Cyp19 expression and sex change timing in captive-bred false clownfish / Expressão de Cyp19 e o período da mudança de sexo em peixes-palhaço falsos criados em cativeiro

The false clown anemonefish (Amphiprion ocellaris) is a protandrous hermaphrodite with a distinctive reproductive behavior. This study elucidates the genetic mechanisms and timing of sex changes in captive-bred A. ocellaris by examining the expression of key genes involved in this process, specifically cyp19a1a and cyp19a1b. Gonadal histological analyses and gene expression studies were conducted on subadult fish paired for 0, 1, 2, 3, 4, 5, and 16 months. Our findings reveal that alterations in cyp19 gene expression coincide with a pairing period starting after 3 months. Both cyp19a1a and cyp19a1b expression levels were significantly elevated in paired females compared with their male counterparts and unpaired controls. Histological investigations demonstrated that sex conversion to females occurred during the 3-month pairing period. This study highlights the crucial role of cyp19a1a and cyp19a1b in the sex change process of A. ocellaris and indicates that a minimum of 5 months of pairing is necessary for completing the sex change.

O peixe-palhaço falso (Amphiprion ocellaris) é um hermafrodita protândrico com um comportamento reprodutivo distintivo. Este estudo esclarece os mecanismos genéticos e o período das mudanças de sexo em A. ocellaris criados em cativeiro, examinando a expressão de genes-chave envolvidos nesse processo, especificamente cyp19a1a e cyp19a1b. Análises histológicas gonadais e estudos de expressão gênica foram conduzidos em peixes subadultos emparelhados por 0, 1, 2, 3, 4, 5 e 16 meses. Os resultados revelam que alterações na expressão do gene cyp19 coincidem com um período de emparelhamento a partir de 3 meses. Os níveis de expressão de cyp19a1a e cyp19a1b foram significativamente elevados em fêmeas emparelhadas em comparação com seus homólogos masculinos e controles não-emparelhados. Investigações histológicas demonstraram que a conversão sexual para fêmeas ocorreu durante o período de emparelhamento de 3 meses. Este estudo destaca o papel crucial de cyp19a1a e cyp19a1b no processo de mudança de sexo de A. ocellaris e indica que um mínimo de 5 meses de emparelhamento é necessário para concluir a mudança de sexo.

Effect of dosage of orally administered 17α-methyltestosterone on sex reversion of the yellowtail tetra Astyanax lacustris (Lütken, 1875)

The females of yellowtail tetra (Astyanax lacustris), known as the freshwater sardine, are approximately 1.33 times larger than males, and thus, all-female monosex culture would increase production and reduce size variability. The present work aimed to identify the optimal dose of 17α-methyltestosterone (MT) to be used in the masculinization of A. lacustris for indirect sex reversal. Three different concentrations of MT (20, 40, and 60 mg/kg of feed in the diet) were fed to the fry for 30 days. Thirty adult individuals from each treatment, including the control (0 mg MT/kg), were evaluated for gonadal development, morphological and histological sexual identification, zootechnical performance, and the possible genotoxic effect caused by prolonged exposure to MT. MT significantly (P<0.01) affected the differentiation of the gonads, with the presence of possible inhibitory effects in all treatments. Intersex individuals were present in the 20 and 60 mg MT/kg treatments. All treatments were able to masculinize A. lacustris and the treatment with the lowest hormone concentration produced the highest percentage of males 76.7%, while the control had 46.7% males. The presence of erythrocyte nuclear alterations indicated a possible cytotoxic effect of MT in treatments 40 and 60 mg MT/kg, however, the use of the hormone did not affect the growth and the survival of the individuals. Thus, the use of MT is a viable option for obtaining neomales as a first step into the production of all-female progenies.(AU)

Morphology and immunolocalization of intertubular steroidogenic cell in mesonephros of Podocnemis expansa during gonadal differentiation

Sex steroid hormones are critical in gonadal differentiation in turtles. The gonads are not the only organs responsible for producing these hormones during this phase. Mesonephros play an important role in steroidogenesis. The present study aimed to investigate the presence of steroidogenic cells in mesonephros of Podocnemis expansa during gonadal differentiation and to evaluate their morphology and ultrastructure. Ten embryos of P. expansa were collected from 5 nests on day 36 of incubation, during spawning period on an artificial beach. Embryos were extracted from eggs by slicing the shell and euthanized. They were dissected under a stereoscopic microscope to collect the gonad-mesonephro complex, in which were fixed and subsequently processed for light microscopy, immunohistochemistry and transmission electron microscopy analysis. During histological analysis was observed mesonephros has typical morphological structure. Immunohistochemistry showed immunoreaction to aromatase in cells of intertubular space. Confirming these findings, it was possible to observe a type of intertubular cell in several regions of mesonephro, being more predominant in region close to blood vessels, distal and proximal tubules. In ultrastructural analysis these cells were characterized by having a clear, large, and rounded nucleus with evident nucleolus and cytoplasm rich in electron-dense droplets. This study demonstrated for the first time the presence of cells with morphological, immunohistochemical and ultrastructural characteristics similar to steroid-producing cells in P. expansa mesonephrons, suggesting that this organ may contribute to gonadal differentiation in this species.(AU)

Desenvolvimento e diferenciação gonadal em embriões de Podocnemis unifilis (Testudines: Podocnemididae) em temperatura controlada / Development and gonadal differentiation in embryos of Podocnemis unifilis (Testudines: Podocnemididae) at controlled temperature

Esse estudo objetivou caracterizar o desenvolvimento e a diferenciação gonadal de Podocnemis unifilis em temperatura controlada de 32°C em incubadora artificial e com controle de umidade feito por um higrômetro interno. Foram realizadas análises macroscópicas, por microscopia de luz e por microscopia eletrônica de transmissão. O desenvolvimento gonadal foi agrupado em três etapas: células germinativas primordiais (CGP), estabelecimento da gônada indiferenciada e diferenciação gonadal. As CGP só foram visualizadas a partir do 7º dia de incubação, e se encontravam na região caudal do corpo do embrião, e entre os dias 9 e 11 de incubação foi possível observar a migração das CGP a partir do saco vitelínico em direção à região ventromedial do mesonefro. Com 20 dias de desenvolvimento, a gônada indiferenciada estava estabelecida, sendo identificadas duas regiões distintas: a região cortical externa, caracterizada pela presença de CGP, e a região medular interna, marcada por cordões sexuais primitivos. Nesse estudo, a diferenciação gonadal só ocorreu em testículo. A diferenciação teve início após 35 dias de incubação, com o início da organização dos cordões sexuais em túbulos seminíferos. As etapas de diferenciação gonadal foram semelhantes às de outras espécies de quelônios com determinação do sexo pela temperatura, no entanto, neste estudo, usando a temperatura pivotal descrita para a espécie, todos os indivíduos analisados diferenciaram-se em machos, sendo necessária, portanto, a realização de mais estudos com diferentes temperaturas.(AU)

