Molecular characterization and association of lactoferrin gene to subclinical mastitis in goats (Capra hircus)

The study characterized the lactoferrin (Lf) mRNA gene in different goat breeds in the Philippines and determined its association with subclinical mastitis (SCM). The study involved collection of milk at second week of lactation (n=75) and blood samples (n=5) to obtain extracted RNA and using cDNA to amplify Lf gene through polymerase chain reaction. The nucleotide and amino acid sequences were determined and used as reference in the evaluation of phylogenetic relationship. Amplified products were utilized for RFLP analysis before determining the association of the gene with SCM. Results of the study demonstrated that Lf gene in goats registered a molecular weight of 2135. Nucleotide and amino acid sequence of Lf gene revealed high similarity (99%) in Saanen, Anglo-Nubian and Philippine native goats with that of Capra hircus (U53857) Lf gene submitted to GenBank. Phylogenetic studies showed that Lf gene of Anglo-Nubian, Saanen and Native goats clade together with Lf gene of C. hircus (U53857). Three genotypes in goats were documented using the restriction enzymes AluI and HaeIII. Based on the Statistical analysis, association (comp 5.65, p = 0.0308) has been established between the Lf genes of goats with genotype BB to SCM using HaeIII restriction enzyme.(AU)

Can intramammary infections change immunoglobulins and acute phase proteins of colostrum and transition milk in dairy goats? / A infecção intramamária pode alterar imunoglobulinas e proteínas de fase aguda do colostro e do leite de transição de cabras leiteiras?

Proteiongram analysis is useful for the early diagnosis of intramammary infections during the period of colostrogenesis. This study aimed to evaluate the profile of total proteins, immunoglobulins, lactoferrin, and gamma-glutamyl transferase (GGT) in the colostrum of dairy goats with intramammary infections. Animals were divided in groups: GI (n=12) of goats without mammary gland infections, and GII (n=8) of goats with mammary gland infections. Intramammary infections were diagnosed using microbiological isolations and somatic cell counts Cs). Total protein was evaluated in the samples using SDS-PAGE shortly after parturition, and 24 and 48 hours after that event. Non-aureus Staphylococcus (NAS) were detected all isolates. At 48 h, GII had high IgG levels and a SCC of 1660.25 x 103/mL. Levels of total protein were high in this group at 24 and 48 h. Albumin levels were high in goats with mastitis at 24 h. Overall, the IgG, lactoferrin, and albumin levels differed between animals with and without intramammary infections at M0. GGT activity was not influenced by the intramammary infection. The results of this study reinforce the importance of the proteinogram as an auxiliary tool in the diagnosis of mastitis in dairy goats.

O proteinograma do colostro/leite pode ser útil para diagnóstico precoce de infecções intramamárias, assim como para a avaliação da intensidade da resposta inflamatória. Este estudo teve como objetivo avaliar o perfil de proteínas, imunoglobulinas, lactoferrina e gamaglutamiltransferase no colostro de cabras leiteiras portadoras s de infecções intramamárias. Os animais foram distribuídos em dois grupos, GI (n 12), composto por cabras sem isolamento microbiológico das glândulas mamárias, e GII (n 8), composto por cabras com resultados positivos na cultura do leite de pelo menos uma das glândulas mamárias. O diagnóstico de infecção intramamária foi realizado logo após o parto, por meio de isolamento microbiológico e de contagem de células somáticas (CCS). Os níveis de proteína total, imunoglobulina A (IgA), imunoglobulina (G) (IgG), lactoferrina, albumina e atividade da gamaglutamiltransferase (GGT) foram avaliados em amostras de colostro/leite de transição, usando-se SDS-PAGE logo após o parto bem como às 24 e às 48 horas após esse evento. Staphylococcus não aureus (NAS) foram encontrados em todos os isolamentos. A concentração de IgG de 186 foi superior no GII apenas às 48h, ao mesmo tempo em que o CCS foi de 1660,25 x 10/mL. No entanto, a proteína total foi maior neste grupo às 24 e às 48h. A albumina foi maior nas cabras com mastite às 24h, e a lactoferrina no momento 0h (M0) e às 48h. Em geral, os valores de IgG, lactoferrina e albumina diferiram entre os animais com e sem infecções intramamárias no M0. A atividade da gamaglutamiltransferase não foi influenciada pela infecção intramamária. Os resultados deste estudo reforçam a importância do proteinograma como uma ferramenta auxiliar no diagnóstico da mastite em cabras leiteiras.

Lactoferrin, chitosan and Melaleuca alternifolia-natural products that show promise in candidiasis treatment

Abstract The evolution of microorganisms resistant to many medicines has become a major challenge for the scientific community around the world. Motivated by the gravity of such a situation, the World Health Organization released a report in 2014 with the aim of providing updated information on this critical scenario. Among the most worrying microorganisms, species from the genus Candida have exhibited a high rate of resistance to antifungal drugs. Therefore, the objective of this review is to show that the use of natural products (extracts or isolated biomolecules), along with conventional antifungal therapy, can be a very promising strategy to overcome microbial multiresistance. Some promising alternatives are essential oils of Melaleuca alternifolia (mainly composed of terpinen-4-ol, a type of monoterpene), lactoferrin (a peptide isolated from milk) and chitosan (a copolymer from chitin). Such products have great potential to increase antifungal therapy efficacy, mitigate side effects and provide a wide range of action in antifungal therapy.

Lactoferrin, chitosan and Melaleuca alternifolia-natural products that show promise in candidiasis treatment

The evolution of microorganisms resistant to many medicines has become a major challenge for the scientific community around the world. Motivated by the gravity of such a situation, the World Health Organization released a report in 2014 with the aim of providing updated information on this critical scenario. Among the most worrying microorganisms, species from the genus Candida have exhibited a high rate of resistance to antifungal drugs. Therefore, the objective of this review is to show that the use of natural products (extracts or isolated biomolecules), along with conventional antifungal therapy, can be a very promising strategy to overcome microbial multiresistance. Some promising alternatives are essential oils of Melaleuca alternifolia (mainly composed of terpinen-4-ol, a type of monoterpene), lactoferrin (a peptide isolated from milk) and chitosan (a copolymer from chitin). Such products have great potential to increase antifungal therapy efficacy, mitigate side effects and provide a wide range of action in antifungal therapy.(AU)

Influência da mastite nas frações eletroforéticas do colostro de vacas da raça Holandesa / Influence of mastitis on electrophoretic fractions of colostrum from Holstein cows

O objetivo desse estudo foi o de avaliar as frações proteicas em secreções colostrais de vacas acometidas por mastite clínica imediatamente após o parto. Para tanto, foram utilizadas 30 vacas da raça Holandesa distribuídas em três grupos, a saber: Grupo I (GI)- 10 vacas pluríparas sadias, Grupo II (GII) 10 vacas pluríparas que pariram com mastite assintomática e Grupo III (GIII) 10 vacas pluríparas que pariram com mastite clínica. Foram avaliadas as concentrações de imunoglobulina a (IgA), lactoferrina (LF), albumina, imunoglobulina G (IgG), ß-lactoglobulina (ß-Lg) e α-lactoalbumina (α-La) por meio da eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE).Observou-se que a IgG, LF e a albumina variaram entre as glândulas com mastite assintomática e clínica quando comparadas às glândulas sadias, e que a presença de um único microrganismo é capaz de promover alterações no proteinograma, com ou sem manifestações clínicas na glândula mamária.(AU)

