Promising use of nanotechnology in Pythium insidiosum: a systematic review / Utilização promissora de nanotecnologia em Pythium insidiosum: uma revisão sistemática

ABSTRACT: The aquatic oomycete Pythium insidiosum is an emerging pathogen highly relevant in human and veterinary medicine and an etiologic agent of pythiosis, a disease of worldwide distribution mainly affecting horses, dogs, and humans, presenting cutaneous, subcutaneous, ocular, gastrointestinal, and systemic forms. The available therapeutic methods to treat this disease and its forms are not entirely effective, thus highlighting the need to investigate the forms of treatments with better efficacy, such as compounds from different pharmacological classes, compounds of natural origin, and new technological alternatives, including nanotechnology. Therefore, this study evaluated scientific publications regarding the use of nanotechnology in P. insidiosum treatment. For this, a systematic literature review, was carried out on articles published from 2010 to 2022 on the LILACS, MEDLINE, Google Scholar, PubMed, and SciELO databases using the descriptors 'Pythium insidiosum,' 'pythiosis,' 'nanotechnology,' 'nanoparticles,' 'nanoemulsion,' and 'treatment.' We reported 162 articles for the researched theme; although, only four studies were included because they met the criteria established herein. A meta-analysis was used for the statistical analysis of the data obtained in vitro studies, and we reported the use of nanotechnology can be a promising alternative in developing antimicrobial compounds with anti-P. insidiosum activity. Nevertheless, additional research is needed to verify the potential use of this technology in clinical therapy against P. insidiosum infections.

RESUMO: O oomiceto aquático Pythium insidiosum é um patógeno emergente de relevância em medicina humana e veterinária. É o agente etiológico da pitiose, uma enfermidade de distribuição mundial, que acomete principalmente em equinos, caninos e seres humanos, podendo apresentar-se nas formas cutâneas, subcutâneas, oculares, gastrointestinais e sistêmicas. Considerando que os métodos terapêuticos disponíveis para o tratamento da doença não são completamente efetivos, há uma necessidade de investigar formas de tratamentos com melhor eficácia, como os compostos de diferentes classes farmacológicas, compostos de origem natural, bem como, novas alternativas tecnológicas, incluindo a nanotecnologia. Deste modo, este trabalho objetivou avaliar publicações científicas referentes a utilização de nanotecnologia em P. insidiosum. Para isso, realizou-se uma revisão sistemática da literatura, buscando artigos no período de 2010 a 2022, nas bases de dados LILACS, MEDLINE, Google Scholar, PubMed e SciELO, utilizando-se os descritores Pythium insidiosum, pitiose, nanotecnologia, nanopartículas, nanoemulsão e tratamento. Encontrou-se 162 artigos com familiaridade a temática pesquisada; no entanto, apenas quatro estudos foram incluídos, pois atendiam os critérios estabelecidos na pesquisa. Para análise estatística dos dados obtidos nos estudos in vitro, utilizou-se meta-análise. Demonstrou-se o promissor uso de nanotecnologia como alternativa no desenvolvimento de compostos antimicrobianos com atividade anti-P. insidiosum. Entretanto, constata-se que estudos adicionais se fazem necessários para verificar o potencial uso desta tecnologia na terapêutica clínica contra infecções por P. insidiosum.

Pitiose cutânea em equino no sertão do Ceará / Skin pythiosis in horse in the backwoods of the Ceará State

A pitiose é uma infecção invasiva ulcerativa piogranulomatosa causada pelo oomiceto Pythium insidiosum, parasita de plantas aquáticas em águas estagnadas. Apesar de não serem raros os relatos de pitiose nas espécies domésticas, a espécie equina é a mais afetada. A enfermidade pode ser adquirida através da colonização de lesões traumáticas e do folículo piloso. Em casos dessa infecção, pode-se encontrar hifas recobertas por células necróticas, formando massas branco-amareladas semelhantes a corais, denominadas de kunkers. As lesões são localizadas prioritariamente nas extremidades distais dos membros e na porção ventral da parede tóraco-abdominal. O diagnóstico da pitiose está relacionado a um prognóstico reservado dependendo do grau de comprometimento anatômico que a enfermidade se encontra. Diante do exposto, este trabalho teve como objetivo relatar um caso de pitiose cutânea em um equino, fêmea da raça Mangalarga Machador. O animal apresentava lesões ulcerativas no membro torácico esquerdo e no membro pélvico esquerdo. O tratamento escolhido foi o cirúrgico e imunoterápico, com intuito de remover todo o tecido lesionado e, posteriormente, coletar material para realização do exame histopatológico. O equino foi submetido a um protocolo pós-operatório com a terapia antitetânica por via intramuscular. A antibioticoterapia sistêmica foi realizada com penicilina benzatina, anti-inflamatório esteroidal, dexametasona foi realizada uma vez ao dia, durante cinco dias. Posteriormente, optou-se pelo uso do anti-inflamatório não esteroidal maxicam uma vez ao dia, durante cinco dias. O animal recebeu quatro doses do imunoterápico PITIUM-VAC por via subcutânea, com intervalo de 14 dias entre uma e outra aplicação, apresentando uma resposta satisfatória ao tratamento.

Pythiosis is an invasive ulcerative pyogranulomatous infection caused by the Oomycete Pythium insidiosum, a parasite of aquatic plants in standing water. Although reports of pythiosis in domestic species are not uncommon, equine species are the most affected. The disease can be acquired through the colonization of traumatic lesions and hair follicles. Hyphae covered by necrotic cells, forming yellowish-white coral-like masses called "kunkers" can be found. The lesions are located primarily on the distal extremities of the limbs and on the ventral portion of the thoracoabdominal wall. The diagnosis of pythiosis is linked to a poor prognosis, depending on the degree of anatomical involvement of the disease. Thus, this work aimed to report a case of cutaneous pythiosis in a female Mangalarga Machador equine. The animal presented ulcerative lesions on the left thoracic limb and the left pelvic limb. The chosen treatment was surgery and immunotherapy to remove all the injured tissue and, later, collect the material for histopathological examination. The horse was submitted to a post-operative protocol with intramuscular anti-tetanus therapy. Systemic antibiotic therapy with benzathine penicillin, steroidal anti-inflammatory, dexamethasone was performed once a day for five days. Subsequently, it was decided to use the non-steroidal anti-inflammatory maxicam once a day for five days. The animal received four doses of the immunotherapy PITIUM-VAC subcutaneously, with an interval of 14 days between applications, presenting a satisfactory response to the treatment.

