Seroprevalence and risk factors associated with seropositivity for equine encephalomyelitis virus in horses in Rio Grande do Norte, Brazil

The present objective was to investigate the presence of anti-equine viral encephalomyelitis (EVE) antibodies and the possible risk factors for its dissemination in horses raised in the East and West Potiguar mesoregions of the state of Rio Grande do Norte, Brazil. Serological diagnosis for neutralizing antibodies against Eastern (EEEV), Western (WEEV) and Venezuelan (VEEV). Equine viral encephalomyelitis was performed using a seroneutralization technique on 811 blood samples from horses from ninety properties and sixteen municipalities between July 2018 and February 2019. Factors associated with EVE were evaluated using an investigative epidemiological questionnaire, and the data were statistically analyzed using the Epi Info 3.5.2 software with a confidence level of 95%. The seroprevalence of anti-EVE antibodies was 14.2% (115), with 10.36% (84) for EEEV, 6.9% (56) for WEEV, and null for EVE. When analyzing risk factors, it can be concluded that horses raised in properties that do not clean installations and/or rent out their pasture are more likely to have anti-EVE antibodies. These results show evidence that horses raised in the East and West Potiguar mesoregions were exposed to EEEV and WEEV, thus reinforcing the importance of vaccination and serological survey of nonvaccinated horses as a means of monitoring the disease.

Type C botulism in dogs from rural properties located in Goiânia, Brazil

Botulism is a disease usually fatal, caused by the ingestion of neurotoxins produced by Clostridium botulinum. In dogs, intoxication is caused by the ingestion of botulinum toxin type C, and animals often recover spontaneously. The present study describes the occurrence of type C botulism in two dogs domiciled on neighboring rural properties in the municipality of Goiânia, state of Goiás, Brazil, probably associated with ingestion of decomposing bovine carcass. Upon clinical evaluation, the dogs were alert in the lateral decubitus position with ascending flaccid paralysis, absence of eyelid reflexes, and reduced muscle tone. Due to their worsening clinical symptoms, the animals died within 12 h and 3 days after supportive treatment. Botulinum toxin type C was identified, in the serum and feces of both dogs, by seroneutralization in mice with homologous monovalent antitoxin. The results of the high-throughput gene sequencing showed that the abundance of C. botulinum in the fecal microbiota of one of the affected dogs was low (0.53%). In this way, the present study highlights the need of sanitary practices related to the appropriate collection and disposal of bovine carcasses in rural areas since they represent a risk factor for the occurrence of botulism in dogs domiciled on rural properties.

Effect of parenteral vaccination of newborn Holstein calves against viral agents involved in bovine respiratory disease (BRD)

Background: Newborn calves are born immunosuppressed, hypogammaglobulinemic, immunologically immature, and therefore more vulnerable to many infectious diseases. During pregnancy, the fetal-placental environment is regulated by Th2-type cytokines that neutralize Th1 responses, an important factor for immune defense against viral agents. The ingestion and absorption of colostral immunoglobulins enhance the immunity of the neonate. However, the presence of maternal antibodies might negatively affect the success of parental vaccination in the first two months of life. This study aimed to evaluate the effecacy of parenteral vaccination in newborn calves with high titers of maternal antibodies against respiratory viruses. Materials, Methods & Results: Twenty-eight Holstein calves were allocated to the vaccinated group (VAC, n = 18) or an unvaccinated control group (NVAC, n = 10). The initial vaccination with 5 mL of a commercial vaccine occurred around the 14th day of life (D14) and the booster at D35. Respiratory and diarrhea symptoms were evaluated at D12, D14, D16, D20, D31, D36, D45, D53, and D60. Blood samples were taken for leukogram, haptoglobin, and seroneutralization of BVDV, BoHV-1, BRSV, and BPI3V, at the time of vaccination at D14 (T1), at booster (D35, T2), and 21 days after the booster (D56, T3). Despite the increased prevalence of BRD during the period of the study, no calves from either group exhibited respiratory disease at D12 or D14. In subsequent assessments, the frequency of BRD increased over time in the VAC group until it reached a maximum prevalence of 38.9% (7/18) at D31. In the NVAC group, the maximum prevalence observed was 40% at D45 and D60. A comparison of the frequencies for BRD cases showed a statistical trend at D36 (P = 0.07), with a higher prevalence for the NVAC group (30%) in relation to the VAC group (5.6%). For the NVAC group, a greater number of total...

Outbreak of Clostridium perfringens type D enterotoxemia in sheep / Surto de enterotoxemia por Clostridium perfringens tipo D em ovinos

This work describes the first Brazilian laboratory-confirmed outbreak of enterotoxemia caused by Clostridium perfringens type D in sheep, which occurred in the state of Paraná. We address the epidemiological aspects involved, the diagnostic modalities employed, and the clinical signs and pathological findings observed. Eight healthy pregnant female sheep with no history of vaccination for clostridiosis presented with a history of abrupt feeding changes and neurological manifestations that quickly evolved to illness, coma and death. Four other females with clinical neurological signs were referred to the Veterinary Hospital of the Universidade Federal do Paraná, Palotina Sector. These animals presented with lethargy, motor incoordination, opisthotonus, pedal movements, muscle tremors, spastic paralysis, bruxism, mandibular trismus, sialorrhea, hyperexcitability and the inability to stand. They were examined and euthanized due to the seriousness of the clinical picture with an unfavorable prognosis. We performed gross anatomical and microscopic analyses of the organs and intestinal contents. We also performed bacterial isolation with molecular typing. From the intestinal contents, we detected toxins by means of the seroneutralization technique in mice. At necropsy, we noted pulmonary edema (2/4), necrotizing enteritis (4/4) and hyperemia of the leptomeninges (1/4). Microscopically, we observed lymphohistiocytic interstitial pneumonia, necrotic enteritis associated with the presence of rods, and nephrosis with interstitial lymphohistiocytic nephritis. No significant brain lesions were observed. Using serum neutralization, we identified epsilon toxin in the intestinal contents of all four animals. C. perfringens type D was identified. Based on the history, clinical signs, postmortem findings, and laboratory confirmation of the presence of epsilon toxin, we concluded that C. perfringens type D enterotoxemia caused this outbreak of sheep deaths.

Este trabalho descreve o primeiro surto brasileiro com confirmação laboratorial de enterotoxemia em ovinos por Clostridium perfringens tipo D, ocorrido no estado do Paraná, abordando os aspectos epidemiológicos envolvidos, sinais clínicos observados, achados patológicos e diagnóstico empregado. Oito fêmeas ovina, gestantes, em bom estado corporal e com histórico de mudanças bruscas na alimentação, sem histórico de vacinação para clostridioses, apresentaram manifestações clínicas neurológicas que logo evoluíram para decúbito, coma e morte. Outras quatro fêmeas apresentaram os sinais clínicos neurológicos e foram encaminhadas ao Hospital Veterinário da Universidade Federal do Paraná, setor Palotina. Os animais foram examinados e submetidos à eutanásia devido à gravidade do quadro clínico e prognóstico desfavorável. Destes quatro animais foram coletados fragmentos de órgãos e do conteúdo intestinal. Foi realizada análise macroscópica e microscópica dos órgãos, bem como isolamento bacteriano, tipificação molecular do agente e a detecção das toxinas por meio da técnica de soroneutralização em camundongos a partir do conteúdo intestinal. Os quatro ovinos examinados apresentaram letargia, incoordenação motora, opistótono, movimentos de pedalagem, tremores musculares, paralisia espástica, bruxismo, trismo mandibular, sialorréia, hiperexcitabilidade e decúbito. Na necropsia, constatou-se edema pulmonar (2/4), enterite necrohemorrágica (4/4) e hiperemia de leptomeninges (1/4). Microscopicamente havia pneumonia intersticial linfohistiocitária, enterite necrótica associada com a presença de bastonetes e nefrose com nefrite intersticial linfohistiocitária. Não foram observadas lesões encefálicas dignas de nota em função do quadro agudo da doença. Por meio da soroneutralização foi possível identificar a presença da toxina épsilon no conteúdo intestinal dos quatro...

