Inclusão da ractopamina na nutrição de peixes: revisão de literatura / Inclusion of ractopamine in fish nutrition: literature review / Inclusión de ractopamina en nutrición de peces: revisión de literatura

A demanda da população mundial por produtos aquáticos esta se incrementando, enquanto que a produção da pesca extrativa reduzindo, alcançando em muitos casos, seu máximo potencial produtivo. Como consequência, não será possível em curto prazo, sustentar o fornecimento de produtos aquáticos, direcionado a uma população que constantemente cresce e demanda pescados. O setor produtivo segue a tendência atual de outros sistemas de produção animal, os quais vêm buscando o aumento da produtividade, de maneira sustentável, do ponto de vista econômico e ambiental, requerendo, principalmente, o aporte da nutrição para contribuir com essa tendência. Os estudos com os aditivos adicionados a dieta dos animais de cativeiro é uma estratégia que tem demonstrado alto potencial para sua inclusão na aquicultura, havendo a possibilidade de um aumento nos índices produtivos e/ou melhora na qualidade do produto para o consumidor. A ractopamina é um aditivo classificado como um agonista beta-adrenérgico e seu mecanismo de ação esta associado com efeitos sobre o metabolismo dos peixes que diminuem o acúmulo de gorduras, por meio da inibição da lipogêneses e estimulo da lipólise, e por mecanismos que favorecem a síntese de proteínas muscular. Os estudos realizados até o momento comprovam que existem alterações metabólicas nos peixes, embora, não se tem encontrado, em todos os estudos, diferenças significativas nos índices zootécnicos, para assim, estabelecer seu uso na indústria. A realização de mais pesquisas é necessária para o melhor entendimento da ractopamina na alimentação dos peixes, sobretudo, no entendimento dos receptores e mecanismos de ação dos peixes.(AU)

The demand of the global population for aquatic products is increasing while the production of extractive fisheries is reducing, and, in many cases, even reaching its maximum productive potential. As a consequence, it will not be possible in the short term to sustain the supply of aquatic products aimed at a population in constant growth and in demand for fish. The productive sector follows the current trend of other animal production systems, which have been seeking to sustainably increase productivity from an economic and environmental point of view, mainly requiring the contribution of nutrition to this trend. Studies with additives to the diet of captive animals is a strategy that has shown high potential for inclusion in aquaculture, with the possibility of an increase in production rates and/or improvement in the quality of the product for the consumer. Ractopamine is an additive classified as a beta-adrenergic agonist and its mechanism of action is associated with effects on fish metabolism that reduce the accumulation of fats through the inhibition of lipogenesis and stimulation of lipolysis, and by mechanisms that favor the synthesis of muscle protein. The studies carried out so far prove that there are metabolic changes in fish, although no significant differences have been found in zootechnical indexes in order to establish its use in the industry. Further research is required for a better understanding of ractopamine in fish nutrition, especially in understanding the receptors and mechanisms of action in fish.(AU)

La demanda de la población mundial por productos acuáticos va en aumento, mientras que la producción de la pesca extractiva se reduce, alcanzando, en muchos casos, su máximo potencial productivo. Como consecuencia, no será posible en corto plazo sostener el suministro de productos acuáticos, dirigidos a una población que crece constantemente y demanda pescado. El sector productivo sigue la tendencia actual de otros sistemas de producción animal, que han venido buscando incrementar la productividad, de manera sostenible, desde el punto de vista económico y ambiental, requiriendo, principalmente, del aporte de la nutrición para contribuir a esa tendencia. Los estudios con aditivos agregados a la dieta de animales en cautiverio es una estrategia que ha mostrado un alto potencial para su inclusión en la acuicultura, con posibilidad de incremento en los índices de producción y/o mejora en la calidad del producto para el consumidor. La ractopamina es un aditivo clasificado como agonista beta-adrenérgico y su mecanismo de acción está asociado con efectos sobre el metabolismo de los peces que reducen la acumulación de grasas, a través de la inhibición de la lipogénesis y estimulación del lipólisis, y por mecanismos que favorecen la síntesis de proteínas musculares. Los estudios realizados hasta el momento prueban que existen cambios metabólicos en los peces, aunque en todos los estudios no se han encontrado diferencias significativas en los índices zootécnicos, con el fin de establecer su uso en la industria. Se necesita más investigación para comprender mejor la ractopamina en la nutrición de los peces, especialmente para comprender los receptores y los mecanismos de acción en los peces.(AU)

Refrigeração do sêmen da garoupa-verdadeira Epinephelus marginatus / Refrigerated storage of dusky grouper Epinephelus marginatus sperm

Foram estudados diferentes diluentes no processo de refrigeração do sêmen da garoupa-verdadeira. Inicialmente, a taxa e a duração da motilidade e a concentração espermática foram avaliadas, caracterizando a qualidade do sêmen fresco. Para os testes de refrigeração a 4ºC, diferentes diluentes foram testados em atmosfera normal e modificada (100% oxigênio). O sêmen fresco apresentou concentração espermática de 3,1±0,2 x 109 células mL-1, motilidade média de 90%, permanecendo móvel, em média, por 3.060 segundos. No experimento de refrigeração, a taxa e a duração média da motilidade foram mantidas adequadas durante 144 horas para o diluente A (70%; 3100 segundos) em atmosfera normal. Na atmosfera modificada, a qualidade do sêmen caiu drasticamente durante as primeiras 24 horas, independentemente do diluente empregado, não propiciando vantagem em sua utilização. A refrigeração do sêmen da garoupa-verdadeira permite manter por até 144 horas uma apropriada qualidade espermática.(AU)

This study aimed to evaluate different extenders in refrigerated storage of dusky grouper sperm. Initially, motility rate, motility time, and sperm density were analyzed to characterize the fresh sperm quality. Different diluents were used in the refrigerated storage sperm at 4ºC in normal atmosphere and modified atmosphere (100% oxygen). The fresh sperm has a spermatozoa density of 3.1±0.2 x 109 spermatozoa mL-1, motility rate 90% and motility time of 3,060 seconds. In the experiment of refrigerated storage, the motility rate and the motility time were maintained appropriate for 144 hours for the extender A (70%; 3,100 seconds) in normal atmosphere. In the modified atmosphere, the sperm quality decreased drastically during the first 24 hours, independently of the diluent used, not propitiating advantages. The refrigerated sperm of dusky grouper is a viable alternative for the short-term storage, being possible, to maintain for up to 144 hours an appropriate sperm viability.(AU)

Refrigeração do sêmen da garoupa-verdadeira Epinephelus marginatus / Refrigerated storage of dusky grouper Epinephelus marginatus sperm

Foram estudados diferentes diluentes no processo de refrigeração do sêmen da garoupa-verdadeira. Inicialmente, a taxa e a duração da motilidade e a concentração espermática foram avaliadas, caracterizando a qualidade do sêmen fresco. Para os testes de refrigeração a 4ºC, diferentes diluentes foram testados em atmosfera normal e modificada (100% oxigênio). O sêmen fresco apresentou concentração espermática de 3,1±0,2 x 109 células mL-1, motilidade média de 90%, permanecendo móvel, em média, por 3.060 segundos. No experimento de refrigeração, a taxa e a duração média da motilidade foram mantidas adequadas durante 144 horas para o diluente A (70%; 3100 segundos) em atmosfera normal. Na atmosfera modificada, a qualidade do sêmen caiu drasticamente durante as primeiras 24 horas, independentemente do diluente empregado, não propiciando vantagem em sua utilização. A refrigeração do sêmen da garoupa-verdadeira permite manter por até 144 horas uma apropriada qualidade espermática.(AU)

This study aimed to evaluate different extenders in refrigerated storage of dusky grouper sperm. Initially, motility rate, motility time, and sperm density were analyzed to characterize the fresh sperm quality. Different diluents were used in the refrigerated storage sperm at 4ºC in normal atmosphere and modified atmosphere (100% oxygen). The fresh sperm has a spermatozoa density of 3.1±0.2 x 109 spermatozoa mL-1, motility rate 90% and motility time of 3,060 seconds. In the experiment of refrigerated storage, the motility rate and the motility time were maintained appropriate for 144 hours for the extender A (70%; 3,100 seconds) in normal atmosphere. In the modified atmosphere, the sperm quality decreased drastically during the first 24 hours, independently of the diluent used, not propitiating advantages. The refrigerated sperm of dusky grouper is a viable alternative for the short-term storage, being possible, to maintain for up to 144 hours an appropriate sperm viability.(AU)