Pythiosis in cattle in Northeastern Brazil / Pitiose em bovinos no Nordeste do Brasil

The epidemiological, clinical and pathological aspects of cutaneous pythiosis occurring in cattle from three farms in the Northeastern of Brazil are described. A biopsy of the lesions of one bovine from each farm was performed. In two cases, the affected cattle had contact with water accumulated in dams during the dry season in the semiarid region. Another case occurred in the coastal tropical region in cattle grazing around irrigation channels. Clinically, lesions were observed mainly on the skin of the thoracic and/or pelvic limbs, characterized by flat and irregular ulcerated areas or nodules of varying sizes, some with fistulous tracts penetrating deep into the subcutaneous tissue. In one case the regional lymph nodes were affected. Histologically, in all cases, pyogranulomatous dermatitis associated with negative hyphae images, in hematoxylin-eosin stained sections, were observed. In sections stained by Grocott methenamine silver, the hyphae measured 2-8μm and had irregular ramifications and rare septations. Immunohistochemistry technique demonstrated strong immunolabeling for Pythium insidiosum. Pythiosis should be included in the differential diagnosis of dermatopathies in cattle in the Northeastern of Brazil.(AU)

Descrevem-se os aspectos epidemiológicos, clínicos e patológicos da pitiose cutânea em bovinos de três propriedades do Nordeste do Brasil. Uma biópsia das lesões de um bovino de cada propriedade foi realizada. Em dois casos, os bovinos afetados tiveram acesso à água acumulada em açudes durante a estação seca da região semiárida. O outro bovino acometido estava a pastoreio próximo a canais de irrigação na região litorânea. Clinicamente, as lesões foram observadas principalmente na pele dos membros torácicos e/ou pélvicos e caracterizavam-se por áreas planas e irregulares de ulceração ou nódulos de tamanhos variados, alguns com trajetos fistulosos penetrando profundamente no tecido subcutâneo. Em um caso, os linfonodos regionais foram afetados. Histologicamente, em todos os casos, observou-se dermatite piogranulomatosa associada a imagens negativas de hifas, em secções corados por hematoxilina e eosina. Em seções coradas por metenamina de prata de Grocott, as hifas mediam 2-8μm e possuíam ramificações irregulares com raras septações. A imuno-histoquímica demonstrou forte imunomarcação para Pythium insidiosum. A pitiose deve ser incluída como diagnóstico diferencial de dermatopatias de bovinos no Nordeste do Brasil.(AU)

Pythiosis in cattle in Northeastern Brazil / Pitiose em bovinos no Nordeste do Brasil

The epidemiological, clinical and pathological aspects of cutaneous pythiosis occurring in cattle from three farms in the Northeastern of Brazil are described. A biopsy of the lesions of one bovine from each farm was performed. In two cases, the affected cattle had contact with water accumulated in dams during the dry season in the semiarid region. Another case occurred in the coastal tropical region in cattle grazing around irrigation channels. Clinically, lesions were observed mainly on the skin of the thoracic and/or pelvic limbs, characterized by flat and irregular ulcerated areas or nodules of varying sizes, some with fistulous tracts penetrating deep into the subcutaneous tissue. In one case the regional lymph nodes were affected. Histologically, in all cases, pyogranulomatous dermatitis associated with negative hyphae images, in hematoxylin-eosin stained sections, were observed. In sections stained by Grocott methenamine silver, the hyphae measured 2-8μm and had irregular ramifications and rare septations. Immunohistochemistry technique demonstrated strong immunolabeling for Pythium insidiosum. Pythiosis should be included in the differential diagnosis of dermatopathies in cattle in the Northeastern of Brazil.(AU)

Descrevem-se os aspectos epidemiológicos, clínicos e patológicos da pitiose cutânea em bovinos de três propriedades do Nordeste do Brasil. Uma biópsia das lesões de um bovino de cada propriedade foi realizada. Em dois casos, os bovinos afetados tiveram acesso à água acumulada em açudes durante a estação seca da região semiárida. O outro bovino acometido estava a pastoreio próximo a canais de irrigação na região litorânea. Clinicamente, as lesões foram observadas principalmente na pele dos membros torácicos e/ou pélvicos e caracterizavam-se por áreas planas e irregulares de ulceração ou nódulos de tamanhos variados, alguns com trajetos fistulosos penetrando profundamente no tecido subcutâneo. Em um caso, os linfonodos regionais foram afetados. Histologicamente, em todos os casos, observou-se dermatite piogranulomatosa associada a imagens negativas de hifas, em secções corados por hematoxilina e eosina. Em seções coradas por metenamina de prata de Grocott, as hifas mediam 2-8μm e possuíam ramificações irregulares com raras septações. A imuno-histoquímica demonstrou forte imunomarcação para Pythium insidiosum. A pitiose deve ser incluída como diagnóstico diferencial de dermatopatias de bovinos no Nordeste do Brasil.(AU)

Culture medium and inoculation methodology for the study of soft root rot caused by Phytopythium sp / Meio de cultura e metodologia de inoculação para o estudo da podridão mole de raízes causada por Phytopythium sp

Cassava (Manihot esculenta Crantz) is an important crop in Brazil and Pará is the major producer of roots. High temperature and humidity of tropical regions favor the development of various diseases, among them the cassava root rot. The objective of this study was to evaluate the effect of luminosity and culture medium on the mycelial growth and sporulation of Phytopythium sp. associated with different methods of inoculation on cassava roots. In vitro tests for pathogen growth were established in a 2 x 6 factorial design (luminosity x culture medium) with five replicates and the means were compared by t test (P0.05). The culture medium containing sweet cassava root produced greater mycelial development and higher pathogen sporulation and it was the most suitable medium for pathogen culture. The culture under absence of light generated better mycelial growth than culture under 12 hour of light. Regarding the type of inoculation, the response was better when deeper injuries were induced.(AU)

A mandioca (Manihot esculenta Crantz) é uma importante cultura para o Brasil, onde o Pará é o principal produtor de raízes. Regiões tropicais com alta umidade e temperatura favorecem o desenvolvimento de diversas doenças, como as podridões de raiz. O presente estudo tem como objetivo avaliar o efeito da luminosidade e de meios de cultura no crescimento micelial e na esporulação de Phytopythium sp. e analisar métodos de inoculação do patógeno em raízes de mandioca destacadas. Os ensaios in vitro foram instalados em esquema fatorial 2x6 (luminosidade x meio de cultura), com cinco repetições e as médias comparadas pelo teste t (p0,05). O meio de cultura contendo raiz de mandioca mansa proporcionou maior desenvolvimento micelial e maior esporulação do patógeno e é o mais adequado para o cultivo do patógeno. O cultivo sob ausência de luz gerou melhor crescimento micelial do que o cultivo sob 12 horas de luz. Quanto ao tipo de inoculação, a resposta foi melhor nas raízes que obtiveram ferimentos mais profundos.(AU)

Mastite por Pythium insidiosum em éguas / Mastitis by Pythium insidiosum in mares

Background: Pythiosis is a chronic inflammatory disease caused by the oomycete Pythium insidiosum. This disease hasbeen reported in several species, but most cases occur in horses. In this species, the cutaneous form is more prevalent,with occasional involvement of adjacent lymph nodes and bone tissue. The involvement of the mammary glands was notproperly characterized. Therefore, the aim of this study is to describe cases of pythiosis with the involvement of the mammary glands in mares.Case: A retrospective study of all biopsy samples and necropsy examinations of horses, performed at the Animal PathologyLaboratory of the Federal University of Campina Grande from January 2000 to December 2018, was carried out. During thestudy period, 142 cases of cutaneous pythiosis were identified. Of these, in three the lesions extended to the mammary glands.Mares with 3-, 7- and 12-year-old, mongrel, from the backlands of the Paraiba were affected. On physical examination, themares presented swollen mammary glands and multifocal wounds, which discharge serosanguinolent secretion. Clinicalevolution ranged from 15 to 30 days. The animals had been medicated, but the wounds did not heal and mastectomies wereperformed. Macroscopically, the mammary glands were enlarged and with multifocal areas of ulceration measuring 1 to 3.5cm in diameter. At the cut surface, they exhibited fistulous tracts containing kunkers. In the histopathological evaluation,was observed diffuse and marked inflammatory infiltrate of eosinophils extending through the deep dermis and interlobularmammary stroma; and multifocal areas, sometimes focally extensive, of eosinophilic necrosis with intralesional negativeimages of hyphae. In histological sections stained by periodic acid-Schiff, the walls of the hyphae were weakly stained inblue; but when impregnated by Grocott methenamine silver, they were strongly marked in black...(AU)

