were assessed by determining mitochondrial oxygen consumption, enzyme activities related to the mitochondrial respiratory chain (NADH dehydrogenase and Succinate dehydrogenase), mitochondrial membrane potential () and mitochondrial ATP levels. When energized with malate + glutamate (substrates of complex I of the electron transport chain) Ametrine promoted significant reduction of oxygen consumption in concentrations from 50 µM and when energized with succinate (substrate of complex II of the electron transport chain) no changes were observed. The dissipation of the membrane potential from 50 µM was observed in mitochondria energized with malate + glutamate and only in 150 µM when energized with succinate. The mitochondrial level of ATP was reduced in a dose-dependent manner from 50 µM of Ametrine. The herbicide affected the activity of the enzyme NADH dehydrogenase at concentrations greater than 50 µM and Succinate dehydrogenase only at the highest concentration tested (150 µM). Thus, the results of this study indicate that the toxicity of Ametrine in hepatocytes may be related to changes in mitochondrial bioenergetics.

Diversidade molecular de Giardia duodenalis em animais domésticos na região de Botucatu, sp

Giardia é um importante protozoário relacionado a quadros de diarreia em animais e seres humanos, transmitido por via fecal-oral. Apesar de representar um importante problema de saúde pública mundial, pouco se conhece sobre o papel efetivo dos animais na epidemiologia da giardíase, mesmo com o desenvolvimento de técnicas moleculares que permitiram consideráveis progressos na identificação e classificação deste protozoário. O objetivo do presente estudo foi determinar a prevalência de Giardia sp. em cães, gatos e pequenos ruminantes, além de detectar a diversidade molecular de Giardia duodenalis pela avaliação dos loci gdh (glutamato desidrogenase), bg (-giardina) e tpi (triose fosfato isomerase) em cães e gatos da região de Botucatu, SP, determinando os assemblages e o papel dos animais de companhia como potenciais reservatórios do parasita para a infecção em seres humanos. Amostras de fezes foram avaliadas pela técnica coproparasitológica de centrifugo-flutuação de sulfato de zinco, com prevalências de 8,7%, 10,4% e 6,6% para cães, gatos e pequenos ruminantes, respectivamente. Houve uma maior prevalência dos assemblages C, D, A, respectivamente para os cães e para os gatos foram detectados os assemblages A, B, C, E e F, sendo o assemblage A de maior prevalência, seguida por F. Não houve correlação entre os assemblages zoonóticos e o ambiente domiciliado. A detecção dos assemblages A e B é um passo importante para sugerir um potencial zoonótico e indicar a participação dos cães, gatos e dos seres humanos no ciclo de transmissão da G. duodenalis, aumentando a possibilidade de um problema de saúde pública envolvendo a giardíase.

Giardia is an important intestinal protozoon related to diarrhea in animals and humans, transmitted by fecal oral route. Despite giardiasis representing an important word public health problem, little is known about the effective role of animals in epidemiology, even with the development of molecular techniques that allowed considerable progress in the identification and classification of this protozoan. The aim of the present study was set the prevalence of Giardia sp. in dogs, cats and small ruminants, in addition to detect the molecular diversity of Giardia duodenalis assessing gdh (glutamate dehydrogenase), bg (-giardin) and tpi (phosphate isomerase) loci in dogs and cats from Botucatu, SP. The assessment of what assemblages are involved is important for evaluate the role of companion and production animals as potential reservoirs of human infection. Fecal samples were evaluated by centrifugal-flotation method, with prevalence of 8.7%, 10.4% and 6.6% for dogs, cats and small ruminants, respectively. From the molecular analyzes there was a higher prevalence of assemblages C, D, A, respectively for dogs, and for cats assemblages A, B, C, E and F were detected, with assemblage A the most prevalent, followed by F. There was no correlate between zoonotic assemblages and domiciled animals. The detection of assemblages A and B is an important step to suggest a zoonotic potential and to indicate the participation of dogs, cats and humans in the transmission of G. duodenalis, increasing the possibility of a public health problem involving giardiasis.