Estado atual da conservação a 4°C de tecidos somáticos derivados da pele em mamíferos / Current status of conservation at 4°C of somatic tissues derived from the skin in mammals

A clonagem por transferência nuclear de células somáticas consiste em uma atraente ferramenta para a conservação e multiplicação de espécies. A eficiência desta biotécnica depende da obtenção e seleção de células doadoras de núcleo derivadas da pele de indivíduos de interesse. Em alguns mamíferos encontrados em regiões de difícil acesso ou distantes de laboratórios especializados, o armazenamento a 4°C de tecidos somáticos da pele seria uma alternativa para a conservação do material genético desses animais. Contudo, o emprego desta técnica depende de alguns fatores, como os períodos e as condições de armazenamento a 4°C das amostras, os quais podem influenciar na recuperação das células após cultivo in vitro dos tecidos. Em mamíferos domésticos, estudos têm mostrado variações quanto ao período de estocagem e a presença de meio nutritivo. Já em mamíferos silvestres, apenas são relatados o uso da refrigeração como ferramenta de transporte em curto prazo. Assim, o objetivo desta revisão é apresentar as diferentes condições de armazenamento a 4°C de tecidos somáticos, evidenciando a importância dessa técnica para a conservação da biodiversidade.(AU)

Cloning by somatic cell nuclear transfer is an attractive tool for conservation and multiplication of species. The efficiency of this biotechnique depends on the obtaining and selection of nucleus donor cells derived from the skin of individuals of interest. In some mammals found in regions difficult to access or distant from specialized laboratories, the storage at 4°C of somatic tissues of the skin would be an alternative for the conservation of the genetic material of these animals. Nevertheless, the use of this technique depends on some factors, such as periods and storage conditions at 4°C of the samples, which may influence the recovery of the cells after tissue culture in vitro. In domestic mammals, studies have shown variations regarding the period of storage and the presence of nutrient medium. Already, in wild mammals, only is related the use of refrigeration as transportation tool in the short term. Thus, the aim of this review is to present the different conditions of storage at 4°C of somatic tissues, evidencing the importance of this technique for the conservation of biodiversity.(AU)

Estado atual da conservação a 4°C de tecidos somáticos derivados da pele em mamíferos / Current status of conservation at 4°C of somatic tissues derived from the skin in mammals

A clonagem por transferência nuclear de células somáticas consiste em uma atraente ferramenta para a conservação e multiplicação de espécies. A eficiência desta biotécnica depende da obtenção e seleção de células doadoras de núcleo derivadas da pele de indivíduos de interesse. Em alguns mamíferos encontrados em regiões de difícil acesso ou distantes de laboratórios especializados, o armazenamento a 4°C de tecidos somáticos da pele seria uma alternativa para a conservação do material genético desses animais. Contudo, o emprego desta técnica depende de alguns fatores, como os períodos e as condições de armazenamento a 4°C das amostras, os quais podem influenciar na recuperação das células após cultivo in vitro dos tecidos. Em mamíferos domésticos, estudos têm mostrado variações quanto ao período de estocagem e a presença de meio nutritivo. Já em mamíferos silvestres, apenas são relatados o uso da refrigeração como ferramenta de transporte em curto prazo. Assim, o objetivo desta revisão é apresentar as diferentes condições de armazenamento a 4°C de tecidos somáticos, evidenciando a importância dessa técnica para a conservação da biodiversidade.

Cloning by somatic cell nuclear transfer is an attractive tool for conservation and multiplication of species. The efficiency of this biotechnique depends on the obtaining and selection of nucleus donor cells derived from the skin of individuals of interest. In some mammals found in regions difficult to access or distant from specialized laboratories, the storage at 4°C of somatic tissues of the skin would be an alternative for the conservation of the genetic material of these animals. Nevertheless, the use of this technique depends on some factors, such as periods and storage conditions at 4°C of the samples, which may influence the recovery of the cells after tissue culture in vitro. In domestic mammals, studies have shown variations regarding the period of storage and the presence of nutrient medium. Already, in wild mammals, only is related the use of refrigeration as transportation tool in the short term. Thus, the aim of this review is to present the different conditions of storage at 4°C of somatic tissues, evidencing the importance of this technique for the conservation of biodiversity.

Isolamento e caracterização de Fibroblastos Associados ao Câncer provenientes de Mastocitomas caninos e sua influência sobre a malignidade de células neoplásicas: uma abordagem molecular, patológica e in vitro

Os mastocitomas cutâneos (MCTs) são neoplasias comuns em cães e são considerados potencialmente malignos. Diversas pesquisas tentaram identificar biomarcadores para melhor predizer o comportamento biológico deste tumor. Além disso, estudos envolvendo o cultivo primário de MCTs caninos podem ser uma ferramenta valiosa para a análise das propriedades funcionais das células. O objetivo deste estudo foi identificar vias moleculares ligadas a características de malignidade histopatológicas, menor tempo de sobrevida e pior prognóstico associados ao MCT. Além disso, objetivamos investigar o comportamento de mastócitos in vitro obtidos a partir de MCTs de diferentes graus histopatológicos e determinar o tipo de interação com os fibroblastos estromais. Realizamos análises de expressão gênica em MCTs únicos obtidos de 15 cães e identificamos dois subtipos distintos de tumor alto risco e baixo risco - associados a diferenças nos graus histológicos, tempos de sobrevida, índices Ki67 e ocorrência de morte devido a doença. Análises comparativas de perfis de sequência de RNA revelaram 71 genes diferencialmente expressos entre MCTs de alto e baixo risco. Ademais, examinamos redes de co-expressão gênica para explorar as funções biológicas dos genes identificados. A construção da rede revelou 63 módulos gênicos, dos quais 4 foram significativamente associados ao grupo mais agressivo. Dois dos módulos gênicos positivamente correlacionados com MCTs de alto risco também foram associados à proliferação celular e à matriz extracelular. No topo do módulo de matriz extracelular, foram identificados genes com funções diretamente relacionadas àqueles de fibroblastos associados ao câncer (CAFs). Análises imuno-histoquímicas também revelaram um maior número de CAFs em MCTs de alto risco. Os experimentos de cultivo foram feitos imediatamente após a ressecção cirúrgica e as células foram cultivadas em DMEM-F12 completo por 4 a 7 passagens. Os mastócitos foram evidenciados por coloração com Romanowsky e azul de toluidina com perda progressiva de seus grânulos em cultivo. A confirmação de fibroblastos como células aderentes foi feita por qRT-PCR para o gene da Proteína Específica de Fibroblastos 1 (FSP1). A caracterização dos fibroblastos cultivados como miofibroblastos foi realizada por imunofluorescência para -actina de músculo liso (SMA) e vimentina. A percentagem de células viáveis no sobrenadante foi determinada a cada passagem. Durante as 4-10 semanas de cultivo sem adição de fatores de crescimento ou citocinas, a população de mastócitos vivos diminuiu progressivamente e os fibroblastos e miofibroblastos continuam a crescer até a senescência. Amostras de MCTs de alto grau foram viáveis por períodos mais curtos (P =0.0442) e menor número de passagens (P <0.0001). Examinamos também os efeitos a curto prazo dos fibroblastos estromais na viabilidade dos mastócitos neoplásicos em diferentes condições de culturas. O contato célula-célula foi a melhor condição em que maior proporção de mastócitos neoplásicos permaneceu viável em comparação com todas as outras condições, isto é, utilizando-se de inserto e no cultivo de mastócitos isolados (P<0.05). Verificamos também que os mastócitos neoplásicos não ficam viáveis por mais de 4 dias na ausência de fibroblastos ou de seus fatores solúveis. Estes resultados indicam uma importante interação entre os mastócitos e os fibroblastos, que podem ocorrer no microambiente tumoral.

