Tracheal post-vaccinal reaction to different strains of Newcastle disease vírus / Reação traqueal pós-vacinal à diferentes cepas do vírus da doença de Newcastle

The aim of the present study was to evaluate the post-vaccinal reaction to two lentogenic vaccine strains of Newcatle disease virus (NDV) and a recombinant turkey herpesvirus (rHVT) vaccine expressing the fusion glycoprotein of NDV in broiler chickens through histomorphometric and histopathologic analyses of the trachea. The experiment involved 245 chicks housed in randomized blocks with three different enclosures under controlled conditions of temperature, light and ventilation. Each enclosure represented a vaccine strain and was divided into groups according to the administration route. Each block also had its own control group composed of unvaccinated birds. The vaccine strains PHY.LMV.42 (PL42) and La Sota (LS) were selected according to the Intracerebral Pathogenicity Index (ICPI) and the rHVT-NDV Serotype 3 strain (ST3) was selected for representing non-NDV infection. At two, four, seven, 14 and 21 days post vaccination, fragments from the middle third of the trachea were collected and submitted to routine histological processing. For the histomorphometric analysis, the slides were photographed, and the thickness of the tracheal mucosa was measured. Statistical analysis involved two-way ANOVA and Tukey's post-hoc test with a 5% significance level. For the histopathological evaluation, lesions were described as to the degree of intensity and distribution. At four and 14 days post vaccination with the LS strain administered by the ocular route, the means of thickening of the tracheal mucosa (20.85±7.31µm and 26.97±5.50µm, respectively) were significantly higher (p<0.05) than for all other strains, which was related to the severe histopathological lesions found in this group, characterized by hyperemia, hyperplasia of the mucous glands, moderate deciliation and multifocal lymphohistiocytic inflammatory infiltrate. At 21 days, broiler chickens vaccinated with the ST3 strain showed more discrete lesions and less thickening of the tracheal mucosa (23.23±7.62µm; p<0.05) in comparison with other studied strains. The lesions found in this group were only hemorrhage, deciliation and mild focal lymphocytic inflammatory infiltrate. The results of the histomorphometry and histopathology of the trachea indicated that vaccination with rHVT-NDV Serotype 3 strain induced lower degree post-vaccine tracheal lesions compared to other vaccine strains analyzed in this study.

Objetivou-se avaliar a reação pós-vacinal de duas estirpes lentogênicas do vírus da doença de Newcastle (VDN) e uma vacina recombinante de herpesvirus de perus (rHVT) que expressa a glicoproteína de fusão de VDN em frangos de corte por meio da histomorfometria e histopatologia da traqueia. Foram utilizados 245 pintos alojados em blocos ao acaso, sendo três galpões distintos em condições controladas de temperatura, luz e ventilação. Cada galpão representou uma cepa vacinal, onde foram divididos por grupos de acordo com a via de administração. Todos os blocos possuíam um grupo controle composto por aves não vacinadas. As cepas vacinais PHY.LMV.42 (PL42) e La Sota (LS) utilizadas foram selecionadas de acordo com o Índice de Patogenicidade Intracerebral (IPIC) e a cepa Sorotipo 3 (ST3), da vacina rHVT-VDN foi selecionada por não representar infecção do VDN. Aos dois, quarto, sete, 14 e 21 dias pós-vacinação, fragmentos do terço médio da traqueia foram coletados e posteriormente processados conforme rotina histológica. Para análise histomorfométrica da mucosa traqueal, as lâminas foram fotografadas e realizadas as mensurações da espessura da mucosa traqueal sendo aplicado teste de análise de variância a dois critérios (ANOVA) e utilizando o post-hoc de Tukey com nível de significância de 5%. Para a avaliação histopatológica foram observadas a presença de lesões microscópicas e estas foram descritas quanto ao grau de intensidade e distribuição. Aos quatro e quatorze dias pós-vacinação com a cepa LS administrada por via ocular, as médias do espessamento da mucosa traqueal (20,85±7,31µm e 26,97±5,50µm, respectivamente) foram significativamente maiores (p<0,05) quando comparada a todas as demais cepas utilizadas, isto se deve às severas lesões histopatológicas encontrados neste grupo, caracterizadas por hiperemia, hiperplasia das glândulas mucosas, deciliação moderada e infiltrado inflamatório linfohistiocitário multifocal moderado. Já aos 21 dias as aves vacinadas com a cepa ST3 apresentaram lesões mais discretas e menor espessamento da mucosa da traqueia (23,23±7,62µm; p<0,05) em comparação às demais cepas estudadas. As lesões encontradas neste grupo foram apenas hemorragia, deciliação e infiltrado inflamatório linfocitário focal discreto. Os resultados da histomorfometria e da histopatologia da traqueia indicou que a vacinação com a rHVT-NDV, cepa Sorotipo 3 induziu menor grau de lesões pós-vacinais na traqueia comparada a outras cepas vacinais analisadas nesse estudo.

Evaluation of quantitative polymerase chain reaction for the detection of Toxoplasma gondii oocysts shed by cats / Avaliação da reação em cadeia da polimerase quantitativa para a detecção de oocistos de Toxoplasma gondii eliminados por gatos

Abstract Felines are definitive hosts of Toxoplasma gondii and can shed oocysts in their feces, contaminating the environment. Sporulated oocysts are highly resistant to the environment and have higher infectivity, which are attributed to many toxoplasmosis outbreaks. The aim of the present study was to evaluate a quantitative polymerase chain reaction (qPCR) technique for the detection of T. gondii oocysts shed by cats. Twelve cats from a previous vaccine experiment were challenged orally with 600 cysts of the TgDoveBr8 strain on day 72. Fecal samples were collected daily using the centrifugal flotation technique, with microscopic examination (Sheather technique) and qPCR for 20 days after the challenge. Cats from all groups shed oocysts in their feces. Five negative cats in the Sheather were positive according to qPCR on the 3rd day post-inoculation (dpi). Oocysts were detected on the 4th dpi using the Sheather; however, there was no statistical difference between the two methods (p=0.1116). In addition, there was no statistically significant difference in oocyst shedding between the groups according to the Sheather technique (p=0.6534) and qPCR (p=0.9670). In conclusion, these results demonstrate that qPCR can be used as an alternative to the Sheather to detect and quantify T. gondii oocysts.

Resumo Felinos são hospedeiros definitivos do Toxoplasma gondii e podem eliminar oocistos nas fezes, contaminando o meio ambiente. Oocistos esporulados são altamente resistentes ao meio ambiente com elevada infectividade, sendo atribuído a muitos surtos de toxoplasmose. O objetivo do estudo foi avaliar a reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) para a detecção de oocistos de T. gondii eliminados por gatos. Doze gatos de um experimento prévio de vacina foram desafiados por via oral com 600 cistos da cepa TgDoveBr8 no dia 72. Amostras fecais foram coletadas diariamente pela técnica de centrifugo-flutuação seguida de exame microscópico (técnica de Sheather) e qPCR por 20 dias após desafio. Gatos de todos os grupos eliminam oocistos nas fezes. Cinco gatos negativos na técnica Sheather foram positivos de acordo com a qPCR no 3º dia pós-inoculação (dpi). Oocistos foram detectados no 4º dpi no Sheather; entretanto, não houve diferença estatística entre os dois métodos (p=0,1116). Não houve diferença estatisticamente significativa na eliminação de oocistos entre os grupos de acordo com a técnica de Sheather (p = 0,6534) e qPCR (p = 0,9670). Em conclusão, esses resultados demonstram que qPCR pode ser usada como uma alternativa ao Sheather para detectar e quantificar oocistos de T. gondii.

