Anti-Leptospira spp. antibodies in wild mammals in the municipality of Monte Mor, São Paulo State, Brazil / Anticorpos anti-Leptospira spp. em mamíferos silvestres do município de Monte Mor, estado de São Paulo, Brasil

Leptospirosis is a potentially fatal zoonosis caused by Leptospira bacteria. Some animal host species are adapted to specific serovars being potential carriers and environmental dispersers. From 2009 to 2011, 45 wild mammals (39 opossums Didelphis albiventris, four porcupines Sphiggurus villosus, one coypu Myocastor coypus and one capybara Hidrochoerus hidrochaeris) found by citizens in anthropic areas of Monte Mor municipality were captured, restrained and had sera samples collected for Leptospira antibody detection. The samples were titrated by the microagglutination technique (MAT) for different serogroups. A total of 35.56% (16/45) animals were reactive for Leptospira antibodies for 11 different serogroups. The most frequent serovar, among the 12 identified, was Icterohaemorrhagiae (6/16), followed by Gryppotyphosa (4/16) and Pyrogenes (2/16). Didelphis albiventris, the most abundant species in the study, had a prevalence of 35.9% (14/39) for Leptospira antibodies, while S. villosus had 0% (0/4), M. coypus (1/1) and H. hydrochaeris (1/1) 100%. Among the seropositive D. albiventris, 35.71% (5/14) and 28.57% (4/14) seroreacted for Leptospira interrogans species, serogroups Icterohaemorrhagiae and Gryppotyphosa respectively, indicating environmental contamination by these bacteria and the possibility of exposure and infection of humans and domestic animals in the studied area.

A leptospirose é uma zoonose potencialmente fatal causada por bactérias do gênero Leptospira. Espécies animais hospedeiras adaptadas a sorovares específicos podem ser portadoras e dispersoras ambientais da bactéria. De 2009 a 2011, 45 mamíferos silvestres (39 gambás Didelphis albiventris, quatro ouriços Sphiggurus villosus, um ratão-do-banhado Myocastor coypus e uma capivara Hidrochoerus hidrochaeris) encontrados por munícipes em áreas antrópicas de Monte Mor, SP, foram capturados, contidos e tiveram amostras de soro coletadas para detecção de anticorpos para Leptospira. As amostras foram tituladas pela técnica de soroaglutinação microscópica (MAT) para diferentes sorogrupos. Um total de 35,56% (16/45) animais foram reagentes para presença de anticorpos para um total de 11 sorogrupos diferentes. O sorovar dominante mais frequente, dentre os 12 identificados, foi o Icterohaemorrhagiae (6/16), seguido de Gryppotyphosa (4/16) e Pyrogenes (2/16). Didelphis albiventris, espécie mais abundante no estudo, apresentou uma prevalência de 35,9% (14/39) de anticorpos anti-Leptospira, enquanto S. villosus teve 0% (0/4) e ambos M. coypus (1/1) e H. hidrochaeris (1/1) 100%. Dentre os Didelphis albiventris avaliados, houve maior frequência de reatividade sorológica à Leptospira interrogans, sorogrupos Icterohaemorrhagiae, com 35,71% (5/14) e Gryppotyphosa com 28,57% (4/14), indicando contaminação ambiental por tais leptospiras e a possibilidade de exposição e infecção de humanos e animais domésticos para tais bactérias na área estudada.

Anti-Leptospira spp. antibodies in wild mammals in the municipality of Monte Mor, São Paulo State, Brazil / Anticorpos anti-Leptospira spp. em mamíferos silvestres do município de Monte Mor, estado de São Paulo, Brasil

Leptospirosis is a potentially fatal zoonosis caused by Leptospira bacteria. Some animal host species are adapted to specific serovars being potential carriers and environmental dispersers. From 2009 to 2011, 45 wild mammals (39 opossums Didelphis albiventris, four porcupines Sphiggurus villosus, one coypu Myocastor coypus and one capybara Hidrochoerus hidrochaeris) found by citizens in anthropic areas of Monte Mor municipality were captured, restrained and had sera samples collected for Leptospira antibody detection. The samples were titrated by the microagglutination technique (MAT) for different serogroups. A total of 35.56% (16/45) animals were reactive for Leptospira antibodies for 11 different serogroups. The most frequent serovar, among the 12 identified, was Icterohaemorrhagiae (6/16), followed by Gryppotyphosa (4/16) and Pyrogenes (2/16). Didelphis albiventris, the most abundant species in the study, had a prevalence of 35.9% (14/39) for Leptospira antibodies, while S. villosus had 0% (0/4), M. coypus (1/1) and H. hydrochaeris (1/1) 100%. Among the seropositive D. albiventris, 35.71% (5/14) and 28.57% (4/14) seroreacted for Leptospira interrogans species, serogroups Icterohaemorrhagiae and Gryppotyphosa respectively, indicating environmental contamination by these bacteria and the possibility of exposure and infection of humans and domestic animals in the studied area.(AU)

A leptospirose é uma zoonose potencialmente fatal causada por bactérias do gênero Leptospira. Espécies animais hospedeiras adaptadas a sorovares específicos podem ser portadoras e dispersoras ambientais da bactéria. De 2009 a 2011, 45 mamíferos silvestres (39 gambás Didelphis albiventris, quatro ouriços Sphiggurus villosus, um ratão-do-banhado Myocastor coypus e uma capivara Hidrochoerus hidrochaeris) encontrados por munícipes em áreas antrópicas de Monte Mor, SP, foram capturados, contidos e tiveram amostras de soro coletadas para detecção de anticorpos para Leptospira. As amostras foram tituladas pela técnica de soroaglutinação microscópica (MAT) para diferentes sorogrupos. Um total de 35,56% (16/45) animais foram reagentes para presença de anticorpos para um total de 11 sorogrupos diferentes. O sorovar dominante mais frequente, dentre os 12 identificados, foi o Icterohaemorrhagiae (6/16), seguido de Gryppotyphosa (4/16) e Pyrogenes (2/16). Didelphis albiventris, espécie mais abundante no estudo, apresentou uma prevalência de 35,9% (14/39) de anticorpos anti-Leptospira, enquanto S. villosus teve 0% (0/4) e ambos M. coypus (1/1) e H. hidrochaeris (1/1) 100%. Dentre os Didelphis albiventris avaliados, houve maior frequência de reatividade sorológica à Leptospira interrogans, sorogrupos Icterohaemorrhagiae, com 35,71% (5/14) e Gryppotyphosa com 28,57% (4/14), indicando contaminação ambiental por tais leptospiras e a possibilidade de exposição e infecção de humanos e animais domésticos para tais bactérias na área estudada.(AU)

Prevalência de leptospirose em rebanhos bovinos no Pantanal de Mato Grosso do Sul

ABSTRACT: This is an epidemiological study of leptospirosis in 24 month-old females from 246 herds. Two thousand, seven hundred and sixty six (2,766) animals were randomly sampled in the nine counties comprising the region of Pantanal of Mato Grosso do Sul, Brazil. The risk factors associated with the disease were also identified. Blood samples were collected from September to November 2009 and examined by the microscopic agglutination test (MAT) against a collection of 24 live antigens of Leptospira spp., representatives of serovars Australis, Bratislava, Autumnalis, Butembo, Castellonis, Batavie, Canicola Whitcombi, Cynopteri, Grippotyphosa, Hebdomadis, Copenhageni, Icterohaemorrhagiae, Javanica, Panama, Pomona, Pyrogenes, Hardjo, Wolffi, Shermani, Tarassovi, Sentot, Andamana, and Patoc. Additionally, twelve representatives of Leptospira strains isolated in Brazil were added to the collection of antigens for the microscopic agglutination test (MAT). The apparent prevalence was 66% and the actual prevalence of infected animals was 79.80%, with a confidence interval of 95% (78.3 to 81.3) and 241 herds having at least one reactive animal. The most likely serovars were Hardjo followed by Wolffi. Results show that bovine leptospirosis is still present in Pantanal, with high prevalence both in animals and herds, the main risk factors for the disease being the type of cattle farming and breeding.

RESUMO: Foi realizado um estudo epidemiológico da leptospirose em fêmeas acima de 24 meses, provenientes de 246 rebanhos, e 2.766 animais amostrados aleatoriamente nos nove municípios que compõem a região do Pantanal de Mato Grosso do Sul, bem como identificados os fatores de risco associados à doença. As amostras de sangue foram coletadas no período de setembro a novembro de 2009 e examinadas pelo teste de aglutinação microscópica ante uma coleção de 24 antígenos vivos de Leptospira spp., representantes dos sorovares Australis, Bratislava, Autumnalis, Butembo, Castellonis, Batavie, Canicola, Whitcombi, Cynopteri, Grippotyphosa, Hebdomadis, Copenhageni, Icterohaemorrhagiae, Javanica, Panamá, Pomona, Pyrogenes, Hardjo, Wolffi, Shermani, Tarassovi, Sentot, Andamana e Patoc. Adicionalmente, representantes de doze estirpes de leptospiras isoladas no Brasil foram adicionados à coleção de antígenos do teste de soroaglutinação microscópica (SAM). A prevalência aparente foi de 66% e a prevalência real de animais infectados, de 79,80%, com intervalo de confiança (IC) de 95% (78,3-81,3) e 241 rebanhos apresentando pelo menos um animal reagente. Os sorovares mais prováveis foram o Hardjo seguido pelo Wolffi. Os resultados demonstram que a leptospirose bovina continua presente no Pantanal, com alta prevalência tanto em rebanhos quanto em indivíduos, sendo os principais fatores de risco para a doença o tipo de exploração e a raça.