Mast cell tumours (MCTs) are common neoplasms in dogs and are considered potentially malignant. Several researches have attempted to identify biomarkers to better predict biological behavior for this tumor. In addition, studies with primary culture of canine MCTs coud be a valuable tool for the analysis of the cells functional properties. The objetive of this study was to identify molecular pathways connected to histopathological malignancies, shorter survival time and poor prognoses associated with MCTs. Moreover, we aimed to investigate the in vitro behavior of mast cells obtained from canine cutaneous MCTs of different histopathological grades and the type of interaction with the stromal fibroblasts. We performed genome-wide gene expression analyses on tissues obtained from 15 dogs with single MCTs, and identified two distinct tumour subtypes - high-risk and low-risk - associated with differences in histological grades, survival times, Ki67 indices, and occurrence of death due the disease. Comparative analyses of RNA sequence profiles revealed 71 genes that were differentially expressed between high and low-risk MCTs. In addition to these analyses, we examined gene co-expression networks to explore the biological functions of the identified genes. The network construction revealed 63 gene modules, 4 of which were significantly associated with the more aggressive tumour group. Two of the gene modules positively correlated with high-risk MCTs were also associated with cell proliferation and extracellular matrix-related terms. At the top of the extracellular matrix module category, genes with functions directly related to those of cancer-associated fibroblasts (CAFs) were identified. Immunohistochemical analyses also revealed a greater number of CAFs in high-risk MCTs. Culture experiments were made immediately after surgical resection and cells were cultured in complete DMEM-F12 for 4 to 7 passages. Mast cells was stained with Romanowsky and toluidine blue and showed progressive loss of their granules in culture. The presence of fibroblasts as adherent cells was confirmed by use of qRT-PCR for Fibroblast-specific Protein 1 (FSP1) gene. The characterization of cultured fibroblasts as myofibroblasts was performed by immunofluorescence for -smooth muscle-actin (SMA) and vimentin. The percentage of viable cells in the supernatant was determined in each passage. During 410 weeks of culture without any addition of growth factors or cytokines, living mast cell population decreased progressively and adherent fibroblasts and myofibroblasts continue to grow until senescence. High-grade MCTs samples were viable for shorter periods in culture (P=0.0442) and lower number of passages (P<0.0001). We also have examined the short-term effects of stroma fibroblasts on neoplastic mast cells in different cultures conditions. The cell-cell contact co-culture was the best condition in which canine neoplastic mast cells remained viable in highest proportion during the experiment compared to all other conditions, i.e. with the transwell condition and mast cells isolated cultures (P<0.05). We also found that isolated neoplastic mast cells are not viable for more than 4 days in the absence of fibroblasts or their soluble factors. These results indicate an important interaction between mast cells and fibroblasts, which may also occur in the tumor microenvirnomental setting.

Short-term movements and habitat preferences of sailfish, Istiophorus platypterus (Istiophoridae), along the southeast coast of Brazil

Pop-up satellite archival tags (PSATs) were deployed on four sailfish, Istiophorus platypterus, in the coastal waters of Rio de Janeiro State in southeast Brazil during January and February of 2009 (sailfish I and II) and between November 2010 and January 2011 (sailfish III and IV). The total number of days monitored (i.e., time that the tags remained attached) were 12 (sailfish I), 51 (sailfish II), 16 (sailfish III) and 43 days (sailfish IV). The results indicate a clear pattern of vertical habitat utilization with the majority of the time spent concentrated near the uniform sea surface layer occupying a relatively narrow temperature range. Despite the clear preference for epipelagic surface waters, sailfish regularly undertook vertical excursions into deeper waters (>50 m) within three to six hour intervals. "Most Probable Tracks" (estimated from raw geolocations using the state-space Kalman filter model) and linear displacements suggested that tagged sailfish did not move significant distances from the tagging site. In brief, our report provides information regarding the biology of sailfish in the southwestern Atlantic and how vertical distributions during the day and night are influenced by water temperature and how this information can improve sailfish stock assessments in southwestern Atlantic Ocean.(AU)

Quatro exemplares de agulhão-vela foram marcados com marcas eletrônicas monitoradas por satélite ('Pop-up satellite archival tags - PSATs') nas águas costeiras do Rio de Janeiro, sudeste do Brasil, durante janeiro e fevereiro de 2009 (agulhão-vela I e II) e entre novembro de 2010 e janeiro de 2011 (agulhão-vela III e IV). O número total de dias monitorados (ou seja, o tempo que as marcas permaneceram implantadas nos peixes) foram 12 (agulhão-vela I), 51 (agulhão-vela II), 16 (agulhão-vela III) e 43 dias (agulhão-vela IV). Os resultados demonstram um padrão claro de utilização do hábitat com a maior parte do tempo despendido predominantemente próximo à superfície do mar ocupando águas com uma faixa de temperatura restrita. Apesar da preferência por águas superficiais, os agulhões frequentemente realizaram mergulhos para águas mais profundas (ca. > 50 m) em intervalos de três a seis horas. A "rota mais provável" estimada a partir dos dados brutos de geolocalização e o modelo 'State-Space Kalman Filter' sugerem que os agulhões marcados não realizaram migrações significativas a partir do local de marcação. Em resumo, nossos resultados apresentam informações sobre a biologia da espécie no Atlântico Sudoeste e como as migrações verticais durante o dia e a noite são influenciadas pela temperatura da água e como essa informação pode auxiliar as avaliações de estoques de agulhão-vela no sudoeste do Atlântico.(AU)

Determinação de áreas propícias para o desenvolvimento responsável da produção do Bijupirá em tanques redes na região sul do estado do Rio de Janeiro.

As projeções indicam que a demanda global por pescado irá atingir até 187 milhões de toneladas, com a produção aquícola igualando a produção pesqueira global. O uso de ecossistemas costeiros e mar aberto aumentará substancialmente, colocando ainda mais as pressões ambientais sobre a natureza, produtos e serviços. Intervenções com objetivos de curto prazo e limites geopolíticos, sem prestar atenção suficiente para outros critérios-chave para o sucesso da atividade normalmente resultam em desenvolvimento e sustentabilidade limitadas. No litoral sul do Rio de Janeiro o cultivo do bijupirá, vem despontando como uma atividade com grande potencial. Apesar dos bons resultados obtidos até o momento ainda existem diversas questões primordiais para o desenvolvimento sustentável da atividade, entre eles técnicas de manejo, a falta de regulamentação e a oposição a atividade centrada na percepção equivocada do seu potencial poluidor, sendo estes apenas alguns dos desafios que precisam ser superados. Este estudo buscou substituir as práticas de manejo não sustentáveis utilizadas atualmente, gerando bases de compreensão aos produtores; avaliar os possíveis impactos do cultivo do bijupirá em tanques-rede próximo à costa; formular um modelo preditivo de deposição e dispersão e apresentar uma metodologia que para definir zonas para aquicultura marinha e consequentemente selecionar as áreas mais adequadas contribuindo assim com o desenvolvimento responsável da piscicultura marinha no litoral sul fluminense. Não foram verificados efeitos negativos na performance produtiva e foi registrada uma melhoria da eficiência ambiental na substituição do uso das dietas úmida regularmente utilizadas, sendo essa metodologia utilizada capaz de demonstrar aos produtores os benefícios da substituição de dietas úmidas. Em relação aos impactos ambientais dos cultivos, os efeitos da descarga de nutrientes na qualidade de água e suas complicações secundárias são mínimas e se mantiveram dentro dos parâmetros normais do ambiente e limites legais vigentes no Brasil. No sedimento os impactos também foram mínimos, não foram registrados acúmulos de COT e nem alterações nas comunidades. A sedimentação foi mais concentrada abaixo dos tanques e as taxas máximas de deposição de M.O e COT verificadas in situ e previstas no modelo, foram caracterizadas como de baixo impacto. O total de áreas identificadas como adequadas e muito adequadas é suficiente para garantir a implantação e expansão do cultivo de peixes marinhos no litoral sul do Rio de Janeiro. Para melhor aplicação de diretrizes sustentáveis, se sugere a adoção de áreas de produção limitadas, baseadas especialmente na capacidade de suporte produtiva.

