Antifungal effect of (R) and (S)-citronellal enantiomers and their predictive mechanism of action on Candida albicans from voriconazole-resistant onychomycoses / Efeito antifúngico dos enantiômeros (R) e (S)-citronelal e seu mecanismo de ação preditivo sobre Candida albicans de onicomicoses resistentes ao voriconazol

Onychomycosis is the most common disease affecting the nail unit and accounts for at least 50% of all nail diseases. In addition, Candida albicans is responsible for approximately 70% of onychomycoses caused by yeasts. This study investigated the antifungal effect of (R) and (S)-citronellal enantiomers, as well as its predictive mechanism of action on C. albicans from voriconazole-resistant onychomycoses. For this purpose, in vitro broth microdilution and molecular docking techniques were applied in a predictive and complementary manner to the mechanisms of action. The main results of this study indicate that C. albicans was resistant to voriconazole and sensitive to the enantiomers (R) and (S)-citronellal at a dose of 256 and 32 µg/mL respectively. In addition, there was an increase in the minimum inhibitory concentration (MIC) of the enantiomers in the presence of sorbitol and ergosterol, indicating that these molecules possibly affect the integrity of the cell wall and cell membrane of C. albicans. Molecular docking with key biosynthesis proteins and maintenance of the fungal cell wall and plasma membrane demonstrated the possibility of (R) and (S)-citronellal interacting with two important enzymes: 1,3-ß-glucan synthase and lanosterol 14α-demethylase. Therefore, the findings of this study indicate that the (R) and (S)-citronellal enantiomers are fungicidal on C. albicans from onychomycoses and probably these substances cause damage to the cell wall and cell membrane of these micro-organisms possibly by interacting with enzymes in the biosynthesis of these fungal structures.

A onicomicose é a doença mais comum que afeta a unidade ungueal e representa pelo menos 50% de todas as doenças ungueais. Além disso, a Candida albicans é responsável por aproximadamente 70% das onicomicoses causadas por leveduras. Nesse estudo, foi investigado o efeito antifúngico dos enantiômeros (R) e (S)-citronelal, bem como seu mecanismo de ação preditivo sobre C. albicans de onicomicoses resistentes ao voriconazol. Para este propósito, foram aplicadas técnicas in vitro de microdiluição em caldo e docking molecular de forma preditiva e complementar para os mecanismos de ação. Os principais resultados deste estudo indicam que C. albicans foi resistente ao voriconazol e sensível aos enantiômeros (R) e (S)-citronelal na dose de 256 e 32 µg/mL respectivamente. Além disso, houve aumento da concentração inibitória mínima (CIM) dos enantiômeros na presença do sorbitol e do ergosterol, indicando que estas moléculas possivelmente afetem a integridade da parede e da membrana celular de C. albicans. O docking molecular com proteínas chave da biossíntese e manutenção da parede celular e da membrana plasmática fúngica, demonstraram a possibilidade do (R) e (S)-citronelal interagir com duas importantes enzimas: 1,3-ß-glucan sintase e lanosterol 14α-demetilase. Portanto, os achados desse estudo indicam que os enantiômeros (R) e (S)-citronelal são fungicidas sobre C. albicans de onicomicoses e provavelmente essas substâncias causem danos a parede e a membrana celular desses microrganismos possivelmente por interagir com as enzimas da biossíntese destas estruturas fúngicas.

In vitro propagation and conservation of Cattleya tigrina A Rich / Propagação e conservação in vitro de Cattleya tigrina A Rich

Cattleya tigrina A. Rich has been suffering heavy losses in its natural habitat and it is now included in the list of plants that are vulnerable to extinction. The development of in vitro propagation and conservation methodologies, as well as acclimatization, are considered important for species at the risk of extinction, as they promote the multiplication and conservation of the species, hence avoiding the loss of their genetic variability. The present study established the protocol of micropropagation and the in vitro conservation of C. tigrina. For the in vitro propagation, the study tested two volumes of the MS medium and two medium consistencies (stationary liquid and semi-solid). For acclimatization, the substrate mixtures containing pine bark, charcoal, vermiculite, and coconut coir were analyzed. For the in vitro conservation, different concentrations of the salts were tested in the MS medium, together with the osmotic regulators (sucrose, mannitol, and sorbitol), and at two temperatures (18 and 25 °C). The results obtained inferred that the semi-solid medium was superior to the stationary liquid medium in the variables of survival and the presence of roots, while the liquid medium was superior to the semi-solid medium in the number of shoots. For acclimatization, pine bark was the substrate where the plants developed an improved height, with sprouting, and rooting. The conservation was satisfactory and the plants remained viable for a period of 730 days, with the MS medium with 25% of the salts, and at temperatures of 18 ºC or 25 ºC. The plants were propagated in the stationary liquid MS medium (10 mL) and the semi-solid medium (25 mL), while they were acclimatized in pine bark and preserved in the MS medium with 25% of the salts (18 ºC or 25 ºC).

A Cattleya tigrina A. Rich vem sofrendo grandes perdas no seu habitat natural, sendo assim foi inclusa na lista de vulneráveis a extinção. O desenvolvimento de metodologias de propagação e conservação in vitro, bem como de aclimatização, são consideradas importantes para espécies em risco de extinção, por promover a multiplicação e conservação da espécie, evitando a perda do seu material genético. Desta forma, o presente trabalho visou estabelecer protocolo de micropropagação e conservação in vitro de C. tigrina. Para propagação in vitro testou volumes de meio de cultura e duas consistências do meio MS (líquido estacionário e semissólido). Para aclimatização, analisou misturas de substratos contendo casca de pinus, carvão vegetal, vermiculita e pó de coco. Para conservação in vitro, foram testados diferentes concentrações de sais no meio MS, reguladores osmóticos (sacarose, manitol e sorbitol), e duas temperaturas (18 e 25 °C). Os resultados obtidos inferem que, o meio de cultura semissólido foi superior ao líquido nas variáveis sobrevivência e presença de raízes, enquanto que o meio líquido foi superior ao meio semissólido em números de brotos. Na aclimatização a casca de pinus foi o substrato em que as plantas se desenvolveram melhor em altura, brotação e enraizamento. A conservação foi satisfatória e as plantas permaneceram viáveis por um período de 730 dias, usando 25% dos sais MS e temperatura de 18 ºC ou 25 ºC. As plantas podem ser propagadas em meio MS líquido estacionário (10 mL) ou semissólido (25 mL), aclimatizadas em casca de pinus e conservadas em 25% dos sais MS (18 ºC ou 25 ºC).

Plasticizer types and whey protein coatings on internal quality and shelf life of eggs stored for 42 days

ABSTRACT: Effects of plasticizer types and whey protein concentrate (WPC) as coatings were evaluated on internal quality and shelf life of eggs stored for 42 days. Eggs were coated with WPC at 8 % solution combined with the plasticizers glycerol (GLY), sorbitol (SOR), and propylene glycol (PRO). The eggs were stored at 20 °C. Weight loss, Haugh Unit (HU), albumen and yolk pH, and yolk index (YI) were evaluated weekly from day 0 to 42 days. After, electron microscopy of the eggshell structure was performed. The data was submitted to the analysis of variance and the effects of treatment, storage time, and the interaction between these factors were evaluated. There was significant interaction between factors (treatment and periods) for weight loss (p 0.0001), HU (p 0.0001), albumen (p 0.0001), and yolk pH (p 0.0001), and YI (p 0.0001). After 42 days, uncoated eggs showed greater weight loss (5.4 %), compared to WPC+GLY, (3.8 %), WPC+SOR (3.3 %) and WPC+PRO (3.9 %). Similar results were verified for HU at 42 days of storage. Uncoated eggs showed HU of 58.46 (B), while coated eggs showed higher values: WPC+GLY 66.58 (A), WPC+SOR 68.79 (A), and WPC + PRO 71.53 (A). The plasticizers GLY, SOR and PRO, associated with WPC, demonstrated effectiveness in maintaining the quality of eggs throughout the 42 days of storage. However, WPC+SOR showed superiority in preserving quality integrity of eggs. This result can be related to the chemical structure of SOR, making the combination more efficient for storage.