Caracterização in silico dos genes envolvidos no metabolismo do nitrogênio em milho (Zea mays) / In silico characterization of genes involved in nitrogen metabolism in maize (Zea mays) / Caracterización in silico de genes implicados en el metabolismo de nitrógeno en maíz (Zea mays)

O N é o nutriente mineral requerido pelas plantas em maior quantidade e frequentemente limita o crescimento e produtividade. A partir de uma análise in silico foram identificados 26 genes envolvidos na assimilação do nitrogênio: quatro genes que codificam a enzima nitrato redutase (ZmNR), oito nitrato redutase de transporte (ZmNRT), uma nitrito redutase (ZmNRi), uma nitrito de transporte (ZmNRiT), seis glutamina sintetase (ZmGS), quatro glutamato sintase (ZmGOGAT) e duas glutamato desidrogenase (ZmGDH). A árvore filogenética foi construída onde foi possível observar a formação de cinco grupos distintos de acordo com as funções. A análise da estrutura dos genes mostrou que o número de íntrons variou de 0 a 32. A análise dos domínios conservados mostrou que a maioria dos genes identificados possuem o domínios específicos a função que desempenham na rota de assimilação do N em milho. Além disso, esses genes apresentaram padrões de expressão diferenciais em tecidos e órgãos. Os dados gerados neste trabalho forneceram subsídios para selecionar genes-candidatos para futuras análises funcionais a serem utilizados nos programas de melhoramento de milho.(AU)

Nitrogen is a mineral highly requested by plants and often limits both growth and productivity. From an in-silico analysis, a total of 26 genes were identified as being involved in nitrogen assimilation: four genes encoding nitrate reductase enzyme (ZmNR), eight encoding nitrate reductase transporters (ZmNRT), one encoding nitrite reductase (ZmNRi), one encoding nitrite transporter (ZmNRiT), six encoding glutamine synthesis (ZmGOGAT) and two encoding glutamate dehydrogenase (ZmGDH). A phylogenetic tree was generated where the formation of five distinct clusters could be observed according to gene function. Structural genes analysis showed that introns varied from 0 to 32. The analysis of conserved domains showed that most of the identified genes play a domain-specific function in the N assimilation pathway in maize. Moreover, these genes present a differential expression pattern in tissues and organs. Data from this study will provide subsidies to select candidate genes for further functional analyses in maize breeding programs.(AU)

N es el nutriente mineral requerido por las plantas en mayor cantidad y a menudo limita el crecimiento y la productividad. Desde un análisis in silico se ha identificado 26 genes implicados en la asimilación de nitrógeno: cuatro genes que codifican la enzima nitrato reductasa (ZmNR), ocho nitrato reductasa de transporte (ZmNRT), un nitrito reductasa (ZmNRi), un nitrito de transporte (ZmNRiT), seis glutamina sintetasa (ZmGS), cuatro sintasa de glutamato (ZmGOGAT) y dos glutamato deshidrogenasa (ZmGDH). El árbol filogenético se ha construido donde ha sido posible observar la formación de cinco grupos distintos de acuerdo con sus funciones. El análisis de la estructura de los genes ha mostrado que el número de intrones ha variado de 0 a 32. El análisis de los dominios conservados mostró que la mayoría de los genes identificados poseen dominios específicos a la función que desempeñan en la ruta de asimilación de N en maíz. Además, esos genes mostraron patrones de expresión diferenciales en tejidos y órganos. Los datos generados en este estudio proporcionan subvenciones para la selección de genes candidatos para posterior análisis funcional, para ser utilizados en programas de mejoramiento de maíz.(AU)

Caracterização in silico dos genes envolvidos no metabolismo do nitrogênio em milho (Zea mays) / In silico characterization of genes involved in nitrogen metabolism in maize (Zea mays) / Caracterización in silico de genes implicados en el metabolismo de nitrógeno en maíz (Zea mays)