Projections indicate that global demand for fish will reach up to 187 million tonnes, with aquaculture equaling global fish production. The use of coastal and open ocean ecosystems will increase substantially, further placing environmental pressures on nature, products and services. Interventions with short-term objectives and geopolitical boundaries, without paying sufficient attention to other key criteria for the success of the activity, usually result in limited development and sustainability. On the southern coast of Rio de Janeiro, cobia cage culture has been emerging as an activity with great potential. Despite the good results obtained so far, there are still several key issues for the sustainable development of the activity, including management techniques, lack of regulation and opposition to activity focused on the misperception of its potential polluter, these being only some of the challenges that need to be overcome. This study sought to replace the unsustainable management practices currently used, providing bases of understanding for the producers; to evaluate the possible impacts of cobia ongrowing near the coast; to formulate predictives deposition and dispersion models and to present a methodology that to define areas for marine aquaculture and consequently to select the most appropriate areas, thus contributing to the responsible development of the marine fish culture on the south coast of Rio de Janeiro. There were no negative effects on the productive performance and there was an improvement in the environmental efficiency in the substitution of the use of the regularly used wet diets, being this methodology able to demonstrate to the producers the benefits of its replacement. Regarding the environmental impacts of crops, the effects of nutrient discharges on water quality and their secondary complications are minimal and have remained within normal environmental parameters and legal limits in Brazil. In the sediment the impacts were also minimal, there were no accumulations of TOC and no changes in the communities. Sedimentation was more concentrated below the tanks and the maximum deposition rates of M.O and TOC verified in situ and predicted in the model were characterized as low impact. The total number of areas identified as suitable and most suitable is enough to guarantee the implantation and expansion of marine fish culture on the southern coast of Rio de Janeiro. For the better application of sustainable guidelines, the adoption of limited production areas, especially based on the carrying capacity, is suggested.

Congelação lenta de tecido ovariano ovino utilizando 1, 2- propanodiol (PROH) seguida de incubação de curta duração / Sheep ovarian tissue slow freezing using 1, 2-propanediol (PROH) as cryoprotectant followed by short-term in vitro culture

A criopreservação de tecido ovariano tem como principal objetivo, a manutenção deste tecido para sua posterior utilização, garantindo a preservação do material biológico de fêmeas de animais de alto valor genético. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivos definir protocolo ótimo para criopreservação de tecido ovariano ovino utilizando PROH como agente crioprotetor e avaliar a resposta do tecido criopreservado incubado in vitro por curtos períodos. Para tanto, o tecido ovariano foi exposto (5, 10 ou 20 minutos) e/ou congelado utilizando PROH em duas diferentes concentrações (1,0 ou 1,5M). Em seguida, após a definição do protocolo mais adequado, realizouse a incubação deste tecido por 2 ou 4 horas. Em ambas as etapas, o tecido ovariano foi avaliado por Histologia Clássica ou viabilidade por inclusão em Azul de Tripan. Verificou-se que a exposição por 5 minutos seguida de criopresevação do tecido em solução de 1,5 M de PROH garantiu percentual de folículos viáveis significativamente semelhantes ao tecido fresco (P<0,05). Em seguida, o tecido congelado nessas condições foi cultivado por 2 ou 4 horas. Tal procedimento demonstrou que, com o decorrer do cultivo, os folículos sofrem perda gradual de sua normalidade morfológica em comparação ao tecido fresco, o que foi confirmado pela análise de viabilidade (P<0,05). Assim, o presente trabalho conclui que é possível congelar eficientemente o tecido ovariano ovino utilizando 1,5 M de PROH e exposição por 5 minutos e, que ocorre uma redução gradual na qualidade folicular do tecido criopreservado e submetido a curtos períodos de incubação.

Ovarian tissue cryopreservation aims to maintain the tissue for later use, ensuring the preservation of biologic material from women and high genetic valuable animals. In this context, this work aimed to define an optimum sheep ovarian tissue cryopreservation protocol using PROH as crioprotectant and to evaluate the responsiveness of cryopreservated tissue to a short-term in vitro culture. Then, the ovarian tisse was exposed (5, 10 or 30 minutes) and/or cryopreservated using PROH (1,0 or 1,5M). After the definition of the most appropriate protocol, the tissue was cultures for 2 or 4 hours. In both stages, ovarian tissue was evaluated by Classic Histology and viability using Trypan blue staining. We observed that the exposure for 5 minutes followed by cryopreservation in 1,5M PROH maintained similar percentages of viable follicles than fresh tissue (P<0,05). Thereafter, cryopreserved tissue was cultured for 2 or 4 hours. This procedure showed that, as in vitro culture goes on, follicles suffer gradual loss in their morphology, what was confirmed by viability analysis (P<0,05) Thus, this work concludes that is possible to properly cryopreservate sheep ovarian tissue using 1,5M PROH and 5 minutes exposure. Moreover, it occurs a gradual quality reduction of follicles obtained from short-term cultured tissue after cryopreservation procedure.

Congelação lenta de tecido ovariano ovino utilizando 1, 2- propanodiol (PROH) seguida de incubação de curta duração / Sheep ovarian tissue slow freezing using 1, 2-propanediol (PROH) as cryoprotectant followed by short-term in vitro culture

A criopreservação de tecido ovariano tem como principal objetivo, a manutenção deste tecido para sua posterior utilização, garantindo a preservação do material biológico de fêmeas de animais de alto valor genético. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivos definir protocolo ótimo para criopreservação de tecido ovariano ovino utilizando PROH como agente crioprotetor e avaliar a resposta do tecido criopreservado incubado in vitro por curtos períodos. Para tanto, o tecido ovariano foi exposto (5, 10 ou 20 minutos) e/ou congelado utilizando PROH em duas diferentes concentrações (1,0 ou 1,5M). Em seguida, após a definição do protocolo mais adequado, realizouse a incubação deste tecido por 2 ou 4 horas. Em ambas as etapas, o tecido ovariano foi avaliado por Histologia Clássica ou viabilidade por inclusão em Azul de Tripan. Verificou-se que a exposição por 5 minutos seguida de criopresevação do tecido em solução de 1,5 M de PROH garantiu percentual de folículos viáveis significativamente semelhantes ao tecido fresco (P<0,05). Em seguida, o tecido congelado nessas condições foi cultivado por 2 ou 4 horas. Tal procedimento demonstrou que, com o decorrer do cultivo, os folículos sofrem perda gradual de sua normalidade morfológica em comparação ao tecido fresco, o que foi confirmado pela análise de viabilidade (P<0,05). Assim, o presente trabalho conclui que é possível congelar eficientemente o tecido ovariano ovino utilizando 1,5 M de PROH e exposição por 5 minutos e, que ocorre uma redução gradual na qualidade folicular do tecido criopreservado e submetido a curtos períodos de incubação.(AU)

Ovarian tissue cryopreservation aims to maintain the tissue for later use, ensuring the preservation of biologic material from women and high genetic valuable animals. In this context, this work aimed to define an optimum sheep ovarian tissue cryopreservation protocol using PROH as crioprotectant and to evaluate the responsiveness of cryopreservated tissue to a short-term in vitro culture. Then, the ovarian tisse was exposed (5, 10 or 30 minutes) and/or cryopreservated using PROH (1,0 or 1,5M). After the definition of the most appropriate protocol, the tissue was cultures for 2 or 4 hours. In both stages, ovarian tissue was evaluated by Classic Histology and viability using Trypan blue staining. We observed that the exposure for 5 minutes followed by cryopreservation in 1,5M PROH maintained similar percentages of viable follicles than fresh tissue (P<0,05). Thereafter, cryopreserved tissue was cultured for 2 or 4 hours. This procedure showed that, as in vitro culture goes on, follicles suffer gradual loss in their morphology, what was confirmed by viability analysis (P<0,05) Thus, this work concludes that is possible to properly cryopreservate sheep ovarian tissue using 1,5M PROH and 5 minutes exposure. Moreover, it occurs a gradual quality reduction of follicles obtained from short-term cultured tissue after cryopreservation procedure.(AU)

Desempenho e viabilidade econômica do tambaqui (Colossoma macropomum, Cuvier 1818) da segunda geração geneticamente melhorada para ganho de peso