Prevalência de leptospirose em rebanhos bovinos no Pantanal de Mato Grosso do Sul / Prevalence of leptospirosis in cattle herds in the Pantanal of Mato Grosso do Sul

Foi realizado um estudo epidemiológico da leptospirose em fêmeas acima de 24 meses, provenientes de 246 rebanhos, e 2.766 animais amostrados aleatoriamente nos nove municípios que compõem a região do Pantanal de Mato Grosso do Sul, bem como identificados os fatores de risco associados à doença. As amostras de sangue foram coletadas no período de setembro a novembro de 2009 e examinadas pelo teste de aglutinação microscópica ante uma coleção de 24 antígenos vivos de Leptospira spp., representantes dos sorovares Australis, Bratislava, Autumnalis, Butembo, Castellonis, Batavie, Canicola, Whitcombi, Cynopteri, Grippotyphosa, Hebdomadis, Copenhageni, Icterohaemorrhagiae, Javanica, Panamá, Pomona, Pyrogenes, Hardjo, Wolffi, Shermani, Tarassovi, Sentot, Andamana e Patoc. Adicionalmente, representantes de doze estirpes de leptospiras isoladas no Brasil foram adicionados à coleção de antígenos do teste de soroaglutinação microscópica (SAM). A prevalência aparente foi de 66% e a prevalência real de animais infectados, de 79,80%, com intervalo de confiança (IC) de 95% (78,3-81,3) e 241 rebanhos apresentando pelo menos um animal reagente. Os sorovares mais prováveis foram o Hardjo seguido pelo Wolffi. Os resultados demonstram que a leptospirose bovina continua presente no Pantanal, com alta prevalência tanto em rebanhos quanto em indivíduos, sendo os principais fatores de risco para a doença o tipo de exploração e a raça.(AU)

This is an epidemiological study of leptospirosis in 24 month-old females from 246 herds. Two thousand, seven hundred and sixty six (2,766) animals were randomly sampled in the nine counties comprising the region of Pantanal of Mato Grosso do Sul, Brazil. The risk factors associated with the disease were also identified. Blood samples were collected from September to November 2009 and examined by the microscopic agglutination test (MAT) against a collection of 24 live antigens of Leptospira spp., representatives of serovars Australis, Bratislava, Autumnalis, Butembo, Castellonis, Batavie, Canicola Whitcombi, Cynopteri, Grippotyphosa, Hebdomadis, Copenhageni, Icterohaemorrhagiae, Javanica, Panama, Pomona, Pyrogenes, Hardjo, Wolffi, Shermani, Tarassovi, Sentot, Andamana, and Patoc. Additionally, twelve representatives of Leptospira strains isolated in Brazil were added to the collection of antigens for the microscopic agglutination test (MAT). The apparent prevalence was 66% and the actual prevalence of infected animals was 79.80%, with a confidence interval of 95% (78.3 to 81.3) and 241 herds having at least one reactive animal. The most likely serovars were Hardjo followed by Wolffi. Results show that bovine leptospirosis is still present in Pantanal, with high prevalence both in animals and herds, the main risk factors for the disease being the type of cattle farming and breeding.(AU)

Prevalência de leptospirose em rebanhos bovinos no Pantanal de Mato Grosso do Sul / Prevalence of leptospirosis in cattle herds in the Pantanal of Mato Grosso do Sul

Foi realizado um estudo epidemiológico da leptospirose em fêmeas acima de 24 meses, provenientes de 246 rebanhos, e 2.766 animais amostrados aleatoriamente nos nove municípios que compõem a região do Pantanal de Mato Grosso do Sul, bem como identificados os fatores de risco associados à doença. As amostras de sangue foram coletadas no período de setembro a novembro de 2009 e examinadas pelo teste de aglutinação microscópica ante uma coleção de 24 antígenos vivos de Leptospira spp., representantes dos sorovares Australis, Bratislava, Autumnalis, Butembo, Castellonis, Batavie, Canicola, Whitcombi, Cynopteri, Grippotyphosa, Hebdomadis, Copenhageni, Icterohaemorrhagiae, Javanica, Panamá, Pomona, Pyrogenes, Hardjo, Wolffi, Shermani, Tarassovi, Sentot, Andamana e Patoc. Adicionalmente, representantes de doze estirpes de leptospiras isoladas no Brasil foram adicionados à coleção de antígenos do teste de soroaglutinação microscópica (SAM). A prevalência aparente foi de 66% e a prevalência real de animais infectados, de 79,80%, com intervalo de confiança (IC) de 95% (78,3-81,3) e 241 rebanhos apresentando pelo menos um animal reagente. Os sorovares mais prováveis foram o Hardjo seguido pelo Wolffi. Os resultados demonstram que a leptospirose bovina continua presente no Pantanal, com alta prevalência tanto em rebanhos quanto em indivíduos, sendo os principais fatores de risco para a doença o tipo de exploração e a raça.(AU)

This is an epidemiological study of leptospirosis in 24 month-old females from 246 herds. Two thousand, seven hundred and sixty six (2,766) animals were randomly sampled in the nine counties comprising the region of Pantanal of Mato Grosso do Sul, Brazil. The risk factors associated with the disease were also identified. Blood samples were collected from September to November 2009 and examined by the microscopic agglutination test (MAT) against a collection of 24 live antigens of Leptospira spp., representatives of serovars Australis, Bratislava, Autumnalis, Butembo, Castellonis, Batavie, Canicola Whitcombi, Cynopteri, Grippotyphosa, Hebdomadis, Copenhageni, Icterohaemorrhagiae, Javanica, Panama, Pomona, Pyrogenes, Hardjo, Wolffi, Shermani, Tarassovi, Sentot, Andamana, and Patoc. Additionally, twelve representatives of Leptospira strains isolated in Brazil were added to the collection of antigens for the microscopic agglutination test (MAT). The apparent prevalence was 66% and the actual prevalence of infected animals was 79.80%, with a confidence interval of 95% (78.3 to 81.3) and 241 herds having at least one reactive animal. The most likely serovars were Hardjo followed by Wolffi. Results show that bovine leptospirosis is still present in Pantanal, with high prevalence both in animals and herds, the main risk factors for the disease being the type of cattle farming and breeding.(AU)

Occurrence of antibodies against Leptospira spp in dogs from Teresina, Piauí, Brazil / Ocorrência de anticorpos contra Leptospira spp em cães de Teresina, Piauí, Brasil

Leptospirosis is a systemic disease caused by the species of bacteria Leptospira spp., which affects human beings, domestic and wild animals. The present study searched the presence of antibodies against Leptospira spp. in the canine population of the city Teresina, Piauí, and the most common serovars. Blood samples from 425 stray dogs were collected in the local zoonosis center in Teresina from July 2010 to January 2012 and submitted to the Microscopic Seroagglutination Test (MAT). This study found an average infection rate of 17.41% (IC 95%; 13,8 ­ 21,0) by 11 different serovars; the four most frequent were Canicola (18.9%), Autumnalis (16.2%), Icterohaemorrhagiae (12.1%), and Butembo (12.1%). The questions raised in this study indicated the occurrence of Leptospira spp infection in dogs of Terezina- Piaui, Brazil.(AU)

A leptospirose é uma doença sistêmica causada por bactéria Leptospira spp. que afeta seres humanos, animais domésticos e selvagens. O presente trabalho investigou a presença de anticorpos anti-Leptospira spp. na população canina da cidade de Teresina-Piauí, e os respectivos sorovares predominantes. Amostras de sangue de 425 cães foram coletadas no Centro de Controle de Zoonoses de Teresina, no período de julho de 2010 a janeiro de 2012, e submetidas à prova de Soroaglutinação Microscópica (SAM). Este estudo encontrou uma taxa de infecção média com 17,41% (IC 95%; 13,8 ­ 21,0) e 11 sorovares reagentes, sendo os prevalentes Canicola (18,9%), Autumnalis (16,2%), Icterohaemorrhagiae (12,1%) e Butembo (12,1%). As questões levantadas neste estudo indicam a ocorrência de infecção por Leptospira spp em cães da cidade de Teresina-Piauí, Brasil.(AU)