O N é o nutriente mineral requerido pelas plantas em maior quantidade e frequentemente limita o crescimento e produtividade. A partir de uma análise in silico foram identificados 26 genes envolvidos na assimilação do nitrogênio: quatro genes que codificam a enzima nitrato redutase (ZmNR), oito nitrato redutase de transporte (ZmNRT), uma nitrito redutase (ZmNRi), uma nitrito de transporte (ZmNRiT), seis glutamina sintetase (ZmGS), quatro glutamato sintase (ZmGOGAT) e duas glutamato desidrogenase (ZmGDH). A árvore filogenética foi construída onde foi possível observar a formação de cinco grupos distintos de acordo com as funções. A análise da estrutura dos genes mostrou que o número de íntrons variou de 0 a 32. A análise dos domínios conservados mostrou que a maioria dos genes identificados possuem o domínios específicos a função que desempenham na rota de assimilação do N em milho. Além disso, esses genes apresentaram padrões de expressão diferenciais em tecidos e órgãos. Os dados gerados neste trabalho forneceram subsídios para selecionar genes-candidatos para futuras análises funcionais a serem utilizados nos programas de melhoramento de milho.

Nitrogen is a mineral highly requested by plants and often limits both growth and productivity. From an in-silico analysis, a total of 26 genes were identified as being involved in nitrogen assimilation: four genes encoding nitrate reductase enzyme (ZmNR), eight encoding nitrate reductase transporters (ZmNRT), one encoding nitrite reductase (ZmNRi), one encoding nitrite transporter (ZmNRiT), six encoding glutamine synthesis (ZmGOGAT) and two encoding glutamate dehydrogenase (ZmGDH). A phylogenetic tree was generated where the formation of five distinct clusters could be observed according to gene function. Structural genes analysis showed that introns varied from 0 to 32. The analysis of conserved domains showed that most of the identified genes play a domain-specific function in the N assimilation pathway in maize. Moreover, these genes present a differential expression pattern in tissues and organs. Data from this study will provide subsidies to select candidate genes for further functional analyses in maize breeding programs.

N es el nutriente mineral requerido por las plantas en mayor cantidad y a menudo limita el crecimiento y la productividad. Desde un análisis in silico se ha identificado 26 genes implicados en la asimilación de nitrógeno: cuatro genes que codifican la enzima nitrato reductasa (ZmNR), ocho nitrato reductasa de transporte (ZmNRT), un nitrito reductasa (ZmNRi), un nitrito de transporte (ZmNRiT), seis glutamina sintetasa (ZmGS), cuatro sintasa de glutamato (ZmGOGAT) y dos glutamato deshidrogenasa (ZmGDH). El árbol filogenético se ha construido donde ha sido posible observar la formación de cinco grupos distintos de acuerdo con sus funciones. El análisis de la estructura de los genes ha mostrado que el número de intrones ha variado de 0 a 32. El análisis de los dominios conservados mostró que la mayoría de los genes identificados poseen dominios específicos a la función que desempeñan en la ruta de asimilación de N en maíz. Además, esos genes mostraron patrones de expresión diferenciales en tejidos y órganos. Los datos generados en este estudio proporcionan subvenciones para la selección de genes candidatos para posterior análisis funcional, para ser utilizados en programas de mejoramiento de maíz.

