Molecular docking, ADMET and molecular dynamics simulation revealed metralindole as a multitargeted inhibitor for division kinases / Ancoragem molecular, ADMET e simulação de dinâmica molecular revelaram o metralindol como inibidor multialvo para divisão quinases

Lung cancer is the most common type of cancer in the world, and alone, in 2020, almost 2.21 million new cases were diagnosed, with 1.80 million deaths, and are increasing daily. Non-small cell lung (NSCLC) is the primary type of lung cancer, predominantly forms around 80% of cases compared to small cell carcinoma, and about 75% of patients are already in an advanced state when diagnosed. Despite notable advances in early diagnosis and treatment, the five-year survival rate for NSCLC is not encouraging. Therefore, it is crucial to investigate the molecular causes of non-small cell lung cancer to create more efficient therapeutic approaches. Lung cancer showed a more significant and persistent binding affinity and energy landscape with the target CDK2 staurosporine and FGF receptor-1. In this study, we have picked two essential target proteins, human cyclin-dependent kinase-2 and Human Protein Kinase CK2 Holoenzyme and screened the entire prepared DrugBank prepared library of 1,55,888 compounds and identified 2-(2-methyl-5-nitroimidazole-1-yl) ethanol (Metralindole) as a major inhibitor. Metralindole has displayed high docking scores of -5.159 Kcal/mol and -5.99 Kcal/mol with good hydrogen bonding and other bonding topologies such as van der Waals force, and ADMET results shown excellent bioavailability, outstanding solubility, no side effects, and toxicity. The molecular dynamics simulation for 100ns in a water medium confirmed the compound's stability and interaction pattern with the lowest deviation and fluctuations. Our in-silico study suggests Metralindole, an experimental compound, can effectively cure lung cancer. Further, the experimental validation of the compound is a must before any prescription.

O câncer de pulmão é o tipo de câncer mais comum no mundo, e, apenas em 2020, foram diagnosticados quase 2,21 milhões de novos casos, com 1,8 milhão de óbitos, e isso vem aumentando diariamente. O câncer de pulmão de células não pequenas (CPCNP) é o tipo primário de câncer de pulmão, forma que predomina em cerca de 80% dos casos em comparação com o carcinoma de pequenas células, e cerca de 75% dos pacientes já estão em estado avançado quando diagnosticados. Apesar dos avanços notáveis no diagnóstico e tratamento precoces, a taxa de sobrevida em cinco anos para CPCNP não é animadora. Portanto, é crucial investigar as causas moleculares do CPCNP para criar abordagens terapêuticas mais eficientes. O câncer de pulmão mostrou uma afinidade de ligação e perfil energético mais significativos e persistentes com a estaurosporina CDK2 alvo e o receptor-1 de FGF. Neste estudo, escolhemos duas proteínas-alvo essenciais, a quinase dependente de ciclina humana-2 e a holoenzima CK2 da proteína quinase humana, examinamos toda a biblioteca preparada pelo DrugBank de 1,55,888 compostos e identificamos 2-(2-metil-5-nitroimidazol-1-il) etanol (metralindol) como inibidor principal. O metralindol apresentou altas pontuações de ancoragem de -5,159 Kcal/mol e -5,99 Kcal/mol, com boas ligações de hidrogênio e outras topologias de ligação, como a força de Van der Waals, e os resultados do ADMET mostraram excelente biodisponibilidade e solubilidade, sem efeitos colaterais e toxicidade. A simulação de dinâmica molecular para 100ns em meio aquoso confirmou a estabilidade e o padrão de interação do composto com os menores desvios e flutuações. Nosso estudo in silico sugere que o metralindol, um composto experimental, pode efetivamente curar o câncer de pulmão. Além disso, a validação experimental do composto é obrigatória antes de qualquer prescrição.

First molecular detection of Leishmania (Leishmania) infantum chagasi in a domestic cat (Felis catus) from an urban area in eastern Amazon

Background: Domestic cats have been implicated as accidental hosts of Leishmania sp. However, in recent years, the recurrent description of new cases in endemic and nonendemic areas draw attention to the potential epidemiological role of cats as reservoir hosts. Although dogs are considered urban reservoirs, cats could act as a secondary natural reservoirs in these areas. Thus, feline leishmaniasis has become an emerging disease in several countries worldwide. Case presentation: This study aimed to describe the first case of feline leishmaniasis in a stray animal that presented lesions compatible with the disease in Belém, Pará, Brazil, an important urban area in eastern Amazon. Serological tests for Leishmania infantum (ELISA and IFA) were nonreactive, whereas histopathological examination indicated infectious dermatitis caused by Leishmania spp. or Toxoplasma gondii. Cytopathological study of lesion aspirate confirmed the presence of Leishmania sp. amastigotes within macrophages. Finally, molecular analyses revealed that the feline infection was caused by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi. Conclusion: To the best of the authors' knowledge, this study reports the first case of natural infection by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi in a feline from eastern Amazon. These findings suggest domestic cats as potential secondary reservoir hosts of Leishmania spp. in Belém, which reinforces the importance of further epidemiological investigation of feline leishmaniasis, especially in urban areas with human cases.(AU)

The molecular investigations on the subgenus Artemisia Less. of the genus Artemisia L. (Asteraceae) in Turkey

Abstract The genus Artemisia L. of the family Asteraceae is systematically very complex. The aim of this study was to evaluate taxonomic positions of taxa of the subgenus Artemisia belonging to the genus Artemisia in Turkey using some molecular techniques. In this molecular study, 44 individuals belong to 14 species of the subgenus Artemisia were examined. Analyses were performed on the combined dataset using maximum parsimony, maximum likelihood and Bayesian inference and Molecular parameters obtained from co-evaluations of sequences of the psbA-trnH, ITS and ETS regions of examined individuals were used in the phylogenetic tree drawing. According to the results of this study, two molecular groups have been formed based on the DNA sequence similarity of the species, but there are no obvious morphological characters corresponding to two molecular groups. There is no also agreement between the two molecular groups and the two morphological groups formed according to the hairiness condition of the receptacle of species. Due to the lack of molecular significance of their receptacles with or without hair, dividing of the subgenus Artemisia species into new subgenera or sections was not considered appropriate. Likewise, it has been found that with or without hair on the corolla lobes of the central hermaphrodite disc flowers have no molecular significance. It was found that there were no gene flow and hybridization between the 14 species of the subgenus Artemisia and these 14 species were found completed their speciation. This study is important as it is the first molecular based study relating with belong to subgenus Artemisia species growing naturally in Turkey. In addition, new haplotypes related to the populations of Turkey belonging to the subgenus Artemisia taxa were reported by us for the first time and added to the GenBank database.