Occurrence of antibodies against Leptospira spp in dogs from Teresina, Piauí, Brazil / Ocorrência de anticorpos contra Leptospira spp em cães de Teresina, Piauí, Brasil

Leptospirosis is a systemic disease caused by the species of bacteria Leptospira spp., which affects human beings, domestic and wild animals. The present study searched the presence of antibodies against Leptospira spp. in the canine population of the city Teresina, Piauí, and the most common serovars. Blood samples from 425 stray dogs were collected in the local zoonosis center in Teresina from July 2010 to January 2012 and submitted to the Microscopic Seroagglutination Test (MAT). This study found an average infection rate of 17.41% (IC 95%; 13,8 ­ 21,0) by 11 different serovars; the four most frequent were Canicola (18.9%), Autumnalis (16.2%), Icterohaemorrhagiae (12.1%), and Butembo (12.1%). The questions raised in this study indicated the occurrence of Leptospira spp infection in dogs of Terezina- Piaui, Brazil.(AU)

A leptospirose é uma doença sistêmica causada por bactéria Leptospira spp. que afeta seres humanos, animais domésticos e selvagens. O presente trabalho investigou a presença de anticorpos anti-Leptospira spp. na população canina da cidade de Teresina-Piauí, e os respectivos sorovares predominantes. Amostras de sangue de 425 cães foram coletadas no Centro de Controle de Zoonoses de Teresina, no período de julho de 2010 a janeiro de 2012, e submetidas à prova de Soroaglutinação Microscópica (SAM). Este estudo encontrou uma taxa de infecção média com 17,41% (IC 95%; 13,8 ­ 21,0) e 11 sorovares reagentes, sendo os prevalentes Canicola (18,9%), Autumnalis (16,2%), Icterohaemorrhagiae (12,1%) e Butembo (12,1%). As questões levantadas neste estudo indicam a ocorrência de infecção por Leptospira spp em cães da cidade de Teresina-Piauí, Brasil.(AU)

Caracterização funcional de quatro termolisinas presentes nas espécies patogênicas de Leptospira

A leptospirose, causada por bactérias patogênicas do gênero Leptospira, é uma doença de importância médica e veterinária altamente difundida em todo mundo. Atualmente, as leptospiras são classificadas em mais de 300 sorovares agrupados em 64 espécies distintas (patogênicas e saprófitas). Estas espiroquetas produzem diversas proteases potencialmente capazes de produzir danos nos tecidos. Hoje, sabemos que proteínas presentes no sobrenadante de cultura de estirpes patogênicas são capazes de degradar diversas moléculas do hospedeiro incluindo proteínas da matriz extracelular, da cascata de coagulação e do sistema complemento, contribuindo para os processos de invasão e evasão imune. A análise dos genomas de leptospiras disponíveis nos levou à identificação de quatro termolisinas, presentes somente nas espécies patogênicas, codificadas pelos genes LIC13320, LIC13321, LIC13322 e LIC10715. Tendo em vista que enzimas da família das termolisinas são fatores cruciais na patogênese de várias doenças causadas por bactérias e representam alvos potenciais para intervenção terapêutica, este projeto teve por objetivo caracterizar funcionalmente essas metaloproteinases de Leptospira. As quatro termolisinas de L. interrogans foram obtidas na forma recombinante e realizou-se também a expressão heteróloga da termolisina codificada pela LIC13322 de L. interrogans (estirpe patogênica) em L. biflexa (estirpe saprófita). Os resultados indicam que as termolisinas de L. interrogans são capazes de degradar diversas proteínas envolvidas na ativação do sistema complemento humano, assim como algumas proteínas da matriz extracelular, e devem, portanto, auxiliar a bactéria nos processos de invasão e evasão imune. A expressão heteróloga da LIC13322 na estirpe saprófita não conferiu resistência ao soro, sugerindo que as termolisinas devem possuir um papel aditivo e certo grau de especificidade de ação.

Leptospirosis, caused by pathogenic bacteria of the genus Leptospira, is a disease of medical and veterinary importance highly widespread worldwide. Currently, leptospires are classified into more than 300 serovars grouped into 64 distinct species (pathogenic and saprophytic). These spirochetes produce several proteases potentially capable of causing tissue damage. Today, we know that proteins present in the culture supernatant of pathogenic strains are able to degrade several host molecules including proteins from the extracellular matrix, the coagulation cascade and the complement system, contributing to the invasion and immune evasion processes. The analysis of the genomes of leptospires available led us to the identification of four thermolysins, present only in pathogenic species, encoded by the genes LIC13320, LIC13321, LIC13322 and LIC10715. Bearing in mind that enzymes of the thermolysin family are crucial factors in the pathogenesis of several diseases caused by bacteria and represent potential targets for therapeutic intervention, this project aimed to functionally characterize these Leptospira metalloproteinases. The four thermolysins of L. interrogans were obtained in recombinant form and the heterologous expression of the thermolysin encoded by LIC13322 of L. interrogans (pathogenic strain) was also carried out in L. biflexa (saprophyte strain). The results indicate that L. interrogans thermolysins are capable of degrading several proteins involved in the activation of the human complement system, as well as some proteins of the extracellular matrix, and should, therefore, assist the bacteria in the processes of immune invasion and evasion. The heterologous expression of LIC13322 in the saprophyte strain did not confer resistance to the serum, suggesting that thermolysins must have an additive role and a certain degree of specificity of action.

SOROPREVALÊNCIA DE ANTICORPOS ANTI-Leptospira EM CÃES NA REGIÃO METROPOLITANA DE GOIÂNIA

Leptospirose é uma zoonose bacteriana infectocontagiosa de distribuição global afetando grande parte dos animais, com destaque aos mamíferos. Dentre estes os cães são hospedeiros que, ao se infectarem, desenvolvendo ou não sinais clínicos, tornam-se reservatórios no meio urbano e rural. Diferentemente de outras bactérias, as leptospiras são usualmente classificadas dentre aproximadamente 250 sorovares, divididos em 24 sorogrupos. Objetivando melhor compreender quais os sorovares mais comuns em cães da região metropolitana Goiânia, foram resgatados os dados do Laboratório de Diagnóstico de Leptospirose da Escola de Veterinária e Zootecnia da Universidade Federal de Goiás. Durante o período que compreende os anos de 2005 à 2014 foram recebidas 104 amostras de soro sanguíneo de cães que apresentavam sintomatologia indicativa de leptospirose. Estas amostras foram submetidas ao teste de Soro Aglutinação Microscópica obedecendo ao Manual of Standars for Diagnostic Tests and Vaccines da OIE. Os materiais que apresentaram aglutinação a partir de diluição 1:100 foram considerados e reunidos para avaliação. Dentre o total de amostras, 39,42% apresentaram-se soropositivas principalmente para os sorovares Andamana, Canicola, Copenhageni, Grippotyphosa, Hardjo, Icterohaemorrhagiae e Wolf. O sorovar mais detectado foi o Grippotyphosa, com 37% de ocorrência, seguidos por Andamana, Copenhageni

AGLUTININAS ANTI-Leptospira spp EM SUÍNOS ABATIDOS EM MATADOURO-FRIGORÍFICO

A leptospirose assume grande importância econômica em criações de suínos, devido às grandes perdas e aos transtornos reprodutivos ocasionados pela doença. As sorovariedades mais envolvidas na infecção dos suínos são: Pomona, Icterohaemorrhagiae, Canicola, Gryppotyphosa, Bratislava e Copenhageni.. Assim, pretendeu-se com o presente trabalho determinar a frequência das sorovariedades presentes e a distribuição espacial da Leptospira spp. em suínos em determinadas mesorregiões de alguns estados brasileiros. Foram colhidas 549 amostras de sangue de suínos em matadouros-frigoríficos das mesorregiões: Norte Pioneiro Paranaense (PR), Centro-Sul Paranaense (PR), Oeste Catarinense (SC) microrregiões Chapecó, Joaçaba e Concórdia , Sudoeste de Mato Grosso do Sul (MS), Ribeirão Preto (SP), Sul Goiano (GO). As amostras de soro sanguíneo foram submetidas ao teste de soroaglutinação microscópica (SAM), para o diagnóstico da leptospirose, utilizando 24 sorovares de leptospiras (patogênicas e saprófitas). Foram observados 217 (39,5%) suínos sororreagentes a pelo menos uma das 24 sorovariedades testadas, com título igual ou superior a 100. Os sorovares predominantes foram Icterohaemorrhagiae nos estados de Goiás (44,8% - Sul ), Mato Grosso do Sul (18,5% - Sudoeste) e Paraná (10,1% -Norte Pioneiro e 55,2%-Centro Sul). Em Santa Catarina houve predominância de Icterohaemorrhagiae (40,5% - Chapec

CARACTERIZAÇÃO SOROEPIDEMIOLÓGICA DA LEPTOSPIROSE EM BOVINOS ABATIDOS EM FRIGORÍFICOS DO SUDOESTE GOIANO

A leptospirose é uma zoonose de grande importância em saúde pública. Além disso, a Leptospira sp. é considerada uma das bactérias mais relacionadas com problemas reprodutivos em bovinos. O objetivo deste trabalho foi investigar a frequência da leptospirose em bovinos provenientes de 14 dos 18 munícipios presentes na região do Sudoeste Goiano. Foram analisadas 2.006 amostras de soro sanguíneo por meio do teste de soroaglutinação microscópica (SAM), perante uma bateria de 32 sorovares de leptospira, em que, eram considerados positivos títulos iguais ou superiores a 100. A frequência da leptospirose bovina nessa região foi 70,1%. O sorovar mais provável foi o Guaricura (30,80%), seguido dos sorovares Wolffi (30,51%), Shermani (9,39%), Hardjo (7,54%), Bananal (4,27%) e Pomona (3,27%). O resultado obtido demostra que a Leptospirose está amplamente difundida entre os bovinos desta região, verificando assim, a importância da implementação de medidas de controle eficientes e direcionadas para as principais fontes de infecção, sendo a vacinação sistemática com a utilização dos sorovares prevalentes na região uma das mais importantes medidas para prevenção da leptospirose.