O tambaqui é uma das espécies mais produzidas na piscicultura brasileira e isso impulsionou o desenvolvimento de novas tecnologias para aumentar sua produtividade no setor produtivo. O melhoramento genético vem como forma de se elevar o ganho genético ao longo das gerações de seleção, uma vez que o ganho é permanente, e dessa forma proporcionando maior eficiência produtiva na criação. Objetivou-se com esse trabalho avaliar o desempenho e viabilidade econômica do tambaqui de duas famílias (A e B) da segunda geração do programa de melhoramento genético para ganho de peso em sistema semi-intensivo de criação e avaliar a viabilidade econômica desses animais em uma produção comercial. Os peixes foram individualizados com microchips e estocados em dois tanques escavados durante 270 dias de cultivo. Foram realizadas biometrias mensais para avaliações de indicadores zootécnicos, características morfométricas, desempenho econômico e comparações entre as unidades experimentais (ambientes). O delineamento experimental empregado foi o em blocos casualizado em arranjo fatorial 2x2 e as comparações entre as famílias e os ambientes foram realizadas pelo teste de Tukey (5%). Simulações considerando os indicadores zootécnicos e econômicos foram projetadas em uma piscicultura comercial com 10 ha de lâmina dágua. Ao final dos 270 dias de cultivo foi constatada que os peixes da família B apresentaram maior crescimento morfométrico e desempenho em relação aos da família A, como maior comprimento total (43,95 ± 0,11), peso final (1756,12±19,32) e ganho de peso (1615,73±17,95). O ambiente 2 propiciou melhores condições de criação para os peixes das duas famílias avaliadas, que apresentaram maior crescimento morfométrico, melhor conversão alimentar (1,86) e desempenho, como ganho de peso (1762,99±15,57) em relação aos peixes cultivados no ambiente 1. Com relação ao custo de produção, foi determinado ciclo de criação de 10 meses com os seguintes indicadores zootécnicos para os peixes da família A, família B, ambiente 1 e ambiente 2, respectivamente: taxa de mortalidade de 17%, 12%, 14% e 15%; peso médio final de 1,709 kg, 1,762 kg, 1,539 kg e 1,937 kg; biomassa de estocagem final 0,562, 0,623, 0,531 e 0,655 kg m-2. O preço médio de venda praticado foi de R$ 5,00kg-1, sendo suficiente para cobrir os custos operacionais da produção dos peixes da família A (R$ 4,92 kg-1), família B (R$ 4,78 kg-1) e ambas no ambiente 2 (R$ 4,62 kg-1), demonstrando que a piscicultura nessas condições consegue se manter a curto prazo na atividade. A análise de sensibilidade com alguns cenários favoráveis demonstrou que em determinadas situações a piscicultura apresentou-se viável economicamente em longo prazo.

Tambaqui is one of the most produced species in Brazilian fish farming and this has boosted the development of new technologies to increase its productivity in the productive sector. Genetic improvement comes as a way to raise the genetic gain over the selection generations, since the gain is permanent, and thus providing greater productive efficiency in the breeding. The objective of this work was to evaluate the performance and economic viability of the two-family tambaqui (A and B) of the second generation of the breeding program for semi-intensive breeding and evaluate the economic viability of these animals in a Commercial production. The fish were individualized with microchips and stored in two tanks excavated during 270 days of culture. Monthly biometrics was used to evaluate zootechnical indicators, morphometric characteristics, economic performance and comparisons between experimental units (environments). The experimental design was a randomized block design in a 2x2 factorial arrangement and the comparisons between the families and the environments were performed using the Tukey test (5%). Simulations considering the zootechnical and economic indicators were projected in a commercial fish farm with 10 ha of water depth. At the end of the 270 days of cultivation, it was observed that the fish of the family B showed higher morphometric growth and performance than those of family A, such as larger total length (43.95 ± 0.11), final weight (1756.12 ± 19, 32) and weight gain (1615.73 ± 17.95). Environment 2 provided better breeding conditions for fish of the two families evaluated, which presented higher morphometric growth, better feed conversion (1.86) and performance, as weight gain (1762.99 ± 15.57) in relation to fish Cultivated in the environment 1. With respect to the cost of production, a breeding cycle of 10 months was determined with the following zootechnical indicators for fish of family A, family B, environment 1 and environment 2, respectively: mortality rate of 17% 12%, 14% and 15%; Final average weight of 1.709 kg, 1.762 kg, 1.539 kg and 1.937 kg; Final stock biomass 0.562, 0.623, 0.531 and 0.655 kg m-2. The average selling price was R $ 5.00kg-1, being enough to cover the operational costs of the production of the fish family A (R $ 4.92 kg-1), family B (R $ 4.78 kg -1) and both in environment 2 (R $ 4.62 kg-1), demonstrating that fish farming under these conditions can remain in the short term in the activity. Sensitivity analysis with some favorable scenarios has shown that in some situations fish farming was economically feasible in the long term.

Occurrence of freemartinism in Santa Ines sheep / Ocorrência de freemartinismo em ovino Santa Inês

This study reports a case of freemartinism of the XX/XY chimera type in a Santa Ines sheep belonging to a property in northeastern Para, Brazil. Discrete masculinization and external genitalia presenting a pseudoprepuce with a hypoplastic penis were observed in vivo. Anatomopathological examination of the internal genitalia showed the absence of a cervix and bilateral presence of an ovary and testis. Variable degrees of epididymal development, accompanied by agenesis of the deferent ducts and other structures arising from the mesonephric ducts, were also observed. Follicular structures, a uterine tubular portion, with marked agenesis and aplasia of the uterine tubes and in some portions of the horns, as well as other parts of paramesonephric structures, were noted in the ovaries. Blood was collected for karyotype analysis and 10 metaphases obtained by short-term lymphocyte culture were examined. Two cell lines were identified: 54,XX (5 cells) and 54,XY (5 cells).

Relata-se um caso de freemartinismo do tipo quimera XX/XY em ovino da raça Santa Inês, proveniente de uma propriedade no Nordeste Paraense (Brasil). In vivo observou-se masculinização discreta, genitália externa apresentando um pseudo-prepúcio com pênis hipoplásico. No exame anatomopatológico verificou-se na genitália interna a ausência de cérvix, ocorrência bilateral de ovário e testículo. Também se observou graus variáveis de desenvolvimento do epidídimo, com considerável agenesia dos ductos deferentes e outras estruturas provenientes dos ductos mesonéfricos. Nos ovários visibilizou-se estruturas foliculares, porção tubular uterina, com maior agenesia e aplasia das tubas uterinas e em algumas porções dos cornos, igualmente como outras partes das estruturas paramesonéfricas. A partir do sangue foi realizado a analise do cariótipo pela analise de dez metáfases, obtidas por cultura temporária de linfócitos, verificando a presença de duas linhagem celulares, sendo 54,XX (5 células) e outra 54,XY (5 células).

Ocorrência de freemartinismo em ovino Santa Inês / Occurrence of freemartinism in Santa Ines sheep

This study reports a case of freemartinism of the XX/XY chimera type in a Santa Ines sheep belonging to a property in northeastern Para, Brazil. Discrete masculinization and external genitalia presenting a pseudoprepuce with a hypoplastic penis were observed in vivo. Anatomopathological examination of the internal genitalia showed the absence of a cervix and bilateral presence of an ovary and testis. Variable degrees of epididymal development, accompanied by agenesis of the deferent ducts and other structures arising from the mesonephric ducts, were also observed. Follicular structures, a uterine tubular portion, with marked agenesis and aplasia of the uterine tubes and in some portions of the horns, as well as other parts of paramesonephric structures, were noted in the ovaries. Blood was collected for karyotype analysis and 10 metaphases obtained by short-term lymphocyte culture were examined. Two cell lines were identified: 54,XX (5 cells) and 54,XY (5 cells).(AU)