Frequency and risk factors associated with the bovine viral diarrhea virus in herds in the semiarid region of the states of Bahia and Pernambuco, Brazil / Frequência e fatores de risco associados a diarreia viral bovina em rebanhos na região semiárida dos estados da Bahia e Pernambuco

Bovine viral diarrhea virus (BVDV) is an important viral pathogen in cattle. There are a few reports of this disease in northeastern Brazil, mainly in the semiarid region. The goal of this study was to determine both the frequency of seropositive animals, and the risk factors for BVDV in the municipalities of Bahia and Pernambuco. A non-probabilistic sampling was initially employed to determine the properties to be visited, whereas a probabilistic sampling was used to determine the number of animals per property. Serum samples were submitted to a seroneutralization test to determine the antibody titer for BVDV. An epidemiological questionnaire was used in the herds to evaluate the correlation and association between possible risk factors and BVDV infection in these herds. Of the 257 animals in the study, 144 were positive for infection BVDV, resulting in an overall frequency of 56.0%. The highest frequency was observed in Miguel Calmon (76.1%) and followed by Senhor do Bonfim (53.1%). The variables identified as risk factors for the BVDV infection were an extensive breeding system (OR = 2.58) and a mixed livestock purpose (beef and dairy) (OR = 3.32). The presence of BVDV-seropositive animals in the assessed municipalities suggests the circulation of the viral agent in these locations. Therefore, control and preventive measures must be implemented in order to minimize losses due to the disease, such as monitoring of the properties through laboratory tests, elimination of infected animals, and the use of vaccines in the indicated regions by the animal health department.

O vírus da Diarreiá Viral Bovina (BVDV) é um dos principais patógenos virais de bovinos. Existe uma baixa prevalência dessa doença no nordeste brasileiro, principalmente na região semiárida. Objetivou-se determinar a frequência e os fatores de risco para BVDV em municípios da Bahia e Pernambuco. Uma amostragem não probabilística foi realizada para determinar o número de propriedades a serem visitadas, enquanto uma amostragem probabilística foi empregada para determinar o número de amostras a serem coletadas por propriedade. Amostras de soro foram obtidas e submetidas à técnica de soroneutralização para determinação do título de anticorpos para o BVDV. Para avaliação dos fatores de risco da infecção, aplicou-se um questionário investigativo nas propriedades. No total de 257 animais, 144 foram positivos para enfermidade, resultando uma frequênciá geral de 56%. A maior prevalência ocorreu em Miguel Cálmon, 76,1% e Senhor do Bonfim, 53,15%. As variáveis identificadas como fator de risco foram sistema de criação extensivo (OR = 2.58) e exploração de animais para carne e leite (OR = 3.32). A presença de animais soropositivos para a doença nos municípios estudados sugere a circulação do agente viral nestas localizações. Assim, medidas de controle e prevenção devem ser colocadas em prática, visando minimizar as perdas, tais como monitoramento dos rebanhos por meio de exames periódicos, eliminação de animais positivos e o uso de vacinas nas regiões indicadas pelas agências de defesa agropecuária do país.

Outbreak of Clostridium perfringens type D enterotoxemia in sheep / Surto de enterotoxemia por Clostridium perfringens tipo D em ovinos

This work describes the first Brazilian laboratory-confirmed outbreak of enterotoxemia caused by Clostridium perfringens type D in sheep, which occurred in the state of Paraná. We address the epidemiological aspects involved, the diagnostic modalities employed, and the clinical signs and pathological findings observed. Eight healthy pregnant female sheep with no history of vaccination for clostridiosis presented with a history of abrupt feeding changes and neurological manifestations that quickly evolved to illness, coma and death. Four other females with clinical neurological signs were referred to the Veterinary Hospital of the Universidade Federal do Paraná, Palotina Sector. These animals presented with lethargy, motor incoordination, opisthotonus, pedal movements, muscle tremors, spastic paralysis, bruxism, mandibular trismus, sialorrhea, hyperexcitability and the inability to stand. They were examined and euthanized due to the seriousness of the clinical picture with an unfavorable prognosis. We performed gross anatomical and microscopic analyses of the organs and intestinal contents. We also performed bacterial isolation with molecular typing. From the intestinal contents, we detected toxins by means of the seroneutralization technique in mice. At necropsy, we noted pulmonary edema (2/4), necrotizing enteritis (4/4) and hyperemia of the leptomeninges (1/4). Microscopically, we observed lymphohistiocytic interstitial pneumonia, necrotic enteritis associated with the presence of rods, and nephrosis with interstitial lymphohistiocytic nephritis. No significant brain lesions were observed. Using serum neutralization, we identified epsilon toxin in the intestinal contents of all four animals. C. perfringens type D was identified. Based on the history, clinical signs, postmortem findings, and laboratory confirmation of the presence of epsilon toxin, we concluded that C. perfringens type D enterotoxemia caused this outbreak of sheep deaths.(AU)

Este trabalho descreve o primeiro surto brasileiro com confirmação laboratorial de enterotoxemia em ovinos por Clostridium perfringens tipo D, ocorrido no estado do Paraná, abordando os aspectos epidemiológicos envolvidos, sinais clínicos observados, achados patológicos e diagnóstico empregado. Oito fêmeas ovina, gestantes, em bom estado corporal e com histórico de mudanças bruscas na alimentação, sem histórico de vacinação para clostridioses, apresentaram manifestações clínicas neurológicas que logo evoluíram para decúbito, coma e morte. Outras quatro fêmeas apresentaram os sinais clínicos neurológicos e foram encaminhadas ao Hospital Veterinário da Universidade Federal do Paraná, setor Palotina. Os animais foram examinados e submetidos à eutanásia devido à gravidade do quadro clínico e prognóstico desfavorável. Destes quatro animais foram coletados fragmentos de órgãos e do conteúdo intestinal. Foi realizada análise macroscópica e microscópica dos órgãos, bem como isolamento bacteriano, tipificação molecular do agente e a detecção das toxinas por meio da técnica de soroneutralização em camundongos a partir do conteúdo intestinal. Os quatro ovinos examinados apresentaram letargia, incoordenação motora, opistótono, movimentos de pedalagem, tremores musculares, paralisia espástica, bruxismo, trismo mandibular, sialorréia, hiperexcitabilidade e decúbito. Na necropsia, constatou-se edema pulmonar (2/4), enterite necrohemorrágica (4/4) e hiperemia de leptomeninges (1/4). Microscopicamente havia pneumonia intersticial linfohistiocitária, enterite necrótica associada com a presença de bastonetes e nefrose com nefrite intersticial linfohistiocitária. Não foram observadas lesões encefálicas dignas de nota em função do quadro agudo da doença. Por meio da soroneutralização foi possível identificar a presença da toxina épsilon no conteúdo intestinal dos quatro...(AU)

Frequency and risk factors associated with the bovine viral diarrhea virus in herds in the semiarid region of the states of Bahia and Pernambuco, Brazil / Frequência e fatores de risco associados a diarreia viral bovina em rebanhos na região semiárida dos estados da Bahia e Pernambuco

Bovine viral diarrhea virus (BVDV) is an important viral pathogen in cattle. There are a few reports of this disease in northeastern Brazil, mainly in the semiarid region. The goal of this study was to determine both the frequency of seropositive animals, and the risk factors for BVDV in the municipalities of Bahia and Pernambuco. A non-probabilistic sampling was initially employed to determine the properties to be visited, whereas a probabilistic sampling was used to determine the number of animals per property. Serum samples were submitted to a seroneutralization test to determine the antibody titer for BVDV. An epidemiological questionnaire was used in the herds to evaluate the correlation and association between possible risk factors and BVDV infection in these herds. Of the 257 animals in the study, 144 were positive for infection BVDV, resulting in an overall frequency of 56.0%. The highest frequency was observed in Miguel Calmon (76.1%) and followed by Senhor do Bonfim (53.1%). The variables identified as risk factors for the BVDV infection were an extensive breeding system (OR = 2.58) and a mixed livestock purpose (beef and dairy) (OR = 3.32). The presence of BVDV-seropositive animals in the assessed municipalities suggests the circulation of the viral agent in these locations. Therefore, control and preventive measures must be implemented in order to minimize losses due to the disease, such as monitoring of the properties through laboratory tests, elimination of infected animals, and the use of vaccines in the indicated regions by the animal health department.(AU)