Plasticizer types and whey protein coatings on internal quality and shelf life of eggs stored for 42 days

Effects of plasticizer types and whey protein concentrate (WPC) as coatings were evaluated on internal quality and shelf life of eggs stored for 42 days. Eggs were coated with WPC at 8 % solution combined with the plasticizers glycerol (GLY), sorbitol (SOR), and propylene glycol (PRO). The eggs were stored at 20 °C. Weight loss, Haugh Unit (HU), albumen and yolk pH, and yolk index (YI) were evaluated weekly from day 0 to 42 days. After, electron microscopy of the eggshell structure was performed. The data was submitted to the analysis of variance and the effects of treatment, storage time, and the interaction between these factors were evaluated. There was significant interaction between factors (treatment and periods) for weight loss (p < 0.0001), HU (p < 0.0001), albumen (p < 0.0001), and yolk pH (p < 0.0001), and YI (p < 0.0001). After 42 days, uncoated eggs showed greater weight loss (5.4 %), compared to WPC+GLY, (3.8 %), WPC+SOR (3.3 %) and WPC+PRO (3.9 %). Similar results were verified for HU at 42 days of storage. Uncoated eggs showed HU of 58.46 (B), while coated eggs showed higher values: WPC+GLY – 66.58 (A), WPC+SOR – 68.79 (A), and WPC + PRO – 71.53 (A). The plasticizers GLY, SOR and PRO, associated with WPC, demonstrated effectiveness in maintaining the quality of eggs throughout the 42 days of storage. However, WPC+SOR showed superiority in preserving quality integrity of eggs. This result can be related to the chemical structure of SOR, making the combination more efficient for storage.

Plasticizer types and whey protein coatings on internal quality and shelf life of eggs stored for 42 days

Effects of plasticizer types and whey protein concentrate (WPC) as coatings were evaluated on internal quality and shelf life of eggs stored for 42 days. Eggs were coated with WPC at 8 % solution combined with the plasticizers glycerol (GLY), sorbitol (SOR), and propylene glycol (PRO). The eggs were stored at 20 °C. Weight loss, Haugh Unit (HU), albumen and yolk pH, and yolk index (YI) were evaluated weekly from day 0 to 42 days. After, electron microscopy of the eggshell structure was performed. The data was submitted to the analysis of variance and the effects of treatment, storage time, and the interaction between these factors were evaluated. There was significant interaction between factors (treatment and periods) for weight loss (p < 0.0001), HU (p < 0.0001), albumen (p < 0.0001), and yolk pH (p < 0.0001), and YI (p < 0.0001). After 42 days, uncoated eggs showed greater weight loss (5.4 %), compared to WPC+GLY, (3.8 %), WPC+SOR (3.3 %) and WPC+PRO (3.9 %). Similar results were verified for HU at 42 days of storage. Uncoated eggs showed HU of 58.46 (B), while coated eggs showed higher values: WPC+GLY 66.58 (A), WPC+SOR 68.79 (A), and WPC + PRO 71.53 (A). The plasticizers GLY, SOR and PRO, associated with WPC, demonstrated effectiveness in maintaining the quality of eggs throughout the 42 days of storage. However, WPC+SOR showed superiority in preserving quality integrity of eggs. This result can be related to the chemical structure of SOR, making the combination more efficient for storage.(AU)

In vitro conservation of Amburana cearensis (Fabaceae) / Conservação in vitro de Amburana cearensis (Fabaceae)

Slow-growth tissue culture allows in vitro conservation of plant genetic resources and is a complementary technique to conventional preservation methods. The objective of this study was to evaluate the effect of the culture medium supplemented with sucrose, mannitol and sorbitol osmotic agents on the induction of in vitro slow growth of A. cearensis, seeking to establish alternative techniques for ex situ conservation of the species. Plants with age of 10 days were inoculated in woody plant medium (WPM) supplemented with different concentrations of sucrose (87.64, 131.46, 175.28 or 262.92 mM) combined with mannitol or sorbitol at varying concentrations (0.0, 43.8, 65.73, 87.64 or 131.46 mM), solidified with 0.7% agar. The following parameters were evaluated: survival percentage, number of senescent leaves, aerial part length, root length, aerial part dry mass, root dry mass; and number of shoots. The conservation of A. cearensis was viable for up to 300 days in WPM supplemented with 262.92 mM of sucrose or the combination of 87.64 mM of sucrose with 43.80 mM of mannitol, because besides achieving a survival percentage greater than 55.0%, the plants conserved in these media presented normal development and the best appearances, with predominance of uniform green leaves during the storage process.(AU)

A cultura de tecidos, através do crescimento mínimo, possibilita a conservação in vitro dos recursos genéticos vegetais, tornando-se uma técnica complementar aos métodos convencionais de conservação. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do meio de cultura suplementado com sacarose, manitol e agentes osmóticos sorbitol na indução de crescimento mínimo in vitro de A. cearensis, buscando estabelecer técnicas alternativas para conservação ex situ da espécie. Plantas com 10 dias foram inoculadas em meio de cultura WPM suplementado com diferentes concentrações de sacarose (87,64; 131,46; 175,28 e 262,92 mM) combinado com manitol ou sorbitol nas concentrações (0,0; 43,8; 65,73; 87,64 e 131,46 mM), solidificados com 0,7% de ágar. Foram avaliados a porcentagem de sobrevivência, número de folhas senescentes, comprimento da parte aérea, comprimento da raiz, massa seca da parte aérea, massa seca da raiz e número de brotos. A conservação de A. cearensis mostrou-se viável até 300 dias, em meio de cultura WPM suplementado com 262,92 mM de sacarose ou na combinação de 87.64 mM de sacarose com 43.80 mM de manitol. Assim sendo, além de apresentarem porcentagem de sobrevivência acima de 55.0%, as plantas conservadas nesses meios apresentaram um desenvolvimento normal e com melhores aparências com predomínio de folhas verdes uniformes ao longo do processo de armazenamento.(AU)

Aplicação de silício no solo: efeito na expressão enzimática de sementes oriundas de plantas de arroz sob estresse salino / Application of silicon to the soil: effect on enzymatic expression in rice seed produced under salt stress

A utilização de silício pode acarretar em aumento da capacidade biológica da planta em resistir às condições adversas do meio ambiente. Diante disso, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a expressão isoenzimática de sementes oriundas de plantas cultivadas com aplicação de cinza da casca de arroz, via solo, sob estresse salino. O delineamento utilizado foi em blocos casualizados, em esquema fatorial A x B (Fator A- Cinco doses de cinza da casca de arroz aplicada via solo: 0; 500; 1000; 1500 e 2000 kg ha-¹; Fator B- Três concentrações salinas: 0, 4 e 8 mM), com quatro repetições. Foram realizados os testes de primeira contagem de germinação e germinação, e expressão dos sistemas isoenzimáticos glutamato oxaloacetato transaminase, álcool desidrogenase, glutamato desidrogenase e sorbitol. Variações nos quatro sistemas eletroforéticos analisados podem estar associados ao estresse salino causado durante o crescimento e desenvolvimento de plantas de arroz. O sistema isoenzimático glutamato oxaloacetato transaminase é uma ferramenta complementar à avaliação do potencial fisiológico de sementes de arroz.