Leptospirosis is a great of importance in public health zoonosis, Leptospira sp. it is considered to be one of the most responsible bacterias for reproductive problems in cattle. The objective of this study was to investigate the frequency of leptospirosis in cattle from 14 of the 18 districts in the Southwest region of the state of Goias. A total of 2,006 blood serum samples were analyzed by the microscopic serum agglutination test (SAM) against a battery of 32 leptospira serovars, where titers of 100 or greater were considered positive. The frequency of bovine leptospirosis in this region was 70.1 %. The most probable serovar was Guaricura (30.80%), followed by Wolffi (30.51%), Shermani (9.39%), Hardjo (7.54%), Bananal (4.27%) and Pomona serovars. (3.27%). The results shows that Leptospirosis is widespread among cattle in this region, therefore, this verifies the importance of implementing efficient and targeted control measures for the main sources of infection, being systematic vaccination with use of serovars prevalente in the region one of most importante measures for the prevention of leptospirosis.

LEPTOSPIROSE CANINA NO MUNICÍPIO DE FRANCO DA ROCHA, SP

A leptospirose é uma zoonose com distribuição mundial que afeta várias espécies,incluindo animais domésticos, silvestres e os seres humanos. Causada porespiroquetas patogênicas do gênero Leptospira. A doença é endêmica nos países tropicais, mas também ocorre em zonas subtropicais e temperadas e sua ocorrência é favorecida pelas condições geoclimáticas e sociais, que facilitam a transmissão e contribuem para crescente incidência da doença. A leptospirose tem sido reconhecida como um importante problema emergente de saúde pública global e os cães também podem desempenhar um papel importante na manutenção das leptospiras no ambiente urbano e na sua transmissão aos seres humanos devido ao contato próximo com estes. Os cães errantes e os cães de abrigo são consideradosos mais suscetíveis à infecção por leptospiras devido a um maior grau de exposição ambiental ao agente/patógeno. Este projeto tem como objetivo realizar um estudo sobre a leptospirose canina no município de Franco da Rocha, SP por meio de um levantamento sorológico e do isolamento de leptospiras e para isso, foram coletadas207 amostras de sangue e seis amostras de urina de cães errantes, comunitários e de abrigo do município. Foram sororreagentes 36 do total de 207 cães (17,39%) para pelo menos um sorovar testado, com títulos variando de 100 a 12800. Seis cães (16,66%) foram sororreativos com títulos 800 e 4 cães (11,11%) apresentaram reações cruzadas para até oito sorovares diferentes. O sorovar mais frequente foi o Canicola com 12 amostras (33,33%), seguidos do sorovar Butembo com 9 amostras (25,0%) e Australis com 3 amostras (8,33%), os sorovares Hardjo, Icterohaemorrhagiae, Pomona e Sentot foram sororreagentes com duas amostras cada (5,55%) e os sorovares Castellonis, Hebdomadis e Hardjobovis apresentaram uma amostra reagente (2,17%). No entanto o título mais alto foi detectado contra o sorovar Butembo. Os cultivos bacterianos de leptospiras das amostras de urinas coletadas foram negativos. Os resultados sugerem que a população canina pode desempenhar um papel importante na infecção por leptospiras para diversas espécies nesta região.

Leptospirosis is a zoonosis with worldwide distribution that affects several species, including domestic animals, wild animals and humans. It is caused by pathogenic spirochetes of the genus Leptospira. The disease is endemic in tropical countries, but it also occurs in subtropical and temperate zones and its occurrence is favored by geoclimatic and social conditions, which facilitate transmission and contribute to the increasing incidence of the disease. Leptospirosis has been recognized as an important emerging global public health problem and dogs can alsoplay an important role in maintaining leptospires in the urban environment and in transmitting them to humans due to close contact with them. Stray dogs and shelter dogs are considered to be the most susceptible to leptospiral infection due to a greater degree of environmental exposure to the agent / pathogen. This project aims to conduct a study on canine leptospirosis in the municipality of Franco da Rocha, SP by means of a serological survey and isolation of leptospires and for this purpose, 207 blood samples and six urine samples from community stray dogs were collected and shelter in the municipality. 36 out of 207 dogs (17.39%) were seroreactive for at least one tested serovar, with titers ranging from 100 to 12800. Six dogs (16.66%) were seroreactive with titers 800 and 4 dogs (11,11 %) presented cross reactions for up to eight different serovars. The most frequent serovar was Canicola with 12 samples (33.33%), followed by Butembo serovar with 9 samples (25.0%) and Australis with 3 samples (8.33%), Hardjo, Icterohaemorrhagiae, Pomona and Sentot were seroreactive with two samples each (5.55%) and the serovars Castellonis, Hebdomadis and Hardjobovis presented a reagent sample (2.17%). However, the highest titer was detected against the Butembo serovar. The bacterial leptospiral cultures of the collected urine samples were negative. The results suggest that this canine population may play an important role in leptospiral infection for several species in this region.

DESENVOLVIMENTO DE ESTRATÉGIAS DE CULTURA PARA ISOLAMENTO DE LEPTOSPIRAS FASTIDIOSAS E USO DE BIOINFORMÁTICA PARA DESCOBERTA DE NOVOS ALVOS VACINAIS E DROGÁVEIS PARA CONTROLE DA LEPTOSPIROSE ANIMAL

A leptospirose, causada por espiroquetas do gênero Leptospira, é uma zoonose globalmente disseminada, negligenciada e emergente. O isolamento de leptospiras é o primeiro passo para sua caracterização molecular e genotipagem, no entanto, para os sorovares mais fastidiosos, a cultura e isolamento são controversos e laboriosos. Com relação ao controle e tratamento da leptospirose, muitos estudos são realizados, mas ainda não existe uma vacina eficaz contra todas as espécies patogênicas ou variedade de antimicrobianos com atuação sobre o quadro de leptospirúria. Assim o presente estudo visou primeiramente desenvolver estratégias de cultura e isolamento para as leptospiras fastidiosas e utilizar métodos rápidos de diagnóstico molecular para caracterização e tipificação dos sorovares. Posteriormente, a partir do isolamento de novas estirpes, o sequenciamento genômico foi realizado com a finalidade de obtenção de dados de genômica comparativa com outras estirpes disponíveis no GenBank para uma busca in silico de alvos drogáveis e vacinais. No primeiro estudo, três formulações de meios de cultura líquidos básicos foram produzidas para isolar e manter leptospiras. Em cada formulação (A, B e C) foram adicionados diferentes suplementos para ajudar no crescimento de leptospiras fastidiosas: piruvato de sódio, enzima superóxido dismutase e soro fetal bovino. Durante o período aproximado de 55 dias, adotou-se estratégias de troca entre as três formulações de acordo com a observação em microscopia de campo escuro e ao final desse período houve sucesso no isolamento de três estirpes do sorovar Hardjo (dois genotipos, Hardjobovis e Hardjoprajitno) com adaptação total ao meio de cultura. Posteriormente, estas culturas foram avaliadas com uso da microscopia eletrônica e notou-se diferenças na morfologia e viabilidade de acordo com a composição do meio. No segundo estudo, os genomas desses dois genotipos foram sequenciados, montados e depositados no GenBank. A partir desses dados e também de outros genomas de outras espécies de Leptospira foi possível realizar uma abordagem de com base na vacinologia reversa, genômica comparativa e de docking molecular com o uso de ferramentas de bioinformática. Para os alvos vacinais, os resultados com base nas características da probabilidade de adesão, TMHMM e densidade de epítopos, sugerem que cinco alvos são bons candidatos e podem ser testados rapidamente em novas formulações de vacinas e posteriormente testados in vivo. Para a etapa de docking molecular, oito proteínas preditas como citoplasmáticas e identificadas como essenciais para a sobrevivência de leptospiras foram consideradas bons alvos para novos medicamentos. Destacando a proteína de divisão celular FtsZ, que foi o alvo identificado com as melhores características de ligação e, por meio de uma triagem virtual, o ZINC04259719 foi identificado como a melhor molécula para ligar a essa proteína, a fim de inibir sua função eliminando o patógeno. A vacinologia reversa e o docking molecular são poderosas ferramentas de bioinformáticas que possibilitam uma busca rápida e sem procedimentos laboriosos, por alvos proteicos específicos que possam ser candidatos a uma nova vacina ou medicamento no controle da leptospirose.

