Susceptibilidade de Staphylococcus aureus isolados de leite cru a antibióticos comerciais / Susceptibility of Staphylococcus aureus isolated from raw milk to commercial antibiotics

O leite possui extremo valor na dieta humana e constitui um excelente substrato para o crescimento de grande diversidade de microrganismos, dentre eles o Staphylococcus aureus, frequentemente encontrado no leite cru, e que se destaca como um dos microrganismos mais prevalentes em casos de mastite bovina no mundo. Objetivou-se avaliar a sensibilidade de cepas de S. aureus isoladas de leite cru à antimicrobianos comerciais. Para isso, selecionaram-se antibióticos com base em pesquisas junto a estabelecimentos comerciais de medicamentos veterinários no município de Zé Doca, Estado do Maranhão, Brasil. Esses antibióticos foram identificados por associação à base de penicilina, estreptomicina, isoniazida e prednisolona (BPC), oxitetraciclina base (TOR), associação à base de penicilina e estreptomicina (MPP) e cloridrato de tetraciclina (TCA). Posteriormente, realizou-se contagem de Staphylococcus spp., com isolamento e identificação bioquímica das cepas de S. aureus as quais, em seguida, foram submetidas à antibiogramas com identificação de ce,pas produtoras de beta-lactamase. Os resultados demonstraram contaminação em todas as amostras por Staphylococcus spp., com contagens de 1,9 x 103 a 5,24 x 106 UFC/mL. Dentre os antibióticos testados, o TOR apresentou maior eficiência na eliminação ou redução de todas as cepas de S. aureus. Verificou-se que 50% das cepas de S. aureus isoladas produziram enzima beta-lactamase. Torna-se necessário a criação de medidas de combate ao surgimento de novas cepas bacterianas e atuação das autoridades públicas, fiscalizando a comercialização de medicamentos veterinários.

Milk is extremelly valuable to the human diet and an excellent substrate for the growth of a wide range of microorganisms, including Staphylococcus aureus, frequently found in raw milk and one of the most prevalent microorganisms in cases of bovine mastitis in the world. The objective of this study was to evaluate the sensitivity of S. aureus strains isolated from raw milk to commercial antimicrobials. For this end, antibiotics based on research were selected from commercial establishments of veterinary drugs in the municipality of Zé Doca (Maranhão State, Brazil). The antibiotics were identified by association with penicillin, streptomycin, isoniazid and prednisolone (PCB), oxytetracycline base (TOR), a combination of penicillin and streptomycin (MPP), and tetracycline hydrochloride (TCA). Subsequently, Staphylococcus spp. counting was perfomed, with isolation and biochemical identification of strains of S. aureus, which were then submitted to antibiograms with identification of beta-lactamase producing strains. The results showed contamination in all samples by Staphylococcus spp., with counts ranging from 1.9 x 103 to 5.24 x 106 CFU/mL. Among the antibiotics tested, TOR showed the highest efficiency in elimination or reduction of all S. aureus strains. We found that 50% of S. aureus strains isolated produced the enzyme beta-lactamase. It is necessary to create measures to combat the emergence of new bacterial strains and to promote action by public authorities, supervising the commercialization of veterinary drugs.

Susceptibilidade de Staphylococcus aureus isolados de leite cru a antibióticos comerciais / Susceptibility of Staphylococcus aureus isolated from raw milk to commercial antibiotics

O leite possui extremo valor na dieta humana e constitui um excelente substrato para o crescimento de grande diversidade de microrganismos, dentre eles o Staphylococcus aureus, frequentemente encontrado no leite cru, e que se destaca como um dos microrganismos mais prevalentes em casos de mastite bovina no mundo. Objetivou-se avaliar a sensibilidade de cepas de S. aureus isoladas de leite cru à antimicrobianos comerciais. Para isso, selecionaram-se antibióticos com base em pesquisas junto a estabelecimentos comerciais de medicamentos veterinários no município de Zé Doca, Estado do Maranhão, Brasil. Esses antibióticos foram identificados por associação à base de penicilina, estreptomicina, isoniazida e prednisolona (BPC), oxitetraciclina base (TOR), associação à base de penicilina e estreptomicina (MPP) e cloridrato de tetraciclina (TCA). Posteriormente, realizou-se contagem de Staphylococcus spp., com isolamento e identificação bioquímica das cepas de S. aureus as quais, em seguida, foram submetidas à antibiogramas com identificação de ce,pas produtoras de beta-lactamase. Os resultados demonstraram contaminação em todas as amostras por Staphylococcus spp., com contagens de 1,9 x 103 a 5,24 x 106 UFC/mL. Dentre os antibióticos testados, o TOR apresentou maior eficiência na eliminação ou redução de todas as cepas de S. aureus. Verificou-se que 50% das cepas de S. aureus isoladas produziram enzima beta-lactamase. Torna-se necessário a criação de medidas de combate ao surgimento de novas cepas bacterianas e atuação das autoridades públicas, fiscalizando a comercialização de medicamentos veterinários.(AU)

