Glässer's disease in swine from Northeastern Brazil / Doença de Glässer em suínos no Nordeste do Brasil

Glässer's disease is an important infectious disorder of swine caused by Haemophilus parasuis. Although well recognized in most regions of Brazil, outbreaks of Glässer's disease have not been described in Northeastern region. For this reason, three municipalities of the Pernambuco State were visited in order to identify histories of high mortality in growing and finishing pigs. The main clinical signs consisted of dry cough, apathy, fever, anorexia, paresis, muscle tremors, motor incoordination, seizures leading to high mortality rates. Nine pigs were necropsied, and fragments of the nervous system, organs of the abdominal and thoracic cavities were collected for histological analysis. In addition, lung and brain fragments were used for DNA extraction and molecular testing by real-time Polymerase Chain Reaction (PCR). Grossly, the main lesions consisted of petechial hemorrhages or ecchymosis on the skin of the face, abdomen, forelimbs, and hind limbs. The main severe lesions consisted of hydropericardium, hemopericardium, fibrinous pericarditis and pleuropneumonia. Microscopically, pericarditis, epicarditis and subepicardial myocarditis, followed by a moderate to severe multifocal pleuropneumonia, fibrinosuppurative and necrotizing were the most frequent lesions observed. Real-time PCR amplified H. parasuis infB gene in all samples analyzed, confirming the presence of this etiologic agent.(AU)

A doença de Glässer é uma importante enfermidade infecciosa de suínos causada pela bactéria Haemophilus parasuis. Embora bem reconhecida na maioria das regiões do Brasil, surtos de doença de Glässer não têm sido descritos na região Nordeste. Por este motivo, três regiões do Estado de Pernambuco foram visitadas com o objetivo de se identificar históricos de alta mortalidade em leitões e suínos em fase de terminação. Nove suínos foram necropsiados e fragmentos do sistema nervoso, órgãos das cavidades abdominal e torácica foram coletados para análise histopatológica. Além disso, fragmentos de pulmão e cérebro foram utilizados para extração de DNA e realização de teste molecular por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) em tempo real. Os principais sinais clínicos consistiram em tosse seca, apatia, febre, anorexia, paresia, tremores musculares, incoordenação motora e convulsões levando a altas taxas de mortalidade. As lesões macroscópicas mais severas consistiam em petéquias e equimoses na pele da face, abdome, membros anteriores e posteriores, além de hidropericárdio, hemopericárdio, pericardite fibrinosa e pleuropneumonia. Microscopicamente, pericardite, epicardite e miocardite subepicárdica, seguidas de pleuropneumonia multifocal moderada a grave, fibrino-supurativa e necrosante foram as lesões mais frequentes observadas. A PCR em tempo real amplificou o gene infB de H. parasuis em todas as amostras analisadas, confirmando a presença deste agente etiológico.(AU)

Glässer's disease in swine from Northeastern Brazil / Doença de Glässer em suínos no Nordeste do Brasil

Glässer's disease is an important infectious disorder of swine caused by Haemophilus parasuis. Although well recognized in most regions of Brazil, outbreaks of Glässer's disease have not been described in Northeastern region. For this reason, three municipalities of the Pernambuco State were visited in order to identify histories of high mortality in growing and finishing pigs. The main clinical signs consisted of dry cough, apathy, fever, anorexia, paresis, muscle tremors, motor incoordination, seizures leading to high mortality rates. Nine pigs were necropsied, and fragments of the nervous system, organs of the abdominal and thoracic cavities were collected for histological analysis. In addition, lung and brain fragments were used for DNA extraction and molecular testing by real-time Polymerase Chain Reaction (PCR). Grossly, the main lesions consisted of petechial hemorrhages or ecchymosis on the skin of the face, abdomen, forelimbs, and hind limbs. The main severe lesions consisted of hydropericardium, hemopericardium, fibrinous pericarditis and pleuropneumonia. Microscopically, pericarditis, epicarditis and subepicardial myocarditis, followed by a moderate to severe multifocal pleuropneumonia, fibrinosuppurative and necrotizing were the most frequent lesions observed. Real-time PCR amplified H. parasuis infB gene in all samples analyzed, confirming the presence of this etiologic agent.(AU)