Mastite por Pythium insidiosum em éguas / Mastitis by Pythium insidiosum in mares

Background: Pythiosis is a chronic inflammatory disease caused by the oomycete Pythium insidiosum. This disease hasbeen reported in several species, but most cases occur in horses. In this species, the cutaneous form is more prevalent,with occasional involvement of adjacent lymph nodes and bone tissue. The involvement of the mammary glands was notproperly characterized. Therefore, the aim of this study is to describe cases of pythiosis with the involvement of the mammary glands in mares.Case: A retrospective study of all biopsy samples and necropsy examinations of horses, performed at the Animal PathologyLaboratory of the Federal University of Campina Grande from January 2000 to December 2018, was carried out. During thestudy period, 142 cases of cutaneous pythiosis were identified. Of these, in three the lesions extended to the mammary glands.Mares with 3-, 7- and 12-year-old, mongrel, from the backlands of the Paraiba were affected. On physical examination, themares presented swollen mammary glands and multifocal wounds, which discharge serosanguinolent secretion. Clinicalevolution ranged from 15 to 30 days. The animals had been medicated, but the wounds did not heal and mastectomies wereperformed. Macroscopically, the mammary glands were enlarged and with multifocal areas of ulceration measuring 1 to 3.5cm in diameter. At the cut surface, they exhibited fistulous tracts containing kunkers. In the histopathological evaluation,was observed diffuse and marked inflammatory infiltrate of eosinophils extending through the deep dermis and interlobularmammary stroma; and multifocal areas, sometimes focally extensive, of eosinophilic necrosis with intralesional negativeimages of hyphae. In histological sections stained by periodic acid-Schiff, the walls of the hyphae were weakly stained inblue; but when impregnated by Grocott methenamine silver, they were strongly marked in black...

Feline subcutaneous pythiosis / Pitiose subcutânea em um felino

Pythiosis in felines is a rare disease associated with the oomycete Pythium insidiosum. The aim of this report was to describe the macroscopic, histopathological, and molecular characteristics of P. insidiosum infection in a 2-year-old cat, with a localized invasive subcutaneous mass. The feline had an increase of volume near the anal region since it was younger. The cat died just after surgery. The necropsy was performed, and samples were collected for histopathological examination. Microscopically, the skin lesion was characterized by necro-eosinophilic dermatitis, panniculitis, and myositis surrounding negatively stained hyphal structures. In the sections stained with GMS, dark brown hyphae were clearly seen inside the affected tissue. They were rarely septate and their walls were almost parallel. Immunohistochemistry using a polyclonal anti-P. insidiosum antibody showed a strongly immunostained hyphae into the lesions. The analysis based on PCR had a positive result for P. insidiosum. Pythiosis should be considered in the differential diagnosis of subcutaneous tissue disorders in felines.(AU)

Pitiose em felinos é uma doença de ocorrência rara associada ao oomiceto Pythium insidiosum. O objetivo deste relato é descrever as características macroscópicas, histopatológicas e moleculares da infecção por P. insidiosum em um gato de dois anos de idade, com uma massa invasiva localizada no subcutâneo. O gato morreu logo após a cirurgia, sendo realizada a necropsia e coleta de amostras para exame histopatológico. Microscopicamente, a lesão cutânea foi caracterizada por dermatite necroeosinofílica, paniculite e miosite envolvendo imagens de hifas negativamente coradas. Nas seções coradas com GMS, hifas marrom-escuras foram claramente vistas dentro do tecido afetado. As hifas raramente eram septadas e suas paredes eram quase paralelas. A imuno-histoquímica, utilizando um anticorpo policlonal anti-P. insidiosum, mostrou hifas fortemente imunomarcadas nas lesões. A análise baseada em PCR teve resultado positivo para P. insidiosum. A pitiose deve ser considerada no diagnóstico diferencial de desordens teciduais subcutâneas em felinos.(AU)

Isolation of Saprolegnia aenigmatica oomycetes and protocol for experimental infection of pacu (Piaractus mesopotamicus) / Isolamento do oomiceto Saprolegnia aenigmatica e protocolo de infecção experimental em pacu (Piaractus mesopotamicus)

Successful disease treatment depends on molecular studies under indoor conditions with experimental infection protocols that facilitate understanding the disease and the drug`s efficacy. The internal transcribed spacer (ITS) region was sequenced from three isolates, which were identified as Saprolegnia aenigmatica. Subsequently, healthy fish were immunosuppressed with dexamethasone (1.2 mg kg-1) and descaled to the skin using a sharp scalpel. These individuals were isolated in individual aquariums maintained at 22°C. Individuals in one group were subcutaneously inoculated with 9,000 zoospores (DDZ treatment), a second group was exposed to oomycetes in water with three colonized baits (DDB), a third group was maintained in water without zoospores (DD), and a control group (C) consisted of healthy animals. After 48 and 96 hours, two animals from each group were euthanized for fungal reisolation. The fish from groups DD and C did not show clinical signs, and no oomycetes were isolated. The animals from the DDZ and DDB groups showed cotton-wool-like masses on the skin, and S. aenigmatica was re-isolated. Thus, for infection using zoospores or baits parasitized by S. aenigmatica, an immunosuppressor (dexamethasone) and a sharp scalpel can be used effectively to establish an experimental infection in P. mesopotamicus.

O sucesso do tratamento de uma enfermidade depende do estudo de moléculas em condições de laboratório por meio de protocolos de infecção experimental que viabilizam a compreensão da doença e da eficácia dos fármacos. Pela sequência ITS foram identificadas três cepas de Saprolegnia aenigmatica. Dessa forma, pacus sadios foram submetidos à imunossupressão com dexametasona (1,2 mg kg-1), esfoliados com auxílio de bisturi e distribuídos em aquários a 22ºC. Após este procedimento, um grupo de animais foi inoculado com 9.000 zoósporos/peixe subcutâneo (DEZ), a outro foram adicionadas três iscas colonizadas com o oomiceto na água (DEI), um terceiro grupo foi mantido sem contato com o oomiceto (DE) e um quarto grupo, de animais sadios, representaram o controle (C). Após 48 e 96h deste procedimento, foram eutanaziados animais de cada grupo para reisolamento. Os animais do grupo DE e C não apresentaram sinais clínicos e não foi reisolado o oomiceto. Porém, tanto os animais do grupo DEZ quanto como os animais do grupo DEI apresentaram micélio branco na pele e foi reisolado Saprolegnia aenigmatica. Assim, a infecção com zoósporos ou com iscas colonizadas por S. aenigmatica, com o uso de dexametasona e abrasivo epitelial são formas eficazes de infecção experimental em P. mesopotamicus.

