Resumo
Os endoparasitas têm demonstrado resistência aos principais anti-helmínticos. Por isso é necessário investigar estratégias sustentáveis, sendo uma das alternativas a utilização de plantas leguminosas (Fabaceae) no controle de nematóides. Objetivou-se avaliar a atividade anti-helmíntica de 17 extratos de plantas no teste de inibição da eclodibilidade dos ovos, teste de inibição de desembainhamento de larvas de Haemonchus contortus e o teste de motilidade do Caenorhabditis elegans, in vitro. As duas melhores plantas foram levadas para teste in vivo (Arachis pintoi cv Amarillo e Caesalpinia echinata). Os extratos foram feitos a partir das folhas de Arachis pintoi cv Amarillo, Caesalpinia echinata, Cajanus cajan, Calopogonium velutinum, Canavalia ensiformis, Centrosema pubencens cv Cardillo, Cratylia mollis, Dipteryx alata, Gliricidia sepium, Leucaena leucocephala cv Cunningham, Leucaena pulverulenta, Mimosa caesalpiniaefolia, Neonotonia wighiti cv Cianova, Noenotonia wighiti cv Tinaroo, Piptadenia colubrina, Stylosanthes guianensis e Styzolobium aterrimun, as quais foram coletadas no campo agrostológico do Instituto de Zootecnia em Nova Odessa/SP. Seus princípios ativos foram extraídos em solução de acetona:água 70:30, solvente retirado por rotaevaporação, seguido por lavagem com diclorometano e liofilizado. Os resultados obtidos para o TIEO, TIDL e para o TMCE foram baseados na concentração letal de 50% (CL50), maior concentração testada 50 mg/mL e a menor 0,0975 mg/mL nos TIEO e TIDL, e TMCE a maior foi 50 mg/mL e a menor 0,039 mg/mL. Em ordem da maior para menor eficácia no TIEO foram para o extrato de P. colubrina (0,10 mg/mL), extrato de C. echinata (0,17 mg/mL) e extrato M. caesalpiniaefolia (0,53 mg/mL). Os resultados do TIDL em ordem da maior para menor eficácia foram para o extrato de S. guianensis (0,51 mg/mL), extrato de A. pintoi cv Amarillo (1,04 mg/mL) e extrato de C. echinata (1,25 mg/mL). O resultado obtido com maior eficiência na CL50 do TMCE foi o extrato de C. echinata (0,49 mg/mL), o extrato de M. caesalpiniaefolia (1,03 mg/mL), extrato de Dipteryx alata (1,50 mg/mL) e extrato de P. colubrina (1,56 mg/mL). Para o experimento in vivo utilizou-se 30 ovinos, PV médio de 32 kg (+/- 0,59), mestiços Dorper/Santa Inês, machos, não castrados. Animais foram divididos em três tratamentos: A. pintoi (A), C. echinata (B) e controle (C) infectados sem tratamento, cada tratamento continha 10 animais. Animais dos tratamentos A e B foram tratados com 10 g da planta moída juntamente no concentrado. Foram colhidos sangue e fezes para análises. Final do experimento os animais foram abatidos e abomaso lavado para a recuperação dos H. contortus. O tratamento A obteve resultado significativo de OPG (1015) quando comparado com OPG dos tratamentos B (1244) e C (1537). O comprimento dos nematóides machos (A = 1,24 cm; B = 1,31 e C = 1,35) e fêmeas (A = 1,83 cm; B = 1,91 e C = 1,97) encontrados em cada tratamento teve diferença significativa, sendo a quantidade de nematóides do tratamento A menores. Conclui-se que o experimento com a planta A. pintoi foi que propiciou redução no OPG e comprimento dos nematóides sugerindo ação anti-helmíntica com potencial de uso no controle sustentável desta verminose.
