Murine animal models for in vivo studies of Zika and Chikungunya viruses

Arboviruses are worldwide distributed arthropod-borne viruses representing a constant threat to public health. Among these arboviruses, the Chikungunya (CHIKV) and Zika (ZIKV) viruses have a high prevalence in Brazil being responsible for recent outbreaks resulting mainly in irreparable socioeconomic damages such as the high rate of cases of comorbidities and microcephaly in newborns, respectively. Therefore, it is necessary to understand the biology of these arboviruses and develop effective treatments against them; moreover, appropriate mice animal models are strongly encouraged. Here we reviewed the scientific literature aiming to improve the search for the best murine animal model, specific for the arboviruses, specifically, CHIKV and ZIKV. In this way, we performed a comparison between the various mice models currently available, among them: genetically modified immunosuppressed animals, as the A129 and AG129 which are knockout animals for the α/ß and α/ß/γ receptors, respectively, neonatal immunocompetent models C57BL/6 strains used between 6-8 days old for neuropathogenesis studies or 1 day old for vaccine safety studies and finally immunosuppressed induced by dexamethasone or interferon 1 blocker for pathogenesis studies. Mice models are the first option after in vitro analysis, as they are small animals, which facilitates handling and maintenance, in addition to being more inexpensive and abundantly available in different genetic strains, both wild and modified. If the results of this stage are promising, the studies move forward to the use of models with animals of greater complexity, such as rats, non-human primates and finally humans. For this review, we searched through articles in PubMed, Scopus and ScienceDirect databases using the criteria of date publications, titles, abstracts and complete manuscripts. The correct choice of these models during experimental planning is essential, since increases the confidence and the rational use of animals in experimentation in accordance to current bioethics guidelines.

Immunomodulatory effects of Blaps rynchopetera extract

Purpose: To explore the potential immunomodulatory effects of total extract and different polar parts from Blaps rynchopetera Fairmaire. Methods: Phagocytic activity was evaluated by neutral red assay, and the effect of the immune function was investigated by normal and immunocompromised mice models. Results: In vitro, total extract, as well as chloroform, ethyl acetate, n-butanol and water fractions could individually enhance the phagocytic ability of mouse peritoneal macrophages; in addition, chloroform and ethyl acetate fractions had an increasing tendency when combined stimulation with lipopolysaccharide (LPS). In vivo, ethyl acetate fraction (EAF) could enhance the immune organ index, increase the serum hemolysin level and peripheral blood immune cells of immunocompromised mice, while for normal mice, the effect was inconspicuous. Conclusions: Blaps rynchopetera extracts had noteworthy immunomodulatory effect, especially for individuals with immune disorders.

Rescue of caprine fetal ovaries, vitrification and follicular development after xenotransplantation in two immunodeficient mice models

Domestic and wild goats are very susceptible animals to predation, specially when pregnancy occurs. This study aimed to evaluate the use of goat fetal ovarian tissue for vitrification followed by xenotransplantation and fresh xenotransplantation in two immunosuppressed mice models (C57BL/6 SCID and Balb-C NUDE). Goat fetus ovaries were collected in slaughterhouses, divided into small cortical pieces and were destined for fresh xenotransplantation (FX) and cryopreservation followed by xenotransplantation (CX). Five recipients from each lineage were used for FX and 10 animals from each lineage for CX. The mice were euthanized after 65 postoperative days, and the transplants were collected for microscopic assessment. The blood plasma was collected for estradiol measurement. Independently of mice strain, all recipients presented complete estrus cycle in FX and 80% after CX groups. Follicles were observed at all development stages without morphological changes. The volume density and total vessel surface observed in the transplants were different (p <0.01) between groups. The estradiol levels in the recipients did not differ (p <0.05) among the treatments. Thus, it is possible to activate the preantral follicles in the ovaries of fetuses by optimizing germplasm utilization and conservation of domestic and endangered wild goats that are in predatory situations, undesirable drowning or accidental death, since provided conditions for xenotransplantation are performed.

Rescue of caprine fetal ovaries, vitrification and follicular development after xenotransplantation in two immunodeficient mice models

Domestic and wild goats are very susceptible animals to predation, specially when pregnancy occurs. This study aimed to evaluate the use of goat fetal ovarian tissue for vitrification followed by xenotransplantation and fresh xenotransplantation in two immunosuppressed mice models (C57BL/6 SCID and Balb-C NUDE). Goat fetus ovaries were collected in slaughterhouses, divided into small cortical pieces and were destined for fresh xenotransplantation (FX) and cryopreservation followed by xenotransplantation (CX). Five recipients from each lineage were used for FX and 10 animals from each lineage for CX. The mice were euthanized after 65 postoperative days, and the transplants were collected for microscopic assessment. The blood plasma was collected for estradiol measurement. Independently of mice strain, all recipients presented complete estrus cycle in FX and 80% after CX groups. Follicles were observed at all development stages without morphological changes. The volume density and total vessel surface observed in the transplants were different (p <0.01) between groups. The estradiol levels in the recipients did not differ (p <0.05) among the treatments. Thus, it is possible to activate the preantral follicles in the ovaries of fetuses by optimizing germplasm utilization and conservation of domestic and endangered wild goats that are in predatory situations, undesirable drowning or accidental death, since provided conditions for xenotransplantation are performed.(AU)

Frequency of antibodies and risk factors associated with Toxoplasma gondii infection in backyard pig production in the city of Mossoró, state of Rio Grande do Norte, Brazil / Frequência de anticorpos e fatores de risco associados à infecção por Toxoplasma gondii em criações de suínos em Mossoró, Rio Grande do Norte

Toxoplasmosis is an important zoonosis for pregnant women and immunosuppressed people. The pig population also becomes infected by this pathogen, and undercooked or raw meat is an important source of infection for humans. The aims of the present study were to evaluate the rate of exposure of pigs to T. gondii in the municipality of Mossoró, Rio Grande do Norte and seek to identify associations with possible risk factors. Blood samples were collected from 412 pigs and were analyzed using the immunofluorescence assay. Among these 412 serum samples, 40.7% were seropositive for T. gondii. The IgG antibody titers were 64 (56 specimens), 128 (32), 256 (37), 512 (23), 1024 (14), 2048 (5) and 4046 (1). Seropositivity for T. gondii was found to be related (p-value 0.05) to the following factors: female gender, semi-confined rearing system, use of well water, dewormed animals, presence of cats, goats, sheep, mice and vultures on the farm and carcasses left on the ground. In contrast, seropositivity was not related (p-value 0.05) to the age of the pigs, type of facility or feeding with human food remains. Preventive measures need to be adopted on the farms studied here, with the aim of decreasing the animals intake of sporulated oocysts.(AU)

A toxoplasmose é uma importante zoonose para mulheres grávidas e pessoas imunossuprimidas. Os suínos também são infectados por este patógeno; e a carne crua ou malcozida é uma importante fonte de infecção para o ser humano. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a taxa de exposição suína à T. gondii no município de Mossoró, Rio Grande do Norte e identificar associações com possíveis fatores de risco. Amostras de sangue foram coletadas em tubos sem anticoagulante e o soro foi separado de 412 porcos e analisadas pelo ensaio de imunofluorescência. Dentre as 412 amostras de soro, 40,7% foram positivas para T. gondii. Os títulos para o anticorpo IgG foram 64 (56 amostras); 128 (32); 256 (37); 512 (23); 1024 (14); 2048 (5) e 4046 (1). A soropotividade para T. gondii foi relacionada (p-valor 0,05) aos seguintes fatores: gênero feminino, sistema de criação de semi-confinamento, uso de água de poço, animais vermifugados, presença de gatos, cabras, ovelhas, ratos e urubus na fazenda e carcaças deixadas à céu aberto. Em contrapartida, a soropositividade não foi relacionada (p-valor 0,05) à idade dos suínos, tipo de instalações ou alimentação com restos de comida humana. As adoções de medidas preventivas são necessárias na propriedade estudada, objetivando diminuir a ingestão de oocistos esporulados pelos animais.(AU)