A doença de Glässer é uma importante enfermidade infecciosa de suínos causada pela bactéria Haemophilus parasuis. Embora bem reconhecida na maioria das regiões do Brasil, surtos de doença de Glässer não têm sido descritos na região Nordeste. Por este motivo, três regiões do Estado de Pernambuco foram visitadas com o objetivo de se identificar históricos de alta mortalidade em leitões e suínos em fase de terminação. Nove suínos foram necropsiados e fragmentos do sistema nervoso, órgãos das cavidades abdominal e torácica foram coletados para análise histopatológica. Além disso, fragmentos de pulmão e cérebro foram utilizados para extração de DNA e realização de teste molecular por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) em tempo real. Os principais sinais clínicos consistiram em tosse seca, apatia, febre, anorexia, paresia, tremores musculares, incoordenação motora e convulsões levando a altas taxas de mortalidade. As lesões macroscópicas mais severas consistiam em petéquias e equimoses na pele da face, abdome, membros anteriores e posteriores, além de hidropericárdio, hemopericárdio, pericardite fibrinosa e pleuropneumonia. Microscopicamente, pericardite, epicardite e miocardite subepicárdica, seguidas de pleuropneumonia multifocal moderada a grave, fibrino-supurativa e necrosante foram as lesões mais frequentes observadas. A PCR em tempo real amplificou o gene infB de H. parasuis em todas as amostras analisadas, confirmando a presença deste agente etiológico.(AU)

DOENÇAS DE SUÍNOS NO NORDESTE DO BRASIL

O Brasil é o quarto maior produtor mundial e exportador de carne suína, esta possui uma importância econômica pelo fato de que de ser a segunda fonte de proteína animal mais consumida no mundo. Porém, tanto a criação de suínos quanto o consumo da carne é pouco expressiva no Nordeste, cenário diferente da região Sul, onde os três estados lideram os primeiros lugares do ranking de maiores produtores do país. Estes apresentam criação intensiva com bons padrões de sanidade, alimentação adequada, alta tecnologia e utilização de raças melhoradas geneticamente, proporcionando uma carne de melhor qualidade para o consumidor. Enquanto que na suinocultura nordestina, predomina pequenos e médios produtores, criação extensiva e semiextensiva, muitas vezes voltada para subsistência familiar, com baixo nível tecnológico e pouca instrução técnica. Devido a precariedade na sanidade várias doenças surgem e a maioria delas podem ser evitadas a partir da implementação de boas práticas de manejo. Esta dissertação de mestrado é dividida em duas partes, a primeira tem por objetivo revisar as doenças de suínos já descritas em publicações científicas referentes a região Nordeste, onde as enfermidades foram separadas de acordo com a etiologia em intoxicações, nutricionais, infecciosas (viroses e bacterioses) e parasitárias. Destaca-se que poucas enfermidades têm sido relatadas na região Nordeste e supõe-se que outras doenças importantes ocorram, porém, não foram diagnosticadas ou não reportadas. A segunda parte é um artigo científico formatado segundo as normas de publicação da revista Pesquisa Veterinária Brasileira, que descreve os aspectos epidemiológicos, clínicos e patológicos de três surtos de Doença de Glässer no Estado de Pernambuco, onde fragmentos de pulmão e cérebro foram utilizados para extração de DNA e realização de teste molecular por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) em tempo real, que amplificou o gene infB de H. parasuis em todas as amostras analisadas, confirmando a presença deste agente etiológico.

Brazil is the fourth largest world producer and exporter of swine, this has an economic importance due to the fact that it is the second most consumed animal protein source in the world. However, both the creation of pigs and the consumption of meat is not very significant in the Northeastern, a different scenario from the South region, where the three states lead the first places in the ranking of the largest producers in the country. These have intensive breeding with good standards of health, adequate food, high technology and the use of genetically improved breeds, providing better quality meat for the consumer. While in northeastern swine farming, small and medium producers predominate, extensive and semi-extensive breeding, often geared to family subsistence, with low technological level and little technical education. Due to the precariousness in health, several diseases arise and most of them can be avoided by implementing good management practices. This master's dissertation is divided into two parts, the first of which aims to review the swine diseases already described in scientific publications referring to the Northeastern region, where the diseases were be separated according to the etiology into intoxications, nutritional, infectious (viruses and bacteriosis) and parasitic. It is noteworthy that few diseases have been reported in the Northeastern region and it is assumed that other important diseases occur, however, they have not been diagnosed or not reported. The second part is a scientific article formatted according to the publication rules of the Pesquisa Veterinária Brasileira magazine, which describes the epidemiological, clinical and pathological aspects of three outbreaks of Glässer disease in the state of Pernambuco, where lung and brain fragments were used for DNA extraction and molecular testing using real-time Polymerase Chain Reaction (PCR), which amplified the H. parasuis infB gene in all analyzed samples, confirming the presence of this etiological agent.