FREQUÊNCIA E VARIABILIDADE GENÉTICA DE Giardia duodenalis EM CÃES DO MUNICÍPIO DE CUIABÁ - MATO GROSSO, BRASIL

Giardia duodenalis é um protozoário unicelular, eucarioto e flagelado. Duas formas evolutivas são observadas no ciclo de vida: trofozoíto e cisto, sendo o cisto a forma infectante. Este protozoário é responsável por causar quadros de diarreia em humanos, cães, gatos, roedores e animais ungulados. Apesar de serem morfologicamente iguais, os isolados de G. duodenalis escondem grande diversidade genética e dificultam a estabilidade e unanimidade da classificação taxonômica. Até o momento foram identificados oito assemblages denominados de A-H. Atualmente, a genotipagem multilocus é utilizada para a identificação molecular das espécies e/ou genótipos de Giardia. Com o objetivo de identificar a frequência de G. duodenalis nas fezes de cães domiciliados no município de Cuiabá, Mato Grosso, e caracterizar a variabilidade genética das amostras positivas, foram coletadas amostras de fezes de 147 cães. Para realização de triagem, todas as amostras foram submetidas ao exame de centrífugo-flutuação para visualização em microscopia. De todas as amostras coletadas, 26 cães estavam infectados por parasitos intestinais, sendo 38% (10) acometidos por G. duodenalis. A frequência de G. duodenalis em cães foi de 6,8%. Outros parasitos foram observados, como Cystoisospora sp. (15%) e Entamoeba sp. (2%), além dos nematoides Ancylostoma sp. (27%), Trichuris sp. (2%) e Toxocara sp. (1%). As amostras positivas para G. duodenalis foram submetidas à extração de DNA para realização da Reação em Cadeia pela Polimerase dos genes triosefosfato isomerase (tpi) e glutamato desidrogenase (gdh) para amplificação do fragmento de 530 e 659 pb, respectivamente, para caracterização genotípica. A análise dos fatores de risco para os cães infectados por G. duodenalis., não foi significativa quanto à sexo, raça, idade, presença de diarreia e dieta. Somente cães com contactantes foram significativamente positivos para giardíase. Após análise molecular dos isolados de G. duodenalis, apenas três amostras amplificaram fragmento do gene tpi apresentando 100% de identidade com Assemblage C. Para análise genética das sequências, foi construído a árvore filogenética a partir das sequências concatenadas dos genes gdh e tpi para determinar o assemblage com maior precisão. A amostra identificada neste estudo ficou agrupada no mesmo clado do assemblage C corroborando com a sequência obtida pelo tpi. A genotipagem multilocus é o método mais confiável para determinar os assemblages de G. duodenalis, uma vez que discrepâncias entre os locus de um mesmo isolado podem ocorrer devido a infecções mistas e/ou heterozigose

Giardia duodenalis is a unicellular, eukaryotic and flagellated protozoan. Two evolutionary forms are observed in the life cycle: trophozoite and cyst, the cyst being the infectious form. This protozoan is responsible for causing diarrhea in humans, dogs, cats, rodents and ungulate animals. Despite being morphologically equal, the isolates of G. duodenalis hide great genetic diversity and hinder the stability and unanimity of the taxonomic classification. So far, eight assemblages called A-H have been identified. Currently, multilocus genotyping is used for the molecular identification of Giardia species and / or genotypes. In order to identify the frequency of G. duodenalis in the feces of dogs domiciled in the city of Cuiabá, Mato Grosso, and to characterize the genetic variability of positive samples, fecal samples were collected from 147 dogs. To perform screening, all samples were subjected to centrifugalfluctuation examination for viewing under a microscopy. Of all samples collected, 26 dogs were infected with intestinal parasites, 38% (10) of whom were affected by G. duodenalis. The frequency of G. duodenalis in dogs was 6.8%. Other parasites have been observed, such as Cystoisospora sp. (15%) and Entamoeba sp. (2%), in addition to the Ancylostoma sp. (27%), Trichuris sp. (2%) and Toxocara sp. (1%). The positive samples for G. duodenalis were submitted to DNA extraction to perform the Chain Reaction by the Polymerase of the genes triosephosphate isomerase (tpi) and glutamate dehydrogenase (gdh) for amplification of the fragment of 530 and 659 bp, respectively, for genotypic characterization. The analysis of risk factors for dogs infected with G. duodenalis, was not significant regarding sex, breed, age, presence of diarrhea and diet. Only dogs with contacts were significantly positive for giardiasis. After molecular analysis of G. duodenalis isolates, only three samples amplified a fragment of the tpi gene showing 100% identity with Assemblage C. For genetic analysis of the sequences, the phylogenetic tree was built from the concatenated sequences of the gdh and tpi genes to determine the assemblage with greater precision.The sample identified in this study was grouped in the same clade as assemblage C, corroborating the sequence obtained by the tpi. Multilocus genotyping is the most reliable method for determining the assemblages of G. duodenalis, since discrepancies between the loci of the same isolate can occur due to mixed infections and / or heterozygosis.