Occurrence of vaccine abscesses in bovines after the administration of bivalent foot-and-mouth disease vaccine / Ocorrência de abscessos vacinais em bovinos após aplicação da vacina antiaftosa bivalente

The aim of the present study is to identify the occurrence of abscesses in cattle after the administration of bivalent foot-and-mouth disease vaccine as adverse reaction to components in the new commercial vaccine formulation. Thirty bovines were divided into three groups composed of 10 animals, each. Groups 1 and 2 were vaccinated by researchers based on good vaccination practices criteria. Group 1 was intramuscularly administered with the vaccine, Group 2 received it through subcutaneous route and Group 3 was vaccinated by breeders through subcutaneous route. Animals were selected and observed in vivo in three different moments (7, 28 and 45 days after vaccination). Subsequently, they were observed during post mortem inspection in order to assess the occurrence of vaccine abscesses. Vaccine abscesses were recorded in 40% of bovines in Group 1, in 50% of the ones in Group 2 and in 60% of those in Group 3. There was no significant difference between experimental groups based on the Chi-square test and on Cramer's V analysis; there was no significant difference among experimental groups. Excess of carcass parts presenting vaccine abscesses during post mortem inspection resulted in the meat loss of 1.775 kg in Group 1, of 2.303 kg in Group 2 and of 3.268 kg in Group 3. In conclusion, despite changes in bivalent foot-and-mouth disease vaccine formulation, care should be taken at vaccination time to minimize the occurrence of vaccine abscesses and, consequently, meat losses at slaughter, as well as to reduce losses in beef production chain.(AU)

O presente estudo objetivou identificar a ocorrência de abcessos em bovinos após a aplicação da vacina antiaftosa bivalente, como reação adversa aos componentes da nova formulação comercial. Foram avaliados 30 bovinos divididos em três grupos de 10 animais. Os Grupos 1 e 2 foram vacinados pelos pesquisadores seguindo os critérios de boas práticas de vacinação, sendo o Grupo 1 vacinado pela via intramuscular e o Grupo 2 pela via subcutânea, já o Grupo 3 foi vacinado pelo produtor rural utilizando a via subcutânea. Os animais foram isolados e observados in vivo em três momentos (7°, 28° e 45° dias após a vacinação), em seguida foram observados durante a inspeção post mortem para constatação da ocorrência de abscessos vacinais. Registrou-se a ocorrência de abscessos vacinais em 40% dos bovinos do Grupo 1, em 50% do grupo 2 e em 60% do grupo 3. Não houve diferença significativa entre os grupos experimentais segundo o teste do Qui-quadrado e a análise do V de Cramer. A partes cárneas excisadas das carcaças com abcessos vacinais durante a inspeção post mortem resultaram em uma perda cárnea de 1.775 kg no Grupo 1, de 2.303 kg no Grupo 2 e de 3.268 kg no Grupo 3. Conclui-se, que mesmo com a alteração da formulação da vacina antiaftosa, são necessários cuidados no ato da vacinação, a fim de minimizar a ocorrência de abscessos vacinais e consequentes perdas cárneas no ato do abate dos animais, diminuindo assim os prejuízos à cadeia produtiva da carne.(AU)

Occurrence of vaccine abscesses in bovines after the administration of bivalent foot-and-mouth disease vaccine / Ocorrência de abscessos vacinais em bovinos após aplicação da vacina antiaftosa bivalente

The aim of the present study is to identify the occurrence of abscesses in cattle after the administration of bivalent foot-and-mouth disease vaccine as adverse reaction to components in the new commercial vaccine formulation. Thirty bovines were divided into three groups composed of 10 animals, each. Groups 1 and 2 were vaccinated by researchers based on good vaccination practices criteria. Group 1 was intramuscularly administered with the vaccine, Group 2 received it through subcutaneous route and Group 3 was vaccinated by breeders through subcutaneous route. Animals were selected and observed in vivo in three different moments (7, 28 and 45 days after vaccination). Subsequently, they were observed during post mortem inspection in order to assess the occurrence of vaccine abscesses. Vaccine abscesses were recorded in 40% of bovines in Group 1, in 50% of the ones in Group 2 and in 60% of those in Group 3. There was no significant difference between experimental groups based on the Chi-square test and on Cramer's V analysis; there was no significant difference among experimental groups. Excess of carcass parts presenting vaccine abscesses during post mortem inspection resulted in the meat loss of 1.775 kg in Group 1, of 2.303 kg in Group 2 and of 3.268 kg in Group 3. In conclusion, despite changes in bivalent foot-and-mouth disease vaccine formulation, care should be taken at vaccination time to minimize the occurrence of vaccine abscesses and, consequently, meat losses at slaughter, as well as to reduce losses in beef production chain.

O presente estudo objetivou identificar a ocorrência de abcessos em bovinos após a aplicação da vacina antiaftosa bivalente, como reação adversa aos componentes da nova formulação comercial. Foram avaliados 30 bovinos divididos em três grupos de 10 animais. Os Grupos 1 e 2 foram vacinados pelos pesquisadores seguindo os critérios de boas práticas de vacinação, sendo o Grupo 1 vacinado pela via intramuscular e o Grupo 2 pela via subcutânea, já o Grupo 3 foi vacinado pelo produtor rural utilizando a via subcutânea. Os animais foram isolados e observados in vivo em três momentos (7°, 28° e 45° dias após a vacinação), em seguida foram observados durante a inspeção post mortem para constatação da ocorrência de abscessos vacinais. Registrou-se a ocorrência de abscessos vacinais em 40% dos bovinos do Grupo 1, em 50% do grupo 2 e em 60% do grupo 3. Não houve diferença significativa entre os grupos experimentais segundo o teste do Qui-quadrado e a análise do V de Cramer. A partes cárneas excisadas das carcaças com abcessos vacinais durante a inspeção post mortem resultaram em uma perda cárnea de 1.775 kg no Grupo 1, de 2.303 kg no Grupo 2 e de 3.268 kg no Grupo 3. Conclui-se, que mesmo com a alteração da formulação da vacina antiaftosa, são necessários cuidados no ato da vacinação, a fim de minimizar a ocorrência de abscessos vacinais e consequentes perdas cárneas no ato do abate dos animais, diminuindo assim os prejuízos à cadeia produtiva da carne.

Adverse effects of foot-and-mouth disease vaccine in dairy cattle / Efeitos adversos da vacina contra febre aftosa em bovinos de leite

Foot-and-mouth disease represents an important barrier to the international commerce of animal products, potentially associated with significant economic losses. The systematic vaccination of bovines and buffaloes was fundamental for the eradication of this disease; however, the use of vaccines can lead to reactions at the application site. The objectives of this study were to evaluate the effects of the vaccination protocol to the production of dairy cows and to observe the occurrence of vaccinal reactions in the animals. At one property located in the municipality of Salvador do Sul, Rio Grande do Sul, 270 dairy cows were vaccinated against foot-and-mouth disease in May 2019. The vaccine was administered via a subcutaneous application using disposable syringes and needles for each animal. Inspection of the animals was performed before and 20 days after the vaccination to verify the presence of reactions to the vaccine. The study's sample was set by convenience, including 203 lactating animals with or without bovine somatotropin (BST) administration during the data collection period, which was limited to 20 days before and 20 days after the vaccination. Milk production data was obtained through SmartDairy® HerdMetrix™ software, tabulated in electronic spreadsheets using Microsoft Excel® and processed using the program SAS®, considering a 5% significance level for mixed model statistical analysis. A total of 160 animals (78.82%) presented local lesions at the application site, even when the recommended vaccination practices were followed, suggesting that the high reaction power was provoked by the vaccinal components. In regards to milk production, a statistically significant (p<0.05) decrease of 0.30kg of milk per animal/day was observed in the average daily production in the 20 days post-vaccination. These results demonstrate the local and systemic effects caused by the foot-and-mouth disease vaccine, evidenced by reduced levels of milk production and the occurrence of vaccine reactions, implying significant economic losses.(AU)

A febre aftosa representa uma importante barreira no comércio internacional de produtos de origem animal, podendo acarretar em significativas perdas econômicas. A vacinação sistemática de bovinos e bubalinos foi fundamental para a erradicação da doença. No entanto, a utilização de vacinas pode causar reações no local da aplicação. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da vacina em bovinos leiteiros e observar a incidência de reações vacinais no local de aplicação. O estudo foi realizado numa propriedade leiteira do município de Salvador do Sul, Rio Grande do Sul, onde foram vacinados 270 bovinos contra febre aftosa no mês de maio de 2019. A vacina foi administrada por via subcutânea, com seringas e agulhas descartáveis para cada animal. Foi realizada inspeção dos animais antes da vacinação e 21 dias após a vacinação, para verificar a presença de reações vacinais. A amostra foi definida por conveniência, incluindo 203 vacas em lactação com ou sem administração de somatotropina bovina (BST) durante o período de coleta de dados, que l foi de 20 dias antes e 20 dias após a vacinação. Estes dados de produção de leite foram obtidos através do software SmartDairy® HerdMetrix™, tabulados em planilhas eletrônicas do Microsoft Excel® e processados usando o programa SAS®, considerando 5% de nível de significância para uma análise estatística modelo misto. Foi observado que 160 (78,82%) vacas apresentaram lesões no local de aplicação, mesmo quando a aplicação era realizada de acordo com as boas práticas de vacinação, o que indica o alto poder de reação provocada pelos componentes da vacina. Em relação à produção de leite, observou-se uma redução significativa (p<0,05) na produção média diária de 0,30kg de leite por animal/dia nos 21 dias após a vacinação. Esses resultados demonstram os efeitos locais e sistêmicos provocados pela vacina da febre aftosa, evidenciados pela redução na produção de leite e pela incidência de reações vacinais, o que implica em significativas perdas econômicas.(AU)