Leptospirosis, caused by spirochetes of the genus Leptospira, is a globally widespread, neglected and emerging zoonosis. The leptospires isolation is the first step towards its molecular characterization and genotyping, however, for the most fastidious serovars, the culture and isolation are controversial and laborious. Regarding the control and treatment of leptospirosis, many studies have been carried out, but there is not yet an efficient vaccine against all pathogenic species or more variety of antimicrobials acting on leptospiruria. Thus, the present study aimed primarily to develop culture and isolation strategies for fastidious leptospires and using rapid molecular diagnostic methods for characterization and typing of serovars. Subsequently, from the isolation of new strains, genomic sequencing was carried out in order to obtain comparative genomic data with other strains available at GenBank for an in silico search for drug and vaccine targets. In the first study, three formulations of basic liquid culture media were produced to isolate and maintain leptospires. In each formulation (A, B and C) different supplements were added to help the growth of fastidious leptospires: sodium pyruvate, superoxide dismutase enzyme and fetal bovine serum. During the approximate period of 55 days, exchange strategies were adopted between the three formulations according to the observation in dark field microscopy and at the end of this period, there was success in the isolation of three strains of serovar Hardjo (two genotypes, Hardjobovis and Hardjoprajitno) with total adaptation to the culture medium. Subsequently, these culture was evaluated through electron microscopy and differences in morphology and viability were noted according to the composition of the medium. In the second study, the genomes of these two genotypes were sequenced, assembled and deposited on GenBank. From these data and also from other genomes of Leptospira species, it was possible to carry out an approach based on reverse vaccinology, genomic comparative and molecular docking with the use of bioinformatics tools. For vaccine targets, results based on characteristics of probability of adherence, TMHMM and epitope density, suggest that five targets are good candidates and can be tested quickly in new vaccine formulations and subsequently tested in vivo. For the molecular docking step, eight proteins predicted as cytoplasmic and considered essential for the survival of leptospires were considered good targets for new drugs. Highlighting the cell division protein FtsZ, which was the target identified with the best binding characteristics and through a virtual screening the ZINC04259719 was identified as the best molecule for linked to this protein in order to inhibit its function and consequently eliminating the microorganism. Reverse vaccinology and molecular docking are powerful bioinformatics tools that enable a quick discovery, without laborious procedures, for specific protein targets that may be candidates for a new vaccine or therapeutic target to leptospirosis control.

ESTUDO DA LEPTOSPIROSE EM PEQUENOS RUMINANTES NO BIOMA CAATINGA

A leptospirose é uma enfermidade de caráter zoonótico, que apresenta ampla distribuição mundial, sendo apontada como uma das enfermidades mais frequentes que provocam distúrbios reprodutivos nos pequenos ruminantes. O objetivo do trabalho foi determinar a frequência de caprinos fêmeas e ovinos machos soropositivos para pesquisa de anticorpos anti-Leptospira spp., bem como identificar os sorogupos predominantes no Semiárido paraibano, detectar DNA de Leptospira spp. e isolamento bacteriológico de Leptospira sp., no trato urinário de caprinos fêmeas e ovinos machos abatidos no matadouro público de Patos, PB. Descreve-se 34 fêmeas adultas da espécie caprina no capítulo I e 24 machos adultos da espécie ovina no capítulo II. Coletou-se amostras de tecido renal e bexiga na linha de abate para posterior detecção molecular por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR) e isolamento bacteriológico. As amostras com melhores reações foram amplificadas e submetidas ao sequenciamento genético. O sangue coletado foi destinado à investigação sorológica por meio do teste de aglutinação 2 microscópica (SAM), utilizando-se 24 sorovares como antígenos e ponto de corte 1:100. 2No capítulo I a frequência de sororeativos encontrada foi de 17,6 %, com títulos variando entre 100 a 200. Os sorovares Autumnalis, Icterohaemorrhagiae, Tarassovi foram os mais frequentes nesse estudo com 33,3% cada. Na PCR foi encontrado DNA leptospírico em 2 17,6% das amostras de tecido renal e 5,8% de bexiga. Foi possível realizar o sequenciamento em uma amostra de tecido renal com 99% de similaridade à L. interrogans e isolamento em duas amostras de tecido renal (5,8%) e uma de bexiga (2,9%). No Capítulo II não foi encontrado animal sororeativo. Na PCR foi encontrado DNA leptospírico em 16,0% das amostras de tecido renal e 41,6% de bexiga. Foi possível realizar o sequenciamento em três amostras de tecido renal com 99% de similaridade à L. interrogans e isolamento em duas amostras de tecido renal (8,3%) e duas de bexiga (8,3%). Conclui-se que o trato urinário é um importante local de colonização de leptospiras em pequenos ruminantes criados no semiárido nordestino. Os resultados moleculares demonstram a grande quantidade de animais assintomáticos portadores de leptospiras, enfatizando a necessidade de associar a MAT e PCR para um seguro diagnóstico da leptospirose em caprinos e ovinos.

Leptospirosis is a disease of a zoonotic character, which has a wide worldwide distribution, was identified as one of the most frequent illnesses that cause reproductive disorders in small ruminants. The objective of the work was to determine the frequency of seropositive female goats and male sheep to search for anti-Leptospira spp. Antibodies, as well as to identify the predominant serogroups in the Semi-arid of Paraiba, to detect Leptospira spp DNA. and bacteriological isolation of Leptospira sp., in the urinary tract of female goats and male sheep slaughtered in the public slaughterhouse in Patos, PB. 34 adult females of the caprine species were described in Chapter I and 24 adult males of the sheep species in chapter II. Samples of kidney and bladder tissue were collected in the slaughter line for later molecular detection through polymerase chain reaction (PCR) and bacteriological isolation. The samples with the best response were amplified and subjected to genetic sequencing. The blood collected was used for serological investigation using the microscopic agglutination test (SAM), using 24 serovars as antigens and a cut-off point of 1: 100. In Chapter I, the frequency of seroreactivity found was 17.6%, with titers ranging from 100 to 200. The serovars Autumnalis, Icterohaemorrhagiae, Tarassovi were the most frequent in this study by 33.3% each. In PCR, leptospiral DNA was found in 17.6% of renal tissue samples and 5.8% of the bladder. It was possible to perform the sequencing in a sample of renal tissue with 99% similarity to L. interrogans and isolation in two samples of renal tissue (5.8%) and one of the bladders (2.9%). In Chapter II, no seroreactive animal was found. In PCR, leptospiral DNA was found in 16.0% of the renal tissue samples and 41.6% of the bladder. It was possible to perform the sequencing in three selected renal tissue with 99% similarity to L. interrogans and isolation in two samples of renal tissue (8.3%) and two of the bladder (8.3%). We conclude that the urinary tract is a necessary site for the colonization of leptospires in small ruminants raised in the Northeast semiarid. The molecular results show a large number of asymptomatic animals with leptospires, require to associate MAT and PCR for a safe diagnosis of leptospirosis in goats and sheep.

Search of leptospires and of antibodies against leptospires in animals and human beings in farms in Pantanal and Caatinga Brazilian biomes / Pesquisa de leptospiras e de anticorpos contra leptospiras em animais e humanos de propriedades rurais nos biomas brasileiros Pantanal e Caatinga