Resumo O gênero Artemisia L. da família Asteraceae é sistematicamente muito complexo. O objetivo deste estudo foi avaliar as posições taxonômicas de táxons do subgênero Artemisia pertencentes ao gênero Artemisia na Turquia usando algumas técnicas moleculares. Neste estudo molecular, 44 indivíduos pertencentes a 14 espécies do subgênero Artemisia foram examinados. As análises foram realizadas no conjunto de dados combinado usando máxima parcimônia, máxima verossimilhança e inferência bayesiana e parâmetros moleculares obtidos a partir de coavaliações de sequências das regiões psbA-trnH, ITS e ETS de indivíduos examinados foram usados no desenho da árvore filogenética. De acordo com os resultados deste estudo, dois grupos moleculares foram formados com base na similaridade da sequência de DNA das espécies, mas não há caracteres morfológicos óbvios correspondentes a dois grupos moleculares. Também não há concordância entre os dois grupos moleculares e os dois grupos morfológicos formados de acordo com a condição de pilosidade do receptáculo da espécie. Devido à falta de significado molecular de seus receptáculos com ou sem cabelo, a divisão das espécies do subgênero Artemisia em novos subgêneros ou seções não foi considerada apropriada. Da mesma forma, verificou-se que com ou sem cabelo nos lobos da corola das flores do disco hermafrodita central não tem significado molecular. Constatou-se que não houve fluxo gênico e hibridização entre as 14 espécies do subgênero Artemisia e essas 14 espécies concluíram sua especiação. Este estudo é importante porque é o primeiro estudo de base molecular relacionado com espécies pertencentes ao subgênero Artemisia crescendo naturalmente na Turquia. Além disso, novos haplótipos relacionados às populações da Turquia pertencentes ao subgênero Artemisia taxa foram relatados por nós pela primeira vez e adicionados ao banco de dados do GenBank.

Molecular diagnostic for a screening investigation method of tick-borne pathogens in Didelphis albiventris road-killed in north of Paraná, Brazil

The synanthropization of wild animals puts public health at risk by promoting the circulation of zoonotic agents, found naturally in the wild, in the anthropic environment. The objective of this work was to carry out screening by molecular detection of pathogens of the Anaplasmatacea family in Didelphis albiventris, a specie characterized as having a synanthropic habit. Opossums that were dead (n = 25) after being road-killed were collected in the North of Paraná state, southern Brazil during the 2016 and 2018 years, through active search. A questionnaire was filled out with information about the animal and collected place. Biological samples of spleen and liver were collected. The genetic material extracted from the spleen and liver was submitted to molecular diagnosis through PCR for amplification of dsb of Ehrlichia and 16S genes for the other agents of the Anaplasmataceae family. One animal was positive for the genus Ehrlichia in semi-nested PCR for amplification of the 349 bp fragment of the dsb gene in extracted from the liver samples. In PCR for the 16S target no animal was positive. These are preliminary results that reinforce the circulation of Ehrlichia in opossums. To improve the knowledge of these agents in opossums more studies are necessary.(AU)

A sinantropização de animais silvestres coloca em risco a saúde pública por propiciar a circulação de agentes zoonóticos, encontrados naturalmente em ambiente silvestre, no ambiente antrópico. O trabalho teve como objetivo realizar a triagem por detecção molecular de patógenos da família Anaplasmataceae em Didelphis albiventris, espécie caracterizada como de hábito sinantrópico. Gambás mortos (n=25) por atropelamento durante os anos de 2016 e 2018 foram coletados na região norte do Paraná, sul do Brasil, por meio de busca ativa. Realizou-se o preenchimento de formulário com informações sobre a espécie do animal e o local do atropelamento. Foi realizada a necrópsia e coleta de amostras biológicas, de baço e fígado. O material genético extraído de baço e fígado foi submetido a diagnóstico molecular, por meio de PCR, para amplificação dos genes dsb de Ehrlichia sp. e 16S para os demais agentes da família Anaplasmataceae. Um animal foi positivo para o gênero Ehrlichia em semi-nested PCR para a amplificação do fragmento de 349 pb do gene dsb, extraído de fígado. Na PCR para detecção do gene 16S nenhum dos animais foi positivo. Esses resultados preliminares reforçam a circulação de Ehrlichias em gambás. Para melhorar o conhecimento desses agentes em gambás mais estudos são necessários.(AU)

A threefold approach including quantum chemical, molecular docking and molecular dynamic studies to explore the natural compounds from Centaurea jacea as the potential inhibitors for COVID-19 / Uma abordagem tríplice incluindo química quântica, docking molecular e estudos dinâmicos moleculares para explorar os compostos naturais de Centaurea jacea como inibidores potenciais para Covid-19

Abstract In the current report, we studied the possible inhibitors of COVID-19 from bioactive constituents of Centaurea jacea using a threefold approach consisting of quantum chemical, molecular docking and molecular dynamic techniques. Centaurea jacea is a perennial herb often used in folk medicines of dermatological complaints and fever. Moreover, anticancer, antioxidant, antibacterial and antiviral properties of its bioactive compounds are also reported. The Mpro (Main proteases) was docked with different compounds of Centaurea jacea through molecular docking. All the studied compounds including apigenin, axillarin, Centaureidin, Cirsiliol, Eupatorin and Isokaempferide, show suitable binding affinities to the binding site of SARS-CoV-2 main protease with their binding energies -6.7 kcal/mol, -7.4 kcal/mol, -7.0 kcal/mol, -5.8 kcal/mol, -6.2 kcal/mol and -6.8 kcal/mol, respectively. Among all studied compounds, axillarin was found to have maximum inhibitor efficiency followed by Centaureidin, Isokaempferide, Apigenin, Eupatorin and Cirsiliol. Our results suggested that axillarin binds with the most crucial catalytic residues CYS145 and HIS41 of the Mpro, moreover axillarin shows 5 hydrogen bond interactions and 5 hydrophobic interactions with various residues of Mpro. Furthermore, the molecular dynamic calculations over 60 ns (6×106 femtosecond) time scale also shown significant insights into the binding effects of axillarin with Mpro of SARS-CoV-2 by imitating protein like aqueous environment. From molecular dynamic calculations, the RMSD and RMSF computations indicate the stability and dynamics of the best docked complex in aqueous environment. The ADME properties and toxicity prediction analysis of axillarin also recommended it as safe drug candidate. Further, in vivo and in vitro investigations are essential to ensure the anti SARS-CoV-2 activity of all bioactive compounds particularly axillarin to encourage preventive use of Centaurea jacea against COVID-19 infections.