Relata-se um caso de freemartinismo do tipo quimera XX/XY em ovino da raça Santa Inês, proveniente de uma propriedade no Nordeste Paraense (Brasil). In vivo observou-se masculinização discreta, genitália externa apresentando um pseudo-prepúcio com pênis hipoplásico. No exame anatomopatológico verificou-se na genitália interna a ausência de cérvix, ocorrência bilateral de ovário e testículo. Também se observou graus variáveis de desenvolvimento do epidídimo, com considerável agenesia dos ductos deferentes e outras estruturas provenientes dos ductos mesonéfricos. Nos ovários visibilizou-se estruturas foliculares, porção tubular uterina, com maior agenesia e aplasia das tubas uterinas e em algumas porções dos cornos, igualmente como outras partes das estruturas paramesonéfricas. A partir do sangue foi realizado a analise do cariótipo pela analise de dez metáfases, obtidas por cultura temporária de linfócitos, verificando a presença de duas linhagem celulares, sendo 54,XX (5 células) e outra 54,XY (5 células).(AU)

Prebióticos em dietas para tilapias do Nilo

A expansão do cultivo da tilápia-do-Nilo (Oreochromis niloticus) no mundo, ocorreu em função de diversos fatores tais como uma grande produção de alevinos machos, a inclusão do cultivo em tanques-rede. No Brasil a piscicultura como atividade econômica é recente, embora o Brasil apresente um dos maiores potenciais hídricos do mundo para a aquicultura, por possuir recursos hídricos abundantes, grande extensão territorial e tem grande parte do território localizado em ambiente tropical (NOGUEIRA, 2007). Um desafio para a criação de tilápias é a necessidade de redução dos custos de produção (OLIVEIRA, 2009). Com os sucessivos aumentos dos preços dos insumos agropecuários, estudos vêem sendo desenvolvidos para avaliação de alternativas, que aumentem a sustentabilidade da atividade (HISANO et al., 2008). Os prebióticos vêm sendo utilizados como alternativa aos promotores de crescimento, em animais jovens ou em iminente risco de estresse, com o objetivo de manter o equilíbrio benéfico da microbiota intestinal, melhorando as condições luminais do TGI, do sistema imune e em alguns casos, pela melhora no desempenho do animal (SILVA; NORNBERG, 2003). Um dos mais importantes prebióticos que tem sido pesquisado em todo o mundo é o MOS (mananoligossacarídeo), que consiste em fragmentos de parede celular de Saccharomyces cerevisiae eficaz na aglutinação de bactérias patogênicas, impedindo a colonização e proliferação destas populações no intestino e mudando a estrutura do intestino. O objetivo deste trabalho foi verificar a resposta do uso de mananoligossacarideo na dieta de Tilapias-do-Nilo. Foram avaliados alevinos e juvenis de tilápias do Nilo, com dietas contendo mananoligossacarídeo, onde foi avaliado desempenho zootécnico, hematologia e morfometria intestinal para verificar as mudanças proporcionada pelo prebiótico a morfometria intestinal. O uso de mananoligossacarideo em dietas para tilápias apresenta ainda resultados inconsistentes, carecendo de mais estudos que visem avaliar novos produtos industriais, assim como outras concentrações nas dietas, que sejam viáveis técnica e economicamente e que tragam resposta no desempenho zootécnico dos animais. Alterações morfométricas das vilosidades intestinais não parecem ser marcadores eficazes para a avaliação de resposta morfológica intestinal dos peixes ao prebiótico, devendo ser buscados novos marcadores, que possibilitem uma avaliação da ação dos produtos testados em curto prazo.

The expansion of cultivation of Nile tilapia (Oreochromis niloticus) in the world, was due to several factors such as a large production of fingerlings males, the inclusion of culture in cages. In Brazil fish farming as an economic activity is recent, although Brazil has one of the largest the world's water potential for aquaculture, because it has abundant water resources, large territory and has much of the territory located in tropical environment (Nogueira, 2007). A challenge for raising tilapia is the need to reduce production costs (OLIVEIRA, 2009). With the successive increases in the prices of agricultural inputs, studies have been developed for evaluation of alternatives that increase the sustainability of the activity (Hisano et al., 2008). Prebiotics have been used as an alternative to growth promoters in young animals or in imminent danger of stress, with the purpose of maintaining a beneficial balance of intestinal microflora, improving the luminal conditions TGI, immune system and in some cases, by improvement in animal performance (SILVA; Nörnberg, 2003). One of the most important prebiotics which have been researched around the world is a MOS (mannanoligosaccharide), consisting of cell wall fragments of Saccharomyces effective cerevisiae in agglutination pathogenic bacteria, preventing the colonization and proliferation of these populations in the gut and changing the structure bowel. The objective of this study was to determine the response of the use of mannan oligosaccharides in diet Tilapias-the-Nile. They were evaluated fry and juveniles of Nile tilapia diets containing mannan oligosaccharides, which was evaluated growth performance, hematology and intestinal morphology to verify the change provided by prebiotic intestinal morphology. The use of mannan oligosaccharides in diets for tilapia also presents inconsistent results and would require more studies aimed at evaluating new industrial products, as well as other concentrations in diets that are technically and economically viable and to bring answers on the performance of the animals. Morphometric changes of the intestinal villi do not seem to be effective markers for evaluating intestinal morphological response of fish to the prebiotics and should be new markers sought that enable an evaluation of the action of short-term products tested, without the need for evaluation of a production cycle animal.

Long-term maintenance of in vitro cultures affects growth and secondary metabolism of St. John's Wort

Hypericum perforatum is a traditional medicinal plant with wound healing and antidepressant properties. Efficiency of micropropagation is often related to the long term maintenance of tissues in culture, which may alter the secondary metabolism of plants. The objective of this study was to evaluate growth and secondary metabolism of in vitro shoots of H. perforatum on short and long term maintenance of cultures (30 and 100 days). The effect of BA and NAA supplementation was evaluated during 30 days of culture. Adventitious shoots were cultivated on MS medium supplemented with 4.4mM BA alone or in combination with 0.05mM NAA for 30 days. A hormone-free medium was used as control. Shoots cultivated for 100 days were maintained in presence of 4.4mM BA. Biomass, multiplication of shoots, contents of phenolic compounds, flavonoids and hypericin were evaluated. No difference between BA and BA+NAA was observed on growth, multiplication of shoots and levels of flavonoids at the end of 30 days of culture. Production of phenolic compounds was promoted by addition of BA+NAA to the medium, whereas hypericin was increased by the presence of BA. The time of culture (30 and 100 days) affected all the parameters analyzed, except the levels of flavonoids in the short term experiment.

Hypericum perforatum é uma planta medicinal que apresenta propriedades cicatrizante e antidepressiva. Frequentemente, a eficiência da micropropagação está relacionada à manutenção dos tecidos em cultura por longos períodos, o que pode alterar o metabolismo secundário das plantas. O objetivo deste trabalho foi avaliar o crescimento e o metabolismo secundário de brotações adventícias de H. perforatum mantidas por diferentes tempos de cultivo (30 e 100 dias). O efeito da adição de BA e ANA foi avaliado no período de 30 dias. As brotações foram cultivadas em meio MS suplementado com 4,4mM BA como único regulador ou em combinação com 0,05mM ANA, por 30 dias. Um meio de cultivo sem adição de reguladores foi utilizado como controle. As brotações cultivadas por 100 dias foram mantidas em presença de 4,4mM BA. A biomassa, a multiplicação dos brotos, as concentrações de compostos fenólicos, flavonoides e hipericina foram os parâmetros avaliados. Nenhuma diferença entre a adição de BA ou BA+ANA foi observada quanto ao crescimento, ao número de brotos e aos níveis de flavonoides ao final de 30 dias de cultivo. Diferenças neste período foram detectadas nos níveis de compostos fenólicos e de hipericina quando os brotos foram cultivados em presença de BA+NAA e de BA, respectivamente. O tempo de cultivo (30 e 100 dias) afetou todos os parâmetros avaliados, com exceção dos níveis de flavonoides no período de 30 dias.