O vírus da Diarreiá Viral Bovina (BVDV) é um dos principais patógenos virais de bovinos. Existe uma baixa prevalência dessa doença no nordeste brasileiro, principalmente na região semiárida. Objetivou-se determinar a frequência e os fatores de risco para BVDV em municípios da Bahia e Pernambuco. Uma amostragem não probabilística foi realizada para determinar o número de propriedades a serem visitadas, enquanto uma amostragem probabilística foi empregada para determinar o número de amostras a serem coletadas por propriedade. Amostras de soro foram obtidas e submetidas à técnica de soroneutralização para determinação do título de anticorpos para o BVDV. Para avaliação dos fatores de risco da infecção, aplicou-se um questionário investigativo nas propriedades. No total de 257 animais, 144 foram positivos para enfermidade, resultando uma frequênciá geral de 56%. A maior prevalência ocorreu em Miguel Cálmon, 76,1% e Senhor do Bonfim, 53,15%. As variáveis identificadas como fator de risco foram sistema de criação extensivo (OR = 2.58) e exploração de animais para carne e leite (OR = 3.32). A presença de animais soropositivos para a doença nos municípios estudados sugere a circulação do agente viral nestas localizações. Assim, medidas de controle e prevenção devem ser colocadas em prática, visando minimizar as perdas, tais como monitoramento dos rebanhos por meio de exames periódicos, eliminação de animais positivos e o uso de vacinas nas regiões indicadas pelas agências de defesa agropecuária do país.(AU)

Impairment on nuclear maturation rate in oocytes from cows naturally infected by bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) / Comprometimento na taxa de maturação nuclear em ovócitos de vacas naturalmente infectadas pelo herpesvírus bovino 1 (BoHV-1)

Bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) is an important bovine pathogen that is responsible for causing respiratory diseases and reproductive failures. The presence of BoHV-1 in an in vitro embryo production system affects fertilization, maturation, and embryonic development. The objective of this study was to evaluate the developmental capacity of oocytes from naturally infected cows with no reproductive history. Moreover, this study investigated the presence of viral DNA in cumulus oophorus complexes (COCs). Experimental groups were differentiated by titrating the antibodies detected through seroneutralization assays, establishing three groups: seronegative animals (titer lower than 2), low titer (2 to 8), and animals with a titer above or equal to 16. COCs were obtained from 15 donors during 22 sessions of ultrasound-guided follicular aspiration. DNA was extracted from a pool of COCs obtained from all aspirations from the same donor as well as from whole blood and nested PCR reactions were performed. Only COCs with a compact layer of cumulus cells, an intact zona pellucida, and homogeneous cytoplasm were selected for in vitro culture and evaluation of nuclear maturation rate. After culturing for 24 hours, the oocytes were fixed and stained to evaluate the meiotic cell cycle stage. Oocytes that showed a chromosomal configuration in metaphase II were considered to have reached nuclear maturation. Compared with the other groups, the oocyte nuclear maturation rate in animals with a titer greater than or equal to 16 (50%) was compromised (P<0.05). However, the viral titer did not influence the maturation rate of bovine oocytes in animals exhibiting low titration (62.2%) when compared with the control group (76.7%). Viral DNA was not observed in the blood samples but was detected in the COC pool from three seropositive donors. In view of the results obtained, we conclude that natural infections by the BoHV-1 virus can compromise the nuclear maturation rate in cows, depending on the titration levels of antibodies against the virus. Moreover, viral DNA could be present in COCs, contradicting the hypothesis that seropositive animals with no history of clinical symptomatology pose a negligible risk of transmitting BoHV-1 by COCs.(AU)

Herpesvírus bovino 1 (BoHV-1) é um importante patógeno bovino, responsável por causar doenças respiratórias e falhas reprodutivas. A presença do BoHV-1 em sistema de produção in vitro de embriões afeta a fertilização, a maturação e o desenvolvimento embrionário. O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade de desenvolvimento de ovócitos oriundos de vacas infectadas naturalmente sem histórico reprodutivo. Além disso, este estudo investigou a presença do DNA viral em Complexos Cumulus Ooforus (COCs). Os tratamentos foram definidos a partir do título de anticorpos detectados pelos ensaios de soroneutralização, sendo estabelecidos três grupos: animais soronegativos (título menor do que 2), título baixo (2 a 8) e animais com título maior ou igual a 16. Os COCs foram obtidos de 15 doadoras durante 22 sessões de aspiração folicular guiada por ultrassom. A extração do DNA foi realizada em um pool de COCs de todas as aspirações de uma mesma doadora e no sangue total para a realização das reações de Nested-PCR. Para avaliação da taxa de maturação nuclear, foram selecionados para o cultivo in vitro somente os COCs com camada compacta de células do cumulus, zona pelúcida íntegra e citoplasma homogêneo. Após 24 horas de cultivo, os ovócitos foram fixados e corados em lâmina para a avaliação do estádio do ciclo celular meiótico. Os ovócitos que apresentaram configuração cromossômica em metáfase II foram considerados como tendo alcançado a maturação nuclear. Verificou-se comprometimento na taxa de maturação nuclear ovocitária (P<0.05) nos animais de título maior ou igual a 16 (50%). No entanto, não houve influência do título viral na taxa de maturação de ovócitos bovinos em animais que apresentaram titulação baixa (62,2%) quando comparados com o grupo controle (76,7%). O DNA viral não foi identificado nas amostras de sangue, mas foi detectado no pool de COCs de três doadoras soropositivas. Diante dos resultados encontrados conclui-se que vacas infectadas naturalmente pelo vírus BoHV-1 apresentam comprometimento na taxa de maturação nuclear, dependendo do grau de titulação de anticorpos contra o vírus. Ademais, o DNA viral pode estar presente em COCs contrariando a hipótese de que animais sorologicamente positivos e sem histórico de sintomatologia clínica oferecem risco negligível de transmissão do BoHV-1 por COCs.(AU)

Impairment on nuclear maturation rate in oocytes from cows naturally infected by bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) / Comprometimento na taxa de maturação nuclear em ovócitos de vacas naturalmente infectadas pelo herpesvírus bovino 1 (BoHV-1)

Bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) is an important bovine pathogen that is responsible for causing respiratory diseases and reproductive failures. The presence of BoHV-1 in an in vitro embryo production system affects fertilization, maturation, and embryonic development. The objective of this study was to evaluate the developmental capacity of oocytes from naturally infected cows with no reproductive history. Moreover, this study investigated the presence of viral DNA in cumulus oophorus complexes (COCs). Experimental groups were differentiated by titrating the antibodies detected through seroneutralization assays, establishing three groups: seronegative animals (titer lower than 2), low titer (2 to 8), and animals with a titer above or equal to 16. COCs were obtained from 15 donors during 22 sessions of ultrasound-guided follicular aspiration. DNA was extracted from a pool of COCs obtained from all aspirations from the same donor as well as from whole blood and nested PCR reactions were performed. Only COCs with a compact layer of cumulus cells, an intact zona pellucida, and homogeneous cytoplasm were selected for in vitro culture and evaluation of nuclear maturation rate. After culturing for 24 hours, the oocytes were fixed and stained to evaluate the meiotic cell cycle stage. Oocytes that showed a chromosomal configuration in metaphase II were considered to have reached nuclear maturation. Compared with the other groups, the oocyte nuclear maturation rate in animals with a titer greater than or equal to 16 (50%) was compromised (P<0.05). However, the viral titer did not influence the maturation rate of bovine oocytes in animals exhibiting low titration (62.2%) when compared with the control group (76.7%). Viral DNA was not observed in the blood samples but was detected in the COC pool from three seropositive donors. In view of the results obtained, we conclude that natural infections by the BoHV-1 virus can compromise the nuclear maturation rate in cows, depending on the titration levels of antibodies against the virus. Moreover, viral DNA could be present in COCs, contradicting the hypothesis that seropositive animals with no history of clinical symptomatology pose a negligible risk of transmitting BoHV-1 by COCs.(AU)