Adverse effects of foot-and-mouth disease vaccine in dairy cattle / Efeitos adversos da vacina contra febre aftosa em bovinos de leite

Foot-and-mouth disease represents an important barrier to the international commerce of animal products, potentially associated with significant economic losses. The systematic vaccination of bovines and buffaloes was fundamental for the eradication of this disease; however, the use of vaccines can lead to reactions at the application site. The objectives of this study were to evaluate the effects of the vaccination protocol to the production of dairy cows and to observe the occurrence of vaccinal reactions in the animals. At one property located in the municipality of Salvador do Sul, Rio Grande do Sul, 270 dairy cows were vaccinated against foot-and-mouth disease in May 2019. The vaccine was administered via a subcutaneous application using disposable syringes and needles for each animal. Inspection of the animals was performed before and 20 days after the vaccination to verify the presence of reactions to the vaccine. The study's sample was set by convenience, including 203 lactating animals with or without bovine somatotropin (BST) administration during the data collection period, which was limited to 20 days before and 20 days after the vaccination. Milk production data was obtained through SmartDairy® HerdMetrix™ software, tabulated in electronic spreadsheets using Microsoft Excel® and processed using the program SAS®, considering a 5% significance level for mixed model statistical analysis. A total of 160 animals (78.82%) presented local lesions at the application site, even when the recommended vaccination practices were followed, suggesting that the high reaction power was provoked by the vaccinal components. In regards to milk production, a statistically significant (p<0.05) decrease of 0.30kg of milk per animal/day was observed in the average daily production in the 20 days post-vaccination. These results demonstrate the local and systemic effects caused by the foot-and-mouth disease vaccine, evidenced by reduced levels of milk production and the occurrence of vaccine reactions, implying significant economic losses.(AU)

A febre aftosa representa uma importante barreira no comércio internacional de produtos de origem animal, podendo acarretar em significativas perdas econômicas. A vacinação sistemática de bovinos e bubalinos foi fundamental para a erradicação da doença. No entanto, a utilização de vacinas pode causar reações no local da aplicação. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da vacina em bovinos leiteiros e observar a incidência de reações vacinais no local de aplicação. O estudo foi realizado numa propriedade leiteira do município de Salvador do Sul, Rio Grande do Sul, onde foram vacinados 270 bovinos contra febre aftosa no mês de maio de 2019. A vacina foi administrada por via subcutânea, com seringas e agulhas descartáveis para cada animal. Foi realizada inspeção dos animais antes da vacinação e 21 dias após a vacinação, para verificar a presença de reações vacinais. A amostra foi definida por conveniência, incluindo 203 vacas em lactação com ou sem administração de somatotropina bovina (BST) durante o período de coleta de dados, que l foi de 20 dias antes e 20 dias após a vacinação. Estes dados de produção de leite foram obtidos através do software SmartDairy® HerdMetrix™, tabulados em planilhas eletrônicas do Microsoft Excel® e processados usando o programa SAS®, considerando 5% de nível de significância para uma análise estatística modelo misto. Foi observado que 160 (78,82%) vacas apresentaram lesões no local de aplicação, mesmo quando a aplicação era realizada de acordo com as boas práticas de vacinação, o que indica o alto poder de reação provocada pelos componentes da vacina. Em relação à produção de leite, observou-se uma redução significativa (p<0,05) na produção média diária de 0,30kg de leite por animal/dia nos 21 dias após a vacinação. Esses resultados demonstram os efeitos locais e sistêmicos provocados pela vacina da febre aftosa, evidenciados pela redução na produção de leite e pela incidência de reações vacinais, o que implica em significativas perdas econômicas.(AU)

Anatomopathological and molecular studies of Marek's disease virus in India

In India, increasing incidence of Marek’s Disease Virus (MDV) outbreaks are being reported even in vaccinated poultry farms. Hence identifying the new emerging pathotype of MDV is necessary for successful control through vaccination. Birds received in the post mortem section of The Avian Disease Laboratory, Indian Veterinary Research Institute, were screened for the presence of MDV by collecting neoplastic tissues, spleen and feather follicles. Screening was carried out by polymerase chain reaction (PCR) and histopathological examination. Among the tested 150 birds’ tissue samples, 35 bird tissue samples were found positive for MDV. Based on pathotyping specific PCR, it was found that 34 birds tissues were affected virulent MDV and one birds tissue was affected with very virulent MDV. Since, HVT vaccine will not protect the very virulent pathotype, combined vaccine of SB-1 and HVT can be administered to control the very virulent MDV. Among the MD infected birds, neoplastic liver is most commonly encountered. Spleen tissue samples was found to be more suitable for the DNA isolation for PCR.

Cytological, histopathological, histochemical, and immunohistochemical findings of multiple cutaneous nodules in a bovine / Achados citológicos, histopatológicos, histoquímicos e imuno-histoquímicos de múltiplas nodulações cutâneas em um bovino

This case study describes the cytological and histopathological findings of cutaneous masses in a bovine, including a peripheral nerve sheath tumor (PNST), vaccine-associated granulomatous inflammation, and eosinophilic inflammation due to parasitosis. A six-year-old undefined cow (SRD) presented with heterogeneous cutaneous lesions including multiple nodules in the left paralumbar fossa, bilaterally at the withers, and scattered along the dorsum, limbs and near the tail; some lesions were associated with ticks. Cytology of these nodules showed benign mesenchymal neoplasia (paralumbar fossa), granulomatous and pyogranulomatous inflammation (withers) and keratin (dorsum). Histopathology, in this order, confirmed PNST, post-vaccination granuloma, and eosinophilic dermatitis. A peripheral nerve sheath tumor was suspected based on the histological findings, showing a well-delineated proliferation of fusiform cells arranged in plexiform structures, which appeared red by Masson's Trichrome stain. The diagnosis was confirmed by immunohistochemistry (anti-S100 antibody). Vaccine reaction often occurs in cattle, and cytological examination is sufficient to determine the inflammatory process. Eosinophilic dermatitis is usually accompanied by perivascular inflammation and reflects the exfoliative process by the oral apparatus of the parasite.

Descrevem-se os achados citológicos e histopatológicos do tumor de bainha de nervo periférico (TBNP), da reação vacinal e da inflamação eosinofílica decorrente dapicada de carrapatoem um bovino. Uma vaca sem raça definida (SRD) de seis anos de idade foi apresentada com diferentes lesões cutâneasnodulares localizadas na fossa paralombar esquerda, bilateralmente na cernelha e dispersos no dorso, membros e próximo à cauda, por vezes associado a carrapatos. Realizou-se citologia e biópsia desses nódulos. Na citologia verificou-se neoplasia mesenquimal benigna (fossa paralombar), inflamação granulomatosa e piogranulomatosa (cernelha) e ceratina (dorso). Na histopatologia, confirmou-se que esses nódulos correspondiam, nessa ordem, a tumor de bainha de nervo periférico, granuloma vacinal e dermatite eosinofílica. O diagnóstico do TBNP foi estabelecido com base nos achados histológicos, que caracterizaram-se por uma proliferação bem delimitada de células fusiformes arranjadas em estruturas plexiformes, corados em vermelho pelo Tricômico de Masson, e confirmado por imuno-histoquímica (anticorpo anti-S100). A reação vacinal ocorre frequentemente em bovinos e o exame citológico é suficiente para determinação do processo inflamatório. Dermatite eosinofílica em geral é acompanhada de inflamação perivascular e perianexal e reflete a ação esfoliativa do

