First report of complete albinism in Mazama americana (Erxleben, 1777) in the Biological Reserve of Tapirapé, Oriental Amazon, Brazil

Albinism is a genetic condition that results in total hypopigmentation of the eyes, fur, skin, hair, scales, and feathers of an organism. Albinism might result in a selective disadvantage for affected animals. Cases of albinism have been previously recorded in Neotropical vertebrates, such as reptiles, mammals, birds, and fish. However, observing albinism in a wild population is still considered to be a rare event. This paper reports a unique case of complete albinism in a red-brocket deer (Mazama americana) living in the Brazilian Amazon rainforest. The individual was observed within the Biological Reserve of Pará State, one of the most deforested regions of the Brazilian Amazon. The survival of the albino red-brocket deer in the wild can be related to mechanisms of apostatic selection, which theorize the survival of individual prey animals whose mutations make them less likely to be attacked by predators. In other words, the more different a prey animal is from others, the less likely it will be targeted by predators. The high abundance prey animals within the Biological Reserve of Tapirapé seems to support this prediction. This report exemplifies the importance of monitoring the biodiversity and promoting the conservation of favorable habitats to support species multiplicity in highly fragmented regions, as in the Brazilian Amazon.

First report of complete albinism in Mazama americana (Erxleben, 1777) in the Biological Reserve of Tapirapé, Oriental Amazon, Brazil EN

Albinism is a genetic condition that results in total hypopigmentation of the eyes, fur, skin, hair, scales, and feathers of an organism. Albinism might result in a selective disadvantage for affected animals. Cases of albinism have been previously recorded in Neotropical vertebrates, such as reptiles, mammals, birds, and fish. However, observing albinism in a wild population is still considered to be a rare event. This paper reports a unique case of complete albinism in a red-brocket deer (Mazama americana) living in the Brazilian Amazon rainforest. The individual was observed within the Biological Reserve of Pará State, one of the most deforested regions of the Brazilian Amazon. The survival of the albino red-brocket deer in the wild can be related to mechanisms of apostatic selection, which theorize the survival of individual prey animals whose mutations make them less likely to be attacked by predators. In other words, the more different a prey animal is from others, the less likely it will be targeted by predators. The high abundance prey animals within the Biological Reserve of Tapirapé seems to support this prediction. This report exemplifies the importance of monitoring the biodiversity and promoting the conservation of favorable habitats to support species multiplicity in highly fragmented regions, as in the Brazilian Amazon.(AU)

Avaliação do acetato de melengestrol (MGA) na sincronização do estro em fêmeas de veado-mão-curta (Mazama nana) e veado-roxo (Mazama nemorivaga): estudo piloto / Assessment of melengestrol acetate on estrus synchronization in female of Brazilian dwarf brocket deer and Amazonian brown brocket deer: pilot study

A introdução de dispositivos intravaginais em protocolos tradicionais de sincronização do estro (SE) exige contenção física e/ou química, o que pode resultar em estresse e efeitos negativos na fisiologia reprodutiva de animais selvagens. Portanto, o uso de protocolos não invasivos pode ser mais eficaz para o manejo da reprodução ex situ. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do acetato de melengestrol (MGA), na SE de uma fêmea de veado-mão-curta (Mazama nana) e uma de veado-roxo (Mazama nemorivaga). Ambas receberam uma aplicação via intramuscular de 0,25 mg de benzoato de estradiol (Sincrodiol® ) no dia 0 (D0). Entre o D0 e o D7, foi administrado 1 mg/animal/dia de MGA® Premix fracionado em duas porções (0,5 mg pela manhã e 0,5 mg a tarde), misturadas com banana. No D8, um análogo de PGF2α (Cloprostenol - Ciosin® ) foi administrado via intramuscular. Após o tratamento, o estro comportamental (EC) foi avaliado com auxílio de um macho da respectiva espécie desde D9 a D13, primeiramente a cada seis horas e, após o início do EC, a cada quatro horas. As duas fêmeas apresentaram sinais de EC nos dias 12 e 13. Na espécie Mazama nana, o EC teve uma duração aproximada de 16 horas e, na espécie Mazama nemorivaga, 20 horas. Os resultados obtidos neste estudo sugerem a eficácia da dose de 1,0 mg/animal/dia de MGA, fracionada em duas doses, na manipulação estral em fêmeas de veado-mão-curta e veado-roxo, uma vez que ambas demonstraram EC quatro dias após o protocolo de sincronização proposto.(AU)