Valores hematológicos e bioquímicos de camundongos imunossuprimidos BALB/c NUDE E C57BL/6 SCID / Haematological and biochemical values of immunosuppressed BALB/c NUDE and C57BL/6 SCID mice

Background: The emergence of the NUDE and SCID immunosuppressed mice lineages generated knowledge on various mechanisms of lymphocyte maturation and human autoimmune diseases. Information on haematological and biochemical parameters of these lineages is still scarce, making it impossible to infer homeostasis by comparing data, or to detect genetic influences on the parameters for these species. Haematological and biochemical tests were carried out on Balb/c NUDE and C57BL/6 SCID mice of both sexes, aiming to analyse the presence of genetic influence on possible variations of such parameters and to verify reference values for both lineages.Materials, Methods & Results: One hundred and forty mice (Mus musculus) of the Balb/C NUDE and C57BL/6 SCID lineages were used in the present study. The animals were previously anesthetized, the blood collection procedure was performed by cardiac puncture and the samples were collected in the presence of heparin and intended for haematological and biochemical evaluation, under standardized conditions. The haematological evaluation consisted of red blood cell count, leukocyte counts, platelet counts, haematocrit, haemoglobin concentration, mean corpuscular volume (MCV), and mean corpuscular haemoglobin concentration (MCHC). The quantified biochemical parameters were: urea, creatinine, alanine aminotransaminase (ALT), aspartate aminotransaminase (AST) and alkaline phosphatase (ALP). While analysing the obtained data, it was possible to observe that only females presented divergences (P < 0.05) in the red blood cell series, in haemoglobin and in mean haemoglobin concentration (MCH). Regarding the analysis of the white blood cell series, females only presented differences (P < 0.05) in the leukocyte count. For males, there were variations (P < 0.05) in the counts of leukocytes, eosinophils, lymphocytes and neutrophils.[...]

Valores hematológicos e bioquímicos de camundongos imunossuprimidos BALB/c NUDE E C57BL/6 SCID / Haematological and biochemical values of immunosuppressed BALB/c NUDE and C57BL/6 SCID mice

Background: The emergence of the NUDE and SCID immunosuppressed mice lineages generated knowledge on various mechanisms of lymphocyte maturation and human autoimmune diseases. Information on haematological and biochemical parameters of these lineages is still scarce, making it impossible to infer homeostasis by comparing data, or to detect genetic influences on the parameters for these species. Haematological and biochemical tests were carried out on Balb/c NUDE and C57BL/6 SCID mice of both sexes, aiming to analyse the presence of genetic influence on possible variations of such parameters and to verify reference values for both lineages.Materials, Methods & Results: One hundred and forty mice (Mus musculus) of the Balb/C NUDE and C57BL/6 SCID lineages were used in the present study. The animals were previously anesthetized, the blood collection procedure was performed by cardiac puncture and the samples were collected in the presence of heparin and intended for haematological and biochemical evaluation, under standardized conditions. The haematological evaluation consisted of red blood cell count, leukocyte counts, platelet counts, haematocrit, haemoglobin concentration, mean corpuscular volume (MCV), and mean corpuscular haemoglobin concentration (MCHC). The quantified biochemical parameters were: urea, creatinine, alanine aminotransaminase (ALT), aspartate aminotransaminase (AST) and alkaline phosphatase (ALP). While analysing the obtained data, it was possible to observe that only females presented divergences (P < 0.05) in the red blood cell series, in haemoglobin and in mean haemoglobin concentration (MCH). Regarding the analysis of the white blood cell series, females only presented differences (P < 0.05) in the leukocyte count. For males, there were variations (P < 0.05) in the counts of leukocytes, eosinophils, lymphocytes and neutrophils.[...](AU)

Histopathological assessment of the liver during experimental infection with Leishmania (Leishmania) chagasi in immunosuppressed BALB/c mice / Avaliação histopatológica do fígado durante a infecção experimental por Leishmania chagasi (Leishmania) em camundongos BALB / c imunossuprimidos / Evaluación histopatológico del hígado durante la infección experimental por Leishmania chagasi (Leishmania) en ratones BALB / c con inmunosupresión

BALB/c mice were experimentally infected with L. (L.) chagasi and immunosuppressed for the study of the histopathological changes present in their liver. The 96 studied mice were subdivided into four groups: control (I) no treatment; immunosuppressed (II) treatment with dexamethasone (DXM) and pentoxifylline (PTX); infected (III) infection with L. (L.) chagasi; and infected and immunosuppressed (IV) - infection with L. (L.) chagasi and treatment with DXM and PTX. The day of infection was considered the day zero and immunosuppression occurred at 60 days P.I. Samples were obtained at distinct moments, 15, 30, 60, 75 and 90 days P.I., by collecting liver fragments for histopathological assessment. There was progressive and constant inflammatory reaction of inflammatory infiltrate and complete granulomas, which was renewed in all observation phases. For inoculated groups, the presence of amastigotes was confirmed by means of immunohistochemistry. The immunosuppressed group showed weak inflammatory reaction and rare incomplete granulomas. Immunosuppression influenced the immune response of the liver, which is capable of controlling murine visceral leishmaniasis.(AU)

Camundongos BALB / c foram infectados experimentalmente com L. (L.) chagasi e imunossuprimidos para estudar as alterações histopatológicas no fígado presente. Os 96 ratos estudados foram divididos em quatro grupos: controle (I) - sem tratamento; imunossuprimidos (II) - O tratamento com dexametasona (DXM) e pentoxifilina (PTX); infectado (III) - infecção por L. chagasi (L.); e infectados e imunodeprimidos (IV) - infecção por L. chagasi (L.) e tratamento com DXM e PTX. O dia da infecção foi considerado o dia zero e imunossupressão ocorreu 60 dias P.I. As amostras foram obtidas em vários momentos, 15, 30, 60, 75 e 90 dias P.I., por coleta de fragmentos de fígado para avaliação histopatológica. Houve constante reação inflamatória e infiltrado inflamatório progressivo e granulomas completos, que foi renovado em todas as fases de observação. Para os grupos inoculados, a presença de amastigotas foi confirmada por imuno-histoquímica. O grupo de imunodeprimidos apresentou uma resposta inflamatória fraca e granulomas raros e incompletos. Imunossupressão influenciou a resposta imune do fígado, que é capaz de controlar a leishmaniose visceral murina.(AU)

Ratones BALB / c se infectaron experimentalmente con L. chagasi (L.) y inmunosuprimidos para el estudio de los cambios histopatológicos presentes en su hígado. Los 96 ratones estudiados se dividieron en cuatro grupos: control (I) - sin tratamiento; inmunosuprimidos (II) - El tratamiento con dexametasona (DXM) y pentoxifilina (PTX); infectada (III) - la infección con L. chagasi (L.); y infectada y inmunosuprimidos (IV) - infección con L. chagasi (L.) y el tratamiento con DXM y PTX. El día de la infección fue considerado como el día cero y la inmunosupresión se produjo a 60 días P.I. Las muestras se obtuvieron en momentos distintos, 15, 30, 60, 75 y 90 días P.I., mediante la recopilación de fragmentos de hígado para la evaluación histopatológica. Hubo reacción inflamatoria progresiva y constante de infiltrado inflamatorio y granulomas completos, que fue renovado en todas las fases de observación. Para los grupos inoculados, la presencia de amastigotes se confirmó por medio de inmunohistoquímica. El grupo inmunosuprimidos mostró una reacción inflamatoria débil y granulomas incompletas raras. Inmunosupresión influyó en la respuesta inmune del hígado, que es capaz de controlar la leishmaniosis visceral murino.(AU)

Histopathological assessment of the liver during experimental infection with Leishmania (Leishmania) chagasi in immunosuppressed BALB/c mice / Avaliação histopatológica do fígado durante a infecção experimental por Leishmania chagasi (Leishmania) em camundongos BALB / c imunossuprimidos / Evaluación histopatológico del hígado durante la infección experimental por Leishmania chagasi (Leishmania) en ratones BALB / c con inmunosupresión

BALB/c mice were experimentally infected with L. (L.) chagasi and immunosuppressed for the study of the histopathological changes present in their liver. The 96 studied mice were subdivided into four groups: control (I) – no treatment; immunosuppressed (II) – treatment with dexamethasone (DXM) and pentoxifylline (PTX); infected (III) – infection with L. (L.) chagasi; and infected and immunosuppressed (IV) - infection with L. (L.) chagasi and treatment with DXM and PTX. The day of infection was considered the day zero and immunosuppression occurred at 60 days P.I. Samples were obtained at distinct moments, 15, 30, 60, 75 and 90 days P.I., by collecting liver fragments for histopathological assessment. There was progressive and constant inflammatory reaction of inflammatory infiltrate and complete granulomas, which was renewed in all observation phases. For inoculated groups, the presence of amastigotes was confirmed by means of immunohistochemistry. The immunosuppressed group showed weak inflammatory reaction and rare incomplete granulomas. Immunosuppression influenced the immune response of the liver, which is capable of controlling murine visceral leishmaniasis.