Milk is extremelly valuable to the human diet and an excellent substrate for the growth of a wide range of microorganisms, including Staphylococcus aureus, frequently found in raw milk and one of the most prevalent microorganisms in cases of bovine mastitis in the world. The objective of this study was to evaluate the sensitivity of S. aureus strains isolated from raw milk to commercial antimicrobials. For this end, antibiotics based on research were selected from commercial establishments of veterinary drugs in the municipality of Zé Doca (Maranhão State, Brazil). The antibiotics were identified by association with penicillin, streptomycin, isoniazid and prednisolone (PCB), oxytetracycline base (TOR), a combination of penicillin and streptomycin (MPP), and tetracycline hydrochloride (TCA). Subsequently, Staphylococcus spp. counting was perfomed, with isolation and biochemical identification of strains of S. aureus, which were then submitted to antibiograms with identification of beta-lactamase producing strains. The results showed contamination in all samples by Staphylococcus spp., with counts ranging from 1.9 x 103 to 5.24 x 106 CFU/mL. Among the antibiotics tested, TOR showed the highest efficiency in elimination or reduction of all S. aureus strains. We found that 50% of S. aureus strains isolated produced the enzyme beta-lactamase. It is necessary to create measures to combat the emergence of new bacterial strains and to promote action by public authorities, supervising the commercialization of veterinary drugs.(AU)

Tuberculose pulmonar paucibacilar em Centros de Detenção Provisória / Paucibacillary pulmonary tuberculosis in Provisional Detention Centers

Cultura de micobactérias proporciona o crescimento de bacilos viáveis, mesmo presentes em escassa quantidade e não detectados pela baciloscopia. Neste estudo foram analisadas as amostras de escarro que apresentaram baciloscopia negativa e cultura positiva. As amostras foram coletadas de 2008 a 2013, de indivíduos detidos em Centros de Detenção Provisória de Santo André, Mauá e Diadema, Estado de São Paulo. As metodologias utilizadas foram baciloscopia por coloração Ziehl-Neelsen e cultura pelo Sistema BACTEC MGIT 960 e Ogawa-Kudoh. Dos 11.529 exames realizados, 221 (1,9 %) apresentaram baciloscopias negativas e culturas positivas. Dos 221 isolados, 166 (75,1 %) pertenciam ao Complexo Mycobacterium tuberculosis, 21 (9,5 %) micobactérias não membros do Complexo Mycobacterium tuberculosis (MNT), 33 (14,9 %) Mycobaterium sp e uma cultura mista do Complexo M. tuberculosis e M. avium. MNT mais frequentes foram M. avium (23,8 %) e M. fortuitum (19,0 %). A maioria dos isolados do Complexo M. tuberculosis (155/166 - 93,4 %) foi sensível aos antimicrobianos. Sete amostras apresentaram resistência à isoniazida e uma apresentou multirresistência à isoniazida e rifampicina. Este estudo mostra a importância da realização da cultura em escarros que apresentam baciloscopia negativa no diagnóstico da TB e micobacteriose. O tratamento tardio causa a continuidade da transmissão da doença e agravamento do quadro clínico.

Culture of mycobacteria induces the growth of viable bacillus occurring in small quantity, which are no detectable by bacilloscopy. This study aimed at identifying the mycobacteria isolates from sputum presenting negative bacilloscopy and positive culture. The samples were collected from 2008 to 2013 from criminals of Provisional Detention Centers in Santo André, Mauá and Diadema/SP. Smears were stained by Ziehl-Neelsen staining and the cultures were performed by the BACTEC MGIT 960 system and Ogawa-Kudoh culture medium. Of 11,529 isolates, 221 (1.9 %) showed negative bacilloscopy and positive cultures. Of 221 isolates, 166 (75.1 %) belonged to Mycobacterium tuberculosis complex, 21 (9.5 %) were nontuberculous mycobacteria (NTM), 33 (14.9 %) Mycobacterium sp, and one identified as a mixed culture of M. tuberculosis and M. avium complex. The most common NTM species were M. avium (23.8 %) and M. fortuitum (19.0 %). Most of the isolates (155/166-93.4 %) were susceptible to antimicrobial agents. Seven samples were resistant to isoniazid, and one presented multiresistance to isoniazid and rifampicin. This study shows the importance in performing sputum culture, when these samples are negative on bacilloscopy in diagnosing TB and mycobacteriosis. The treatment delay results in the maintenance of disease transmission and worsening of clinical symptoms.

Tuberculose pulmonar paucibacilar em Centros de Detenção Provisória / Paucibacillary pulmonary tuberculosis in Provisional Detention Centers

Cultura de micobactérias proporciona o crescimento de bacilos viáveis, mesmo presentes em escassa quantidade e não detectados pela baciloscopia. Neste estudo foram analisadas as amostras de escarro que apresentaram baciloscopia negativa e cultura positiva. As amostras foram coletadas de 2008 a 2013, de indivíduos detidos em Centros de Detenção Provisória de Santo André, Mauá e Diadema, Estado de São Paulo. As metodologias utilizadas foram baciloscopia por coloração Ziehl-Neelsen e cultura pelo Sistema BACTEC MGIT 960 e Ogawa-Kudoh. Dos 11.529 exames realizados, 221 (1,9 %) apresentaram baciloscopias negativas e culturas positivas. Dos 221 isolados, 166 (75,1 %) pertenciam ao Complexo Mycobacterium tuberculosis, 21 (9,5 %) micobactérias não membros do Complexo Mycobacterium tuberculosis (MNT), 33 (14,9 %) Mycobaterium sp e uma cultura mista do Complexo M. tuberculosis e M. avium. MNT mais frequentes foram M. avium (23,8 %) e M. fortuitum (19,0 %). A maioria dos isolados do Complexo M. tuberculosis (155/166 - 93,4 %) foi sensível aos antimicrobianos. Sete amostras apresentaram resistência à isoniazida e uma apresentou multirresistência à isoniazida e rifampicina. Este estudo mostra a importância da realização da cultura em escarros que apresentam baciloscopia negativa no diagnóstico da TB e micobacteriose. O tratamento tardio causa a continuidade da transmissão da doença e agravamento do quadro clínico.(AU)