The introduction of intravaginal devices in traditional estrus synchronization protocols requires physical and/or chemical restraint, which can result in stress and negative effects on the reproductive physiology of wild animals. Therefore, the use of non-invasive protocols might be more effective for the reproductive management ex situ. The objective of this study was to evaluate the efficacy of the melengestrol acetate (MGA) for estrus synchronization of two females: one deer-short-hand (Mazama nana) and one deer-purple (Mazama nemorivaga). Both were given an application of estradiol benzoate (Sincrodiol® ) on day 0 (D0). From D0 to D7, 1 mg/female/day of oral MGA® Premix was fractionated in two administrations (0.5 mg morning and 0.5mg afternoon) mixed with banana. On D8, a PGF2α analogue were given intramuscularly (Cloprostenol - Ciosin® ). After treatment, behavioural estrus was evaluated with the aid of a male of the respective species from D9 to D13, initially every six hours then every four hours after the onset of behavioural estrus. The two females showed behavioural estrus on days 12 and 13. In the Mazama nana, the behavioral estrus had duration of approximately 16 hours and in the Mazama nemorivaga 20 hours. The results obtained in this study suggest the efficacy of 1.0 mg/female/day of MGA fractionated in two doses for the estrus manipulation in deer-short-hand and deer-purple females, since both showed behavioural estrus four days after the proposed synchronization protocol.(AU)

Avaliação do acetato de melengestrol (MGA) na sincronização do estro em fêmeas de veado-mão-curta (Mazama nana) e veado-roxo (Mazama nemorivaga): estudo piloto / Assessment of melengestrol acetate on estrus synchronization in female of Brazilian dwarf brocket deer and Amazonian brown brocket deer: pilot study

A introdução de dispositivos intravaginais em protocolos tradicionais de sincronização do estro (SE) exige contenção física e/ou química, o que pode resultar em estresse e efeitos negativos na fisiologia reprodutiva de animais selvagens. Portanto, o uso de protocolos não invasivos pode ser mais eficaz para o manejo da reprodução ex situ. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do acetato de melengestrol (MGA), na SE de uma fêmea de veado-mão-curta (Mazama nana) e uma de veado-roxo (Mazama nemorivaga). Ambas receberam uma aplicação via intramuscular de 0,25 mg de benzoato de estradiol (Sincrodiol® ) no dia 0 (D0). Entre o D0 e o D7, foi administrado 1 mg/animal/dia de MGA® Premix fracionado em duas porções (0,5 mg pela manhã e 0,5 mg a tarde), misturadas com banana. No D8, um análogo de PGF2α (Cloprostenol - Ciosin® ) foi administrado via intramuscular. Após o tratamento, o estro comportamental (EC) foi avaliado com auxílio de um macho da respectiva espécie desde D9 a D13, primeiramente a cada seis horas e, após o início do EC, a cada quatro horas. As duas fêmeas apresentaram sinais de EC nos dias 12 e 13. Na espécie Mazama nana, o EC teve uma duração aproximada de 16 horas e, na espécie Mazama nemorivaga, 20 horas. Os resultados obtidos neste estudo sugerem a eficácia da dose de 1,0 mg/animal/dia de MGA, fracionada em duas doses, na manipulação estral em fêmeas de veado-mão-curta e veado-roxo, uma vez que ambas demonstraram EC quatro dias após o protocolo de sincronização proposto.

The introduction of intravaginal devices in traditional estrus synchronization protocols requires physical and/or chemical restraint, which can result in stress and negative effects on the reproductive physiology of wild animals. Therefore, the use of non-invasive protocols might be more effective for the reproductive management ex situ. The objective of this study was to evaluate the efficacy of the melengestrol acetate (MGA) for estrus synchronization of two females: one deer-short-hand (Mazama nana) and one deer-purple (Mazama nemorivaga). Both were given an application of estradiol benzoate (Sincrodiol® ) on day 0 (D0). From D0 to D7, 1 mg/female/day of oral MGA® Premix was fractionated in two administrations (0.5 mg morning and 0.5mg afternoon) mixed with banana. On D8, a PGF2α analogue were given intramuscularly (Cloprostenol - Ciosin® ). After treatment, behavioural estrus was evaluated with the aid of a male of the respective species from D9 to D13, initially every six hours then every four hours after the onset of behavioural estrus. The two females showed behavioural estrus on days 12 and 13. In the Mazama nana, the behavioral estrus had duration of approximately 16 hours and in the Mazama nemorivaga 20 hours. The results obtained in this study suggest the efficacy of 1.0 mg/female/day of MGA fractionated in two doses for the estrus manipulation in deer-short-hand and deer-purple females, since both showed behavioural estrus four days after the proposed synchronization protocol.

