Resumo
ABSTRACT: The heating rate used during semen thawing plays an important role in reducing structural and functional damage to spermatozoa. In this study, we evaluated the influence of thawing temperature on semen quality, reactive oxygen species (ROS) production, and mitochondrial activity of cryopreserved bovine semen. A total of 195 straws of 0.5 mL from five Holstein Friesian bulls were used (39 straws per bull). Samples underwent 8 to 22 years of storage; they were processed under a standard protocol with tris-egg yolk and stored in liquid nitrogen. Samples were thawed for 30 seconds in a water bath at T1: 36 °C, T2: 38 °C or T3: 40 °C. Sperm motility and kinematics, morphology, structural membrane integrity (SMI), functional membrane integrity (FMI), acrosome integrity (AI), ROS, and mitochondrial membrane potential (ΔΨM) of post-thawing bovine sperm were evaluated. Generalized linear models were fitted to the data. Each model included the effects of bull, storage time, and treatment. The Shapiro-Wilk test was used to assess data normality, and means were compared using the Tukey test. T2 and T3 showed better results for sperm motility and kinematic parameters, SMI (%) (T1 41.9 ± 2.3; T2 45.7 ± 1.9; T3 47.4 ± 2.8), ROS (RFU/min) (T1 0.026 ± 0.007; T2 0.032 ± 0.001; T3 0.031 ± 0.001) and high-ΔΨM (RFU x 103) (67.1± 0,4; 71.3 ± 0.4; 74.2 ± 0.4) (P < 0.05). However, T1 had higher FMI (39.3 ± 2.3) than T2 (34.0 ± 1.9) (P < 0.05), though not significantly (P > 0.05) different from T3 (38.4 ± 2.2). Thawing temperatures of 38 °C and 40 °C increases motility, kinetics, membrane integrity, mitochondrial activity and ROS of cryopreserved bovine semen, compared with more conventional thawing at 36 °C.
RESUMO: A taxa de aquecimento usada durante o descongelamento do sêmen desempenha um papel importante na redução dos danos estruturais e funcionais nos espermatozóides. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a influência da temperatura de descongelamento na qualidade do sêmen, produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) e atividade mitocondrial do sêmen bovino criopreservado. Foram utilizados 195 palhetas de 0,5 mL de cinco touros Holstein Friesian (39 palhetas por touro). As amostras passaram por oito a 22 anos de armazenamento e foram processadas sob protocolo padrão com Tris-gema de ovo e armazenadas em nitrogênio líquido. As temperaturas de descongelamento foram T1: 36 °C, T2: 38 °C, T3: 40 °C, cada uma por 30 segundos em banho-maria. Pós-descongelamento, a motilidade e cinética dos espermatozoides, morfologia, integridade estrutural da membrana (SMI), integridade funcional da membrana (FMI), integridade acrossomal (AI), ROS e potencial de membrana mitocondrial (ΔΨM) foram avaliados. Modelos lineares generalizados foram ajustados. Cada modelo incluiu os efeitos de touro, tempo de armazenamento e tratamento. A normalidade dos dados foi avaliada pelo teste de Shapiro-Wilk e as médias comparadas pelo teste de Tukey. T2 e T3 apresentaram resultados mais elevados para a maioria dos parâmetros de motilidade e cinemática espermática, SMI (%) (T1 41,9 ± 2,3; T2 45,7 ± 1,9; T3 47,4 ± 2,8), ROS (RFU/min) (T1 0,026 ± 0,007; T2 0,032 ± 0,001; T3 0,031 ± 0,001) e alto ΔΨM (RFU x 103) (67,1 ± 0,4; 71,3 ± 0,4; 74,2 ± 0,4) (P < 0,05). No entanto, T1 apresentou maior FMI (%) (39,3 ± 2,3) em comparação a T2 (34,0 ± 1,9) (P < 0,05), mas não foi diferente do T3 (38,4 ± 2,2) (P > 0,05). Conclui-se que as temperaturas de descongelamento de 38 °C e 40 °C produzem um aumento na motilidade, cinética, integridade de membrana, atividade mitocondrial e ROS do sêmen bovino criopreservado, em comparação com o uso mais convencional de uma temperatura de descongelamento de 36 °C.
Resumo
The heating rate used during semen thawing plays an important role in reducing structural and functional damage to spermatozoa. In this study, we evaluated the influence of thawing temperature on semen quality, reactive oxygen species (ROS) production, and mitochondrial activity of cryopreserved bovine semen. A total of 195 straws of 0.5 mL from five Holstein Friesian bulls were used (39 straws per bull). Samples underwent 8 to 22 years of storage; they were processed under a standard protocol with tris-egg yolk and stored in liquid nitrogen. Samples were thawed for 30 seconds in a water bath at T1: 36 °C, T2: 38 °C or T3: 40 °C. Sperm motility and kinematics, morphology, structural membrane integrity (SMI), functional membrane integrity (FMI), acrosome integrity (AI), ROS, and mitochondrial membrane potential (ΔΨM) of post-thawing bovine sperm were evaluated. Generalized linear models were fitted to the data. Each model included the effects of bull, storage time, and treatment. The Shapiro-Wilk test was used to assess data normality, and means were compared using the Tukey test. T2 and T3 showed better results for sperm motility and kinematic parameters, SMI (%) (T1 41.9 ± 2.3; T2 45.7 ± 1.9; T3 47.4 ± 2.8), ROS (RFU/min) (T1 0.026 ± 0.007; T2 0.032 ± 0.001; T3 0.031 ± 0.001) and high-ΔΨM (RFU x 103) (67.1± 0,4; 71.3 ± 0.4; 74.2 ± 0.4) (P < 0.05). However, T1 had higher FMI (39.3 ± 2.3) than T2 (34.0 ± 1.9) (P < 0.05), though not significantly (P > 0.05) different from T3 (38.4 ± 2.2). Thawing temperatures of 38 °C and 40 °C increases motility, kinetics, membrane integrity, mitochondrial activity and ROS of cryopreserved bovine semen, compared with more conventional thawing at 36 °C.