Anatomopathological and molecular studies of Marek's disease virus in India

In India, increasing incidence of Mareks Disease Virus (MDV) outbreaks are being reported even in vaccinated poultry farms. Hence identifying the new emerging pathotype of MDV is necessary for successful control through vaccination. Birds received in the post mortem section of The Avian Disease Laboratory, Indian Veterinary Research Institute, were screened for the presence of MDV by collecting neoplastic tissues, spleen and feather follicles. Screening was carried out by polymerase chain reaction (PCR) and histopathological examination. Among the tested 150 birds tissue samples, 35 bird tissue samples were found positive for MDV. Based on pathotyping specific PCR, it was found that 34 birds tissues were affected virulent MDV and one birds tissue was affected with very virulent MDV. Since, HVT vaccine will not protect the very virulent pathotype, combined vaccine of SB-1 and HVT can be administered to control the very virulent MDV. Among the MD infected birds, neoplastic liver is most commonly encountered. Spleen tissue samples was found to be more suitable for the DNA isolation for PCR.(AU)

An outbreak of compressive myelopathy due to pyogranulomatous reaction to the oily adjuvant of the foot-and-mouth disease vaccine - case report / Surto de mielopatia compressiva associada à reação piogranulomatosa ao adjuvante oleoso da vacina contra Febre Aftosa em Minas Gerais - relato de caso

Cases of compressive myelopathy syndrome associated with post vaccinal pyogranulomas were diagnosed post mortem in three cows from a farm in Minas Gerais state, Brazil. These cows presented ataxia and bilateral paresis of the pelvic limbs, which evolved to paralysis, and sternal recumbence. On necropsy, locally extensive areas of the longissimus dorsi muscle were replaced by pyogranulomas supported by moderate amounts of fibrous connective tissue. On the cut surface, some nodules contained yellowish and viscous fluid (purulent exudate) or whitish fluid (interpreted as the oily adjuvant of a vaccine). In the spinal canal of the subjacent vertebrae, compressing the spinal cord, were pyogranulomas identical to those described in the skeletal muscle. Histologically, the pyogranulomas were composed of a central clear vacuole (consistent with the space left by the oil adjuvant droplets), surrounded by neutrophils and, more externally, by large numbers of epithelioid macrophages and fewer multinucleated giant cells. In the white matter of the spinal cord were numerous well-defined, clear vacuoles (Wallerian degeneration). The association of the clinical history and pathological findings allowed the diagnosis of compressive myelopathy associated with pyogranulomatous reaction to the oily adjuvant of the foot-and-mouth disease vaccine, in this case, due to its inadequate application.(AU)

São descritos casos de síndrome de compressão medular, associada a granulomas pós-vacinais, em bovinos Nelore, provenientes de uma propriedade em Minas Gerais. Esses bovinos apresentavam ataxia e paresia bilateral dos membros pélvicos, que evoluiu para paralisia e decúbito esternal. Na necropsia, áreas focalmente extensas da musculatura na região torácica dorsal (músculo longissimus dorsi) eram substituídas por numerosos piogranulomas, separados por tecido brancacento e firme (tecido conjuntivo fibroso). Ao corte, alguns nódulos continham material amarelado e viscoso (exsudato purulento) ou material esbranquiçado e fluido (sugestivo de adjuvante de vacina). No canal medular das vértebras subjacentes, havia granulomas idênticos aos observados no tecido muscular. Histologicamente, os piogranulomas continham, no centro, vacúolo, bem delimitado e arredondado (consistente com o espaço deixado pela gotícula de lipídio do adjuvante), circundado por variável quantidade de neutrófilos degenerados e íntegros e, mais externamente, por numerosos macrófagos epitelioides e algumas células gigantes multinucleadas. Nas áreas da medula espinhal, circundadas pelos granulomas, numerosos vacúolos, bem definidos, eram observados na substância branca (degeneração walleriana). A associação do histórico clínico e de achados patológicos permitiu o diagnóstico de mielopatia compressiva associada à reação granulomatosa ao adjuvante oleoso da vacina contra febre aftosa, no caso, induzida pela aplicação inadequada da vacina.(AU)

An outbreak of compressive myelopathy due to pyogranulomatous reaction to the oily adjuvant of the foot-and-mouth disease vaccine - case report / Surto de mielopatia compressiva associada à reação piogranulomatosa ao adjuvante oleoso da vacina contra Febre Aftosa em Minas Gerais - relato de caso

Cases of compressive myelopathy syndrome associated with post vaccinal pyogranulomas were diagnosed post mortem in three cows from a farm in Minas Gerais state, Brazil. These cows presented ataxia and bilateral paresis of the pelvic limbs, which evolved to paralysis, and sternal recumbence. On necropsy, locally extensive areas of the longissimus dorsi muscle were replaced by pyogranulomas supported by moderate amounts of fibrous connective tissue. On the cut surface, some nodules contained yellowish and viscous fluid (purulent exudate) or whitish fluid (interpreted as the oily adjuvant of a vaccine). In the spinal canal of the subjacent vertebrae, compressing the spinal cord, were pyogranulomas identical to those described in the skeletal muscle. Histologically, the pyogranulomas were composed of a central clear vacuole (consistent with the space left by the oil adjuvant droplets), surrounded by neutrophils and, more externally, by large numbers of epithelioid macrophages and fewer multinucleated giant cells. In the white matter of the spinal cord were numerous well-defined, clear vacuoles (Wallerian degeneration). The association of the clinical history and pathological findings allowed the diagnosis of compressive myelopathy associated with pyogranulomatous reaction to the oily adjuvant of the foot-and-mouth disease vaccine, in this case, due to its inadequate application.(AU)

São descritos casos de síndrome de compressão medular, associada a granulomas pós-vacinais, em bovinos Nelore, provenientes de uma propriedade em Minas Gerais. Esses bovinos apresentavam ataxia e paresia bilateral dos membros pélvicos, que evoluiu para paralisia e decúbito esternal. Na necropsia, áreas focalmente extensas da musculatura na região torácica dorsal (músculo longissimus dorsi) eram substituídas por numerosos piogranulomas, separados por tecido brancacento e firme (tecido conjuntivo fibroso). Ao corte, alguns nódulos continham material amarelado e viscoso (exsudato purulento) ou material esbranquiçado e fluido (sugestivo de adjuvante de vacina). No canal medular das vértebras subjacentes, havia granulomas idênticos aos observados no tecido muscular. Histologicamente, os piogranulomas continham, no centro, vacúolo, bem delimitado e arredondado (consistente com o espaço deixado pela gotícula de lipídio do adjuvante), circundado por variável quantidade de neutrófilos degenerados e íntegros e, mais externamente, por numerosos macrófagos epitelioides e algumas células gigantes multinucleadas. Nas áreas da medula espinhal, circundadas pelos granulomas, numerosos vacúolos, bem definidos, eram observados na substância branca (degeneração walleriana). A associação do histórico clínico e de achados patológicos permitiu o diagnóstico de mielopatia compressiva associada à reação granulomatosa ao adjuvante oleoso da vacina contra febre aftosa, no caso, induzida pela aplicação inadequada da vacina.(AU)