Camundongos BALB / c foram infectados experimentalmente com L. (L.) chagasi e imunossuprimidos para estudar as alterações histopatológicas no fígado presente. Os 96 ratos estudados foram divididos em quatro grupos: controle (I) - sem tratamento; imunossuprimidos (II) - O tratamento com dexametasona (DXM) e pentoxifilina (PTX); infectado (III) - infecção por L. chagasi (L.); e infectados e imunodeprimidos (IV) - infecção por L. chagasi (L.) e tratamento com DXM e PTX. O dia da infecção foi considerado o dia zero e imunossupressão ocorreu 60 dias P.I. As amostras foram obtidas em vários momentos, 15, 30, 60, 75 e 90 dias P.I., por coleta de fragmentos de fígado para avaliação histopatológica. Houve constante reação inflamatória e infiltrado inflamatório progressivo e granulomas completos, que foi renovado em todas as fases de observação. Para os grupos inoculados, a presença de amastigotas foi confirmada por imuno-histoquímica. O grupo de imunodeprimidos apresentou uma resposta inflamatória fraca e granulomas raros e incompletos. Imunossupressão influenciou a resposta imune do fígado, que é capaz de controlar a leishmaniose visceral murina.

Ratones BALB / c se infectaron experimentalmente con L. chagasi (L.) y inmunosuprimidos para el estudio de los cambios histopatológicos presentes en su hígado. Los 96 ratones estudiados se dividieron en cuatro grupos: control (I) - sin tratamiento; inmunosuprimidos (II) - El tratamiento con dexametasona (DXM) y pentoxifilina (PTX); infectada (III) - la infección con L. chagasi (L.); y infectada y inmunosuprimidos (IV) - infección con L. chagasi (L.) y el tratamiento con DXM y PTX. El día de la infección fue considerado como el día cero y la inmunosupresión se produjo a 60 días P.I. Las muestras se obtuvieron en momentos distintos, 15, 30, 60, 75 y 90 días P.I., mediante la recopilación de fragmentos de hígado para la evaluación histopatológica. Hubo reacción inflamatoria progresiva y constante de infiltrado inflamatorio y granulomas completos, que fue renovado en todas las fases de observación. Para los grupos inoculados, la presencia de amastigotes se confirmó por medio de inmunohistoquímica. El grupo inmunosuprimidos mostró una reacción inflamatoria débil y granulomas incompletas raras. Inmunosupresión influyó en la respuesta inmune del hígado, que es capaz de controlar la leishmaniosis visceral murino.

Fungal infection control by garlic extracts (Allium sativum L. ) and modulation of peritoneal macrophages activity in murine model of sporotrichosis / Controle da infecção fúngica pelos extratos de alho (Allium sativum L. ) e modulação da atividade de macrófagos peritoneais em modelo murino de esporotricose

Garlic (Allium sativum L.) is grown all over the world as seasoning and medicinal vegetable since 3,000 BC. Allicin is the main component of garlic, being attributed to it the most of its biological activities, such as bactericidal, antifungal and antiviral actions. However, other compounds of garlic present antioxidant, hypocholesterolemic, vasodilator activities, protective action against different types of cancer, and immunomodulatory. Fungal infections are important causes of morbidity and mortality in people mainly in immunosuppressed ones. Sporothrix schenckii, the causing agent of Sporotrichosis (most common subcutaneous mycosis in Latin America), is dimorphic fungus, of saprophytic life in soil or plants, infecting people and animals mainly through skin injuries and bruises. The main of this work was to evaluate the influence of garlic consuming on immune modulation of healthy and infected Swiss mice in induced way by S. schenckii, since these animals functioning of peritoneal macrophages as well as the nitric oxide and cytokines production (IL-1β, IL-10 and IL-12) and to evaluate the antifungal potential of garlic with S. schenckii through minimum inhibitory concentration test and colony-forming units. The results showed that garlic offers antifungal potential with S. schenckii. The oral taking of garlic extracts influences the releasing of cytokines by macrophages, regular consuming shows anti-inflammatory effect, and its acute use may take to an inflammatory response. Mice that consumed garlic responded more effectively to fight against the infection.(AU)

O alho (Allium sativum L.) é cultivado em todo o mundo como hortaliça condimentar e medicinal desde 3.000 a. C. A alicina é o principal componente do alho, sendo atribuída a ela a maior parte das suas atividades biológicas, dentre elas as ações bactericida, antifúngica e antiviral. Porém, outros compostos do alho apresentam atividade antioxidante, hipocolesterolemiante, vasodilatadora, ação protetora contra diversos tipos de câncer e imunomoduladora. As infecções por fungos são causas importantes de morbidade e mortalidade no homem principalmente em indivíduos imunossuprimidos. O Sporothrix schenckii, agente causal da esporotricose (micose subcutânea mais comum na América Latina), é fungo dimórfico, de vida saprofítica no solo ou em vegetais, infectando homens e os animais principalmente através de lesões e arranhões na pele. O objetivo desse trabalho foi avaliar a influência do consumo de alho na imunomodulação de camundongos Swiss saudáveis e infectados de forma induzida por S. schenckii, a partir do estado funcional dos macrófagos peritoneais desses animais quanto à produção de óxido nítrico e das citocinas (IL-1β, IL-10 and IL-12) e avaliar o potencial antifúngico do alho frente ao S. schenckii por meio de teste de concentração inibitória mínima e unidades formadoras de colônia. Os resultados demonstraram que o alho apresenta potencial antifúngico frente S. schenckii. A administração oral de extratos de alho influencia a liberação de citocinas por macrófagos, o consumo regular apresenta efeito anti-inflamatório, e seu uso agudo pode gerar uma resposta inflamatória. Camundongos que consumiram alho responderam de forma mais efetiva no combate da infecção.(AU)

IDADE DA DOADORA E DIFERENTES GÊNEROS RECEPTORES: RESPOSTAS AO XENOTRANSPLANTE OVARIANO OVINO POR LONGO PERÍODO DE CULTIVO