The occurrence of Leptospira and of seroreactivity against Leptospira was investigated in animals and humans from six farms located in two Brazilian biomes that have different geoclimatic conditions: Pantanal municipalities of Miranda (MS), Itiquira (MT) and Pocone (MT) and Caatinga municipalities of Sobradinho (BA), Garanhuns (PE) and Sobral (BA). Blood and urine samples of wildlife, domestic animals and humans were collected at each property. The samples were collected from February to April 2012 in Caatinga and from July to September 2012 in Pantanal. The serological reactivity against Leptospira spp. was verified by microscopic agglutination technique (MAT) made with a collection consisting by 24 antigens of Leptospira spp. The leptospires research was carried out by urine samples crop sown in Fletcher resources and Ellinghausen McCullough Johnson Harris (EMJH). Crops with growth of leptospires were referred to the Leptospirosis Laboratory of the Institute of Pathobiology, National Institute of Agricultural Technology, Buenos Aires, Argentina and isolated Leptospira strains were genotyped with the technique of Multiple Locus Variable Number Tandem Repeat Analysis (MLVA). The classification procedure employed the VNTR 4, 7, 9, 10, 19, 23, 31, LB4 and LB5, which discriminate strains of L. interrogans and L. borgpetersenii. In Pantanal, 17 wildlife, 65 domestic animals and two humans were examined. In Caatinga, seven wild animals were examined, along with 100 domestic animals and 26 humans. Of 84 blood samples tested in Pantanal, 47 (55.95%) were positive and, of 133 in Caatinga, 59 (44.36%) were reactant. By Fishers exact test, considering a 0.05 significance level, there was no difference between the proportions of serum reagent animals against Leptospira spp. in two biome reviews (p = 0.063). The predominant serovars in SAM reactions were: 1) Pantanal Bratislava (wildlife, dogs and humans), Grippotyphosa (horses and cattle); 2) Caatinga Copenhageni (humans and dogs), Patoc (horses and cattle), Panama (sheep and goats), Patoc, Copenhageni and Australis (wildlife). Four strains of Leptospira were isolated: two in Sobradinho, BA, L. interrogans serogroup Pomona in Cavea aperea and L. interrogans in Euphractus sexcinctus; and two in Sobral, CE, L. interrogans in Cerdocyon thous and L. interrogans serogroup Pomona in Euphractus sexcinctus.(AU)

Foi investigada a ocorrência de leptospiras e de sororreatividade para leptospiras em animais e seres humanos de seis propriedades rurais localizadas em dois biomas brasileiros que apresentam condições geoclimáticas distintas: Pantanal municípios de Miranda (MS), Itiquira (MT) e Poconé (MT) e Caatinga municípios de Sobradinho (CE), Garanhuns (PE) e Sobral (BA). Em cada uma das propriedades, foram realizadas colheitas de sangue e de urina de animais selvagens de vida livre, animais domésticos e de seres humanos. As colheitas de materiais foram realizadas no período de fevereiro a abril de 2012 no bioma Caatinga e no período de julho a setembro de 2012 no bioma Pantanal. A reatividade sorológica contra Leptospira spp. foi verificada pela técnica de soroaglutinação microscópica (SAM) efetuada com uma coleção de antígenos constituída por 24 sorovares de Leptospira spp. A pesquisa de leptospiras foi efetuada por cultivos de amostras de urina semeadas nos meios Fletcher e de Ellinghausen McCullough Johnson Harris (EMJH). Os cultivos em que houve crescimento de leptospiras foram encaminhados ao Laboratório de Leptospirose do Instituto de Patobiologia, Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuária, Buenos Aires, Argentina e as estirpes de leptospiras isoladas foram genotipadas com o emprego da técnica de Multiple Locus Variable Number Tandem Repeat Analysis (MLVA). O procedimento de tipificação empregou os VNTR 4, 7, 9, 10, 19, 23, 31, Lb4 e Lb5, que discriminam estirpes de L. interrogans e L. borgpetersenii. No Pantanal, foram examinados 17 animais selvagens, 65 animais domésticos e dois humanos. Na Caatinga, foram examinados sete animais selvagens, 100 animais domésticos e 26 humanos. Das 84 amostras de sangue examinadas no Pantanal, 47 (55,95%) foram reagentes e, das 133 da Caatinga, 59 (44,36%) foram reagentes. Pelo teste exato de Fisher, considerando-se um nível de significância de 0,05, não houve diferença entre as proporções de animais sororreagentes para Leptospira spp. nos dois biomas avaliados (p = 0,063). Os sorovares predominantes nas reações de SAM foram: 1) Pantanal Bratislava (animais selvagens, cães e humanos); Grippotyphosa (equinos e bovinos); 2) Caatinga Copenhageni (humanos e cães), Patoc (equinos e bovinos), Panama (ovinos e caprinos), Patoc, Copenhageni e Australis (animais selvagens). Houve isolamento de quatro estirpes de leptospiras: duas em Sobradinho, BA, L. interrogans sorogrupo Pomona em Cavea aperea e L. interrogans em Euphractus sexcinctus; e duas em Sobral, CE, L. interrogans em Cerdocyon thous e L. interrogans sorogrupo Pomona em Euphractus sexcinctus.(AU)

OCORRÊNCIA DE ANTICORPOS ANTI-Leptospira spp. EM MAMÍFEROS SILVESTRES DA REGIÃO METROPOLITANA DE CAMPINAS, AGLOMERADO URBANO DE JUNDIAÍ E UNIDADE REGIONAL BRAGANTINA, ESTADO DE SÃO PAULO

Objetivou-se verificar a ocorrência de anticorpos anti-Leptospira spp. em mamíferos silvestres de vida livre da Região Metropolitana de Campinas RMC (20 municípios), do Aglomerado Urbano de Jundiaí AUJ (sete municípios) e da Unidade Regional Bragantina URB (11 municípios), localizadas no Estado de São Paulo. Para tanto, foram utilizadas amostras de soros sanguíneos de 267 mamíferos pertencentes a 26 espécies, 17 famílias e oito ordens (Carnivora, Cetartiodactyla, Cingulata, Didelphimorphia, Lagomorpha, Pilosa, Primates e Rodentia) que foram colhidas na Associação Mata Ciliar, no período de 2012 a 2019. Os soros foram examinados por meio do Teste de Aglutinação Microscópica (MAT) com uma coleção de 24 antígenos vivos de leptospiras dos seguintes sorovares e variantes sorológicas: Australis (Australis e Bratislava), Autumnalis (Autumnalis e Butembo), Batavia (Bataviae), Ballum (Castellonis) , Canicola, Celledoni (Whitcombi), Cynopteri, Djasiman (Sentot), Grippotyphosa, Hebdomadis, Icterohaemorrhagiae (Copenhageni e Icterohaemorrhagiae), Javanica, Panama, Pomona (Pomona), Pyrogenes, Sejroe (Guaicura, Harjo e Hardjobovis), Shermani e Tarassovi. Os soros foram triados na diluição de 1:100 (ponto de corte), e os que apresentaram 50% ou mais de aglutinação foram titulados em uma série de diluições geométricas de razão dois. Dentre os soros examinados, 11 (4,1%) foram soropositivos para anticorpos anti-Leptospira spp. No total, foram 11 mamíferos soropositivos: três cachorros-do-mato (Cerdocyon thous), dois lobos-guará (Chrysocyon brachyurus), dois veados-catingueiros (Mazama gouazoubira), um ouriço-cacheiro (Sphiggurus villosus), uma capivara (Hydrochoerus hydrochaeris), um gambá-de-orelha-branca (Didelphis albiventris) e um sagui-de-tufo-preto (Callithrix penicillata). Os sorovares mais prevalentes de acordo com as espécies analisadas foram: cachorro-do-mato (Pomona), lobo-guará (Australis e Icterohaemorrhagiae), ouriço-cacheiro (Autumnalis), capivara (Panama), veado-catingueiro (Panama e Canicola), gambá-de-orelha-branca (Sejroe) e sagui-de-tufo-preto (Autumnalis). Considerando a região, os mamíferos soropositivos da RMC foram oriundos dos municípios de Itatiba e Pedreira, do AUJ de Jundiaí e Louveira e da URB de Atibaia e Bragança Paulista. Esta pesquisa representou o primeiro inquérito sorológico da leptospirose nestas três regiões geográficas de São Paulo.

The objective was to verify the occurrence of anti-Leptospira spp. antibodies in free-living wild mammals in the regions of the Campinas Metropolitan Region - RMC (20 municipalities), Jundiaí Urban Agglomerate - AUJ (seven municipalities), and Bragantina Regional Unit - URB (11 municipalities), State of São Paulo, Brazil. For this purpose, 267 blood serum samples from 26 species, 17 families and eight orders (Carnivora, Cetartiodactyla, Cingulata, Didelphimorphia, Lagomorpha, Pilosa, Primates and Rodentia) were used. In order to obtain more samples (n=62), the mammals were restrained according to the specific protocol for each species. The blood serum were was examined by the Microscopic Agglutination Test (MAT) with a collection of 24 live leptospiral antigens from the following serogroups and serological variants: Australis (Australis and Bratislava), Autumnalis (Autumnalis and Butembo), Batavia (Bataviae), Ballum (Castellonis), Canicola, Celledoni (Whitcombi), Cynopteri, Djasiman (Sentot), Grippotyphosa, Hebdomadis, Icterohaemorrhagiae (Copenhageni and Icterohaemorrhagiae), Javanica, Panama, Pomona (Pomona), Pyrogenes, Sejroe (Guaicura, Harjo and Hardjobovis), Shermani, and Tarassovi. The sera were screened at a 1: 100 dilution (cut off), and those with 50% or more agglutination were titrated in a series of geometric dilutions of ratio two. Among the examined sera, 11 (4.1%) were seropositive for anti-Leptospira spp. antibodies. In total, there were 11 seropositive mammals: three crab-eating fox (Cerdocyous thous), two maned wolves (Chrysocyon brachyurus), two brown brocket (Mazama gouazoubira), an orange-spined hairy dwarf porcupine (Sphiggurus villosus), a capybara (Hydrochoerus hydrochaeris), a white-eared opossum (Didelphis albiventris) and a black-tufted marmoset (Callithrix penicillata). The detected serovars according to the analyzed species were: crab-eating fox (Pomona), maned wolf (Australis and Icterohaemorrhagiae), orange-spined hairy dwarf porcupine (Autumnalis), capybara (Panama), brown brocket (Panama and Canicola), white-eared opossum (Sejroe) and black-tufted marmoset (Autumnalis). Considering the region, the seropositive mammals from RMC came from the municipalities of Itatiba and Pedreira, AUJ from Jundiaí and Louveira and URB from Atibaia and Bragança Paulista. This research represented the first serological survey of leptospirosis in these three geographic regions of the State of São Paulo.