The aim of this study was to evaluate the protein fractions in colostral secretions of cows affected by mastitis immediately after calving. Therefore, 30 Holstein cows were divided into three groups: Group I (GI) composed of ten multiparous cows calving without mastitis; Group II (GII) composed of ten multiparous cows calving with subclinical mastitis, and Group III (GIII) composed of ten multiparous cows calving with mastitis. The concentration of immunoglobulin A (IgA), lactoferrin (LF), albumin, immunoglobulin G (IgG), ß-lactoglobulin (ß-Lg) and α-lactoalbumin (α-La) was determined by sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). It was found that the IgG, LF and albumin vary among glands of subclinical and clinical mastitis and healthy and that the presence of a bacteria in the mammary gland was the key role for changing of the pattern of serum protein source.(AU)

Influência da mastite nas frações eletroforéticas do colostro de vacas da raça Holandesa / Influence of mastitis on electrophoretic fractions of colostrum from Holstein cows

O objetivo desse estudo foi o de avaliar as frações proteicas em secreções colostrais de vacas acometidas por mastite clínica imediatamente após o parto. Para tanto, foram utilizadas 30 vacas da raça Holandesa distribuídas em três grupos, a saber: Grupo I (GI)- 10 vacas pluríparas sadias, Grupo II (GII) 10 vacas pluríparas que pariram com mastite assintomática e Grupo III (GIII) 10 vacas pluríparas que pariram com mastite clínica. Foram avaliadas as concentrações de imunoglobulina a (IgA), lactoferrina (LF), albumina, imunoglobulina G (IgG), ß-lactoglobulina (ß-Lg) e α-lactoalbumina (α-La) por meio da eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE).Observou-se que a IgG, LF e a albumina variaram entre as glândulas com mastite assintomática e clínica quando comparadas às glândulas sadias, e que a presença de um único microrganismo é capaz de promover alterações no proteinograma, com ou sem manifestações clínicas na glândula mamária.(AU)

The aim of this study was to evaluate the protein fractions in colostral secretions of cows affected by mastitis immediately after calving. Therefore, 30 Holstein cows were divided into three groups: Group I (GI) composed of ten multiparous cows calving without mastitis; Group II (GII) composed of ten multiparous cows calving with subclinical mastitis, and Group III (GIII) composed of ten multiparous cows calving with mastitis. The concentration of immunoglobulin A (IgA), lactoferrin (LF), albumin, immunoglobulin G (IgG), ß-lactoglobulin (ß-Lg) and α-lactoalbumin (α-La) was determined by sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). It was found that the IgG, LF and albumin vary among glands of subclinical and clinical mastitis and healthy and that the presence of a bacteria in the mammary gland was the key role for changing of the pattern of serum protein source.(AU)

Lactoferrin and immunoglobulin G concentration in bovine milk from cows with subclinical mastitis during the late lactation period

Background: Lactoferrin and immunoglobulin G in milk have an important role in udder resistance to infection in the involution period. Both proteins express antimicrobial activity- lactoferrin by the binding and sequestration of iron ion; and immunoglobulin G by complement activation, bacterial opsonization and agglutination. Many factors affect lactoferrin and immunoglobulin G concentrations in bovine milk, such as the stage of lactation, milk production, and intramammary infections. The aim of this study was to determine concentrations of lactoferrin and immunoglobulin G in milk from healthy cows and subclinical mastitic cows during the late lactation period, and to evaluate the relationship between them. Materials, Methods & Results: A total of 150 quarter milk samples from 41 cows (Holstein-Friesian breed) in late lactation period were reviewed in this study. Milk samples were collected during morning milking, using aseptic techniques in sterile test tubes. From each sample, 0.1 mL of milk was plated on Columbia blood agar base with 5% defibrinated ovine blood, MacConkey agar and Sabouraud dextrose agar and incubated for 24 h - 48 h (bacteria) and 5 days (yeasts, mould) at 37oC. Milk samples for detection lactoferrin and immunoglobulin G concentration were skimmed at 1,400 g for 45 min and stored at -20C until analysis. Lactoferrin concentration in bovine milk was [...](AU)

Lactoferrin and immunoglobulin G concentration in bovine milk from cows with subclinical mastitis during the late lactation period

Background: Lactoferrin and immunoglobulin G in milk have an important role in udder resistance to infection in the involution period. Both proteins express antimicrobial activity- lactoferrin by the binding and sequestration of iron ion; and immunoglobulin G by complement activation, bacterial opsonization and agglutination. Many factors affect lactoferrin and immunoglobulin G concentrations in bovine milk, such as the stage of lactation, milk production, and intramammary infections. The aim of this study was to determine concentrations of lactoferrin and immunoglobulin G in milk from healthy cows and subclinical mastitic cows during the late lactation period, and to evaluate the relationship between them. Materials, Methods & Results: A total of 150 quarter milk samples from 41 cows (Holstein-Friesian breed) in late lactation period were reviewed in this study. Milk samples were collected during morning milking, using aseptic techniques in sterile test tubes. From each sample, 0.1 mL of milk was plated on Columbia blood agar base with 5% defibrinated ovine blood, MacConkey agar and Sabouraud dextrose agar and incubated for 24 h - 48 h (bacteria) and 5 days (yeasts, mould) at 37oC. Milk samples for detection lactoferrin and immunoglobulin G concentration were skimmed at 1,400 g for 45 min and stored at -20C until analysis. Lactoferrin concentration in bovine milk was [...]

Compostos bioativos no tratamento de lesões inflamatórias na produção animal

O aumento da produção animal voltado à produção de bens de consumo acarreta problemas relacionados com a sustentabilidade, bem-estar animal e queda de produção provenientes de sistemas mal manejados. O uso de compostos bioativos no tratamento de doenças inflamatórias e reincidentes: mastite em cabras leiteiras e úlceras de decúbito em coelhos, foram objetos de estudo deste trabalho. O cravo-da-índia no tratamento tópico das úlceras calcaneres em coelhos, demonstrou resultados satisfatórios quanto aos processos de regeneração celular e ação antioxidante sobre as lesões inflamatórias. O tratamento preventivo da mastite em cabras leiteiras, com base no uso de lactoferrina bovina intramamária, foi significativo quanto à diminuição de infecções mamárias e melhora na qualidade do leite. A administração de cravo-da-índia e lactoferrina bovina como compostos ativos dos tratamentos tópicos foram eficientes e demonstraram boa relação custo/benefício em substituição aos tratamentos antimicrobianos e antiinflamatórios convencionais.

The increase in animal production for consumer goods production brings problems of sustainability, animal welfare and low production from poorly maintained systems. The use of bioactive compounds in the treatment of inflammatory and re-incident diseases: mastitis in dairy goats and decubitus ulcers in rabbits, were objects of study of this research. The use of clove in the topical treatment of leg ulcers in rabbits demonstrated satisfactory results regarding the processes of cell regeneration and antioxidant action on inflammatory lesions. Preventive treatment of mastitis in dairy goats based on the use of intramammary bovine lactoferrin was significant in terms of reducing breast infections and improving milk quality. The administration of clove and bovine lactoferrin as active compounds of topical treatments were efficient and demonstrated good cost-benefit ratio to replace conventional treatments.