This study aimed to characterize the development and gonadal differentiation of Podocnemis unifilis at a controlled temperature of 32° C in artificial incubator and with humidity control performed by an internal hygrometer. Macroscopic analyzes, light microscopy and transmission electron microscopy were performed. We grouped gonadal development into three stages: primordial germ cells (PGC), establishment of the undifferentiated gonad and gonadal differentiation. We only visualized the PGC from the 7th day of incubation, and in the caudal region of the embryo body; between days 9 and 11 of incubation we were able to observe the migration of the PGC from the viteline sac towards the ventromedial region of the mesonefro. At 20 days of development, the undifferentiated gonad was established and two distinct regions were identified: the external cortical region characterized by the presence of PGC, and the internal medullary region marked by primitive sexual cords. In this study, only gonadal differentiation occurred in the testicle. Gonadal differentiation began after 35 days of incubation with the beginning of the organization of sexual cords in the seminiferous tubules. The stages of gonadal differentiation were similar to those of other species of turtles with temperature determined sex, however in this study, using the pivotal temperature described for the species all the individuals analyzed were males, and it is there for necessary to carry out further studies using a higher incubation temperature.(AU)

Desenvolvimento e diferenciação gonadal em embriões de Podocnemis unifilis (Testudines: Podocnemididae) em temperatura controlada / Development and gonadal differentiation in embryos of Podocnemis unifilis (Testudines: Podocnemididae) at controlled temperature

Esse estudo objetivou caracterizar o desenvolvimento e a diferenciação gonadal de Podocnemis unifilis em temperatura controlada de 32°C em incubadora artificial e com controle de umidade feito por um higrômetro interno. Foram realizadas análises macroscópicas, por microscopia de luz e por microscopia eletrônica de transmissão. O desenvolvimento gonadal foi agrupado em três etapas: células germinativas primordiais (CGP), estabelecimento da gônada indiferenciada e diferenciação gonadal. As CGP só foram visualizadas a partir do 7º dia de incubação, e se encontravam na região caudal do corpo do embrião, e entre os dias 9 e 11 de incubação foi possível observar a migração das CGP a partir do saco vitelínico em direção à região ventromedial do mesonefro. Com 20 dias de desenvolvimento, a gônada indiferenciada estava estabelecida, sendo identificadas duas regiões distintas: a região cortical externa, caracterizada pela presença de CGP, e a região medular interna, marcada por cordões sexuais primitivos. Nesse estudo, a diferenciação gonadal só ocorreu em testículo. A diferenciação teve início após 35 dias de incubação, com o início da organização dos cordões sexuais em túbulos seminíferos. As etapas de diferenciação gonadal foram semelhantes às de outras espécies de quelônios com determinação do sexo pela temperatura, no entanto, neste estudo, usando a temperatura pivotal descrita para a espécie, todos os indivíduos analisados diferenciaram-se em machos, sendo necessária, portanto, a realização de mais estudos com diferentes temperaturas.

This study aimed to characterize the development and gonadal differentiation of Podocnemis unifilis at a controlled temperature of 32° C in artificial incubator and with humidity control performed by an internal hygrometer. Macroscopic analyzes, light microscopy and transmission electron microscopy were performed. We grouped gonadal development into three stages: primordial germ cells (PGC), establishment of the undifferentiated gonad and gonadal differentiation. We only visualized the PGC from the 7th day of incubation, and in the caudal region of the embryo body; between days 9 and 11 of incubation we were able to observe the migration of the PGC from the viteline sac towards the ventromedial region of the mesonefro. At 20 days of development, the undifferentiated gonad was established and two distinct regions were identified: the external cortical region characterized by the presence of PGC, and the internal medullary region marked by primitive sexual cords. In this study, only gonadal differentiation occurred in the testicle. Gonadal differentiation began after 35 days of incubation with the beginning of the organization of sexual cords in the seminiferous tubules. The stages of gonadal differentiation were similar to those of other species of turtles with temperature determined sex, however in this study, using the pivotal temperature described for the species all the individuals analyzed were males, and it is there for necessary to carry out further studies using a higher incubation temperature.

Determinação e diferenciação sexual em peixes teleósteos: papel dos fatores ambientais e genéticos / Sexual determination and differentiation in teleost fish: the role of environmental and genetic factors

Peixes teleósteos possuem diversas maneiras de determinação e diferenciação sexual. De modo que, fatores genéticos e ambientais podem atuar interagindo para determinar o sexo e agir sobre a diferenciação das gônadas desses animais. Os fatores ambientais atuam de diferentes formas para determinar o sexo de peixe, uma vez que sua ação é dependente da espécie. Fatores como temperatura, pH, densidade populacional e poluição podem causara masculinização ou feminização, agindo principalmente sobre os hormônios sexuais e muitas vezes causando a apoptose ovariana e, consequentemente, promovendo a masculinização. Já a determinação genética se dar por cromossomos sexuais (sistema monogênico) ou por ação autossômica (sistema poligênica). No sistema monogênico já foram observados vários modelos de cromossomos sexuais, sendo os principais XX/XY (machos heterogaméticos) e ZW/ZZ (fêmeas heterogaméticas). Com isso, é possível observar que os peixes teleósteos possuem uma grande diversidade de determinação sexual e diferenciação gonadal.

Teleost fish have various forms of sexual determination and differentiation. Genetic and environmental factors can interact to determine sex and act on the differentiation of the gonads of these animals. Environmental factors act in different ways to determine the sex of the fish, as their action depend on the species. Factors such as temperature, pH, population density and pollution can cause a masculinization or a feminization, by acting on the hormones and, often, the ovarian apoptosis. The genetic determination is given by the sexual chromosome (monogenic system) or by the autosomal action (polygenic system). In the monogenic system several models of sexual chromosomes were observed, the main ones being XX / XY (heterogeneous males) and ZW / ZZ(heterogeneous females). With this, it is possible to observe that teleost possess a great amplitude of sexual determination and gonadal differentiation.