The silicon utilization may result in the increased biological ability of the plants to withstand the harsh conditions of the environment. In this sense, the study aimed to evaluate the effect of the application of rice husk ash to the soil in rice plants under salt stress on isoenzymes expression. The experimental design was a randomized block in factorial A x B (Factor A- Five doses of rice husk ash applied to soil: 0.0, 500, 1000, 1500, and 2000 kg ha-¹, Factor B- Three salt concentrations: 0, 4, and 8 mM), with four replications. Tests were the first count of germination and germination, and expression of isozyme systems glutamate oxaloacetate transaminase, alcohol dehydrogenase, glutamate dehydrogenase, and sorbitol. Variations in the all analyzed electrophoretic systems may be associated with salt stress caused during the growth and development of rice plants. The isoenzyme system glutamate oxaloacetate transaminase is a complementary tool to assess the physiological rice seed quality.

Aplicação de silício no solo: efeito na expressão enzimática de sementes oriundas de plantas de arroz sob estresse salino / Application of silicon to the soil: effect on enzymatic expression in rice seed produced under salt stress

A utilização de silício pode acarretar em aumento da capacidade biológica da planta em resistir às condições adversas do meio ambiente. Diante disso, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a expressão isoenzimática de sementes oriundas de plantas cultivadas com aplicação de cinza da casca de arroz, via solo, sob estresse salino. O delineamento utilizado foi em blocos casualizados, em esquema fatorial A x B (Fator A- Cinco doses de cinza da casca de arroz aplicada via solo: 0; 500; 1000; 1500 e 2000 kg ha-¹; Fator B- Três concentrações salinas: 0, 4 e 8 mM), com quatro repetições. Foram realizados os testes de primeira contagem de germinação e germinação, e expressão dos sistemas isoenzimáticos glutamato oxaloacetato transaminase, álcool desidrogenase, glutamato desidrogenase e sorbitol. Variações nos quatro sistemas eletroforéticos analisados podem estar associados ao estresse salino causado durante o crescimento e desenvolvimento de plantas de arroz. O sistema isoenzimático glutamato oxaloacetato transaminase é uma ferramenta complementar à avaliação do potencial fisiológico de sementes de arroz.(AU)

The silicon utilization may result in the increased biological ability of the plants to withstand the harsh conditions of the environment. In this sense, the study aimed to evaluate the effect of the application of rice husk ash to the soil in rice plants under salt stress on isoenzymes expression. The experimental design was a randomized block in factorial A x B (Factor A- Five doses of rice husk ash applied to soil: 0.0, 500, 1000, 1500, and 2000 kg ha-¹, Factor B- Three salt concentrations: 0, 4, and 8 mM), with four replications. Tests were the first count of germination and germination, and expression of isozyme systems glutamate oxaloacetate transaminase, alcohol dehydrogenase, glutamate dehydrogenase, and sorbitol. Variations in the all analyzed electrophoretic systems may be associated with salt stress caused during the growth and development of rice plants. The isoenzyme system glutamate oxaloacetate transaminase is a complementary tool to assess the physiological rice seed quality.(AU)

Optimization of asparaginase production from Zymomonas mobilis by continuous fermentation / Otimização da produção de asparaginase de Zymomonas mobilis por fermentação contínua

Asparaginase is an enzyme used in clinical treatments as a chemotherapeutic agent and in food technology to prevent acrylamide formation in fried and baked foods. Asparaginase is industrially produced by microorganisms, mainly gram-negative bacteria. Zymomonas mobilis is a Gram-negative bacterium that utilizes glucose, fructose and sucrose as carbon source and has been known for its efficiency in producing ethanol, sorbitol, levan, gluconic acid and has recently aroused interest for asparaginase production. Current assay optimizes the production of Z. mobilis asparaginase by continuous fermentation using response surface experimental design and methodology. The studied variables comprised sucrose, yeast extract and asparagine. Optimized condition obtained 117.45 IU L-1 with dilution rate 0.20 h-1, yeast extract 0.5 g L-1, sucrose 20 g L-1 and asparagine 1.3 g L-1. Moreover, carbon:nitrogen ratio (1:0.025) strongly affected the response of asparaginase activity. The use of Z. mobilis by continuous fermentation has proved to be a promising alternative for the biotechnological production of asparaginase.(AU)

A asparaginase é uma enzima usada em tratamento clínico como agente quimioterapêutico e em tecnologia de alimentos na prevenção de formação de acrilamida em alimentos fritos e assados. Asparaginase é industrialmente produzida por micro-organismos, principalmente bactérias gram negativas. Zymomonas mobilis é uma bactéria gram negativa que utiliza glicose, frutose e sacarose como fonte de carbono e é conhecida por sua eficiência para produzir etanol, sorbitol, levana, ácido glicônico, e mais recentemente, tem despertado interesse no uso desse micro-organismo na produção de asparaginase. Este trabalho teve como objetivo otimizar a produção de asparaginase de Z. mobilis por fermentação contínua, pelo uso do delineamento experimental e da metodologia da superfície de resposta, testando as variáveis: sacarose, extrato de levedura e asparagina. A condição ótima alcançada, com produção de 117,45 UI L-1 foi na taxa de diluição 0,20 h-1, utilizando 0,5 g L-1 de extrato de levedura, 20 g L-1 de sacarose e 1,3 g L-1 de asparagina. Observou-se que a relação carbono:nitrogênio (1:0,025) exerceu forte influência na resposta da atividade de asparaginase. A utilização de Z. mobilis por fermentação contínua demonstrou ser uma alternativa promissora na produção biotecnológica da asparaginase.(AU)

CARACTERIZAÇÕES GENÉTICAS E MOLECULARES EM ALGAROBA (PROSOPIS JULIFLORA (SW.) DC)