Resumo No presente relatório, estudamos os possíveis inibidores de Covid-19 de constituintes bioativos de Centaurea jacea usando uma abordagem tripla que consiste em técnicas de química quântica, docking molecular e dinâmica molecular. Centaurea jacea é uma erva perene frequentemente usada em remédios populares de doenças dermatológicas e febre. Além disso, as propriedades anticâncer, antioxidante, antibacteriana e antiviral de seus compostos bioativos também são relatadas. A Mpro (proteases principais) foi acoplada a diferentes compostos de Centaurea jacea por meio de docking molecular. Todos os compostos estudados, incluindo apigenina, axilarina, Centaureidina, Cirsiliol, Eupatorina e Isokaempferide, mostram afinidades de ligação adequadas ao sítio de ligação da protease principal SARS-CoV-2 com suas energias de ligação -6,7 kcal / mol, -7,4 kcal / mol, - 7,0 kcal / mol, -5,8 kcal / mol, -6,2 kcal / mol e -6,8 kcal / mol, respectivamente. Dentre todos os compostos estudados, a axilarina apresentou eficiência máxima de inibidor, seguida pela Centaureidina, Isokaempferida, Apigenina, Eupatorina e Cirsiliol. Nossos resultados sugeriram que a axilarina se liga aos resíduos catalíticos mais cruciais CYS145 e HIS41 do Mpro, além disso a axilarina mostra 5 interações de ligações de hidrogênio e 5 interações hidrofóbicas com vários resíduos de Mpro. Além disso, os cálculos de dinâmica molecular em uma escala de tempo de 60 ns (6 × 106 femtossegundos) também mostraram percepções significativas sobre os efeitos de ligação da axilarina com Mpro de SARS-CoV-2 por imitação de proteínas como o ambiente aquoso. A partir de cálculos de dinâmica molecular, os cálculos RMSD e RMSF indicam a estabilidade e dinâmica do melhor complexo ancorado em ambiente aquoso. As propriedades ADME e a análise de previsão de toxicidade da axilarina também a recomendaram como um candidato a medicamento seguro. Além disso, as investigações in vivo e in vitro são essenciais para garantir a atividade anti-SARS-CoV-2 de todos os compostos bioativos, particularmente a axilarina, para encorajar o uso preventivo de Centaurea jacea contra infecções por Covid-19.

Dogs naturally infected by Rangelia vitalii, Babesia canis vogeli, and Ehrlichia canis in São Paulo, Brazil / Cães naturalmente infectados por Rangelia vitalii, Babesia canis vogeli, e Ehrlichia canis em São Paulo, Brasil

Several agents can cause hemoparasitic diseases in dogs, and blood-sucking arthropods transmit these diseases. These agents can cause several clinical manifestations and, in some cases, can kill the host. Because these agents are essential in animal health, this study aims to detect the frequency of Ehrlichia canis, Rickettsia rickettsii, Anaplasma platys, and Rangelia vitalii by real-time PCR and Babesia vogeli in dogs in the southern region of the city of São Paulo, São Paulo. Of the 98 dog samples, 18 (18.4%) tested positive with real-time polymerase chain reaction for at least one studied agent. Of these 18 samples, 17 tested positive for a single agent (11.2% for B. canis vogeli, 1.02% for R. vitalii, and 5.1% for E. canis), and one showed co-infection with B. canis vogeli and R. vitalii. The results demonstrate the presence of hemoparasites in the studied animals, which can influence the quality and life expectancy of these animals. The Rangeliadetection warns small animal clinicians to include it as a differential diagnosis for hemoparasitosis.(AU)

As hemoparasitoses em cães podem ser causadas por diversos agentes, sendo essas doenças transmitidas por artrópodes hematófagos. Esses agentes podem causar diversas manifestações clínicas e, em alguns casos, podem matar o hospedeiro. Este estudo teve como objetivo detectar por PCR em tempo real a frequência de Ehrlichia canis, Rickettsia rickettsii, Anaplasma platys, Rangelia vitalii e Babesia canis vogeli em amostras de cães da zona sul da cidade de São Paulo, Brasil. Das 98 amostras de cães, 18 (18,4%) testaram positivo com reação em cadeia da polimerase em tempo real para pelo menos um agente estudado. Destas 18 amostras, 17 testaram positivo para um único agente (11,2% para B. canis vogeli, 1,02% para R. vitalii e 5,1% para E. canis), e uma apresentou coinfecção com B. canis vogeli e R. vitalii. Os resultados demonstram a presença de hemoparasitas nos animais estudados, o que pode influenciar a qualidade e a expectativa de vida desses animais. Além disso, é o primeiro relato da detecção de R. vitalli na zona sul de São Paulo e serve de alerta para os clínicos de pequenos animais incluírem esse agente como diagnóstico diferencial para as hemoparasitoses.(AU)

Canine ringworm caused by Trichophyton mentagrophytes - detection by SYBR-Green real-time PCR

Background: Dermatophytes, fungi of universal distribution, invade semi or fully keratinized structures, such as skin, fur/ hair and nails. The various species of dermatophytes are classified into three genera anamorphic: Microsporum, Trichophyton and Epidermophyton. The genus Epidermophyton includes only E. floccosum, that rarely affects animals. The main species responsible for the disease in dogs and cats are Microsporum canis, M. gypseum and Trichophyton mentagrophytes, which were characterized through conventional mycological methodology (microscopic examination with KOH and culture). Molecular methodologies, such as real-time PCR, can contribute to a rapid laboratory diagnosis, helping clinicians to initiate an early antifungal treatment. This case report describes a case of canine dermatophytosis due to Trichophyton mentagrophytes detected from a clinical sample by SYBR-Green real-time PCR. Case: A 8-year-old dog, rescued from the street, was referred to a private veterinary clinic in the city of Canoas, RS, Brazil, presenting generalized lymphadenomegaly, crusted lesions all over the body, generalized alopecia, signs of excoriation and epistaxis. Initially, were administered prednisone [1 mg/kg every 48 h, BID] and cephalexin [30 mg/kg, BID]. Weekly baths with benzoyl peroxide were also given. The therapy was not clinically successful. Wood's Lamp Test was negative. As a differential diagnosis, PCR for detection of Leishmania was negative. Complete blood count and serum biochemical assay were also performed. For mycological diagnosis, hair specimen was clarified and examined microscopically using 10% potassium hydroxide (KOH) for the visualization of chains of arthroconidia (ectothrix invasion of hair). The infected hair was plated onto MycoselTM Agar, incubated at 28°C for 15 days. Microscopy of hyphae/ conidia and macroscopic colony characteristics (colors and texture) were conducted for the differentiation of the species within the genus Microsporum and Trichophyton. In addition, real-time PCR was applied for direct analysis of the fungal DNA obtained from the hair sample. Microscopic examination was negative. The dermatophyte present in the hair sample was confirmed as Trichophyton mentagrophytes by culture and qPCR (melting-point analysis). The patient was treated with systemic itraconazole [10 mg/ kg SID - 90 days]. Twice-weekly application of 2.5 % miconazole and 2% chlorhexidine shampoo until complete cure. Discussion: Dermatophytosis is often listed as self-limiting infection; however, animal dermatophytosis can spread between pets, as well as a zoonotic transmission to humans. The literature on dermatophytosis indicates that Microsporum canis is the predominant etiological agent, followed by M. gypseum. Trichophyon mentagrophytes that appear in a lower percentage of isolation. The culture of hair, even with specific medium containing chloramphenicol and cyclohexamide, may present contaminating fungi, not related to dermatophytosis, which can inhibit or override the growth of dermatophytes. The use of real-time PCR provided a faster and specific diagnosis of dermatophytosis when compared to the conventional mycological methodology for detection and identification of T. mentagrophytes, which takes around 10 to 15 days for culture. It is possible to use this technique as an alternative diagnosis for dermatophytes associated to clinical hair samples of dogs.