Determinação e diferenciação sexual em peixes teleósteos: papel dos fatores ambientais e genéticos / Sexual determination and differentiation in teleost fish: the role of environmental and genetic factors

Peixes teleósteos possuem diversas maneiras de determinação e diferenciação sexual. De modo que, fatores genéticos e ambientais podem atuar interagindo para determinar o sexo e agir sobre a diferenciação das gônadas desses animais. Os fatores ambientais atuam de diferentes formas para determinar o sexo de peixe, uma vez que sua ação é dependente da espécie. Fatores como temperatura, pH, densidade populacional e poluição podem causara masculinização ou feminização, agindo principalmente sobre os hormônios sexuais e muitas vezes causando a apoptose ovariana e, consequentemente, promovendo a masculinização. Já a determinação genética se dar por cromossomos sexuais (sistema monogênico) ou por ação autossômica (sistema poligênica). No sistema monogênico já foram observados vários modelos de cromossomos sexuais, sendo os principais XX/XY (machos heterogaméticos) e ZW/ZZ (fêmeas heterogaméticas). Com isso, é possível observar que os peixes teleósteos possuem uma grande diversidade de determinação sexual e diferenciação gonadal.(AU)

Teleost fish have various forms of sexual determination and differentiation. Genetic and environmental factors can interact to determine sex and act on the differentiation of the gonads of these animals. Environmental factors act in different ways to determine the sex of the fish, as their action depend on the species. Factors such as temperature, pH, population density and pollution can cause a masculinization or a feminization, by acting on the hormones and, often, the ovarian apoptosis. The genetic determination is given by the sexual chromosome (monogenic system) or by the autosomal action (polygenic system). In the monogenic system several models of sexual chromosomes were observed, the main ones being XX / XY (heterogeneous males) and ZW / ZZ(heterogeneous females). With this, it is possible to observe that teleost possess a great amplitude of sexual determination and gonadal differentiation.(AU)

Macho ou fêmea? Como o sexo dos vertebrados é determinado / Male or female? How the vertebrate sex are determined / ¿Macho o hembra? Cómo se determina el sexo de los vertebrados

La reproducción sexual es la forma de propagación más antigua y universal utilizada por los vertebrados. Los mecanismos que controlan la determinación sexual y la diferenciación en estos animales son diversos y dependen de una amplia variedad de factores genéticos, así como en algunos casos de factores ambientales. El sexo genético puede definirse por factores genéticos hereditarios que se determinan en la fertilización. Por otro lado, la diferenciación gonadal depende de la activación de factores transcripcionales que se expresan durante la ventana de diferenciación sexual. Dichos factores pueden tener su expresión alterada por condiciones ambientales como la temperatura y la osmolaridad, entre otros. Estos procesos sexuales se dividen clásicamente en determinación y diferenciación sexual, respectivamente. Con base en tales hechos, esta revisión tiene como objetivo mostrar los fundamentos básicos de los procesos de determinación y diferenciación sexual en vertebrados, enfatizando el grupo de peces teleósteos.

Sexual reproduction is the oldest and universal form of propagation used by vertebrates. The mechanisms that control sexual determination and differentiation in these animals are diverse and depend on a wide variety of genetic factors as well as in some cases environmental factors. Genetic sex can be define by hereditary genetic factors that are determined in fertilization. On the other hand, gonadal differentiation depends on the activation of transcriptional factors that are expressed during the sexual differentiation window. Such factors may have their expression altered by environmental conditions such as temperature and osmolarity, among others. These sexual processes are classically divided into sexual determination and differentiation, respectively. Based on such facts, this review aims to show the basic theoretical reasoning of the processes of sexual determination and differentiation in vertebrates, emphasizing the group of teleost fishes.

A reprodução sexual é a forma de propagação mais antiga e universal utilizada pelos vertebrados. Os mecanismos que controlam a determinação e diferenciação sexual nestes animais são diversos e dependem de uma grande variedade de fatores genéticos bem como em alguns casos de fatores ambientais. O sexo genético pode ser definido por fatores genéticos hereditários que são determinados na fecundação. Por outro lado, a diferenciação gonadal depende da ativação de fatores transcricionais que são expressos durante a janela de diferenciação sexual. Tais fatores podem ter sua expressão alterada por condições ambientais como a temperatura e a osmolaridade dentre outros. Estes processos sexuais são classicamente divididos em determinação e diferenciação sexual, respectivamente. Baseados em tai fatos, esta revisão tem como objetivo mostrar a fundamentação básica dos processos de determinação e diferenciação sexual em vertebrados com ênfase no grupo dos peixes teleósteos.

Macho ou fêmea? Como o sexo dos vertebrados é determinado / Male or female? How the vertebrate sex are determined / ¿Macho o hembra? Cómo se determina el sexo de los vertebrados

La reproducción sexual es la forma de propagación más antigua y universal utilizada por los vertebrados. Los mecanismos que controlan la determinación sexual y la diferenciación en estos animales son diversos y dependen de una amplia variedad de factores genéticos, así como en algunos casos de factores ambientales. El sexo genético puede definirse por factores genéticos hereditarios que se determinan en la fertilización. Por otro lado, la diferenciación gonadal depende de la activación de factores transcripcionales que se expresan durante la ventana de diferenciación sexual. Dichos factores pueden tener su expresión alterada por condiciones ambientales como la temperatura y la osmolaridad, entre otros. Estos procesos sexuales se dividen clásicamente en determinación y diferenciación sexual, respectivamente. Con base en tales hechos, esta revisión tiene como objetivo mostrar los fundamentos básicos de los procesos de determinación y diferenciación sexual en vertebrados, enfatizando el grupo de peces teleósteos.(AU)

Sexual reproduction is the oldest and universal form of propagation used by vertebrates. The mechanisms that control sexual determination and differentiation in these animals are diverse and depend on a wide variety of genetic factors as well as in some cases environmental factors. Genetic sex can be define by hereditary genetic factors that are determined in fertilization. On the other hand, gonadal differentiation depends on the activation of transcriptional factors that are expressed during the sexual differentiation window. Such factors may have their expression altered by environmental conditions such as temperature and osmolarity, among others. These sexual processes are classically divided into sexual determination and differentiation, respectively. Based on such facts, this review aims to show the basic theoretical reasoning of the processes of sexual determination and differentiation in vertebrates, emphasizing the group of teleost fishes.(AU)