O estoque de folículos primordiais e primários existente em ovários fetais representa um potencial inexplorado que pode ser cultivado para fins de reprodução, preservação ou pesquisa. Adicionalmente, a utilização de receptores masculinos imunodeficientes no xenotransplante ovariano fornece mais uma oportunidade de aproveitamento de material genético que poderia ser perdido. Dessa forma, objetivou-se avaliar o desenvolvimento e viabilidade do tecido ovariano ovino, na fase fetal e na fase pré-pubere, xenotransplantado a fresco, em diferentes linhagens e sexo de camundongos imunossuprimidos. Para o primeiro experimento, ovários de fetos ovinos (100-140 dias) foram colhidos após o abate de suas genitoras, divididos em pequenos fragmentos (1 mm3) que foram destinados a avaliação controle e ao xenotransplante a fresco. Foram utilizadas cinco receptoras da linhagem C57BL/6 SCID para o xenotransplante. Cinco dias após o procedimento cirúrgico, as camundongas receptoras foram submetidas ao lavado vaginal durante 60 dias. Ao final desse período foram eutanasiadas e procedeu-se com a coleta dos transplantes para avaliações macro e microscópicas. Observou-se que em 80% das fêmeas receptoras o padrão citológico do lavado vaginal alternou entre diestro-proestro-diestro, não sendo observadas as fases de estro e metaestro durante o período experimental. Na análise histológica foi constatado que a neovascularização ocorreu em 80% dos tecidos recuperados. Observou-se também folículos pré-antrais e antrais (menores) e sem alterações morfológicas, no entanto, não foram obtidos folículos antrais com mais de 1mm. Corpos lúteos também não foram visualizados. No segundo experimento, fragmentos ovarianos (1 mm3) de ovelhas jovens foram xenotransplantados a fresco em receptores machos da linhagem C57BL/6 SCID (n = 5) e BALB/c Nude (n = 5). Após 65 dias do xenotransplante, os animais foram eutanasiados e os transplantes avaliados quanto às características macroscópicas, microscópicas e o desenvolvimento oocitário in vitro. Foi observado nos ovários recuperados dos animais da linhagem C57BL/6 SCID grande consumo folicular. Dos folículos morfologicamente normais restantes, a maioria era primordial. Adicionalmente, áreas com tecido cicatricial semelhante ao corpo albicans também foram encontradas. Nos transplantes recuperados dos animais da linhagem BALB/c Nude foi observado consumo folicular moderado, apresentando baixa taxa de folículos primordiais e primários normais e alta proporção de primordiais atrésicos. Adicionalmente, recuperou-se um oócito, o qual foi submetido à maturação, fecundação e cultivo in vitro sem, contudo, apresentar desenvolvimento embrionário. Considerando que utilizou-se doadoras da mesma espécie, conclui-se que a idade da doadora, a espécie receptora e o período para a coleta do tecido ovariano devem ser adaptados para melhores resultados.

The stock of primordial and primary follicles in fetal ovaries represents an untapped potential that can be cultivated for purposes of reproduction, preservation or research. Additionally, the use of male immunodeficient receptors in the ovarian xenograft provides more opportunity to use genetic material that could be lost. Thus, the objective was to evaluate the development and viability of ovarian ovine tissue, in the fetal phase and in the prepubertal phase, freshly grafted, in different strains and sex of immunosuppressed mice. For the first experiment, ovaries from fetal sheep (100-140 days old) were harvested after slaughtering their mothers, divided into small fragments (1 mm3) that were destined for control evaluation and fresh xenotransplantation. Five C57BL/6 SCID strain recipients were used for xenotransplantation. Five days after the surgical procedure, the recipient mice were subjected to vaginal lavage for 60 days. At the end of this period, they were euthanized and the grafts were collected for macro and microscopic evaluations. It was observed that in 80% of the receiving females the cytological pattern of the vaginal lavage alternated between diestrus-proestrus-diestrus, with the estrus and metestrus phases not being observed during the experimental period. Histological analysis showed that neovascularization occurred in 80% of the recovered tissues. Pre-antral and antral follicles (smaller) and without morphological changes were also observed, however, antral follicles larger than 1 mm were not obtained. Corpus luteum was also not seen. In the second experiment, ovarian fragments (1 mm3) from young sheep were xenotransplanted fresh into male recipients of the C57BL/6 SCID (n = 5) and BALB/c Nude (n = 5) lines. After 65 days of xenograft, the animals were euthanized and the grafts were evaluated for macroscopic and microscopic characteristics and oocyte development in vitro. It was observed in the tissues recovered from animals of the C57BL / 6 SCID strain a high follicular consumption. Of the remaining morphologically normal follicles, most were primordial. Additionally, areas with scar tissue similar to the corpus albicans were also found. In grafts recovered from animals of the BALB/c Nude strain, moderate follicular consumption was observed, with a low rate of normal primordial and primary follicles and a high proportion of primordial atretic follicles. Additionally, an oocyte was recovered, which was subjected to maturation, fertilization and in vitro culture without, however, showing embryonic development. Considering that donors of the same species were used, it is concluded that the age of the donor, the recipient species and the period for the collection of ovarian tissue must be adapted for better results.

Estudo de patogenicidade de duas cepas de Neospora caninum isoladas de caprinos e sua correlação genética com outras cepas por genotipagem de microssatélites

O presente trabalho compreende o Estudo de diferentes cepas de Neospora caninum do Brasil e da Escócia quanto às suas características genéticas, avaliação de patogenicidade, virulência e possibilidade de isolamento. O primeiro capítulo, consiste de um artigo publicado no periódico internacional Veterinary Parasitology e descreve uma tentativa de isolamento de cepas do parasito utilizando tecido placentário de cabras naturalmente infectadas, em um bioensaio utilizando gerbis. Apesar dos gerbis serem descritos na literatura como sendo altamente susceptíveis à infecção por N. caninum, somente foi obtido sucesso na infecção de animais após imunossupressão com altas doses de metilpredinisolona. Animais imunossuprimidos apresentaram sinais clínicos de emagrecimento, pelos arrepiados e alterações de propriocepção como Head tilt. Análises histopatológicas revelaram reações inflamatórias no encéfalo, consistindo de infiltrados inflamatórios mononucleares multifocais associados à manguitos perivasculares e estruturas parasitárias semelhantes a cistos e taquizoítos, juntamente com áreas de necrose associadas à infiltrado inflamatório de macrófagos e reação de cicatrização em musculatura esquelética. Apesar do sucesso na infecção dos gerbis, não foi possível obter o isolamento do parasito em cultivo celular em uma primeira tentativa, o que levou à segunda parte do trabalho. O capítulo dois consiste de um artigo publicado no periódico intenracional Experimental Parasitology. Foram utilizados tecidos dos gerbis infectados descritos anteriormente e novas amostras de sistema nervoso central de caprinos naturalmente infectados em um bioensaio em camundongos C57BL6 Knockout para o gene Interferon gamma (camundongos knockout- KO). Os camundongos Knockout por serem incapazes de desenvolver uma resposta imune adequada ao N. caninum, permitiram a rápida replicação de taquizoítos principalmente em macrófagos peritoneais, os camundongos apresentaram acentuada perde de peso, letargia e ascite 15 a 30 dias após inoculação, quando foram eutanasiados e o líquido peritoneal utilizado para infecção de monocamadas de células VERO. A grande quantidade de taquizoítos no líquido peritoneal de camundongos KO permitiu uma rápida adaptação e crescimento dos mesmos em cultura de células, dando origem a dois isolados de cabras nomeados NC-Goat1 e NC-Goat2. Os dois isolados foram testados quanto à sua Patogenicidade em um modelo de infecção experimental em camundongos BALB/c, amplamente utilizado na literatura. As cepas não apresentaram alta patogenicidade e virulência no modelo de infecção de camundongos, apesar das duas cepas terem sido associadas a doença clínica em caprinos, com abortos, natimortos e encefalite em caprinos jovens e adultos. O terceiro capítulo apresenta resultados de um estudo genético de genotipagem dos isolados NC-Goat1 e NC-Goat2, amostras clínicas de caprinos e bovinos do sul de Minas Gerais e amostras de bovinos da região de Dumfries e Galloway na Escócia. Utilizando a técnica de genotipagem por microssatélites, análises filogenéticas evidenciaram que as cepas de N. caninum presentes nos isolados e nas amostras clínicas de caprinos tinha relação próxima com os isolados brasileiros NC-SP1, NC-Bahia e NC-Goiás, enquanto que as amostras de bovinos de minas gerais não se correlacionaram proximamente às outras. Analisando as amostras provenientes de rebanhos escoceses, todos tenderam a se relacionar proximamente entre elas e com outras amostras escocesas descritas anteriormente na literatura. Análises adicionais utilizando marcadores microssatélites descritos pelo grupo de pesquisa do Instituto Moredun, evidenciaram genótipos mistos associados ao isolado padrão de N. caninum (NC-1), sugerindo que o isolado poderia ter sido composto por múltiplos genótipos ao isolamento e à medida que foi replicado em cultura celular convergiu em uma população mais homogênea de parasitos.