A taxa de aquecimento usada durante o descongelamento do sêmen desempenha um papel importante na redução dos danos estruturais e funcionais nos espermatozóides. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a influência da temperatura de descongelamento na qualidade do sêmen, produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) e atividade mitocondrial do sêmen bovino criopreservado. Foram utilizados 195 palhetas de 0,5 mL de cinco touros Holstein Friesian (39 palhetas por touro). As amostras passaram por oito a 22 anos de armazenamento e foram processadas sob protocolo padrão com Tris-gema de ovo e armazenadas em nitrogênio líquido. As temperaturas de descongelamento foram T1: 36 °C, T2: 38 °C, T3: 40 °C, cada uma por 30 segundos em banho-maria. Pós-descongelamento, a motilidade e cinética dos espermatozoides, morfologia, integridade estrutural da membrana (SMI), integridade funcional da membrana (FMI), integridade acrossomal (AI), ROS e potencial de membrana mitocondrial (ΔΨM) foram avaliados. Modelos lineares generalizados foram ajustados. Cada modelo incluiu os efeitos de touro, tempo de armazenamento e tratamento. A normalidade dos dados foi avaliada pelo teste de Shapiro-Wilk e as médias comparadas pelo teste de Tukey. T2 e T3 apresentaram resultados mais elevados para a maioria dos parâmetros de motilidade e cinemática espermática, SMI (%) (T1 41,9 ± 2,3; T2 45,7 ± 1,9; T3 47,4 ± 2,8), ROS (RFU/min) (T1 0,026 ± 0,007; T2 0,032 ± 0,001; T3 0,031 ± 0,001) e alto ΔΨM (RFU x 103) (67,1 ± 0,4; 71,3 ± 0,4; 74,2 ± 0,4) (P < 0,05). No entanto, T1 apresentou maior FMI (%) (39,3 ± 2,3) em comparação a T2 (34,0 ± 1,9) (P < 0,05), mas não foi diferente do T3 (38,4 ± 2,2) (P > 0,05). Conclui-se que as temperaturas de descongelamento de 38 °C e 40 °C produzem um aumento na motilidade, cinética, integridade de membrana, atividade mitocondrial e ROS do sêmen bovino criopreservado, em comparação com o uso mais convencional de uma temperatura de descongelamento de 36 °C.
Assuntos
Animais , Bovinos , Preservação do Sêmen/veterinária , Criopreservação/veterinária , Análise do Sêmen/veterináriaResumo
Degradation of bovine small intestine and respective effects on biomechanics have not been described to date. Biomechanical testing of intestinal tissues is often carried out within a few hours of donor death and tissue deterioration is not accounted for. Freezing is efficient for the preservation of several tissues; however, it may cause cellular damage. This study investigated the morphologic and biomechanical changes of bovine jejunum at different postmortem moments. Effects of freezing and thawing on morphology and biomechanical behavior were also examined. Macroscopic changes were first noted within eight hours of death. At this time, histologic changes also started to set in, and biomechanical tests revealed lower bursting pressure (203.10±46.14mmHg). At 12 hours, tissue rearrangement was noted, and bursting pressure increased (238.43±31.04mmHg). A second drop in pressure was detected at 18 hours (235.20±38.21mmHg), followed by a progressive drop until the end of the experimental period. Histologic changes revealed progressive deterioration. Mechanical resistance did not differ between thawed and fresh specimens. It was concluded that bovine jejunal specimens retain biomechanical resistance up to 6 hours after death. Freezing and thawing did not affect the mechanical resistance of the intestinal wall in this experimental model.
A degradação do intestino delgado de bovinos e seu efeito biomecânico não são descritos na literatura. Trabalhos que envolvem a biomecânica intestinal realizam os ensaios em poucas horas após o óbito dos doadores, sem avaliação de seu estado de deterioração. O congelamento é eficiente na conservação de vários tecidos, porém pode provocar danos em nível celular. Este estudo teve por objetivo avaliar a degradação morfológica e biomecânica do jejuno de bovinos em diferentes tempos post mortem. O efeito do congelamento e do descongelamento sobre essas características também foi avaliado. As primeiras alterações macroscópicas foram observadas oito horas após o óbito. No mesmo momento, se iniciaram as alterações histológicas e a menor pressão suportada ao teste biomecânico (203,10±46,14mmHg). A partir de 12 horas, o tecido sofreu um rearranjo, suportando maior pressão (238,43±31,04mmHg). Uma segunda queda foi detectada após 18 horas (235,20±38,21mmHg), seguida de redução progressiva até o término do experimento. As lesões histológicas foram progressivas e graduais. As amostras testadas após descongelamento não apresentaram diferença estatística quanto à resistência mecânica em comparação com os espécimes frescos. Concluiu-se que as amostras mantêm sua resistência biomecânica até 6 horas após o óbito. Também se mostrou que o congelamento e o descongelamento, nas condições testadas, não alteraram a resistência mecânica da parede intestinal.
Assuntos
Animais , Bovinos , Preservação de Órgãos , Fenômenos Biomecânicos , Criopreservação , Congelamento , JejunoResumo
Ao preservar o espermatozoide suíno no estado líquido ou criopreservado, os componentes do plasma seminal (PS) contidos nos ejaculados podem alterar a capacidade de fertilização desses gametas. O PS contém substâncias essenciais para a manutenção da viabilidade e fertilidade dos espermatozoides. No entanto, esses componentes podem ser deletérios dependendo da quantidade ou duração do tempo de contato entre a ejaculação e a remoção do PS durante o processamento do sêmen para a conservação na forma refrigerada ou congelada. Foram identificadas substâncias que prejudicam (principal proteína plasmática seminal PSPI) ou melhoram (espermadesina PSP-I) a capacidade de fertilização dos espermatozoides. Dependendo dos cachaços e dos procedimentos de colheita de sêmen, a remoção do PS pode ser benéfica antes da preservação no estado líquido ou criopreservado. Em alguns casos, o PS removido antes da congelação pode ser adicionado de volta ao diluente de descongelamento, com efeitos positivos no sêmen descongelado e na viabilidade do espermatozoide no trato reprodutivo da porca. Neste texto, há um foco nos diferentes efeitos de PS em amostras de sêmen refrigerado e criopreservado de suínos com ênfase em como PS modula a função e morfologia das células espermáticas antes, durante e após a preservação de forma refrigerada ou criopreservada.(AU)
When preserving sperm in the liquid or cryopreserved state, seminal plasma (SP) components within ejaculates can alter fertilizing capacity of these gametes. The SP contains substances essential for maintenance of sperm viability and fertility; however, these components can be deleterious depending on quantity, or duration of time before there is removal of SP from sperm in semen processing. Substances that impair (Major seminal plasma protein PSPI - boar) or improve (e.g., spermadhesin PSP-I - boar) sper- matozoa fertilizing capacity have been identified. Depending on individual males and semen collection procedures, SP removal may be beneficial before preservation in the liquid or cryopreserved state. In some cases, SP that is removed can be added back to thawing extender with there being positive effects in thawed sperm and for sperm viability in the female reproductive tract. In this review article, there is a focus on different effects of SP in samples of cooled and cryopreserved semen from boar with there being emphasis on how SP modulates the function and morphology of sperm cells before, during, and after preservation in the refrigerated or cryopreserved state.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Sêmen/fisiologia , Preservação do Sêmen/veterinária , Suínos/fisiologia , Criopreservação/veterináriaResumo