A reprodução sexual é a forma de propagação mais antiga e universal utilizada pelos vertebrados. Os mecanismos que controlam a determinação e diferenciação sexual nestes animais são diversos e dependem de uma grande variedade de fatores genéticos bem como em alguns casos de fatores ambientais. O sexo genético pode ser definido por fatores genéticos hereditários que são determinados na fecundação. Por outro lado, a diferenciação gonadal depende da ativação de fatores transcricionais que são expressos durante a janela de diferenciação sexual. Tais fatores podem ter sua expressão alterada por condições ambientais como a temperatura e a osmolaridade dentre outros. Estes processos sexuais são classicamente divididos em determinação e diferenciação sexual, respectivamente. Baseados em tai fatos, esta revisão tem como objetivo mostrar a fundamentação básica dos processos de determinação e diferenciação sexual em vertebrados com ênfase no grupo dos peixes teleósteos.(AU)

Clitoridectomy and urethrostomy in a pseudohermaphrodite dog

Background: Hermaphroditism is a rare congenital disease that causes ambiguous sexual features. True hermaphroditeshave testicular and ovarian tissue, whereas pseudohermaphrodites have only one type of gonadal tissue and genitalia, butsecondary characteristics of the opposite sex. Pseudohermaphrodites are classified as male or female according to theirgonads. Treatment of pseudohermaphroditism consists of surgical removal of the gonads including reconstruction of abnormal genitalia, especially if the urethra is involved. Therefore, the objective of this report is to describe a case of a malepseudohermaphrodite in a dog treated with clitoridectomy with urethrostomy.Case: A 7-month-old, mixed-breed dog was referred due to the presence of a flaccid structure similar to a small penis,containing an os clitoris, bulbourethral glands, and urethra protruding from the vulva. Physical examination, completeblood count and serum biochemistry were within normal ranges. Hormonal levels of estradiol, testosterone, and progesterone were 56.39 pg/mL, 127.9 ng/mL, and 0.892 ng/mL, respectively. The abdominal ultrasound and posteriorly theexploratory celiotomy found a normal size prostate and two round organs resembling testicles connected to a uterus-liketubular structure. The patient underwent surgical abdominal exploration that confirmed the ultrasonographic findings andled to gonadohysterectomy. Also, clitoridectomy and urethrostomy were performed to excise the protruded structure andmaintain normal urethral patency. The histopathological examination of the clitoris and penis confirmed it was a malegenital organ, however, the abdominal structures were compatible with the testicles, epididymis, uterus, and even a broadligament. These organs are normally found in cases of male pseudohermaphroditism. The...

Clitoridectomy and urethrostomy in a pseudohermaphrodite dog

Background: Hermaphroditism is a rare congenital disease that causes ambiguous sexual features. True hermaphroditeshave testicular and ovarian tissue, whereas pseudohermaphrodites have only one type of gonadal tissue and genitalia, butsecondary characteristics of the opposite sex. Pseudohermaphrodites are classified as male or female according to theirgonads. Treatment of pseudohermaphroditism consists of surgical removal of the gonads including reconstruction of abnormal genitalia, especially if the urethra is involved. Therefore, the objective of this report is to describe a case of a malepseudohermaphrodite in a dog treated with clitoridectomy with urethrostomy.Case: A 7-month-old, mixed-breed dog was referred due to the presence of a flaccid structure similar to a small penis,containing an os clitoris, bulbourethral glands, and urethra protruding from the vulva. Physical examination, completeblood count and serum biochemistry were within normal ranges. Hormonal levels of estradiol, testosterone, and progesterone were 56.39 pg/mL, 127.9 ng/mL, and 0.892 ng/mL, respectively. The abdominal ultrasound and posteriorly theexploratory celiotomy found a normal size prostate and two round organs resembling testicles connected to a uterus-liketubular structure. The patient underwent surgical abdominal exploration that confirmed the ultrasonographic findings andled to gonadohysterectomy. Also, clitoridectomy and urethrostomy were performed to excise the protruded structure andmaintain normal urethral patency. The histopathological examination of the clitoris and penis confirmed it was a malegenital organ, however, the abdominal structures were compatible with the testicles, epididymis, uterus, and even a broadligament. These organs are normally found in cases of male pseudohermaphroditism. The...(AU)

Melanoma oral amelanótico metastático com acometimento neurológico e gonadal em um cão fêmea - relato de caso / [Metastatic oral amelanotic melanoma with neurologic and gonadal involvement in a female dog - case report]

Relata-se um caso de melanoma oral disseminado em uma cadela de dois anos, com protrusão de bulbo ocular unilateral e quadro convulsivo progressivo. Os exames de imagem revelaram aumento de volume nas regiões submandibular, maxilar e cerebral, padrão nodular pulmonar e aumento das dimensões ovarianas. A citologia da massa submandibular indicou proliferação epitelial maligna, enquanto a biópsia excisional foi sugestiva de melanoma amelanótico. Na necropsia, havia uma massa gengival localmente infiltrativa e nodulações brancas nos linfonodos, nos rins, no pulmão, no cérebro e nos ovários, indicativas de metástase. O diagnóstico histopatológico consistiu de neoplasia maligna metastática indiferenciada, indicativo de melanoma amelanótico. Células caracterizadas por núcleo com cromatina espessa, múltiplos nucléolos bem evidentes, mitoses atípicas e multinucleações consistiram nos principais critérios de malignidade. No espaço peritrabecular ósseo facial, havia rara diferenciação pigmentar melanocítica, confirmada histoquimicamente pela técnica de Fontana-Massom e Giemsa. Algumas células foram positivas pela imuno-histoquímica para PNL-2 e Melan-A, e o diagnóstico de melanoma amelanótico disseminado foi firmado. A indiferenciação neoplásica marcante, com disseminação metastática multissistêmica e acometimento mútuo de sítios anatômicos pouco comuns, conjuntamente com a ampla variação dos padrões celulares, foi responsável pelo desafio diagnóstico do presente caso, ressaltando o papel decisivo da imuno-histoquímica para confirmação diagnóstica. A importância clínica deste trabalho consiste ainda em alertar a comunidade clínica e científica acerca da dificuldade diagnóstica, devendo-se considerar o melanoma amelanótico como diferencial mesmo em casos de lesões orais menos perceptíveis e/ou desprovidas de pigmentação.(AU)