Isolation of Saprolegnia aenigmatica oomycetes and protocol for experimental infection of pacu (Piaractus mesopotamicus) / Isolamento do oomiceto Saprolegnia aenigmatica e protocolo de infecção experimental em pacu (Piaractus mesopotamicus)

Successful disease treatment depends on molecular studies under indoor conditions with experimental infection protocols that facilitate understanding the disease and the drug`s efficacy. The internal transcribed spacer (ITS) region was sequenced from three isolates, which were identified as Saprolegnia aenigmatica. Subsequently, healthy fish were immunosuppressed with dexamethasone (1.2 mg kg-1) and descaled to the skin using a sharp scalpel. These individuals were isolated in individual aquariums maintained at 22°C. Individuals in one group were subcutaneously inoculated with 9,000 zoospores (DDZ treatment), a second group was exposed to oomycetes in water with three colonized baits (DDB), a third group was maintained in water without zoospores (DD), and a control group (C) consisted of healthy animals. After 48 and 96 hours, two animals from each group were euthanized for fungal reisolation. The fish from groups DD and C did not show clinical signs, and no oomycetes were isolated. The animals from the DDZ and DDB groups showed cotton-wool-like masses on the skin, and S. aenigmatica was re-isolated. Thus, for infection using zoospores or baits parasitized by S. aenigmatica, an immunosuppressor (dexamethasone) and a sharp scalpel can be used effectively to establish an experimental infection in P. mesopotamicus.(AU)

O sucesso do tratamento de uma enfermidade depende do estudo de moléculas em condições de laboratório por meio de protocolos de infecção experimental que viabilizam a compreensão da doença e da eficácia dos fármacos. Pela sequência ITS foram identificadas três cepas de Saprolegnia aenigmatica. Dessa forma, pacus sadios foram submetidos à imunossupressão com dexametasona (1,2 mg kg-1), esfoliados com auxílio de bisturi e distribuídos em aquários a 22ºC. Após este procedimento, um grupo de animais foi inoculado com 9.000 zoósporos/peixe subcutâneo (DEZ), a outro foram adicionadas três iscas colonizadas com o oomiceto na água (DEI), um terceiro grupo foi mantido sem contato com o oomiceto (DE) e um quarto grupo, de animais sadios, representaram o controle (C). Após 48 e 96h deste procedimento, foram eutanaziados animais de cada grupo para reisolamento. Os animais do grupo DE e C não apresentaram sinais clínicos e não foi reisolado o oomiceto. Porém, tanto os animais do grupo DEZ quanto como os animais do grupo DEI apresentaram micélio branco na pele e foi reisolado Saprolegnia aenigmatica. Assim, a infecção com zoósporos ou com iscas colonizadas por S. aenigmatica, com o uso de dexametasona e abrasivo epitelial são formas eficazes de infecção experimental em P. mesopotamicus.(AU)

Biological activity of 7beta-acetoxywithanolide D isolated from Acnistus arborescens / Atividade biológica de 7beta-acetoxivitanolido D isolado de Acnistus arborescens

Many oomycete species are plant pathogens and are responsible for causing significant losses in agriculture. Currently, plant pathogen control is carried out by chemical, biological and physical methods. However, due to the development of resistance to these methods by some pathogens, it is imperative that alternative methods are developed. Brazilian biodiversity is well-known for its species richness and is considered a promising source of natural products. Among the vascular plants, the family Solanaceae A. Juss. (Solanaceae) is considered one of the largest, with distributions across all tropical and temperate regions of the world. The Solanaceae family presents a high diversity of species of economic importance as sources of food, medicinal and ornamental properties. Plants of this family are sources of secondary metabolites of various chemical classes that possess potential diverse applications. Therefore, chemical and biological investigations of these compounds are extremely important as they present alternatives for their potential use in the control of plant pathogens. Here, we report for the first time, the biological activity of 7β-acetoxywithanolide D, a compound isolated from Acnistus arborescens, against the oomycete Phytophthora cinnamomi. With these results, we emphasize the importance of such studies on plant secondary metabolites, which may present coadjuvant options in the control of plant pathogens.(AU)

Muitas espécies de oomicetos são fitopatógenos e responsáveis por causar perdas significativas na agricultura. Atualmente, o controle de fitopatógenos é realizado por métodos químicos, biológicos e físicos. No entanto, alguns agentes patogênicos adquirem resistência a esses métodos, por isso é necessário desenvolver constantemente alternativas para controlá-los. A biodiversidade brasileira é conhecida devido à sua riqueza de espécies, sendo considerada uma fonte promissora de produtos naturais. Entre as plantas vasculares, a família Solanaceae A. Juss. (Solanaceae) é considerada uma das maiores, apresentando distribuição em todas as regiões tropicais e temperadas do mundo. A família Solanaceae apresenta alta diversidade de espécies de importância econômica como fonte de alimentos, propriedades medicinais e ornamentais. As plantas desta família são fontes de metabolitos secundários de várias classes químicas com as mais diversas aplicações. Portanto, as investigações químicas e biológicas desses compostos são extremamente importantes e podem se tornar uma alternativa para o controle dos agentes patogênicos das plantas. Aqui, relatamos pela primeira vez a atividade biológica do composto 7β-acetoxivitanolido D isolado de Acnistus arborescens contra o oomiceto Phytophthora cinnamomi. Com este resultado, enfatizamos a importância de estudos com metabolitos secundários de plantas, que podem ser uma opção coadjuvante no controle de fitopatógenos.(AU)

Pythiosis with atypical location in the soft palate in a horse in Southern Brazil / Pitiose com localização atípica no palato mole em um equino na região Sul do Brasil

A pitiose é uma enfermidade piogranulomatosa causada pelo oomiceto aquático Pythium insidiosum, que acomete várias espécies domésticas, assim como a humana. O presente relato refere-se à descrição de um caso de pitiose em um equino, fêmea, da raça Crioula, criado na região Sul do Brasil com história clínica de emagrecimento progressivo, disfagia e dificuldade respiratória. Macroscopicamente, o palato mole estava aumentado de tamanho e deslocado caudalmente, resultando em obstrução física da nasofaringe. Ao corte, essa massa era branca-amarelada, fibrosa e com áreas de ulceração. Na análise histopatológica, havia inflamação piogranulomatosa, com focos necróticos associados a imagens negativas tubuliformes de hifas fúngicas. A coloração de Grocott demonstrou inúmeras hifas septadas e ramificadas, as quais foram marcadas positivamente para anticorpos contra P. insidiosum na imuno-histoquímica. O diagnóstico de pitiose foi baseado nos achados macro e microscópicos e confirmado pela técnica de imuno-histoquímica.(AU)

Pythiosis with atypical location in the soft palate in a horse in Southern Brazil / Pitiose com localização atípica no palato mole em um equino na região Sul do Brasil

A pitiose é uma enfermidade piogranulomatosa causada pelo oomiceto aquático Pythium insidiosum, que acomete várias espécies domésticas, assim como a humana. O presente relato refere-se à descrição de um caso de pitiose em um equino, fêmea, da raça Crioula, criado na região Sul do Brasil com história clínica de emagrecimento progressivo, disfagia e dificuldade respiratória. Macroscopicamente, o palato mole estava aumentado de tamanho e deslocado caudalmente, resultando em obstrução física da nasofaringe. Ao corte, essa massa era branca-amarelada, fibrosa e com áreas de ulceração. Na análise histopatológica, havia inflamação piogranulomatosa, com focos necróticos associados a imagens negativas tubuliformes de hifas fúngicas. A coloração de Grocott demonstrou inúmeras hifas septadas e ramificadas, as quais foram marcadas positivamente para anticorpos contra P. insidiosum na imuno-histoquímica. O diagnóstico de pitiose foi baseado nos achados macro e microscópicos e confirmado pela técnica de imuno-histoquímica.(AU)