Diversidade genética de receptores de lactoferrina e transferrina em Moraxella bovis e Moraxella bovoculi

A ceratoconjuntivite infecciosa bovina (CIB) é a doença ocular de maior relevância em bovinos e os principais agentes etiológicos associados são Moraxella bovis e Moraxella bovoculi. Para o controle desta doença a vacinação é imprescindível, entretanto, as vacinas atualmente disponíveis apresentam baixa eficiência. Espécies de Moraxella possuem sistemas capazes de extrair ferro a partir de glicoproteínas compostos por uma proteína integral da membrana externa, as proteínas de ligação à lactoferrina ou transferrina A (LbpA ou TbpA), e uma lipoproteína de superfície, as proteínas de ligação à lactoferrina ou transferrina B (LbpB ou TbpB). Imunização com antígenos derivados desses receptores demonstraram grande capacidade em prevenir infecções, porém, não existem estudos sobre a diversidade genética desses receptores e tampouco foram investigados como potenciais compostos vacinais. Neste contexto, esta tese foi elaborada visando investigar a diversidade genética das proteínas TbpA e TbpB de M. bovis e M. bovoculi (manuscrito 1) e a diversidade genética de LbpA e o desenvolvimento de antígenos híbridos (manuscrito 2). Para o manuscrito 1, 37 sequências de M. bovis e M. bovoculi foram utilizadas, sendo traduzidas para aminoácidos e alinhadas. Posteriormente, árvores filogenéticas foram geradas, e os alinhamentos mapeados nas estruturas preditas das proteínas. As sequências de TbpB foram separadas por espécies e mostraram-se mais variáveis que as de TbpA. Também, foram selecionadas duas cepas representativas de TbpB que provavelmente são capazes de cobrir toda a variabilidade encontrada nessas cepas. No manuscrito 2, análise semelhante foi realizada com trinta e seis sequências de LbpA, além disso, foram construídos cinco antígenos híbridos utilizando quatro combinações diferentes dos loops de LbpA em um esqueleto da lipoproteína de superfície de Vibrio cholerae (VcSLP). LbpA mostrou-se bastante conservada, inclusive em toda sua estrutura. Os antígenos híbridos foram expressos em pequena escala de forma eficiente e apresentaram potencial para serem produzidos em grande escala e analisados como antígenos vacinais. Em conclusão, foi demonstrado em dois estudos diferentes a diversidade de TbpA, TbpB e LbpA e as abordagens que podem ser feitas para produzir antígenos vacinais a partir destas proteínas pensando em abranger toda diversidade genética destes receptores em ambas as espécies.

Infectious bovine keratoconjunctivitis (IBK) is the most important eye disease in cattle, which has a great economic impact due to eye injuries and loss of vision, resulting in pain, reduced milk production, and decreased weight gain. The main etiological agents associated with IBK are Moraxella bovis (M. bovis) and Moraxella bovoculi (M. bovoculi). Vaccination is essential for the disease control; however, currently available vaccines may present limited efficiency. Moraxella spp. have systems capable of extracting iron from the host glycoproteins named lactoferrin and transferrin. Each receptor is composed of an integral outer membrane protein, named lactoferrin or transferrin binding protein A (LbpA or TbpA), and of exposed surface lipoprotein, named lactoferrin or transferrin binding protein B (LbpB or TbpB). These receptors are known to be functionally and genetically related and are known for being essential in the maintenance of pathogens on the mucosal surface leading to disease development. Studies involving immunization with antigens derived from these receptors demonstrate a great capacity to prevent infection, as well as to eliminate colonization of the upper respiratory tract. A great potential of these receptors as vaccine antigens is expected due to their privileged position on the cell surface, and their presumed ubiquity in all isolates of Moraxella spp. However, to date, there have been no studies on the diversity of the pathogens responsible for IBK, or they have been investigated as potential vaccine compounds. In this context, this thesis was designed to investigate the genetic diversity and its distribution in the structure of TbpA and TbpB proteins of M. bovis and M. bovoculi (manuscript 1) and the diversity of LbpA, as well as the development of hybrid antigens (manuscript 2). For manuscript 1, DNA sequences of thirty-seven M. bovis and M. bovoculi strains were translated into amino acids to build phylogenetic trees for each protein. The alignments were then mapped on the predicted structures of the proteins. In the phylogenetic analysis, TbpB sequences were separated by species and more variable than TbpA. Also, two representative strains of TbpB were selected that are likely to be able to cover all the variability found in these strains. In manuscript 2, a similar analysis was performed with thirty-six LbpA sequences, and five hybrid antigens were constructed using four different combinations of LbpA loops in a scaffold of the surface lipoprotein from Vibrio cholerae (VcSLP). LbpA was very conserved also throughout its whole structure. Hybrid antigens were expressed on a small scale efficiently and had the potential to be large scaled for analysis of immunogenicity and cross-reactivity as vaccine antigens. In conclusion, it was demonstrated in two different studies the diversity of TbpA, TbpB, and LbpA and the approaches that can be taken to produce vaccine antigens derived from these proteins intending to cover all the genetic diversity of the species

ASPECTOS CLÍNICO-LABORATORIAIS E SONOGRÁFICOS NO DIAGNÓSTICO COMPLEMENTAR DE LESÕES FIBRÓTICAS EM PARÊNQUIMA MAMÁRIO DE FÊMEAS OVINAS

O presente estudo avaliou 27 fêmeas ovinas e suas glândulas mamárias, no 60º dia de lactação. Os objetivos foram a detecção de alterações nas concentrações das proteínas do soro lácteo, contagem de células somáticas frente à mastite crônica e subclínica de ocorrência natural, bem como o possível uso da elastografia por impulso de força de radiação acústica (ARFI) como diagnóstico de mastite em glândulas com parênquima fibrosado. Os grupos experimentais foram divididos de acordo com a CCS em: GC com CCS < 500.000 cls/ml sem fibrose em parênquima; Baixa contagem de células somáticas (CB) com CCS < 500.000 cls/ml e presença de fibrose na glândula; CA com CCS > 500.000 cls/ml e presença de fibrose. Para a análise das proteínas e CCS, foram utilizadas 48 amostras de soro lácteo. A CCS obtida nos três grupos apresentou valores médios de 136,63 x 103 ± 98,09 cls/ml, 122,06 x 103 ± 94,83 cel/ml e 3.979,55 x 103 ± 2943,81 cls/ml. Através do método SDS-PAGE, foi possível identificar seis proteínas: Lactoferrina, Albumina Sérica, IgG Pesada, IgG Leve, -lactoglobulina e -lactoalbumina. Através da comparação entre grupos, notou-se aumento da Lactoferrina entre GC e CA, aumento da albumina sérica entre CB e CA e aumento da IgG de cadeia pesada entre GC e CA, bem como entre CB e CA. Acredita-se que o valor limite de CCS em 500.000 cls/ml seja seguro para a detecção de mastites subclínicas. O aumento da albumina sérica e IgG de cadeia pesada em animais que possuem lesões no parênquima e CCS alta, quando comparados aos demais grupos pode indicar a presença de mastite. Não houve diferenças na composição proteica avaliada que diferenciasse glândulas sadias de fibrosas, dentro da mesma faixa de CCS. Cabe ressaltar que há a necessidade de estudos avaliando outros componentes lácteos, bem como compará-los ao grau de fibrose da glândula. O parênquima mamário e linfonodos também foram submetidos à ultrassonografia em modo-B, com posterior elastografia ARFI, obtendo-se variáveis qualitativas (ecogenicidade e ecotextura) e quantitativas (velocidade de cisalhamento, profundidade e proporção eixo curto/longo) de 52 glândulas mamárias. Através da elastografia ARFI em áreas sadias da glândula nos grupos, foi possível observar aumento da velocidade de cisalhamento (p<0,05) no grupo CB quando comparado ao grupo GC, o que ocorreu também quando comparados CB e CA. Quando comparadas as áreas de fibrose nos grupos CB e CA, com suas respectivas áreas normais, a velocidade aumentou nos dois grupos: CB (p<0,05; t= 4,07) e CA (p<0,05; t= 6,92). Ao comparar as áreas de fibrose em CB e CA com o parênquima de GC, houve aumento em CB (p<0,05; t=4,95) e CA (p<0,05; t=5,49). Ao avaliar o linfonodo supramamário de cada glândula, a velocidade de cisalhamento aumentou quando comparados os grupos GC e CA (p<0,05, T=2,11), apresentando-se maior no último. Os resultados da ultrassonografia em modo-B apontam predomínio da ecogenicidade hipoecóica nos linfonodos, bem como redução da proporção do eixo curto/longo em casos de mastite subclínica ativa. A eslatografia ARFI pode indicar pontos de corte para que haja diferenciação de um processo de mastite ativa de mastites que já se curaram, seu uso é excelente ferramenta para diferenciação das áreas normais de áreas fibrosadas em parênquima. A avaliação nos linfonodos supramamários, com altas velocidades de cisalhamento, podem indicar mastites, porém o comportamento no parênquima mamário é diferente, produzindo maiores valores em mastites já crônicas, necessitando de estudo com mais animais e mastites induzidas artificialmente, para padronização de valores de corte.