Herpesvírus bovino 1 (BoHV-1) é um importante patógeno bovino, responsável por causar doenças respiratórias e falhas reprodutivas. A presença do BoHV-1 em sistema de produção in vitro de embriões afeta a fertilização, a maturação e o desenvolvimento embrionário. O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade de desenvolvimento de ovócitos oriundos de vacas infectadas naturalmente sem histórico reprodutivo. Além disso, este estudo investigou a presença do DNA viral em Complexos Cumulus Ooforus (COCs). Os tratamentos foram definidos a partir do título de anticorpos detectados pelos ensaios de soroneutralização, sendo estabelecidos três grupos: animais soronegativos (título menor do que 2), título baixo (2 a 8) e animais com título maior ou igual a 16. Os COCs foram obtidos de 15 doadoras durante 22 sessões de aspiração folicular guiada por ultrassom. A extração do DNA foi realizada em um pool de COCs de todas as aspirações de uma mesma doadora e no sangue total para a realização das reações de Nested-PCR. Para avaliação da taxa de maturação nuclear, foram selecionados para o cultivo in vitro somente os COCs com camada compacta de células do cumulus, zona pelúcida íntegra e citoplasma homogêneo. Após 24 horas de cultivo, os ovócitos foram fixados e corados em lâmina para a avaliação do estádio do ciclo celular meiótico. Os ovócitos que apresentaram configuração cromossômica em metáfase II foram considerados como tendo alcançado a maturação nuclear. Verificou-se comprometimento na taxa de maturação nuclear ovocitária (P<0.05) nos animais de título maior ou igual a 16 (50%). No entanto, não houve influência do título viral na taxa de maturação de ovócitos bovinos em animais que apresentaram titulação baixa (62,2%) quando comparados com o grupo controle (76,7%). O DNA viral não foi identificado nas amostras de sangue, mas foi detectado no pool de COCs de três doadoras soropositivas. Diante dos resultados encontrados conclui-se que vacas infectadas naturalmente pelo vírus BoHV-1 apresentam comprometimento na taxa de maturação nuclear, dependendo do grau de titulação de anticorpos contra o vírus. Ademais, o DNA viral pode estar presente em COCs contrariando a hipótese de que animais sorologicamente positivos e sem histórico de sintomatologia clínica oferecem risco negligível de transmissão do BoHV-1 por COCs.(AU)

Desenvolvimento e avaliação de uma vacina inativada de aplicação intravaginal contra o alphaherpesvirus bovino 5 (BoHV-5) em associação ao hidróxido de alumínio e aos polímeros mucoadesivos Polaxamer 407 e 2-hidroxietilcelulose

Os alphaherpesvirus bovinos BoHV - são patógenos que colonizam as células epiteliais das cavidades mucosas e causam doenças respiratória e reprodutiva em bovinos, além de casos de encefalite herpética bovina (BoHV-5) e persistência do genoma viral no organismo hospedeiro, com casos de reativação e excreção de progênie infecciosa. Mecanismos da imunidade inata e adaptativa conferem proteção frente a estes agentes, mas o estímulo da imunidade local, mediada por anticorpos das classes IgG e IgA, é essencial para a efetividade desta proteção. Desta forma, há a necessidade da formulação de vacinas que propiciem a imunidade adequada a estas mucosas. Neste estudo, 20 fêmeas bovinas das raças Jersey e Holandês foram divididas em três grupos (G1 (controle positivo BoHV-5+Al(OH)3), G2 (controle negativo PBS) e G3 (vacina experimental BoHV-5+Al(OH)3+2-Hidroxietilcelulose+Polaxamer 407) e inoculadas três vezes, com intervalos de vinte e um dias, pelas vias parenteral (G1 e G2) e vaginal (G3). A avaliação da resposta imunológica humoral foi realizada pelos testes de soroneutralização e ELISA. Não houve detecção de anticorpos neutralizantes no grupo tratado com a vacina experimental (G3), em nenhum dos períodos experimentais. Apenas no grupo 1 (controle positivo) foram observados títulos de anticorpos neutralizantes, a partir do dia 21 após a primeira vacinação. O teste de ELISA indireto demonstrou incremento na produção dos anticorpos IgG e IgA nas secreções nasal e vaginal (G3) e as vacinas demonstraram-se seguras e bem toleradas pelos animais. O incremento de IgG e IgA a níveis séricos não apresentou resultado satisfatório no tratamento experimental (G3). Conquanto, nosso estudo confirma a necessidade de pesquisas adicionais que avaliem a capacidade imunomoduladora e imunogênica de outras formulações que possam ser utilizadas na elaboração de um produto comercial seguro e eficaz.

Bovine alphaherpesviruses - BoHV - are pathogens that colonize epithelial cells in mucous cavities and cause respiratory and reproductive diseases in cattle, in addition to cases of bovine herpetic encephalitis (BoHV-5) and persistence of the viral genome in the host organism, with cases of reactivation and excretion of infectious progeny. Mechanisms of innate and adaptive immunity provide protection against these agents, but stimulating local immunity, mediated by antibodies of the IgG and IgA classes, is essential for the effectiveness of this protection. Thus, there is a need for the formulation of vaccines that provide adequate immunity to these mucous membranes. In this study, 20 bovine females of the Jersey and Dutch breeds were divided into three groups (G1 - (positive control - BoHV-5 + Al (OH) 3), G2 (negative control - PBS) and G3 (experimental vaccine - BoHV-5 + Al (OH) 3 + 2-Hydroxyethylcellulose + Polaxamer 407) and inoculated three times, at intervals of twenty-one days, by parenteral (G1 and G2) and vaginal (G3) routes. seroneutralization and ELISA tests There was no detection of neutralizing antibodies in the group treated with the experimental vaccine (G3), in any of the experimental periods Only in group 1 (positive control), neutralizing antibody titers were observed, starting on the 21st day after The indirect ELISA test showed an increase in the production of IgG and IgA antibodies in nasal and vaginal secretions (G3) and the vaccines were shown to be safe and well tolerated by the animals.The increase in IgG and IgA at serum levels did not show satisfactory result in t experimental treatment (G3). However, our study confirms the need for further research to assess the immunomodulatory and immunogenic capacity of other formulations that can be used in the development of a safe and effective commercial product.

Epidemiological analysis of infection by the bovine viral diarrhea virus on family farms in Brazil / Análise epidemiológica da infecção pelo vírus da diarreia viral bovina em rebanhos da agricultura familiar, Brasil

The aim of the present study was to determine the seroprevalence of infection by the bovine viral diarrhea virus (BVDV) on family farms, as well as to study the risk factors associated with the infection. In total, 319 blood serum samples were collected from cattle, of reproductive age (>24 months) in 24 herds from 11 cities of the brejo microregion in Pernambuco. The samples were subjected to the seroneutralization test to detect anti-BVDV antibodies. In order to identify the risk factors associated with the BVDV, a questionnaire epidemiologic was applied and followed by statistical analysis of logistic regression, with the serological test considered as the dependent variable (reagent or non-reagent). A prevalence of 51.1% (163/319; C.I. 45.5% - 56.7%) was found in the present study. Of the 24 herds sampled, 100.0% contained at least one reagent animal. The prevalence in the counties ranged from 23.1% to 70.0%. The following risk factors were identified in the present study: not providing colostrum (OR 3.85; p=0.018); disease unknown (OR 2.54; p=0.001) and consortium breeding (OR 1.76; p=0.013). Based on these results, it was clear that BVDV infection is widespread in herds on family farms in the microregion studied herein. Health education policies must be implemented for producers and professionals who provide technical assistance. In addition, based on the risk factors identified in the present study, hygiene-sanitary measures should be implemented in order to reduce the prevalence of the BVDV.