A algaroba, Prosopis juliflora (Sw) DC, é considerada uma alternativa na alimentação de animais em regiões semiáridas, apresentando importância econômica e social. A referida espécie tem recebido atenção por pesquisadores em estudos genéticos moleculares, embora, pouco se sabe sobre a sua diversidade e estrutura genética. Assim, objetivou-se gerar informações relativas à extração de ácidos nucleicos, uso de marcadores moleculares e estimativas de diversidade e estrutura genética que contribuam para subsidiar ações de manejo e melhoramento genético em P. juliflora (Sw.) DC. Para isto, foram testados sete protocolos de extração de DNA genômico disponíveis na literatura, utilizados em diferentes espécies vegetais. Os protocolos foram otimizados por meio da eliminação do uso de -mercaptoetanol, nitrogênio líquido, proteinase K e RNAses. Após as etapas de extração, foi analisada a qualidade e quantidade de DNA obtido e, por fim, realizado teste de amplificação com uso de marcador molecular Resistance Gene Analogs - RGA. Ao final, selecionou-se os três protocolos mais eficientes para a obtenção do DNA genômico: tampão SDS 10%, CTAB 5% e Sorbitol; sendo utilizado o SDS 10% para extração do DNA nos próximos estudos. Posteriormente, foram caracterizados e selecionados 17 combinações de marcadores moleculares RGA, em 20 amostras de DNA genômico da planta extraídas de espécimes coletadas no município de Itapetinga, Bahia. Com base nos perfis de amplificação os pares de iniciadores foram classificados como: Adequado; Razoável e Inadequado. Também foram realizadas análises descritivas associadas ao número de marcadores gerados, onde os percentuais de polimorfismo variou entre 60% e 100%, a média da Heterozigosidade Esperada (He) foi de 0,21 e, o conteúdo de informações polimórficas (PIC) médio foi de 0,17. Dos 17 pares de iniciadores analisados, 10 foram selecionados para estimar a diversidade e a estrutura genética de população referente à sete populações naturalizadas da mesorregião centro sul baiano, composta por 48 acessos e 144 acessos da coleção de germoplasma do Instituto Federal Baiano foram incluídas nas análises. Com base nos perfis de amplificação, realizou-se a genotipagem e a construção da tabela de dados binários. As análises descritivas, Análise de Variância Molecular (AMOVA) e Análise de Coordenadas Principais (PCoA) também foram realizadas. Observamos um total de 147 marcas, cuja média de polimorfismo foi de 51,7% , sendo 12 marcas raras e cinco exclusivas. A Heterozigosidade esperada apresentou média de 0,17, variando de 0,05 em Anagé e 0,32 em Caculé. O conteúdo de informação de polimorfismo variou de 0,04 a 0,25 com média de 0,14. Os acessos estudados apresentaram estruturação em dois pools gênicos e subestruturação em três pools gênicos. A partir dos atributos genéticos moleculares apresentados nesse estudo, a presente Tese busca subsidiar futuros planos de manejo das populações de Prosopis juliflora naturalizada na mesorregião sudoeste da Bahia.

The mesquite, Prosopis juliflora (Sw) DC, is considered an alternative for animal feeding in semiarid regions, presenting economic and social importance. The specie has received attention by researchers in molecular genetic studies, although, there are not much studies about its diversity and genetic structure. This study aimed to generate information related to the extraction of nucleic acids, use of molecular markers and estimation of diversity and genetic structure that contribute to support management and genetic improvement actions of P. juliflora (Sw.) DC. It was used seven genomic DNA extraction protocols available in the literature, used in different botanical species. The protocols were optimized by eliminating the use of -mercaptoethanol, liquid nitrogen, proteinase K and RNAses. After the extraction steps were done, the quality and quantity of DNA obtained was analyzed and an amplification test was performed using a molecular marker Resistance Gene Analogs - RGA. At the end, three most efficient protocols for obtaining genomic DNA were selected: 10% SDS buffer, 5% CTAB and Sorbitol; using 10% SDS for DNA extraction in future studies. Subsequently, 17 combinations of RGA molecular markers were characterized and selected on 20 samples of plant genomic DNA extracted from specimens collected in the county of Itapetinga, Bahia. Based on the amplification profiles the primer pairs were classified as: Adequate; Reasonable and Inappropriate. It was also performed the description of the analyzes associated with the number of generated markers, where the polymorphism percentages ranged between 60% and 100%, the average Expected Heterozygosity (H) was 0.21, and the average polymorphic information content (PIC) was of 0.17. From the 17 pairs of primers analyzed, 10 were selected to estimate the diversity and genetic structure of the population referring to seven naturalized populations from the central southern region of Bahia, comprising 48 accessions and 144 accessions from the germplasm collection of the Instituto Federal Baiano were included in the analyses. Based on the amplification profiles, genotyping and the construction of the binary data table were performed. Descriptive analyses, Molecular Variance Analysis (AMOVA) and Principal Coordinate Analysis (PCoA) were also performed. It was observed a total of 147 brands, whose average polymorphism was 51.7%, being 12 rare brands and five exclusive ones. Expected heterozygosity averaged 0.17, ranging from 0.05 in Anagé to 0.32 in Caculé. The polymorphism information content ranged from 0.04 to 0.25 with a mean of 0.14. The studied accessions presented structure in two gene pools and substructure in three gene pools. From the molecular genetic attributes presented in this study, this doctoral dissertation intends to support future management plans for populations of Prosopis juliflora naturalized in the southwestern mesoregion of Bahia.

Effects of different osmolarities on bacterial biofilm formation

Biofilm formation depends on several factors. The influence of different osmolarities on bacterial biofilm formation was studied. Two strains (Enterobacter sp. and Stenotrophomonas sp.) exhibited the most remarkable alterations. Biofilm formation is an important trait and its use has been associated to the protection of organisms against environmental stresses.

XXX - REVESTIMENTO Á BASE DE PROTEÍNA DE ARROZ COMO ALTERNATIVA PARA PROLONGAR A VIDA DE PRATELEIRA DE OVOS

A busca por tecnologias inovadoras que possam auxiliar na manutenção da qualidade interna dos ovos durante o armazenamento e também trazer melhoria nas propriedades da casca é de grande interesse por parte da indústria avícola. As vantagens do uso de revestimentos podem ser justificadas pela capacidade de proteger o alimento mecanicamente e ainda diminuir a degradação do produto, aumentando assim seu tempo de prateleira. O uso de diferentes revestimentos à base de proteína concentrada de arroz (PCA) (5, 10 ou 15%) e seus efeitos nas características de qualidade foram avaliadas em ovos convencionais (Experimento 1) e orgânicos (Experimento 2) e armazenados por oito semanas em temperatura ambiente. Posteriormente, a incorporação de extrato de própolis (0, 5 ou 10% Experimento 3) ou 1% de óleos essenciais (copaíba, melaleuca ou tomilho Experimento 4) aos revestimentos também foi avaliada, assim como o efeito de diferentes plastificantes (glicerol, propileno glicol ou sorbitol Experimento 5). Em todos os experimentos foram utilizados ovos íntegros, não férteis e de um dia, distribuídos em delineamentos inteiramente casualizados, com 12 repetições cada. Foram avaliados a perda de peso (%), Unidade Hagh (UH), índice de gema (IG) e pH do albúmen e gema. Os dados foram analisados utilizando o programa estatístico SAS (9.4, SAS Inst. Inc., Cary, NC, Estados Unidos). Os dados foram submetidos à análise de variância utilizando o PROC GLM. Eventuais diferenças entre médias foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. No experimento 1 foi possível observar que ovos não-revestidos apresentaram a maior perda de peso (8,28%), enquanto a proteína do arroz a 5% (5,60%), 10% (5,45%) e 15% (5,54%) foram eficientes na prevenção da perda de peso (P < 0,001). Os ovos que não receberam nenhum tipo de tratamento apresentaram os piores valores de (P < 0,001) UH (54,45), IG (0,28) e pH do albúmen (9,18). O uso dos revestimentos à base de PCA preservaram a qualidade interna dos ovos por até 4 semanas a mais quando comparado a ovos não revestidos. Resultados semelhantes foram encontrados no experimento 2, onde os mesmos revestimentos foram testando em ovos orgânicos. O uso do revestimento de PCA pode preservar a qualidade interna dos ovos por até 3 semanas a mais do que os ovos não revestidos. Ovos revestidos com proteína de arroz com e sem própolis (experimento 3) apresentaram resultados com qualidade interna similar durante as 6 semanas de armazenamento. Os revestimentos com proteína de arroz e óleos essenciais (experimento 4) foram eficientes na preservação da qualidade interna dos ovos por até 3 semanas a mais que os ovos sem revestimento. Ovos não revestidos apresentaram maior perda de peso (P < 0,001) (5,43%) quando comparado com ovos revestidos com PCA (4,23%) ou PCA enriquecido com melaleuca (4,10%), copaíba (3,90%) ou tomilho (4,08%). O uso do sorbitol como plastificante é mais eficiente na manutenção do controle do aumento do pH do albumen (9,13) quando comparado aos ovos não revestidos (9,52) ou revestidos com glicerol (9,20) ou propileno glicol (9,20) (P < 0,001) (experimento 5). A microscopia eletrônica de varredura demonstrou menor porosidade nas casca de ovos revestidos, indicando que o uso do revestimento pode fornecer uma barreira protetora contra a transferência de gases e umidade. O uso de revestimentos à base de proteína de arroz é uma opção interessante para auxíliar na manutenção da qualidade interna dos ovos armazenados uma vez que os resultados encontrados neste trabalho foram promissores.