Reducing lactate secretion by ldhA Deletion in L-glutamate- producing strain Corynebacterium glutamicum GDK-9

L-lactate is one of main byproducts excreted in to the fermentation medium. To improve L-glutamate production and reduce L-lactate accumulation, L-lactate dehydrogenase-encoding gene ldhA was knocked out from L-glutamate producing strain Corynebacterium glutamicum GDK-9, designated GDK-9ΔldhA. GDK-9ΔldhA produced approximately 10.1% more L-glutamate than the GDK-9, and yielded lower levels of such by-products as α-ketoglutarate, L-lactate and L-alanine. Since dissolved oxygen (DO) is one of main factors affecting L-lactate formation during L-glutamate fermentation, we investigated the effect of ldhA deletion from GDK-9 under different DO conditions. Under both oxygen-deficient and high oxygen conditions, L-glutamate production by GDK-9ΔldhA was not higher than that of the GDK-9. However, under micro-aerobic conditions, GDK-9ΔldhA exhibited 11.61% higher L-glutamate and 58.50% lower L-alanine production than GDK-9. Taken together, it is demonstrated that deletion of ldhA can enhance L-glutamate production and lower the unwanted by-products concentration, especially under micro-aerobic conditions.

SÍNDROME DO CORPO ESTRANHO METÁLICO EM BOVINOS: ESTUDO CLÍNICO, LABORATORIAL, ULTRASONOGRÁFICO E ANATOMOPATOLÓGICO.

A síndrome do corpo estranho metálico é uma das principais enfermidades digestivas que acometem os bovinos. A associação do exame clínico aos exames complementares, laboratoriais e ultrassonográfico podem auxiliar no estabelecimento do diagnóstico precoce e prognóstico da enfermidade aprimorando a adoção de medidas preventivas. Este trabalho objetivou avaliar as implicações clínicas, laboratoriais, ultrassonográficas e anatomopatológicas de 37 bovinos portadores da síndrome do corpo estranho provenientes do Agreste Meridional de Pernambuco. Os animais foram submetidos ao exame clínico, laboratoriais e ultrassonográfico, sendo distribuídos em retículo peritonite (GI; n=21) e reticulo pericardite (GII; n=16) traumáticas baseado nos achados anatomopatológicos. Foram colhidas amostras de sangue, com e sem anticoagulante, para realização do hemograma, determinação da proteína plasmática total e fibrinogênio plasmático, obtenção de soro para mensuração de proteína total, albumina, globulinas, gama glutamiltransferase (GGT), aspartato aminotransferase (AST), glutamato desidrogenase (GLDH), creatinina, ureia, cortisol, creatina quinase (CK), creatina quinase - MB (CK-MB), troponina cardíaca-I (cTn-I), e plasma para determinação de glicose e L-lactato. A abdominocentese foi produtiva em oito animais do GI (n=8) e sete do GII (n=7) permitindo avaliar características físicas, citológicas e bioquímicas do líquido peritoneal como concentrações de proteína total, albumina, GLDH, AST, GGT, CK, glicose e L-lactato. Foram obtidas imagens ultrassonográficas de 18 animais do GI (n=18) e 12 animais do GII (n=12). Os resultados referentes às observações clínicas, análise de líquido peritoneal, achados ultrassonográficos e anatomopatológicos foram analisados por meio de estatística descritiva. Os dados hematológicos, de bioquímica sanguínea e do líquido peritoneal foram analisados e comparados entre os grupos empregando à análise de variância (ANOVA one way) e teste F da ANOVA, com nível de 5% de significância (p<0,05%). Ambos os grupos apresentaram alterações de comportamento, apetite, desidratação e variação de temperatura de 38-39°C, no entanto, estas características foram mais expressivas nos animais do GII. Os achados hematológicos evidenciaram leucocitose por neutrofilia com desvio à esquerda regenerativo e hiperfibrinogenemia em ambos os grupos. A análise bioquímica sanguínea de ambos os grupos demonstrou aumento da concentração de globulinas e L-lactato e da atividade sérica de GGT, GLDH, CK e CK-MB, além de elevação significativa da cTnI nos bovinos do GII. O líquido peritoneal encontrava-se alterado com concentrações proteicas elevadas e predomínio de polimorfonucleares, dentre as variáveis bioquímicas o L-lactato mostrou ser um indicador de alteração abdominal. O exame ultrassonográfico permitiu a visualização de irregularidade de contorno, aderência, deslocamento e alteração de motilidade reticular em ambos os grupos, líquido na cavidade abdominal, pericárdica e torácica no GII e apenas abdominal no GI, além de alterações cardíacas e hepáticas principalmente no GII e esplênicas no GI. As lesões anatomopatológicas ratificaram os achados ultrassonográficos observados em ambos os grupos confirmando o diagnóstico da síndrome. A gravidade das implicações sistêmicas verificadas nesta síndrome, justificam a importância da intervenção precoce de forma não invasiva na realização do diagnóstico preciso e precoce, no estabelecimento do prognóstico e na adoção de medidas preventivas voltadas para o rebanho, visando minimizar o impacto econômico acarretado por esta síndrome à criação de bovinos, principalmente os de aptidão leiteira.