A case of disseminated oral melanoma in a two year old female dog with unilateral protuberance of the eye bulb and progressive seizure is described. Imaging exams revealed increase of the submandibular, maxillary and cerebral regions, nodular pattern in lungs and increased ovarian dimensions. The cytology of the submandibular mass indicated a malignant epithelial proliferation, whereas the excisional biopsy indicated an amelanotic melanoma. At necropsy, a locally infiltrating gingival mass and white nodules in the lymph nodes, kidneys, lung, brain and ovaries were observed, indicative of metastases. Histopathological diagnosis consisted of an undifferentiated malignant metastatic neoplasm. Nucleus with coarse chromatin, prominent nucleoli, bizarre mitotic figures and multinucleated cells were the major malignant features. There was a poor melanocytic pigment differentiation in the peritrabecular space of facial bones, confirmed by Fontana-Masson and Giemsa histochemical techniques. Only a few cells were immunohistochemically positive for PNL-2 and Melan-A and the diagnosis of a disseminated amelanotic melanoma was performed. The diagnostic challenge was based on marked neoplastic undifferentiation, with multisystemic metastasis and mutual involvement of uncommon anatomic sites, associated with a large variability of cellular patterns, highlighting the decisive role of immunohistochemistry for diagnostic confirmation. Therefore, the clinical importance of this study is to warn the clinical and scientific community about the diagnostic challenge, considering the amelanotic melanoma as a differential even in cases of poorly apparent and/or nonpigmented oral lesions.(AU)

Populações monosexo em peixes nativos brasileiros: iniciando o futuro / Monosex population in Brazilian native fish: the start of the future

Técnicas de controle e manipulação do sexo fenotípico têm sido amplamente utilizadas na piscicultura mundial (como atividade pecuária) e em estudos científicos acerca da fisiologia reprodutiva de peixes. A indução do sexo desejado é possível graças à alta flexibilidade do processo de diferenciação sexual de peixes e seus variados sistemas de determinação sexual. Atualmente, são produzidas populações monosexo em mais de 20 espécies de peixes de importância comercial em diferentes países. Se nos países mais avançados a produção monosexuada de peixes já é prática consolidada, no Brasil a única espécie produzida comercialmente em lotes monosexo é africana (tilápia Nilótica), ou seja, exótica. Entretanto, recentes investigações sobre desempenho zootécnico comparativo entre machos e fêmeas têm sido desenvolvidas nos peixes nativos brasileiros. Essa revisão aborda as finalidades e métodos para produção de populações monosexo em peixes, ressaltando a sua ampla disseminação na aquicultura mundial, e traz à tona as primeiras espécies nativas brasileiras em que esse tipo de estudo tem sido realizado.(AU)

Techniques for controlling and manipulating phenotypic sex have been widely used in fish farming worldwide (as livestock activity) and in scientific studies of fish reproductive physiology. The induction of a desired sex is possible due to the high flexibility of the process of fish sex differentiation and the different systems of fish sex determination. Currently, monosex populations are produced in at least 20 economically important fish species in different countries. While in the most advanced countries the monosex production of fish is already consolidated, in Brazil the only species produced commercially in monosex batches is African (Nile tilapia), i.e. exotic. However, recent research on the comparative production between males and females has been developed with native Brazilian fish. This review addresses the purposes and methods for producing monosex population in fish, highlighting their wide spread use in the world and brings to light the first native Brazilian species in which this type of study has been already conducted.(AU)

Populações monosexo em peixes nativos brasileiros: iniciando o futuro / Monosex population in Brazilian native fish: the start of the future

Técnicas de controle e manipulação do sexo fenotípico têm sido amplamente utilizadas na piscicultura mundial (como atividade pecuária) e em estudos científicos acerca da fisiologia reprodutiva de peixes. A indução do sexo desejado é possível graças à alta flexibilidade do processo de diferenciação sexual de peixes e seus variados sistemas de determinação sexual. Atualmente, são produzidas populações monosexo em mais de 20 espécies de peixes de importância comercial em diferentes países. Se nos países mais avançados a produção monosexuada de peixes já é prática consolidada, no Brasil a única espécie produzida comercialmente em lotes monosexo é africana (tilápia Nilótica), ou seja, exótica. Entretanto, recentes investigações sobre desempenho zootécnico comparativo entre machos e fêmeas têm sido desenvolvidas nos peixes nativos brasileiros. Essa revisão aborda as finalidades e métodos para produção de populações monosexo em peixes, ressaltando a sua ampla disseminação na aquicultura mundial, e traz à tona as primeiras espécies nativas brasileiras em que esse tipo de estudo tem sido realizado.

Techniques for controlling and manipulating phenotypic sex have been widely used in fish farming worldwide (as livestock activity) and in scientific studies of fish reproductive physiology. The induction of a desired sex is possible due to the high flexibility of the process of fish sex differentiation and the different systems of fish sex determination. Currently, monosex populations are produced in at least 20 economically important fish species in different countries. While in the most advanced countries the monosex production of fish is already consolidated, in Brazil the only species produced commercially in monosex batches is African (Nile tilapia), i.e. exotic. However, recent research on the comparative production between males and females has been developed with native Brazilian fish. This review addresses the purposes and methods for producing monosex population in fish, highlighting their wide spread use in the world and brings to light the first native Brazilian species in which this type of study has been already conducted.

The role of cytokines in immune regulation of female reproductive physiology / O papel das citocinas na imunorregulação da fisiologia reprodutiva da fêmea

Cytokines act as protein mediators of the immune system and exert pleiotropic effects on the source cells and/or on target cells. Cytokines are formed in a cascade, bind to specific receptors, and influence the activity, differentiation, proliferation, and survival of immune cells of both T helper 1 (Th1) type (which has proinflammatory properties) and Th2 type (with an anti-inflammatory function). The female reproductive system is regulated by the immune system via cytokines at various physiological stages: during the ovarian cycle, maternal recognition, embryo implantation, gestation, and birth, participating in homeostasis and protection from pathogens. These processes interact under the hormonal influence of the hypothalamic–pituitary–gonadal axis. This review is aimed at addressing the involvement of some cytokines in female reproductive physiology, highlighting the maternal recognition of the embryo and implantation as immunologically important steps for fetal survival. The scientific knowledge on the role of cytokines in female reproduction processes, such as the Th1/Th2 balance and immune tolerance should advance the research in various fields of assisted reproduction in humans and animals, such as artificial insemination, embryo transfer, and in vitro fertilization. The same is true for the development of contraceptive methods and understanding of pathological processes such as uterine infections and autoimmune diseases.(AU)