This study evaluated the effect of increasing centrifugal force and reducing centrifugation time and volume in Percoll protocols on ram sperm parameters. Commercial semen of Santa Inês rams were used and five treatments were performed: traditional Percoll and mini-Percoll (MP) techniques (I- 5000 x g, 5min; II- 2500 x g, 5min; III- 1250 x g, 5min; IV- 700 x g, 10min). At post-thawing (PT) and post-selection protocols (0h), samples were assessed for spermatozoa recovery rate, motility, plasma membrane (PM) integrity, sperm capacitation and morphology and incubated at 37 C for 1, 2 and 3h. The sperm recovery rate averaged 9.1±1.4%, and most motility parameters were similar (P> 0.05) among protocols. VCL (µm/s) was higher (P< 0.05) after MP-II, III and IV (66.1±4.5) than traditional Percoll (46.3±4.9). Capacitation status and PM integrity were similar (P> 0.05) among treatments. For the first time, we have demonstrated the reduction of the gradient volume and centrifugation time associated with an increase on centrifugation force at Percoll can be successfully used for frozen-thawed ram sperm selection. MP may be used instead of traditional Percoll, decreasing costs and semen handling time.(AU)
O presente estudo avaliou o efeito do aumento da força de centrifugação, bem como da redução do tempo de centrifugação e do volume do gradiente de Percoll em diferentes protocolos nos parâmetros espermáticos de ovinos. Foi utilizado sêmen comercial de carneiros da raça Santa Inês, e cinco tratamentos foram realizados: Percoll tradicional e quatro técnicas de mini-Percoll (I- 5000 x g, 5min; II- 2500 x g, 5min; III- 1250 x g, 5min; IV- 700 x g, 10min). Após o descongelamento e a seleção espermática em cada técnica utilizada (0h), amostras foram avaliadas quanto à taxa de recuperação espermática, motilidade, integridade de membrana plasmática, capacitação e morfologia. Ao final, foram incubadas a 37 ºC por uma, duas e três horas. A taxa de recuperação média (9,1±1,4%) e a maioria dos parâmetros de motilidade foram similares (P>0,05) entre os tratamentos. VCL foi maior (P<0,05) após MP-II, III e IV (66,1±4,5) quando comparados ao Percoll tradicional (46,3±4,9). O status da capacitação e a integridade de membrana foram similares (P>0,05) entre os tratamentos. Pela primeira vez, foi demonstrado que a redução do volume do gradiente utilizado e do tempo de centrifugação, associada com o aumento da força de centrifugação nos protocolos de Percoll, pode ser usada com sucesso na seleção espermática de sêmen congelado de ovinos. O mini-Percoll pode ser utilizado em alternativa à técnica de Percoll tradicional, diminuindo custos e tempo de manipulação do sêmen durante a técnica.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Preservação do Sêmen/veterinária , Capacitação Espermática , Ovinos , Criopreservação/veterináriaResumo
This study evaluated the effect of increasing centrifugal force and reducing centrifugation time and volume in Percoll protocols on ram sperm parameters. Commercial semen of Santa Inês rams were used and five treatments were performed: traditional Percoll and mini-Percoll (MP) techniques (I- 5000 x g, 5min; II- 2500 x g, 5min; III- 1250 x g, 5min; IV- 700 x g, 10min). At post-thawing (PT) and post-selection protocols (0h), samples were assessed for spermatozoa recovery rate, motility, plasma membrane (PM) integrity, sperm capacitation and morphology and incubated at 37 C for 1, 2 and 3h. The sperm recovery rate averaged 9.1±1.4%, and most motility parameters were similar (P> 0.05) among protocols. VCL (µm/s) was higher (P< 0.05) after MP-II, III and IV (66.1±4.5) than traditional Percoll (46.3±4.9). Capacitation status and PM integrity were similar (P> 0.05) among treatments. For the first time, we have demonstrated the reduction of the gradient volume and centrifugation time associated with an increase on centrifugation force at Percoll can be successfully used for frozen-thawed ram sperm selection. MP may be used instead of traditional Percoll, decreasing costs and semen handling time.(AU)
O presente estudo avaliou o efeito do aumento da força de centrifugação, bem como da redução do tempo de centrifugação e do volume do gradiente de Percoll em diferentes protocolos nos parâmetros espermáticos de ovinos. Foi utilizado sêmen comercial de carneiros da raça Santa Inês, e cinco tratamentos foram realizados: Percoll tradicional e quatro técnicas de mini-Percoll (I- 5000 x g, 5min; II- 2500 x g, 5min; III- 1250 x g, 5min; IV- 700 x g, 10min). Após o descongelamento e a seleção espermática em cada técnica utilizada (0h), amostras foram avaliadas quanto à taxa de recuperação espermática, motilidade, integridade de membrana plasmática, capacitação e morfologia. Ao final, foram incubadas a 37 ºC por uma, duas e três horas. A taxa de recuperação média (9,1±1,4%) e a maioria dos parâmetros de motilidade foram similares (P>0,05) entre os tratamentos. VCL foi maior (P<0,05) após MP-II, III e IV (66,1±4,5) quando comparados ao Percoll tradicional (46,3±4,9). O status da capacitação e a integridade de membrana foram similares (P>0,05) entre os tratamentos. Pela primeira vez, foi demonstrado que a redução do volume do gradiente utilizado e do tempo de centrifugação, associada com o aumento da força de centrifugação nos protocolos de Percoll, pode ser usada com sucesso na seleção espermática de sêmen congelado de ovinos. O mini-Percoll pode ser utilizado em alternativa à técnica de Percoll tradicional, diminuindo custos e tempo de manipulação do sêmen durante a técnica.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Preservação do Sêmen/veterinária , Capacitação Espermática , Ovinos , Criopreservação/veterináriaResumo
The objective of the study was to determine whether or not there is a correlation between thermoresistance tests (TT) after semen thawing and pregnancy rate (PR) after fixed-time artificial insemination (FTAI). Four different TT were performed on ten samples used for AI; a rapid test (RTT) (30min / 46°C) and three slow tests (STT): STT1 (60min/38°C), STT2 (180min/38°C), and STT3 (300min/38°C). Two hundred and fifteen multiparous crossbred cows were submitted to FTAI under the following protocol: on day zero (d0) the animals received a P4 device +EB; on d7 PGF2α; on d8 P4 was removed and eCG+EC were administered; IATF was performed on d10. Three gestational diagnoses (G D) were performed on d40, d70 and d120. The mean sperm motility (%) in RTT and STTs were 19.84±6.13, 28.55±10.48, 17.62±5.87 and 8.63±3.46, respectively, and TP in the three DG 61.86%, 57.67%, and 55.81%, respectively. Through Person test a significant negative correlation (P< 0.05) was found between STT2 and PR at 60 days (r= -0.644) and between STT3 and all TPs (r= -0.774, -0.752, 0.748). It was concluded that TT parameters are not able to determine correlation between semen quality and TP.(AU)