The present work comprises the study of different strains of Neospora caninum, from Brazil and Scotland, regarding their genetic characteristics, pathogenicity, virulence and attempts at isolation. The first chapter consists of an article published in the journal Veterinary Parasitology and describes an attempt to isolate parasite strains using placental tissue from naturally infected goats in a bioassay using gerbils. Although gerbils are described in the literature as highly susceptible to N. caninum infection, successful infection of animals has only been achieved after immunosuppression with high doses of methylpredinisolone. Immunosuppressed animals showed clinical signs of weight loss, fur and proprioception changes such as Head tilt. Histopathological analysis revealed inflammatory reactions in the brain consisting of multifocal mononuclear inflammatory infiltrates associated with perivascular cuffs, cyst-like and tachyzoite-like parasitic structures, along with areas of necrosis associated with macrophage inflammatory infiltrate and skeletal muscle scar formation. Despite the success in gerbil infection, it was not possible to obtain isolation of the parasite in cell culture in a first attempt, which led to the second part of the work. The chapter two consists of an article published in the journal Experimental Parasitology. Tissues from the previously described infected gerbils and new samples from the central nervous system of naturally infected goats were used in a bioassay using C57BL6 interferon gamma Knockout mouse (KO mice). Knockout mice, being unable to develop an adequate immune response to N. caninum, allowed the rapid replication of tachyzoites mainly in peritoneal macrophages, showing marked weight loss, lethargy and ascites 15 to 30 days after inoculation, when they were euthanized, and the peritoneal fluid used for infection of VERO cell monolayers. The large amount of tachyzoites in the peritoneal fluid of KO mice allowed their rapid adaptation and growth in cell culture, resulting in two goat isolates named NCGoat1 and NC-Goat2. Both isolates were tested for pathogenicity in a widely used experimental BALB/c mouse infection model. The strains did not show high pathogenicity and virulence in the mouse infection model, although both strains were associated with clinical disease in goats, with abortions, stillbirths and encephalitis in young and adult goats. The third chapter presents the results of a genetic genotyping study of the isolates NCGoat1 and NC-Goat2, clinical samples from goats and cattle from southern Minas Gerais and samples from cattle from the Dumfries and Galloway region of Scotland. Using the microsatellite genotyping technique, phylogenetic analyzes showed that N. caninum strains present in the isolates and clinical samples of goats had a close relationship with the Brazilian isolates NC-SP1, NC-Bahia and NC-Goiás, while the samples from Minas Gerais cattle did not correlate closely to the others. Analysing samples from Scottish herds, all tended to relate closely to each other and to other Scottish samples previously described in the literature. Additional analyses using microsatellite markers described by the Moredun Institute research group showed mixed genotypes associated with the standard N. caninum isolate (NC-1), suggesting that the isolate could have been composed of multiple genotypes on isolation and as it was replicated in cell culture they converged to a more homogeneous population of parasites.

Xenotransplante em camundongos imunossuprimidos coletado por meio de ovariectomia unilateral total vídeolaparoscópica em ovelha / Xenotransplantation in immunosuppressed mice collected from total unilateral laparoscopic ovariectomy in sheep

Objetivou-se neste estudo descrever a técnica de xenotransplante gonadal em camundongosimunossuprimidos por meio de ovariectomia unilateral total videolaparoscópica (OVL) em ovelhas. Foramutilizadas quatro ovelhas como doadoras do tecido reprodutivo e camundongos em fase reprodutiva (n = 12)como receptores. As coletas foram realizadas por videocirurgia, e foram avaliados o tempo de cirurgia, as respostascomportamentais antiálgicas, o apetite, o escore corporal e a locomoção durante 10 dias pós-operatórios. Osxenotransplantes foram realizados na cápsula renal dos camundongos, sendo avaliados histologicamente 60 diasapós o transplante. O tempo de cirurgia foi de 18 ± 3 min. A técnica OVL apresentou-se minimamente invasiva,sem complicações cirúrgicas, proporcionando mínimo desconforto e ótima recuperação dos animais, e pode serempregada em ovelhas adultas e pré-púberes para coleta de tecidos reprodutivos para conservação de gametas. Parahistologia dos tecidos xenotransplantados, verificou-se viabilidade tecidual, com neovascularização e ausência defocos necróticos, porém não se visualizaram folículos nas diferentes fases. Concluiu-se que a OVL pode ser atécnica empregada em ovelhas pré-púberes e adultas para recuperação de tecido reprodutivo paraxenotransplante. Para o xenotransplante, sugere-se que os fragmentos ovarianos selecionados contenham umnúmero suficiente de folículos primordiais para o possível sucesso da biotécnica.(AU)

The aim of this study was to describe the technique of gonadal xenotransplantation inimmunosuppressed mice from total unilateral laparoscopic ovariectomy (OVL) in sheep. Four sheep were usedas donors of reproductive tissue in mice in the reproductive phase (n = 12) as receivers. Samples were collectedby laparoscopic surgery, evaluating the time of surgery, observation of behavioral anti-painful responses,monitoring appetite, body condition score and locomotion for 10 days postoperatively. The xenografts wereperformed in the renal capsule of mice, as evaluated histologically 60 days after transplantation. The operationtime was 18 ± 3 min, the technique presented OVL minimally invasive surgical complications without providingminimum discomfort and optimum recovery of the animals and can be used in adult and prepubertal sheep forcollecting reproductive tissues for the conservation of gametes. Histology tissue xenotransplanteted was a viabletissue, with neovascularization and absence of necrotic foci, but follicles at different stages were not visualized.It was concluded that the OVL technique can be employed in sheep and adult prepubertal for recoveringreproductive tissue for xenotransplantation. For xenotransplantation, it is suggested that the ovarian fragmentsselected contain a sufficient number of primordial follicles for the possible success of biotech.(AU)

Xenotransplante em camundongos imunossuprimidos coletado por meio de ovariectomia unilateral total vídeolaparoscópica em ovelha / Xenotransplantation in immunosuppressed mice collected from total unilateral laparoscopic ovariectomy in sheep

Objetivou-se neste estudo descrever a técnica de xenotransplante gonadal em camundongosimunossuprimidos por meio de ovariectomia unilateral total videolaparoscópica (OVL) em ovelhas. Foramutilizadas quatro ovelhas como doadoras do tecido reprodutivo e camundongos em fase reprodutiva (n = 12)como receptores. As coletas foram realizadas por videocirurgia, e foram avaliados o tempo de cirurgia, as respostascomportamentais antiálgicas, o apetite, o escore corporal e a locomoção durante 10 dias pós-operatórios. Osxenotransplantes foram realizados na cápsula renal dos camundongos, sendo avaliados histologicamente 60 diasapós o transplante. O tempo de cirurgia foi de 18 ± 3 min. A técnica OVL apresentou-se minimamente invasiva,sem complicações cirúrgicas, proporcionando mínimo desconforto e ótima recuperação dos animais, e pode serempregada em ovelhas adultas e pré-púberes para coleta de tecidos reprodutivos para conservação de gametas. Parahistologia dos tecidos xenotransplantados, verificou-se viabilidade tecidual, com neovascularização e ausência defocos necróticos, porém não se visualizaram folículos nas diferentes fases. Concluiu-se que a OVL pode ser atécnica empregada em ovelhas pré-púberes e adultas para recuperação de tecido reprodutivo paraxenotransplante. Para o xenotransplante, sugere-se que os fragmentos ovarianos selecionados contenham umnúmero suficiente de folículos primordiais para o possível sucesso da biotécnica.

The aim of this study was to describe the technique of gonadal xenotransplantation inimmunosuppressed mice from total unilateral laparoscopic ovariectomy (OVL) in sheep. Four sheep were usedas donors of reproductive tissue in mice in the reproductive phase (n = 12) as receivers. Samples were collectedby laparoscopic surgery, evaluating the time of surgery, observation of behavioral anti-painful responses,monitoring appetite, body condition score and locomotion for 10 days postoperatively. The xenografts wereperformed in the renal capsule of mice, as evaluated histologically 60 days after transplantation. The operationtime was 18 ± 3 min, the technique presented OVL minimally invasive surgical complications without providingminimum discomfort and optimum recovery of the animals and can be used in adult and prepubertal sheep forcollecting reproductive tissues for the conservation of gametes. Histology tissue xenotransplanteted was a viabletissue, with neovascularization and absence of necrotic foci, but follicles at different stages were not visualized.It was concluded that the OVL technique can be employed in sheep and adult prepubertal for recoveringreproductive tissue for xenotransplantation. For xenotransplantation, it is suggested that the ovarian fragmentsselected contain a sufficient number of primordial follicles for the possible success of biotech.