Objetivou-se com este estudo determinar a soroprevalência e estudar os fatores de risco associados à infecção pelo vírus da diarreia viral bovina (BVDV) nas unidades produtivas de agricultura familiar. Foram coletadas 319 amostras de soro sanguíneo, de bovinos em idade reprodutiva (>24 meses), procedentes de 24 rebanhos bovinos em 11 municípios da microrregião brejo pernambucano. As amostras foram submetidas ao teste de soroneutralização para detecção de anticorpos anti-BVDV. Para a identificação dos fatores de risco associados ao BVDV, foi aplicado um questionário epidemiológico e foi realizada uma análise estatística de regressão logística, considerando como variável dependente o exame sorológico (reagente ou não reagente). Observou-se com este estudo uma prevalência de 51,1% (163/319; I.C. 45,5% - 56,7%). Dos 24 rebanhos amostrados, 100% apresentaram pelo menos um animal reagente. A prevalência nos municípios variou de 23,1% a 70,0%. Os fatores de risco identificados neste estudo foram: não fornecer colostro (OR 3,85; p=0,018); não conhecer a enfermidade (OR 2,54; p=0,001) e criação consorciada (OR 1,76; p=0,013). Diante dos resultados obtidos, constatou-se que a infecção pelo BVDV está disseminada nos rebanhos de agricultura familiar na microrregião estudada e que políticas de educação em saúde devem ser implementadas tanto para os produtores como para os profissionais que prestam assistência técnica. Além disso, medidas higiênico-sanitárias com base nos fatores de risco identificados neste estudo devem ser implementadas como forma de reduzir a prevalência do BVDV.

Epidemiological analysis of infection by the bovine viral diarrhea virus on family farms in Brazil / Análise epidemiológica da infecção pelo vírus da diarreia viral bovina em rebanhos da agricultura familiar, Brasil

The aim of the present study was to determine the seroprevalence of infection by the bovine viral diarrhea virus (BVDV) on family farms, as well as to study the risk factors associated with the infection. In total, 319 blood serum samples were collected from cattle, of reproductive age (>24 months) in 24 herds from 11 cities of the brejo microregion in Pernambuco. The samples were subjected to the seroneutralization test to detect anti-BVDV antibodies. In order to identify the risk factors associated with the BVDV, a questionnaire epidemiologic was applied and followed by statistical analysis of logistic regression, with the serological test considered as the dependent variable (reagent or non-reagent). A prevalence of 51.1% (163/319; C.I. 45.5% - 56.7%) was found in the present study. Of the 24 herds sampled, 100.0% contained at least one reagent animal. The prevalence in the counties ranged from 23.1% to 70.0%. The following risk factors were identified in the present study: not providing colostrum (OR 3.85; p=0.018); disease unknown (OR 2.54; p=0.001) and consortium breeding (OR 1.76; p=0.013). Based on these results, it was clear that BVDV infection is widespread in herds on family farms in the microregion studied herein. Health education policies must be implemented for producers and professionals who provide technical assistance. In addition, based on the risk factors identified in the present study, hygiene-sanitary measures should be implemented in order to reduce the prevalence of the BVDV.(AU)

Objetivou-se com este estudo determinar a soroprevalência e estudar os fatores de risco associados à infecção pelo vírus da diarreia viral bovina (BVDV) nas unidades produtivas de agricultura familiar. Foram coletadas 319 amostras de soro sanguíneo, de bovinos em idade reprodutiva (>24 meses), procedentes de 24 rebanhos bovinos em 11 municípios da microrregião brejo pernambucano. As amostras foram submetidas ao teste de soroneutralização para detecção de anticorpos anti-BVDV. Para a identificação dos fatores de risco associados ao BVDV, foi aplicado um questionário epidemiológico e foi realizada uma análise estatística de regressão logística, considerando como variável dependente o exame sorológico (reagente ou não reagente). Observou-se com este estudo uma prevalência de 51,1% (163/319; I.C. 45,5% - 56,7%). Dos 24 rebanhos amostrados, 100% apresentaram pelo menos um animal reagente. A prevalência nos municípios variou de 23,1% a 70,0%. Os fatores de risco identificados neste estudo foram: não fornecer colostro (OR 3,85; p=0,018); não conhecer a enfermidade (OR 2,54; p=0,001) e criação consorciada (OR 1,76; p=0,013). Diante dos resultados obtidos, constatou-se que a infecção pelo BVDV está disseminada nos rebanhos de agricultura familiar na microrregião estudada e que políticas de educação em saúde devem ser implementadas tanto para os produtores como para os profissionais que prestam assistência técnica. Além disso, medidas higiênico-sanitárias com base nos fatores de risco identificados neste estudo devem ser implementadas como forma de reduzir a prevalência do BVDV.(AU)

PREVALÊNCIA E FATORES DE RISCO ASSOCIADOS À INFECÇÃO PELO VÍRUS DA ESTOMATITE VESICULAR EM EQUÍDEOS NO ESTADO DO RIO GRANDE DO NORTE, BRASIL

A estomatite vesicular (EV) é uma enfermidade zoonótica viral, que acomete ruminantes, equídeos, porcinos, algumas espécies silvestres e cursa com sintomatologia clínica semelhante as provocadas pelo vírus da febre aftosa. O vírus da estomatite vesicular (VEV) apresenta dois sorotipos New Jersey e Indiana sendo este último classificado em três subtipos Indiana 1, 2 e 3. Objetivou-se investigar a presença de anticorpos do VEV e potenciais fatores de risco envolvidos com a infecção pelo vírus em equídeos das mesorregiões Leste e Oeste Potiguar do estado do Rio Grande do Norte, Brasil. Foram analisadas amostras sanguíneas de 809 animais provenientes de noventa propriedades distribuídas em dezesseis municípios do estado durante os meses de julho de 2018 a fevereiro de 2019. As amostras foram obtidas por venopunção da jugular com sistema de colheita a vácuo, em tubos do tipo Vacutainer® sem anticoagulante e posteriormente centrifugadas a 3.000 rpm por 10 minutos para obtenção de soro, que foi armazenado em tubos do tipo Eppendorf® a -20ºC até o processamento para diagnóstico por soroneutralização. Os fatores de riscos foram avaliados por meio de questionário epidemiológico investigativo. Os dados foram submetidos a análise estatística no programa EpiInfo 3.5.2 com nível de confiança de 95%. A prevalência de anticorpos anti-VEV foi 24,6% (199/809), sendo 3,2% (13/402) soropositivos na mesorregião Leste e 45,7% (186/407) na região Oeste. Considerando os sorotipos observou-se uma prevalência de 3,8% (31/809) para Indiana 2, 24,5% (198/809) para Indiana 3 e 15,1% (30/198) de coinfecção para ambos. Todas as variáveis estatisticamente significantes foram submetidas a uma análise de regressão logística multivariada e concluiu-se que animais criados em áreas rurais da mesorregião Oeste, em sistemas extensivo e semi-intensivo, cujo pasto é alagado, não realiza quarentena, não desinfeta as instalações, e onde os animais enfermos são mantidos no rebanho, foram consideradas fatores de risco para infecção pelo VEV. Esses resultados demonstram que o VEV está distribuído pelo estado do Rio Grande do Norte e medidas de controle devem ser adotadas para evitar a disseminação do mesmo.