O objetivo do presente estudo foi determinar se há ou não correlação entre testes de termorresistência (TT) após descongelamento do sêmen e taxa de prenhez (TP) após inseminação artificial em tempo fixo (IATF). Quatro diferentes TT foram realizados nas 10 amostras utilizadas para a IA; um teste rápido (RTT) (30min/46°C) e três testes lentos (STT): STT1 (60min/38°C), STT2 (180min/38°C) e STT3 (300min/38°C). Duzentas e quinze vacas cruzadas multíparas foram submetidas à IATF sob o seguinte protocolo: no dia zero (d0), os animais receberam um dispositivo de P4+EB; em d7, PGF2α; em d8, retirou-se P4 e eCG+EC administrados; no d10, foi realizada IATF. Três diagnósticos gestacionais (DG) foram feitos, em d40, d70 e d120. As médias de motilidade espermática (%) em RTT e STTs foram 19,84±6,13, 28,55±10,48, 17,62±5,87 e 8,63±3,46, respectivamente, e TP nos três DG 61,86%, 57,67% e 55,81%, respectivamente. Por meio do teste de Person, uma correlação negativa significativa (P<0,05) foi encontrada entre os resultados de STT2 e PR aos 60 dias (r=-0,644) e entre STT3 e todas TPs (r=-0,774, -0,752 e -0,748). Concluiu-se que parâmetros de TT não são capazes de determinar correlação entre qualidade do sêmen e TP.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Feminino , Gravidez , Bovinos , Motilidade dos Espermatozoides , Regulação da Temperatura Corporal , Taxa de Gravidez , Resposta ao Choque Térmico , Análise do Sêmen/métodos , Inseminação Artificial/veterináriaResumo
The objective of the study was to determine whether or not there is a correlation between thermoresistance tests (TT) after semen thawing and pregnancy rate (PR) after fixed-time artificial insemination (FTAI). Four different TT were performed on ten samples used for AI; a rapid test (RTT) (30min / 46°C) and three slow tests (STT): STT1 (60min/38°C), STT2 (180min/38°C), and STT3 (300min/38°C). Two hundred and fifteen multiparous crossbred cows were submitted to FTAI under the following protocol: on day zero (d0) the animals received a P4 device +EB; on d7 PGF2α; on d8 P4 was removed and eCG+EC were administered; IATF was performed on d10. Three gestational diagnoses (G D) were performed on d40, d70 and d120. The mean sperm motility (%) in RTT and STTs were 19.84±6.13, 28.55±10.48, 17.62±5.87 and 8.63±3.46, respectively, and TP in the three DG 61.86%, 57.67%, and 55.81%, respectively. Through Person test a significant negative correlation (P< 0.05) was found between STT2 and PR at 60 days (r= -0.644) and between STT3 and all TPs (r= -0.774, -0.752, 0.748). It was concluded that TT parameters are not able to determine correlation between semen quality and TP.(AU)
O objetivo do presente estudo foi determinar se há ou não correlação entre testes de termorresistência (TT) após descongelamento do sêmen e taxa de prenhez (TP) após inseminação artificial em tempo fixo (IATF). Quatro diferentes TT foram realizados nas 10 amostras utilizadas para a IA; um teste rápido (RTT) (30min/46°C) e três testes lentos (STT): STT1 (60min/38°C), STT2 (180min/38°C) e STT3 (300min/38°C). Duzentas e quinze vacas cruzadas multíparas foram submetidas à IATF sob o seguinte protocolo: no dia zero (d0), os animais receberam um dispositivo de P4+EB; em d7, PGF2α; em d8, retirou-se P4 e eCG+EC administrados; no d10, foi realizada IATF. Três diagnósticos gestacionais (DG) foram feitos, em d40, d70 e d120. As médias de motilidade espermática (%) em RTT e STTs foram 19,84±6,13, 28,55±10,48, 17,62±5,87 e 8,63±3,46, respectivamente, e TP nos três DG 61,86%, 57,67% e 55,81%, respectivamente. Por meio do teste de Person, uma correlação negativa significativa (P<0,05) foi encontrada entre os resultados de STT2 e PR aos 60 dias (r=-0,644) e entre STT3 e todas TPs (r=-0,774, -0,752 e -0,748). Concluiu-se que parâmetros de TT não são capazes de determinar correlação entre qualidade do sêmen e TP.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Feminino , Gravidez , Bovinos , Motilidade dos Espermatozoides , Regulação da Temperatura Corporal , Taxa de Gravidez , Resposta ao Choque Térmico , Análise do Sêmen/métodos , Inseminação Artificial/veterináriaResumo
O objetivo com o trabalho foi avaliar a eficiência de quatro crioprotetores adicionados ao meio diluidor na criopreservação do sêmen de tambaqui (Colossoma macropomum) e melhor protocolo de descongelamento. Foram realizadas quatro coletas com intervalos regulares de amostras de sêmen (pool) de dez reprodutores. Os crioprotetores testados foram: glicerol, dimeltilsulfóxido (DMSO), dimetilformamida (DMF) e metanol, na proporção de 10,0%. Para a avaliação da qualidade do sêmen após o descongelamento foi realizado o teste in vivo das amostras em três protocolos diferentes para cada crioprotetor, com três tempos de descongelamento (15, 30 e 45s) na temperatura de 30ºC, totalizando 12 tratamentos com cinco repetições em esquema fatorial. Os resultados da fertilização foram submetidos a análise de variância (ANOVA) e teste de Tukey, com significância de 0,05. O tratamento que resultou em melhor taxa de fertilização foi o que continha metanol como crioprotetor e o descongelamento no tempo de 30 s, com taxa de fertilização média de 77,65%, sendo, entre os tratamentos avaliados, o mais recomendado para a criopreservação do sêmen de tambaqui.(AU)
The objective of the study was to evaluate the efficiency of four cryoprotectants added to the extender on sperm cryopreservation of tambaqui Colossoma macropomum and to define the best thawing protocol. Four semen samples were collected at regular intervals from ten breeding males (pool). The cryoprotectants tested were: glycerol, dimethylsulfoxide (DMSO), dimethylformamide (DMF) and methanol at a ratio of 10.0%. For the evaluation of semen quality after thawing in vivo test samples in three different protocols for each cryoprotectant was performed with three thawing times (15, 30 and 45s) at 30ºC temperature, totalizing 12 treatments with five replicates in factorial design. The results of fertilization were subjected to analysis of variance (ANOVA) and Tukey's test, with significance of 0.05. The treatment that resulted in improved fertilization rate was the one containing methanol as cryoprotectant and thawing time of 30 s, with a mean fertilization rate of 77.65%, being among the treatments the most recommended for cryopreservation of tambaqui semen.(AU)
Assuntos
Animais , Crioprotetores/análise , Criopreservação/veterinária , Congelamento , Characidae , Análise do Sêmen/veterinária , Fatores de Tempo , Fertilização , EspermatozoidesResumo
O objetivo com o trabalho foi avaliar a eficiência de quatro crioprotetores adicionados ao meio diluidor na criopreservação do sêmen de tambaqui (Colossoma macropomum) e melhor protocolo de descongelamento. Foram realizadas quatro coletas com intervalos regulares de amostras de sêmen (pool) de dez reprodutores. Os crioprotetores testados foram: glicerol, dimeltilsulfóxido (DMSO), dimetilformamida (DMF) e metanol, na proporção de 10,0%. Para a avaliação da qualidade do sêmen após o descongelamento foi realizado o teste in vivo das amostras em três protocolos diferentes para cada crioprotetor, com três tempos de descongelamento (15, 30 e 45s) na temperatura de 30ºC, totalizando 12 tratamentos com cinco repetições em esquema fatorial. Os resultados da fertilização foram submetidos a análise de variância (ANOVA) e teste de Tukey, com significância de 0,05. O tratamento que resultou em melhor taxa de fertilização foi o que continha metanol como crioprotetor e o descongelamento no tempo de 30 s, com taxa de fertilização média de 77,65%, sendo, entre os tratamentos avaliados, o mais recomendado para a criopreservação do sêmen de tambaqui.