GENETIC VARIABILITY OF NEW BRAZILIAN PCV2D STRAINS AND THEIR RELATION TO COMMERCIAL VACCINES

No presente estudo 246 amostras clínicas oriundas de granjas de suínos comerciais nas regiões sul, sudeste e centr-oeste do Brasil, previamente vacinadas contra PCV2 e que apresentavam sinais clínicos compatíveis com PCVD foram submetidas para genotipagem de PCV2. O tipo de material enviado para diagnóstico foram amostras de fluido oral, soro e pool de órgãos linfoides. Das amostras analisadas, 106 (43.09% - 106/246) foram genotipadas, sendo 75.47% (80/106) identificadas como PCV2d e 22.64% (24/106) identificadas como PCV2b. Em 2/106 (1.89%) amostras foram verificadas co-infecção de PCV2b e PCV2d. Não houve detecção do genótipo PCV2a nas amostras analisadas. Dentre as amostras clínicas analisadas, o fluido oral obteve um maior número de amostras genotipadas (40/106-37.74%), seguido de pool de órgãos linfóides e soro, com o mesmo número de amostras genotipadas (33/106- 31.13%). Adicionalmente, 51 amostras clínicas brasileiras coletadas em 2019 foram enviadas para sequenciamento genético do gene ORF2, que codifica a proteína do capsídeo viral (Cap). Destas, 25 apresentaram boa qualidade para análise, sendo 8 genotipadas como PCV2b e 17 como PCV2d, confirmando que no Brasil, como descrito mundialmente, houve o aumento do genótipo PCV2d. Para analisar a distribuição temporal dos genótipos e flutuação mundial dos genótipos desde 1993 à 2019, 3,544 sequencias disponíveis no GenBank foram analisadas, demonstrando um considerável aumento do genótipo PCV2d a partir de 2006, sendo hoje, o genótipo mais prevalente no mundo. Para estimar a variabilidade da Cap protein de nossas sequencias de PCV2d, comparamos nossas amostras com outras 1,300 sequencias de PCV2d disponíveis no GenBank. Com o objetivo de avaliar a possível pressão vacinal sobre o o genótipo PCV2d, separamos as sequencias em 4 grupos: (1) Pre vacinação (PreVacD) - sequencias de amostras coletadas antes de 2006; (2) Pós vacinação (PosVacD) - sequencias de amostras coletadas entre 2007 e 2020; (3) sequencias de suínos selvagens ou de vida livre(WboarD) que não sofreram pressão vacinal; e (4) nossas sequencias de PCV2d (TestD), analisadas no presente estudo.. Devido às possíveis falhas vacinais observadas nas granjas de suínos comerciais no Brasil, as amostras de PCV2d sequenciadas no presente estudo foram comparadas com as sequencias da ORF2 disponíveis de três vacinas comercias utilizadas no Brasil, uma contendo o genótipo PCV2b e duas contendo o genótipo PCV2a. Grande parte dos resíduos de aminoácidos que se encontram dentro de regiões de epítopo são conservadas, sugerindo uma boa reação cruzada entre as amostras vacinais e as amostras de PCV2d analisadas. Contudo, em alguns resíduos de aminoácidos em sítios antigênicos, essencias para ligação de anticorpos e, consequentemente, neutralização viral, foram detectadas mutações entre as sequencias de PCV2d e as sequencias vacinais. Este resultado sugere que estas mutações possam ter importancia em relação à resposta. Porém, mais estudos devem ser realizados para elucidar essas questões, principalmente a implementação de processos de vigilância de genótipos de Circovirus suínos tipo 2 circulantes no Brasil.

In the present study, 246 clinical samples from commercial pig farms located in the south, southeast and central-west regions of Brazil previously vaccinated against PCV2 and showing clinical signs compatible with PCVD were submitted for PCV2 genotyping. The type of material sent for diagnosis were samples of oral fluid, serum and lymphoid organs pool. Of the analyzed samples, 106 (43.09% - 106/246) were genotyped, with 75.47% (80/106) identified as PCV2d and 22.64% (24/106) as PCV2b. In 2/106 (1.89%) samples, coinfection of PCV2b and PCV2d was observed. There was no detection of the PCV2a genotype in the analyzed samples. Among the analyzed clinical samples, oral fluid obtained the greater number of genotyped samples (40/106- 37.74%), followed by pool of lymphoid organs and serum, with the same number of genotyped samples (33/106-31.13%) . Additionally, 51 Brazilian clinical samples collected in 2019 were sent for genetic sequencing of the ORF2 gene, widely used for genomic/protein analysis, which encodes for the viral capsid protein (Cap). Of these, 25 had good quality for analysis, and 8 were genotyped as PCV2b and 17 as PCV2d, corroborating many other publications around the world that demonstrated the increase of the PCV2d genotype. To analyze the temporal distribution of genotypes and fluctuation of genotypes from 1993 to 2019 worldwide, 3,544 sequences available in GenBank were analyzed, demonstrating a considerable increase in the PCV2d genotype since 2006, today the most prevalent genotype in the world. To estimate the Cap protein variability of our PCV2d sequences, our results were compared to other 1,300 PCV2d sequences available in GenBank. In order to assess the possible pressure of the vaccine against the PCV2d genotype population infection, four groups of samples were defined: (1) Prevaccination (PreVacD) - sequences from samples collected before 2006; (2) Post-vaccination (PosVacD) - sequences of samples collected between 2007 and 2020; (3) sequences from wild or feral pigs (WboarD) that were not vaccinated, and (4) our PCV2d sequences (TestD) analyzed in the present study. Due to possible vaccine failures observed in commercial pig farms in Brazil, the PCV2d sequenced samples in the present study were compared to the ORF2 amino acid sequences available from three commercial vaccines used in Brazil, one containing the PCV2b genotype and 2 containing the PCV2a genotype. Most of the amino acid residues found within epitope regions were conserved, suggesting a good cross-reaction between vaccines and the analyzed PCV2d samples. However, in some amino acid residues in antigenic sites essential for antibody binding and consequently viral neutralization, mutations were detected in PCV2d sequences and in vaccine sequences. This result may suggest that these mutations might be involved in the vaccine immune response. However, further studies must be carried out to elucidate these aspects, especially the implementation of surveillance processes of Porcine Circovirus type 2 genotypes circulating in Brazil.

Epidemiology of avian infectious laryngotracheitis with special focus to south america: an update

Avian Infectious laryngotracheitis (AILT) is a respiratory tract disease of great importance because it causes significant economic losses in the poultry industry around the world. It is caused by a Gallid herpesvirus type 1, a member of the genus Iltovirus. The target system for Avian Infectious Laryngotracheitis virus (AILTV) infections is the respiratory system, and the main organ in which the virus remains latent is the trigeminal ganglia. However, the virus has demonstrated tropism for other organs besides the respiratory tract. The main transmission routes are ocular and respiratory. Infected birds with clinical symptoms are main sources of transmission, but birds with latent infections, litter, and contaminated fomites may also transmit the virus. Clinical signs usually appear 6-12 days after natural exposure and may be moderate or severe. The causative agent of this disease can be propagated in chorioallantoic membrane (CAM) of developing chicken embryos and replicate in mature chicken kidney cells, as well as in a variety of epithelial chick embryo cells, such as kidneys, liver and lungs. There are several procedures for the diagnosis of ILT such as the observation of clinical signs, the detection of gross and histopathological lesions, and the use of molecular techniques, including RFLP, polymerase chain reaction (PCR), real-time PCR, and loop-mediated isothermal amplification. Vaccination with different types of vaccine provides a good expectation on disease control, such as vaccines produced in chicken-embryo-origin (CEO), tissue-culture-origin (TCO), and recombinant vaccines. However, in endemic areas, biosecurity measures and best management practices are important for the control of the disease. It is distributed worldwide and, in South America, it has been reported in Brazil, Peru, Ecuador, Bolivia, and Argentina causing great economic losses.

Epidemiology of avian infectious laryngotracheitis with special focus to south america: an update

Avian Infectious laryngotracheitis (AILT) is a respiratory tract disease of great importance because it causes significant economic losses in the poultry industry around the world. It is caused by a Gallid herpesvirus type 1, a member of the genus Iltovirus. The target system for Avian Infectious Laryngotracheitis virus (AILTV) infections is the respiratory system, and the main organ in which the virus remains latent is the trigeminal ganglia. However, the virus has demonstrated tropism for other organs besides the respiratory tract. The main transmission routes are ocular and respiratory. Infected birds with clinical symptoms are main sources of transmission, but birds with latent infections, litter, and contaminated fomites may also transmit the virus. Clinical signs usually appear 6-12 days after natural exposure and may be moderate or severe. The causative agent of this disease can be propagated in chorioallantoic membrane (CAM) of developing chicken embryos and replicate in mature chicken kidney cells, as well as in a variety of epithelial chick embryo cells, such as kidneys, liver and lungs. There are several procedures for the diagnosis of ILT such as the observation of clinical signs, the detection of gross and histopathological lesions, and the use of molecular techniques, including RFLP, polymerase chain reaction (PCR), real-time PCR, and loop-mediated isothermal amplification. Vaccination with different types of vaccine provides a good expectation on disease control, such as vaccines produced in chicken-embryo-origin (CEO), tissue-culture-origin (TCO), and recombinant vaccines. However, in endemic areas, biosecurity measures and best management practices are important for the control of the disease. It is distributed worldwide and, in South America, it has been reported in Brazil, Peru, Ecuador, Bolivia, and Argentina causing great economic losses.(AU)

Detecção de Circovírus suíno 2 (PCV2) por reação em cadeia pela Polimerase (PCR) nas fezes e baia de suínos em granja sem vacinação / Porcine circovirus 2 detection in feces and sty samples from an unvaccinated farm using PCR

The circovirosis caused by porcine circovirus 2 (PCV2) is responsible for generating economic losses in swine production in Brazil. Infected animals can develop post weaning multisystemic wasting syndrome (PMWS), reproductive disorders and respiratory diseases. An important subclinical manifestation leads to arrested development. Feces are the main form of contamination. Vaccination is the most effective way to decrease the viral circulation, because it minimizes viral shedding in feces. Unfortunately, the high cost prevents the use of the vaccine for many producers. The objective of this study was to detect PCV2 in stool samples collected from piglets and from the sty of a pig farm, unvaccinated for the agent. A total of 16 samples were collected using swabs, six from the rectum of animals and 10 from the sty. DNA extraction was performed using the Qiagen QIAamp kit, followed by PCR amplification. The amplicons were checked on agarose gel electrophoresis. Our results showed that 87.5% of the samples were positive for PCV2 (14/16), 83.3% of tested animals were infected (5/6) as well as 90% of the sty samples (9/10), indicating a high spread of the virus in the environment. These results were similar to those described in the literature for farms that also did not use vaccination to control PCV2 infection.

