Detection of salmonella sp in chicken cuts using immunomagnetic separation

The immunomagnetic separation (IMS) is a technique that has been used to increase sensitivity and specificity and to decrease the time required for detection of Salmonella in foods through different methodologies. In this work we report on the development of a method for detection of Salmonella in chicken cuts using in house antibody-sensitized microspheres associated to conventional plating in selective agar (IMS-plating). First, protein A-coated microspheres were sensitized with polyclonal antibodies against lipopolysacharide and flagella from salmonellae and used to standardize a procedure for capturing Salmonella Enteritidis from pure cultures and detection in selective agar. Subsequently, samples of chicken meat experimentally contaminated with S. Enteritidis were analyzed immediately after contamination and after 24h of refrigeration using three enrichment protocols. The detection limit of the IMS-plating procedure after standardization with pure culture was about 2x10 CFU/mL. The protocol using non-selective enrichment for 6-8h, selective enrichment for 16-18h and a post-enrichment for 4h gave the best results of S. Enteritidis detection by IMS-plating in experimentally contaminated meat. IMS-plating using this protocol was compared to the standard culture method for salmonellae detection in naturally contaminated chicken cuts and yielded 100% sensitivity and 94% specificity. The method developed using in house prepared magnetic microespheres for IMS and plating in selective agar was able to diminish by at least one day the time required for detection of Salmonella in chicken products by the conventional culture method.

A separação imunomagnética (IMS) é uma técnica que tem sido associada a diferentes métodos de detecção de Salmonella em alimentos para aumentar a sensibilidade e a especificidade e diminuir o tempo de análise. Neste trabalho é comunicada a obtenção de microesferas magnéticas sensibilizadas com anticorpos anti-Salmonella e seu uso em associação com a metodologia de cultivo convencional para desenvolver um método de detecção de salmonelas em cortes de frango (IMS-plaqueamento). Inicialmente, microesferas cobertas com proteína A foram sensibilizadas com anticorpos policlonais contra lipopolissacarídeo e flagelo de salmonelas e usadas na padronização de um procedimento que captura Salmonella Enteritidis em cultivo puro e faz posterior detecção em ágar seletivo. A seguir, amostras de carne de frango experimentalmente contaminadas com S. Enteritidis foram analisadas imediatamente após a contaminação e após 24h de refrigeração utilizando três protocolos de enriquecimento. O limite de detecção foi cerca de 2x10 UFC/mL. O protocolo que incluiu enriquecimento não-seletivo por 6-8h, enriquecimento seletivo por 16-18h e pós-enriquecimento por 4h foi o que proporcionou melhor resultado na detecção de S. Enteritidis em carne de frango experimentalmente contaminada. Este protocolo foi comparado à metodologia convencional em estudo de detecção de salmonelas em cortes de frango naturalmente contaminados e obteve 100% de sensibilidade e 94% de especificidade. O método desenvolvido foi capaz de diminuir em pelo menos um dia o tempo de detecção de salmonelas em cortes de frango pela metodologia convencional.

Ração suplementada com vitaminas C e E influencia a resposta inflamatória aguda em tilápia do Nilo / Vitamin C and E supplemented diet influences the acute inflammatory response in Nile tilapia

Este estudo avaliou o hemograma e a resposta inflamatória aguda em tilápia do Nilo alimentada com 500mg de vitamina C e 500mg de vitamina E/kg de ração. Após 30 dias de alimentação com a dieta suplementada com as vitaminas, 500µg de carragenina, 3mg de lipopolissacarídeo (LPS)/kg de peixe e 0,5ml de solução salina estéril (controle) foram injetados na bexiga natatória dos animais. Seis horas após, os peixes foram anestesiados para coleta de amostras sangüíneas e análise da resposta inflamatória. Peixes injetados com carragenina e LPS apresentaram as maiores contagens totais de leucócitos no sangue, sendo que a suplementação vitamínica na ração provocou redução no número total de trombócitos nos injetados com carragenina. A taxa de glicose, o número de eritrócitos, o hematócrito e o cortisol não sofreram influência da suplementação vitamínica na ração. A suplementação vitamínica provocou redução no número de neutrófilos no sangue dos animais injetados com LPS. Nos peixes injetados com carragenina e LPS alimentados com vitaminas, houve maior migração de células para o sítio inflamado. O LPS provocou maior migração de células em comparação com os demais tratamentos, principalmente por macrófagos. A suplementação vitamínica provocou aumento no número de trombócitos no exsudato em peixes injetados com carragenina e LPS.(AU)