The present study evaluated 27 ewes and their mammary glands, on the 60th lactation day. The aims were the detection in whey proteins, somatic cell count against chronic and subclinical mastitis, as well as the possible use of ARFI elastography as a diagnosis tool of mastitis in glands with fibrous parenchyma. The experimental groups were divided according to the SCC into: GC with SCC<500,000 cls/ml without parenchyma fibrosis; CB with SCC <500, cls/ml and presence of fibrosis; CA with CCS> 500,000 cls/ml and fibrosis. For proteins and SCC, 48 samples of milk serum were used. The SCC obtained in the three groups showed mean values of 136.63 x 103 ± 98.09 cell / ml, 122.06 x 103 ± 94.83 cell / ml and 3,979.55 x 103 ± 2943.81 cls/ml. Through the SDS-PAGE method, it was possible to identify six proteins: Lactoferrin, Serum Albumin, Heavy IgG, Light IgG, -lactoglobulin, and lactoalbumin. According to the group's analysis, there was an increase in lactoferrin between GC and CA, an increase in serum albumin between CB and CA, and an increase in heavy IgG between GC and CA, as well as between CB and CA. The CCS high limit value of 500,000 cls/ml is believed to be safe for the detection of subclinical mastitis. The increase in serum albumin and heavy IgG in animals with lesions in the parenchyma and high CCS, when compared to the other groups, may indicate the presence of active mastitis. There were no differences in the protein composition evaluated that differentiated healthy and fibrous glands, using the same CCS range. Major studies evaluating other whey components, as well as comparing them to the degree of gland fibrosis are needed. The mammary parenchyma and supramammary lymph node were also submitted to B-mode ultrasonography, with subsequent ARFI elastography, obtaining qualitative (echogenicity and echotexture) and quantitative (shear speed, depth and short/long axis ratio) variables from 52 mammary glands. Through ARFI elastography in healthy areas of the gland in the groups, it was possible to observe an increase in shear velocity (p <0.05) in CB group when compared to the GC group, which also occurred when comparing CB and CA. When comparing the fibrous areas in the CB and CA groups, with their respective normal areas, the speed increased in the two groups: CB (p <0.05; t = 4.07) and CA (p <0.05; t = 6.92). When comparing the areas of fibrosis in CB and CA with the parenchyma of GC, there was an increase in CB (p <0.05; t = 4.95) and CA (p <0.05; t = 5.49). When assessing the supramammary lymph node of each gland, the shear velocity increased when the groups GC and CA were compared (p <0.05, T = 2.11), being higher in the last one. The results of B-mode ultrasonography indicate a predominance of hypoechoic echogenicity in nodes, as well as a reduction in the proportion of the short/long axis in cases of active subclinical mastitis. ARFI elastography can indicate cut off points for differentiating an active mastitis process from mastitis that has already healed, its use is an excellent tool for differentiating normal areas from fibrous areas in the parenchyma. The evaluation in the supramammary lymph nodes, with high shear speeds, may indicate active mastitis, but the behavior in the mammary parenchyma is different, producing higher values in already chronic mastitis, Further studies are needed using more animals and artificially induced mastitis, for standardization cut off values.

Proteins of the canine seminal plasma / Proteínas do plasma seminal canino

Studies have been performed to identify the proteins present in canine seminal plasma (SP) and relate them to sperm quality as well as to discover molecular markers of reproductive tract diseases. There is evidence that heparin-binding proteins, zinc-binding proteins, and lactoferrin as well as the matrix metalloproteinase, superoxide dismutase, catalase, and glutathione peroxidase enzymes are associated with canine sperm quality. Other studies indicate that prolactin and enzymes like arginine esterase, acid phosphatase, and alkaline phosphatase could be successfully used as biomarkers of reproductive disorders. Thus, the present literature review aims to address aspects related to proteins of the canine SP, their influence on fertility, and their importance as biomarkers of reproductive disorders.(AU)

Pesquisas têm sido realizadas para identificar as proteínas presentes no plasma seminal canino, com o intuito de relacioná-las com a qualidade espermática, bem como buscar por marcadores moleculares de patologias do trato reprodutivo. Há evidências de que as proteínas ligadoras de heparina, ligadoras de zinco, a lactoferrina, bem como as enzimas matrix metalloproteinase, superoxide dismutase, catalase e a glutationa peroxidase estão relacionadas com a qualidade seminal canina. Outras pesquisas indicam que a prolactina, e as enzimas arginina esterase, fosfatase ácida e fosfatase alcalina poderiam ser utilizadas com sucesso como biomarcadores de doenças reprodutivas. Assim, esta revisão de literatura objetiva abordar aspectos relacionados às proteínas do plasma seminal canino, suas influências sobre a fertilidade, e sua importância como biomarcadores de doenças reprodutivas.(AU)

Perfil eletroforético do colostro de ovelhas suplementadas com propileno glicol e cobalto associado à vitamina B12 no final da gestação / Electrophoretic profile of the colostrum of ewes supplemented with propylene glycol and cobalt associated with vitamin B12 in late pregnancy