Culture of mycobacteria induces the growth of viable bacillus occurring in small quantity, which are no detectable by bacilloscopy. This study aimed at identifying the mycobacteria isolates from sputum presenting negative bacilloscopy and positive culture. The samples were collected from 2008 to 2013 from criminals of Provisional Detention Centers in Santo André, Mauá and Diadema/SP. Smears were stained by Ziehl-Neelsen staining and the cultures were performed by the BACTEC MGIT 960 system and Ogawa-Kudoh culture medium. Of 11,529 isolates, 221 (1.9 %) showed negative bacilloscopy and positive cultures. Of 221 isolates, 166 (75.1 %) belonged to Mycobacterium tuberculosis complex, 21 (9.5 %) were nontuberculous mycobacteria (NTM), 33 (14.9 %) Mycobacterium sp, and one identified as a mixed culture of M. tuberculosis and M. avium complex. The most common NTM species were M. avium (23.8 %) and M. fortuitum (19.0 %). Most of the isolates (155/166-93.4 %) were susceptible to antimicrobial agents. Seven samples were resistant to isoniazid, and one presented multiresistance to isoniazid and rifampicin. This study shows the importance in performing sputum culture, when these samples are negative on bacilloscopy in diagnosing TB and mycobacteriosis. The treatment delay results in the maintenance of disease transmission and worsening of clinical symptoms.(AU)

Method for simultaneously determining the Rifampin, Isoniazid, Pyrazinamide and Ethambutol in the combined fixed-dose tablets / Determinação simultânea de Rifampicina, Isoniazida, Pirazinamida e Etambutol em comprimidos com doses fixas combinadas

Tablets containing isoniazid, pyrazinamide, ethambutol and rifampicin are used for tuberculosis treatment, and theyare freely distributed by the Brazilian National Health System. The official analytical methods for testing those substances in fixed-dose combined tablet are described in the United States Pharmacopeia and theInternational Pharmacopoeia. None of these official compendiums refers to the methodologies forconducting the simultaneous analysis of these four drugs. This study aimedatdeveloping an analytical methodology to determine simultaneously allof four drugs in tablets for tuberculosis treatment, bymeans ofhigh performance liquid chromatography with ultraviolet-visible detector. The developed method used a chromatographic column with octadecylsilane stationary phase (250 mm x 4.6 mm x 5 m particle size). The mobile phase was aqueous (85 % ammonium formate buffer pH 5, 15 % methanol and 250 mg CuSO4.5H2O), and organic phase (methanol, 0.1 % triethylamine and 0.2 % formic acid). The flow was 1.0 mL/min, at a wavelength of 265 nm or, when the equipment allowed, a wavelength of 265 nm for isoniazid, pyrazinamide and ethambutol and 335 nm for rifampicin. The developed methodology showed satisfactory results regarding the precision parameter, with relative standard deviation lower than 2.0 % for the studied drugs.(AU)

Os comprimidos utilizados no tratamento da tuberculose possuem quatro fármacos associados, isoniazida, pirazinamida, etambutol e rifampicina, e são distribuídos gratuitamente pelo Sistema Único de Saúde. Os métodos analíticos oficiais para analisar este medicamento estão especificados na Farmacopeia Americana 36a edição e na Farmacopeia Internacional 4a edição. Porém, estes compêndios oficiais não possuem monografias para análise simultânea dos quatro fármacos. O objetivo deste estudo foi desenvolver uma metodologia para determinar simultaneamente os princípios ativos em comprimidos dose fixa combinada, utilizando-se cromatografia a líquido de alta eficiência com detector de ultravioleta-visível, pois é de grande importância para o controle da qualidade do medicamento. O método desenvolvido utilizou coluna cromatográfica C18 (250 x 4,6) mm e 5 m, fase móvel constituída de fase aquosa (85 % tampão formiato de amônio 0,3 mol/L pH 5, 15 % metanol e 0,005 mol/L de Cu2+ ou 250 mg/L de CuSO4.5H2O) e fase orgânica (metanol, 0,1 % de trietilamina e 0,2 % de ácido fórmico). O fluxo foi de 1,0 mL/min e comprimento de ondade 265 nm para isoniazida, pirazinamida e o etambutol e de 335 nm para rifampicina. Este método apresentou desvio padrão relativo inferior a 2,0 % na precisão e linearidade para os quatro fármacos estudados.(AU)

GENOTIPAGEM E PESQUISA DE RESISTÊNCIA FENOTÍPICA E GENÉTICA À RIFAMPICINA E ISONIAZIDA EM LINHAGENS DE MYCOBACTERIUM BOVIS ISOLADAS DE LINFONODOS DE BOVINOS DE ABATEDOURO NA REGIÃO CENTRO-OESTE DO ESTADO DE SÃO PAULO