PADRONIZAÇÃO DE ELISA PARA DETECÇÃO DE ANTICORPOS ANTI-Toxoplasma gondii E Neospora caninum EM SORO E FEZES DE CERVÍDEOS

A maior parte dos dados descritos na literatura sobre patógenos de cervídeos neotropicais são provenientes de levantamentos sorológicos, informações sobre vías de transmissão e avaliações clínicas ainda são escasos. O presente trabalho teve como objetivos: a) estimar a prevalência de cervídeos positivos para Toxoplasma gondii e Neospora canium em 92 animais mantidos em cativeiro; b) Avaliar a probabilidade de diferentes vias de transmissão do T. gondii e N. caninum; c) avaliar a sintomatologia clínica e resposta imune humoral de machos de veados-catingueiros (Mazama gouazoubira) infectados experimentalmente com oocistos da cepa ME49 (genotipo tipo II) de T. gondii e d) padronizar a técnica de ELISA indireta para detecção de anticorpos fecais específicos para T. gondii e N. caninum. Inicialmente, foram colhidas amostras dos animais cervídeos pertencentes a dois criadouro conservacionistas e comparados os resultados sorológicos obtidos nos testes de imunofluorescência indireta (RIFI) e ELISA indireto pelo teste de concordância Kappa de Cohen. Em seguida, foram desenhadas árvores genealógicas dos animais de cada espécie para estimativa da taxa de transmissão congênita de cada doença. A prevalência estimada para T. gondii foi de 20,73% pela tecnica de RIFI e 25,60% por ELISA, apresenando uma concordância rasoável ( = 0,277) entre as duas técnicas sorológicas utilizadas. Já para N. caninum a prevalência estimada foi de 40,24% por RIFI e 39,02% por ELISA com uma correlação quase perfeita ( = 0,83) entre as técnicas. A taxa de transmissão congênita, estimada com base em números de filhos positivos de mães positivas entre o número total de filhos de mães positivas, diferiu bastante entre as doenças, sendo de 0% para toxoplasmose e 81,25% para neosporose. No capítulo 3, para a infecção experimental dos animais, quatro machos da espécie Mazama gouazoubira foram infectados experimentalmente com 5000 oocistos esporulados de T. gondii da cepa ME49, enquanto um animal soronegativo foi usado como controle. Os animais foram monitorados quanto aos parâmetros clínicos de -7 a 40 dias após a infecção (dpi). Amostras de sangue foram coletadas semanalmente até 49 dpi para detecção de anticorpos pelo teste de ELISA. A cada 15 dias os animais foram submetidos à contenção química e coleta de sêmen por eletroejaculação e o material genético das amostras de semen foi extraído para posterior análise por PCR para T. gondii. Apenas dois dos quatro animais infectados desenvolveram resposta de anticorpos detectável no teste de ELISA, e mesmo sem nenhum animal ter manifestado sinais clínicos da infecção, o material genético do parasita foi encontrado no sêmen dos animais soropositivos aos 35 e 49 dpi. A terceira etapa do projeto visou a padronização da técnica de ELISA para detecção de imunoglobulinas fecais contra os dois patógenos. Amostras de fezes frescas foram coletadas, extraídas e armazenadas em nitrogênio líquido ou processadas imediatamente. Um pool de amostras de animais soropositivos foi utilizado como controle positivo para N. caninum e um pool de amostras de animais experimentalmente infectados foi usado como controle para T. gondii. Mesmo com diversas alterações de protocolos não foi possível contornar o problema da baixa iv especificidade do teste, constatada pelos altos ruídos nas leituras das placas. Foi possível concluir que as técnicas sorológicas provaram ser muito úteis para estudos epidemiológicos em animais de cativeiro, tendo diversas aplicações além da simples estimativa da prevalência, porém sem a padronização de um método não invasivo de detecção de anticorpos, estudos epidemiológicos em populações de vida-livre ainda são um grande desafio. Nesses estudos foi possível inferir que a principal via de transmissão do N. caninum em cervídeos é a via congênita, de forma semelhante ao que se observa em bovinos , enquanto que o T. gondii parece utilizar da via horizontal para a transmissão na maioria dos casos. Além disso , a infecção experimental com 5000 oocistos esporulados de T. gondii não causou sinais clínicos nos animais estudados, sugerindo que a espécie apresenta certa resistência à doença, por outro lado, a detecção do DNA do parasito no sêmen dos animais sugere que a transmissão sexual é uma possibilidade nessas espécies, o que deve ser levado em consideração por criadouros conservacionistas.