Pitiose equina: revisão de literatura / Equine phityosis: literature review / Pitiosis equina: revisión de literatura

A pitiose é uma enfermidade que afeta diversas espécies animais, sendo a espécie equina geralmente a mais acometida. É causada por um oomiceto que se desenvolve principalmente em regiões subtropicais e tropicais em áreas alagadiças. As lesões frequentemente são únicas, bastante exsudativas, com prurido moderado a intenso e tendem a se localizar nas regiões do corpo que mais entram em contato com as áreas alagadas. Os meios de diagnostico e tratamento vêm sendo estudados surgindo assim cada vez mais técnicas e alternativas. Por ser uma doença que pode causar diversos impactos econômicos, seja por gastos com o tratamento ou até perda da função ou morte do animal, é uma doença que merece atenção no mercado de equinos no Brasil e no mundo. Este trabalho tem por objetivo abordar as principais características da pitiose, seu diagnóstico, tratamento e possíveis impactos.(AU)

Pythiosis is a disorder affecting several animal species; equines are usually the most widely affected species. The disease is caused by oomycete mainly developed in swampy areas in tropical and subtropical regions. The lesions are frequently single, exudative wounds, with moderate to intense itching, with a tendency to be located in parts that are in contact with wetlands. Diagnostic and treatment procedures have been studied, resulting in increasingly techniques and alternatives. This condition causes several economic impacts, either by expenditure with treatment, loss of function or even death of the animal. Therefore, greater care in the equine market must be provided, both in Brazil and worldwide. This study aims to describe the main features of pythiosis, its diagnosis, treatment and possible impacts.(AU)

Pitiosis es una enfermedad que afecta a varias especies animales, siendo la espécie equina generalmente la más afectada. Es causada por un oomiceto que se desarrolla principalmente en las regiones tropicales y subtropicales en las zonas pantanosas. Las lesiones, con frecuencia son únicas, exudativas, con prurito moderado a intenso, y tienden a ubicarse en regiones del cuerpo que más entran en contacto com zonas húmedas. Los procedimientos de diagnóstico y tratamento vienen siendo estudiados, lo que resulta cada vez más en técnicas y alternativas. Por ser una enfermedad que puede causar varios impactos económicos, sea por gastos con el tratamiento, la pérdida de la función o la muerte del animal, es una enfermedad que merece atención en el mercado de equinos en Brasil y en el mundo. Este estudio há tenido como objetivo abordar las principales características de pitiosis, su diagnóstico, tratamiento y los posibles impactos.(AU)

Pitiose equina: revisão de literatura / Equine phityosis: literature review / Pitiosis equina: revisión de literatura

A pitiose é uma enfermidade que afeta diversas espécies animais, sendo a espécie equina geralmente a mais acometida. É causada por um oomiceto que se desenvolve principalmente em regiões subtropicais e tropicais em áreas alagadiças. As lesões frequentemente são únicas, bastante exsudativas, com prurido moderado a intenso e tendem a se localizar nas regiões do corpo que mais entram em contato com as áreas alagadas. Os meios de diagnostico e tratamento vêm sendo estudados surgindo assim cada vez mais técnicas e alternativas. Por ser uma doença que pode causar diversos impactos econômicos, seja por gastos com o tratamento ou até perda da função ou morte do animal, é uma doença que merece atenção no mercado de equinos no Brasil e no mundo. Este trabalho tem por objetivo abordar as principais características da pitiose, seu diagnóstico, tratamento e possíveis impactos.(AU)

Pythiosis is a disorder affecting several animal species; equines are usually the most widely affected species. The disease is caused by oomycete mainly developed in swampy areas in tropical and subtropical regions. The lesions are frequently single, exudative wounds, with moderate to intense itching, with a tendency to be located in parts that are in contact with wetlands. Diagnostic and treatment procedures have been studied, resulting in increasingly techniques and alternatives. This condition causes several economic impacts, either by expenditure with treatment, loss of function or even death of the animal. Therefore, greater care in the equine market must be provided, both in Brazil and worldwide. This study aims to describe the main features of pythiosis, its diagnosis, treatment and possible impacts.(AU)

Pitiosis es una enfermedad que afecta a varias especies animales, siendo la espécie equina generalmente la más afectada. Es causada por un oomiceto que se desarrolla principalmente en las regiones tropicales y subtropicales en las zonas pantanosas. Las lesiones, con frecuencia son únicas, exudativas, con prurito moderado a intenso, y tienden a ubicarse en regiones del cuerpo que más entran en contacto com zonas húmedas. Los procedimientos de diagnóstico y tratamento vienen siendo estudiados, lo que resulta cada vez más en técnicas y alternativas. Por ser una enfermedad que puede causar varios impactos económicos, sea por gastos con el tratamiento, la pérdida de la función o la muerte del animal, es una enfermedad que merece atención en el mercado de equinos en Brasil y en el mundo. Este estudio há tenido como objetivo abordar las principales características de pitiosis, su diagnóstico, tratamiento y los posibles impactos.(AU)

Caracterização Das Lesões Vasculares Na Pitiose Em Cães E Equídeo

Pitiose é uma doença infecciosa causada pelo oomiceto Pythium insidiosum. Esta enfermidade acomete humanos e diversas espécies animais. Em humanos, a forma vascular é a apresentação clínica mais comum, na qual são observadas hifas na parede de artérias, com desenvolvimento de aneurismas e trombose, podendo levar à amputação de membros, entre outras consequências. Em animais, a ocorrência de lesões vasculares já foi citada por diversos autores, no entanto, o detalhamento destas lesões e o seu possível papel na patogênese da pitiose ainda não foram estudados mais profundamente. Assim, os objetivos desta tese foram (1) caracterizar as lesões vasculares da pitiose em cães e equinos, determinando a presença e a localização das hifas na parede dos vasos sanguíneos afetados; (2) explorar o modo como as lesões da pitiose canina evoluem e se disseminam para os tecidos adjacentes; (3) assim como também buscar compreender o papel dos vasos sanguíneos no desenvolvimento dos kunkers na pitiose equina; (4) e descrever um caso incomum de pitiose intestinal em um equino. No primeiro estudo, a reavaliação histológica das lesões permitiu determinar a localização das hifas principalmente na parede de artérias, e em menor quantidade no lúmen dos vasos ou em meio a trombos, sugerindo que na pitiose canina, a ocorrência de embolismo seja infrequente em comparação à pitiose em humanos ou a infecções fúngicas em cães. A observação de intensa inflamação e de hifas adjacentes aos vasos sanguíneos (perivasculite) sugere fortemente que as hifas utilizam a parede dos vasos sanguíneos como um caminho, e que as lesões e hifas se disseminam para os tecidos adjacentes por extensão (contiguidade). No segundo estudo, foram observadas hifas na parede de arteríolas e na periferia dos kunkers, muitas vezes se projetando levemente para fora dos kunkers, além de permanecerem no sentido longitudinal das fibras colágenas, presentes no interior de alguns kunkers. Estes achados, somados à observação de kunkers com ramificações semelhantes a vasos sanguíneos, sugerem que as hifas utilizem as artérias como um caminho, e que a formação dos kunkers ocorra pela extensão direta do processo inflamatório, semelhante ao que parece ocorrer nos cães, porém formando as concreções (kunkers) de forma tridimensional. No terceiro artigo, foi descrito o primeiro caso de pitiose segmentar intestinal em um equino, no Laboratório de Patologia Veterinária da UFSM, em 56 anos de rotina diagnóstica