The search for innovative technologies that can help in maintaining the internal quality of the eggs during storage and also bring improvement in the properties of the shell is of great interest on the part of the poultry industry. The advantages of using coatings can be justified by the ability to mechanically protect the food and further decrease the degradation of the product, thereby increasing its shelf life. The use of different coatings based on rice protein concentrated (RPC) (5, 10 or 15%) and their effects on quality characteristics were evaluated in conventional and organic eggs and stored for eight weeks at room temperature. Later, the incorporation of propolis extract (0, 5 or 10%) or 1% of essential oils (copaiba, melaleuca or thyme) to the coatings was also evaluated, as well as the effect of different plasticizers (glycerol, propylene glycol or sorbitol) . Inbreeding eggs were used in a completely randomized design with 12 replicates each. The weight loss (%), Hagh Unit (UH), yolk index (GI) and albumin and gem pH were evaluated. Statistical procedures were performed using SAS statistical software (9.4, SAS Inst. Inc., Cary, NC, United States). Data were submitted to analysis of variance using PROC GLM. Possible differences between averages were compared by the Tukey test at 5% probability.In the experiment 1, it was possible to observe that uncoated eggs had the highest weight loss (8.28%), while rice protein 5% (5.60%), 10% (5.45%) and 15% (5.54%) were efficient in preventing weight loss (P <0.001). The eggs that did not receive any treatment presented the worst values (P <0.001) HU (54,45), IG (0,28) and pH of the albumen (9,18). The use of PCA-based coatings preserved the internal quality of the eggs for up to 4 more weeks when compared to uncoated eggs. Similar results were found in Experiment 2, where the same coatings were tested on organic eggs. The use of the RPC coating can preserve the internal quality of the eggs for up to 3 weeks longer than uncoated eggs. Rice protein coated eggs with and without propolis (experiment 3) showed similar internal quality results during 6 weeks of storage. Rice protein coatings and essential oils (experiment 4) were efficient in preserving the internal quality of eggs for up to 3 weeks longer than uncoated eggs. Uncoated eggs presented greater weight loss (5.43%) when compared to eggs coated with RPC (4.23%) or RPC enriched with melaleuca (4.10%), copaiba (3.90%) or thyme (4%) (P <0.001). The use of sorbitol as a plasticizer is more efficient in maintaining control of the increase in albumen pH (9,13) when compared to uncoated eggs (9,52) or coated with glycerol (9,20) or propylene glycol (9, 20) (P <0.001) (experiment 5). Scanning electron microscopy demonstrated lower porosity in the coated eggshell, indicating that the use of the coating may provide a protective barrier against gas transfer and moisture. The use of rice protein coatings is an interesting option to help maintain the internal quality of stored eggs since the results found in this work were promising.

Uso promissor do óleo essencial de Rosmarinus officinalis L. e Origanum majorana L. na esporotricose cutânea experimental por Sporothrix brasiliensis resistente ao itraconazol, e susceptibilidade de isolados aos óleos vegetais

O itraconazol é o fármaco de eleição no tratamento da esporotricose humana e animal, entretanto, o surgimento de Sporothrix brasiliensis com resistência in vitro tem incentivado os estudos com plantas da família Lamiaceae como fontes promissoras de moléculas antifúngicas. Dessa família, os óleos essenciais de alecrim (Rosmarinus officinalis L.) e manjerona (Origanum majorana L.) têm se destacados pela atividade antifúngica e baixa citotoxicidade. Essa tese objetivou avaliar a atividade dos óleos essenciais de plantas da família Lamiaceae em isolados clínicos de Sporothrix spp. e na esporotricose cutânea experimental por S. brasiliensis resistente ao itraconazol. Quarenta ratos Wistar adultos machos foram inoculados via subcutânea no coxim plantar esquerdo (2×105 células/mL) e, dez dias após, receberam tratamento oral (1 mL) por 30 dias nos seguintes grupos experimentais (n=10): controle com solução salina com propilenoglicol 1% (CONT); itraconazol a 10 mg/kg (ITRA); óleos essenciais de alecrim a 90 mg/ml (ALEC) e manjerona a 30 mg/ml (MANJ). Semanalmente, a evolução clínica era acompanhada e a eutanásia realizada para histopatologia e contagem fúngica (retro-isolamento). Ainda, os óleos foram avaliados por cromatografia gasosa com espectrometria de massas, e o mecanismo de ação pelos ensaios de proteção do sorbitol e efeito do ergosterol. Os resultados revelaram que os animais dos grupos ALEC e MANJ apresentaram remissão dos sinais clínicos, com ausência de edema e exsudato no membro inoculado, ao passo que CONT e ITRA mantiveram os sinais da doença. Ainda, a disseminação do S. brasiliensis para os órgãos foi menos observada no fígado, baço, linfonodos, rins e testículos dos grupos ALEC e MANJ em comparação ao CONT e ITRA (P < 0.05), revelando uma proteção sistêmica a partir da infecção subcutânea. Essa observação foi relacionada com a composição química, cujos compostos prevalentes foram terpineol-4 (34,09%) e -terpineno (14,28%) em manjerona, e 1,8-cineol (47,91%) e cânfora (12,47%) em alecrim. Não houve alteração nos valores da concentração inibitória mínima (CIM) quando adicionado o protetor osmótico, demonstrando ausência de atividade à nível de parede celular, ao passo que o uso do ergosterol elevou os valores de CIM, revelando que ambos óleos apresentaram atividade a nível de complexação com o ergosterol. Esse estudo demonstrou a eficácia do uso oral de alecrim e manjerona no tratamento da esporotricose cutânea experimental, sendo promissores como antifúngicos. Palavras-ch