A threefold approach including quantum chemical, molecular docking and molecular dynamic studies to explore the natural compounds from Centaurea jacea as the potential inhibitors for COVID-19

Abstract In the current report, we studied the possible inhibitors of COVID-19 from bioactive constituents of Centaurea jacea using a threefold approach consisting of quantum chemical, molecular docking and molecular dynamic techniques. Centaurea jacea is a perennial herb often used in folk medicines of dermatological complaints and fever. Moreover, anticancer, antioxidant, antibacterial and antiviral properties of its bioactive compounds are also reported. The Mpro (Main proteases) was docked with different compounds of Centaurea jacea through molecular docking. All the studied compounds including apigenin, axillarin, Centaureidin, Cirsiliol, Eupatorin and Isokaempferide, show suitable binding affinities to the binding site of SARS-CoV-2 main protease with their binding energies -6.7 kcal/mol, -7.4 kcal/mol, -7.0 kcal/mol, -5.8 kcal/mol, -6.2 kcal/mol and -6.8 kcal/mol, respectively. Among all studied compounds, axillarin was found to have maximum inhibitor efficiency followed by Centaureidin, Isokaempferide, Apigenin, Eupatorin and Cirsiliol. Our results suggested that axillarin binds with the most crucial catalytic residues CYS145 and HIS41 of the Mpro, moreover axillarin shows 5 hydrogen bond interactions and 5 hydrophobic interactions with various residues of Mpro. Furthermore, the molecular dynamic calculations over 60 ns (6×106 femtosecond) time scale also shown significant insights into the binding effects of axillarin with Mpro of SARS-CoV-2 by imitating protein like aqueous environment. From molecular dynamic calculations, the RMSD and RMSF computations indicate the stability and dynamics of the best docked complex in aqueous environment. The ADME properties and toxicity prediction analysis of axillarin also recommended it as safe drug candidate. Further, in vivo and in vitro investigations are essential to ensure the anti SARS-CoV-2 activity of all bioactive compounds particularly axillarin to encourage preventive use of Centaurea jacea against COVID-19 infections.

Resumo No presente relatório, estudamos os possíveis inibidores de Covid-19 de constituintes bioativos de Centaurea jacea usando uma abordagem tripla que consiste em técnicas de química quântica, docking molecular e dinâmica molecular. Centaurea jacea é uma erva perene frequentemente usada em remédios populares de doenças dermatológicas e febre. Além disso, as propriedades anticâncer, antioxidante, antibacteriana e antiviral de seus compostos bioativos também são relatadas. A Mpro (proteases principais) foi acoplada a diferentes compostos de Centaurea jacea por meio de docking molecular. Todos os compostos estudados, incluindo apigenina, axilarina, Centaureidina, Cirsiliol, Eupatorina e Isokaempferide, mostram afinidades de ligação adequadas ao sítio de ligação da protease principal SARS-CoV-2 com suas energias de ligação -6,7 kcal / mol, -7,4 kcal / mol, - 7,0 kcal / mol, -5,8 kcal / mol, -6,2 kcal / mol e -6,8 kcal / mol, respectivamente. Dentre todos os compostos estudados, a axilarina apresentou eficiência máxima de inibidor, seguida pela Centaureidina, Isokaempferida, Apigenina, Eupatorina e Cirsiliol. Nossos resultados sugeriram que a axilarina se liga aos resíduos catalíticos mais cruciais CYS145 e HIS41 do Mpro, além disso a axilarina mostra 5 interações de ligações de hidrogênio e 5 interações hidrofóbicas com vários resíduos de Mpro. Além disso, os cálculos de dinâmica molecular em uma escala de tempo de 60 ns (6 × 106 femtossegundos) também mostraram percepções significativas sobre os efeitos de ligação da axilarina com Mpro de SARS-CoV-2 por imitação de proteínas como o ambiente aquoso. A partir de cálculos de dinâmica molecular, os cálculos RMSD e RMSF indicam a estabilidade e dinâmica do melhor complexo ancorado em ambiente aquoso. As propriedades ADME e a análise de previsão de toxicidade da axilarina também a recomendaram como um candidato a medicamento seguro. Além disso, as investigações in vivo e in vitro são essenciais para garantir a atividade anti-SARS-CoV-2 de todos os compostos bioativos, particularmente a axilarina, para encorajar o uso preventivo de Centaurea jacea contra infecções por Covid-19.

Study of resveratrol against bone loss by using in-silico and in-vitro methods / Estudo do resveratrol contra a perda óssea usando métodos in silico e in vitro

Abstract By applying the in-silico method, resveratrol was docked on those proteins which are responsible for bone loss. The Molecular docking data between the resveratrol and Receptor activator of nuclear factor-kappa-Β ligand [RANKL] receptors proved that resveratrol binds tightly to the receptors, showed the highest binding affinities of −6.9, −7.6, −7.1, −6.9, −6.7, and −7.1 kcal/mol. According to in-vitro data, Resveratrol reduced the osteoclasts after treating Marrow-Derived Macrophages [BMM] with Macrophage colony-stimulating factor [MCSF] 20ng / ml and RANKL 50ng / ml, with different concentrations of resveratrol (2.5, 10 μg / ml) For 7 days, the cells were treated with MCSF (20 ng / ml) and RANKL (40 ng / ml) together with concentrated trimethyl ether and resveratrol (2.5, 10 μg / ml) within 12 hours. Which, not affect cell survival. After fixing osteoclast cells with formaldehyde fixative on glass coverslip followed by incubation with 0.1% Triton X-100 in PBS for 5 min and after that stain with rhodamine phalloidin staining for actin and Hoechst for nuclei. Fluorescence microscopy was performed to see the distribution of filaments actin [F.actin]. Finally, resveratrol reduced the actin ring formation. Resveratrol is the best bioactive compound for drug preparation against bone loss.

Resumo Com a aplicação do método in-silico, o resveratrol foi ancorado nas proteínas responsáveis ​​pela perda óssea. Os dados de docking molecular entre o resveratrol e o ligante do receptor ativador do fator nuclear kappa-Β [Receptor Activator of Nuclear Factor kappa-B Ligant (RANKL)] provaram que o resveratrol se liga fortemente aos receptores, mostraram as afinidades de ligação mais altas de −6,9, −7,6, −7,1, −6,9, - 6,7 e -7,1 kcal / mol. De acordo com dados in-vitro, o resveratrol reduziu os osteoclastos após o tratamento de macrófagos derivados da medula óssea [Bone Marrow-derived Macrophage (BMM)] com fator estimulador de colônias de macrófagos [Macrophage Colony-Stimulating Factor (MCSF)] 20ng / ml e RANKL 50ng / ml, com diferentes concentrações de resveratrol (2,5, 10 μg / ml). Durante sete dias, as células foram tratadas com MCSF (20 ng / ml) e RANKL (40 ng / ml) juntamente com éter trimetílico concentrado e resveratrol (2,5, 10 μg / ml) em 12 horas, processo que não afeta a sobrevivência celular. Após a fixação de células de osteoclastos com fixador de formaldeído em lamela de vidro seguido de incubação com 0,1% Triton X-100 em PBS por 5 min, foi realizado posteriormente o procedimento para corar com rodamina faloidina a actina e Hoechst os núcleos. A microscopia de fluorescência foi realizada para ver a distribuição dos filamentos de actina [F.actina]. Finalmente, o resveratrol reduziu a formação do anel de actina. O resveratrol é o melhor composto bioativo para o preparo de medicamentos contra a perda óssea.