Vesicular stomatitis (VS) is a viral zoonotic disease that affects ruminants, equines, porcinis, some wild species and has clinical symptoms similar to those caused by the FMD virus. The vesicular stomatitis virus (VSV) has two serotypes New Jersey and Indiana, the latter being classified into three subtypes Indiana 1, Indiana 2 and Indiana 3. The objective of this study was to investigate the presence of VSV and its potential risk factors for the occurrence and dissemination of disease in Equidae from the eastern and Western mesoregions of the state of Rio Grande do Norte, Brazil. Blood samples were analyzed from 809 animals from 90 properties distributed in sixteen municipalities in the state from July 2018 to February 2019. The samples were obtained by venipuncture of the jugular with vacuum collection system, in tubes of the type Vacutainer® without anticoagulant. Packaged under refrigeration in a thermal box and transported to the Ruminant Laboratory of the Federal Rural University of Pernambuco for centrifugation at 3,000 rpm for 10 minutes and obtaining serum aliquots, which were stored in Eppendorf® tubes at -20ºC until diagnostic processing. by seroneutralization. Risk factors were assessed using an investigative epidemiological questionnaire. The data were submitted to statistical analysis in the EpiInfo 3.5.2 program with a 95% confidence level. The occurrence of anti-VSV antibodies was 24.6% (199/809), with 3.2% (13/402) seropositive in the eastern mesoregion and 45.7% (186/407) in the western region. Considering the serotypes, there was a prevalence of 3.8% (31/809) for Indiana 2 and 24.5% (198/809) for Indiana 3. All statistically significant variables were subjected to multivariate logistic regression analysis and it was concluded that animals raised in rural areas of the western mesoregion, in extensive and semi-intensive systems, whose pasture is flooded, does not quarantine, does not disinfect the facilities, are raised in a communal way with small ruminants and pigs, and where the animals sick are kept in the herd, risk factors for infection by VSV-IN subtypes 1 and 2 were considered. These results demonstrate that VSV is distributed across the state of Rio Grande do Norte and control measures must be adopted to prevent its spread.

Avaliação da eficiência de toxóide recombinante contra botulismo em bubalinos

criação de búfalos (Bubalus bubalis) no Brasil se consolida cada vez mais como importante fonte econômica alternativa a bovinocultura por suas características de rusticidade e adaptabilidade. O estado do Pará destaca-se por concentrar o maior rebanho bubalino brasileiro com um efetivo aproximado de 519 mil animais. O botulismo em bovídeos é uma doença de grande importância econômica e sanitária, sendo uma das principais causas de mortalidade de animais adultos no Brasil. A vacinação com os toxoides C e D de Clostridium botulinum é a forma mais efetiva de controle desta doença, contudo, apesar da eficiência, os toxoides botulínicos comerciais apresentam limitações no que diz respeito a sua produção industrial: i- C. botulinum produz baixos níveis de neurotoxina botulínica (BoNT) in vitro; ii- a produção em larga escala é laboriosa, onerosa e sua produtividade dificilmente previsível e; iii- a produção industrial exige a adoção de normas muito exigentes de biossegurança. Dentro dessa ótica as vacinas utilizando proteínas recombinantes vêm apresentando resultados promissores como ferramenta alternativa na imunização animal. Diante da importância da doença e das dificuldades na produção da vacina comercial este projeto teve como objetivo avaliar a eficiência de um toxóide recombinante contra botulismo em bubalinos estabelecendo a curva de anticorpos neutralizantes. Cinquenta búfalos adultos sem histórico de vacinação contra botulismo e níveis detectáveis de anticorpos contra BoNTs C e D foram agrupados aleatoriamente em cinco grupos de dez animais: Grupo Vacina Recombinante 100µg (G1), Grupo Vacina Recombinante 200µg (G2), Grupo Vacina Recombinante 400µg (G3), Grupo Vacina Comercial (G4) e Grupo Controle Negativo (G5). Os bubalinos do G1, G2 e G3 foram vacinados com a vacina recombinante contendo diferentes concentrações da proteína recombinante 100µg, 200µg e 400µg, respectivamente, G4 com vacina comercial e o G5 receberam solução salina estéril (NaCl 0,9%). Todos os animais receberam duas doses, num volume por dose de 5ml, por via subcutânea, na tábua do pescoço, nos dias zero e 28 após a primeira dose. Foram realizadas coletas de amostras sangue nos dias 56, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 e 365. As amostras foram centrifugadas e os soros submetidos a técnica de soroneutralização em camundongos. No teste de potência aos 56 dias após a vacinação a formulação recombinante com concentração 400µg foi aquela que conseguiu induzir resposta imune humoral com os maiores títulos. No teste de eficiência (longevidade vacinal) a formulação de 200µg do ponto de vista custo/benefício, foi a mais eficiente para a produção em grande escala e, portanto, a formulação a ser escolhida.

Buffalo (Bubalus bubalis) rearing in Brazil is increasingly consolidating itself as an important alternative economic source to cattle raising due to its characteristics of rusticity and adaptability. The state of Pará stands out for concentrating the largest Brazilian buffalo herd with an approximate herd of 519 thousand animals. Botulism in cattle is a disease of great economic and sanitary importance, being one of the main causes of mortality of adult animals in Brazil. Vaccination with Clostridium botulinum toxoids C and D is the most effective way to control this disease, however, despite their efficiency, commercial botulinum toxoids have limitations in their industrial production: i-C. botulinum produces low levels. botulinum neurotoxin (BoNT) in vitro; (ii) large-scale production is laborious, costly and its productivity hardly predictable; iii- Industrial production requires the adoption of very demanding biosafety standards. From this perspective, vaccines using recombinant proteins have shown promising results as an alternative tool in animal immunization. Given the importance of the disease and the difficulties in commercial vaccine production, this project aimed to evaluate the efficiency of a recombinant toxoid against botulism in buffaloes by establishing the neutralizing antibody curve. Fifty adult buffaloes with no history of botulism vaccination and detectable levels of BoNTs C and D antibodies were randomly grouped into five groups of ten animals: Recombinant Vaccine Group 100µg (G1), Recombinant Vaccine Group 200µg (G2), Recombinant Vaccine Group 400µg (G3), Commercial Vaccine Group (G4) and Negative Control Group (G5). G1, G2 and G3 buffaloes were vaccinated with the recombinant vaccine containing different concentrations of the 100µg, 200µg and 400µg recombinant protein, respectively, G4 with commercial vaccine and G5 received sterile saline (0.9% NaCl). All animals received two doses, in a volume per dose of 5 ml, subcutaneously, on the neck table, on days zero and 28 after the first dose. Blood samples were collected on days 56, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 and 365. The samples were centrifuged and serum were submitted to seroneutralization technique in mice. In the potency test at 56 days after vaccination, the recombinant formulation with concentration 400µg was the one that was able to induce humoral immune response with the highest titers. In the efficiency test (vaccine longevity) the 200µg formulation from the cost / benefit point of view was the most efficient for large scale production and therefore the formulation to be chosen.

SOROPREVALÊNCIA DAS INFECÇÕES POR Herpesvírus equino (EHV-1/ EHV-4), Sarcocystis neurona e Brucella spp. EM CAVALOS DA MICRORREGIÃO DE ILHÉUS-ITABUNA, BAHIA-BRASIL

Objetivou-se com este estudo determinar a soroprevalência e fatores associados à infecção por Herpesvírus equino (EHV-1/EHV-2), S. neurona e Brucella spp. em cavalos, assim como, determinar a positividade de oocistos de S. neurona em Didelphis spp. Todos os animais foram provenientes da microrregião de Ilhéus-Itabuna, Bahia, Brasil. Para o diagnóstico de Herpesvírus equino (EHV- 1/EHV-2), foi utilizada a técnica de soroneutralização em microplacas, e considerados positivos animais com titulação 4 capaz de inibir 100% do efeito citopático. Para S. neurona foi utilizado a reação de imunofluorescência indireta (RIFI) utilizando merozoitas da cepa de S. neurona 138 (SN138) com o ponto de corte 1:80. E para Brucella spp. foram utilizados como triagem o teste do antígeno acidificado tamponado (AAT) e como confirmatório o teste de soroaglutinação lenta em tubos (SAT) com o ponto de corte 1:100 associado ao teste de redução pelo 2-Mercaptoetanol (2ME) em titulações (1:25, 1:50, 1:100, 1:200). Foram capturados 25 Didelphis spp. para a pesquisa de oocistos e esporocistos de S. neurona através do exame de fezes e da digestão do raspado da mucosa intestinal. Foi observado uma prevalência de 36,33% (IC95% = 32,44 40,13) de equinos soropositivos para Herpesvírus equino (EHV-1/EHV-4), com titulação de 1:4 (105), 1:8 (52), 1:16 (32), 1:32 (20), 1:64 (9), 1:128 (8). A prevalência de anticorpos anti- S. neurona nos equinos amostrados foi de 7,92% (IC 95%= 5,99 10,23), com titulação encontrada de 1:80 (94,3%), 1:160 (3,8%) e 1:320 (1,9%). A positividade de anticorpos contra Brucella spp. encontrados nos equinos foi de 0,15% (1 animal) com (IC 95%= 0-0,83) na titulação 1:100 (SAT) e 1:50 (2ME). Todos os Didelphis spp. analisados foram negativos para a presença de S. neurona. Este é o primeiro estudo que avalia os três agentes em cavalos.