Itraconazole is the drug of choice for the treatment of sporotrichosis, however, the emergence of Sporothrix brasiliensis with in vitro resistance has encouraged studies with plants of the family Lamiaceae as promising sources of antifungal molecules. From this family, essential oils of rosemary (Rosmarinus officinalis L.) and marjoram (Origanum majorana L.) have been highlighted for their antifungal activities and low cytotoxicity. This thesis aimed to evaluate the effectiveness of the essential oils of the plants from Lamiaceae family in clinical isolates of Sporothrix spp. and in the experimental cutaneous sporotrichosis by itraconazole-resistant S. brasiliensis. Forty male adult Wistar rats were inoculated subcutaneously in the left footpad (2×105 cells/mL) and, ten days later, received oral treatment (1 mL) for 30 days in the following experimental groups (n=10): control with solution saline with 1% propylene glycol (CONT); itraconazole at 10 mg/kg (ITRA); essential oils of rosemary at 90 mg/mL (ROSM) and marjoram at 30 mg/mL (MARJ). The clinical follow-up was done weekly, as well as the euthanasia for histopathology and fungal burden (retro-isolation). Furthermore, the oils were evaluated by gas chromatography with mass spectrometry, and the mechanism of action by the assays of sorbitol protection and ergosterol effect. The results showed that the animals from ALEC and MANJ groups presented remission of the clinical signs, with no edema and exudate in the inoculated limb, whereas CONT and ITRA maintained the signs of the disease. Also, the dissemination of S. brasiliensis to the organs was less observed in the liver, spleen, lymph nodes, kidneys and testicles of the ALEC and MANJ groups compared to the CONT and ITRA (P <0.05), revealing systemic protection from the subcutaneous infection. This observation was related to the chemical composition, whose prevalent compounds were terpineol-4 (34.09%) and -terpinene (14.28%) in marjoram, and 1,8-cineole (47.91%) and camphor (12.47%) in rosemary. There was no change in minimum inhibitory concentration (MIC) values when the osmotic protector was added, showing an absence of activity at the cell wall level, whereas the use of ergosterol increased MIC values, revealing that both oils presented activity at the level of complexion with ergosterol. This study demonstrated the effectiveness of the oral use of rosemary and marjoram in the treatment of experimental cutaneous sporotrichosis, being promising as antifungal.

Ocorrência de Escherichia coli O157: H7 e O26 sorbitol negativas em matadouro frigorífico de bovino e suscetibilidade a antimicrobianos / Occurrence of Escherichia coli O157: H7 and O26 sorbitol negative in a cattle slaughterhouse and susceptibility to antimicrobials

A carne bovina pode ser um meio de transmissão de Escherichia coli O157:H7 e de não-O157 para os humanos, que a ingerem mal cozida, sendo responsáveis por causarem doenças severas, como a síndrome hemolítico urêmica. A resistência bacteriana se tornou preocupante em relação à eficácia nos tratamentos das doenças, e tendo em vista tais aspectos este estudo teve os objetivos de verificar a ocorrência de E. coli O157:H7 e não-O157 em etapas do abate bovino, asssim como de avaliar a suscetibilidade dessas bactérias frente à ação de antimicrobianos. Foram colhidas em abatedouro bovino 21 amostras de superfície de mãos dos manipuladores, 21 de facas e 300 provenientes de 50 animais em seis pontos no fluxograma de abate. O isolamento foi realizado utilizando o ágar CT-SMAC e a caracterização dos sorotipos pela PCR. Houve uma ocorrência maior de E. coli O157:H7 (12,0%) nos animais, e menor ocorrência de E. coli O26 (8,0%) e de O113 (2,0%). E. coli O26 esteve presente em 9,52% das facas. A presença de E. coli não-O157 sorbitol negativa foi um fato inesperado devido ao método de isolamento utilizado. Todos os isolados de E. coli O157:H7 mostraram-se sensíveis à tetraciclina, cefepime, cefoxitina, ciprofloxacina e sulfazotrim, e 78,85% deles foram resistentes à cefalotina e 34,61% à ampicilina. Todas E. coli O26 foram sensíveis ao cefepime, cefoxitina e sulfazotrim, e 88,23% resistentes à tetraciclina e cefalotina e 82,35% à ampicilina. A multirresistência aos antibimicrobianos foi observada em todos os sorotipos, devendo, portanto, haver critérios no uso de antimicrobianos nos tratamentos para não se tornar um problema de saúde pública.(AU)

Cattle beef could be a way of transmitting Escherichia coli O157: H7 and non-O157 to humans if they consume undercooked meat, being responsible for causing severe diseases such as hemolytic uremic syndrome. Bacterial resistance has become worrying concerning the efficacy in the treatment of diseases, and because of these aspects, the objective of this study was to verify the occurrence of E. coli O157: H7 and non-O157 in the stages of cattle slaughter and to evaluate the susceptibility of these bacteria against antimicrobial action. We collected from a cattle slaughterhouse 21 samples from manipulators' hands, 21 from knives and 300 from 50 animals in six points of the flowchart. The isolation was performed using the CT-SMAC agar and characterization of serotypes by PCR. There was higher occurrence of E. coli O157: H7 (12.0%) in animals and lower prevalence of E. coli O26 (8.0%) and O113 (2.0%). E. coli O26 was present in 9.52% of the knives. The presence of E. coli non-O157 sorbitol negative was an unexpected fact due to the method of isolation. All E. coli O157: H7 isolates were sensitive to tetracycline, cefepime, cefoxitin, ciprofloxacin and sulphazotrim, and 78.85% of them were resistant to cephalothin and 34.61% to ampicillin. All E. coli O26 were sensitive to cefepime, cefoxitin and sulphazotrim, and 88.23% were resistant to tetracycline and cephalothin and 82.35% to ampicillin. The antimicrobial multiresistance was observed in both serotypes. It should be, therefore, a criteria for using antimicrobial in treatments to avoid become a public health concern.(AU)

Ocorrência de Escherichia coli O157: H7 e O26 sorbitol negativas em matadouro frigorífico de bovino e suscetibilidade a antimicrobianos / Occurrence of Escherichia coli O157: H7 and O26 sorbitol negative in a cattle slaughterhouse and susceptibility to antimicrobials

A carne bovina pode ser um meio de transmissão de Escherichia coli O157:H7 e de não-O157 para os humanos, que a ingerem mal cozida, sendo responsáveis por causarem doenças severas, como a síndrome hemolítico urêmica. A resistência bacteriana se tornou preocupante em relação à eficácia nos tratamentos das doenças, e tendo em vista tais aspectos este estudo teve os objetivos de verificar a ocorrência de E. coli O157:H7 e não-O157 em etapas do abate bovino, asssim como de avaliar a suscetibilidade dessas bactérias frente à ação de antimicrobianos. Foram colhidas em abatedouro bovino 21 amostras de superfície de mãos dos manipuladores, 21 de facas e 300 provenientes de 50 animais em seis pontos no fluxograma de abate. O isolamento foi realizado utilizando o ágar CT-SMAC e a caracterização dos sorotipos pela PCR. Houve uma ocorrência maior de E. coli O157:H7 (12,0%) nos animais, e menor ocorrência de E. coli O26 (8,0%) e de O113 (2,0%). E. coli O26 esteve presente em 9,52% das facas. A presença de E. coli não-O157 sorbitol negativa foi um fato inesperado devido ao método de isolamento utilizado. Todos os isolados de E. coli O157:H7 mostraram-se sensíveis à tetraciclina, cefepime, cefoxitina, ciprofloxacina e sulfazotrim, e 78,85% deles foram resistentes à cefalotina e 34,61% à ampicilina. Todas E. coli O26 foram sensíveis ao cefepime, cefoxitina e sulfazotrim, e 88,23% resistentes à tetraciclina e cefalotina e 82,35% à ampicilina. A multirresistência aos antibimicrobianos foi observada em todos os sorotipos, devendo, portanto, haver critérios no uso de antimicrobianos nos tratamentos para não se tornar um problema de saúde pública.(AU)