A tuberculose causada por Mycobacterium bovis (bTB) é uma zoonose de distribuição mundial com ampla gama de hospedeiros. Nos países onde a bTB é prevalente, 10 a 20% dos casos de tuberculose humana são causados por M. bovis. São escassos em todo o mundo estudos que investigam a resistência à isoniazida (INH) e rifampicina (RMP) em linhagens de M. bovis de origem bovina, reservatórios silvestres, e em casos humanos de tuberculose. Foi investigada a diversidade genotípica de 67 linhagens de M. bovis isoladas de bovinos de abatedouro, obtidas de 100 linfonodos com lesão caseosa, pelas técnicas de Spoligotyping e MIRU-VNTR, bem como foi determinado o perfil fenotípico de resistência à INH e RMP pela técnica de REMA, e pesquisadas possíveis bases genéticas para resistência aos antimicrobianos. Dentre os isolados, 11 (16%) foram classificados como MDR-TB, 8 (12%) resistentes à INH e 2 (3%) resistentes à RMP. A pesquisa pelo GenoType MTBDRplus ver. 2.0 não acusou a presença de mutações em nenhum dos isolados fenotipicamente resistentes. Foram identificados 16 spoligotipos entre as linhagens. A subfamília BOV_1 predominou com 52 (77,6%) isolados, com os SIT 481, 482, 594, 665, 691, 698, 1021, 1667, 1852, 2141 e dois isolados sem shared type. A BOV_2 foi identificada em 8 (11,9%) isolados, com o SIT 683. Os SIT 982, 1851 e 1853 foram agrupados na família BOV. Dois isolados não foram classificados em família ou subfamília. A análise de MIRU-VNTR com painel de 12 MIRUs, identificou 31 isolados pertencentes ao MIT 49, um ao MIT 5 e 35 órfãos. A junção das análises de Spoligotyping e MIRU-VNTR possibilitou o agrupamento dos isolados em 12 clusters (contendo, ao todo, 46 isolados) e 21 isolados diferenciados em perfis únicos. Ressalta-se a elevada frequência de M. bovis nos linfonodos processados, e a multirresistência de certas linhagens a fármacos de primeira linha utilizados no tratamento humano da tuberculose, fato que gera preocupações em saúde pública. Futuros estudos são necessários para elucidar as bases da resistência aos fármacos e a ocorrência da diversidade genotípica em linhagens de M. bovis de origem bovina.

Tuberculosis caused by Mycobacterium bovis (bTB) is a zoonosis of worldwide distribution with broad host range. In countries where bTB is prevalent, 10-20% of the human cases of tuberculosis are caused by M. bovis. All over the world there are few studies investigating the resistance to isoniazid (INH) and rifampicin (RMP) in M. bovis strains from cattle, wild reservoirs, and human cases of tuberculosis. The genotypic diversity of 67 M. bovis strains obtained out of 100 lymph nodes with caseous lesions from slaughtered animals was investigated by Spoligotyping and MIRU-VNTR techniques, as well as the assessment of their phenotypic profile of resistance to INH and RMP by REMA method and the search of possible genetic basis for antimicrobial resistance. Among the obtained isolates, 11 (16%) were classified as MDR-TB, 8 (12%) INH-resistant and 2 (3%) RMP-resistant. The use of GenoType MTBDRplus ver. 2.0 did not pointed the presence of genetic mutations in any of the phenotypically resistant isolates. Sixteen different spoligotype patterns were identified. The BOV_1 subfamily predominated with 52 (77.6%) isolates, with SITs 481, 482, 594, 665, 691, 698, 1021, 1667, 1852, 2141 and two isolates without a given SIT. BOV_2 was identified in 8 (11.9%) isolates, within SIT 683. The SITs 982, 1851 and 1853 were grouped in BOV family. Two isolates were not classified in family or subfamily. The MIRU-VNTR analysis using the 12 classical MIRUs, identified a cluster of 31 isolates belonging to the MIT 49, one on MIT 5 and 35 orphans isolates. The combination of Spoligotyping and MIRU-VNTR analysis allowed the grouping of the isolates in 12 clusters (containing, in total, 46 isolates) and 21 isolates with unique profiles. The study highlights the high frequency of M. bovis among the sampled lymph nodes, emphasizing the impact of the pathogen as the causal agent of lymphadenitis and tuberculosis in cattle herds in the study area. In addition, points up the multidrug-resistance of M. bovis lineages to first-line drugs used in the human treatment of tuberculosis, a fact that raises public health concerns. Further studies are required to elucidate the basis of drug resistance and the occurrence of genotypic diversity in M. bovis strains.

POTENCIALIZAÇÃO DA ISONIAZIDA PELO DIMETILSULFÓXIDO (DMSO) NO TRATAMENTO DE HAMSTERS (Mesocricetus auratus), EXPERIMENTALMENTE INFECTADOS COM Mycobacterium bovis (AN5)