Metallic foreign body syndrome is one of the main digestive diseases affecting cattle. The association of clinical examination with complementary, laboratory and ultrasound examinations can help in the establishment of early diagnosis and prognosis of the disease, improving the adoption of preventive measures. This study aimed to evaluate the clinical, laboratory, ultrasonographic and anatomopathological implications of 37 cattle with foreign body syndrome from the Southern Agreste of Pernambuco. The animals were submitted to clinical, laboratory and ultrasonographic examination, being distributed in reticuloperitonitis (GI; n = 21) and reticulopericarditis (GII; n = 16) traumatic, based on anatomopathological findings. Blood samples were taken with or without anticoagulant for blood counts, determination of total plasma protein and plasma fibrinogen, serum obtained for measurement of total protein, albumin, globulins, gamma glutamyltransferase (GGT), aspartate aminotransferase (AST), glutamate dehydrogenase (GLDH), creatinine, urea, cortisol, creatine kinase (CK), creatine kinase-MB (CK-MB), cardiac troponin-I (cTn-I), and plasma for glucose and L-lactate determination. The abdominocentesis was productive in eight GI (n = 8) and seven GII (n = 7) animals, allowing the evaluation of physical, cytological and biochemical characteristics of the peritoneal fluid as concentrations of total protein, albumin, GLDH, AST, GGT, glucose and L-lactate. Ultrasonographic images of 18 GI (n = 18) and 12 GII (n = 12) animals were obtained. Results regarding clinical observations, peritoneal fluid analysis, ultrasonographic and anatomopathological findings were analyzed using descriptive statistics. Hematological, blood biochemical and peritoneal fluid data were analyzed and compared between groups using ANOVA one way and ANOVA F test, with a significance level of 5% (p <0.05%). Both groups showed changes in behavior, appetite, dehydration and temperature variation of 38-39 ° C, however, these characteristics were more expressive in GII animals. The hematological findings showed leukocytosis due to neutrophilia with regenerative left deviation and hyperfibrinogenemia in both groups. Blood biochemical analysis of both groups showed increased globulin and L-lactate concentration and serum GGT, GLDH, CK and CK-MB activity, as well as significant elevation of cTnI in GII cattle. The peritoneal fluid was altered with high protein concentrations and a predominance of polymorphonuclear cells. Among the biochemical variables, L-lactate showed to be an indicator of abdominal alteration. Ultrasound examination allowed visualization of contour irregularity, adhesion, displacement and alteration of motility in reticle in both groups, fluid in the abdominal cavity, pericardial and thoracic cavity in the GII and only abdominal in the GI, besides cardiac and hepatic alterations mainly in the GII and in the GI.The anatomopathological lesions confirmed the ultrasound findings observed in both groups confirming the diagnosis of the syndrome. The severity of the systemic implications of this syndrome justifies the importance of early intervention in a non-invasive way in the accurate and early diagnosis, in the establishment of prognosis and in the adoption of preventive measures aimed at the herd, in order to minimize the economic impact caused by this to the breeding of cattle, especially dairy cattle.