Caracterização molecular e imunológica da proteína TbpB de cepas clínicas de Haemophilus parasuis pertencentes ao sorovar 7

O Haemophilus parasuis (H. parasuis) é o agente etiológico da Doença de Glässer (DG), doença bacteriana que acomete suíno, gerando um alto impacto econômico na suíno cultura mundial moderna. Bactéria gram negativa, desencadeadora de severos sinais sistêmicos em suínos principalmente em fase de creche é caracterizada por poliserosite, poliartrite e meningite. O controle pela vacinação tem sido limitado devido à dificuldade de produção de vacinas com um perfil de proteção heterólogos. Os fatores de virulência durante o processo de infecção pela doença de Glasser podem variar desde sua capacidade de adesão, invasão de um tecido até sua capacidade de absorção de ferro através de receptores de transferrina. Neste estudo, foram identificadas vinte e oito cepas clínicas sorotificadas como SV7, mostrando, pela primeira vez, dados da presença epidemiológica de SV7 no Brasil em fazendas de animais distribuídas em três regiões do país com alta produção de suínos. A PCR do gene VtA estabeleceu que as 28 cepas clínicas do SV7 apresentam alto perfil virulento. O sequenciamento da TbpB demonstra um perfil de similaridade entre as TbpBs das cepas utilizadas no estudo e cepas de H. parasuis, A. pleuropneumoniae e A. suis, demonstrando a possibilidade de produção de vacinas utilizando antígenos recombinantes derivados de Tbpbs. Com base nesses resultados, demonstramos a presença de epítopos de reatividade cruzada de um lóbulo N de variantes de TbpBs expressas na superfície de 28 cepas clínicas virulentas de H. parasuis SV7.

Haemophilus parasuis (H. parasuis) is the etiological agent of Glässer's Disease (DG), a bacterial disease that affects swine, generating a high economic impact on swine modern world culture. Gram negative bacterium, triggering severe systemic signs in pigs mainly in the day care phase is characterized by polyserositis, polyarthritis and meningitis. The control by vaccination has been limited due to vaccine production difficulty with a heterologous protection profile. The virulence factors during the infection process by Glasser's disease can vary since its adhesion ability, invasion of a tissue until its iron uptake capacity through transferrin receptors. In this study, we identified twenty-eight clinical strains serotyped with SV7, showing for the first-time data from epidemiological SV7 presence in Brazil in farms animal distributed in three regions of the country with high swine production. VtA PCR established that the 28 clinical strains of SV7 have high virulent profile. Sequencing of TbpB demonstrates a similarity profile between the TbpBs of the strains used in the study and strains of H. parasuis, Actinobacillus pleuropneumoniae and A. suis demonstrating the possibility of vaccine production using recombinant antigens derived from Tbpbs. Based on these results, we demonstrated the presence of cross-reactivity epitopes one N-lobe of variants of TbpBs expressed on the surface 28 virulent clinical strains of H. parasuis SV7.

Aspectos patológicos e imuno-histoquímicos da poliserosite em búfalos (Bubalus bubalis)