Long-term maintenance of in vitro cultures affects growth and secondary metabolism of St. John's Wort

Hypericum perforatum is a traditional medicinal plant with wound healing and antidepressant properties. Efficiency of micropropagation is often related to the long term maintenance of tissues in culture, which may alter the secondary metabolism of plants. The objective of this study was to evaluate growth and secondary metabolism of in vitro shoots of H. perforatum on short and long term maintenance of cultures (30 and 100 days). The effect of BA and NAA supplementation was evaluated during 30 days of culture. Adventitious shoots were cultivated on MS medium supplemented with 4.4mM BA alone or in combination with 0.05mM NAA for 30 days. A hormone-free medium was used as control. Shoots cultivated for 100 days were maintained in presence of 4.4mM BA. Biomass, multiplication of shoots, contents of phenolic compounds, flavonoids and hypericin were evaluated. No difference between BA and BA+NAA was observed on growth, multiplication of shoots and levels of flavonoids at the end of 30 days of culture. Production of phenolic compounds was promoted by addition of BA+NAA to the medium, whereas hypericin was increased by the presence of BA. The time of culture (30 and 100 days) affected all the parameters analyzed, except the levels of flavonoids in the short term experiment.

Hypericum perforatum é uma planta medicinal que apresenta propriedades cicatrizante e antidepressiva. Frequentemente, a eficiência da micropropagação está relacionada à manutenção dos tecidos em cultura por longos períodos, o que pode alterar o metabolismo secundário das plantas. O objetivo deste trabalho foi avaliar o crescimento e o metabolismo secundário de brotações adventícias de H. perforatum mantidas por diferentes tempos de cultivo (30 e 100 dias). O efeito da adição de BA e ANA foi avaliado no período de 30 dias. As brotações foram cultivadas em meio MS suplementado com 4,4mM BA como único regulador ou em combinação com 0,05mM ANA, por 30 dias. Um meio de cultivo sem adição de reguladores foi utilizado como controle. As brotações cultivadas por 100 dias foram mantidas em presença de 4,4mM BA. A biomassa, a multiplicação dos brotos, as concentrações de compostos fenólicos, flavonoides e hipericina foram os parâmetros avaliados. Nenhuma diferença entre a adição de BA ou BA+ANA foi observada quanto ao crescimento, ao número de brotos e aos níveis de flavonoides ao final de 30 dias de cultivo. Diferenças neste período foram detectadas nos níveis de compostos fenólicos e de hipericina quando os brotos foram cultivados em presença de BA+NAA e de BA, respectivamente. O tempo de cultivo (30 e 100 dias) afetou todos os parâmetros avaliados, com exceção dos níveis de flavonoides no período de 30 dias.

VITRIFICAÇÃO E CULTIVO IN VITRO DE FOLÍCULOS SECUNDÁRIOS OVINOS: UMA ALTERNATIVA PARA A PRESERVAÇÃO DA FUNÇÃO REPRODUTIVA DE FÊMEAS

A criopreservação de folículos pré-antrais presentes no tecido ovariano (TO) tem sido utilizada com sucesso para restaurar a função reprodutiva após transplante, principalmente em mulheres submetidas a tratamentos gonadotóxicos. No entanto, o transplante do TO pode promover a reintrodução de células cancerosas. Desta forma, a utilização de folículos secundários (FS) (folículos pré-antrais em desenvolvimento) isolados do TO pode ser uma alternativa para evitar esse inconveniente. O principal objetivo desta tese foi identificar a melhor forma (isolada ou inclusa no TO) de vitrificação de FS ovinos para posterior cultivo in vitro e obtenção de oócitos maduros, visando à produção in vitro de embriões. Para isso, os FS foram avaliados in vitro após vitrificação em três diferentes fases: Fase I: Vitrificação de FS inclusos ou isolados do TO seguido de cultivo in vitro de curta duração (6 dias); Fase II: Vitrificação de FS inclusos ou isolado do TO seguido de cultivo in vitro de longa duração (18 dias) e maturação in vitro (MIV) e Fase III: Uso de diferentes meios (-MEM ou TCM199) para o cultivo in vitro de FS vitrificados inclusos ou isolados do TO, MIV e expressão gênica de CX37, CX43, BAX e BCL2. Os dados foram submetidos ao teste de normalidade de Bartletts e/ou Shapiro-Wilke, as médias comparadas pelo teste de Tuckey e/ou Students Newman Keuls, variáveis discretas ao Qui quadrado ou ao teste exato de Fisher, todos a uma probabilidade de erro menor que 5%. Na Fase I, observamos que FS vitrificados na forma isolada foram capazes de crescer, semelhantemente aos folículos frescos (P<0,05). Além disso, parâmetros como a morfologia, ultraestrutura, viabilidade, proliferação celular e percentual de formação de antro foram similares (P<0,05) entre os folículos vitrificados isolados ou inclusos no TO. Na Fase II, oócitos oriundos de folículos vitrificados na forma isolada retomaram a meiose a atingiram metáfase I (MI) semelhante aos folículos frescos ou não vitrificados (P>0,05). Na Fase III, observou-se que o meio -MEM foi fundamental para a retomada da meiose e metáfase II (MII). A expressão gênica para BAX e CX37 foi observada apenas nos folículos frescos cultivados em -MEM ou em TCM199. Já para o BCL2 a expressão foi significativamente superior nos folículos vitrificados no TO, cultivados em ambos os meios comparados aos demais folículos. Com relação à CX43, a expressão nos folículos frescos foi superior a dos vitrificados. Conclui-se que: 1) FS podem ser vitrificados com êxito antes ou depois do isolamento do TO, sem prejuízos para a morfologia e capacidade de formar antro após cultivo in vitro por 6 dias. No entanto, a ultraestrutura de folículos vitrificados é mais comprometida do que folículos frescos; 2) Oócitos provenientes de FS vitrificados na forma isolada e, cultivados in vitro por 18 dias se desenvolveram até o estágio de MI; 3) Ao final da MIV, o diâmetro oocitário não foi afetado pela vitrificação folicular ou meio utilizado; 4) Oócitos maturados in vitro provenientes de folículos vitrificados na x forma isolada e cultivados in vitro em -MEM se desenvolveram até o estágio de MII e 5) A expressão gênica foi afetada pela vitrificação.

The cryopreservation of preantral follicles enclosed in ovarian tissue (OT) has been applied successfully for the restoration of the ovarian function after transplantation mainly in women submitted to gonadotoxic treatments. However, the transplantation of the OT could cause reintroduction of cancerous cells. In this way, the utilization of secondary follicles (SF) (growing preantral follicles) isolated of the OT could be an alternative to avoid this bias. Therefore, the goal of this dissertation was to identify which is the best way (enclosed or denuded of OT) to vitrify ovine SF thereafter in vitro culture (IVC) and promotion of mature oocytes, aiming produce embryos in vitro. Thereby, the evaluation of SF from IVC after vitrification occurred in three different phases: Phase I: Vitrification of SF enclosed or denuded of OT, followed by short term IVC (6 days). Phase II: Vitrification of SF enclosed or denuded of OT, followed by long term IVC (18 days), and in vitro maturation (IVM); and Phase III: Utilization of different medium (-MEM or TCM199) for IVC of SF vitrified enclosed or isolated of OT, followed by IVM and gene expression of CX37, CX43, BAX and BCL2. The data applied Bartletts and /or Shapiro Wilk. The media were compared using Turkey test and/or Students Newman-Keuls, and discrete variable of the data used qui-square tests or Fishers test. All probabilities where considered for errors minor than 5%. In Phase I, vitrified SF in an isolated form was capable to grow similarly to fresh follicles or non-vitrified (P < 0.05). Moreover, the end points morphology, ultrastructure, viability, cell proliferation and percentage of antrum formation were similar (P < 0.05) among vitrified follicles enclosed or denuded from OT. In Phase II, oocytes recovered from vitrified follicles in an isolated form had meiotic resumption reaching metaphase I (MI) similar of the fresh follicles or nonvitrified (P > 0.05). In Phase III, -MEM medium was prior to meiotic resumption and development until Metaphase II (MII) stage. The gene expression for BAX and CX37 were observed only in fresh follicles cultured in -MEM or TCM199. The BCL2 gene had higher (P < 0.05) expression in vitrified follicles enclosed in OT cultured in both medium when compared to other follicles. The CX43 gene had higher (P < 0.05) expression on vitrified follicles. As conclusions, 1) Vitrified SF can develop appropriately after or before isolation of OT, without any damage to morphology or capacity to form antrum after IVC for 6 days. However, the ultrastructure of vitrified follicles is more impaired than fresh follicles; 2) Oocytes from isolated SF vitrified and then IVC for 18 days developed reaching metaphase I stage; 3) At the end of IVM, no damage on oocyte diameters were observed neither by vitrification or by the base medium used; 4) IVM oocytes from vitrified follicles in an isolated form and IVC in -MEM developed to MII stage. 5) The gene expression was affected by vitrification.