Resumo A tuberculose zoonótica é uma doença mundialmente distribuída, com grande importância para a saúde pública, causada pela bactéria Mycobacterium bovis. Sua resistência a algumas drogas é muito discutida baseada no tratamento e diagnóstico. Assim, objetivou-se verificar o efeito potencializador do dimetilsulfóxido (DMSO) em relação a isoniazida. Três grupos de 20 hamsters foram inoculados experimentalmente com uma estirpe de M.bovis: G1, controle; G2, tratado com isoniazida durante 30 dias após a infecção; G3, com isoniazida associada com DMSO pelo mesmo período. Todos os grupos foram sacrificados ao final do experimento. À necropsia foram colhidos fígado, pulmão, baço e rim para realização de exames histopatológicos e avaliação da intensidade das lesões, análise morfométrica de granulomas e exames microbiológicos para isolamento e quantificação do agente. O resultado dos exames histopatológicos mostrou menor intensidade das lesões e menor número de granulomas e da área ocupada pelos mesmos em fígado e pulmão dos animais do G3 em relação aos outros grupos. Ao exame microbiológico identificou-se no G3 uma diminuição na quantificação do agente, isolado dos órgãos com diferença significativa comparada ao G2. Deste modo, os resultados comprovaram a eficácia do DMSO em potencializar a ação terapêutica da isoniazida frente a uma estirpe patogênica de M.bovis, provavelmente pe

Comparative evaluation of the Nitrate Reductase Assay and the Resazurin Microtitre Assay for drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis against first line anti-tuberculosis drugs

Tuberculosis remains as a serious infection disease of worldwide distribution, with high morbidity and mortality, mainly in low socio-economic condition countries. The state of emergency of tuberculosis caused by the resistant and multidrug-resistant (MDR) strains, became the main threat to the tuberculosis treatment and control programs. A fast detection method for the resistant strains will allow the implementation of an adequate treatment and contribute for controlling the dissemination of these resistant strains. This study evaluated the performance of the nitrate reductase assay in solid (NRA-LJ) and liquid (NRA-7H9) media, to determine the susceptibility to first line anti-tuberculosis drugs: isoniazid (INH), rifampicin (RMP), ethambutol (EMB) and streptomycin (SMR). Both methods NRA-LJ and NRA-7H9 were evaluated among 18 strains with a known susceptibility profile. The resazurin microtiter assay (REMA) was performed as a reference method. One hundred percent of accordance was observed between NRA-7H9 and REMA for the four tested drugs. When the NRA-LJ method was compared to REMA, the sensitivity and the specificity to INH, RMP, EMB and SMR were 100%, 100 %, 85.7%, 76.9% and 80%, 100%, 75% and 80%, respectively. From the 57 clinical isolates of M. tuberculosis evaluated by NRA-7H9 and REMA, 56 (98.2%) were sensitive to all antibiotics tested (INH, RMP, EMB and SMR) by the NRA-7H9 method, while three of these strains were resistant to INH by REMA. One strain showed resistance to INH and RMP for both methods, and MIC of 1.0 µg/ml to INH for both methods, while MIC of 1.0 and 2.0 µg/ml to RMP for REMA and NRA-7H9, respectively. The three assays showed a high level of agreement for rapid detection of rifampicin and isoniazid resistance. Regarding rapidness, the detection of color change in the NRA method is within instants as compared to the overnight incubation required for the REMA test. NRA might represent an inexpensive and alternative assay for rapid detection of resistance in low-income countries.

A tuberculose permanece como uma séria doença infecciosa, com distribuição mundial, alta morbidade e mortalidade, ocorrendo principalmente em paises com baixa condição econômica. O estado de emergência da tuberculose causada por cepas resistentes e multirresistentes tornou-se uma importante ameaça para o tratamento e programas de controle da tuberculose. Uma rápida detecção de cepas resistentes permitirá a implantação de um tratamento adequado e contribuirá para controlar a disseminação destas cepas. Este estudo avaliou a performace do ensaio nitrato redutase em meio sólido (NRA-LJ) e meio líquido (NRA-7H9), para determinar a sensibilidade frente aos fármacos antituberculosos de primeira linha: isoniazida (INH), rifampicina (RMP), etambutol (EMB) and estreptomicina (SMR). Ambos os métodos, NRA-LJ e NRA-7H9, foram avaliados com 18 cepas com conhecido perfil de sensibilidade. O ensaio de microplaca com resazurina (REMA) foi utilizado como método de referência. A concordância observada entre NRA-7H9 and REMA foi de 100% para os quatro fármacos testados. Quando o método NRA-LJ foi comparado com o REMA, a sensibilidade e especificidade para INH RMP e SMR foram de 100%, 100%, 85,7%, 76,9% e 80%, 100%, 75% and 80%, respectivamente. Dos 57 isolados clinicos de M. tuberculosis avaliados por NRA-7H9 e REMA, 56 (98.2%) foram sensíveis a todos antibióticos testados (INH, RMP, EMB e SMR) pelo método NRA-7H9, enquanto três destas cepas foram resistentes para INH pelo REMA. Uma cepa mostrou resistência para INH e RMP por ambos os métodos, e CMI de 1,0 µg/ml para INH para ambos os métodos, enquanto CMI de 1,0 e 2,0 µg/ml para RMP pelo REMA e NRA-7H9, respectivamente. Os três ensaios mostraram um alto nível ded concordância para uma rápida detecção de resistência a rifampicina e isoniazida. Com relação à rapidez na obtenção dos resultados, a detecção na mudança de cor nos métodos NRA é imediata enquanto para o método REMA é necessário incubar overnight. Os métodos NRA podem representar uma alternativa, de baixo custo e rápida detecção de resistência, em países com poucos recursos.