Este trabalho teve por objetivo avaliar o proteinograma do colostro de ovelhas submetidas a administração de propileno glicol e de cobalto associado à vitamina B12 no final da gestação. Dezoito ovelhas da raça Santa Inês, prenhas e com idade variando entre 18 meses a cinco anos foram distribuídas, por amostragem probabilística em três grupos experimentais, aproximadamente 30 dias antes da data prevista para o parto. No Grupo 1 (G1/n=6) foram administrados 30mL de propileno glicol P.A. via oral diariamente; no Grupo 2 (G2/n=6) foi administrado 1mg de cloreto de cobalto em solução a 1% via oral diariamente e 2mg de vitamina B12, via intramuscular semanalmente e no Grupo 3 (G3/n=6): grupo controle. Logo após o parto procedeu-se a colheita de 30mL de colostro, que foram acondicionados em recipientes apropriados e encaminhados ao laboratório. Após homogeneização, adicionou-se a cada 1.000µL de colostro, 75µL de solução de renina, que foi mantido em banho-maria a 37ºC por aproximadamente 20 minutos e centrifugado a 21.000G durante dez minutos em centrífuga refrigerada. Posteriormente, a fração intermediária, correspondente ao soro do colostro, foi aliquotada e mantida em ultrafreezer a -80oC para posterior determinação das proteínas. A determinação da proteína total do soro colostral foi realizada empregando-se reagente comercial. A separação das proteínas foi realizada utilizando-se a técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). Foram identificadas as proteínas IgA, lactoferrina, albumina, IgG de cadeia pesada (IgGCP), ß-caseína, IgG de cadeia leve (IgGCL), ß-lactoglobulina and α-lactoalbumina, não havendo influência da administração dos suplementos na fase final da gestação sobre as concentrações protéicas do colostro.(AU)

This study aimed to evaluate the proteinogram of the colostrum of ewes submitted to administration of propylene glycol and cobalt associated with vitamin B12 in late pregnancy. Eighteen pregnant Santa Inês ewes 18 months to 5 years old were distributed by probabilistic sampling into three experimental groups, about 30 days before the expected delivery date. In group 1 (G1/n=6), daily oral doses of 30ml propylene glycol PA were administered; Group 2 (G2/n=2) received a daily oral dosage of 1mg cobalt chloride in 1% solution and 2mg of vitamin B12 intramuscularly once a week, and Group 3 (G3/n=6) was the control group. Soon after delivery 30mL of colostrum was harvested from each ewe, which were stored in appropriate containers and sent to the laboratory. After homogenization, we added to each 1000µL of colostrum 75µL solution of rennin, which was kept in a water bath at 37°C for about 20 minutes and centrifuged at 21.000G for 10 minutes in a refrigerated centrifuge. Later, the intermediate fraction, corresponding to colostrum whey, was aliquoted and kept in a -80oC ultrafreezer for subsequent determination of proteins. The determination of the total colostral protein whey was performed using a commercial reagent, observing the linearity test for colostrum. The separation of proteins was performed using the technique of electrophoresis on polyacrylamide gel containing sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE). Lactoferrin, IgA, albumin, IgG heavy chain (IgGCP), ß-casein, IgG light chain (IgGCL), ß-lactoglobulin and α-lactalbumin proteins were identified. There was no influence of the administration of supplements during late pregnancy on the concentration of proteins identified in the colostrum of the ewes.(AU)

Perfil eletroforético do colostro de ovelhas suplementadas com propileno glicol e cobalto associado à vitamina B12 no final da gestação / Electrophoretic profile of the colostrum of ewes supplemented with propylene glycol and cobalt associated with vitamin B12 in late pregnancy

Este trabalho teve por objetivo avaliar o proteinograma do colostro de ovelhas submetidas a administração de propileno glicol e de cobalto associado à vitamina B12 no final da gestação. Dezoito ovelhas da raça Santa Inês, prenhas e com idade variando entre 18 meses a cinco anos foram distribuídas, por amostragem probabilística em três grupos experimentais, aproximadamente 30 dias antes da data prevista para o parto. No Grupo 1 (G1/n=6) foram administrados 30mL de propileno glicol P.A. via oral diariamente; no Grupo 2 (G2/n=6) foi administrado 1mg de cloreto de cobalto em solução a 1% via oral diariamente e 2mg de vitamina B12, via intramuscular semanalmente e no Grupo 3 (G3/n=6): grupo controle. Logo após o parto procedeu-se a colheita de 30mL de colostro, que foram acondicionados em recipientes apropriados e encaminhados ao laboratório. Após homogeneização, adicionou-se a cada 1.000μL de colostro, 75μL de solução de renina, que foi mantido em banho-maria a 37ºC por aproximadamente 20 minutos e centrifugado a 21.000G durante dez minutos em centrífuga refrigerada. Posteriormente, a fração intermediária, correspondente ao soro do colostro, foi aliquotada e mantida em ultrafreezer a -80oC para posterior determinação das proteínas. A determinação da proteína total do soro colostral foi realizada empregando-se reagente comercial. A separação das proteínas foi realizada utilizando-se a técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). Foram identificadas as proteínas IgA, lactoferrina, albumina, IgG de cadeia pesada (IgGCP), β-caseína, IgG de cadeia leve (IgGCL), β-lactoglobulina and α-lactoalbumina, não havendo influência da administração dos suplementos na fase final da gestação sobre as concentrações protéicas do colostro.(AU)

This study aimed to evaluate the proteinogram of the colostrum of ewes submitted to administration of propylene glycol and cobalt associated with vitamin B12 in late pregnancy. Eighteen pregnant Santa Inês ewes 18 months to 5 years old were distributed by probabilistic sampling into three experimental groups, about 30 days before the expected delivery date. In group 1 (G1/n=6), daily oral doses of 30ml propylene glycol PA were administered; Group 2 (G2/n=2) received a daily oral dosage of 1mg cobalt chloride in 1% solution and 2mg of vitamin B12 intramuscularly once a week, and Group 3 (G3/n=6) was the control group. Soon after delivery 30mL of colostrum was harvested from each ewe, which were stored in appropriate containers and sent to the laboratory. After homogenization, we added to each 1000μL of colostrum 75μL solution of rennin, which was kept in a water bath at 37°C for about 20 minutes and centrifuged at 21.000G for 10 minutes in a refrigerated centrifuge. Later, the intermediate fraction, corresponding to colostrum whey, was aliquoted and kept in a -80oC ultrafreezer for subsequent determination of proteins. The determination of the total colostral protein whey was performed using a commercial reagent, observing the linearity test for colostrum. The separation of proteins was performed using the technique of electrophoresis on polyacrylamide gel containing sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE). Lactoferrin, IgA, albumin, IgG heavy chain (IgGCP), β-casein, IgG light chain (IgGCL), β-lactoglobulin and α-lactalbumin proteins were identified. There was no influence of the administration of supplements during late pregnancy on the concentration of proteins identified in the colostrum of the ewes.(AU)

Transição do colostro para o leite de cabras: novos horizontes nos estudos das proteínas aos metabólitos