Composition, diversity and short-term temporal fluctuations of zooplankton communities in fish culture ponds (Pindamonhangaba), SP

The present study aimed at evaluating the composition, diversity and short-term temporal fluctuations of zooplankton communities in fish ponds. The study was carried out in two fish ponds, with 180 m² of water surface (6 × 30 m) each, located in the Aquiculture Centre of the Pindamonhangaba Fisheries Institute - São Paulo. The study was developed over eight weeks, from February 16 to April 6, 1998. The physical and chemical conditions of the water in the fish ponds were adequate for zooplankton development. The zooplanktonic community was characterised by high richness of species and a greater diversity was observed in the first fish pond, with a superior density of Rotifera. Temporal changes in zooplankton composition occurred in both ponds with Cladocera appearing in abundance later, in the fourth week, whereas copepods and rotifers were well represented since the beginning. Many species found are typical of fish ponds and are considered to constitute an excellent food source, showing high nutritional value for fish larvae, a good example being individuals from the Rotifera group and the micro-crustacean species Moina minuta and Thermocyclops decipiens.

O presente estudo visou avaliar a composição, a diversidade e a flutuação do zooplâncton em dois viveiros escavados na terra com 180 m² de espelho d'água (6 × 30 m) cada um, no Núcleo de Aquicultura do Instituto de Pesca de Pindamonhangaba-SP. O estudo foi realizado durante oito semanas, no período de 16 de fevereiro a 6 de abril de 1998. As condições observadas, em relação às características físicas e químicas da água dos viveiros, foram adequadas ao desenvolvimento dos organismos zooplanctônicos. A comunidade zooplanctônica foi caracterizada por elevada riqueza de espécies, com maiores densidades de organismos pertencentes ao grupo Rotifera. Mudanças temporais na composição do zooplâncton ocorreram em ambos os tanques, com Cladocera aparecendo em maior abundância mais tarde, na quarta semana, enquanto que copepodos e rotíferos foram bem representados desde o início. Muitas espécies encontradas são típicas de viveiros de piscicultura e constituem excelente fonte alimentar, apresentando alto valor nutritivo para larvas de peixes, como por exemplo os indivíduos do grupo Rotifera e as espécies Moina minuta e Thermocyclops decipiens.

Short-term culture of bovine bisected embryos effects on pregnancy rates, sex ratio and birth weight of calves / Cultivo in vitro temporário de embriões bovinos bipartidos. Efeito na posterior taxa de prenhez, sexo e peso dos bezerros

This study evaluated pregnancy rate, gestation length, calving rate, and also sex proportion and birth weight of calves derived from in vitro reconstructed bovine demi-embryos. Recovered embryos (grade I morulae) from superovulated cows were bisected with a steel blade and transferred to recipient heifers either immediately (group 1, n=38) or after a 24h period in culture medium (EARLE + 10% FCS) at 38.5 C and 5% CO2 (group 2, n=34) when showed a reconstituted appearance. Intact, uncultured embryos immediately transferred to recipients after collection (group 3, n=36) were used as control. Data were analyzed by ANOVA and Chi-square test. In vitro cultured demi-embryos that developed from morulae to blastocyst (78%, 44/56) were considered viable. Pregnancy rate at day 45 was 47.4%, 52.9%, and 52.8% for groups 1, 2, and 3 respectively (P> 0.05). Calving rate reached 26.3% in group 1. 29.4% in group 2, and 30.6% in group 3 (P> 0.05). No difference was found regarding pregnancy length (280.8 ± 1.8, 285.5 ± 1.7 and 285.3 ± 1.7 days), male proportion (60%, 50% and 54.5%) and birth weight of calves (38 ± 4.2, 32.4 ± 2.5 and 36.2 ± 2.6 kg) among groups 1, 2 and 3, respectively. It was concluded that even though in vitro reconstructed demi-embryos transfer can be of some utility to select the viability of demi-embryos, this procedure is not able to improve pregnancy rates since i

O presente estudo objetivou avaliar a taxa de prenhez, a duração da prenhez e a taxa de parição após a transferência de embriões bipartidos e reconstituídos in vitro, bem como algumas características (proporção de sexo e peso ao nascimento) dos bezerros produzidos. Embriões (mórulas grau 1) recuperados de vacas superovuladas foram bipartidos com uma lâmina metálica e transferidos em novilhas receptoras logo em seguida (grupo 1, n=38) ou após 24 horas de cultivo (meio EARLE + 10% SFB) a 38,5C e atmosfera de 5% de CO2 (grupo 2, n=34). Como controle foram utilizados embriões intactos, não cultivados, transferidos logo após a coleta (grupo 3, n=36). Os dados foram analisados utilizando ANOVA e teste de x2. Os hemi-embriões cultivados que evoluíram ao estágio de blastocisto (78%, 44/56) foram considerados viáveis. A taxa de prenhez no dia 45 após a transferência foi de 47,4%, 52,9% e 52,8% para os grupos 1, 2 e 3, respectivamente (P> 0,05). A taxa de parição foi de 26,3% no grupo 1, 29,4% no grupo 2 e 30,6% no grupo 3 (P> 0,05). Não houve diferença (P>0,05) na duração da prenhez (280,8 ± 1,8, 285,5 ± 1,7 e 285,3 ± 1,7 dias), na proporção de machos (60,0%, 50,0% e 54,5%) e no peso dos bezerros ao nascimento (38,0 ± 4,2, 32,4 ± 2,5 e 36,2 ± 2,6kg) entre os grupos 1, 2 e 3, respectivamente. Foi concluído que o cultivo in vitro dos hemi-embriões durante 24 horas pode ser uma b

Acute effect of nitrate on Mugil platanus (Pisces: Mugilidae) fingerlings / Efeito agudo do nitrato sobre alevinos da tainha Mugil platanus (Pisces: Mugilidae)

Nitrate was used to be considered not toxic for aquatic animals; however, in closed water culture system, this substance can accumulate high concentrations that could become potentially toxic for fish and crustacean. The aim of the present work was to determine the median lethal concentrations (LC50) of nitrate for mullet (Mugil platanus) fingerlings, and to establish the safe level for the culture of the species. Short-term bioassay was carried out through 96 hours. Mullet fingerlings (average weight of 0.19 g) were exposed to concentrations of 0; 125; 250; 500; 750; 1,000; 1,250; 1,500; 1,750; 2,000; 2,500; and 3,000 mg/L of N-NO3. The LC50 was estimated based on mortality in the bioassays and their values were 2,287.4 and 1,522.4 mg/L, after 24 and 96 hours, respectively. Safe level was estimated in 152.2 mg/L of N-NO3. Results demonstrate that M. platatus is highly tolerant to nitrate, and data contribute positively for its culture.

O nitrato não é considerado tóxico para os organismos aquáticos cultivados com renovação de água, entretanto, em sistemas de cultivo fechados, este composto pode atingir altas concentrações, tornando-se potencialmente tóxico para peixes e crustáceos. O objetivo do trabalho foi determinar o valor mediano da concentração letal de nitrato para alevinos da tainha Mugil platanus e estabelecer os níveis de segurança para o cultivo da espécie. Para isto foram realizados ensaios de curta duração (96 h) em que alevinos de tainha (0,19 g de peso médio) foram submetidos às concentrações de 0, 125, 250, 500, 750, 1.000, 1.250, 1.500, 1.750, 2.000, 2.500 e 3.000 mg/L de N-NO3. A partir dos resultados de mortalidade nos ensaios estabeleceram-se as concentrações letais medianas (CL50) de 2.287,4 e 1.522,4 mg/L N-NO3, para 24 e 96 horas, respectivamente. A partir da CL50 (96 h) foi estimado o nível de segurança de 152,2 mg/L de N-NO3. Com base nos resultados observados, pode-se concluir que a tainha apresenta alta tolerância ao nitrato, fator que conta positivamente no estabelecimento do seu cultivo.