The objective of this study was to determine seroprevalence and factors associated with infection by Equine Herpesvirus (EHV-1 / EHV-2), S. neurona and Brucella spp. in horses, as well as to determine the positivity of S. neurona oocysts in Didelphis spp. All animals came from the micro region of IlhéusItabuna, Bahia, Brazil. For the diagnosis of Equine Herpesvirus (EHV-1 / EHV-2), the micro-plate seroneutralization technique was used, and animals with a titre 4 capable of inhibiting 100% of the cytopathic effect were considered positive. For S. neurona, the indirect immunofluorescence reaction (IFAT) was used using merozoites from the S. neurona 138 (SN138) strain with a cutoff point of 1:80. And for Brucella spp. the buffered acidified antigen (AAT) test was used as a screening test and the slow serum agglutination test (SAT) with the cut-off point 1: 100 associated with the 2-Mercaptoethanol (2ME) reduction test in titrations (1 : 25, 1:50, 1: 100, 1: 200). 25 Didelphis spp. for the investigation of oocysts and sporocysts of S. neurona through the examination of feces and digestion of the scrape of the intestinal mucosa. It was observed a prevalence of 36.33% (95% CI = 32.44 - 40.13) of horses seropositive for Equine Herpesvirus (EHV-1 / EHV- 4), with a titre of 1:4 (105), 1:8 (52), 1:16 (32), 1:32 (20), 1:64 (9), 1:128 (8). The prevalence of anti-S. neurona antibodies in the sampled horses was 7.92% (95% CI = 5.99 - 10.23), with a titre found of 1:80 (94.3%), 1: 160 ( 3.8%) and 1: 320 (1.9%). The positivity of antibodies against Brucella spp. found in horses was 0.15% (1 animal) with (95% CI = 0-0.83) in the titration 1: 100 (SAT) and 1:50 (2ME). All Didelphis spp. analyzed were negative for the presence of S. neurona. This is the first study to evaluate the three agents in horses.

Javalis (Sus scrofa) como Sentinelas Silvestres para Raiva em Unidades de Conservação

O objetivo da presente dissertação de mestrado em Ciências Veterinárias da Universidade Federal do Paraná é apresentar a pesquisa referente ao diagnóstico sorológico de raiva em javalis (Sus Scrofa) e a titulação de anticorpos em caçadores das regiões centro-oeste e sul do Brasil. Para isto, foi estruturado inicialmente em introdução, objetivos geral e específicos e justificativa, e posteriormente dividido em dois capítulos. O primeiro capítulo foi desenvolvido uma revisão de literatura intitulado Raiva em Javalis Localizados em Unidades de Conservação: Uma Revisão, a ser submetido ao Boletim Epidemiológico Paulista, revista com classificação qualis B4. No capítulo 2, tem-se o artigo: Wild boar exposure to hematophagous bats and rabies virus, associated to lack of immune protection in hunters of Brazil, submetido na BMC Veterinary Research, na forma de case report. Esta revista possui classificação Qualis A1 e fator de impacto: 1.792. Para construção do artigo, inserido no capítulo 2, foi analisado 80 amostras de soro de javali, sendo 36 de animais capturados em Goiás, 21 no Parque Estadual de Vila Velha e 23 encontrados ao redor do Parque, e realizou-se a titulação de anticorpos de 49 caçadores. O artigo aborda os resultados sorológicos encontrados para raiva nos javalis, juntamente com os fatores de risco para a doença e a resposta vacinal dos caçadores que receberam as vacinas pré-exposição da doença. Assim, foi possível por meio do presente trabalho, constatar com o resultado das análises laboratoriais, que os javalis, por apresentarem anticorpos neutralizantes para o vírus da raiva, atuam no ciclo silvestre da doença, além de evidenciar que os caçadores são susceptíveis ao vírus.

The objective of the present Master's Dissertation in Veterinary Sciences of the Federal University of Paraná is to present the research regarding the serological diagnosis of wild boar rabies (Sus Scrofa) and the titration of antibodies in hunters of the central-western and southern regions of Brazil. For this, it was initially structured in introduction, general and specific objectives and justification, and later divided into two chapters. The first chapter was developed a literature review entitled "Rabies on Wild Boars Located in Conservation Units: A Review", to be submitted to the Paulista Epidemiological Bulletin, magazine with qualis classification B4. In chapter 2, there is the article: Wild boar exposure to hematophagous bats and rabies virus, associated with lack of immune protection in hunters of Brazil, submitted to BMC Veterinary Research, as a case report. This magazine has a Qualis A1 rating and impact factor: 1,792. For the construction of the article, inserted in chapter 2, 80 wild boar serum samples were analyzed, 36 of which were captured in Goias, 21 in Vila Velha State Park and 23 found around the Park, and antibody titration was performed. of 49 hunters. The article addresses the serological results found for wild boar rabies, along with the risk factors for the boar and the vaccine response of hunters who received pre-exposure vaccines. Thus, it was possible through the present work, to verify with the result of the laboratory analysis, that the wild boars, having neutralizing antibodies to the rabies virus, act in the wild cycle of the disease, besides evidencing that the hunters are susceptible to the virus.

In vitro potency test for evaluation of Clostridium perfringens type D epsilon toxoid

The control of enterotoxemia caused by the epsilon toxin, produced by Clostridium perfringenstype D, is based on vaccination with epsilon toxoid. The potency test for this immunogen is conducted using seroneutralization in mice. Here, an in vitro test for detection of neutralizing antibodies with Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) cells was standardized in order to study alternative methodologies for the potency test. Titers observed in the in vivo and in vitro seroneutralization tests had a correlation of 99.73%.

O controle da enterotoxemia causada pela toxina épsilon produzida por Clostridium perfringenstipo D é baseado na vacinação com toxoide. O teste de potência desse imunógeno é realizado utilizando-se a técnica de soroneutralização em camundongos. Objetivando-se estudar metodologias alternativas a essa técnica, padronizou-se um teste in vitropara detecção de anticorpos neutralizantes utilizando-se a linhagem celular Madin-Darby Canine Kidney (MDCK). Os títulos observados nas soroneutralizações in vivoe in vitro apresentaram correlação de 99,73%.

In vitro potency test for evaluation of Clostridium perfringens type D epsilon toxoid / Avaliação in vitro da potência de toxoide épsilon de Clostridium perfringens tipo D

The control of enterotoxemia caused by the epsilon toxin, produced by Clostridium perfringens type D, is based on vaccination with epsilon toxoid. The potency test for this immunogen is conducted using seroneutralization in mice. Here, an in vitro test for detection of neutralizing antibodies with Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) cells was standardized in order to study alternative methodologies for the potency test. Titers observed in the in vivo and in vitro seroneutralization tests had a correlation of 99.73%.

O controle da enterotoxemia causada pela toxina épsilon produzida por Clostridium perfringens tipo D é baseado na vacinação com toxoide. O teste de potência desse imunógeno é realizado utilizando-se a técnica de soroneutralização em camundongos. Objetivando-se estudar metodologias alternativas a essa técnica, padronizou-se um teste in vitro para detecção de anticorpos neutralizantes utilizando-se a linhagem celular Madin-Darby Canine Kidney (MDCK). Os títulos observados nas soroneutralizações in vivo e in vitro apresentaram correlação de 99,73%.