Avaliação do tratamento com isoniazida em bovinos infectados naturalmente pelo Mycobacterium bovis / Evaluation of the treatment with isoniazid carried out in bovines naturally infected with Mycobacterium bovis

Foi adotado o tratamento intermitente da tuberculose com isoniazida em 240 bovinos de um rebanho naturalmente infectado pelo M. bovis. No início do tratamento 36,6% dos animais foram reagentes positivos e 2,9% inconclusivos. Todos os animais do rebanho receberam isoniazida por via oral em doses de 25mg/kg de peso vivo, administrada três vezes por semana, às segundas, quartas e sextas-feiras, durante 10 meses, perfazendo 120 doses. A cura de 98,9% dos animais tratados foi verificada por meio da dessensibilização alérgica realizada pela tuberculinização e controle bacteriológico de 39 animais abatidos. O tratamento neste rebanho não resultou em seleção de cepas resistentes a isoniazida, comprovada pelo teste de sensibilidade a essa droga, realizado em cultura de M. bovis isolada de um animal não curado.(AU)

The intermittent treatment with isoniazid was adopted in 240 bovines from a naturally infected herd. At the beginning of the treatment, 36.6% of the animals were positive reactors and 2.9% inconclusive reactors. The drug was administered orally at a dose of 25mg/kg of live weight, three times a week (on Mondays, Wednesdays and Fridays) during 10 months in a total of 120 doses. The cure of 98.9% of the treated animals was verified by the allergic desensitization demonstrated through the tuberculin test and the bacteriological control of 39 slaughtered animals. The treatment in this herd did not cause selection of isoniazid-resistant strains as demonstrated by the isoniazid sensitivity test carried out in M. bovis culture isolated from a non-cured animal.(AU)

POTENCIALIZAÇÃO DA ISONIAZIDA PELO DIMETILSULFÓXIDO (DMSO) NO TRATAMENTO DE HAMSTERS (Mesocricetus auratus), EXPERIMENTALMENTE INFECTADOS COM Mycobacterium bovis (AN5)

Resumo A tuberculose zoonótica é uma doença mundialmente distribuída, com grande importância para a saúde pública, causada pela bactéria Mycobacterium bovis. Sua resistência a algumas drogas é muito discutida baseada no tratamento e diagnóstico. Assim, objetivou-se verificar o efeito potencializador do dimetilsulfóxido (DMSO) em relação a isoniazida. Três grupos de 20 hamsters foram inoculados experimentalmente com uma estirpe de M.bovis: G1, controle; G2, tratado com isoniazida durante 30 dias após a infecção; G3, com isoniazida associada com DMSO pelo mesmo período. Todos os grupos foram sacrificados ao final do experimento. À necropsia foram colhidos fígado, pulmão, baço e rim para realização de exames histopatológicos e avaliação da intensidade das lesões, análise morfométrica de granulomas e exames microbiológicos para isolamento e quantificação do agente. O resultado dos exames histopatológicos mostrou menor intensidade das lesões e menor número de granulomas e da área ocupada pelos mesmos em fígado e pulmão dos animais do G3 em relação aos outros grupos. Ao exame microbiológico identificou-se no G3 uma diminuição na quantificação do agente, isolado dos órgãos com diferença significativa comparada ao G2. Deste modo, os resultados comprovaram a eficácia do DMSO em potencializar a ação terapêutica da isoniazida frente a uma estirpe patogênica de M.bovis, provavelmente pe

HPLC identification of isoniazid residues in bovine milk

The high pressure liquid chromatography (HPLC) was used for the identification of isoniazid (isonicotinic acid hydrazide) in the milk of cattle treated with a dose of 25 mg/kg/day in alternated days. The effect of milk pasteurization on the isoniazid residue concentration was also studied. The drug excretion presented a cyclic variation, with higher levels in the first day after administration (aa), a mean of 1104.48µg/l, and a decrease two days aa, with a mean of 104.12µg/l. Four days after the last administration of the drug it was not possible to identify residues of isoniazid in the milk of treated animals. Body weight and milk yield influenced the amount of the excreted drug, and pasteurization decreased (mean 47.07%) the concentration of isoniazid residue in milk.

Cromatografia líqüida de alta eficiência (HPLC) foi utilizada na identificação de isoniazida (hidrazida do ácido isonicotínico) no leite de bovinos tratados com a dose de 25 mg/kg/dia em dias alternados. Também foi verificado o efeito da pasteurização sobre a concentração residual de isoniazida no leite. A excreção da droga no leite apresentou variação cíclica com picos no primeiro dia após a administração da droga, média de 1104,48µg/l, e queda dois dias após, média de 104,12µg/l. Quatro dias após a última administração da droga não foi mais possível a identificação de resíduos de isoniazida no leite. Observou-se influência do peso corporal e da produção de leite sobre a quantidade da droga excretada. A pasteurização diminuiu, em média 47,07%, a concentração de resíduo de isoniazida no leite.