MODELO DE PNEUMONIA INTERSTICIAL CAUSADA PELO ENCEPHALITOZOON CUNICULI EM CAMUNDONGOS

As pneumonias são afecções importantes que impactam a sobrevida de pacientes imunossuprimidos e imunodeprimidos. Encephalitozoon cuniculi é um patógeno intracelular obrigatório que infecta hospedeiros vertebrados, incluindo o homem, sendo oportunista na maioria das infecções. A ocorrência de pneumonia associada à encefalitozoonose tem sido relatada de forma rara. Assim, o objetivo do presente estudo foi caracterizar pneumonia em camundongos tratados ou não com ciclofosfamida (Cy) e experimentalmente infectados com Encephalitozoon cuniculi, para instituir um modelo animal de pneumonia fúngica oportunista. Camundongos C57BL/6, machos, com 6 a 8 semanas, foram infectados com esporos de E. cuniculi por via intravenosa e tratados com Cy (75 mg/kg/semana, por via intraperitoneal), sendo mantidos controles não infectados e não tratados. Aos trinta dias pós-infecção, a partir do tecido pulmonar, avaliou-se a carga fúngica (qPCR), as lesões histopatológicas, a produção de citocinas e o fenótipo das células inflamatórias presentes no parênquima por meio de citometria de fluxo. Histologicamente, nos animais infectados foi observada pneumonia intersticial com infiltrado linfocítico. Este infiltrado foi constituído majoritariamente por linfócitos T CD8+ e CD4+ e com populações de linfócitos B e de macrófagos totais reduzidas. A carga fúngica foi maior nos animais tratados com Cy, sendo confirmada pela imunohistoquímica, com a visualização de esporos no tecido pulmonar. Esses resultados demonstram que camundongos C57BL/6, tratados ou não com Cy e infectados com E. cuniculi, apresentaram pneumonia intersticial linfocítica, agravada pela imunossupressão, sendo este um modelo que pode ser empregado no estudo de pneumonias fúngicas oportunistas.

Pneumonias are important conditions that impact the survival of immunosuppressed and immunocompromised patients. Encephalitozoon cuniculi is an obligate intracellular pathogen that infects vertebrate hosts, including humans, and is opportunistic in most infections. The occurrence of encephalitozoonosis-related pneumonia has been rarely reported. Thus, the aim of this study was to characterize pneumonia in mice treated or not with cyclophosphamide (Cy) and experimentally infected with Encephalitozoon cuniculi, to establish an animal model of opportunistic fungal pneumonia. C57BL/6 mice, males, aged 6-8 weeks, were infected intravenously with E. cuniculi spores and treated with Cy (75 mg/kg/week, intraperitoneally). Controls were uninfected and untreated. Thirty days post-infection, fungal load (qPCR), histopathological lesions, cytokine production, and the phenotype of the immune cells present in the parenchyma were evaluated from lung tissue by flow cytometry. Histologically, interstitial pneumonia with lymphocytic infiltrate was observed in the infected animals. This infiltrate consisted mainly of T CD8+ and CD4+ lymphocytes, and B lymphocyte and macrophage populations were reduced. Fungal load was higher in the Cy-treated animals, which was confirmed by immunohistochemistry, with visualization of spores in lung tissue. These results demonstrate that C57BL/6 mice treated or not with Cy and infected with E. cuniculi had lymphocytic interstitial pneumonia, aggravated by immunosuppression. This model may be used to study opportunistic fungal pneumonias.

Avaliação de minerais e elementos traço na leishmaniose cutânea e sua correlação com a patogênese da doença

A leishmaniose é uma doença ocasionada por parasitos do gênero Leishmania e pode se manifestar através de diversas formas clínicas com lesões cutâneas localizadas, disseminadas ou até a forma visceral. O resultado clínico de uma infecção por Leishmania spp. é variável e depende de diversos fatores, tanto relacionados ao parasito, quanto ao hospedeiro. A imunidade ou susceptibilidade às doenças infecto-parasitárias estão relacionadas com o estado nutricional do paciente. Nos últimos anos algumas pesquisas têm relacionado o estado nutricional e a presença ou ausência de minerais e elementos traço com a gravidade da doença, tanto para a leishmaniose tegumentar, quanto para a visceral. Sendo assim, este estudo teve como objetivo identificar e quantificar alterações de macro e microelementos durante o curso de infecção experimental por Leishmania (Leishmania) amazonensis e avaliar sua influência na patogenicidade da doença, correlacionando-os com a carga parasitária, análise histopatológica e parâmetros de estresse oxidativo. Para isto, camundongos BALB/c foram inoculados com as formas promastigotas de L. (L.) amazonensis em fase estacionária de crescimento. Os animais foram divididos em diferentes grupos, simulando quadros de infecções em hospedeiros imunocompetentes e imunocomprometidos. Amostras de sangue, baço, fígado e rim foram coletadas e submetidas a análise de espectrometria de Emissão Óptica por Plasma Acoplado Indutivamente, realizado testes histopatológicos, bem como da atividade da butirilcolinesterase, mieloperoxidase, substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico, superóxido dismutase, tióis totais e glutationa peroxidase. Foi possível observar a doença sistêmica com lesões histopatológicas em diferentes órgãos dos animais infectados, além de diminuição nos níveis de zinco e manganês no baço de animais infectados com L. (L.) amazonensis e imunossuprimidos pela depleção de células T CD4+ quando comparado ao grupo controle (P<0,05). No entanto não foi observado alteração nos parâmetros de estresse oxidativo evidenciando a resistência dos protozoários de L. (L.) amazonensis frente à resposta antioxidante de hospedeiros imunocompetentes e imunossuprimidos, possibilitando assim a persistência da infecção.

Leishmaniasis is a disease caused by parasites of the genus Leishmania and can manifest several clinical forms like localized, disseminated skin lesions or visceral form. The clinical result of a Leishmania spp. infection is variable and depends on several factors, both related to the parasite and to the host. Immunity or susceptibility to infectious-parasitic diseases is related to the nutritional status of the patient. In recent years, some research has correlated nutritional status and the presence or absence of minerals and trace elements with the severity of the disease, both for tegumentary and visceral leishmaniasis. This study aimed to identify and quantify changes in macro and microelements during the course of experimental infection by Leishmania (Leishmania) amazonensis and to evaluate its influence on the pathogenicity of the disease, correlating them with the parasite load, histopathological analysis and parameters oxidative stress. For this, BALB/c mice were inoculated with the promastigote forms of L. (L.) amazonensis in stationary phase of growth. The animals were divided into different groups and submitted to different clinical situations, simulating immunocompetent and immunocompromised hosts. Samples of blood, spleen, liver and kidney were collected and subjected to Inductively Coupled Plasma Optical Emission Spectroscopy analysis, histopathology, butyrylcholinesterase activity, myeloperoxidase, thiobarbituric acid reactive substances, superoxide dismutase, total thiols and glutathione peroxidase. It was possible to observe visceralization of the disease with histopathological lesions in several organs of the infected animals, as well as a decrease in the levels of zinc and manganese in the spleen of L. (L.) amazonensis infected animals and immunosuppressed by CD4+ T cell depletion when compared to the control group (P <0.05). However, no alteration in the oxidative stress parameters was observed evidencing the resistance of L. (L.) amazonensis protozoans to the antioxidant response of immunocompetent and immunosuppressed hosts.