Cattle beef could be a way of transmitting Escherichia coli O157: H7 and non-O157 to humans if they consume undercooked meat, being responsible for causing severe diseases such as hemolytic uremic syndrome. Bacterial resistance has become worrying concerning the efficacy in the treatment of diseases, and because of these aspects, the objective of this study was to verify the occurrence of E. coli O157: H7 and non-O157 in the stages of cattle slaughter and to evaluate the susceptibility of these bacteria against antimicrobial action. We collected from a cattle slaughterhouse 21 samples from manipulators' hands, 21 from knives and 300 from 50 animals in six points of the flowchart. The isolation was performed using the CT-SMAC agar and characterization of serotypes by PCR. There was higher occurrence of E. coli O157: H7 (12.0%) in animals and lower prevalence of E. coli O26 (8.0%) and O113 (2.0%). E. coli O26 was present in 9.52% of the knives. The presence of E. coli non-O157 sorbitol negative was an unexpected fact due to the method of isolation. All E. coli O157: H7 isolates were sensitive to tetracycline, cefepime, cefoxitin, ciprofloxacin and sulphazotrim, and 78.85% of them were resistant to cephalothin and 34.61% to ampicillin. All E. coli O26 were sensitive to cefepime, cefoxitin and sulphazotrim, and 88.23% were resistant to tetracycline and cephalothin and 82.35% to ampicillin. The antimicrobial multiresistance was observed in both serotypes. It should be, therefore, a criteria for using antimicrobial in treatments to avoid become a public health concern.(AU)

Genetic variability in Oligosarcus paranensis (Teleostei: Characiformes) from the São Francisco river, Ivaí river basin Paraná State, Brazil / Variabilidade Genética em Oligosarcus paranensis do rio São Francisco, Bacia do rio Ivaí Estado do Paraná, Brasil

The genetic variability of Oligosarcus paranensis was estimated from a population collected in São Francisco river, Prudentópolis county in Paraná State (Brazil) using the electrophoresis in starch gel technique. Eleven enzymatic systems were analyzed: Aspartate aminotransaminase (AAT; E. C. 2.6.1), Alcohol dehydrogenase (ADH; E. C. 1.1.1.1), Esterase (EST; E. C. 3.1.1.1), Glucose-6-phosphate isomerase (GPI; E. C. 5.3.1.9), Glycerol-3-Phosphate dehydrogenase (G3PDH; E. C. 1.1.1), Isocitrate dehydrogenase (IDH; E. C. 1.1.1.42), L-lactate dehydrogenase (LDH; E. C. 1.1.1.27), Malate dehydrogenase (MDH; E. C. 1.1.1.37 ), Malate dehydrogenase NADP (ME; E. C. 1.1.1.40), Phosphoglucomutase (PGM; E. C. 5.4.2.2) and Sorbitol dehydrogenase (SORB; E.C. 1.1.1.14). Twenty loci were identified through 15% corn starch gel electrophoresis of which nine (45%) were polymorphic. The average expected heterozygosity was estimated as 0.1229 ± 0.1728, and the observed was 0.0586 ± 0.1069, indicating high genetic variability. The average value of FIS = 0.5145 indicates homozygote excess.(AU)

A variabilidade genética de Oligosarcus paranensis foi estimada a partir de uma população coletada no rio São Francisco, município de Prudentópolis no Estado do Paraná (Brasil) utilizando a técnica de eletroforese em gel de amido. Onze sistemas enzimáticos foram analisados: Aspartato aminotransaminase (AAT; E.C. 2.6.1.1), Álcool desidrogenase (ADH; E.C. 1.1.1.1), Esterase (EST; E.C. 3.1.1.1), Glicose-6-fosfato isomerase (GPI; E.C. 5.3.1.9), Glicerol-3-fosfato desidrogenase (G3PDH; E.C. 1.1.1.8), Isocitrato desidrogenase (IDH; E.C. 1.1.1.42), L-Lactato desidrogenase (LDH; E.C. 1.1.1.27), Malato desidrogenase (MDH; E.C. 1.1.1.37), Malato desidrogenase NADP+ (ME; E.C. 1.1.1.40), Fosfoglicomutase (PGM; E.C. 5.4.2.2) e Sorbitol desidrogenase (SORB; E.C. 1.1.1.14). Foram identificados vinte loci por eletroforese em gel de amido de milho 15% dos quais nove (45%) foram polimórficos. A heterozigosidade média esperada foi estimada em 0,1229 ± 0,1728, e a observada foi de 0,0586 ± 0,1069, indicando uma alta variabilidade genética. O valor médio de FIS = 0,5145 indica excesso de homozigotos.(AU)

Caracterização fenotípica e genotípica de Streptococcus equi subespécie equi isolados de equinos doentes e portadores no Rio Grande do Sul

Streptococcus equi subespécie equi (S. equi) é o agente causador da adenite equina, uma das doenças infecciosas mais frequentemente diagnosticadas em todo o mundo. Após a doença aguda de curta duração, caracterizada pelo enfartamento dos linfonodos da cabeça e pescoço, parte dos equinos permanece portador da bactéria por longos períodos, sendo este o ponto chave para a manutenção do agente e ocorrência da doença de forma contínua. Em vista disso, se torna importante entender o que desencadeia o estado de portador, o motivo de nem todos os animais conseguirem eliminar a bactéria após a melhora clínica. Esta dissertação descreve a caracterização fenotípica e genotípica de cepas de S. equi isoladas de equinos doentes (n=42) e portadores (n=18) no estado do Rio Grande do Sul. Por meio da avaliação da coloração e aspecto das colônias, provas de fermentação de açúcares (ribose, lactose, trealose e sorbitol), visualização da cápsula, teste de suscetibilidade aos antimicrobianos, avaliação da capacidade de formação de biofilme e detecção de genes que codificam fatores de virulência (hasA, hasB, hasC, eqbE, eqbG, seeH e seeI) foi possível evidenciar diferenças consideráveis entre os dois grupos de isolados. S. equi isolados de equinos portadores apresentaram colônias opacas e branco-acinzentadas (100%), cápsula em pequena quantidade (38,9%) ou ausente (61,1%), com capacidade de fermentar pelo menos dois dos açúcares testados (100%) e resistência em média a 3,6 (1-7) classes de antimicrobianos. Por outro lado, cepas isoladas de equinos doentes apresentaram predominantemente colônias mucóides e cor de mel (95,2%), com muita cápsula (92,8%), incapazes de fermentar qualquer um dos açúcares (92,8%) e resistentes em média a 2,1 (0-7) classes de antimicrobianos. Foi obsevada uma maior proporção de cepas multirresistentes no grupo de isolados de animais portadores (13/18 = 72,2%) em comparação ao grupo de isolados de animais doentes (5/42 = 11,9%). Capacidade de formar biofilme foi detectada em 94,4% dos isolados de animais doentes e 78,6% de portadores, não havendo diferença entre os grupos. Todos os isolados de equinos portadores apresentaram deleção do gene eqbE e 66,7% dos mesmos também em hasA e hasB. A perda desses loci gênicos por isolados de equinos portadores já havia sido reportada em outro estudo. Desta forma, nossos resultados complementam os da literatura internacional ao associar as características genotípicas dos isolados de animais portadores com suas características fenotípicas, e evidenciar diferenças com aquelas de isolados de equinos com manifestação clínica. Estudos mais aprofundados são necessários para elucidar quais outros eventos estão envolvidos na persistência de S. equi no hospedeiro após a cura clínica.