Polisserosites são alterações inflamatórias das serosas viscerais e parietais das cavidades corpóreas. Um tipo especial destas alterações foi identificado em bubalinos abatidos para consumo nos anos 80, sendo associado a infecção por Chlamydia psittaci. Apesar da importância social e econômica da bubalinocultura no Brasil, do caráter zoonótico da infecção por C. psittaci e da possibilidade de envolvimento de outros agentes na afecção polisserosite de bubalinos, não houveram trabalhos desde este estudo pioneiro. Nesta dissertação amostras biológicas de coração, diafragma, fígado e pulmão, de bubalinos abatidos para consumo foram coletadas após serem identificadas como polisserosite pelo serviço de inspeção sanitária do matadouro de município de um estado do Brasi. Estas amostras foram coletadas e com objetivo de avaliar a frequência e origem dos casos. De um total de 2.887 bubalinos abatidos em um período de seis meses, foram detectados 48 (1,66%) casos de polisserosite, sendo coletados para análise material de 39 animais. Santa Cruz do Arari na Ilha de Marajó foi o município com maior frequência de casos, visto que 6,49% dos búfalos oriundos deste município apresentavam lesões. No entanto, 52,08% dos casos do presente estudo foram oriundos do município de Soure, na Ilha de Marajó, que forneceu cerca de 51% dos búfalos abatidos no período. Na macroscopia, as lesões se caracterizaram por áreas opacas, branco-amareladas, com espessamento das serosas, por vezes com franjas fibrosas na superfície dos órgãos. Na histopatologia foram encontradas projeções de tecido conjuntivo parcialmente revestidas por células mesoteliais pavimentosas com formas cuboidais. Frequentemente as projeções apresentavam um infiltrado mononuclear de intensidade variável, constituído predominantemente por células linfoides, com ocasional formação de folículos linfoides ectópicos ou terciários. Através da imuno-histoquímica foi considerado que havia um predomínio de linfócitos T em relação aos linfócitos B.

Polyserositis are inflammatory changes of the visceral and parietal serous of the body cavities. A special type of these alterations was identified in buffaloes slaughtered for consumption in the 80's, being associated with Chlamydia psittaci infection. Despite the importance of buffaloes production in Pará, the zoonotic character of C. psittaci and the possibility of involvement of other agents in the polyserositis affection of buffaloes, no studies have been found since this pioneer study. In this work, cases identified as polyserositis by the sanitary inspection service in buffaloes slaughtered for consumption in Belém, Pará, were collected to evaluate the frequency and origin of polyserositis cases in buffaloes. From a total of 2.887 buffaloes slaughtered in a six-month period, 48 (1.66%) cases of polyserositis were detected, being collected for material analysis of 39 animals. Santa Cruz do Arari on Marajó Island was the municipality with the highest frequency of findings, since 6,49% of the buffaloes from this municipality had lesions. However, 52,08% of the cases in the present study came from the municipality of Soure, from Marajó Island, which provided about 51% of the buffaloes slaughtered in the period. Samples of the lung, heart, diaphragm and liver of these animals were analyzed. In the macroscopy, the lesions were characterized by opaque, yellowish white areas, with thickening of the serous ones, sometimes with fibrous fringes on the surface of the organs. Histopathology showed connective tissue projections partially coated by cuboidal cells. Often the projections presented a mononuclear infiltrate of variable intensity, consisting predominantly of lymphoid cells, with occasional formation of ectopic or tertiary lymphoid follicles. Through the IHC it was considered that there was a predominance of T lymphocytes in relation to the B lymphocytes. In the present study, Chlamydia spp. antigens were not detected.