Clonagem do cDNA e sequenciamento parcial do gene que codifica a enzima glutamato desidrogenase hepática de ovino / Cloning of the cDNA and partial sequencing of the gene that codifi es the sheep hepatic enzyme glutamate dehydrogenase

A enzima mitocondrial glutamato desidrogenase (GDH: EC 1.4.1.2) catalisa a desaminação reversível do L-glutamato para 2-oxoglutarato (α-cetoglutarato) usando o NAD+ e NADP+ como coenzimas. É uma das mais importantes enzimas hepáticas encontradas em hepatócitos de bovinos, ovinos e caprinos. Infecções por Fasciola spp., intoxicação grave aguda por toxinas de plantas, tais como Xanthium spp. e Senecio spp. e intoxicação por cobre resultam na liberação dessa enzima no sangue. O aumento da GDH indica danos ou necrose hepática em bovinos e ovinos. Esta é a enzima de escolha para avaliar a função hepática dos ruminantes. No presente trabalho o cDNA que codifica a enzima GDH do hepatócito de ovino foi sintetizado por meio de RT-PCR utilizando mRNA extraído do fígado de ovino. Parte da região de codificação do cDNA da GDH de ovino foi amplificada por PCR usando oligonucleotídeos iniciadores sintetizados a partir do alinhamento de sequências de ORFs de Ovis aries, Bos taurus, Homo sapiens, Rattus norvegicus e Mus musculus disponíveis em banco de dados. O cDNA foi clonado no vetor pGEM® -T Easy (Promega) e inserido em células cálcio-competentes de Escherichia coli DH10B através de choque térmico. O DNA plasmidial foi purificado e após o sequenciamento a presença de um inserto de 1292 pb foi confirmado. O alinhamento da sequência deduzida de aminoácidos com outras espécies revelou alta homologia entre as GDH.

The mitochondrial enzyme Glutamate Dehydrogenase (GDH: EC 1.4.1.2) catalyzes the reversible deamination of the L-glutamate for 2-oxoglutarate (α-ketoglutarate) using NAD+ and NADP+ as coenzymes. It is one of the most important liver enzymes found in hepatocytes of cattle, sheep and goats. Infections by Fasciola spp., severe acute intoxication by toxins of plants such as Xanthium spp. and Senecio spp. as well as intoxication by copper result in the release of this enzyme in blood. The increase of the GDH indicates damage or hepatic necrosis in cattle and sheep. This is an enzyme of choice to evaluate the function of the ruminants. In the present study the cDNA, that codifies the GDH enzyme of the hepatocyte of sheep, was synthesized by means of RT-PCR making use of mRNA extracted from the liver of sheep. Part of the region where the cDNA of the GDH of the ovine is codified was amplified by PCR from primers synthesized through the comparison of the aligned sequences of Ovis aries, Bos taurus, Homo sapiens, Rattus norvegicus and Mus musculus available in the database. The cDNA was cloned in the vector pGEM®-T Easy (Promega) and inserted in Escherichia coli DH10B calcium competent cells by heat shock procedure. The plasmid DNA was purified and after sequencing, the presence of 1292 pb was confirmed. The alignment of the sequence deduced of amino acid with other species revealed high homology among the GDHs.