Citocinas funcionam como mediadores proteicos do sistema imunológico, que exercem efeitos pleiotrópicos nas próprias células e/ou em células-alvo; formadas em cascata e ligando-se a receptores específicos, influenciam a atividade, diferenciação, proliferação e sobrevida da célula imunológica, tanto tipo Th1 (Thelper1), de ação pró-inflamatória, quanto tipo Th2 (Thelper2), de ação anti-inflamatória. O sistema reprodutivo das fêmeas é imunorregulado pelas citocinas em seus diversos estágios fisiológicos: ciclos ovarianos, reconhecimento materno e implantação do embrião, avanço da gestação e parto, auxiliando na homeostase e prevenção contra patógenos, interagindo sob influência hormonal do eixo hipotalâmico-hipofisário-gonadal. Esta revisão tem como objetivo abordar o envolvimento de algumas citocinas na fisiologia reprodutiva feminina, destacando o reconhecimento materno do embrião e a implantação como etapas imunologicamente importantes à sobrevida fetal. É possível constatar que o conhecimento científico sobre as citocinas na reprodução de fêmeas, como o balanço Th1/Th2 e a imunotolerância, permite um sólido avanço de pesquisas nas áreas de Reprodução Assistida em humanos e animais, a exemplo da inseminação artificial, transferência de embriões e fertilização in vitro, bem como no desenvolvimento de métodos contraceptivos e compreensão de processos patológicos, como infecções uterinas e doenças auto-imunes.(AU)

Rediscovering hermaphroditism in Grammatidae with the description of the testicular gland in Brazilian Basslet Gramma brasiliensis / Redescobrindo o hermafroditismo em Grammatidae com a descrição da glândula testicular de Gramma brasiliensis

Many aspects of sex change in reef fishes have been studied, including behavior and social organization. However, gonad histology remains the most robust way to identify sexual patterns in fishes. Some uncommon tissues remain poorly described, such as the accessory gonadal structures found in species from the Gobiidae family, which are rare in other bony fishes. This is the first report of the testicular gland in Gramma brasiliensis and for the Grammatidae family. Between April 2011 and February 2012 eighty specimens were collected during four dive campaigns on the Taipus de Fora reef (13°5620S 38°5532W), Bahia, Northeast Brazil, and their sex was determined. Thirteen per cent of the active-females and 90% of the active-males had testicular gland tissue in their ovotestis. This discovery led to additional research into the characteristics of the gland tissue and its relationship with gonadal maturation. Three patterns of testicular gland development were found in Brazilian basslet ovotestis. Both ova and sperm-producing gonad contained testicular gland tissue, and the appearance of this tissue seems to be the first modification of ovotestis tissue marking the beginning of the protogynous sex-change process in G. brasiliensis.(AU)

Diversos aspectos da troca de sexo em peixes recifais vem sendo estudados, incluindo comportamentos e organização social. Entretanto, a histologia das gônadas continua sendo a maneira mais robusta para se identificar padrões sexuais em peixes. Alguns tecidos incomuns, tais como as estruturas anexas a gônada encontradas em espécies da família Gobiidae e raras em outras espécies são pouco estudados. Este trabalho é a primeira descrição da glândula testicular em Gramma brasiliensis e para a família Grammatidae. Entre abril de 2011 e fevereiro de 2012, oitenta espécimes foram coletados durante quatro amostragens no recife de Taipus de Fora (13°5620S 38°5532W), Bahia, Brasil, e tiveram seus sexos determinados. Treze por cento das fêmeas ativas e noventa por cento dos machos ativos apresentaram tecido da glândula testicular em suas gônadas. Esta descoberta levou ao estudo da características dessa estrutura e sua relação com a maturação gonadal. Foram identificados três padrões de desenvolvimento da glândula testicular nas gônadas do Gramma brasiliensis. Tanto as gônadas produtoras de espermatozoides quanto as de oócitos apresentaram tecido da glândula testicular, e o surgimento desse tecido parece ser a primeira modificação gonadal do início da troca de sexo protogínica em G. brasiliensis.(AU)

DESENVOLVIMENTO GONADAL DE PIRACANJUBAS (Brycon orbignyanus) CRIADAS EM DIFERENTES TEMPERATURAS

Em peixes, a razão sexual é o principal parâmetro demográfico que influencia a estrutura e a viabilidade de uma população. Este parâmetro é resultado da diferenciação sexual, que pode depender de fatores genéticos e ambientais, sendo a temperatura a principal característica ambiental a afetar este processo. Com isso, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da temperatura sobre o desenvolvimento gonadal e razão sexual de Brycon orbignyanus. Os animais foram mantidos em três temperaturas (20, 23 e 26°C) a partir do início da alimentação exógena. Ao completarem 420 dias pós-fecundação, foram coletados dez indivíduos por tratamento, para análises histológica e hormonal das gônadas. Os resultados apontaram padrões sexuais dependentes da temperatura. Todos os animais mantidos em 20°C ainda estavam indiferenciados, tendo em suas gônadas somente células somáticas. Na temperatura de 23°C, a maioria dos animais eram machos imaturos (7/9). Em contrapartida, dos animais mantidos na temperatura mais alta (26°C), a maioria era machos em desenvolvimento (6/9). Nesta temperatura (26°C) também foram encontrados machos com gônadas em fase de regressão (2/9). Na análise hormonal, a única temperatura em que os animais possuíam estradiol presente foi em 23°C. Foi possível quantificar a testosterona nos animais dos três tratamentos. Podemos concluir que temperaturas contínuas de 23 e 26°C em cativeiro produzem uma razão sexual desequilibrada em Brycon orbignyanus em favor do sexo masculino, assim como há um desenvolvimento gonadal acelerado na temperatura de 26°C, uma vez que os machos deste tratamento se apresentaram maduros com um ano e dois meses de idade.

In fishes, sex ratio is the main demographic parameter that influences the structure and viability of a population. This parameter is the result of sexual differentiation, which depends on genetic and environmental factors, with temperature being the main environmental characteristic to affect this process. The aim of this study was to assess the effect of temperature on gonadal development and sex ratio in the Brycon orbignyanus. Animals were kept at three temperatures (20, 23 and 26°C) since the beginning of exogenous feeding. After 420 days following fertilization, ten individuals were collected per treatment, for histologic and steroid hormonal measurement of the gonads. The results showed a sexual pattern dependent of temperature. All animals kept at 20°C were undifferentiated, with only somatic cells in their gonads. At 23°C, most of the animals were immature males (7/9). On the other hand, among the animals kept at the higher temperature (26°C), the majority was males in development (6/9). In this temperature (26°C) males with gonads in regression phase were found too. In the hormonal assay, the only tratament where the animals had detectable estradiol was at 23°C. It was possible to quantify the testosterone in the animals of the three treatments. We can conclude that continuous 23 and 26°C temperatures favor the testicular development in B. orbignyanus, as well as the gonadal development is accelerated in fish farming at 26°C, once the males in this treatment had maturity with one year and two months of age.