Molecular survey of hemotropic mycoplasmas in crab-eating raccoons (Procyon cancrivorus) in southern Brazil / Levantamento molecular de micoplasma hemotrópico em mão-pelada (Procyon cancrivorus) do sul do Brasil

Hemoplasmas are non-cultivable bacterial parasites of erythrocytes that infect domestic and wild animals, as well as humans. Their means of transmission and pathogenesis remain contentious issues and difficult to evaluate in wild animals. Procyon cancrivorus is a South American carnivore and occurs in all Brazilian biomes. In this study, we aimed to investigate occurrences of hemoplasmas infecting P. cancrivorus and to identify their 16S rRNA gene, in southern Brazil. DNA was extracted from spleen and blood samples of P. cancrivorus (n = 9) from different locations. Hemoplasma DNA was detected in six samples, based on 16S rRNA gene amplification and phylogenetic analysis. Four of the six sequences belonged to the "Mycoplasma haemofelis group", which is closely related to genotypes detected in Procyon lotor from the USA; one was within the "Mycoplasma suis group", closely related to "Candidatus Mycoplasma haemominutum"; and one was within the intermediate group between these clusters. Thus, these sequences showed that the molecular identity of hemoplasmas in the population studied was very variable. In five positive animals, Amblyomma aureolatum ticks and a flea (Ctenocephalides felis felis) were collected. The present study describes the first molecular detection of mycoplasmas in P. cancrivorus.(AU)

Os micoplasmas hemotrópicos (hemoplasmas) são parasitas bacterianos não-cultiváveis de eritrócitos que infectam tanto animais domésticos e selvagens, como seres humanos. A transmissão e a patogênese são discutíveis e difíceis de avaliar em animais selvagens. O mão pelada (Procyon cancrivorus) é um carnívoro Sul-americano, que ocorre em todos os biomas brasileiros. O objetivo do presente estudo é o de investigar a ocorrência de hemoplasmas infectando P. cancrivorus e identificar seu gene 16S rRNA no Sul do Brasil. O DNA foi extraído do baço e amostras de sangue de P. cancrivorus (n= 9). O DNA de hemoplasma foi detectado em seis amostras, com base na amplificação do gene 16S rRNA e na análise filogenética. Quatro das seis sequências pertencem ao "Grupo Mycoplasma haemofelis", que estão intimamente relacionadas aos genótipos detectados no Procyon lotor dos EUA; uma dentro do "Grupo Mycoplasma suis", que está intimamente relacionado ao "Candidatus Mycoplasma haemominutum", e uma dentro do grupo intermediário entre esses clusters, mostrando assim que há uma diversidade genética de hemoplasmas na população estudada. Em cinco animais positivos, foram coletados carrapatos Amblyomma aureolatum e uma pulga Ctenocephalides felis. O presente estudo traz a primeira detecção molecular de micoplasmas em P. cancrivorus.(AU)

Molecular Phylogenetics of Physa acuta (Pulmonata: Basommatophora): an Invasive species in Central Punjab Pakistan

Abstract Physids belong to Class Gastropoda; belong to Phylum Mollusca and being bioindicators, intermediate hosts of parasites and pests hold a key position in the ecosystem. There are three species of Genus Physa i.e. P. fontinalis, Physa acuta and P. gyrina water bodies of Central Punjab and were characterized on the basis of molecular markers High level of genetic diversity was revealed by polymorphic RAPD, however SSR markers were not amplified. The multivariate analysis revealed polymorphism ranging from 9.09 percent to 50 percent among the three Physid species. Total number of 79 loci were observed for the three species under study and 24 loci were observed to be polymorphic. These RAPD fragment(s) can be developed into co dominant markers (SCAR) by cloning and can be further sequenced for the development of the Physa species specific markers to identify the introduced and native species in Pakistan.

Resumo Os físidos pertencem à classe Gastropoda; pertencem ao filo Mollusca e, sendo bioindicadores, hospedeiros intermediários de parasitas e pragas, ocupam uma posição-chave no ecossistema. Existem três espécies do gênero Physa, ou seja, P. fontinalis, Physa acuta e P. gyrina em corpos dágua do Punjab Central e foram caracterizadas com base em marcadores moleculares. Alto nível de diversidade genética foi revelado por RAPD polimórfico, no entanto os marcadores SSR não foram amplificados. A análise multivariada revelou polimorfismo variando de 9,09% a 50% entre as três espécies de Physid. Um número total de 79 loci foi observado para as três espécies em estudo e 24 loci foram observados como polimórficos. Esses fragmentos RAPD podem ser desenvolvidos em marcadores codominantes (SCAR) por clonagem e podem ser posteriormente sequenciados para o desenvolvimento de marcadores específicos da espécie Physa para identificar as espécies introduzidas e nativas no Paquistão.

Morphological and molecular characterization of Contracaecum australe (Nematoda: Anisakidae) parasitizing Phalacrocorax brasilianus (Aves: Phalacrocoracidae) on the north coast of Brazil / Caracterização morfológica e molecular de Contracaecum australe (Nematoda: Anisakidae) parasitando Phalacrocorax brasilianus (Aves: Phalacrocoracidae) no litoral norte do Brasil

Abstract For the first time in Brazil, Contracaecum australe is recorded parasitizing Phalacrocorax brasilianus (Aves, Suliformes, Phalacrocoracidae) from the Marine Extractive Reserve of Soure on Marajó Island, Brazilian Amazon. Its morphology revealed a body with a transversally striated cuticle, smooth or slightly cleft interlabia, lips with auricles, labial papillae, and conspicuous amphids. In males, the presence of the median papilla on the upper lip of the cloaca and spicules that reach almost half of the body of the parasite. These morphological characters, added to the number and distribution of the pre- and postcloacal papillae of the male specimens, and supported by the molecular phylogeny from the analysis of the ITS-1, 5.8S and ITS-2 genes, allowed the identification of these parasites.

Resumo Pela primeira vez no Brasil, Contracaecum australe é registrado parasitando Phalacrocorax brasilianus (Aves, Suliformes, Phalacrocoracidae) da Reserva Extrativista Marinha de Soure na Ilha de Marajó, Amazônia brasileira. Sua morfologia revelou corpo com cutícula estriada transversalmente, interlábios lisos ou levemente fendidos, lábios com aurículas, papilas labiais e anfídeos conspícuos. Nos machos, observa-se a presença da papila mediana no lábio superior da cloaca e espículos que atingem quase a metade do corpo do parasito. Esses caracteres morfológicos, somados ao número e distribuição das papilas pré e pós-cloacais dos espécimes machos, e apoiados pela filogenia molecular a partir da análise dos genes ITS-1, 5.8S e ITS-2, permitiram a identificação desses parasitos.