Most of the data on neotropical deer pathogens come from serological surveys, little is known about transmission routes and clinical evaluations.The present study aimed to: a) estimate the prevalence of positive cervids for Toxoplasma gondii and Neospora canium in animals kept in captivity; b) Assess different routes of infection of T. gondii and N.caninum on these deer populations; c) Evaluate the clinical symptomatology and humoral immune response of male brocket deer (Mazama gouazoubira) experimentally infected with T. gondii (ME49 strain) oocysts; and d) Standardize an indirect ELISA technique for non-invasive detection of specific fecal antibodies to T. gondii and N. caninum. Initially, deer serum samples collected from animals from two conservation breeding centers were tested by both techniques making it possible to compare the results obtained in the indirect immunofluorescence tests (IFAT) and indirect ELISA by the Cohen's Kappa concordance test. Furthermore, family trees were drawn for each species to estimate the congenital transmission rate of both diseases. The T. gondii prevalence were 20,73% by IFAT and 25,60 by ELISA, with , with an fair agreement of = 0.277 between the two serological techniques. For N. caninum, the antibody prevalence was 40,24% by IFAT and 39,02% by ELISA, with a almost perfect correlation of = 0.83 between techniques. The congenital transmission rate, estimated by the number of positive offspring from positive mothers by the total of positive mother offspring, differed significantly between diseases, resulting in 0% for Toxoplasmosis and 81,25% for Neosporosis. In Chapter 3, four Mazama gouazoubira males were inoculated with 5000 sporulated T. gondii oocysts (ME49), while one seronegative animal was used as a control. Animals were monitored for clinical parameters from -7 to 40 days post-infection (dpi). Blood samples were collected weekly up to 49 dpi for antibody detection by the previously standardized ELISA test. Once every 15 days, the animals were chemical restraint for semen collection by electroejaculation. DNA of the semen samples was extracted for T. gondii PCR analysis. Only two from four infected animals developed an antibody response detectable in the ELISA test, and despite the animals didnt manifest any clinical signs, the parasite's genetic material was found in the semen of the seropositive animals at 35 and 49 dpi. In the third step, the standardization of ELISA technique for detection of fecal immunoglobulins against the two pathogens was carried out, aiming to apply the methodology to epidemiological studies in free-living animals. Fresh stool samples were collected, extracted and stored in liquid nitrogen or processed immediately. A pool of samples from seropositive animals was used as a positive control for N. caninum and a pool of samples from experimentally infected animals was used as a control for T. gondii. Even with several protocol changes, it was not possible to overcome the problem of the low specificity evidenced by the high background at plate readings. Finally, it was possible to conclude that serological techniques have proved very useful for epidemiological studies in captive animals, having several applications beyond the simple estimation of prevalence, but without the standardization of a non-invasive method of detection of antibodies, epidemiological studies in free-living populations are still challenging. Whith these studies it was possible to infer tha the congenital transmission is the major route of infection os N. caninum in neotropical deer, in the other hand, horizontal transmission seem to be more important to T. gondii epidemiology in these species. Furthermore, the experimental infection with 5000 T. gondii oocysts did not caused clinical signs in Mazama gouazoubira, implying that the specie present some resistance to the disease, still, the detection of the parasite in semen samples indicate the possibility of sexual transmission of T. gondii in cervids, vi and breeding centers should take this into account for better reproductive performance of the animals