DETERMINAÇÃO DOS SOROVARES DE HAEMOPHILUS PARASUIS RELACIONADOS COM A DOENÇA DE GLÄSSER NO BRASIL

A Doença de Glässer (DG) é uma doença infecciosa, emergente, e de grande importância para a suinocultura mundial. Seu agente etiológico é o Haemophilus parasuis (H. parasuis), uma bactéria Gram negativa, fastidiosa, fenotipicamente heterogênea e que pode desencadear uma importante patologia sistêmica em suínos, caracterizada por poliserosite fibrinosa, poliartrite e meningite. H. parasuis é classificado em 15 sorovares (SV), no entanto, um número crescente de cepas não-tipificáveis (NS) e relacionadas à surtos de DG tem emergido, demonstrando a variabilidade genética deste microrganismo. O Brasil destaca-se como um dos principais países nessa cadeia de produção, sendo globalmente, o quarto maior em produção e exportação de carne suína. Apesar desta importância, os estudos relacionados à tipificação de cepas clínicas de H. parasuis circulantes no Brasil são escassos e não abordam a distribuição nacional dos sorovares nas principais regiões produtoras de suínos. Em nosso país, a imunoprevenção das infeções produzidas por H. parasuis é realizada através de vacinas comerciais baseadas em bacterinas mono e bivalentes, inativadas com formol e potencializadas com adjuvantes aquosos ou oleosos. Devido aos problemas relacionados com a capacidade protetora dessas vacinas, principalmente em razão da grande variabilidade fenotípica dos diferentes sorovares e da escassa ou ausente proteção cruzada conferida por um único sorovar, o isolamento e tipificação de cepas envolvidas em um surto de DG são determinantes para o desenvolvimento de um programa preventivo baseado em vacinação. Em resposta ao cenário nacional exposto acima, apresentamos neste trabalho: os sorovares de H. parasuis envolvidos em surtos de DG no Brasil; sua distribuição geográfica; o efeito temporal sobre a prevalência de sorovares; e, o impacto destas informações sobre as atuais estratégias preventivas vacinais utilizadas para prevenção da DG. Para alcançar estes objetivos, 460 cepas clínicas de H. parasuis provenientes de dez estados do Brasil, abrangendo as principais regiões produtoras de suínos, foram analisadas. As cepas foram tipificadas através da técnica de PCR multiplex desenvolvida por Howell et al. (2015) e a diferenciação dos sorovares 5 e 12 foi realizada mediante a técnica de hemaglutinação indireta modificada desenvolvida por Lorenson et al. (2017). Nossos resultados demonstram que a nível nacional os sorovares mais prevalente são SV 4 (26.6%), NS (17.6%), SV 1 (13.1%), SV 14 (12.6%) e SV 5 (10.7%). Considerando-se a virulência dos sorovares, de acordo com a classificação proposta por Kielstein e Rapp-Gabrielson (1992), mais da metade do total dos isolados pertencem ao grupo dos sorovares altamente virulentos (51.0%) e 31.4% ao grupo dos sorovares moderadamente virulentos. Observamos que as cepas NS foram isoladas fundamentalmente do sistema respiratório, envolvendo pulmões (64.9%), área nasal (13.0%) e traqueia (10.4%). Por outro lado, os sorovares 5 e 14 foram basicamente isolados de cérebro, coração, articulações e líquidos cavitários. Quando relacionados à virulência, 62.5% dos sorovares altamente virulentos foram isolados a partir de locais sistêmicos e os demais procedentes do sistema respiratório. Em relação à distribuição geográfica, observamos a presença dos sorovares 1, 4, 5, 512, 14, 15 e NS em praticamente todos os estados analisados. Por outro lado, os sorovares 2 e 13 somente foram detectados em SC, MT e MG, além disso o sorovar 12 ficou basicamente restrito ao RS . Os estados com maior número de amostras analisadas foram MG e SC, fato que pode estar relacionado com as altas densidades de suínos produzidos nestas regiões. Também, verificamos que ao longo da linha temporal dos isolamentos ocorreu entre os anos de 2013 a 2016, um aumento no número de isolados clínicos e entre estes, de cepas altamente virulentas. Em síntese, apresentamos neste estudo, uma atualização dos sorovares de H. parasuis associados com a DG no Brasil e, destacamos que as vacinas comerciais disponíveis em nosso pais não incluem 76.3% dos sorovares presentes em nossas granjas produtoras de suínos. Desta maneira, o sucesso da prevenção da DG em nosso país em curto prazo está condicionado ao uso de vacinas autógenas e, em longo prazo, a uma atualização da composição antigênica das atuais vacinas comerciais.