Effects of Solanum lycopersicum L. (tomato) against isoniazid and rifampicin induced hepatotoxicity in wistar albino rats

Abstract Anti-tuberculosis drugs are reported to cause hepatotoxicity, which varies from asymptomatic rise of the hepatic enzymes. Hepatoprotective plants plays important role to protect liver. This study investigated the hepatoprotective potential of the Solanum lycopersicum in rats intoxicated with Isoniazid and Rifampicin (INH+RIF) to induce hepatotoxicity. Thirty wistar albino rats were divided into five groups of six animals each. Group 1 rats were kept control while groups II, III, IV and V were administered with INH+RIF (75+150 mg/kg) orally, for seven consecutive days. For treatment, rats in group III received silymarin while animals in group IV and V were provided with 40 mg/kg and 80 mg/kg of Solanum lycopersicum extract, respectively. On day 0 and 8th blood samples were collected for the analysis of hepatic biomarkers. The data were subjected to one-way ANOVA and Bonferronis post hoc test for statistical analysis. Hepatotoxicity induced by INH+RIF resulted in significant elevation of serum hepatic enzymes including Aspartate aminotransferase (AST), Alanine aminotransferase (ALT), Alkaline phosphatase (ALP), and total bilirubin while decreased the albumin level. The Solanum lycopersicum at dose of 80 mg/kg significantly reduced the hepatic enzymes AST, ALT, ALP and bilirubin while the albumin level was significantly increased. The treatment had non-significant effect on body and liver weight. Drug induced hepatotoxicity can be effectively treated with Solanum lycopersicum at 80 mg/kg dose.

Resumo As drogas antituberculose são relatadas como causadoras de hepatotoxicidade, ocasionando o aumento assintomático das enzimas hepáticas. As plantas hepatoprotetoras desempenham um papel importante na proteção do fígado. Este estudo investigou o potencial hepatoprotetor de Solanum lycopersicum em ratos que foram intoxicados com isoniazida e rifampicina (INH + RIF) para induzir hepatotoxicidade. Trinta ratos wistar albinos foram divididos em cinco grupos de seis animais cada. Os ratos do grupo 1 representaram o grupo controle, enquanto os ratos dos grupos II, III, IV e V receberam INH + RIF (75 + 150 mg/kg) por via oral, por sete dias consecutivos. Para o tratamento, os ratos do grupo III receberam silimarina, enquanto os animais do grupo IV e V receberam 40 mg/kg e 80 mg/kg de extrato de S. lycopersicum, respectivamente. Nos dias 0 e 8, foram coletadas amostras de sangue para análise de biomarcadores hepáticos. Os dados foram submetidos a teste unilateral (ANOVA) e post hoc de Bonferroni para análise estatística. A hepatotoxicidade induzida por INH + RIF resultou em elevação significativa das enzimas hepáticas séricas, incluindo aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT), fosfatase alcalina (ALP) e bilirrubina total, enquanto houve a diminuição do nível de albumina. O S. lycopersicum, na dose de 80 mg / kg, reduziu significativamente as enzimas hepáticas AST, ALT, ALP e bilirrubina, enquanto o nível de albumina aumentou de forma significativa. O tratamento não teve efeito significativo no peso corporal e hepático. A hepatotoxicidade induzida por drogas pode ser tratada de forma eficaz com S. lycopersicum na dose de 80 mg/kg.

Searching tuberculosis cases in a psychiatric hospital: importance of laboratory diagnosis / Importância do diagnóstico laboratorial na busca de casos de tuberculose em um hospital psiquiátrico

From February to August of 2002, the search for M. tuberculosis was performed among 74 inpatients from the Psychiatric Hospital of Goiás - Brazil. Mycobacteria were isolated from five (6.8%) patients, being four M. tuberculosis isolates and one M. chelonae. M. chelonae positive result on baciloscopy was observed in a sputum sample only. M. tuberculosis was isolated culture of clinical specimens from four smearnegative patients. Mycobacteria species were identified by means of conventional methods, mycolic acids analysis, and PCR technique. The most specific and sensitive method - PCR detected M. tuberculosis on a culture and M. chelonae was only identified by means of conventional methods. According to drug susceptibility profiles, all of four M. tuberculosis isolates were susceptible to isoniazid and riphampicin.

Durante o período de fevereiro a agosto de 2002, a pesquisa de M. tuberculosis foi realizada entre 74 internos de um Hospital Psiquiátrico no interior do Estado de Goiás - Brasil. Micobactérias foram isoladas de cinco (6,8 %) dos pacientes analisados, sendo identificados quatro Mycobacterium tuberculosis e um Mycobacterium chelonae. A baciloscopia foi positiva apenas para a amostra de escarro contendo M. chelonae. O cultivo possibilitou o isolamento de M. tuberculosis a partir de espécimes clínicos de quatro pacientes com baciloscopia negativa. As micobactérias foram identificadas por meio de metodologia clássica, análise de ácidos micólicos e biologia molecular (PCR). A técnica de PCR, por tratar-se de um método mais sensível e específico, detectou M. tuberculosis em uma cultura em que apenas M. chelonae foi identificado por meio de técnicas convencionais. Os quatro isolados de M. tuberculosis foram sensíveis a isoniazida e rifampicina no método das proporções de sensibilidade as drogas, empregado neste trabalho.

Influence of Mycobacterium tuberculosis cultures quality conditions on negative results on pyrazinamidase testing / Influência da qualidade das culturas de Mycobacterium tuberculosis nos resultados negativos dos testes da pirazinamidase

The pyrazinamidase is a fast and easy to perform assay, recommended by the World Health Organization as an alternative technique to determine pyrazinamide resistant Mycobacterium tuberculosis strains. This study aimed to assess the reproducibility of negative results on pyrazinamidase assay using both primary cultures and respective subcultures, and to correlate them with original cultures quality, as well as their susceptibility profile to streptomycin (S), isoniazid (I), rifampin (R) and ethambutol (E). A total of 115 Mycobacterium tuberculosis cultures were analyzed, which the original growth produced negative results on pyrazinamidase assay, implying a resistance to pyrazinamide. The cultures quality was assessed and recorded; a second testing was performed using recent and abundant subcultures. Results from the first and the second tests demonstrated an agreement rate of 72.2%, and the cultures quality showed correlation with the results (p 0.001). Pyrazinamidase testing is useful when it is combined with other techniques for analyzing mycobacteria susceptibility to S, I, R, E since it is performed with high quality cultures which allow the use of abundant inocula.