Streptococcus equi subspecies equi (S. equi) is the causative agent of srangles, one of the most frequently diagnosed infectious disease worldwide. After the short duration acute disease, characterized by abscess formation in the head and neck lymph nodes, some horses remain as S. equi carriers for long periods. Equine carriers are the key point for the bacteria maintenance and occurrence of the disease continuously. Therefore, it becomes important to understand what triggers the carrier state, why not all animals can eliminate the bacteria after clinical improvement. This dissertation describes the phenotypic and genotypic characterization of S. equi strains isolated from diseased horses (n = 42) and carriers (n = 18) in the Rio Grande do Sul state. Evaluating colonies color and appearance, sugars fermentation tests (ribose, lac-tose, trehalose and sorbitol), capsule visualization, antimicrobial susceptibility test, biofilm formation capacity and detection of virulence factors encoding genes (hasA, hasB, hasC, eqbE, eqbG, seeH and seeI) it was possible to show considerable differences between the two groups of isolates. S. equi isolated from equine carriers presented dry, opaque and white-gray colonies (100%), capsule in small quantity (38.9%) or absent (61.1%), capable of fermenting at least two sugars tested (100%) and resistance on average to 3.6 (1-7) antimicrobials classes. On the other hand, strains isolated from diseased horses had predominantly mucoid and honey color colonies (95.2%), with a large capsule (92.8%), unable to ferment any of the sugars (92.8%) and resistant in mean to 2.1 (0-7) antimicrobials classes. A higher proportion of multiresistant strains was observed in the isolates from carrier animals group (13/18 = 72.2%) compared to the group of isolates from diseased animals (5/42 = 11.9%). Biofilm formation capacity was detected in 94.4% of the isolates from diseased animals and 78.6% from carriers, with no difference between the groups. All the equine carriers isolates showed deletion of the eqbE gene and 66.7% of them also in hasA and hasB genes. The loss of these gene loci by isolates from carrier horses had already been reported in another study. Thus, our results complement those of the international literature by associating the genotypic characteristics of the isolates of animal carriers with their phenotypic characteristics, and evidencing differ-ences with those isolated from horses with clinical manifestation. Further studies are needed to elucidate which other events are associated to the persistence of S.equi in the host after clinical cure.

Osmo-, thermo- and ethanol- tolerances of Saccharomyces cerevisiae S1

Saccharomyces cerevisiae S1, which is a locally isolated and improved strain showed viability at 40, 45 and 50ºC and produced ethanol at 40, 43 and 45ºC. When the cells were given heat shock at 45ºC for 30min and grown at 40ºC, 100% viability was observed for 60h, and addition of 200gl-1 ethanol has led to complete cell death at 30h. Heat shock given at 45ºC (for 30min) has improved the tolerance to temperature induced ethanol shock leading to 37% viability at 30h. when the cells were subjected to ethanol (200gl-1 for 30 min) and osmotic shock (sorbitol 300gl-1), trehalose contents in the cells were increased. The heat shocked cells showed better viability in presence of added ethanol. Soy flour supplementation has improved the viability of S. cerevisiae S1 to 80% in presence of 100gl-1 added ethanol and to 60% in presence of 300gl-1 sorbitol. In presence of sorbitol (200gl-1) and ethanol (50gl-1) at 40ºC, 46% viability was retained by S. cerevisiae S1 at 48h and it was improved to 80% by soy flour supplementation.

Essential oil from Cymbopogon citratus (DC) Stapf: a promising natural product against Malassezia spp

This study evaluated the sensitivity of Malassezia spp. strains, the etiologic agent of pityriasis versicolor, to essential oil from Cymbopogon citratus. The chemical composition of the essential oil was analysed by GC-MS, and the major constituents were: geraniol (52.80%), neral (36.65%) and myrcene (3.73%). The minimum inhibitory concentration (MIC) of C. citratus essential oil on to 22 strains of Malassezia spp. were determined by agar dilution technique in the presence and absence of ergosterol (50-250 ìg/mL) and sorbitol (0.8 M). Increased MIC values in the presence of ergosterol indicate an effect on fungal membrane, and the higher MIC values in the presence of sorbitol indicate a mechanism of action on thecell wall. The MIC ranged from 0.31 to 1.25 ìL/mL and it increased fourfold in the presence of ergosterol, regardless of concentration tested; and this fact was most likely related to the occurrence of the oil and exogenous ergosterol complexes. No change in MIC values in the presence of sorbitol was found. The sedata infer that C. citratus essential oil causes an effect on Malassezia spp. plasma membrane synthesis by binding to ergosterol. This study contributes to the development of new antifungal drugs, especially against Malassezia spp. (AU)

ESTUDO COMPARATIVO DE PROCESSO CICATRICIAL CUTÂNEO EM RATOS COM USO DE SOLUÇÃO DE PAPAÍNA A 2% E LASER AlGaInP DE BAIXA POTÊNCIA

O objetivo deste estudo foi avaliar e comparar o tratamento convencional de feridas (GTC) com a Papaína em solução aquosa à 2% estabilizada com sorbitol à 70% (GPC) e a terapia laser de baixa potência (TLBP) de AlGaInP com comprimento de onda de 660nm, com densidade de energia (DE) de 3J/cm2 (GLC) coadjuvante ao tratamento convencional. Os tratamentos comparativos para a cicatrização iniciaram 24 horas após a cirurgia e as avaliações deste estudo ocorreram no 4º, 8º, 15º e 22º dias. Para a avaliação térmica foram captadas imagens por Termografia de Infra vermelho (TIV) e para a avaliação clínica foi usada câmera fotográfica. As feridas foram mensuradas utilizando paquímetro eletrônico digital e os dados analisados estatisticamente por meio do teste de Tukey. Não houve diferença estatística entre os tratamentos, porém foi evidenciada maior contração e epitelização do GPC (13,91%) quando comparado ao GTC (6,03%) e o GLC (8,13%) na fase inflamatória. Não foram detectadas diferenças estatísticas na temperatura das feridas no 4º e 8º dia, porém a média das temperaturas do grupo GLC no 4º dia apresentou queda de 1,4°C e o GPC de 0,7°C na temperatura cutânea em relação ao GTC, evidenciando a aceleração do processo inflamatório através do exame termográfico

The objective of this study was to evaluate and compare conventional wound treatment (GTC) with papain in 2% aqueous solution stabilized with 70% sorbitol combined with conventional treatment (GPC) and Low Power Laser Therapy (TLBP) of AlGaInP with wavelength of 660nm, with energy density (DE) of 3J / cm2 (GLC) associated with conventional treatment. The comparative treatments for cicatrization started 24 hours after surgery and the evaluations of this study occurred on the 4th, 8th, 15th and 22nd days. For the thermal evaluation images were captured by Infra red thermography (TIV) and for the clinical evaluation a photographic camera was used. The wounds were measured using electronic digital caliper and the data analyzed statistically through the Tukey test. There was no statistically significant difference between the treatments, but showed a greater contraction and epithelization of GPC (13.91%) when compared to GTC (6.03%) and GLC (8.13%) in the inflammatory phase. No statistical differences were detected in the temperature of the wounds on the 4th and 8th day, but the average of the GLC group on the 4th day presented a drop of 1.4 ° C and the GPC of 0.7 ° C on the skin temperature in relation to the GTC, evidencing the acceleration of the inflammatory process through thermographic examination.