A circovirose causada pelo circovírus suíno 2 (PCV2) é responsável por gerar prejuízos econômicos na atividade suinícola no Brasil. Os animais infectados podem desenvolver a síndrome multissistêmica do definhamento, distúrbios reprodutivos e doenças do complexo respiratório. Há uma manifestação subclínica importante onde observa-se a queda no desempenho. A disseminação ocorre primariamente pelas vezes. A vacinação é a forma mais eficaz para a diminuição da circulação viral, pois minimiza a eliminação viral pelas fezes. Infelizmente, o alto custo inviabiliza a utilização da vacina por muitos produtores. O objetivo deste trabalho foi detectar o PCV2 em amostras de fezes coletadas de leitões e da baia de uma granja de suínos não vacinados para o agente. Foram coletadas 16 amostras usando suabes, sendo seis delas da ampola retal de animais e dez da baia. A extração do DNA foi feita com o kit QIAamp da Qiagen, seguida de amplificação por PCR. Os amplicons foram verificados em eletroforese em gel de agarose. 87,5% das amostras foram positivas para o PCV2 (14/16), sendo que 83,3% dos animais testados estavam infectados, (5/6) bem como 90% das amostras da baia (9/10), indicando uma alta disseminação do vírus no ambiente. Esses resultados foram semelhantes aos descritos em literatura para granjas que, também, não utilizavam a vacinação para o controle da infecção por PCV2.

Detecção de Circovírus suíno 2 (PCV2) por reação em cadeia pela Polimerase (PCR) nas fezes e baia de suínos em granja sem vacinação / Porcine circovirus 2 detection in feces and sty samples from an unvaccinated farm using PCR

The circovirosis caused by porcine circovirus 2 (PCV2) is responsible for generating economic losses in swine production in Brazil. Infected animals can develop post weaning multisystemic wasting syndrome (PMWS), reproductive disorders and respiratory diseases. An important subclinical manifestation leads to arrested development. Feces are the main form of contamination. Vaccination is the most effective way to decrease the viral circulation, because it minimizes viral shedding in feces. Unfortunately, the high cost prevents the use of the vaccine for many producers. The objective of this study was to detect PCV2 in stool samples collected from piglets and from the sty of a pig farm, unvaccinated for the agent. A total of 16 samples were collected using swabs, six from the rectum of animals and 10 from the sty. DNA extraction was performed using the Qiagen QIAamp kit, followed by PCR amplification. The amplicons were checked on agarose gel electrophoresis. Our results showed that 87.5% of the samples were positive for PCV2 (14/16), 83.3% of tested animals were infected (5/6) as well as 90% of the sty samples (9/10), indicating a high spread of the virus in the environment. These results were similar to those described in the literature for farms that also did not use vaccination to control PCV2 infection.(AU)

A circovirose causada pelo circovírus suíno 2 (PCV2) é responsável por gerar prejuízos econômicos na atividade suinícola no Brasil. Os animais infectados podem desenvolver a síndrome multissistêmica do definhamento, distúrbios reprodutivos e doenças do complexo respiratório. Há uma manifestação subclínica importante onde observa-se a queda no desempenho. A disseminação ocorre primariamente pelas vezes. A vacinação é a forma mais eficaz para a diminuição da circulação viral, pois minimiza a eliminação viral pelas fezes. Infelizmente, o alto custo inviabiliza a utilização da vacina por muitos produtores. O objetivo deste trabalho foi detectar o PCV2 em amostras de fezes coletadas de leitões e da baia de uma granja de suínos não vacinados para o agente. Foram coletadas 16 amostras usando suabes, sendo seis delas da ampola retal de animais e dez da baia. A extração do DNA foi feita com o kit QIAamp da Qiagen, seguida de amplificação por PCR. Os amplicons foram verificados em eletroforese em gel de agarose. 87,5% das amostras foram positivas para o PCV2 (14/16), sendo que 83,3% dos animais testados estavam infectados, (5/6) bem como 90% das amostras da baia (9/10), indicando uma alta disseminação do vírus no ambiente. Esses resultados foram semelhantes aos descritos em literatura para granjas que, também, não utilizavam a vacinação para o controle da infecção por PCV2.(AU)

Estimativas de perdas econômicas causadas por reação granulomatosa local após uso de vacina oleosa contra febre aftosa em bovinos de Mato Grosso do Sul / Estimates of economic losses caused by local granulomatous reaction after use of an oily vaccine against FMD in cattle of Mato Grosso do Sul

Lesões exacerbadas à vacina contra a febre aftosa foram observadas em 1.815 de um total de 5.000 bovinos abatidos em frigorífico com inspeção federal. Essas lesões resultaram na condenação de parte das carcaças de acordo com o Regulamento da Inspeção Industrial e Sanitária de Produtos de Origem Animal. Os bovinos haviam sido vacinados em maio de 2012 e abatidos em setembro do mesmo ano e divididos em Lotes 1 e 2 constituídos respectivamente por 1.500 e 315 bovinos. As lesões de reação vacinal eram caracterizadas por nódulos protuberantes, circunscritos, bem delimitados, firmes e de tamanhos variáveis, distribuídos multifocalmente na musculatura do aspecto lateral do pescoço; ao corte apresentavam exsudato purulento. Amostras da lesão de 28 bovinos foram avaliadas histologicamente e os principais achados foram piogranulomas com espaços claros circulares de tamanhos variados no centro, circundados por intenso infiltrado de neutrófilos íntegros e necróticos, circundados por macrófagos epitelioides com citoplasma vacuolizado, ocasionais células gigantes multinucleadas e, mais externamente, por abundante tecido conjuntivo em meio observavam-se linfócitos e plasmócitos. Culturas bacterianas realizadas em amostras do exsudato da lesão de seis bovinos resultaram negativas. Quando as carcaças afetadas foram submetidas ao toalete foi retirado em média 1,8 e 2,0 kg de músculo da área afetada, respectivamente dos Lotes 1 e 2. O prejuízo econômico da propriedade de origem dos bovinos afetados foi de R$ 20.424,00, considerando o preço pago pela arroba do boi no mês e ano da ocorrência. Esses valores à época seriam suficientes para adquirir 29,17 bezerros desmamados para engorda. Se considerarmos 5.000 bovinos vacinados forem considerados como população sob risco o coeficiente de morbidade seria de 0,36%. Os resultados deste estudo demonstram que perdas por reação vacinal, mesmo quando não provocam sinais clínicos marcantes, podem ocasionar importantes prejuízos econômicos.(AU)

Lesions caused by excessive reaction to foot and mouth vaccine were observed in 1,815 out of 5,000 cattle slaughtered in a slaughterhouse under federal meat inspection. Such lesions resulted in condemnation of the affect parts of the carcasses in accordance with the Brazilian Federal Meat Inspection Regulations. The affected cattle had been vaccinated on May 2012 and then slaughtered in September of the same year. They were allotted to two groups with 1,500 (Groups 1) and 315 cattle (Group 2). Post vaccination lesions were characterized as salient, firm variable sized nodules multifocally distributed in the musculature of the lateral neck. Pus oozed at the cut surface of these nodules. Samples of 28 cattle were submitted for histopathological examination; main findings were pyogranulomas with central variable-sized clear spaces surrounded by marked infiltrate of viable and dead neutrophils, which were surrounded by epithelioid macrophages with vacuolated cytoplasm and occasional multinucleated giant cell. This inflammatory reaction was walled by abundant connective tissue infiltrated by lymphocytes and plasma cells. Samples of the lesion of six cattle were submitted to bacteriological culture with negative results. When affected carcasses went through dressing, there was an average of 1.8 and 2.0 kg of muscle tissue cut off from the carcasses respectively of Group 1 and 2. Economic losses in the farm of origin of the affected cattle was R$ 20,424.00, considering the price paid by kg of cattle for slaughter at the time of the occurrence. This amount at that time was enough to buy 29.17 weaned calves for fattening. If one considers theses 5,000 cattle vaccinated on the farm as the population at risk, the morbidity rate would be 0.36%. These results indicate that the losses due to vaccine reaction, even with no overt clinical signs, may cause important economic losses.(AU)