Insights of sex determination and sex differentiation in fish

A decisao sobre se uma gônada bipotencial se desenvolverá em um testículo ou em um ovário e considerado um estágio critico na diferenciacao sexual dos vertebrados. A administração de esteróides exógenos durante este período pode afetar essa plasticidade, promovendo a diferenciação sexual na direção feminina ou masculina. Dessa forma, o objetivo desta tese foi avaliar os efeitos do tratamento de 17-estradiol no desenvolvimento de Astyanax altiparanae (lambari), através de análises histológicas e de análises de expressão genica de possíveis genes envolvidos em vias masculinas e femininas. Para isso, larvas com gônadas indiferenciadas foram alimentadas com Artemia contendo diferentes concentrações de estradiol durante 28 dias, desde o 1 dia pós-eclosão (dpe) até o período que precede a diferenciação gonadal. Nossos resultados mostraram que o E2 modificou o fenotípo e a relação sexual histológica e, surpreendentemente, induziu intersexo com com a presença de óvulos nos testículos nas concentrações de 2 e 6 mg de E2/kg de alimento. Esses dados são uma evidência clara de que o tratamento utilizado não foi suficiente para induzir a reversão completa do sexo em A. altiparanae. Em termos de expressão gênica, o tratamento com E2 (6 mg/kg de alimento) produziu uma notável plasticidade gonadal entre machos e fêmeas aos 90 dias após a eclosão (dph). Os machos, denominados machos resistentes ao estradiol, superexpressaram os genes masculinos, como dmrt1, sox9 e amh. Dessa forma, nós sugerimos esses machos foram capazes de resistir à feminização induzida por estradiol, aumentando a expressão de genes relacionados à diferenciação testicular. Interessantemente, também encontramos fêmeas derivadas de estradiol com maior expressão de genes masculinos como dmrt1 e sox9. Em conclusão, nossos resultados mostraram que menores concentrações de E2 administradas durante o desenvolvimento larval induziram uma reversão incompleta do sexo masculino para feminino em A. altiparanae e produziram uma complexa plasticidade gonadal genética a 90 dph.

The decision whether a bipotential gonad will become a testis or ovary is considered a critical stage in vertebrate sex determination. Administration of exogenous steroids can affect this plasticity by skewing the sex gonadal differentiation towards a male or female. The aim of this study is to evaluate the effects of 17-estradiol (E2) diet on Astyanax altiparanae (lambari) development, focusing on the gonadal development and gene expression analysis of possible candidate genes involved in either male or female pathways. Larvae with undifferentiated gonads were fed with steroid diet containing different concentrations of E2 during 28 days, from the mouth opening until a period that precedes the gonadal differentiation. Animals were sampled at 90 days post-hatching (dhp) for histology and gene expression analysis. Our results showed that E2 disrupted both phenotypic and histological sex ratios, and surprisingly, induced intersex with testis-ova in the concentrations of 2 and 6 mg E2/Kg food. This data is a clear evidence that the treatment used was not enough to induce complete sex reversal in A. altiparanae. However, in terms of gene expression, E2 (6mg/Kg food) induced a remarkable gonadal plasticity between males and females at 90 dph. The males, named as E2 resistant males, overexpressed the male-biased genes, such as dmrt1, sox9 and amh. We suggested that these males were able to resist the E2-induced feminization by the expression of genes related to testis differentiation. Strikingly, we also found E2-derived females with normal ovarian morphology but with higher or lower expression of dmrt1 and sox9. In conclusion, our results showed that lower E2 concentrations administered during larval development induced an incomplete male-to-female sex reversal in A. altiparanae and produced a complex genetic gonadal plasticity at 90 dph.

ASPECTOS ESTRUTURAIS DA DIFERENCIAÇÃO SEXUAL DO PIRARUCU Arapaima gigas (Schinz, 1822) E DO JUNDIÁ Rhamdia quelen (Quoy & Gaimard, 1824)

O pirarucu Arapaima gigas é um peixe gigante da língua óssea da Amazônia e um promissor espécies para a aquicultura brasileira. No entanto, a indústria agrícola da espécie ainda não está consolidada devido à falta de informações sobre sua fisiologia reprodutiva. Reprodução em cativeiro não pode ser manipulado ou estimulado ea identificação de machos e fêmeas em um O broodstock não é fácil. Nosso objetivo foi revelar a diferenciação morfológica do sexo do pirarucu, pois estudos envolvendo o desenvolvimento de gônadas são essenciais para o entendimento da fisiologia reprodutiva de qualquer espécie. Realizamos análise histológica em todo o corpo e extraímos gônadas de 60 juvenis (de 2,7 a 17 cm de comprimento total) e 90 (de 15 a 80 cm de LT), respectivamente. O primeiro sinal de diferenciação do ovário no pirarucu é o rearranjo específico do sexo das células germinativas. Nas fêmeas com cerca de 9 cm de LT, as células germinativas se agrupam em ninhos e restringem-se ao lado lateral da gônada, em íntimo contato com a parede do abdome. Com mais desenvolvimento, esta região sofre invaginações que mais tarde se desenvolvem nas lamelas ovígeras. A meiose começa logo após a diferenciação do ovário. Nos presumíveis machos, as células germinativas se espalham ao longo do testículo diferenciado alongado no início, e então se tornam mais restritas à região central onde os cistos espermatogônios se desenvolvem. No pirarucu, as células somáticas parecem estar envolvidas no processo de reorganização das células germinativas durante a diferenciação gonadal, especificamente quando as células germinativas das gônadas indiferenciadas começam a estabelecer novas associações durante o desenvolvimento tanto do epitélio germinativo quanto do estroma.