The objective of the study was to evaluate the efficiency of four cryoprotectants added to the extender on sperm cryopreservation of tambaqui Colossoma macropomum and to define the best thawing protocol. Four semen samples were collected at regular intervals from ten breeding males (pool). The cryoprotectants tested were: glycerol, dimethylsulfoxide (DMSO), dimethylformamide (DMF) and methanol at a ratio of 10.0%. For the evaluation of semen quality after thawing in vivo test samples in three different protocols for each cryoprotectant was performed with three thawing times (15, 30 and 45s) at 30ºC temperature, totalizing 12 treatments with five replicates in factorial design. The results of fertilization were subjected to analysis of variance (ANOVA) and Tukey's test, with significance of 0.05. The treatment that resulted in improved fertilization rate was the one containing methanol as cryoprotectant and thawing time of 30 s, with a mean fertilization rate of 77.65%, being among the treatments the most recommended for cryopreservation of tambaqui semen.
Assuntos
Animais , Análise do Sêmen/veterinária , Characidae , Congelamento , Criopreservação/veterinária , Crioprotetores/análise , Espermatozoides , Fatores de Tempo , FertilizaçãoResumo
O congelamento de células é uma importante ferramenta na preservação de espécies ameaçadas de extinção. Células fetais de cultivo primário obtidas de um bovino clone foram submetidas à pressão negativa (PN) de 200, 500 ou 800 mbar, imediatamente (PN0h) ou três horas antes (PN3h) do congelamento em palhetas finas, com 10% de DMSO como crioprotetor. Células frescas e congeladas sem submissão à PN foram utilizadas como controles. Avaliou-se a viabilidade pós-descongelamento, a curva de proliferação celular, assim como o tempo de duplicação da população (PDT) celular, a cada 24 horas, durante oito dias. Os dados obtidos foram submetidos ao teste de Tukey ou Qui quadrado (P≤0,05). A sobrevivência média dos grupos controle (89,8%) e PN500 0h (88,1%) foi superior aos outros grupos; o tempo de PDT foi semelhante nos grupos fresco (27,5 ± 0,35 h), controle congelado (30,1 ± 2,3 h) e PN500 0h (32,4 ± 1,6 h). O menor tempo foi observado no grupo PN800 0h (21,9 h). O congelamento de células fetais bovinas de cultivo primário, realizado em palhetas de 0,25 mL, com 10% de DMSO, possibilita elevadas taxas de sobrevivência após o descongelamento. A PN modifica a curva de crescimento de células criopreservadas, sendo que as intensidades de 200 ou 500 mbar, aplicadas imediatamente antes do congelamento das células, possibilitam curvas de proliferação semelhantes às obtidas com células frescas.
Cell cryopreservation is an important tool in the preservation of endangered species. Fetal bovine primary culture-obtained cells were subjected to negative pressure (NP) 200, 500 or 800 mbar, just before (NP0h) or 3 hours before (NP3h) freezing into fine (0.25 mL) straws, using 10% DMSO as cryoprotectant. Fresh and frozen fibroblasts non submitted to NP were used as controls. We evaluated cell viability after freezing, cell proliferation curve, and population doubling time (PDT) every 24 hours during 8 days. Data were submitted to Tukey or Chi square test (P≤ 0.05). The average survival of control group (89.8%) and NP500-0h (88.1%) was higher than other groups; the time of PDT was similar in the fresh (27.5 ± 0.35 h), frozen control (30.1 ± 2.3 h) and NP500-0h groups (32.4 ± 1.6 h). The lowest time was observed in the NP800-0h (21.9 h) group. Freezing of bovine fibroblasts into 0.25 mL straws with 10% DMSO enables high survival rates after thawing. The NP modifies the growth curve of cryopreserved cells and the intensities of 200 or 500 mbar, applied just before freezing the cells, allow proliferation curves similar to those obtained with fresh cells.