DEFICIÊNCIA DE CÉLULAS B ASSOCIADA À IMUNOSSUPRESSÃO PERMITE A COMPREENSÃO DA RESPOSTA IMUNE NA ENCEFALITOZOONOSE

Encephalitozoon cuniculi é um patógeno intracelular que estabelece uma relação equilibrada com hospedeiros imunocompetentes, dependente da atividade de linfócitos T. Em indivíduos imunodeficientes, pelo HIV ou por fármacos, a encefalitozoonose é grave, disseminada e letal. Anteriormente, nós demonstramos maior suscetibilidade de camundongos com imunodeficiência ligada ao cromossomo X (XID) à encefalitozoonose, indicando a participação das células B-1. Nós hipotetizamos que as células B (B-1 e B-2) participam da resposta imune contra E. cuniculi. Assim, o objetivo desse estudo foi avaliar a resposta imune de camundongos XID e Balb/c contra Encephalitozoon cuniculi, com foco na participação de células B (B-1 e B-2), utilizando a ciclofosfamida (Cy) como agente imunossupressor para potencializar a infecção. Para tal, camundongos Balb/c e XID foram imunossuprimidos com Cy e infectados com E. cuniculi. Após 14 e 21 dias de infecção e tratamento, avaliou-se a carga fúngica, as lesões teciduais, as citocinas do plasma e as populações de células T, B e macrófagos do peritônio e baço. Os camundongos XID apresentaram quadro clínico grave com ascite e letargia, tiveram aumento das populações peritoneais de linfócitos TCD8+ e TCD4+ e de macrófagos e aumento de citocinas pró-inflamatórias (IFN-, TNF-, IL-6), contudo sem apresentar alteração de populações imunitárias do baço. Em camundongos Balb/c observou-se aumento da população de linfócitos T e de macrófagos no baço, indicando montagem da reposta imune contra E. cuniculi associada à ausência de quadro clínico da infecção. Pode-se concluir que a imunodeficiência de células B nos camundongos XID associada ao tratamento com Cy determinou um quadro de encefalitozoonose grave e disseminada, caracterizada por uma resposta imune esplênica incipiente e por resposta imune peritoneal aumentada, porém ineficaz, evidenciando assim a participação de células B-1 e B-2 da imunidade contra microsporídios.

Encephalitozoon cuniculi is an intracellular pathogen that establishes a balanced relationship with immunocompetent hosts, dependent on T lymphocyte activity. In immunodeficient individuals, by HIV or by drugs, encephalitozoonosis is severe, widespread and lethal. Previously, we demonstrated that mice with X-linked immunodeficiency (XID) were more susceptible to encephalitozoonosis, indicating the participation of B-1 cells. We hypothesized that B cells (B-1 and B-2) participate in the immune response against E. cuniculi. Thus, the objective of this study was to evaluate the immune response of XID and Balb/c mice against Encephalitozoon cuniculi, focusing on the participation of B cells (B-1 and B-2), using Cyclophosphamide (Cy) as an immunosuppressive agent. For this, XID and Balb/c mice were immunosuppressed with Cy and infected with E. cuniculi. After 14 and 21 days of infection and treatment, fungal burden, tissue lesions, plasma Cytokines, T and B cells and macrophages from peritoneum and spleen were evaluated. The XID mice presented severe clinical manifestations with ascites and lethargy, increased peritoneal populations of CD8+ and CD4+ T lymphocytes and macrophages, increased proinflammatory Cytokines (IFN-, TNF-, IL-6), but the spleen immune populations did not change. In Balb/c mice, the T lymphocyte and macrophages population increased in the spleen, indicating the assembly of the immune response against E. cuniculi, which is associated with the absence of clinical manifestations of the infection. We conclude that B-cell immunodeficiency in XID mice associated with Cy treatment has determined a severe and widespread encephalitozoonosis characterized by an incipient splenic immune response and an increased but ineffective peritoneal immune response, thus evidencing the participation of B-1 and B-2 immunity against microsporidia.

CARACTERIZAÇÃO DA RESPOSTA IMUNE ASSOCIADA A HEPATITE GRANULOMATOSA CAUSADA PELO Encephalitozoon cuniculi

O microsporídio Encephalitozoon cuniculi é um fungo oportunista causador da encefalitozoonose, principalmente em indivíduos imunossuprimidos, tais como pacientes infectados com o vírus da imunodeficiência humana e pacientes em quimioterapia. A investigação sobre a resposta imune no fígado de pacientes com encefalitozoonose local e/ou disseminada ainda foi pouco esclarecida. Assim, este trabalho objetivou caracterizar a resposta imune local e sistêmica na hepatite granulomatosa experimental murina. Para isso, foram utilizados camundongos C57BL/6, machos, imunossuprimidos com ciclofosfamida e infectados com E. cuniculi. As análises fenotípicas das populações celulares indicam que a infecção por E. cuniculi induziu no fígado aumento significante de linfócitos TCD4+, TCD8+ e B, além de macrófagos, em relação ao controle não infectado. Já no baço, a infecção por E. cuniculi não alterou as populações celulares TCD4+, TCD8+, B e macrófagos em relação ao controle não infectado. Além disso, a infecção por E. cuniculi e imunossupressão por CY induziu aumento significante de macrófagos no fígado em relação ao grupo controle não infectado e ao grupo CY, associada ao aumento de macrófagos no baço em relação ao grupo controle não infectado e ao grupo infectado. Com relação às citocinas Th1, Th2, e Th17, a infecção por E. cuniculi aumentou os níveis das citocinas IFN- em relação ao grupo controle e CY, e TNF- em relação ao grupo controle, associada ao aumento significante da citocina IFN- no soro. Além disso, a infecção por E. cuniculi e imunossupressão por CY induziu aumento significante de IFN-, TNF- e IL-10 no fígado em comparação ao grupo controle não infectado, associado ao aumento significante da citocina IFN- no soro. Em conjunto, os resultados do presente estudo demonstram que a hepatite granulomatosa murina causada por E. cuniculi é caracterizada por um processo predominantemente pró-inflamatório, demonstrando um importante papel do fígado na resposta imune contra a encefalitozoonose, mesmo em condições de imunossupressão.

The microsporidium Encephalitozoon cuniculi is an opportunistic fungus that causes encephalitozoonosis, especially in immunosuppressed individuals, such as patients infected with the human immunodeficiency virus and patients on chemotherapy. Investigation of the immune response in the liver of patients with local and / or disseminated encephalitozoonosis has not been clarified. Thus, this work aimed to characterize the local and systemic immune response in murine experimental granulomatous hepatitis. For this, male C57BL / 6 mice, immunosuppressed with cyclophosphamide (CY) and infected with E. cuniculi were used. Phenotypic analyzes of the cell populations indicate that infection by E. cuniculi induced a significant increase in TCD4 +, TCD8 + and B lymphocytes in the liver, in addition to macrophages, in relation to the uninfected control. In the spleen, E. cuniculi infection did not alter the cellular populations TCD4 +, TCD8 +, B and macrophages in relation to the uninfected control. In addition, E. cuniculi infection and CY immunosuppression induced a significant increase of macrophages in the liver in relation to the uninfected control group and CY group, associated to the increase of macrophages in the spleen in relation to the uninfected control group and the infected group. With regard to the Th1, Th2, and Th17 cytokines, E. cuniculi infection increased levels of the cytokines IFN- in relation to the control group and CY, and TNF- in relation to the control group, associated to the significant increase of the cytokine IFN - in serum. In addition, E. cuniculi infection and CY immunosuppression induced a significant increase in IFN-, TNF- and IL-10 in the liver compared to the uninfected control group, associated with a significant increase in IFN- serum cytokine. Together, the results of the present study demonstrate that murine granulomatous hepatitis caused by E. cuniculi is characterized by a predominantly pro-inflammatory process, demonstrating an important role of the liver in the immune response against encephalitozoonosis, even under conditions of immunosuppression.