PESQUISA DE DOENÇAS HEMORRÁGICAS EM CERVÍDEOS DO REFÚGIO BIOLÓGICO BELA VISTA DA ITAIPU BINACIONAL, FOZ DO IGUAÇU PR

Os cervídeos neotropicais são pouco estudados, particularmente as espécies pertencentes ao gênero Mazama, em razão da dificuldade de acesso aos animais silvestres e suas amostras. O status de conservação da espécie Mazama nana não está bem definido. As principais ameaças a esses animais são a caça ilegal, a destruição de seu habitat e a proximidade a animais domésticos, que podem introduzir doenças comuns em populações de ruminantes silvestres. Dentre as doenças importantes em cervídeos, as síndromes hemorrágicas são muito frequentes e levam a um alto índice de morbidade e mortalidade. As doenças que provocam sinais e quadro de hemorragia generalizada em cervídeos são conhecidas pelo nome genérico de doenças hemorrágicas, e são três os agentes virais reconhecidos atualmente: um adenovírus (vírus da doença hemorrágica por adenovírus) e dois orbivirus, (o vírus da língua azul BTV e o vírus da doença epizoótica hemorrágica EHDV). O Refúgio Biológico Bela Vista da Itaipu Binacional vem reproduzindo com sucesso a espécie Mazama nana desde 1990, conhecida popularmente como veado-bororó-do-sul, porém, fazendo uma revisão histórica, percebe-se que desde que a criação foi iniciada, ocorreram mortes de cervídeos com sinais compatíveis com as doenças hemorrágicas. Entretanto, o agente etiológico nunca foi identificado. O presente projeto teve por objetivo identificar o agente viral que tem causado a doença hemorrágica no plantel de veados-bororó-do-sul do Refúgio Biológico Bela Vista, situado no município de Foz do Iguaçu, Paraná. Foram avaliadas amostras obtidas por meio de necropsia, incluindo fragmentos de fígado, coração, linfonodos e esôfago, além de amostras de sangue de 32 animais vivos para a pesquisa de material genético viral pelo teste de RT-PCR em tempo real para o vírus da língua azul e semi-nested RT-PCR para o vírus da doença epizoótica hemorrágica, além de PCR convencional para o adenovírus de cervídeos. A técnica de IDGA foi utilizada para a pesquisa de anticorpos contra o vírus da língua azul. Quatro amostras, provenientes de animais que vieram a óbito com sinais de doença hemorrágica, foram positivas para o teste de RTq-PCR contra língua azul (BTV), e a partir desse material foi possível isolar e sorotipificar o vírus. Ao final do estudo, foram identificados três sorotipos até então desconhecidos em território brasileiro, o BTV3, BTV14 e BTV18. A prevalência de animais soropositivos para BTV foi de 3,12%. Todos os testes de semi-nested RT-PCR para o vírus da doença epizoótica hemorrágica (EHDV) e de PCR convencional para adenovírus tiveram resultados negativos. Com este estudo foi possível determinar que o BTV é o agente causador da doença hemorrágica no plantel de veados-bororós-do-sul do Refúgio Biológico Bela Vista e que pelo menos três sorotipos estão envolvidos na epidemiologia da doença.

Neotropical deer are poorly studied species, particularly those belonging to the genus Mazama because of the access difficulty to these animals. The conservation status of Mazama nana is not well known and their main threats are poaching, habitat destruction and exposure to domestic animal diseases. Among the important diseases in cervids, haemorrhagic syndromes are very common and lead to a high rate of morbidity and mortality. Diseases leading to signs of widespread bleeding are known as haemorrhagic diseases and in deer, there are three causative viral agents currently recognized: an adenovirus (Adenoviral haemorrhagic disease virus) and two orbiviruses (Bluetongue disease virus, BTV, and Epizootic haemorrhagic disease virus, EHDV). The Bela Vista Biological Refuge of Itaipu Binacional has been successfully reproducing the species Mazama nana, popularly known as the brazilian dwarf brocket deer, since 1990. While the death of animals with compatible signs with bleeding disorders has been occurring ever since, the etiological agent has not yet been identified. Thus, this project aimed to identify the viral agent that has been causing haemorrhagic disease in the herd of Brazilian dwarf brocket deer from the Bela Vista Biological Refuge. Therefore, we evaluated autopsy samples, including liver, heart, lymph nodes and esophagus as well blood from 32 live animals in the search for viral genetic material, using namely the RT-PCR test for BTV, semi-nested RT-PCR for EHDV and the conventional PCR for adenovirus. In addition, we applied the Agar Gel Immunodiffusion technique (AGID) for detecting antibodies against BTV. Four samples, belonging from animals that died with haemorrhagic disease signs, were positive for RT-PCR test against BTV, and from this material, it was possible to isolate and serotype the virus. At the end of the study, we identified three serotypes thus far unknown in Brazil, the BTV3, BTV14 and BTV18 plus a serotype not yet identified. The prevalence of seropositive animals to BTV was 3.12%. All semi-nested RT-PCR tests for EHDV and conventional PCR for AHDV had negative results. Therefore, we concluded that the BTV is the causative agent of the haemorrhagic disease of the brazilian dwarf brocket deers from the Bela Vista Biological Refuge and at least three serotypes are involved in the epidemiology of the disease.