Pythiosis is an infectious disease caused by the oomycete Pythium insidiosum. This disease affects humans and several animal species. In humans, the vascular form is the most common clinical presentation of pythiosis, where hyphae are observed on the artery wall, with the development of aneurysms and thrombosis, which can lead to limb amputation, among other consequences. In animals, the occurrence of vascular lesions has already been cited by several authors, however, the details of these lesions and their possible role in the pathogenesis of pythiosis have not been studied further. Thus, the objectives of this study were (1) to characterize the vascular lesions in dogs and horses, determining the presence and location of hyphae in the wall of the affected blood vessels; (2) to investigate how canine pythiosis lesions evolve and spread to adjacent tissues, (3) as well as to seek to understand the role of blood vessels in the development of kunkers in equine pythiosis; (4) and describe an unusual case of intestinal pythiosis in a horse. In the first study, the histological reassessment of the lesions made it possible to determine the location of the hyphae, mainly in the artery wall, rather than in the lumen of the vessels or inside thrombi, suggesting that in canine pythiosis, the occurrence of embolism is uncommon in comparison to pythiosis in humans or fungal infections in dogs. The observation of intense inflammation and hyphae adjacent to blood vessels (perivasculitis) strongly suggests that hyphae use the blood vessel wall as a pathway and that lesions and hyphae spread to adjacent tissues by extension (contiguity). In the second study, hyphae were observed on the wall of the arterioles and on the periphery of the kunkers, often slightly protruding out of the kunkers, in addition to remaining in the longitudinal direction of the collagen fibers, present inside some kunkers. These findings, added to the observation of kunkers with blood vessel-like ramifications, indicate that hyphae use arteries as a pathway and that the formation of kunkers occurs through the extension of the inflammatory process, similar to what occurs in dogs, forming the concretions of threedimensional shape. In the third article, the first case of intestinal segmental pythiosis was described in an equine, at the Veterinary Pathology Laboratory of UFSM, in 56 years of diagnostic routine

EFEITO DO GÁS OZÔNIO E DO ÓLEO DE GIRASSOL OZONIZADO NO CRESCIMENTO IN VITRO DO Pythium insidiosum CANINO

A pitiose é uma doença infecciosa granulomatosa causada pelo oomiceto aquático Pythium insidiosum. Trata-se de uma infecção crônica responsável por graves danos locais e sistêmicos. Os tratamentos convencionais possuem eficácia reduzida. Assim, a busca por terapias alternativas se faz necessária para o devido combate da doença. Neste contexto, o ozônio (O3) tem apresentado alto poder antimicrobiano frente a patógenos diversos, como fungos e bactérias. Assim, o presente estudo teve por objetivo caracterizar o efeito do gás ozônio e do óleo de girassol ozonizado no crescimento in vitro do P. insidiosum isolado de cães. No Experimento 1, o patógeno foi exposto à mistura gasosa O2-O3 por períodos distintos (72 g O3 mL-1 durante 5, 15 ou 30 minutos) ou com diferentes concentrações por 30 minutos (32, 52 ou 72 gO3 mL-1 ). No Experimento 2, fragmentos de P. insidiosum foram recobertos com óleos de girassol ozonizados com índice de peróxido distintos (25, entre 400 e 500 ou 600 mmolequiv. kg-1 ). As amostras foram cultivas em Ágar Sabouraud Dextrose durante os primeiros 14 dias pós-tratamento ao logo dos quais, a área de crescimento foi mensurada digitalmente. Amostras que não apresentaram crescimento nesses foram recultivadas para avaliar a ação germicida ou germiostática do respectivo tratamento. No Experimento 1, a exposição do P. insidiosum ao gás O3 por 30 minutos apresentou ação germicida independente da concentração utilizada. Todavia, amostras do patógeno expostas ao gás O3 por tempos inferiores (15 ou 05 min) apresentaram taxa de crescimento semelhante ao grupo controle (P>0,1). No Experimento 2, o óleo de girassol ozonizado com índice de peróxido ou 600 mmol-equiv. kg-1 foi o único a inibir o crescimento do patógeno. Frente as condições experimentais do presente estudo, conclui-se que a exposição à mistura gasosa O2-O3 durante 30 minutos e ao óleo de girassol com alto índice de peróxido apresentam ação germicida frente ao P. insidiosum isolado de cães.

Pythiosis is an infectious granulomatous disease caused by the aquatic oomycete Pythium insidiosum. Conventional treatments have reduced effectiveness against the chronic infection, which can be responsible for local and systemic damage in several species. In this context, ozone (O3) has shown high antimicrobial action against several pathogens, such as fungi and bacteria. Threfore, the present study aimed to characterize the effect of O3 gas and ozonated sunflower oil on the in vitro growth of P. insidiosum isolated from dogs. In Experiment 1, the pathogen was exposed to the O2-O3 gas mixture for different periods (72 g O3 mL-1 for 5, 15 or 30 minutes) or with different concentrations (32, 52 or 72 gO3 mL-1 for 30 minutes). In Experiment 2, fragments of P. insidiosum were covered with ozonized sunflower oils with different peroxide index (25, between 400 and 500 or 600 mmol-equiv. Kg-1 ). The growth area of the pathogen was digitally measured during the first 14 days post-treatment. Samples with absence of grow were recultured to assess the germicidal or germiostatic action of the respective treatment. In Experiment 1, exposure of P. insidiosum to O3 gas for 30 minutes showed germicidal action regardless of the concentration. However, samples of the pathogen exposed to O3 gas for 15 or 05 min showed similar growth rate when compared to the control group (P> 0.1). In Experiment 2, ozonized sunflower oil with a peroxide index 600 mmolequiv. kg-1 inhibit the growth of the pathogen. Considering the experimental conditions of the present study, the treatment with O2-O3 gas mixture for 30 minutes or sunflower oil with a high peroxide index have a germicidal action against P. insidiosum isolated from dogs.