 A Organização Mundial da Saúde recomenda o uso do teste da pirazinamidase (PZAse) como método alternativo para determinação da resistência do Mycobacterium tuberculosis à pirazinamida, por ser um teste rápido e de fácil execução. Foram objetivos deste estudo: verificar a reprodutibilidade dos resultados negativos do teste da pirazinamidase quando realizado a partir das culturas originais e de seus subcultivos e relacioná-los com a qualidade das culturas originais e com os perfis de suscetibilidade à estreptomicina (S), isoniazida (I), rifampicina (R) e etambutol (E). Foram analisadas 115 culturas de Mycobacterium tuberculosis cujos cultivos originais apresentaram resultados negativos no teste da PZAse, o que representa resistência à pirazinamida. A qualidade das culturas foi avaliada, anotada e um segundo teste foi realizado a partir de subcultivos jovens e abundantes. A concordância entre os resultados do primeiro e do segundo teste foi de 72,2% e a qualidade das culturas mostrou correlação com os resultados (p 0,001). O teste da pirazinamidase é útil quando utilizado juntamente com técnicas de detecção de suscetibilidade às drogas S, I, R, E, desde que seja realizado a partir de cultivos com boa qualidade, que permitam a utilização de inóculo abundante. 

Effects of Solanum lycopersicum L. (tomato) against isoniazid and rifampicin induced hepatotoxicity in wistar albino rats / Efeitos de Solanum lycopersicum L. (tomate) contra hepatotoxicidade induzida por isoniazida e rifampicina em ratos albinos wistar

Anti-tuberculosis drugs are reported to cause hepatotoxicity, which varies from asymptomatic rise of the hepatic enzymes. Hepatoprotective plants plays important role to protect liver. This study investigated the hepatoprotective potential of the Solanum lycopersicum in rats intoxicated with Isoniazid and Rifampicin (INH+RIF) to induce hepatotoxicity. Thirty wistar albino rats were divided into five groups of six animals each. Group 1 rats were kept control while groups II, III, IV and V were administered with INH+RIF (75+150 mg/kg) orally, for seven consecutive days. For treatment, rats in group III received silymarin while animals in group IV and V were provided with 40 mg/kg and 80 mg/kg of Solanum lycopersicum extract, respectively. On day 0 and 8th blood samples were collected for the analysis of hepatic biomarkers. The data were subjected to one-way ANOVA and Bonferroni's post hoc test for statistical analysis. Hepatotoxicity induced by INH+RIF resulted in significant elevation of serum hepatic enzymes including Aspartate aminotransferase (AST), Alanine aminotransferase (ALT), Alkaline phosphatase (ALP), and total bilirubin while decreased the albumin level. The Solanum lycopersicum at dose of 80 mg/kg significantly reduced the hepatic enzymes AST, ALT, ALP and bilirubin while the albumin level was significantly increased. The treatment had non-significant effect on body and liver weight. Drug induced hepatotoxicity can be effectively treated with Solanum lycopersicum at 80 mg/kg dose.

As drogas antituberculose são relatadas como causadoras de hepatotoxicidade, ocasionando o aumento assintomático das enzimas hepáticas. As plantas hepatoprotetoras desempenham um papel importante na proteção do fígado. Este estudo investigou o potencial hepatoprotetor de Solanum lycopersicum em ratos que foram intoxicados com isoniazida e rifampicina (INH + RIF) para induzir hepatotoxicidade. Trinta ratos wistar albinos foram divididos em cinco grupos de seis animais cada. Os ratos do grupo 1 representaram o grupo controle, enquanto os ratos dos grupos II, III, IV e V receberam INH + RIF (75 + 150 mg/kg) por via oral, por sete dias consecutivos. Para o tratamento, os ratos do grupo III receberam silimarina, enquanto os animais do grupo IV e V receberam 40 mg/kg e 80 mg/kg de extrato de S. lycopersicum, respectivamente. Nos dias 0 e 8, foram coletadas amostras de sangue para análise de biomarcadores hepáticos. Os dados foram submetidos a teste unilateral (ANOVA) e post hoc de Bonferroni para análise estatística. A hepatotoxicidade induzida por INH + RIF resultou em elevação significativa das enzimas hepáticas séricas, incluindo aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT), fosfatase alcalina (ALP) e bilirrubina total, enquanto houve a diminuição do nível de albumina. O S. lycopersicum, na dose de 80 mg / kg, reduziu significativamente as enzimas hepáticas AST, ALT, ALP e bilirrubina, enquanto o nível de albumina aumentou de forma significativa. O tratamento não teve efeito significativo no peso corporal e hepático. A hepatotoxicidade induzida por drogas pode ser tratada de forma eficaz com S. lycopersicum na dose de 80 mg/kg.

Redução do período de tratamento da tuberculose bovina com associação de estreptomicina, isoniazida e dimetilsulfóxido

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