INQUÉRITO EPIDEMIOLÓGICO DA INFECÇÃO PELO HERPESVÍRUS EM EQUINOS NO ESTADO DE PERNAMBUCO

A herpesvirose equina é uma das principais afecções virais que causa impactos negativos na equideocultura, principalmente na reprodução de equinos. Objetivou-se com este estudo realizar um inquérito epidemiológico da infecção por herpesvírus em equinos na microrregião do Vale do Ipojuca, agreste do estado de Pernambuco, Brasil. A soroneutralização viral foi realizada em 322 equinos não vacinados contra a infecção herpética, procedentes de 42 propriedades de 16 municípios pertencentes à Microrregião do Vale do Ipojuca. Um questionário investigativo foi utilizado para análise dos fatores de risco associados à infecção por herpesvírus equino. Observou-se ocorrência de 23,3% (75/322; Índice de confiança (IC) 95%: 18,9 28,4%) para infecção por herpesvírus em equinos. Além disso, 61,9% (26/42) das propriedades possuíam pelo menos um animal positivo, com variação da ocorrência de infecção entre 5 a 100% inter-rebanhos. Foram considerados fatores de risco associados à infecção: criação consorciada de equinos com muares (Odds ratio - OR: 6,64; IC 95%: 2,66% - 16,58%) e tipo da propriedade, fazenda (OR: 1,88; IC 95%: 0,99-3,57) e haras (OR: 2,76; IC 95%: 1,42-5,35). Ao analisar índices reprodutivos, associou-se à infecção herpética: a utilização de biotécnicas reprodutivas com a monta natural (p = 0,003); histórico de mortalidade perinatal no rebanho (p = 0,004); intervalo entre partos superior a dois anos (p = 0,003); e a sazonalidade reprodutiva, com a presença de éguas com ciclos irregulares no rebanho (p = 0,041). Este é o primeiro registro da infecção por herpesvírus em equinos no estado de Pernambuco, Brasil. A partir dos resultados obtidos, sugere-se a adoção de medidas profiláticas direcionadas aos fatores de risco identificados, a fim de reduzir a ocorrência da infecção herpética na região estudada.

Equine herpesvirus is one of the main viral diseases that causes negative impacts on equidae culture, especially on equine reproduction. This studys objective to conduct an epidemiological investigation of herpesvirus infection in horses in the micro-region of the Ipojuca Valley, in the state of Pernambuco, Brazil. A viral seroneutralization was performed in 322 non-vaccinated horses against herpetic infection, from 42 properties of 16 municipalities belonging to the Ipojuca Valley Microregion. An investigated questionnaire was used to analyze the risk factors associated with equine herpesvirus infection. The occurrence of 23.3% (75/322; 95% confidence interval (CI): 18.9 - 28.4%) for herpesvirus infection in horses was observed. In addition, 61.9% (26/42) of the good possessing at least one positive animal, with variation of the occurrence of infection between 5 to 100% inter-herds. (OR: 6.64, 95% CI: 2.66% - 16.58%) and farm type (OR: 1.88, 95% CI: 0.99-3.57) and farms (OR : 2.76, 95% CI: 1.42-5.35). When analyzing reproductive indexes, associate with herpetic infection: a use of reproductive biotechniques with a natural mount (p = 0.003); history of perinatal mortality without herds (p = 0.004); interval between deliveries greater than two years (p = 0.003); and reproductive seasonality, with presence of mares with irregular cycles in the herd (p = 0.041). This is the first record of herpesvirus infection in horses in the state of Pernambuco, Brazil. From the results obtained, it is suggested to adopt prophylactic measures directed to the identified risk factors, in order to reduce the occurrence of herpetic infection in the studied region.

ESTRATÉGIAS PARA A IDENTIFICAÇÃO DE ALTERAÇÕES UTERINAS EM CADELAS

As causas de infertilidade nas cadelas são variadas, pois a fertilidade exige normalidade no ciclo estral e um trato reprodutor saudável. Entre as causas de falhas reprodutivas podem ser citados os fatores inflamatórios e infecciosos, que muitas vezes se apresentam de forma subclínica. O objetivo deste trabalho foi investigar a associação entre agentes infecciosos e alterações histológicas e imuno-histoquímicas no útero de cadelas aparentemente hígidas. Para tanto, foram utilizadas 40 cadelas, provenientes de um projeto de castração ara controle de natalidade. Foram realizadas citologia vaginal, cultura uterina, morfohistologia uterina e ovariana, morfometria uterina, contagem de células inflamatórias endometriais e imuno-histoquímica para ciclooxigenase 2 (COX-2) dos fragmentos uterinos. Também foi realizado PCR e soroneutralização de swabs vaginais e oculares para detecção de Herpesvírus canino e teste de imunodifusão em gel de ágar para detecção de anticorpos contra Brucella canis. Foram utilizados para as análises as variáveis do histórico geral e reprodutivo e os resultados da PCR e sorologia para herpesvirus canino e Brucella canis, submetidos ao programa IBM SPSS para o estabelecimento de fatores de risco relacionados a detecção desses patógenos (p<0,05). A pesquisa de anticorpos para Brucella canis e PCR para Herpesvirus foi negativa para todos os animais presentes no estudo. A soroneutralização para herpesvírus mostrou resultados positivos em 67,5% (27/40) das cadelas, com titulação entre 2 e 32. Os resultados das avaliações histológicas uterinas demonstraram que metade das fêmeas apresentou algum tipo de alteração uterina. As afecções mais frequentes foram hiperplasia endometrial cística (40%; 8/20) e endometrite (70%; 14/20), sendo que alguns animais apresentavam afecções concomitantes. Foi observada diferença significativa entre as contagens de linfócitos (p<0.000001) e plasmócitos (p<0.0004) presentes na camada superficial do endométrio quando comparados os animais com afecções uterinas inflamatórias e animais púberes sem afecção. A imunomarcação para COX-2 foi mais mais acentuada e extensa nos quadros agudos, os quais maior número de neutrófilos em camada superficial de endométrio, edema e congestão foram verificados. Conclui-se que não houve associação entre os fatores de risco e os resultados da soroneutralização, e que a razão endométrio/miométrio uterina, a contagem de células inflamatórias infiltradas em endométrio uterino e a imunomarcação da COX-2 em endométrio canino se mostraram eficazes no auxílio do diagnóstico de afecções uterinas e na diferenciação entre alterações inflamatórias e não inflamatórias.

The cause of infertility in dogs are varied, since fertility requires normal oestrus cycle and a healthy reproductive tract. Among the causes of reproductive failure may be mentioned inflammatory and infectious factors, which often appear subclinically. The objective of this study was to to investigate the association between infectious agents and histological and immunohistochemical changes in the uterus of apparently healthy bitches. Bitches (n=40) from a birth control project were used. Vaginal cytology, uterine culture, ovarie and uterine morphology, uterine morphometry, endometrial immune cell counts, and cyclooxygenase 2 (COX-2) immunohistochemistry of the uterine fragments were performed. It was also performed PCR and seroneutralization of vaginal and ocular swabs for canine herpesvirus detection and agar gel immunodiffusion test for the detection of antibodies against Brucella canis. General and reproductive history variables were analyzed together with the results of canine herpesvirus and Brucella canis and submitted to the IBM SPSS program for the establishment of risk factors related to the detection of these pathogens (p<0.05). Antibody screening for Brucella spp and PCR for herpesvirus was negative for all animals in the study. Seroneutralization for herpesvirus showed positive results in 67.5% (27/40) of he bitches, with titration between 2 and 32. The results of histological uterine evaluations showed that half of the femeals had some type of uterine alteration. The most frequent diseases were cystic endometrial hyperplasia (40%, 8/20) and endometritis (70%, 14/20), and some animals had concomitant diseases. A significant difference was observed between lymphocyte counts (p <0.0000) and plasma cells (p <0.0004) present in the superficial layer of the endometrium when compared animals with inflammatory uterine conditions to pubertal animals without affection. The most marked and extensive COX-2 immunostaining occurred in the acute series, where a higher number of neutrophils in the superficial layer of the endometrium, edema and congestion were verified. It is concluded that there was no association between the risk factors and the serum neutralization results, and the endometrial / uterine myometrial ratio, the count of immune cells infiltrated in the uterine endometrium and the COX-2 immunostaining in the endometrium have been shown to be effective to diagnose uterine conditions and to differentiate inflammatory and non-inflammatory changes.