ESTUDO COMPARATIVO DE CASOS DE PITIOSE EM EQUÍDEOS, RUMINANTES, CARNÍVOROS E AVE NO NORDESTE DO BRASIL

Descrevem-se nesta tese quatro artigos científicos que abordam a pitiose em animais domésticos no Nordeste do Brasil. O primeiro capítulo reúne e comparativamente descreve os casos de pitiose em equídeos, ruminantes, carnívoros e aves acometidos na região Nordeste do Brasil durante um período de 35 anos de diagnóstico no Laboratório de Patologia Animal da Universidade Federal de Campina Grande. Durante o período de estudo foram recebidas 13.542 amostras teciduais provenientes de necropsias e biópsias. Das quais, 306 foram diagnosticados como pitiose: 195 casos em equinos, 75 em ovinos, 19 em cães, 6 em muares, 4 em bovinos, 3 em gatos, 2 em caprinos, 1 em asinino e 1 em avestruz. Os equídeos foram as espécies mais afetadas, com lesões na pele, glândula mamária e fossas nasais. Dentre os ruminantes, os ovinos foram os mais afetados, com lesões cutâneas, nasais e digestivas, enquanto os bovinos e caprinos apresentaram lesões cutâneas. Os carnívoros desenvolveram lesões principalmente no trato alimentar, suficientemente graves para determinar a morte ou eutanásia dos animais. O único caso em ave afetou o trato alimentar e a excisão cirúrgica determinou a remissão. Para a maioria dos animais, a doença teve um curso clínico crônico e potencialmente grave, exceto para os bovinos que apresentaram cura espontânea das lesões. Os sinais clínicos estavam diretamente relacionados à localização das lesões, que sempre apresentavam evidência histológica de inflamação crônica associada a hifas intralesionais. O segundo capítulo caracteriza os aspectos epidemiológicos, clínicos, patológicos e os principais métodos de diagnóstico da pitiose em equinos, muares e asininos. Foram recebidas 1.331 amostras teciduais de equídeos, das quais 202 (15,17%) foram diagnosticadas como pitiose. Equídeos de ambos os sexos e com idades variando de 4 meses a 25 anos foram afetados. A maioria dos animais era mestiço (79,7%) e criado em sistema extensivo (73,26%). A doença ocorreu durante todo o ano, mas a maior incidência (70,29%) foi observada após o período das chuvas. O curso clínico foi sempre crônico. As lesões localizavam-se preferencialmente nos membros e parede toracoabdominal ventral e caracterizavam-se por nódulos ou massas com ulcerações e secreção serossanguinolenta. A superfície de corte demonstrou tratos fistulosos contendo kunkers. A histopatologia revelou acentuado infiltrado inflamatório de eosinófilos com áreas multifocais bem definidas de necrose de eosinófilos e colagenólise e imagens negativas de hifas intralesionais. No asinino, observou-se infiltrado inflamatório piogranulomatoso circundando essas áreas. A imuno-histoquímica para Pythium insidiosum revelou forte imunomarcação das hifas. O terceiro capítulo descreve três casos de pitiose em gatos, caracterizando os aspectos epidemiológicos, clínicos e patológicos. Foram recebidas 1.928 amostras teciduais de gatos, das quais três foram diagnosticadas como pitiose. Macroscopicamente, os gatos apresentavam uma massa multinodular na cavidade oral associada a deformidade facial (caso 1), uma grande massa multinodular espessando a parede do jejuno (caso 2) e um nódulo cutâneo ulcerado na base da cauda (caso 3). Histologicamente, observou-se inflamação piogranulomatosa e necrose, com hifas intralesionais, predominantemente não coradas. A imuno-histoquímica para Pythium insidiosum revelou forte imunomarcação das hifas. O quarto capítulo relata um caso de pitiose esofágica em um avestruz, caracterizando os aspectos epidemiológicos, clínicos, patológicos e imuno-histoquímicos. Uma avestruz-do-pescoço-vermelho, com dois anos de idade, apresentava um nódulo no terço médio do esôfago. Na histologia observou-se uma área focalmente extensa de necrose estendendo-se da túnica mucosa à adventícia. Circundando a área de necrose, observou-se uma reação inflamatória composta principalmente por granulócitos e macrófagos, associada à fibroplasia e neovascularização. Em meio às áreas de necrose e inflamação, verificavam-se numerosas imagens negativas de hifas em seções longitudinais e transversais, melhor apreciadas pela coloração de metenamina nitrato de prata de Grocott. O diagnóstico definitivo de infecção por Pythium insidiosum foi confirmado por imuno-histoquímica. A pitiose é uma doença endêmica no Nordeste do Brasil. Equinos, ovinos e cães parecem ser os mais comumente afetados, mas é importante estar ciente de que a doença pode afetar outras espécies animais. Os médicos veterinários, clínicos e patologistas, devem estar familiarizados com as características clinicopatológicas da doença e com a ampla variedade de espécies animais suscetíveis.

We describe in this thesis four scientific papers that address pythiosis in domestic animals in northeastern Brazil. The first chapter gathers and comparatively describes pythiosis cases in equidae, ruminants, carnivores and birds affected in the northeastern region of Brazil over a 35-year period of diagnosis at the Animal Pathology Laboratory of the Federal University of Campina Grande. During the study period, 13,542 tissue samples from necropsies and biopsies were received. Among these samples, 306 were diagnosed as pythiosis: 195 cases in horses, 75 in sheep, 19 in dogs, 6 in mules, 4 in cattle, 3 in cats, 2 in goats, 1 in a donkey, and 1 in an ostrich. The equidae were the most affected species, with lesions in the skin, mammary glands and nasal cavities. Among ruminants, sheep were the most affected, with cutaneous, nasal and digestive lesions, while cattle and goats had cutaneous lesions. Carnivores developed lesions mainly in the alimentary tract, severe enough to determine the animals' death or euthanasia. The single case in a bird affected the alimentary tract and surgical excision determined remission. For most animals, the disease had a long-term and life-threatening clinical course, except for cattle that had spontaneous healing. The clinical signs were directly related to the location of the lesions, which always presented histological evidence of chronic inflammation associated with intralesional hyphae. The second chapter characterizes the epidemiological, clinical and pathological aspects and the main diagnostic techniques for pythiosis in horses, mules and donkeys. Were received 1,331 tissue samples of equidae, 202 (15.17%) of which were diagnosed as pythiosis. Equidae of both sexes with ages varying from 4 months to 25 years were affected. Most animals were mixed breed (79.7%) and reared in an extensive system (73.26%). The disease occurred throughout the year but the highest incidence (70.29%) was noted after the rainy season. The clinical course was always chronic. The lesions were preferentially located on the limbs and ventral thoracoabdominal wall and characterized by nodules or tumor-like masses with ulcerations and serosanguineous discharge. The cut surface showed fistulous tracts containing kunkers. Histopathology revealed a marked inflammatory infiltrate of eosinophils with multifocal well-defined areas of eosinophil necrosis and collagenolysis and intralesional negatively-stained hyphal profiles; in the donkey, a pyogranulomatous inflammatory infiltrate was noted surrounding these areas. Immunohistochemistry for Pythium insidiosum revealed strong immunolabelling of the hyphae. The third chapter describes three cases of pythiosis in cats, characterizing the epidemiological, clinical, and pathological findings. Were received 1,928 tissue samples of cats, three of which were diagnosed as pythiosis. Grossly, the cats showed a multinodular mass in the oral cavity associated with facial deformity (case 1), a large multinodular mass thickening the jejunum wall (case 2), and an ulcerated nodule in the skin at the base of the tail (case 3). Histologically, pyogranulomatous inflammation and necrosis, with intralesional predominantly negatively stained hyphae, were observed in all cases. Immunohistochemistry for Pythium insidiosum revealed strong immunolabelling of the hyphae. The diagnosis of pythiosis was based on the epidemiological, clinical and anatomopathological findings, and was confirmed by immunohistochemistry. The fourth chapter reports a case of esophageal pythiosis in an ostrich, characterizing the epidemiological, clinical, pathological, and immunohistochemical aspects. A 2-year-old female red-necked ostrich presented with a nodular mass in the middle third of the esophagus. Histologically, there was a focally extensive area of necrosis extending from the tunica mucosa to the adventitia. Surrounding the necrotic area were a dense inflammatory reaction composed mainly of granulocytes and macrophages and associated with fibroplasia and neovascularization. In some inflammatory and necrotic areas, there were numerous longitudinal and cross sections of negatively stained hyphae, which were best visualized using Grocott methenamine silver stain. Definitive diagnosis of infection by Pythium insidiosum was confirmed by immunohistochemistry. Pythiosis is an endemic disease in northeastern Brazil. Horses, sheep, and dogs seem to be most commonly affected, but it is important to be aware that the disease can affect other animal species. Veterinary clinicians and pathologists should be familiar with the clinicopathological features of the disease and the wide range of susceptible animal species.