EFEITOS DA VIRULÊNCIA DAS CEPAS VACINAIS CONTRA AS DOENÇAS DE NEWCASTLE E BRONQUITE INFECCIOSA EM FRANGOS DE CORTE

A Doença de Newcastle (DN) e a Bronquite Infecciosa das Galinhas (BIG) estão entre as dez principais enfermidades de impacto econômico para a avicultura mundial. Diante da importância da avicultura brasileira como provedora de proteína e do impacto econômico que a DN e a BIG podem causar ao setor avícola, é necessário o estudo dos efeitos da virulência das cepas vacinais contra DN e BIG por meio de ferramentas como histomorfometria, histopatologia e sorologia, para a escolha do programa de imunização mais adequado para o plantel avícola. Em cada experimento foram utilizados 245 pintos de um dia de vida da linhagem Cobb, separados e alojados em blocos ao acaso em galpões distintos em condições controladas de temperatura e luz. No experimento com cepas de DN foram coletados fragmentos do terço médio da traqueia aos dois, quarto, sete, 14 e 21 dias de idade, enquanto que no experimento com cepas de BIG as coletas foram aos quatro, sete e 14 dias de vida e processados conforme rotina histológica. Para análise histomorfométrica da mucosa traqueal, as lâminas foram fotografadas e realizadas as mensurações da espessura da mucosa traqueal sendo aplicado teste ANOVA e utilizando o post-hoc de Tukey com nível de significância de 5%. Para a avaliação histopatológica das traqueias das aves vacinadas com cepas de DN foram observadas a presença de lesões e analisadas quanto ao grau de intensidade e distribuição. No experimento para BIG foram utilizadas as cepas Massachusetts H120 e a bronquite Variante BR, ambas administradas pela via ocular e spray. Amostras de sangue para obtenção de soro e posterior análise de resposta humoral por meio de ELISA, foram coletadas aos quatro, sete, 14, 21 e 28 dias de idade e em seguida foi confeccionado um perfil da resposta imune para cada grupo de vacina de acordo com a via de administração a partir dos títulos médios (GMT). Aos quatro dias as aves vacinadas com cepa La Sota para DN administrada por via ocular foram as que apresentaram pior resultado (p<0,05), sendo observado um maior espessamento da mucosa traqueal quando comparada a todas as demais cepas utilizadas. Já aos 21 dias foi possível observar que os animais vacinados com cepa PHY.LMV.42 por via ocular e com a cepa La Sota por via spray apresentaram maior espessamento da mucosa da traqueia comparada ao Sorotipo 3 (p<0,05). As aves vacinadas com a cepa Sorotipo 3 apresentaram os menores escores de lesões quando comparado às demais cepas estudadas. Já nas aves vacinadas com a cepa La Sota por via spray apresentaram os maiores escores de lesões histopatológicas em relação às demais cepas observando hiperemia e hiperplasia epitelial, hiperplasia de glândulas mucosas, desciliação e infiltrado inflamatório mononuclear. Para a BIG ao compararmos aos títulos médios obtidos pelas cepas H120 e Variante BR nas diferentes vias de aplicação observamos que são semelhantes quanto a resposta imune, pois ambas apresentam o mesmo perfil sorológico. Já na análise histomorfométrica da espessura da mucosa traqueal foram observadas diferenças significativas (p<0,05) apenas dentro dos grupos quando comparado a cepa testada ao seu controle, também ocorrendo diferenças (p<0,05) entre os diferentes tipos de cepas vacinais e entre diferentes dias de vida. Aos quatro e 14 dias as aves vacinadas com a cepa H120 pela via ocular e spray apresentaram maior espessamento da mucosa traqueal quando comparadas às aves vacinadas com a cepa Variante BR (p<0,05). Desta forma, concluímos que a cepa Sorotipo 3 foi a melhor por ter apresentado menor espessamento da mucosa traqueal pós vacinação e menores escores de lesão histopatológica sendo a melhor opção para imunização das aves contra a DN, bem como que a resposta imune a cepa Variante BR se comporta semelhante a cepa H120. Em relação a virulência, a cepa Variante BR é a mais adequada por apresentar menor reação pós-vacinal e proteger de forma homóloga frente ao desafio presente no plantel avícola brasileiro.

Newcastle Disease (ND) and Infectious Chicken Bronchitis (ICB) are among the top 10 diseases of economic impact for poultry farming worldwide. Given the importance of Brazilian poultry farming as a protein supplier and the economic impact that DN and ICB can cause to the poultry sector, it is necessary to study the effects of virulence of vaccine strains against DN and ICB through tools such as histomorphometry, histopathology and selection of the most appropriate immunization program for poultry. In each experiment, 245 day-old broilers of the Cobb lineage were used, separated and housed in randomized blocks in different houses under controlled conditions of temperature and light. In the experiment with ND strains fragments of the middle third of the trachea were collected at two, four, seven, 14 and 21 days of age, while in the experiment with ICB strains the collections were collected at four, seven and 14 days of life and processed according to histological routine. For the histomorphometric analysis of the tracheal mucosa, the slides were photographed and measurements of the thickness of the tracheal mucosa were performed using an ANOVA test and using Tukey post-hoc with a significance level of 5%. For the histopathological evaluation of the trachea of the birds vaccinated with ND strain, the presence of lesions was observed and the degree of intensity and distribution were analyzed. In the ICB experiment the Massachusetts H120 strains and BR variant bronchitis, both administered via the ocular route and spray, were used. Serum blood samples and subsequent humoral response analysis by ELISA were collected at four, seven, 14, 21 and 28 days of age and then a profile of the immune response was made for each vaccine group according to with the route of administration from the geometric mean titers (GMT). At four days the birds vaccinated with La Sota strain for ocular ND were the ones that presented the worst result (p <0.05), being observed a greater thickening of the tracheal mucosa when compared to all other strains used. At 21 days, it was possible to observe that the animals vaccinated with strain PHY.LMV.42 ocularly and with the La Sota strain by spray showed a greater thickening of the trachea mucosa compared to Serotype 3 (p <0.05). The birds vaccinated with the strain Sorotype 3 had the lowest lesion scores when compared to the other strains studied. In the birds vaccinated with the La Sota strain by spray, they presented the highest histopathological lesions in relation to the other strains, observing hyperemia and epithelial hyperplasia, mucosal gland hyperplasia, deciliation and mononuclear inflammatory infiltrate. For the ICB when comparing the average titers obtained by the H120 strains and the BR variant in the different routes of application we observed that they are similar as regards the immune response, since both have the same serological profile. In the histomorphometric analysis of the thickness of the tracheal mucosa, significant differences (p <0.05) were observed only within the groups when compared to the tested strain at their control, also occurring differences (p <0.05) between the different types of vaccine strains and between different days of life. At four and 14 days, the birds vaccinated with the H120 strain by the ocular route and spray presented greater thickening of the tracheal mucosa when compared to the birds vaccinated with the variant BR strain (p <0.05). In this way, we conclude that the strain Sorotype 3 was the best because it presented less thickening of the tracheal mucosa after vaccination and lower histopathological lesion scores being the best option for the immunization of the birds against DN, as well as that the immune response to strain Variante BR behaves similar to H120 strain. In relation to virulence, the Variante BR strain is the most adequate because it presents a smaller post-vaccinal reaction and protects homologously against the challenge present in the Brazilian poultry stock.