Molecular Phylogenetics of Physa acuta (Pulmonata: Basommatophora): an invasive species in Central Punjab Pakistan / Molecular Phylogenetics of Physa acuta (Pulmonata: Basommatophora): uma espécie invasora no centro de Punjab, Paquistão

Physids belong to Class Gastropoda; belong to Phylum Mollusca and being bioindicators, intermediate hosts of parasites and pests hold a key position in the ecosystem. There are three species of Genus Physa i.e. P. fontinalis, Physa acuta and P. gyrina water bodies of Central Punjab and were characterized on the basis of molecular markers High level of genetic diversity was revealed by polymorphic RAPD, however SSR markers were not amplified. The multivariate analysis revealed polymorphism ranging from 9.09 percent to 50 percent among the three Physid species. Total number of 79 loci were observed for the three species under study and 24 loci were observed to be polymorphic. These RAPD fragment(s) can be developed into co dominant markers (SCAR) by cloning and can be further sequenced for the development of the Physa species specific markers to identify the introduced and native species in Pakistan.

Os físidos pertencem à classe Gastropoda; pertencem ao filo Mollusca e, sendo bioindicadores, hospedeiros intermediários de parasitas e pragas, ocupam uma posição-chave no ecossistema. Existem três espécies do gênero Physa, ou seja, P. fontinalis, Physa acuta e P. gyrina em corpos d’água do Punjab Central e foram caracterizadas com base em marcadores moleculares. Alto nível de diversidade genética foi revelado por RAPD polimórfico, no entanto os marcadores SSR não foram amplificados. A análise multivariada revelou polimorfismo variando de 9,09% a 50% entre as três espécies de Physid. Um número total de 79 loci foi observado para as três espécies em estudo e 24 loci foram observados como polimórficos. Esses fragmentos RAPD podem ser desenvolvidos em marcadores codominantes (SCAR) por clonagem e podem ser posteriormente sequenciados para o desenvolvimento de marcadores específicos da espécie Physa para identificar as espécies introduzidas e nativas no Paquistão.

The molecular investigations on the subgenus Artemisia Less. of the genus Artemisia L. (Asteraceae) in Turkey / Investigações moleculares sobre o subgênero Artemisia Less. do gênero Artemisia L. (Asteraceae) na Turquia

Abstract The genus Artemisia L. of the family Asteraceae is systematically very complex. The aim of this study was to evaluate taxonomic positions of taxa of the subgenus Artemisia belonging to the genus Artemisia in Turkey using some molecular techniques. In this molecular study, 44 individuals belong to 14 species of the subgenus Artemisia were examined. Analyses were performed on the combined dataset using maximum parsimony, maximum likelihood and Bayesian inference and Molecular parameters obtained from co-evaluations of sequences of the psbA-trnH, ITS and ETS regions of examined individuals were used in the phylogenetic tree drawing. According to the results of this study, two molecular groups have been formed based on the DNA sequence similarity of the species, but there are no obvious morphological characters corresponding to two molecular groups. There is no also agreement between the two molecular groups and the two morphological groups formed according to the hairiness condition of the receptacle of species. Due to the lack of molecular significance of their receptacles with or without hair, dividing of the subgenus Artemisia species into new subgenera or sections was not considered appropriate. Likewise, it has been found that with or without hair on the corolla lobes of the central hermaphrodite disc flowers have no molecular significance. It was found that there were no gene flow and hybridization between the 14 species of the subgenus Artemisia and these 14 species were found completed their speciation. This study is important as it is the first molecular based study relating with belong to subgenus Artemisia species growing naturally in Turkey. In addition, new haplotypes related to the populations of Turkey belonging to the subgenus Artemisia taxa were reported by us for the first time and added to the GenBank database.

Resumo O gênero Artemisia L. da família Asteraceae é sistematicamente muito complexo. O objetivo deste estudo foi avaliar as posições taxonômicas de táxons do subgênero Artemisia pertencentes ao gênero Artemisia na Turquia usando algumas técnicas moleculares. Neste estudo molecular, 44 indivíduos pertencentes a 14 espécies do subgênero Artemisia foram examinados. As análises foram realizadas no conjunto de dados combinado usando máxima parcimônia, máxima verossimilhança e inferência bayesiana e parâmetros moleculares obtidos a partir de coavaliações de sequências das regiões psbA-trnH, ITS e ETS de indivíduos examinados foram usados ​​no desenho da árvore filogenética. De acordo com os resultados deste estudo, dois grupos moleculares foram formados com base na similaridade da sequência de DNA das espécies, mas não há caracteres morfológicos óbvios correspondentes a dois grupos moleculares. Também não há concordância entre os dois grupos moleculares e os dois grupos morfológicos formados de acordo com a condição de pilosidade do receptáculo da espécie. Devido à falta de significado molecular de seus receptáculos com ou sem cabelo, a divisão das espécies do subgênero Artemisia em novos subgêneros ou seções não foi considerada apropriada. Da mesma forma, verificou-se que com ou sem cabelo nos lobos da corola das flores do disco hermafrodita central não tem significado molecular. Constatou-se que não houve fluxo gênico e hibridização entre as 14 espécies do subgênero Artemisia e essas 14 espécies concluíram sua especiação. Este estudo é importante porque é o primeiro estudo de base molecular relacionado com espécies pertencentes ao subgênero Artemisia crescendo naturalmente na Turquia. Além disso, novos haplótipos relacionados às populações da Turquia pertencentes ao subgênero Artemisia taxa foram relatados por nós pela primeira vez e adicionados ao banco de dados do GenBank.

Molecular Phylogenetics of Physa acuta (Pulmonata: Basommatophora): an invasive species in Central Punjab Pakistan / Molecular Phylogenetics of Physa acuta (Pulmonata: Basommatophora): uma espécie invasora no centro de Punjab, Paquistão

Physids belong to Class Gastropoda; belong to Phylum Mollusca and being bioindicators, intermediate hosts of parasites and pests hold a key position in the ecosystem. There are three species of Genus Physa i.e. P. fontinalis, Physa acuta and P. gyrina water bodies of Central Punjab and were characterized on the basis of molecular markers High level of genetic diversity was revealed by polymorphic RAPD, however SSR markers were not amplified. The multivariate analysis revealed polymorphism ranging from 9.09 percent to 50 percent among the three Physid species. Total number of 79 loci were observed for the three species under study and 24 loci were observed to be polymorphic. These RAPD fragment(s) can be developed into co dominant markers (SCAR) by cloning and can be further sequenced for the development of the Physa species specific markers to identify the introduced and native species in Pakistan.(AU)