TOXICIDADE DOS EXTRATOS VEGETAIS DE JATOBÁ E CHAPÉU-DE-SOL AO OOMICETO PATÓGENO Saprolegnia ferax

A utilização de quimioterápicos auxilia no controle e profilaxia de patógenos na aquicultura, mas o uso e o descarte incorretos podem apresentar perigo aos usuários e ao meio ambiente. Compostos secundários de plantas vêm despertando o interesse devido apresentarem menor risco de seleção artificial de cepas de resistência e diminuírem a exposição a agentes químicos. O presente estudo verificou a ação oomiceticida dos extratos aquosos das folhas de Terminalia sp. (EAT) e, da casca do caule de Jatobá (EAJ), e dos extratos hidroalcoólicos da casca do caule (EPCA) e do exocarpo de jatobá (EPEJ) no desenvolvimento micelial e viabilidade dos zoósporos do oomiceto Saprolegnia ferax. O cobre foi usado como substância de referência junto aos ensaios realizados em meio Maltose-Peptona (MP5) com inoculo de 0,5 cm para o micélio, enquanto que nos ensaios de viabilidade foram inoculados 2000 zoósporos ao centro das placas com meio de cultura. A avaliação do crescimento das colônias durou 72h, em triplicata. Foram realizadas análises quantitativas de fenóis para os extratos, e para análise estatística utilizou-se o programa CIp para determinar a Concentração Inibitória de 50% do crescimento micelial e viabilidade dos zoósporos, e análise de variância seguida do teste de Dunnet para a determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) de 100% para ambas as estruturas. A menor concentração de fenóis, presentes nos extratos, responsáveis pela inibição de 100% (CIM100; 72h) do crescimento micelial e da viabilidade dos zoósporos foram iguais a 0,745mg.mL-1, para o EPEJ, 1,78mg.mL-1 no EPCA e 3,029mg.mL-1 para o EAJ em ambas as estruturas testadas. No EAT a CIM100 ao fenol foi de 1,651mg.mL-1 para o micélio e 0,826mg.mL-1 para zoósporo em 72h. E concentrações de fenol inferiores a 0,052mg.mL-1 no EAT e 0,006mg.mL-1 para o EAJ apresentaram maior crescimento que as culturas do grupo controle em 24h.

The use of chemotherapy aid in the control and prophylaxis of pathogens in aquaculture, but the incorrect use and disposal may present a danger to users and the environment. Secondary plant compounds have been arousing interest because they present a lower risk of artificial selection of resistance strains and decrease exposure to chemical agents. The present study verified the oomyceticidal action of the aqueous extracts of the leaves of Terminalia sp. (EAT) and, from the bark of the Jatobá tree (EAJ), and from the hydroalcolic extracts of the tree bark (EPCA) and from the Jatobá exocarp (EPEJ) in the mycelial development and viability of the zoospores of the oomycete Saprolegnia ferax. Copper was used as a reference substance in the tests, which proceeded in a Maltose-Peptone (MP5) medium with a 0.5 cm inoculum for the mycelium, while the viability tests were inoculated with 2000 zoospores in the center of the plates with culture. Colony growth assessment lasted 72 hours, in triplicate. Quantitative analyzes of phenols were performed for the extracts, and for statistical analysis, the CIp program was used to identify the inhibitory concentration of 50% of the mycelial growth and viability of the zoospores, and the minimum inhibitory concentration (MIC) of 100% for both structures. S. ferax presented CIM100 in 72h at phenol concentrations of 0.745mg.mL-1, for EPEJ, 1.78mg.mL-1 in EPCA and 3.029mg.mL-1 for EAJ in both tested structures. In the EAT, the CIM100 for phenol was 1.651mg.mL-1 for the mycelium and 0.826mg.mL-1 for the zoospore in 72h. The phenol concentrations less than 0.052mg.mL-1 in the EAT and 0.006mg.mL-1 for the EAJ showed greater growth the cultures of the control group in 24 hours.

SURTO DE PITIOSE EQUINA E PADRONIZAÇÃO DE qPCR PARA RÁPIDA DETECÇÃO DE Pythium insidiosum

A pitiose é uma doença granulomatosa causada pelo oomiceto P. insidiosum, com curso clínico progressivo e frequentemente fatal em humanos e animais. Descrevemos o primeiro surto de pitiose equina envolvendo cinco animais, diagnosticados por cultivo microbiológico e nested-PCR em maio de 2018 em Botucatu e São Manuel-SP, após pastejarem nas margens do rio Tietê. A combinação de técnicas microbiológicas, moleculares e filogenéticas permitiram o isolamento de P. insidiosum de amostras de água do rio e a caraterização filogenética, com a primeira identificação do clado III de P. insidiosum no Brasil. Além disso, realizamos a padronização de qPCR para o diagnóstico de P. insidiosum com alvo molecular o gene ELI025. Para tanto foram utilizadas 23 isolados de P. insidiosum e 10 amostras clínicas (09 de kunkers e 01 de tecido) de animais com pitiose previamente comprovada por cultivo microbiológico ou nested-PCR. O limite de detecção foi de 1pg/L de DNA, correspondente a 17 cópias do genoma, curvas de dissociação com valor médio de 88,7ºC e coeficiente de linearidade (R²) em 0,994. A sensibilidade, especificidade e acurácia da qPCR foram de 100% em comparação com a nested-PCR, com homologia de 99% dos produtos amplificados para o gene ELI025, específico de P. insidiosum. Concluímos que a descrição do primeiro surto de pitiose equina e a identificação da fonte de infecção podem auxiliar na implantação de medidas preventivas, e a padronização de qPCR com alvo no gene ELI025 auxiliará para o diagnóstico precoce da pitiose, contribuindo substancialmente para a melhora do prognóstico do paciente.

Pythiosis is a granulomatous disease, caused by the oomycete P. insidiosum, with a progressive and often fatal clinical course in humans and animals. We described a first outbreak of equine pythiosis involving five animals diagnosed by microbiological culture of the agent and nested-PCR in May 2018 in the cities of Botucatu and São Manuel-SP, São Paulo state, after grazing on the margins of the Tietê River. The combination of microbiological, molecular, and phylogenetic techniques allowed the isolation of P. insidiosum from water samples of the river and the phylogenetic characterization of isolates in clades I and III. We also standardized qPCR for the diagnosis of P. insidiosum targeting the ELI025 gene. For this, 23 isolates of P. insidiosum and 10 clinical samples (9 from kunkers and 1 from tissue) from animals previously confirmed with pythiosis by microbiological culture or nested-PCR were employed. The detection limit was 1pg/l of DNA, corresponding to 17 copies of the genome, maximum quantification cycle of up to 35.3 cycles, dissociation curves with a mean value of 88.7ºC, and determination coefficient (R²) of 0.994. The sensitivity of the technique for clinical samples was 100%, with 99% homology for the ELI025 gene, which is specific to P. insidiosum. We concluded that the qPCR technique targeting the ELI025 gene helps in the early diagnosis and certainly will contribute to the significantly improvement of the prognosis of pythiosis.