Glässer's disease (GD) is an emerging bacterial disease of great importance to the world's pig farming. Its etiologic agent is Haemophilus parasuis (H. parasuis), a fastidious, phenotypically heterogeneous Gram negative bacterium that can trigger an important systemic pathology in pigs characterized by fibrinous polyserositis, polyarthritis and meningitis. H. parasuis is classified in 15 serovars (SV), however, a growing number of non-typeable (NT) strains and related to outbreaks of GD have emerged, demonstrating the genetic variability of this microorganism. Brazil stands out as one of the main countries in this production chain, being the fourth largest in swine production and exportation. Studies related to typing clinical strains of H. parasuis that are circulating in Brazil are scarce, even with its importance, and there are no studies that demonstrate the national screening of distribution of the serovars in the main producing regions of swine. In our country, the immunoprevention of the H. parasuis infections relays in commercial vaccines based on monovalent and bivalent bacterins inactivated with formalin and potentiated with aqueous or oily adjuvants. Due to the problems related to the protective capacity of these vaccines, mainly due to the high phenotypic variability of the different serovars of this pathogen and the little or absent cross-protection conferred by a single serovar, isolation and characterization of strains involved in a GD outbreak are determinant for the development of more racional vaccine-based preventive program. In response to the national scenario related to H. parasuis and GD, we present here the H. parasuis serovars involved in outbreaks of DG in Brazil, their geographic distribution, the temporal effect on the prevalence of serovars, and the impact of these work in the vaccines actually used. To reach these objectives, 460 clinical isolates of H. parasuis from ten Brazilian states, covering the main swine producing regions, were analyzed. The strains were typed by multiplex PCR technique developed by Howell et al. (2015), and the differentiation of serovars 5 and 12 was performed using the modified indirect hemagglutination technique developed by Lorenson et al. (2017). Our results show that the most prevalent serovars are SV 4 (26.6%), NT (17.6%), SV 1 (13.1%), SV 14 (12.6%) and SV 5 (10.7%). Taking into account the virulence of serovars, according to the classification proposed by Kielstein and Rapp-Gabrielson (1992), more than half of all isolates belong to the highly virulent serovars group (51.0%) and 31.4% to the serovars moderately virulent group. We observed that NT strains were fundamentally isolated from the respiratory system, involving lungs (64.9%), nasal area (13.0%) and trachea (10.4%). On the other hand, serovars 5 and 14 were basically isolated from brain, heart, joints and cavitary fluids. When related to virulence, 62.5% of the highly virulent serovars were isolated from systemic sites and the others from the respiratory system. Regarding the geographic distribution, we observed the presence of serovars 1, 4, 5,5/12, 14, 15 and NS in almost all analyzed states. On the other hand, serovars 2 and 13 were only detected in SC, MT and MG, respectively; in addition, serovar 12 was basically restricted to RS. The states with the highest number of analyzed samples were MG and SC, a fact that may be related to the high densities of pigs produced in these regions. In addition, we observed that the number of field isolates and amongst them of highly virulent strains have increased between 2013 to 2016. In summary, we present an update of H. parasuis serovars associated with GD in Brazil, and we highlight that the commercial vaccines available in our country do not include 76.3% of the serovars present on our pig production farms. Thus, the short-term success of GD prevention in our country is conditioned by the use of autogenous vaccines and, in the long term, an update of the antigenic composition of current commercial vaccines.

Caracterização fenotípica e molecular de estirpes de Haemophilus parasuis isoladas de suínos da região Centro-sul do Brasil

Haemophilus parasuis é o agente etiológico da Doença de Glässer, que causa artrite, pneumonia, meningite e poliserosite em suínos e tem assumido grande importância na suinocultura moderna, uma vez que sua ocorrência tem aumentado significativamente nos últimos anos em rebanhos afetados pelo circovirus suíno tipo 2. No presente estudo foram avaliadas 117 amostras de H. parasuis isoladas dentre os anos de 2009 a 2014, isoladas de suínos de diferentes estados do da região Centro-Sul do Brasil. As estirpes foram submetidas à sorotipificação, confirmação do gênero/espécie pela PCR, o perfil de resistência a antimicrobianos foi avaliado através da determinação da concentração inibitória mínima (CIM), foi realizada a caracterização genotípica das amostras por eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE) e por sequenciamento de múltiplos sítios (multilocus sequence typing - MLST) e a presença de genes de virulência vtaA foi analisada. Os sorotipos mais frequentes foram: 4 (21,3%), seguido do 5 (12,9%), do 13 (9,4%), do 14 (7,7%) e do sorotipo 1 (1,7%), e em alguns casos mais de um sorotipo foi identificado na mesma granja e até no mesmo animal, resultado este parecido ao encontrado no restante do mundo. Em todas as amostras o gene vtaA estava presente, para alguns antibióticos os índices de resistência foram elevados, como para tilosina (98,29%), danofloxacina (95,72%), sulfadimetoxina (88,03%), penicilina (77,7%) e a multirrestencia atingiu o índice alarmente de 93,16% das estirpes. Foram identificados 67 perfis diferentes no PFGE e das 9 amostras analisadas pelo MLST foram identificados novos STs, até então, não descritos mundialmente. Quando os novos STs foram comparados com os previamente descritos, estas se dispersaram entre as descritas em diferentes países. Neste estudo foi possível observar que as estirpes de H. parasuis brasileiras possuem alta variabilidade, tanto nos sorotipos, perfis de resistência, análises genômicas de PFGE e MLST.