Os físidos pertencem à classe Gastropoda; pertencem ao filo Mollusca e, sendo bioindicadores, hospedeiros intermediários de parasitas e pragas, ocupam uma posição-chave no ecossistema. Existem três espécies do gênero Physa, ou seja, P. fontinalis, Physa acuta e P. gyrina em corpos dágua do Punjab Central e foram caracterizadas com base em marcadores moleculares. Alto nível de diversidade genética foi revelado por RAPD polimórfico, no entanto os marcadores SSR não foram amplificados. A análise multivariada revelou polimorfismo variando de 9,09% a 50% entre as três espécies de Physid. Um número total de 79 loci foi observado para as três espécies em estudo e 24 loci foram observados como polimórficos. Esses fragmentos RAPD podem ser desenvolvidos em marcadores codominantes (SCAR) por clonagem e podem ser posteriormente sequenciados para o desenvolvimento de marcadores específicos da espécie Physa para identificar as espécies introduzidas e nativas no Paquistão.(AU)

Morphology and molecular phylogeny of trypanorhynchid metacestodes infecting commercial fish of the Mediterranean Sea / Morfologia e filogenia molecular das metacestodes de tripanorhynchid que infectam os peixes comerciais do Mar Mediterrâneo

Members of the order Trypanorhyncha are cestode parasites that are frequently found infecting the muscles of several marine fish species, affecting fish health, and resulting in consumers' rejection of fish. Fifty-two specimens of marine fish were freshly caught throughout the year 2020 from boat landing sites at the Alexandria coast along the Mediterranean Sea in Egypt, including the grey trigger fish Balistes carolinensis (F: Balistidae); the mottled grouper Mycteroperca rubra (F: Serranidae) and the common sole Solea vulgaris (F: Soleidae). Blastocysts were isolated and ruptured; the generated pleurocerci were described morphologically and morphometrically by light and scanning electron microscopy. Also, multiple-sequence alignment was performed, and a phylogenetic tree was constructed following maximum likelihood analysis of the 18s and 28s ribosomal RNA sequences of the recovered worms. Thirty fish were infected; the infection was recorded as blastocysts embedded in fish flesh. Three different parasitic species were recovered and classified morphologically as Gymnorhynchus isuri, Pseudotobothrium dipsacum and Heteronybelinia estigmena. The taxonomic position of these parasites was justified by molecular analysis of their 18s and 28s rRNAs, which revealed high percentages of homology with species recovered from the GenBank. The accession numbers ON157059, ON139663 and ON139662 were respectively assigned to the recovered parasites after their deposition in GenBank. The results obtained from the molecular analyses confirmed the morphological records of the recovered parasites. Since metacestodes are found in the musculature of infected fish specimens, it is necessary to remove these areas in the commercialization of fish.

Os membros da ordem Trypanorhyncha são parasitas de cestóides que são freqüentemente encontrados infectando os músculos de várias espécies de peixes marinhos, afetando a saúde dos peixes e resultando na rejeição do peixe por parte dos consumidores. Cinqüenta e dois espécimes de peixes marinhos foram capturados recentemente durante todo o ano de 2020 nos locais de desembarque de barcos na costa de Alexandria ao longo do Mar Mediterrâneo, no Egito, incluindo o peixe de gatilho cinzento Balistes carolinensis (F: Balistidae); a garoupa mosqueada Mycteroperca rubra (F: Serranidae) e o linguado comum Solea vulgaris (F: Soleidae). Os blastocistos foram isolados e rompidos; os pleurocistos gerados foram descritos morfologicamente e morfometricamente por microscopia eletrônica de luz e varredura. Além disso, foi realizado o alinhamento de sequências múltiplas e uma árvore filogenética foi construída seguindo a análise de máxima probabilidade das sequências de RNA ribossômico de 18s e 28s dos vermes recuperados. Trinta peixes foram infectados; a infecção foi registrada como blastocistos embutidos na carne do peixe. Três espécies diferentes de parasitas foram recuperadas e classificadas morfologicamente como Gymnorhynchus isuri, Pseudotobothrium dipsacum e Heteronybelinia estigmena. A posição taxonômica desses parasitas foi justificada pela análise molecular de seus rRNAs de 18 e 28 anos, que revelou altas porcentagens de homologia com espécies recuperadas do GenBank. Os números de acesso ON157059, ON139663 e ON139662 foram respectivamente atribuídos aos parasitas recuperados após sua deposição no GenBank. Os resultados obtidos a partir das análises moleculares confirmaram os registros morfológicos dos parasitas recuperados. Como as metacestodes são encontradas na musculatura dos espécimes de peixes infectados, é necessário remover estas áreas na comercialização dos peixes.

Molecular detection of Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Sarcocystis spp in tissues of Sus scrofa slaughtered in southern Brazil / Detecção molecular de Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Sarcocystis spp. em tecidos de Sus scrofa abatidos no Sul do Brasil

The aim of this study was to determine the presence of deoxyribonucleic acid (DNA) from Toxoplasma gondii, Sarcocystis spp. and Neospora caninum, in tissues of wild boars slaughtered in southern Brazil. A total of 156 samples were collected from different organs of 25 wild boars, and DNA from at least one of the protozoa investigated was detected in 79 samples. To differentiate between infectious agents, restriction fragment length polymorphism was performed using the restriction enzymes DdeI and HpaII. For N. caninum, conventional PCR was performed with specific primers. The DNA of at least one of the studied pathogens was detected in each animal: 26.58% for T. gondii, 68.36% for Sarcocystis spp. and 5.06% for N. caninum. Coinfection between T. gondii and Sarcocystis spp. occurred in 14 animals, between T. gondii and N. caninum in only one male animal, between Sarcocystis spp. and N. caninum in a female, while co-infection with the three agents was equally observed in only one male animal. Considering the high frequency of detection and its zoonotic risk, especially T. gondii, it appears that wild boars can be potential sources of transmission of infectious agents and the adoption of monitoring measures in these populations should be prioritized.(AU)

O objetivo deste estudo foi determinar a presença de ácido desoxirribonucléico (DNA) de Toxoplasma gondii, Sarcocystis spp. e Neospora caninum, em tecidos de javalis abatidos no sul do Brasil. Foram coletadas 156 amostras de diferentes órgãos de 25 javalis, sendo detectado o DNA de pelo menos um dos protozoários pesquisados em 79 amostras. Para diferenciar entre os agentes infecciosos, o polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição, foi realizado usando-se as enzimas de restrição DdeI e HpaII. Para N. caninum, a PCR convencional foi realizada com "primers" específicos. O DNA de pelo menos um dos patógenos estudados foi detectado em cada animal: 26,58% para T. gondii, 68,36% para Sarcocystis spp. e 5,06% para N. caninum. Coinfecção entre T. gondii e Sarcocystis spp. ocorreu em 14 animais; entre T. gondii e N. caninum em apenas um animal macho; entre Sarcocystis spp. e N. caninum em uma fêmea, enquanto a coinfecção com os três agentes foi observada igualmente em apenas um animal macho. Considerando-se a alta frequência de detecção e seu risco zoonótico, especialmente T. gondii, constata-se que os javalis podem ser potenciais fontes de transmissão de agentes infecciosos, e a adoção de medidas de monitoramento nessas populações devem ser priorizadas.(AU)

Molecular Phylogenetics of Physa acuta (Pulmonata: Basommatophora): an Invasive species in Central Punjab Pakistan / Molecular Phylogenetics of Physa acuta (Pulmonata: Basommatophora): uma espécie invasora no centro de Punjab, Paquistão

Abstract Physids belong to Class Gastropoda; belong to Phylum Mollusca and being bioindicators, intermediate hosts of parasites and pests hold a key position in the ecosystem. There are three species of Genus Physa i.e. P. fontinalis, Physa acuta and P. gyrina water bodies of Central Punjab and were characterized on the basis of molecular markers High level of genetic diversity was revealed by polymorphic RAPD, however SSR markers were not amplified. The multivariate analysis revealed polymorphism ranging from 9.09 percent to 50 percent among the three Physid species. Total number of 79 loci were observed for the three species under study and 24 loci were observed to be polymorphic. These RAPD fragment(s) can be developed into co dominant markers (SCAR) by cloning and can be further sequenced for the development of the Physa species specific markers to identify the introduced and native species in Pakistan.