Endoparasites have demonstrated resistance to the main anthelmintics found in the Market and new sustainable strategies are needed to control them. This work aimed to evaluate the anthelmintic activity of 17 extracts of taniniferous plants that belongs to the Fabaceae family by in vitro egg hatch test (EHT), larval exsheathment test (LET) with Haemonchus contortus and larval motility test (LMT) with Caenorhabditis elegans. Arachis pintoi cv Amarillo and Caesalpinia echinata. Arachis pintoi cv Amarillo, Caesalpinia echinata, Cajanus cajan, Calopogonium velutinum, Canavalia ensiformis, Centrosema pubencens cv Cardillo, Cratylia mollis, Dipteryx alata, Gliricidia sepium, Leucaena leucocephala cv Cunningham, Leucaena pulverulenta, Mimosa caesalpiniaefolia, Neonotonia wighiti cv Cianova, Noenotonia wighiti cv Tinaroo, Piptadenia colubrina, Stylosanthes guianensis and Styzolobium aterrimun were collected from Agrostological field from Instituto de Zootecnia (Nova Odessa/SP). The phytochemicals were extracted by maceration in acetone:water (70:30). The acetone was rotoevaporated and the aqueous extract was cleared with dicloromethane. The remaining extract was liofilized and kept frozen until the use in vitro tests. EHT, LET were performed with doses ranging from 50 mg/mL to 0.0975 mg/mL and LMT with doses ranging from 50 mg/mL to 0.039 mg/mL. LC50 were calculated to compare efficacies. The extracts P. colubrina (0.1 mg/mL), C. echinata (0.17 mg/mL) and M. caesalpiniaefolia (0.53 mg/mL) presented the best results in EHT. L. pulverulenta, C. cajan, C. mollis and S. aterrimun were not effective at the higher dose in EHT (50 mg/mL). In the LET the extracts of S. guianensis (0.51mg/mL), A. pintoi cv Amarillo (1.04 mg/mL) and C. echinata (1.25 mg/mL) had the best results. In LMT, the extracts of C. echinata (0.49 mg/mL), M. caesalpiniaefolia (1.03 mg/mL), D. alata (1.5 mg/mL) and P. colubrina (1.56 mg/mL) had the best results. A. pintoi and C. echinata were chosen to be tested in vivo. In order to evaluate the plants over lambs infected with parasites, 30 lambs with average body weight of 32 kg (+/- 0,59 kg), Dorper x Santa Ines, male and not castrated were divided equaly in 3 treatments: (A) A. pintoi 10 g/day, (B) C. echinata 10 g/day and (C) control. The plants were grinded and mixed with concentrate and offered during all experiment. Blood and feces were collected for analysis. At the end of experimental period, animals were slaughtered and H. contortus were recovered from abomasum for counts, measurements and evaluation of female fertility (count of eggs). Treatment (A) with A. pintoi had lower FEC (1015) when compared with (B) C. echinata with FEC of 1244 and (C) Control with FEC of 1537 (P<0.05). The length of male worms (A = 1,24 cm; B = 1,31 cm e C = 1,35 cm) and female (A = 1,83 cm; B = 1,91 cm e C = 1,97 cm) presented differences (P<0.05), as the (A) group present smaller length. It was concluded that A. pintoi cv Amarillo reduced FEC and the size of the worms suggesting potencial anthelmintic effect in the sustainable control of parasites.
Resumo
A presença de parasitos no pescado tem sido motivo de preocupação para pesquisadores do mundo inteiro, devido aos enormes prejuízos econômicos para a indústria pesqueira, principalmente pelas espécies zoonóticas que conferem risco para a saúde pública e não em menor importância por aquelas que apresentam aspecto repugnante ao consumidor. Este trabalho foi dividido em três estudos, no primeiro, o objetivo foi identificar larvas de Anisakidae devido a sua importância higiênico-sanitária e na saúde pública, cujos parasitos infectam espécimes do peixe sapo-pescador, Lophius gastrophysus, obtidos em mercados dos municípios de Cabo Frio, Niterói, Duque de Caxias e Rio de Janeiro. Para tal, foram investigados 87 espécimes de L. gastrophysus. Desses, 17 (19,5%) estavam parasitados por larvas de anisaquideos. Estes peixes estavam parasitados com as espécies: Anisakis simplex, Hysterothylacium sp. e Raphidascaris sp., que apresentaram prevalências de 1,14, 12,6 e 12,6%, intensidade e intensidade média de infecção de 1, 2,81 e 10,5 e abundância média de 0,01, 0,35 e 1,33, respectivamente. Os sítios de infecção observados foram: o estômago, serosas do estômago e intestino e cavidade abdominal. Este foi o primeiro registro de A. simplex, Hysterothylacium sp. e Raphidascaris sp. nesta espécie de peixe. No segundo estudo, objetivou-se investigar as larvas de nematoides Anisakidae e Raphidascarididae, através do estudo integrativo, morfológico, morfométrico e genético, que infectam os linguados Paralichthys patagonicus (Pp) e Xystreurys rasile (Xr), comercializados no Estado do Rio de Janeiro, Brasil, e assim, identificar as espécies de nematoides, relacionando seus índices parasitários de prevalência (P), intensidade média (IM), abundância média (AM), amplitude de infecção (AI) e sítios de infecção (SI), juntamente com a sua importância sanitária. Para esse estudo foram necropsiados 66 espécimes de linguados, sendo 36 espécimes de P. patagonicus e 30 de X. rasile, que estavam parasitados por um total de 5915 larvas de terceiro estágio (L3) de nematoides, sendo 5666 L3 coletadas de P. patagonicus e 249 de X. rasile, pertencentes as espécies Anisakis typica com P = 11,1%, IM = 1.25, AM = 0.13, AI = 1-2 em Pp; P = 16.6%, IM = 1.8, AM = 0.3, RI = 1-3 em Xr; Terranova sp. com P = 33.3%, IM = 2.66, AM = 0.88, AI = 1-11 em Pp; P = 10%, IM = 1, AM = 0.1 em Xr; Contracaecum sp. com P = 8.3%, IM = 1.66, AM = 0.13, RI = 1-3 em Pp; P = 13.3%, IM = 1.33, AM = 0.13, AI = 1-2 em Xr; Hysterothylacium deardorffoverstreetorum com P = 100%, IM = 154.2, AM = 154.2, AI = 1-859 em Pp; P = 93.3%, IM = 7.21, AM = 6.73, AI = 1-17 em Xr; e Raphidascaris sp. com P = 38.8%, IM = 5.14, AM = 2, AI = 1-21 em Pp; P = 33.3%, IM = 3.1, AM = 1.03, AR = 1-8 em Xr. A identificação taxonômica foi baseada nos caracteres morfológicos e morfométricos, e a análise genética foi usada para A. typica e H. deardorffoverstreetorum. A caracterização genética confirmou a identificação dos espécimes das espécies de Anisakis e Hysterothylacium, usando ambos os alvos moleculares ITS e cox2, sendo este o primeiro registro de A. typica, H. deardorffoverstreetorum e Raphidascaris sp. parasitando esses linguados. O terceiro estudo teve como objetivo identificar morfológica e morfometricamente e geneticamente as espécies de Acanthocephala que parasitam P. isosceles (Pi), P. patagonicus (Pp) e X. rasile (Xr), apresentando seus índices parasitários de prevalência (P), intensidade (I), intensidade média (IM), abundância (A), abundância média (AM) e assim como as suas amplitudes de infecção (AI) e sítios de infecção. Os 120 espécimes de linguados estudados, 60 P. isosceles, 30 P. patagonicus e 30 X. rasile, foram coletados na costa do Estado do Rio de Janeiro, Brasil. Os resultados obtidos mostraram que os espécimes de P. isosceles e P. patagonicus estavam parasitados por acantocéfalos juvenis pertencentes as espécies Serrasentis sagittifer com P = 11.7%, IM = 1.4, AM = 0.17 AI = 1-4 em Pi; P = 26.7%, IM = 4.4, AM = 1.17, AI = 1-11 em Pp; Bolbosoma turbinella com P = 13.3 %, IM = 2.0, AM = 0.27, AI = 1-4 em Pi; P = 13.3 %, IM = 2.5, AM = 0.33, AI = 1-4 em Pp; Corynosoma australe com P = 5%, IM = 3.3, AM = 0.17, AI = 1-5 em Pi; P = 16.7 %, IM = 3.6, AM = 0.6, AI = 1-7 em Pp; P = 10 %, IM = 2, AM = 0.2, AI = 1-4 em Xr; e C. cetaceum com P = 1.7%, I = 1, A = 0.017 em Pi; P = 26.7 %, IM = 2.25, AM = 0.6, AI = 1-6 em Pp. Os espécimes de X. rasile estavam parasitados por C. australe, além disso, a caracterização genética confirmou a identificação dos espécimes pertencentes aos gêneros Bolbosoma e Corynosoma, como demonstrado pela análise filogenética, usando ambos os alvos moleculares ITS e cox1. Este é o primeiro registro para S. sagittifer e B. turbinella nos linguados das espécies P. patagonicus e X. rasile.