Assuntos
Animais , Bovinos , Células , Preservação de Tecido/veterinária , Criopreservação/veterináriaResumo
O congelamento de células é uma importante ferramenta na preservação de espécies ameaçadas de extinção. Células fetais de cultivo primário obtidas de um bovino clone foram submetidas à pressão negativa (PN) de 200, 500 ou 800 mbar, imediatamente (PN0h) ou três horas antes (PN3h) do congelamento em palhetas finas, com 10% de DMSO como crioprotetor. Células frescas e congeladas sem submissão à PN foram utilizadas como controles. Avaliou-se a viabilidade pós-descongelamento, a curva de proliferação celular, assim como o tempo de duplicação da população (PDT) celular, a cada 24 horas, durante oito dias. Os dados obtidos foram submetidos ao teste de Tukey ou Qui quadrado (P≤0,05). A sobrevivência média dos grupos controle (89,8%) e PN500 0h (88,1%) foi superior aos outros grupos; o tempo de PDT foi semelhante nos grupos fresco (27,5 ± 0,35 h), controle congelado (30,1 ± 2,3 h) e PN500 0h (32,4 ± 1,6 h). O menor tempo foi observado no grupo PN800 0h (21,9 h). O congelamento de células fetais bovinas de cultivo primário, realizado em palhetas de 0,25 mL, com 10% de DMSO, possibilita elevadas taxas de sobrevivência após o descongelamento. A PN modifica a curva de crescimento de células criopreservadas, sendo que as intensidades de 200 ou 500 mbar, aplicadas imediatamente antes do congelamento das células, possibilitam curvas de proliferação semelhantes às obtidas com células frescas.(AU)
Cell cryopreservation is an important tool in the preservation of endangered species. Fetal bovine primary culture-obtained cells were subjected to negative pressure (NP) 200, 500 or 800 mbar, just before (NP0h) or 3 hours before (NP3h) freezing into fine (0.25 mL) straws, using 10% DMSO as cryoprotectant. Fresh and frozen fibroblasts non submitted to NP were used as controls. We evaluated cell viability after freezing, cell proliferation curve, and population doubling time (PDT) every 24 hours during 8 days. Data were submitted to Tukey or Chi square test (P≤ 0.05). The average survival of control group (89.8%) and NP500-0h (88.1%) was higher than other groups; the time of PDT was similar in the fresh (27.5 ± 0.35 h), frozen control (30.1 ± 2.3 h) and NP500-0h groups (32.4 ± 1.6 h). The lowest time was observed in the NP800-0h (21.9 h) group. Freezing of bovine fibroblasts into 0.25 mL straws with 10% DMSO enables high survival rates after thawing. The NP modifies the growth curve of cryopreserved cells and the intensities of 200 or 500 mbar, applied just before freezing the cells, allow proliferation curves similar to those obtained with fresh cells.(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Preservação de Tecido/veterinária , Células , Criopreservação/veterináriaResumo
O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da adição do glicerol em diferentes etapas do resfriamento (pré-resfriamento e durante) do sêmen de garanhões, sobre os parâmetros de congelabilidade, como avaliações físicas e morfológicas dosêmen e testes complementares (teste hiposmótico, supravital e teste de termoresistência). Foram utilizados onze ejaculados de dois garanhões da raçaMangalarga Marchador. Não foram registradas diferenças (P > 0,05) entre os valores médios obtidos nos protocolos utilizados. Esses registros sugerem que o tempo de contato entre o glicerol e o sêmen antes do processo de congelamento não interfere na qualidade e na longevidade do sêmen de garanhões após o descongelamento.
The aim of this study was to evaluate the effect of glycerol addition in different cooling periods (before and during) of stallion semen, over its freezabilitycharacteristics, such as physical and morphological evaluations and complementary tests (hyposmotic swelling test, supravital staining and termoresistance test). The studyinvolved eleven ejaculates from two Mangalarga Marchador stallions. No relations (P > 0.05) were registered among average values of the treatments. These results suggest that the contact time between semen and glycerol does not affect quality and longevity of stallion semen after thawing.
Assuntos
Masculino , Animais , Glicerol/síntese química , Motilidade dos Espermatozoides , Preservação do Sêmen/veterináriaResumo
This study evaluated animal performance, carcass characteristics and meat quality of 36-month old Nellore steers finished in pastures (n = 10) and 20-month old Angus vs. Nellore bulls finished in feedlot (n = 10). Final body weight, carcass weight, characteristics, conformation and fat thickness, were higher (p 0.05) throughout the ageing period for the Angus vs. Nellore bulls, but higher in meat from the Nellore steers (p 0.05) on meat a* value (redness). Likewise, ageing time had no effect on a* in both genetic groups, and genetic group had no effect (p > 0.05) on meat b* value (yellowness). On the other hand, b* was increased after day 7 of ageing for the bulls from the two genetic groups. Thawing and cooking losses were lower for Nellore steers after day 7 of aging (p 0.05) on lipid oxidation; however, lipid oxidation increased after day7. Meat from Nellore steers contained a higher percentage of saturated fatty acids (SFA), a lower percentage of unsaturated (UFA) and monounsaturated fatty acids (MUFA) and a similar percentage of polyunsaturated fatty acids (PUFA) than the meat from Angus vs. Nellore bulls.
Este estudo foi realizado para avaliar o desempenho animal, características de carcaça e qualidade da carne de novilhos Nelore terminados em pastagens e abatidos aos 36 meses de idade (n = 10) e machos não castrados Angus vs. Nelores abatidos aos 20 meses de idade (n = 10). O peso final, peso, características e conformação da carcaça e espessura de gordura de cobertura foram maiores (p 0,05) ao longo da maturação para os mestiços Angus vs. Nelores; enquanto que o valor de L* da carne dos novilhos Nelores aumentou (p 0,05) sobre o valor de a* (cor vermelha). Da mesma forma, o tempo de maturação não teve efeito (p > 0,05) para os animais dos dois grupos genéticos. O grupo genético não teve efeito (p > 0,05) sobre o valor de b* (cor amarela). Por outro lado, o tempo de maturação aumentou o valor de b* após o sétimo dia para os animais dos dois grupos genéticos. A perda por descongelamento e cocção foi menor (p 0,05) sobre a oxidação de lipídeos; no entanto, a oxidação de lipídeos aumentou após o sétimo dia.