Estudio serológico de la infección por Leptospira spp. en gatos / Serological study of Leptospira Spp. infection in cats / Estudo soroepidemiológico da infecção por Leptospira spp. em gatos

La leptospira se destaca dentro de las zoonosis de mayor importancia debido a su amplia distribución geográfica y por tener su ocurrencia favorecida principalmente en localidades con climas tropicales y subtropicales, con altos índices pluviométricos y altas temperaturas. En felinos la leptospirosis es de ocurrencia rara, no se presenta especificidad por reacción con diferentes serotipos de Leptospiraspp. Son considerados más resistentes a la infección. Aunque ya fue comprobada experimentalmente la ocurrencia de leptospiruria en gatos inoculados con la bacteria sin manifestación de síntomas. El objetivo del presente estudio fue la búsqueda de anticuerpos frente a diferentes serovares de leptospiras por la prueba de seroaglutinación microscópica en sueros de 155 felinos domésticos. Ninguna de las muestras analizadas revelo seropositividad para los 13 serovares analizados.(AU)

Leptospirosis is pointed out between the most important zoonosis due to its wide geographic distribution and for having its ocurrence favored in tropical and subtropical climates, with present high temperatures and rain indexes. In cats, leptospirosis is unsual, not present specificity because they react to different types of Leptospira spp. They are considered more resistents to the infection. However, was proved the occurence of Leptospira spp. in the urine of cats experimentally inoculated with the bactéria with no clinical signs. The aim of this study was the research of antibodies face to different leptospira sorovars by the Agglutination Test in blood serum of 155 domestic cats. None of the evalueted samples showed serum positivety to the 13 tested sorovars.(AU)

A leptospirose destaca-se dentre as zoonoses de maior importância devido à sua ampla distribuição geográfica e por ter sua ocorrência favorecida principalmente em locais com climas tropicais e subtropicais, com altas temperaturas e índices pluviométricos.  Em felinos, a leptospirose é de ocorrência rara, não apresentando especificidade por reagirem com diferentes sorotipos de Leptospira spp.. São considerados mais resistentes à infecção. Porém, já foi comprovada experimentalmente a ocorrência de leptospirúria em gatos inoculados com a bactéria sem que manifestação de sintomas. O objetivo do presente estudo foi a pesquisa de anticorpos frente a diferentes sorovares de leptospiras pela prova de Soroaglutinação Microscópica em soros de felinos atendidos em dois Hospitais Veterinários da UNESP (Botucatu e Araçatuba). Nenhuma das amostras avaliadas revelou soropositividade para os 13 sorovares avaliados.(AU)

Occurrence of antibodies against Leptospira spp. in free-ranging wild canids from the Brazilian savanna / Ocorrência de anticorpos contra Leptospira spp. em canídeos selvagens de vida livre do cerrado brasileiro

The Brazilian savanna, also known as Cerrado, is one of the world's richest and most ecologically invaluable tropical savanna regions. There are few studies in Brazil about the diseases that affect the wild canids of this biome, which may be harmful to wildlife populations and public health. The aim of this study was to evaluate the occurrence of antibodies against Leptospira spp. in three Cerrado wild canids species using the microscopic agglutination test (MAT). Serum samples were tested from 19 crab-eating foxes (Cerdocyon thous), 14 maned wolves (Chrysocyon brachyurus), and seven hoary foxes (Lycalopex vetulus), all free-ranging animals found in the municipalities of Araguari and Uberlândia, Minas Gerais State, and Cumari, Goiás State, Brazil. Fourteen (35%) of these samples were seropositive. The most frequent serovars detected in the samples were Copenhageni and Hardjo, but reactions to the serovars Autumnalis, Grippotyphosa, Hebdomadis, Wolffi, and Icterohaemorrhagiae also occurred. Notwithstanding other reported results, this study is the first to report the presence of antibodies against Leptospira spp. in L. vetulus. The three species of wild canids examined may act as potential hosts for several serovars of leptospira in Brazil's savanna environment.(AU)

O cerrado é a mais diversificada savana tropical do mundo e constitui grande importância ecológica. Ainda assim, são poucos os estudos realizados no Brasil a respeito das doenças que acometem os canídeos desse bioma, o que causa prejuízos à população de animais selvagens e à saúde pública. Essa pesquisa foi realizada com o objetivo de avaliar a ocorrência de anticorpos contra Leptospira spp. em três espécies de canídeos selvagens do cerrado brasileiro utilizando o teste de soroaglutinação microscópica (SAM). Foram testadas amostras de soro sanguíneo de 19 cachorros-do-mato (Cerdocyon thous), 14 lobos guarás (Chrysocyon brachyurus) e sete raposas-do-campo (Lycalopex vetulus) de vida livre das regiões de cerrado de Araguari e Uberlândia, MG, e Cumari, GO. Dessas 40 amostras, 14 (35%) foram soropositivas. Os sorovares detectados com maior frequência foram Copenhageni e Hardjo, porém evidenciou-se também reação aos sorovares Autumnalis, Grippotyphosa, Hbedomadis, Wolffi e Icterohaemorrhagiae. Esse trabalho foi o primeiro a relatar a presença de anticorpos anti-Leptospira spp. em L. vetulus e verificou-se que as três espécies de canídeos utilizadas nessa pesquisa podem atuar como possíveis hospedeiros de diversos sorovares de leptospiras no ambiente de cerrado.(AU)

Detección de anticuerpos y ADN de Leptospira spp. en suero canino / Antibodies and DNA detection of Leptospira spp. in canine serum / Pesquisa de anticorpos e DNA de Leptospira spp. em soro canino

La leptospirosis es una antropozoonosis causada por diferentes serotipos de leptospira cuya epidemiología se asocia con alta precipitación, con una alta incidencia en los animales domésticos, de interés zootécnico y las especies silvestres. Los perros tienen una estrecha relación con los seres humanos y la infección renal puede eliminar las bacterias en la orina, una importante fuente de infección. El presente estudio tuvo como objetivo determinar la prevalencia de anticuerpos y la carga bacteriana de Leptospira spp . en 151 perros recibido en un Centro de Control de Zoonosis. Se recogieron muestras de sangre para obtener suero y la realización de la Prueba de Aglutinación Microscópica (MAT). 59/151 (39,1%) de los perros eran seropositivos a al menos un serovar, con mayor prevalencia y títulos mayores para el serovar Copenhageni (23,73%) del serogrupo icterohaemorrhagiae (16,95%). El serovar canicola, que se encuentra comúnmente en perros, mostró 10,17% de serorreactividad con títulos menores. También se examinaron muestras de suero para detectar la presencia de ADN de la bacteria por la reacción en cadena de la polimerasa convencional (cPCR) utilizando los cebadores LEP1 y LEP2 y sólo una muestra fue positiva, siendo sometida a PCR cuantitativa (qPCR), lo que resultó en un cargo bacterial 14.829.820/mL. Los resultados muestran evidencia de infección con Leptospira spp. en perros, con niveles detectables de anticuerpos MAT y que en un perro podría detectar bacterias en el suero sanguíneo. Es de destacar, por lo tanto, la dispersión de diferente serovares de Leptospira spp. para el medio ambiente, debido a la eliminación de estos serovares por animales portadores renales, así como el riesgo de transmisión a otros animales y seres humanos y la importancia de los perros como animales centinelas en los estudios epidemiológicos.(AU)