Haemophilus parasuis is the etiological agent of Glässer disease that causes arthritis, pneumonia, meningitis and polyserositis in pigs and has assumed great importance in modern swine production, since its occurrence has increased significantly in recent years in herds affected by porcine circovirus type 2. In the present study 117 strains of H. parasuis isolated between 2009 to 2014 were utilized, isolated from pigs of south center of Brazil. The strains were serotyping, confirmed genus/species by PCR, the antimicrobial resistance profile was evaluated determining the minimum inhibitory concentration (MIC) and strains were genotypically characterized by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE), multilocus sequence typing (MLST) and presence of vtA virulence gene. The major serotypes identified were 4 (21.3%), 5 (12.9%), 13 (9.4%), 14 (7.7%) and at last the 1 (1.7%), In some cases more than one serotype was identified in the same farm and in the same animal, this results were identified in others parts of the world. All samples had vtA gene. The resistance for some antibiotics was high for tylosin (98.29%), danofloxacin (95.72%) sulfadimetoxin (88.03%), and penicillin (77.7%). Multidrug resistance rates reached 93.16% of the samples. A total of 67 different profiles were identified in PFGE and nine samples were analyzed by MLST. All nine strains tested were identified as new STs. When these strains were compared with MLST database, they were dispersed among the strains from other countries. In this study, it was clear that the Brazilian H. parasuis strains are highly variable considering serotypes, resistance profiles, genomic analysis of PFGE and MLST.

General points about the infection by haemophilus parasuis in swine review / Aspectos gerais sobre a infecção por haemophilus parasuis em suínos revisão

The Haemophilus parasuis is a Gram-negative, nonhemolytic, nonmotile and nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) dependent bacterium, commonly found in the nasal cavity of healthy swine. However, it is also the cause of Glässers disease, characterized by polyserositis, polyarthritis and meningitis in young pigs. This review highlights general aspects about the infection, including etiology, epidemiology, pathogenesis, clinical signs, lesions, diagnosis, prevention and control of the disesase.

O Haemophilus parasuis é uma bactéria gram negativa, não hemolítica, imóvel e nicotinamida adenina dinucleotídeo (NAD) dependente, comumente encontrada na cavidade nasal de suínos saudáveis. Entretanto, também é o agente causador da Doença de Glässer, manifestada por poliserosite, poliartrite e meningite em suínos jovens. Esta revisão enfoca aspectos gerais sobre a infecção, abrangendo desde etiologia, epidemiologia, patogenia, sinais clínicos, lesões, diagnóstico, prevenção e controle da enfermidade.

GENERAL POINTS ABOUT THE INFECTION BY HAEMOPHILUS PARASUIS IN SWINE REVIEW / ASPECTOS GERAIS SOBRE A INFECÇÃO POR HAEMOPHILUS PARASUIS EM SUÍNOS REVISÃO

The Haemophilus parasuis is a Gram-negative, nonhemolytic, nonmotile and nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) dependent bacterium, commonly found in the nasal cavity of healthy swine. However, it is also the cause of Glässers disease, characterized by polyserositis, polyarthritis and meningitis in young pigs. This review highlights general aspects about the infection, including etiology, epidemiology, pathogenesis, clinical signs, lesions, diagnosis, prevention and control of the disesase.

O Haemophilus parasuis é uma bactéria gram negativa, não hemolítica, imóvel e nicotinamida adenina dinucleotídeo (NAD) dependente, comumente encontrada na cavidade nasal de suínos saudáveis. Entretanto, também é o agente causador da Doença de Glässer, manifestada por poliserosite, poliartrite e meningite em suínos jovens. Esta revisão enfoca aspectos gerais sobre a infecção, abrangendo desde etiologia, epidemiologia, patogenia, sinais clínicos, lesões, diagnóstico, prevenção e controle da enfermidade.

Sorotipagem de amostras de Streptococcus suis isoladas de suínos em granjas dos Estados de São Paulo, Minas Gerais e Paraná / Serotyping of Streptococcus suis strains isolated from pigs in the States of São Paulo, Minas Gerais e Paraná, Brazil