Assuntos
Animais , Bovinos , Carne/análise , Carne/classificação , Vetores Genéticos/análise , Bovinos/classificaçãoResumo
This study evaluated animal performance, carcass characteristics and meat quality of 36-month old Nellore steers finished in pastures (n = 10) and 20-month old Angus vs. Nellore bulls finished in feedlot (n = 10). Final body weight, carcass weight, characteristics, conformation and fat thickness, were higher (p < 0.001) for the Nellore steers than for Angus vs. Nellore bulls. Water losses during chilling (24hours, 4oC) were lower (p < 0.05) for Nellore steers than for the Angus vs. Nellore bulls. Muscle percentage on the 6th rib was higher (p < 0.05) for the Nellore steers than for Angus vs. Nellore bulls; while bone percentage was lower (p < 0.05) for Nellore steers. After 7 and 14 days of ageing, the L* meat value was higher for the Nellore steers than for the Angus vs. Nellore bulls; the L* meat value was similar (p > 0.05) throughout the ageing period for the Angus vs. Nellore bulls, but higher in meat from the Nellore steers (p < 0.05). Genetic group had no effect (p > 0.05) on meat a* value (redness). Likewise, ageing time had no effect on a* in both genetic groups, and genetic group had no effect (p > 0.05) on meat b* value (yellowness). On the other hand, b* was increased after day 7 of ageing for the bulls from the two genetic groups. Thawing and cooking losses were lower for Nellore steers after day 7 of aging (p < 0.05). The meat of the Angus vs. Nellore bulls was more tender (p < 0.05) at all ageing times studied (1, 4, 7 and 14 days) than the meat of the Nellore steers. Genetic group had no effect (p > 0.05) on lipid oxidation; however, lipid oxidation increased after day7. Meat from Nellore steers contained a higher percentage of saturated fatty acids (SFA), a lower percentage of unsaturated (UFA) and monounsaturated fatty acids (MUFA) and a similar percentage of polyunsaturated fatty acids (PUFA) than the meat from Angus vs. Nellore bulls.(AU)
Este estudo foi realizado para avaliar o desempenho animal, características de carcaça e qualidade da carne de novilhos Nelore terminados em pastagens e abatidos aos 36 meses de idade (n = 10) e machos não castrados Angus vs. Nelores abatidos aos 20 meses de idade (n = 10). O peso final, peso, características e conformação da carcaça e espessura de gordura de cobertura foram maiores (p < 0,001) para os novilhos Nelores do que para os mestiços Angus vs. Nelores. As perdas de água durante o resfriamento (24 horas, 4º C) foram menores (p < 0,05) para os novilhos Nelores do que para os mestiços Angus vs. Nelores. A percentagem de músculo na 6ª costela foi maior (p < 0,05) para os novilhos Nelores do que para os mestiços Angus vs. Nelores; enquanto que a percentagem de osso foi menor (p < 0,05) para os novilhos Nelores. Após 7 e 14 dias de maturação, o valor de L* da carne foi maior (p < 0,05) para os novilhos Nelores do que para os mestiços Angus vs. Nelores. O valor de L* foi similar (p > 0,05) ao longo da maturação para os mestiços Angus vs. Nelores; enquanto que o valor de L* da carne dos novilhos Nelores aumentou (p < 0,05). O grupo genético não teve efeito (p > 0,05) sobre o valor de a* (cor vermelha). Da mesma forma, o tempo de maturação não teve efeito (p > 0,05) para os animais dos dois grupos genéticos. O grupo genético não teve efeito (p > 0,05) sobre o valor de b* (cor amarela). Por outro lado, o tempo de maturação aumentou o valor de b* após o sétimo dia para os animais dos dois grupos genéticos. A perda por descongelamento e cocção foi menor (p < 0,05) para os novilhos Nelores após o sétimo dia de maturação. A carne dos mestiços Angus vs. Nelores foi mais macia (p < 0,05) em todos os tempos de maturação (1, 4, 7 e 14 dias) do que a carne dos novilhos Nelores. O grupo genético não teve efeito (p > 0,05) sobre a oxidação de lipídeos; no entanto, a oxidação de lipídeos aumentou após o sétimo dia.(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Carne/análise , Carne/classificação , Vetores Genéticos/análise , Bovinos/classificaçãoResumo
Neste estudo objetivou-se avaliar as variáveis fisiológicas, o consumo, o comportamento ingestivo, as características produtivas (capítulo I), as características da carcaça, dos componentes não carcaça e a qualidade da carne (capítulo II) de borregas das raças Corriedale e Texel, esquiladas ou não esquiladas, terminadas em confinamento. Foram utilizadas 44 borregas, sendo 22 da raça Corriedale e 22 da raça Texel, onde 11 animais de cada raça foram esquilados. Nas variáveis fisiológicas as Texel apresentaram temperatura ocular (TO) e temperatura da pele (TP) superior (P0,05), enquanto as não esquiladas apresentaram frequência respiratória (Freq. Resp.) superior e temperatura da lã (TL) inferior as esquiladas. Quanto ao comportamento ingestivo as Texel passaram maior tempo em atividade de ruminação (RUM) e de mastigação total (TMT) e permaneceram menor tempo em ócio (OCIO) em comparação às Corriedale. As borregas esquiladas permaneceram maior tempo em pé (EM PE) e ficaram menos tempo deitadas (DEIT) do que as não esquiladas. O consumo de matéria seca (CMS) e de nutrientes não foi influenciado (P>0,05) pela raça das borregas. Por outro lado, as borregas esquiladas apresentaram superioridade (P0,05) para os consumos de matéria seca (CMS), matéria orgânica (CMO), proteína bruta (CPB), fibra em detergente neutro (CFDN), fibra em detergente ácido (CFDA) e de nutrientes digestíveis totais (CNDT), quando expressos em kg/dia, % do PV e g/kg PV0,75. Nas características produtivas as Texel apresentaram superioridade em relação ao ganho de peso médio diário (GMD) e, como consequência, no peso vivo ao abate (PVA), além de apresentarem melhor escore de condição corporal ao final do experimento (ECCFi). As esquiladas apresentaram maior ECCFi do que as não esquiladas. Com relação as características da carcaça, dos componentes não carcaça e da qualidade da carne, as Texel foram superiores (P0,05) nas variáveis peso vivo de abate (PVA), peso de carcaça quente (PCQ), peso de carcaça fria (PCF), rendimento de carcaça quente (RCQ), rendimento de carcaça fria (RCF), índice de compacidade da carcaça (ICC), conformação da carcaça (CONF), peso de pescoço (PESC), paleta (PAL), perna (PERN), além de % de perna. As Corriedale foram superiores na variável costilhar (COST) em %. As esquiladas foram superiores em PCQ, PCF, RCQ, RCF, ICC, além de PESC e COST em kg e COST em %. As não esquiladas apresentaram maior % de PERN. Nos componentes não-carcaça as Corriedale foram superiores em kg e em % para órgãos externos (OrExt). As não esquiladas tiveram maior peso e % dos OrExt, enquanto as esquiladas apresentaram maior peso e % de órgãos gastrointestinais (OrGi). Na avaliação do pH e da temperatura (Temp) as Texel apresentaram o pH0 maior, já as esquiladas tiveram maior Temp0. Na avaliação instrumental as Texel tiveram maiores perdas por descongelamento (PPD) e perdas por cocção (PPC), e as Corriedale apresentaram maior capacidade de retenção de água (CRA). As esquiladas apresentaram maior PPC. Houve interação entre raça x sistema para PPC. Quando terminadas em sistema de confinamento as borregas da raça Texel apresentam melhor desempenho do que as borregas Corriedale. A realização da esquila proporciona benefícios na terminação de borregas em confinamento.