AVALIAÇÃO DO POTENCIAL IMUNOGÊNICO DA AQUAPORINA DE Rhipicephalus (Boophilus) microplus CONTRA O CARRAPATO Rhipicephalus sanguineus SENSU LATO EM CÃES DOMÉSTICOS

O controle de carrapatos à base de acaricidas químicos tem levado a seleção de ectoparasitos resistentes além de contaminação ambiental e de produtos de origem animal. Frente a isso, há crescente incentivo na busca por alternativas de controle do ectoparasito, como o desenvolvimento de vacinas. O presente estudo teve como objetivo avaliar a utilização de uma proteína recombinante da aquaporina do Rhipicephalus (Boophilus) microplus como antígeno em uma vacina contra R. sanguineus, em cães domésticos. A investigação foi realizada em cooperação científica com o United States Department of Agriculture/Agricultural Research Service (USDA/ARS). Os efeitos da vacina foram avaliados nos diferentes estádios do ectoparasito em cães previamente vacinados com o antígeno + adjuvante (Montanide) (G1) e em animais de um grupo controle inoculados apenas como adjuvante (G2). Foram avaliados: i. potencial biótico (parâmetros biológicos) dos carrapatos;. Título de anticorpos séricos (IgG) de cães por meio do ensaio imunoenzimático indireto (Teste ELISA) pós imunização; iii. Avaliação histopatológica do sitio de fixação dos carrapatos em diversos momentos pósfixação na pele dos hospedeiros, incluindo a contagem de células inflamatórias migradas para o foco inflamatório; iv. Histologia do ovário dos carrapatos para observação de possíveis danos causados pela ação do imunógeno; v. locais de ação do antígeno no corpo do carrapato por meio de ensaio imunohistoquímico. Os principais resultados obtidos foram: 1) O período de ingurgitamento das fêmeas adultas do grupo imunizado foi 12% menor que o do grupo controle; 2) as larvas do grupo imunizado apresentaram período de ingurgitamento 8,7% maior que as do grupo controle e pesaram 7,2% menos; 3) as ninfas do grupo imunizado apresentaram período de ingurgitamento 4,5% menor e pesaram 3,6% menos que as do grupo controle; 4) apesar de os animais apresentarem um aumento na titulação de anticorpos pós-segunda imunização, estes títulos rapidamente diminuíram; 5) As alterações histopatológicas gerais observadas incluíram espessamento da epiderme (hiperplasia), infiltração celular inflamatória, edema de derme e neovascularização, dentre outros, o que representa aspectos inespecíficos presentes em uma reação inflamatória; 6) processo inflamatório moderado foi observado nos animais do grupo imunizado em todos os tempos avaliados; 7) O infiltrado inflamatório presente no tegumento dos cães era composto majoritariamente por linfócitos, plasmócitos e macrófagos, seguido de neutrófilos, observando-se também a presença esporádica de eosinófilos e de raros mastócitos ainda íntegros, não degranulados; 8) Histologia dos ovários de fêmeas alimentadas em cães imunizados demonstrou maior quantidade de vacuolização em ovócitos II e III, e maior número de deformações em ovócitos IV e V em relação ao grupo controle; 9) Ensaio imunohistoquímico em carrapatos adultos mostrou resultado negativo, ou seja, nenhuma marcação foi evidenciada no tecido do ectoparasito. Os resultados, analisados em conjunto, indicam um baixo potencial imunogênico do RmAQP1 contra carrapatos R. sanguineus adultos na dose testada e possível, ainda que baixa, eficácia contra larvas e ninfas. Sugere-se que novos estudos sejam desenvolvidos com dose maior de RmAQP1 para observação de seu potencial imunogênico contra R. sanguineus em cães.

Tick control based on chemical acaricides has led to rapid selection of resistant ectoparasites as well as environmental and animal products contamination. Therefore, there is an increasing incentive in the search for alternatives to the parasite´s control, such as the development of vaccines. This study aimed to evaluate the use of a recombinant aquaporin R.(Boophilus) microplus protein as antigen in a vaccine against R. sanguineus in domestic dogs. The research was conducted on scientific cooperation with the United States Department of Agriculture / Agricultural Research Service (USDA / ARS). The vaccine´s effects were evaluated at different stages of the ectoparasite in dogs previously vaccinated with antigen + adjuvant (Montanide) (G1) and in animals of a control group inoculated only with adjuvant (G2). It was evaluated: i. biotic potential (biological parameters) of ticks; serum antibodies (IgG) titers of the dogs after immunization, by indirect enzymelinked immunosorbent assay (ELISA); iii. Histopathological evaluation of the tick´s attachment site at various times post-fixation on the host´s skin, including the inflammatory cell counts migrated into the inflammatory site; iv. Tick´s ovarian histology for observation of possible damage caused by the action of the immunogen; v. possible antigen action sites in the tick's body by immunohistochemical assay. The main results were: 1) The engorgement period of adult females from the immunized group was 12% lower than the control group; 2) Larvae from the immunized group had 8.7% higher engorgement period than the control group and weighed 7.2% less; 3) Nymphs from the immunized group had 4.5% lower engorgement period and weighed 3.6% less than the control group; 4) Although the animals showed increased antibodies titer post-second immunization, these titers decreased rapidly; 5) The general histopathological changes observed included, among others, epidermal thickening (hyperplasia), inflammatory cell infiltration, edema and dermis neovascularization, all nonspecific aspects present in an inflammatory reaction; 6) Moderate inflammation was observed in animals from the immunized group in all time periods; 7) The inflammatory infiltrate in the tegument of the dogs was mostly comprised of lymphocytes, plasma cells and macrophages, followed by neutrophils, also presenting the sporadic presence of eosinophils and rare intact mast cells; 8) Histology of the ovaries of females fed on immunized dogs showed a higher amount of vacuolation in oocytes II and III, and higher presence of deformed oocytes IV and V when compared to the control group 9) Immunohistochemical test in adult ticks showed negative result meaning no immunolabeling was evidenced in ectoparasite tissue. The results, all together, indicate low immunogenic potential of the RmAQP1 against adult R. sanguineus ticks, and possible, though subtle, efficacy against larvae and nymphs in the tested dose. It is suggested that further studies are developed with higher dose of RmAQP1 to observe its possible immunogenic potential against R. sanguineus in dogs

Detecção molecular e análise filogenética do gene H de amostras do vírus da cinomose canina em circulação no município de Campinas, São Paulo / Molecular detection and phylogenetic analysis of the gene H from canine distemper virus isolates circulating at the municipality of Campinas, São Paulo

O vírus da cinomose canina (CDV), um Morbillivirus da família Paramyxoviridae, é o agente etiológico de doença neurológica e sistêmica em cães. O diagnóstico laboratorial da infecção requer o isolamento viral ou detecção do material genético do vírus em secreções ou tecidos de cães com suspeita clínica da doença. A diversidade genética entre os isolados de CDV pode ser aferida pelo sequenciamento efilogenia molecular do gene que codifica a hemaglutinina viral (gene H), havendo atualmente um especial interesse em comparar as amostras circulantes a campo com o genogrupo América-1, que abrange as cepas presentes nas vacinas disponíveis no mercado. No presente estudo, foi realizada a detecção molecular do gene H de CDV a partir de amostras biológicas colhidas ante- e post- -mortem de 15 cães com sinais clínicos sugestivos de cinomose na região metropolitana de Campinas, São Paulo. Dez dos 15 cães analisados tiveram ao menos um órgão positivo na detecção molecular e os amplicons obtidos foram submetidos ao sequenciamento nucleotídico seguido de análise filogenética molecular. De forma semelhante ao que já foi reportado para estudo analisando a diversidade do gene H em outros países, a reconstrução filogenética obtida para as amostras de casos de cinomose da região de Campinas demonstrou as mesmas foram agrupadas junto a amostras norte-americanas, europeias e japonesas recentes, em um grupo genético distinto do grupo de amostras clássicas de CDV, nomeado America-1, o qual engloba as estirpes vacinais Snyder Hill, Onderstepoort e Lederle.(AU)

Canine distemper virus (CDV), a Morbillivirus of the family Paramyxoviridae, is the etiological agent of neurological and systemic disease in dogs. The laboratory diagnosis of infection requires viral isolation or detection of genetic material of the virus in secretions or tissues of dogs with clinical suspicion of the disease. The genetic diversity among isolates of CDV can be assessed by sequencing and phylogenetic analysis of the gene that encodes the viral hemagglutinin (H gene), and there is currently a special interest in comparing the strains currently circulating in the field with the genogroup America-1, which comprises strains present in vaccines available in the market. In this study, the molecular detection of CDV gene H was performed from biological samples harvested ante-and post-mortem from 15 dogs with clinical signs suggestive of canine distemper in the metropolitan region of Campinas, São Paulo. Ten of the 15 dogs examined had at least one positive organ under molecular detection and the obtained amplicons were sequenced and further analyzed by molecular phylogenetic analysis. Similarly to what has already been reported on previous studies regarding the diversity of the gene H in other countries, the phylogenetic reconstruction obtained for the samples of cases of distemper from Campinas region showed they were grouped with the North American, European and Japanese newly described samples, a genetic group distinguished from classical samples of CDV, named America-1, which encompasses the vaccine strains Snyder Hill, Onderstepoort and Lederle.(AU)