O leite de cabra é um alimento nutricionalmente complexo e que ao apresentar vários constituintes com diferentes potenciais bioativos, estes podem ser afetados por algumas enfermidades, mas que quando não, o consumo do leite e desses compostos afetam positivamente no desenvolvimento humano e animal. Assim, o objetivo deste estudo foi investigar o proteoma e metaboloma do leite caprino em diferentes estágios de lactação, idade e padrões de saúde (animais cronicamente positivos para o vírus da artrite encefalite caprinaCAEV) assim como avaliar perfis in sílico da modelagem da lactoferrina do leite de diferentes mamíferos, contribuindo com estudos sobre o leite de ruminantes e outros animais. Para obtenção dos resultados foram utilizadas técnicas como 2D-PAGE, espectrometria de massas e modelagem in sílico com programas como o I-TASSER, ExpasyProtParam, COFACTOR, entre outros. Nos estudos proteômicos e metabolômicos os animais foram divididos em grupos, sendo no mínimo sete e cinco animais por grupo, respectivamente. Diante da série de metodologias aplicadas nesse estudo, chegou-se aos resultados seguintes. Quando avaliado o proteoma da transição do colostro ao leite das cabras, observou-se uma maior qualidade nas proteínas nos animais que tiveram o primeiro parto, animais mais velhos na produção apresentaram as mesmas proteínas, porém com menor qualidade. Assim como, com três dias após o parto o padrão de concentração das proteínas também mudou, havendo de modo geral, menor concentração da proteína comparado com o dia do nascimento. Em se tratando dos metabólitos, animais mais jovens apresentaram maior quantidade de metabólitos do que os mais velhos, e não existiu diferença no perfil de metabólitos entre animais positivos e negativos para o vírus da CAE. Grupos de metabólitos foram identificados como ácidos graxos (ácido oleico, ácido palmítico etc.), açúcares (sucrose, D-maltose etc.), aminoácidos e até outros compostos orgânicos (riboflavina). Quando se avaliou a modelagem da lactoferrina, essa proteína contém sua estrutura conservada no genoma de diversas espécies de mamíferos, porém a estrutura da proteína da cabra detém uma adição de aminoácidos que não afeta a função ou aspectos biológicos dessa proteína. Os modelos ao serem gerados, foram estatisticamente validados de acordo com os parâmetros estabelecidos pelos programas utilizados, por mais que os modelos gerados da lactoferrina nas espécies Capra hircus e Macaca mulatta possuam adição de alguns grupos de aminoácidos, não há alteração no perfil15 biológico e químico dessas proteínas quando comparadas com outros mamíferos. Desse modo, os dados obtidos fornecem informações acerca do proteoma e metaboloma do leite de cabras, assim como renovam informações sobre a modelagem de proteínas presentes nas secreções lácteas, contribuindo ainda mais para o crescimento de dados na pecuária de cabras de leite e estudos sobre vírus da artrite encefalite caprina.

Goat's milk is a portion of nutritionally complex food and that by having several constituents with different bioactive potentials, they can be affected by some diseases, but when not, the consumption of milk and these compounds positively affect human and animal development. Thus, this study aimed to investigate the proteome and metabolome of goat's milk at different stages of lactation, age, and health standards (animals chronically positive for the caprine arthritis encephalitis virus-CAEV) as well as to evaluate in silico profiles of lactoferrin modeling from the milk of different mammals, contributing to studies on the milk of ruminants and other animals. To obtain the results, techniques such as 2D-PAGE, mass spectrometry, and in silico modeling were used with programs such as I-TASSER, Expasy ProtParam, COFACTOR, among others. In proteomic and metabolomic studies, animals were divided into groups, with at least seven and five animals per group, respectively. When the proteome of the transition from colostrum to the milk of goats was evaluated, a higher quality of proteins was observed in the animals that had their first calving, older animals in the production had the same proteins, but with lower quality. Likewise, with three days after delivery, the pattern of protein concentration has also changed, with, in general, less protein concentration compared to the day of birth. In the case of metabolites, younger animals had a higher number of metabolites than the older ones, and there was no difference in the metabolite profile between positive and negative animals for the CAE virus. Groups of metabolites have been identified as fatty acids (oleic acid, palmitic acid, etc.), sugars (sucrose, D-maltose, etc.), amino acids, and even other organic compounds (riboflavin). When the lactoferrin modeling was evaluated, this protein has its structure conserved in the genome of several mammal species, however, the structure of the goat protein has an addition of amino acids that do not affect the function or biological aspects of this protein. After model's generation, they were statistically validated according to the parameters established by the programs used, and the models generated from lactoferrin in the species Capra hircus and Macaca mulatta have the addition of some groups of amino acids, there is no change in the biological and chemical profile of these proteins when compared to other mammals. In this way, the data obtained provide information about the proteome and metabolome of goat's milk, as well as renew information about the modeling of proteins present in milk secretions, further contributing to the growth of data in dairy goat livestock and virus studies of goat encephalitis arthritis.

Proteínas do plasma seminal canino: revisão / Protein patterns of canine seminal plasma: review

Nas últimas décadas, o crescente interesse pela cinofilia motivou o crescimento de uma atividadecomercial lucrativa. Assim, há um interesse em aumentar a performance reprodutiva por meio de biotécnicas dareprodução, como a criopreservação de gametas e a inseminação artificial. A identificação de proteínas presentesno plasma seminal canino dá início a novas discussões sobre o uso de proteínas em aditivos que melhorem aviabilidade espermática e possam ser usados como método contraceptivo em cadelas. Dessa forma, este trabalhoobjetivou descrever as proteínas do plasma seminal canino verificadas na literatura científica, como alactoferrina, a arginina esterase, as proteínas ligadoras de heparina, a osteopontina e as proteínas ligadoras dezinco, assim como relacioná-las com suas respectivas funções diante da esfera reprodutiva.(AU)

In the past few years, the interesting in dogs has provided an increase of this commercial activity. Thus,there is an interest in the increase of reproductive performance using biotechnology such as semencryopreservation and artificial insemination. The identification of proteins present in seminal plasma canineamazed initiates further discussion on the use of protein additives that improve sperm viability and it can used ascontraception in female dogs. Thus, this study aimed to describe the canine seminal plasma proteins, describedin the scientific literature, such as lactoferrin, arginine esterase, the heparin-binding proteins, osteopontin andzinc binding proteins, as well as relate them to their respective functions on the reproductive sphere.(AU)

Proteínas do plasma seminal canino: revisão / Protein patterns of canine seminal plasma: review

Nas últimas décadas, o crescente interesse pela cinofilia motivou o crescimento de uma atividadecomercial lucrativa. Assim, há um interesse em aumentar a performance reprodutiva por meio de biotécnicas dareprodução, como a criopreservação de gametas e a inseminação artificial. A identificação de proteínas presentesno plasma seminal canino dá início a novas discussões sobre o uso de proteínas em aditivos que melhorem aviabilidade espermática e possam ser usados como método contraceptivo em cadelas. Dessa forma, este trabalhoobjetivou descrever as proteínas do plasma seminal canino verificadas na literatura científica, como alactoferrina, a arginina esterase, as proteínas ligadoras de heparina, a osteopontina e as proteínas ligadoras dezinco, assim como relacioná-las com suas respectivas funções diante da esfera reprodutiva.

In the past few years, the interesting in dogs has provided an increase of this commercial activity. Thus,there is an interest in the increase of reproductive performance using biotechnology such as semencryopreservation and artificial insemination. The identification of proteins present in seminal plasma canineamazed initiates further discussion on the use of protein additives that improve sperm viability and it can used ascontraception in female dogs. Thus, this study aimed to describe the canine seminal plasma proteins, describedin the scientific literature, such as lactoferrin, arginine esterase, the heparin-binding proteins, osteopontin andzinc binding proteins, as well as relate them to their respective functions on the reproductive sphere.