Leptospirosis is a anthropozoonosis caused by different serotypes of leptospira whose epidemiology is associated with heavy rainfall, with high occurrence in pets, animals of zootechnical interest and wild species. Dogs have close relationship with humans and in the kidney infection can eliminate the bacteria in the urine, being an important source of infection. The present study aimed to determine the prevalence of antibodies and bacterial load of Leptospira spp. in 151 dogs received at a Center for Zoonosis Control. Blood samples were collected to obtain serum which was submitted to the Microscopic Agglutination Test (MAT). 59/151 (39.1%) dogs were seropositive for at least one serovar with the highest prevalence and higher titers for the serovar Copenhageni (23.73%) serogroup Icterohaemorrhagiae and to sorovar Icterohaemorrhagiae (16.95%). The Canicola serovar, commonly found in dogs, showed 10.17% of seroreactivity with smaller titles. Serum samples were also examined for the presence of DNA of the bacterium by the conventional Polymerase Chain Reaction (cPCR) using the primers Lep1 and Lep2 and only one sample was positive, being subjected to quantitative PCR (qPCR), resulting in bacterial load of 14.829.820/mL. The results show evidence of infection with Leptospira spp. in dogs, with detectable levels of antibodies by MAT, and in one dog the bacteria could be detected in the blood serum. It is noteworthy, therefore, the environment dispersion of different serovars of Leptospira spp., due to the elimination of these serovars by carrier animals kidney, and the risk of transmission to other animals and humans and the importance of dogs as sentinels animals in epidemiological studies.(AU)

A leptospirose é uma antropozoonose causada por diferentes sorotipos de leptospiras cuja epidemiologia está associada a altos índices pluviométricos, com alta ocorrência em animais de companhia, de interesse zootécnico e espécies silvestres. Os cães tem estreita relação com humanos e pela infecção renal podem eliminar a bactéria pela urina, sendo importante fonte de infecção. O presente estudo objetivou a determinação da soroprevalência e a carga bacteriana de Leptospira spp. em 151 cães de um Centro de Controle de Zoonoses. Foram coletadas amostras de sangue para a obtenção de soro e realização da prova de Soroaglutinação Microscópica (SAM). 59/151 (39,1%) dos animais foram sororreagentes para pelo menos um sorovar sendo os de maior prevalência e com títulos mais elevados o sorovar Copenhageni (23,73%) pertencente ao sorogrupo Icterohaemorrhagiae e o sorovar Icterohaemorrhagiae (16,95%). O sorovar Canicola, comumente encontrado nos cães, apresentou 10,17% de sororreatividade com títulos menores. As amostras de soro foram também submetidas a pesquisa de DNA da bactéria pela reação em cadeia pela polimerase convencional (cPCR) utilizando-se os primers Lep1 e Lep2 e apenas uma amostra foi positiva sendo submetida a PCR quantitativa (qPCR), que resultou numa carga bacteriana de 14.829.820/mL. Os resultados demonstram evidência de infecção por Leptospira spp. em cães, com níveis de anticorpos detectáveis à SAM, e que em um cão foi possível detectar a bactéria no soro sanguíneo. Destaca-se, portanto, a dispersão de diferentes sorovares de Leptospira spp. no ambiente, devido à eliminação destes sorovares por animais portadores renais, bem como o risco de transmissão para outros animais e humanos e a importância dos cães como animais sentinelas nos estudos epidemiológicos.(AU)

Leptospirose bovina: abordagens para o diagnóstico sorológico individual e do rebanho

A leptospirose bovina está distribuída em todo o mundo. No Brasil, a leptospirose 11 bovina é uma enfermidade de grande preocupação, causando prejuízos econômicos 12 à pecuária. Além disso, a enfermidade é um importante risco à saúde pública, já que 13 bovinos assintomáticos podem eliminar leptospiras através da urina por longos 14 períodos. Atualmente, o teste de soroaglutinação microscópica (MAT) é 15 recomendado como a principal ferramenta para o diagnóstico da leptospirose nos 16 rebanhos bovinos. Nos últimos anos, o Rio Grande do Sul (RS) se consolidou como 17 importante exportador de gado vivo, refletindo diretamente na economia nacional. 18 Nesse contexto, nosso estudo teve como objetivos: (1) determinar a prevalência de 19 anticorpos anti-Leptospira, através do MAT, em bovinos que aguardam exportação 20 na cidade de Pelotas, RS; (2) Padronizar e testar um ELISA indireto, utilizando o 21 sorovar Hardjo como antígeno, comparando os resultados com o MAT; e (3) 22 Padronizar e testar um Dot-ELISA em uma avaliação inicial para o diagnóstico 23 individual e rápido da leptospirose bovina, utilizando o sorovar Hardjo como 24 antígeno, comparando os resultados com o MAT. Para tanto, foi calculada uma 25 amostra da população de 4.552 animais alojados em um confinamento em Pelotas, 26 de 34 municípios do RS, sendo coletado o sangue e realizado o teste de aglutinação 27 microscópica (MAT). Para a realização do ELISA indireto, 60 soros foram 28 aleatoriamente utilizados, dos quais 21,6% eram reagentes no MAT. Para o Dot-29 ELISA, 34 soros bovinos, sendo 17 reagentes e 17 não reagentes no MAT, foram 30 usados. Nenhum animal incluído no estudo tinha história de vacinação contra a 31 leptospirose. Dos 355 animais amostrados, 24 (6,76%; IC 95% 4,58-9,86) foram 32 reativos para pelo menos um dos antígenos do MAT. Os sorovares Hardjo e 33 Icterohaemorrhagiae tiveram prevalência de 2,53%, seguidos de Canicola com 34 1,97% e Grippotyphosa com 1,12%. Dos 60 soros bovinos analisados no ELISA, 35 seis (10%; IC95% 4,6-20,1) soros foram considerados reagentes. De acordo com a 36 análise estatística realizada foi possível detectar uma alta especificidade no teste 37 (97,87%), mas uma sensibilidade baixa (38,46%). Por outro lado, o Dot-ELISA foi 38 capaz de detectar anticorpos anti-Leptospira em 16 (sensibilidade = 94%) dos 17 39 soros bovinos reagentes no MAT. Em uma amostra de bovinos jovens, com 24 40 meses ou menos, a prevalência encontrada indica a necessidade de medidas 41 preventivas, como a vacinação dos rebanhos. Além disso, nossos resultados 42 mostram a exposição dos bovinos ao agente, que por sua vez, pode levar a 43 problemas de saúde pública. Pesquisas futuras podem utilizar nossos resultados 44 para o planejamento de estudos epidemiológicos com o objetivo de descrever a 45 situação da leptospirose em rebanhos bovinos no Rio Grande do Sul. Embora os 46 7 resultados sejam promissores, ensaios adicionais são necessários a fim de 1 padronizar a técnica para uso em larga escala, visando a triagem rápida de casos de 2 leptospirose em bovinos a campo.

Bovine leptospirosis is a worldwide disease. In Brazil, bovine leptospirosis is a major 11 disease, causing economic damage to livestock. In addition, the disease is an 12 important public health risk since asymptomatic cattle can eliminate leptospires 13 through urine for long periods. Currently, the microscopic agglutination test (MAT) is 14 recommended as the main tool for the diagnosis of leptospirosis in cattle herds. In 15 recent years, Rio Grande do Sul (RS) has consolidated as an important exporter of 16 live cattle, directly reflecting on the national economy. In this context, our study 17 aimed to: (1) Determine the prevalence of anti-Leptospira antibodies, through MAT, 18 in cattle awaiting export in the city of Pelotas, RS; (2) Standardize and test an indirect 19 ELISA, using the serovar Hardjo as antigen, comparing the results with the MAT; and 20 (3) Standardize and test a Dot-ELISA in an initial evaluation for the individual and 21 rapid diagnosis of bovine leptospirosis, using the serovar Hardjo as an antigen, 22 comparing the results with the MAT. A representative sample was calculated from 23 4,552 animals housed in Pelotas, from 34 municipalities in RS, blood was drawn, and 24 the microscopic agglutination test (MAT) performed for serological analysis. Indirect 25 ELISA was performed with 60 randomly sera, of which 21.6% were reagents in MAT. 26 For Dot-ELISA, 34 bovine sera, being 17 reagents and 17 non-reagents in MAT, 27 were used. No animals included in the study had a history of vaccination against 28 leptospirosis. Of the 355 animals sampled, 24 (6.76%; 95% CI 4.58-9.86) were 29 reactive for at least one of the MAT antigens. The serovars Hardjo and 30 Icterohaemorrhagiae had a prevalence of 2.53%, followed by Canicola with 1.97% 31 and Grippotyphosa with 1.12%. Of the 60 bovine sera analyzed in the ELISA, six 32 (10%; 95% CI 4.6-20.1) sera were considered reactive. According to the statistical 33 analysis performed, it was possible to detect a high specificity in the test (97.87%), 34 but a low sensitivity (38.46%). On the other hand, Dot-ELISA was able to detect anti-35 Leptospira antibodies in 16 (sensitivity = 94%) of the 17 bovine sera reactive in MAT. 36 A sample of young cattle aged 24 months or less, the prevalence found indicates the 37 need for preventive measures, such as vaccination of herds. In addition, our results 38 show cattle exposure to the agent, which in turn can lead to public health problems. 39 Future research may use our results to plan epidemiological studies aiming at 40 describing the status of leptospirosis in cattle herds in Rio Grande do Sul. Although 41 the results are promising, additional tests are necessary in order to standardize the 42 technique for large-scale use, aiming at the rapid screening of leptospirosis cases in 43 cattle in the field.