This study evaluated the haematology and acute inflammatory response in Nile tilapia fed with 500mg vitamin C and 500 mg vitamin E/kg dry ration. Thirty days after feeding with supplemented diet, 500µg carrageenin, 3mg lipopolysacharide (LPS)/kg body weight and 0.5ml sterile saline solution (control) were injected in the swim bladder. Six hours after the fish were anesthetized to collect blood and analysis of the inflammatory response. Fish injected with carrageenin and LPS showed the highest counts of total leucocytes in blood and, the vitamin supplementation provoked reduction in the number of total thrombocytes in the carrageenin injected fish. Glucose, erythrocyte number, hematocrit and cortisol were not influenced by the vitamin supplmentation. The addition of vitamins in the diet caused reduction in the number of neutrophils in LPS injected fish. Once more, fish injected with carrageenin and LPS fed vitamins showed higher migration of leucocytes to the inflamed site. LPS provoked the highest migration of inflammatory cells, mainly by macrophages when compared to the other treatments. Vitamin supplementation increased the number of thrombocytes in the inflammatory exsudate in carrageenin and LPS injected fish.(AU)

Effects of lidocaine on lipopolysaccharide-induced synovitis in horses / Efeitos da lidocaína em sinovite induzida por lipopolissacarídeo, em eqüinos

Lidocaine (100mg 2%) injected into the carpal joint was used to evaluate the inflammatory response induced by injection (1.5ng) of intra-articular E. coli lipopolysaccharide (LPS) endotoxin. Seventeen male Mangalarga horses aged two to three years were divided into three groups and in all animals was injected 0.9% saline (SAL) in the left carpus (LC), and in the right carpus (RC) one of the following combinations were injected: group A (n=6) LPS plus SAL; group B (n=6) LPS plus lidocaine; group C (n=5) lidocaine plus SAL. Synovial fluid and blood samples were collected immediately before the injection of LPS (T0), and at 1.5 (T1), 3 (T2), 6 (T3), 12 (T4) and 36 hours (T5) after the injection. Clinical and physical variables and cellular and biochemical characteristics of the synovial fluid were evaluated at the same time. The local and systemic inflammatory response was evaluated by measurement of mean serum and synovial fluid TNF-a concentration. A rise in TNF-a concentration in LPS injected joints at 3h in group A and from 1.5h to 3h in group B was observed. It is concluded that LPS triggered an inflammatory process and that lidocaine did not inhibit or attenuate the LPS-induced synovitis nor the synthesis and release of TNF-a .(AU)

Injetou-se lidocaína (100mg 2%) na articulação do carpo para avaliar a resposta inflamatória induzida pela injeção (1,5ng) intra-articular de lipopolissacarídeo (LPS) de E. coli. Utilizaram-se 17 cavalos Mangalarga não castrados, entre dois e três anos, divididos em três grupos. No carpo esquerdo (CE) administrou-se solução fisiológica a 0,9% (SAL) e no carpo direito (CD) uma das seguintes combinações: grupo A (n=6) LPS mais SAL, grupo B (n=6) LPS mais lidocaína e grupo C (n=5) lidocaína mais SAL. Amostras do líquido sinovial e de sangue foram colhidas imediatamente antes da injeção de LPS (T0) e às 1,30 (T1), 3 (T2), 6 (T3), 12 (T4) e 36 horas (T5) após a injeção. Variáveis clínicas e físicas, e características bioquímicas e celulares do líquido sinovial foram avaliadas nos mesmos tempos. A resposta inflamatória local e sistêmica foi mensurada pela concentração do TNF-a no soro e líquido sinovial. Observou-se aumento da concentração do TNF-a nas articulações injetadas com LPS às 3h no grupo A e de 1,30 às 3h no grupo B. Concluiu-se que o LPS induziu o processo inflamatório e que a lidocaína não inibiu nem atenuou a sinovite induzida pelo LPS, nem a síntese e liberação de TNF-a .(AU)