Perfil bioquímico, inclusive proteinograma, do soro lácteo de búfalas primíparas e pluríparas sadias ao longo da lactação

Abstract: To evaluate the biochemical profile and protein concentration of whey from milk samples of healthy Murrah primiparous and pluriparous buffaloes, 30 female buffaloes were analyzed during a complete lactation. The animals were divided into three groups: G1 = 10 primiparous buffaloes, G2 = 10 pluriparous buffaloes with 2-3 lactations and G3 = 10 pluriparous buffaloes with >3 lactations. The lactation period was divided into: early stage (I: 1-3 months of lactation), intermediate stage (T: 4-6 months of lactation) and final stage (F: 7-9 months of lactation). Before milk sampling, physical examination of the mammary gland, strip cup test and California Mastitis Test (CMT) were performed. After mammary quarters asepsis, 20mL of milk were collected monthly from each mammary quarter, during a complete lactation, in sterilized plastic bottles without preservative, in order to perform microbiological isolation, biochemical profile and protein electrophoresis in sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), and 30mL of milk from each mammary quarter were collect, in sterilized plastic bottles containing preservative bronopol to perform the somatic cell count (SCC). A total of 1,042 milk samples were collected from the experimental groups during lactation, of which 923 samples showed negative reaction to CMT and negative microbiological isolation and were selected to biochemical profile analysis and protein electrophoresis in SDS-PAGE. There were influence of parity order and stage of lactation in biochemical profile and protein concentration of healthy Murrah buffaloes' whey. Primiparous buffaloes (G1) showed higher gamma-glutamyltransferase (GGT: 2,346 U/L), alkaline phosphatase (ALP: 181 U/L), phosphorus (P; 56.6mg/dL), potassium (K; 32.0mg/dL) and -lactalbumin (458mg/dL). Buffaloes with 2-3 lactations (G2) showed higher SCC (70,700 cells/mL) and higher concentrations of total protein (1.55g/dL), albumin (100mg/dL), magnesium (Mg; 8.80mg/dL), chlorides (Cl; 176mg/dL), iron (Fe; 10.7g/dL), sodium (Na; 178mMol/L) and lactoferrin (59.5mg/dL). Bufalloes with >3 lactations (G3) showed higher concentrations of total calcium (Ca; 41.8mg/dL), ionized calcium (iCa; 2.92mMol/L), immunoglobulin A (IgA; 1.32mg/dL), serum albumin (99.1mg/dL), immunoglobulin G (IgG; 49.7mg/dL) and -lactoglobulin (1,068mg/dL). During lactation it was observed increase in SCC, GGT, ALP, total protein, albumin, P, Mg, Cl, Na, lactoferrin, serum albumin, IgG and -lactalbumin, as well as decrease in concentrations of Ca, Fe, iCa, K, IgA and -lactoglobulin in buffaloes' whey. The results may be used as reference for buffaloes and to support diagnosis and prognosis of diseases common to lactation periods.

Resumo: Para avaliar o perfil bioquímico, inclusive proteínas, do soro lácteo de búfalas Murrah primíparas e pluríparas sadias foram analisadas amostras de leite de 30 fêmeas bubalinas durante uma lactação completa. Os animais foram distribuídos em três grupos: G1 - 10 búfalas primíparas, G2 - 10 búfalas pluríparas com duas a três lactações e G3 - 10 búfalas pluríparas com mais de três lactações. O período de lactação foi dividido em: fase inicial (I: primeiro ao terceiro mês de lactação), fase intermediária (T: quarto ao sexto mês de lactação) e fase final (F: sétimo ao nono mês de lactação). Antes da colheita das amostras de leite foram realizados o exame físico da glândula mamária, o teste da caneca de fundo escuro e o California Mastitis Test (CMT). Após a assepsia dos quartos mamários, foram colhidas mensalmente, durante uma lactação completa, amostras de 20mL de leite de cada quarto mamário, em frascos plásticos esterilizados e sem conservante, para a realização do isolamento microbiológico, determinação do perfil bioquímico e fracionamento proteico por meio de eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE), e amostras de 30mL de leite de cada quarto mamário, em frascos plásticos esterilizados contendo conservante bronopol, para contagem de células somáticas (CCS). Das 1.042 amostras de leite colhidas dos três grupos experimentais durante a lactação, 923 amostras de leite apresentaram reação negativa ao CMT e isolamento microbiológico negativo e foram selecionadas para as análises do perfil bioquímico e fracionamento proteico em SDS-PAGE. Notou-se influência da ordem de parto e da fase da lactação no perfil bioquímico e no proteinograma do soro lácteo de búfalas da raça Murrah sadias. As búfalas primíparas (G1) apresentaram maior atividade das enzimas gamaglutamiltransferase (GGT: 2.346U/L) e fosfatase alcalina (ALP: 181U/L) e maiores concentrações de fósforo (P: 56,6mg/dL), potássio (K: 32,0mg/dL) e -lactoalbumina (458mg/dL). As fêmeas com duas a três lactações (G2) apresentaram maior CCS (70.700 células/mL) e maiores concentrações de proteína total (1,55g/dL), albumina (100mg/dL), magnésio (Mg: 8,80mg/dL), cloretos (Cl: 176mg/dL), ferro (Fe: 10,7g/dL), sódio (Na: 178mMol/L) e lactoferrina (59,5mg/dL). As fêmeas com mais de três lactações (G3) apresentaram maiores concentrações de cálcio total (Ca: 41,8mg/dL), cálcio ionizado (Cai: 2,92mMol/L), imunoglobulina A (IgA: 1,32mg/dL), albumina sérica (99,1mg/dL), imunoglobulina G (IgG: 49,7mg/dL) e b-lactoglobulina (1.068mg/dL). Durante a lactação foi observado aumento da CCS, aumento das atividades das enzimas GGT e ALP, aumento das concentrações de proteína total, albumina, P, Mg, Cl, Na, lactoferrina, albumina sérica, IgG, -lactoalbumina e redução das concentrações de Ca, Fe, Cai, K, IgA e b-lactoglobulina no soro lácteo das búfalas. Os resultados obtidos podem ser utilizados como referências para a espécie bubalina e auxiliar no diagnóstico e no prognóstico de doenças de ocorrência comum na fase de lactação.