Infecções causadas por Streptococcus suis são muito comuns em países onde a indústria de carne suína é desenvolvida. Estas infecções estão relacionadas a casos clínicos de broncopneumonia, meningite, artrite, pericardite, miocardite, endocardite, poliserosite fibrinosa, septicemia, rinite e aborto. Esta bactéria também foi descrita como patógeno de ruminantes e humanos. No Brasil há evidências clínicas da existência de processos infecciosos causados por S. suis afetando mais de 50 por cento das granjas em Estados como São Paulo, Minas Gerais e Paraná. No presente estudo foram isoladas 51 amostras de S. suis de granjas do Estados acima referidos, coletadas de diferentes casos clínicos como septicemia, meningite, artrite e pneumonia, tendo sido obtidas ou em cultura pura ou como patógeno de maior predominância nos tecidos de suínos. Este material foi semeado em Columbia ágar sangue adicionado de 5 por cento de sangue bovino e incubado a 37ºC por 24 horas. Para a identificação bioquímica as colônias que apresentavam a-hemólise, bem como as amostras padrão, foram submetidas a testes convencionais para a confirmação da espécie S. suis, tais como: hidrólise de arginina, teste de Voges-Proskauer, e produção de ácido a partir de vários carboidratos (inulina, salicina, trealose, lactose, sacarose, sorbitol, manitol e glicerol). As amostras também foram testadas para habilidade de crescimento em meio de TSA com 6,5 por cento de NaCl e para a produção de amilase. Todas as amostras que fizeram parte desta pesquisa foram testadas pelo sistema Api 20 Strep para confirmação dos resultados obtidos nos testes convencionais. Para a sorotipagem foram produzidos antissoros de 1 a 8. Outras amostras não pertencentes a estes sorotipos também foram sorotipadas...(AU)

Caracterização genotípica de cepas de Haemophilus parasuis / Genotype characterization of Haemophilus parasuis strains

Haemophilus parasuis é um dos agentes bacterianos que tem assumido grande importância na indústria suinícola nos últimos anos. Por muitos anos foi considerada uma doença esporádica de suínos jovens, no entanto, com o surgimento de doenças imunossupressoras ou com o aumento da criação de suínos com alto status sanitário, sua freqüência vem assumindo proporções cada vez maiores. A caracterização das cepas através de métodos fenotípicos como a sorotipagem não tem sido suficiente para os estudos epidemiológicos sobre esta bactéria, uma vez que muitos isolados não são sorotipificáveis. Os objetivos deste estudo foram caracterizar os isolados através da sorotipagem, do Polimorfismo do Comprimento de Fragmentos Amplificados (AFLP) e da Eletroforese em Gel de Campo Pulsado (PFGE), comparando os resultados obtidos. Dentre as 51 cepas de Haemophilus parasuis avaliadas uma foi classificada como sorotipo 2, doze como sorotipo 4, seis como sorotipo 5, quatro como 13 e sete como sorotipo 14, sendo que vinte e uma amostras não foram sorotipificáveis. Através do AFLP foi possível caracterizar todos os isolados, com um índice discriminatório de 0,98, porém esta técnica não demonstrou uma boa reprodutibilidade. Através da PFGE utilizando a enzima Sma I apenas 14 cepas foram genotipadas, porém com a enzima Not I, todas apresentaram padrões de bandas e o índice discriminatório obtido foi de 0,95. Os perfis obtidos através da PFGE com a enzima Not I apresentaram a melhor correlação com os dados de origem das cepas e seus sorotipos, indicando que a técnica possui um bom potencial para aplicação em estudos epidemiológicos

In recent years, Haemophilus parasuis has had a growing impact on the swine industry. In the past, Haemophilus parasuis infections were considered to be sporadic in young pigs. However, the incidence is increasing due to immunosuppressive diseases and the increase in the production of pigs with high sanitary status. Characterization of strains using methods based on phenotype identification is not enough to perform epidemiological studies on thebacterium, since a large percentage of isolates are nontypeable). The aim of this study was to characterize isolates according to serotyping, Amplified Fragment Length Polymorphism (AFLP), and Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE), and to compare characterization results. Out of the 51 strains of Haemophilus parasuis evaluated in this study: one was serotype 2; twelve serotype 4; six serotype 5; four serotype 13; and seven serotype 14. Serotyping could not be performed on the remaining 21 samples. All isolates were characterized using AFLP, with a discriminatory index of 0.98, but reproducibility of this technique is not good. Regarding PFGE, 14 strains were genotyped using enzyme Sma I; yet, with enzyme Not I, all strains presented band size and discriminatory index power of 0.95. The profiles obtained using PFGE with Not I presented better correlation with the origin and serotype of the strains, suggesting that this technique could be used in epidemiological studies with promising results