XENOTRANSPLANTE OVARIANO CAPRINOS: EFEITOS DA VITRIFICAÇÃO, DO SEXO E DA LINHAGEM RECEPTORA

O xenotransplante de tecido ovariano representa uma ferramenta interessante para investigar o potencial reprodutivo em diferentes mamíferos domésticos, no entanto sua aplicabilidade em caprinos ainda necessita ser estudada. O objetivo deste estudo foi avaliar o aproveitamento de tecido ovariano caprino transplantado em duas linhagens de camundongos imunossuprimidos (C57BL/6 SCID e BALB/c Nude). Para o primeiro experimento, ovários de fetos caprinos foram colhidos após o abate de suas genitoras, divididos em pequenos fragmentos que foram destinados a avaliação controle, ao xenotransplante a fresco (XF) e xenotransplante após criopreservação (XC). Foram utilizadas cinco receptoras de cada linhagem para o xenotransplante a fresco e 10 animais de cada linhagem para o xenotransplante criopreservado. As camundongas receptoras foram eutanasiadas após 65 dias de pós-operatório, sendo coletados os transplantes para avaliação macro e microscópicas e o sangue coletado por punção via intracardíaca para mensuração de estradiol. Para o segundo experimento, fragmentos ovarianos (1,0 mm3) de seis cabritas jovens foram xenotransplantados imediamente após a colheita para dez receptores de cada linhagem. Após 65 dias do xenotransplante, os animais foram eutanasiados e os transplantes avaliados quanto às características macroscópicas por histologia clássica e o desenvolvimento oocitário in vitro. Adicionalmente, o plasma sanguíneo foi recuperado dos receptores para a quantificação das concentrações de estradiol e análises bioquímicas renais e hepáticas. No primeiro experimento observou-se que, independente das linhagens, todas as receptoras apresentaram taxa de retorno a atividade ovariana com ciclo estral completo após XF e 80% após XC. Foram observados folículos pré antrais e antrais e sem alterações morfológicas. A densidade de volume e a superfície total de vasos observados nos transplantes foram diferentes (p < 0,01) entre os grupos XF e XC. A dosagem de 17- estradiol nas receptoras não diferiu (p < 0,05) entre os tratamentos. No segundo experimento foi observado folículos de todas as fases de desenvolvimento e sem alterações morfológicas nos transplantes recuperados. Além disso, em receptor BALB/c Nude, um oócito recuperado e submetido a maturação, fecundação e cultivo in vitro, sem contudo apresentar desenvolvimento embrionário. Nenhuma diferença foi observada nas dosagens bioquímicas mas houve diferenças nas concentração de 17 - estradiol entre as linhagens C57BL6 SCID e BALB/c Nude e seus respectivos controles. Pode-se observar que é possível ativar os folículos pré-antrais dos ovários de caprinos otimizando o aproveitamento e conservação do germoplasma de caprinos em camundongos imunossuprimidos das linhagens C57BL/6 SCID e BALB/c Nude, gonadectomizados independente do gênero.

The ovarian tissue xenotransplantation represents a promising tool to investigate the reproductive potential in different domestic mammals, however its applicability in goats still needs to be more studied. The aim of this study was to evaluate the use of transplanted goat ovarian tissue in two immunosuppressed mice (C57BL/6 SCID and BALB/c Nude). For the first experiment, ovaries of goat fetuses were collected after the slaughter of their mother, fragmented and destined to the control evaluation, to fresh xenotransplantation (XF) and xenotransplantation after cryopreservation (XC). Five recipients from each line were used for fresh xenotransplantation and 10 animals from each line for cryopreserved xenotransplantation. The recipient mice were euthanized after 65 days of post-surgery, transplants being collected for macro and microscopic assessment and blood was collected via intracardiac puncture for measurement of estradiol. For the second experiment, ovarian fragments (1.0 mm³) of six young goats were xenotransplanted immediately after harvesting to ten recipients of each lineage. After 65 days of xenotransplantation, the animals were euthanized and the transplants evaluated for macroscopic characteristics, histologic sections and oocyte development in vitro. Additionaly, blood plasma was recovered from the recipients for the quantification of estradiol levels and renal and hepatic biochemical analyzes. In the first experiment, it was observed that regardless of the lineages, all the recipients presented return to ovarian activity with complete estrous cycle after XF and 80% after XC. Follicles were observed at all stages of development and without morphological changes. The volume density and total vessel surface observed in the transplants were different (p <0.01) between the XF and XC groups. The dose of 17-estradiol in the recipients did not differ (p <0.05) between the treatments. In the second experiment, we observed preantral and antral follicles without morphological changes in the recovered transplants . Moreover, in a BALB/c Nude recipient, an oocyte recovered and submitted to maturation, fertilization and in vitro culture, without however presenting embryonic development. No differences were observed in the biochemical dosages but there were differences in 17-estradiol concentration between the C57BL6 SCID and BALB/c Nude and their respective controls. It can be concluded that it is possible to activate the preantral follicles of the ovaries of goats by optimizing the use and conservation of goat germplasm in immunosuppressed mice of the C57BL / 6 SCID and BALB / c Nude, gonadectomized and independently of gender

MODELO EXPERIMENTAL DE INFECÇÃO URINÁRIA COM IMPLANTE INTRAVESICAL EM CAMUNDONGOS (MUS MUSCULUS)

O objetivo deste trabalho foi criar um modelo experimental que possibilite a introdução de implante com ou sem agente patogênico contendo no lúmen da vesícula urinária em camundongos (Mus musculus). Foram utilizados 42 camundongos (Mus musculus) Balb/c isogênicos, fêmeas, com oito semanas de idade, peso médio de 15,34 ± 0,76 g, imunossuprimidos com metil predinisolona (200 mg/kg), anestesiados com associação de xilazina (1,5 mg/kg) e cetamina (200 mg/kg) intraperitoneal. Foram realizados três grupos associados aos implantes, Grupo controle (G1), no qual foi implantado somente cateter estéril; no grupo 2 (G2), implantou-se cateter mais 0,01 ml de suspensão com Candida tropicalis; já o grupo 3 (G3) recebeu cateter impregnado com biofilme contaminado por Candida tropicalis. Após a deposição do fragmento no interior vesical o cateter 20G foi retirado seguido da cistorrafia. Os animais foram eutanasiados com três e seis dias após o procedimento. Não houve diferença entre os grupos cirúrgicos, porém houve uma perda significativa de peso de 1,90 ± 1,33 g (p=0,0001), porém, similar entres os grupos (p=0,8320) e baixo índice de complicações (p=0,8345) no transcirúrgico. Analises histopatológicas realizadas na bexiga, apresentou lesões similares entre os grupos (p=0,8779), nos rins congestão, estenose tubular, necrose tubular, cilindros hialinos, congestão glomerular e glomerulonefrite proliferativa, somente no G3 apresentou diferença (p=0,0452) com relação à glomerulonefrite proliferativa. Em conclusão, a presente técnica de implante intravesical de fragmento de cateter para estudos de agentes causadores de infecções do trato geniturinário em Mus musculus foi eficiente devido à sua exequibilidade e aos baixos índices de complicações.

The objective of this work is to create an experimental model that allows the introduction of an implant with or without pathogen containing non-lumen of the urinary vesicle in mice. Fourteen eight-week-old isogenic Balb / c mice, mean weight of 15.34 ± 0.76 g, immunosuppressed with methyl predinisolone (200 mg / kg), anesthetized with xylation association (1.5 mg / kg) and ketamine (200 mg / kg) intraperitoneally. Three groups were associated with implants, Control group (G1), not qualified for implantation, only sterile catheter; no group 2 (G2), catheter was implanted plus 0.01 ml of suspension with Candida tropicalis; Group 3 (G3) is an indwelling catheter with biofilm contaminated with Candida tropicalis. After deposition of the non-bladder fragment, the 20G catheter was removed followed by cystorraphy. The animals were euthanized three and six days after the procedure. There was no difference between the surgical groups, but there was a significant weight loss of 1.90 ± 1.33 g (p = 0.0001), but similar to groups (p = 0.8320) and low complication rate ( p = 0.8345) non-trans-surgically. Histopathological analyzes performed in the bladder showed similar lesions between the groups (p = 0.8779), in the congestive kidneys, tubular stenosis, tubular necrosis, hyaline cylinders, glomerular congestion and proliferative glomerulonephritis, only in G3 presented difference (p = 0.0452 ) with respect to proliferative glomerulonephritis. In conclusion, a present technique of intravesical catheter fragment implantation for studies of agents causing genitourinary tract infections in Mus musculus was efficient due to its feasibility and the low rates of complications.