Resumo Os físidos pertencem à classe Gastropoda; pertencem ao filo Mollusca e, sendo bioindicadores, hospedeiros intermediários de parasitas e pragas, ocupam uma posição-chave no ecossistema. Existem três espécies do gênero Physa, ou seja, P. fontinalis, Physa acuta e P. gyrina em corpos d'água do Punjab Central e foram caracterizadas com base em marcadores moleculares. Alto nível de diversidade genética foi revelado por RAPD polimórfico, no entanto os marcadores SSR não foram amplificados. A análise multivariada revelou polimorfismo variando de 9,09% a 50% entre as três espécies de Physid. Um número total de 79 loci foi observado para as três espécies em estudo e 24 loci foram observados como polimórficos. Esses fragmentos RAPD podem ser desenvolvidos em marcadores codominantes (SCAR) por clonagem e podem ser posteriormente sequenciados para o desenvolvimento de marcadores específicos da espécie Physa para identificar as espécies introduzidas e nativas no Paquistão.

Cytogenetic abnormalities in patients with hematological malignancies in Lahore city, Pakistan / Anormalidades citogenéticas em pacientes com neoplasias hematológicas na cidade de Lahore, Paquistão

Hematological and hematopoietic cells malignancies of the genes and hematopoietic cells are associated with the genetic mutation, often at the chromosomal level. The standard cytogenetic study is widely accepted as one of the main diagnostics and prognostic determinants in patients. Therefore, the current descriptive and cross sectional study sought to determine the cytogenetic analysis of frequent hematological malignancies in Pakistan. A total of 202 peripheral bone marrow or blood samples from patients with benign and malignant hematological malignancy were taken using a conventional G-banding technique. Among enrolled patients, the mean age was 21.5 years ± 23.4, and gender-wise distribution showed a marked predominance of the male 147 (73%) population compared to the female 55 (27%). Patients in the age group (2-10 years) had the highest frequency, 48 (24%), of hematological neoplasms, followed by age (11-20 years) with 40 (20%). Normal karyotypes (46, XX/46, XY) was found in 51% (n=103) patients. Furthermore, the frequency of complex karyotype was 30 (15%), while normal was seen in 171 (85%) patients. Pre-B Acute Lymphoblastic Leukemia (Pre-B ALL) was the most prevalent malignancy of 66 (33%), followed by Chronic Myelogenous Leukemia (CML) of 41 (20%) and Acute Lymphocytic Leukemia of 29 (14%). Translocation was the most prevalent 50 (25%), followed by hypotriploidy 14 (7%) and monosomy 8 (4%) on chromosome aberration analysis. In addition, t(9:22) translocation was found to be 20 (10%) in CML, with the majority in the age group (31-40 years). This study recommends that karyotyping should be tested frequently in hematological conditions because it may provide insight into the relative chromosomal changes associated with particular malignancies.

As neoplasias hematológicas e de células hematopoiéticas dos genes e as células hematopoiéticas estão associadas à mutação genética, geralmente em nível cromossômico. O estudo citogenético padrão é amplamente aceito como um dos principais determinantes diagnósticos e prognósticos em pacientes. Portanto, o presente estudo descritivo e transversal buscou determinar a análise citogenética de neoplasias hematológicas frequentes no Paquistão. Um total de 202 amostras de medula óssea periférica ou sangue de pacientes com malignidade hematológica benigna e maligna foi coletado usando uma técnica convencional de banda G. Entre os pacientes inscritos, a média de idade foi de 21,5 anos ± 23,4, e a distribuição por gênero mostrou uma marcada predominância da população masculina de 147 (73%) em comparação com a feminina de 55 (27%). Pacientes na faixa etária (2-10 anos) tiveram a maior frequência, 48 (24%), de neoplasias hematológicas, seguida da idade (11-20 anos) com 40 (20%). Cariótipos normais (46, XX / 46, XY) foram encontrados em 51% (n = 103) dos pacientes. Além disso, a frequência de cariótipo complexo foi de 30 (15%), enquanto normal foi observada em 171 (85%) pacientes. Leucemia linfoblástica aguda pré-B (LLA Pré-B) foi a doença maligna mais prevalente de 66 (33%), seguida por leucemia mieloide crônica (LMC) de 41 (20%) e leucemia linfocítica aguda de 29 (14%). A translocação foi o 50 mais prevalente (25%), seguido por hipotriploidia 14 (7%) e monossomia 8 (4%) na análise de aberração cromossômica. Além disso, a translocação t (9:22) encontrada foi de 20 (10%) na LMC, com a maioria na faixa etária (31-40 anos). Este estudo recomenda que o cariótipo deve ser testado com frequência em condições hematológicas porque pode fornecer informações sobre as alterações cromossômicas relativas associadas a doenças malignas específicas.

Utilization of Biotechnology, Neurotransmitter and Cytogenetic Indices in Selecting Pigeon Breeds

Investigations into LDH-A and DR-D4 genes polymorphism, neurotransmitter values and cytogenetic indices of 3 sexed pigeon breeds; non-racing pigeons, (wild rock), racing long distances pigeons (Jan Aarden) and racing short distances pigeons (Janssen) have been performed. The long-distances pigeon showed the highest brain neurotransmitters concentration (p<0.001) among pigeon breeds. Both LDH-A and DR-D4 genes polymorphism indicate the presence of different biodiversity values among pigeon breeds. The variations appeared on the position length 389bp for LDH-A polymorphism, and on two positions length of 418bp and 524bp for DR-D4 polymorphism of long distances male pigeon indicate the presence of unique diversity and overall differences in the amino acids structure in this breed. The protein sequence of both genes showed that in the position of 60 for LDH-A gene the amino acid K (lys) was converted to E (glu), while, in the positions of 117 and 153 for DR-D4 gene the amino acid R (arg) and L (leu) were converted to S (ser) and F (phe) only in long distances male pigeon compared to the other breeds. Moreover, there were slight differences in cytogenetic indices detected among the three pigeon breeds. It can be concluded that both DR-D4 and LDH-A genes polymorphism and neurotransmitters estimations in the brain tissue of racing pigeon would be useful indices for the differentiation and genetic characterization of pigeon breeds and provide a foundation for developing sustainable genetic improvement and conservation programs of the breeding and selecting racing pigeon breeders.(AU)