The presence of parasites in fish has been of concern to researchers worldwide due to huge economic losses to the fishery industry, especially by zoonotic species that confer risk to public health and not less important for those with repugnant aspect to consumer. This work was divided into three studies, in the first, the aim was to identify Anisakidae larvae due to its hygienic-sanitary importance and public health, whose parasites infect fish specimens of the blackfin goosefish, Lophius gastrophysus, purchased from markets in the municipalities of Cabo Frio, Niterói, Duque de Caxias and Rio de Janeiro. For this, 87 specimens of Lophius gastrophysus were investigated. Seventeen fish (19.5%) were parasitized with larvae of anisakid nematodes. These fish were parasitized with the species: Anisakis simplex, Hysterothylacium sp. and Raphidascaris sp. with prevalence of 1.14, 12.6 and 12.6%, intensity and mean intensity of infection of 1, 2.81, 10.5 and mean abundance of 0.01, 0.35 and 1.33, respectively. The sites of infection were stomach, stomach and intestine serosas and abdominal cavity. This is the first record of A. simplex, Hysterothylacium sp. and Raphidascaris sp. for this species of fish. In the second study aimed to study anisakid and raphidascaridid nematodes larvae through integrative study, morphological, morphometric and genetic, which infect flounders P. patagonicus and X. rasile commercialized in the State of Rio de Janeiro, Brazil, and thus, identify the nematodes species, relating to their parasitary indices of prevalence, mean intensity, mean abundance, range of infection, and infection sites, along with their sanitary importance. For this study, were necropsied 66 flounders specimens, i.e. 36 specimens of P. patagonicus and 30 of X. rasile, that were parasitized by a total of 5915 third larvae nematode (L3), being 5666 collected of P. patagonicus and 249 of X. rasile, of Anisakis typica with P = 11,1%, MI = 1.25, MA = 0.13, RI = 1-2 in Pp; P = 16.6%, MI = 1.8, MA = 0.3, RI = 1-3 in Xr; Terranova sp. with P = 33.3%, MI = 2.66, MA = 0.88, RI = 1-11 in Pp; P = 10%, MI = 1, MA = 0.1 in Xr; Contracaecum sp. with P = 8.3%, MI = 1.66, MA = 0.13, RI = 1-3 in Pp; P = 13.3%, MI = 1.33, MA = 0.13, RI = 1-2 in Xr; Hysterothylacium deardorffoverstreetorum with P = 100%, MI = 154.2, MA = 154.2, RI = 1-859 in Pp; P = 93.3%, MI = 7.21, MA = 6.73, RI = 1-17 in Xr; and Raphidascaris sp. with P = 38.8%, MI = 5.14, MA = 2, RI = 1-21 (Pp); P = 33.3%, MI = 3.1, MA = 1.03, RI = 1-8 in Xr. The taxonomic identification was based on morphological and morphometrical characters, and genetic analyses was used for A. typica and H. deardorffoverstreetorum. The genetic characterization confirmed the species identification of Anisakis and Hysterothylacium specimens, using both ITS and cox2 molecular targets. This is the first repport of A. typica, H. deardorffoverstreetorum, and Raphidascaris sp. parasitising these flounder species. Considerations on the zoonotic potencial of the parasites and their rules in sanitary inspection are presented. The third study aimed to identify morphologic, morphometrically and genetically Acanthocephala species parasitizing P. isosceles, P. patagonicus and X. rasile, presenting their parasitary indices of prevalence, intensity, mean intensity, abundance, mean abundance, range of infection, and their infection site. Hundred twenty specimens of flounder, i.e. 60 of Paralichthys isosceles, 30 of P. patagonicus and 30 of X. rasile were collected from the coast of State of Rio de Janeiro, Brazil. The results showed that the specimens of P. isosceles and P. patagonicus were parasitized with acanthocephalan juveniles of species Serrasentis sagittifer with P = 11.7%, MI = 1.4, MA = 0.17 RI = 1-4 in Pi; P = 26.7%, MI = 4.4, MA = 1.17, RI = 1-11 in Pp; Bolbosoma turbinella with P = 13.3 %, MI = 2.0, MA = 0.27, RI = 1-4 in Pi; P = 13.3 %, MI = 2.5, MA = 0.33, RI = 1-4 in Pp; Corynosoma australe with P = 5%, MI = 3.3, MA = 0.17, RI = 1-5 in Pi; P = 16.7 %, MI = 3.6, MA = 0.6, RI = 1-7 in Pp; P = 10 %, MI = 2, MA = 0.2, RI = 1-4 in Xr and C. cetaceum with P = 1.7%, I = 1, A = 0.017 in Pi; P = 26.7 %, MI = 2.25, MA = 0.6, RI = 1-6 in Pp. The specimens of X. rasile were parasitized with C. australe, besides this, the genetic characterization confirmed the species identification of the specimens belonging to the genera Bolbosoma and Corynosoma, as demonstrated by phylogenetic analysis using both ITS and cox1 molecular targets. This is the first repport of S. sagittifer and B. turbinella in the flounders P. patagonicus and X. rasile.