ANALYSIS OF BUFFALO COLOSTRUM AND BLOD SERUM FROM BUBALINE CALVES WITH ENFASIS ON PASSIVE IMMUNITY TRANSFER

O objetivo deste estudo foi avaliar a transferência de imunidade passiva em bezerros bubalinos saudáveis e avaliar a influência das concentrações séricas de imunoglobulina G (IgG) às 24 horas no desempenho produtivo nos primeiros 90 dias de idade dos bezerros. Amostras de colostro de novilhas (sem parto prévio), primíparas e pluríparas; e amostras de sangue de seus respectivos bezerros foram coletadas no nascimento, antes da ingestão de colostro, e 24h, 48h e 72h após o nascimento para determinação das atividades séricas de gamamaglutamiltransferase (GGT) e fosfatase alcalina (ALP); e concentrações séricas de proteína total (PT), imunoglobulinas A (IgA) e G (IgG) e lactoferrina. As concentrações de imunoglobulinas de amostras de colostro de búfalas e amostras de sangue de bezerros foram determinadas pela técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS- PAGE). O peso foi medido a cada semana após o nascimento até os três meses de idade. Os resultados da transferência de imunidade passiva foram analisados como medidas repetidas no tempo e o peso e o ganho de peso diário (GPD) foram avaliados por regressão linear simples. As diferenças foram consideradas significativas quando P 0,05. Os búfalos nasceram hipogamaglobulinêmicos (4,23±0,33 mg/mL), e às 24 horas as concentrações séricas de IgG foram de 34,5±1,48 mg/mL, a transferência de imunidade passiva foi considerada bem- sucedida. As concentrações séricas de PT são recomendadas como parâmetros indiretos confiáveis para avaliar a transferência de imunidade passiva em búfalos. O peso médio ao nascimento foi de 38,0±5,54 Kg, e o peso e o GPD aos 30, 60 e 90 dias de idade foram respectivamente: 49,2±6,30 Kg; 61,7±8,14 Kg; 75,9±10,3 Kg e 0,363±0,139 Kg/d; 0,391±0,101 Kg/d; 0,421±0,091 Kg/d. Não foi detectada relação significativa das concentrações séricas de IgG às 24h com o peso ou GPD durante o período do estudo. Os resultados produtivos de bezerros bubalinos nos primeiros 90 dias de idade são mais influenciados pela nutrição da mãe, características genéticas herdáveis e bom manejo sanitário dos bezerros.

The aim of this study was to evaluate the passive immunity transfer on healthy buffalo calves and evaluate the influence of serum concentrations of immunoglobulin G (IgG) at 24hs on productive performance on the first 90 days of age of Murrah buffalo calves. Colostrum samples from heifers (without previous calving), primiparous and pluriparous dams; and blood samples from their respective calves, were taken at birth, before colostrum ingestion, and at 24h, 48h, and 72h after birth for determination of serum activities of gamma- glutamyltransferase (GGT) and alkaline phosphatase (ALP); and serum concentrations of total protein (TP), immunoglobulins A (IgA) and G (IgG) and lactoferrin. The concentrations of immunoglobulins of colostrum samples from buffaloes and blood samples from calves were determined by sodium dodecyl sulfate-containing polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) technique. Weight was measured following each week after birth until three months of age. The passive immunity transfer results were analyzed as repeated measures and weight and average daily gain (ADG) were evaluated by simple linear regression. Differences were considered significant when P0.05. As buffalo calves were born hypogammaglobulinemic (4.23±0.33 mg/mL), and at 24h serum concentrations of IgG were of 34.5±1.48 mg/mL, passive immunity transfer was successful. Serum concentrations of TP at 24h is recommended as reliable indirect parameter to evaluate passive immunity transfer on buffalo calves. An average weight at birth was of 38.0±5.54 Kg, and weight and ADG with 30, 60 and 90 days of age were respectively as follows: 49.2±6.30 Kg; 61.7±8.14 Kg; 75.9±10.3 Kg and 0.363±0.139 Kg/d; 0.391±0.101 Kg/d; 0.421±0.091 Kg/d. No significant relation between serum concentrations of IgG at 24h and weight or ADG was detected. The production outcomes of buffalo calves on the first 90 days of age are more influenced by the dams nutrition, genetic heritable characteristics and good health management of the calf.

Involução da glândula mamária durante o final da lactação e período seco de cabras Saanen: respostas de sobrevivência celular ao estresse agudo e relações com a temperatura por infravermelho

Durante a vida reprodutiva de uma fêmea a glândula mamária passa por diversas modificações. O período seco é de extrema importância para a renovação celular do tecido mamário para a próxima lactação, ocorrendo, nessa fase, intensa apoptose nas células epiteliais mamárias. Com isso, acredita-se que os glicocorticoides podem inibir a expressão de genes relacionados à síntese de leite e síntese de proteínas do leite durante a involução mamária. Além disso, nas horas seguintes à interrupção de ordenha, as células epiteliais ainda sintetizam leite, a qual gera um acúmulo de leite na glândula mamária, aumento da pressão intramamária e pode causar a abertura do canal do teto, favorecendo a entrada de microrganismos patógenos, aumentando a temperatura superficial do úbere. Foram utilizadas cabras da raça Saanen submetidas ao processo de secagem aos 249 ± 8 dias de lactação. O primeiro estudo teve como objetivo avaliar o aumento de cortisol plasmático (via administração exógena do hormônio adrenocorticotrófico) sobre a expressão dos genes da via IGF- 1R/PI3K/Akt/mTOR e proteínas do leite (LALBA, CSN2 e LF) no tecido mamário, e a composição das secreções mamárias durante o período inicial da secagem. Observou-se que o aumento do cortisol causou uma diminuição significativa na expressão relativa de IGF-1R. Porém, não apresentou efeito sobre os demais genes PI3K/Akt/mTOR e LALBA, CSN2 e LF. O período de secagem diminuiu significativamente a expressão de LALBA e CSN2 e aumentou a expressão de LF. Além disso, o cortisol aumentou significativamente a infiltração de células imunes e manteve a concentração de lactoferrina mais elevada nas secreções mamárias. Os componentes do leite não foram alterados com a administração de ACTH. No entanto, o período de secagem aumentou significativamente a porcentagem de gordura, lactose, proteína e extrato seco. O segundo estudo teve por objetivo avaliar a temperatura superficial do úbere e ocular através da temperatura por infravermelho e relaciona-las com a contagem de células somáticas durante o período de secagem. Assim, a temperatura superficial do úbere foi significativamente correlacionada com o status de saúde do úbere das cabras Saanen. Por fim, a temperatura por infravermelho detectou as alterações nas temperaturas superficiais e a suas relações com a contagem de células somáticas.

During the reproductive life of a female, the mammary gland undergoes several modifications. The dry period is of extreme importance for the cellular renewal of the mammary tissue for the next lactation, occurring, at this stage, intense apoptosis in the mammary epithelial cells. With this, it is believed that glucocorticoids can inhibit the expression of genes related to milk synthesis and milk protein synthesis during mammary involution. In the hours following the interruption of milking, the epithelial cells still synthesize milk, which generates an accumulation of milk in the mammary gland, increased intramammary pressure and can cause the opening of the roof canal favoring the entry of pathogenic microorganisms and increasing the udder superficial temperature. So, Saanen goats were submitted to the drying process at 249 ± 8 days of lactation. The first study aimed to evaluate the increase of plasma cortisol (via exogenous adrenocorticotrophic hormone administration) on the expression of IGF-1R/PI3K /Akt /mTOR and milk proteins (LALBA, CSN2 and LF) genes in mammary tissue, and the composition of the mammary secretions during the initial drying period. It was observed that increased cortisol caused a significant decrease in the relative expression of IGF-1R. However, it had no effect on the other PI3K/Akt/mTOR and LALBA, CSN2 and LF genes. The drying period significantly decreased LALBA and CSN2 expression and increased LF expression. In addition, cortisol significantly increased the infiltration of immune cells and maintained the higher concentration of lactoferrin in mammary secretions. Milk components were not altered with ACTH administration. However, the drying period significantly increased the percentage of fat, lactose, protein and dry extract. The second study aimed to evaluate the udder and ocular surface temperature through infrared temperature and correlates them with the somatic cell count during the drying period. Thus, the surface temperature of the udder was significantly correlated with the health status of the udder of the Saanen goats. Finally, the infrared temperature detected changes in surface temperatures and their relationships with somatic cell counts.