Resumo
The viruses Apple stem grooving virus (ASGV), Apple chlorotic leaf spot virus (ACLSV), Apple stem pitting virus (ASPV) and Apple mosaic virus (ApMV) are common in apples and pears and main targets of detection in propagation materials. This study aimed at demonstrating the usefulness of the hybridization method with a non-radioactive probe for simultaneous detection of these four viruses. The sensitivity of this method was sufficiently high enabling the detection of ASGV, ACLSV, ASPV and ApMV in total RNA extracted from infected samples. The probe specificity was confirmed by reaction with homologous viral cDNA, individually cloned for each virus.
Os vírus Apple stem grooving virus (ASGV), Apple chlorotic leaf spot virus (ACLSV), Apple stem pitting virus (ASPV) e Apple mosaic virus (ApMV) são comuns em macieiras e pereiras e alvos prioritários da detecção em materiais propagativos. Este trabalho objetivou demonstrar a viabilidade do método de hibridização com uma sonda não-radioativa para a detecção simultânea desses quatro vírus. A sensibilidade deste teste foi suficientemente alta para permitir a detecção do ASGV, ACLSV, ASPV e ApMV em RNA total extraído de amostras infectadas. A especificidade da sonda foi confirmada pela reação com cDNA viral homólogo, individualmente clonado, para cada vírus.
Assuntos
Doenças das Plantas , Malus/virologia , Pyrus/virologia , Técnicas de Sonda Molecular , VirosesResumo
This work had the aim of comparing the method of hybridization with digoxigenin and the chemiluminescent detection system with the method of radioactive labeled. The cultivars used were susceptible Florunner and resistant COAN. The genomic DNA was isolated from young leaves and Southern blotting analysis was conducted using RFLP probe R2430E. The detection of the probe labeled with digoxigenin was as sensitive as labeled by the radioactivity, however with advantages above the method radioactive. Due to be a safe method and to present reduced costs, the demarcation method based on the digoxigenin and chemiluminescent detection is highly recommendable.
Neste trabalho foram comparados o método de hibridização com digoxigenina e o sistema de detecção por quimioluminescência com o método de marcação radioativa. Foram utilizados o cultivar suscetível Florunner e o resistente COAN. O DNA genômico foi isolado de folhas jovens e a análise de Southern blotting foi conduzida utilizando a sonda de RFLP R2430E. A detecção da sonda marcada com digoxigenina foi tão sensível quanto àquela marcada pela radioatividadade, porém com vantagens sobre o método radioativo. Por ser um método seguro e apresentar custos reduzidos, o método de marcação baseado na digoxigenina e detecção por quimioluminescência é altamente recomendável.
Resumo
Uma sonda radioativa e uma outra biotinilada foram produzidas para detecçäo do vírus da doença de Aujeszky (VDA). O fragmento de Bam H I 7 do DNA genômico do VDA foi marcado por "nick translation" empregando P32dCTP e um fragmento de 196pb, resultante de uma amplificaçäo pela reaçäo em cadeia pela polimerase marcado com biotina 7-dATP. Essas sondas, de uma maneira rápida e específica, prestaram-se para a detecçäo da infecçäo aguda pelo VDA. Entretanto, näo se mostraram sensíveis o suficiente para detectar seqüências genômicas de VDA no gânglio trigêmio de suínos e camundongos com infecçäo latente