The pirarucu Arapaima gigas is a giant bony-tongue fish from the Amazon and a promising species for the Brazilian aquaculture. However, the farming industry of the species is still not consolidated due to the lack of information about its reproductive physiology. Reproduction in captivity cannot be manipulated or stimulated and the identification of males and females in a broodstock is not easy. We aimed at revealing the morphological sex differentiation of pirarucu as studies involving gonad development are essential for understanding the reproductive physiology of any species. We performed histological analysis on the whole body and extracted gonads of 60 (from 2.7 to 17 cm total length-TL) and 90 (from 15 to 80 cm TL) juveniles, respectively. The first sign of ovary differentiation on pirarucu is the sex-specific rearrangement of the germ cells. In females of around 9 cm TL, the germ cells become grouped in nests and restricted to the lateral side of the gonad, in a close contact with the abdomen wall. With further development, this region suffers invaginations that later develop into the ovigerous lamellae. Meiosis starts very soon after ovary differentiation. In the presumptive males, the germ cells are scattered along the elongated differentiating testis at first, and then become more restricted to the central region where the spermatogonial cysts develop. In pirarucu, the somatic cells appear to be involved in the process of germ cell reorganization during gonadal differentiation, specifically when the germ cells of undifferentiated gonads begin to establish new associations during the development of both the germinal epithelium and stroma.

O papel do Amh na diferenciação sexual e na gametogênese de peixes teleósteos

A decisão se a gônada indiferenciada irá se desenvolver em um testículo ou um ovário é uma etapa crítica na diferenciação sexual dos vertebrados. Este processo consiste em uma complexa cascata gênica que culmina na diferenciação das células somáticas presente na gônada indiferenciada. Neste sentido, o hormônio anti-Mülleriano é um importante efetor nesta decisão. Estudos com o peixe medaka mutante hotei, no qual o receptor do Amh tipo 2 (amhrII) é mutado, mostram elevado índice gonadossomático, e reversão sexual de macho para fêmea. Com base nestas informações, acredita-se que o Amh possa regular o número de células germinativas e diretamente ou indiretamente este fato pode influenciar na decisão da gônada bipotencial em se tornar um testículo ou ovário. Sendo assim, o objetivo do presente trabalho foi de se avaliar a sinalização do Amh durante a diferenciação sexual no medaka. Para tanto, estudos de perda de função gênica foram empregados, no qual o gene amh foi deletado através do sistema CRISPR/Cas9. Também foi avaliada a expressão dos genes que atuam na janela de diferenciação sexual por RT-qPCR. Inicialmente, identificamos dois tipos de mutação nos animais heterozigotos (amh (-/+) da F1. A mutação mais interessante foi a deleção de 759 pares de base entre os exons 6 e 7 que compreende parte dos domínios Amh_N e TGF. Na geração F2, os mutantes homozigotos amh (-/-) machos XY apresentaram 100% de reversão sexual para fêmeas fenotípicas. Além disso os animais amh (-/-) apresentaram hipertrofia gonadal. Não foi realizado nenhum tipo de análise histológica, porém, considerando-se os dados da literatura, sugere-se que a ausência do Amh em nossos mutantes também tenha levado à uma proliferação excessiva das células germinativas. Assim, é sugerido em nosso trabalho que o Amh está envolvido na proliferação das células germinativas, sendo um efetor crucial para a formação do testículo. Esse resultado corrobora os dados de expressão temporal do amh e de alguns genes chaves do processo de diferenciação durante diferentes estágios de desenvolvimento de medakas selvagens. A expressão do amh foi maior em machos do que em fêmeas durante todos os estágios de desenvolvimento. Sua expressão diferencial inicia-se no estágio 34 que precede a janela de diferenciação sexual em medaka. Interessantemente, a expressão de outros genes envolvidos na cascata de diferenciação sexual masculina como dmrt1, amhrII e gsdf foi posterior à do amh. Este dado sugere que o Amh atue como efetor upstream da cascata de diferenciação masculina, sendo responsável, direta ou indiretamente, por ativar genes como dmrt1 e gsdf. Estes resultados estão alinhados com os dados encontrados neste trabalho para os medakas mutantes amh (-/-), onde na ausência do Amh, todos os machos XY se diferenciam em fêmeas. Na ausência do Amh, os efetores downstream da cascata não seriam ativados, o que levaria à diferenciação gonadal feminina. De maneira geral, o presente estudo demonstra que o Amh desempenha um papel crucial no processo de diferenciação sexual do medaka. Além disso, o Amh atua como efetor da cascata de diferenciação sexual masculina e também regula a proliferação das células germinativas nesta espécie.

The decision whether the undifferentiated gonad will develop in a testicle or an ovary is a critical step in the sexual differentiation of vertebrates. This process consists of a complex genetic cascade that culminates in the differentiation of the somatic cells present in the undifferentiated gonad. In this context, the antiMüllerian hormone is an important effector in this decision. Studies with the medaka hotei fish, in which the Amh type 2 receptor (amhrII) is mutated, show high gonadosomatic index, and sexual reversion from male to female. Based on this information, it is postulated that the Amh regulates the number of germ cells, and directly or indirectly this fact may influence the decision of the bipotential gonad to become a testicle or ovary. Therefore, the objective of the present study was to evaluate the signaling of Amh during sexual differentiation in medaka. For that, studies of loss of gene function were employed, in which the amh gene was deleted through the CRISPR / Cas9 system. We also evaluated the expression of genes that act in the window of sexual differentiation by RT-qPCR. We initially identified two types of mutation in F1 heterozygous (amh -/+) animals. The most interesting mutation was the deletion of 759 base pairs between exons 6 and 7 which comprises part of the Amh_N and TGF- domains. In the F2 generation, the homozygous amh (-/-) mutants XY males presented 100% of sexual reversion. In addition, the amh (-/-) animals presented gonadal hypertrophy. We did not perform any histological analysis, but considering the literature data, it is suggested that the absence of Amh in our mutants also led to an excessive proliferation of germ cells. Thus, our work shows that Amh is involved in the proliferation of germ cells, being a crucial effector for testicular formation. This result corroborates the temporal expression data of the amh and some key genes of the differentiation process during different stages of development of wild medakas. amh transcripts were highly expressed in males than in females during all stages of development. Its differential expression begins in stage 34 that precedes the window of sexual differentiation in medaka. Interestingly, the expression of other genes involved in the cascade of male sexual differentiation, as dmrt1, amhrII and gsdf was later than amh. This data suggests that Amh acts as an upstream effector of the male differentiation cascade, being responsible, directly or indirectly, for activating genes such as dmrt1 and gsdf. These results are in line with the data found in this work for the amh (-/-) mutant medakas, wherein the absence of Amh, all XY males undergone sex reversal to females. In the absence of Amh, the downstream cascade effectors would not be activated, which would lead to female gonadal differentiation. In general, this work demonstrates that Amh plays a crucial role in the process of sexual differentiation of medaka fish. In addition, Amh acts as an effector of cascade of male sexual differentiation and also regulates the proliferation of germ cells in this species.