This study aimed to evaluate the physiological variables, consumption, ingestive behavior, production characteristics (chapter I), carcass characteristics, non-carcass components and meat quality (chapter II) of Corriedale and Texel ewe hoggets, shorn or non-shorn, finished in feedlot. Forty-four animals were used, 22 of the Corriedale breed and 22 of the Texel breed, where 11 animals of each breed were shorn. Texel had higher ocular temperature (TO) and skin temperature (TS) (P0.05), while those not shorn had higher respiratory frequency (Freq.Resp.) and lower wool temperature (TW) than shorn. As for the ingestive behavior, Texel spent more time in rumination (RUM) and total chewing (TCT) activities and spent less time in idleness (IDLENESS) compared to Corriedale. Sheared hoggets remained standing longer (ST) and less time lying down (LD) than those not shorn. The dry matter (DMI) and nutrient intake was not influenced (P>0.05) by the breed of hoggets. On the other hand, shorn hoggets showed superiority (P0.05) for dry matter (DMI), organic matter (OMI), crude protein (CPI), neutral detergent fiber (NFDI), acid detergent fiber intakes. (ADFI) and total digestible nutrients (TDNI), when expressed in kg/day, % of LW and g/kg LW0.75. In the productive characteristics, Texel showed superiority in relation to the average daily weight gain (DWG) and, as a consequence, in the live weight at slaughter (LWS), in addition to presenting a better body condition score at the end of the experiment (BCSE). The shorn had higher BCSE than the unshorn. Regarding the characteristics of the carcass, non-carcass components and meat quality, Texel were higher (P0.05) in the variables slaughter live weight (SLW), hot carcass weight (HCW), cold carcass weight (CCW), hot carcass yield (HCY), cold carcass yield (CCY), carcass compactness index (CCI), carcass conformation (CONF), neck weight (NECK), pallet (PAL), leg (LEG), besides % of leg. The Corriedale were higher in the rib variable (RIB) in %. The shorn were superior in HCW, CCW, HCY, CCY, CCI, in addition to NECK, RIB in kg and RIB in %. Unshorn ones had the highest % of LEG. In non-carcass components, Corriedale were higher in kg and in % for external organs (ExtOr), while. The unshorn had higher weight and % of ExtOr, while the shorn had higher weight and % of gastrointestinal organs (GiOr). In the evaluation of pH and temperature (Temp), the Texels had the highest pH0, whereas the shorns had the highest Temp0. In the instrumental evaluation, Texels had higher losses on thawing (HLT) and losses on cooking (LC), while Corriedale had higher water retention capacity (WRC). The shorn showed higher LC, there was an interaction between race x system for LC. When finished in a feedlot system, Texel ewe ewes show better performance than Corriedale ewes. Shearing provides benefits in the termination of feedlot ewes.
Resumo
The aim of this study was to evaluate the effect of different concentrations of trans-resveratrol or quercetin on the ability of goat sperm to withstand being frozen. Six pools of semen obtained from six male goats were processed with different concentrations of resveratrol or quercetin (Experiment 1: 0, 15, 25, 50, 75 or 100µM resveratrol; Experiment 2: 0, 15, 25, 50, 75 or 100µM quercetin) and frozen. After thawing, the semen was evaluated for sperm kinematics, plasma membrane and acrosome integrity, morphology and oxidative stress following 0 and 1h of incubation. Immediately after thawing (0h), wobble (oscillation index) in the groups treated with 100µM of quercetin or resveratrol was lower (P<0.05) than in those treated with 0 and 25µM resveratrol and 0µM quercetin, respectively. After 1h of incubation, the total motility in treatments with 15, 50 and 75µM quercetin, as well as the plasma membrane integrity in all quercetin concentrations were lower (P<0.05) than at 0h. In opposition, the linearity of semen samples treated with 100µM quercetin and the straightness of those treated with 75 and 100µM quercetin were lower (P<0.05) at 0h than at 1h after thawing. Thus, it can be concluded that resveratrol and quercetin at high concentrations (100µM) transiently reduce the wobble of goat sperm submitted to frozen storage, and that quercetin (75 and 100µM) increases the linearity and straightness over time, which can be favorable for fertility.(AU)
O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de diferentes concentrações de transresveratrol ou quercetina sobre a capacidade dos espermatozoides caprinos de resistirem à congelação. Seis pools de sêmen, obtidos de seis reprodutores caprinos, foram processados com diferentes concentrações de resveratrol ou quercetina (Experimento 1: 0, 15, 25, 50, 75 ou 100µM de resveratrol; Experimento 2: 0, 15, 25, 50, 75 ou 100µM de quercetina) e congelados. Após o descongelamento, o sêmen foi avaliado quanto à cinética espermática, à integridade das membranas plasmática e acrossomal, à morfologia e ao estresse oxidativo nos tempos zero e uma hora de incubação. Imediatamente após a descongelação (zero hora), o wobble (índice de oscilação) nos grupos tratados com 100µM de quercetina ou de resveratrol foi menor (P<0,05) do que nos tratados com 0 e 25µM de resveratrol e com 0µM de quercetina, respectivamente. Após uma hora de incubação, a motilidade total dos tratamentos com 15, 50 e 75µM de quercetina, assim como a integridade de membrana plasmática em todas as concentrações de quercetina, foi menor (P<0,05) do que à zero hora. Em oposição, a linearidade das amostras de sêmen tratadas com 100µM de quercetina e a retilinearidade daquelas tratadas com 75µM e 100µM de quercetina foram menores (P<0,05) à zero hora do que à uma hora após descongelação. Assim, pode-se concluir que o resveratrol e a quercetina, em concentrações elevadas (100µM), reduzem, transitoriamente, o índice de oscilação de espermatozoides caprinos submetidos à congelação e que a quercetina (75 e 100µM) aumenta a linearidade e a retilinearidade ao longo do tempo, o que pode ser favorável à fertilidade.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Ruminantes , Quercetina/análise , Flavonoides/análise , Criopreservação/veterinária , Antioxidantes , Estresse OxidativoResumo
The aim of this study was to evaluate the effect of different concentrations of trans-resveratrol or quercetin on the ability of goat sperm to withstand being frozen. Six pools of semen obtained from six male goats were processed with different concentrations of resveratrol or quercetin (Experiment 1: 0, 15, 25, 50, 75 or 100µM resveratrol; Experiment 2: 0, 15, 25, 50, 75 or 100µM quercetin) and frozen. After thawing, the semen was evaluated for sperm kinematics, plasma membrane and acrosome integrity, morphology and oxidative stress following 0 and 1h of incubation. Immediately after thawing (0h), wobble (oscillation index) in the groups treated with 100µM of quercetin or resveratrol was lower (P<0.05) than in those treated with 0 and 25µM resveratrol and 0µM quercetin, respectively. After 1h of incubation, the total motility in treatments with 15, 50 and 75µM quercetin, as well as the plasma membrane integrity in all quercetin concentrations were lower (P<0.05) than at 0h. In opposition, the linearity of semen samples treated with 100µM quercetin and the straightness of those treated with 75 and 100µM quercetin were lower (P<0.05) at 0h than at 1h after thawing. Thus, it can be concluded that resveratrol and quercetin at high concentrations (100µM) transiently reduce the wobble of goat sperm submitted to frozen storage, and that quercetin (75 and 100µM) increases the linearity and straightness over time, which can be favorable for fertility.(AU)
O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de diferentes concentrações de transresveratrol ou quercetina sobre a capacidade dos espermatozoides caprinos de resistirem à congelação. Seis pools de sêmen, obtidos de seis reprodutores caprinos, foram processados com diferentes concentrações de resveratrol ou quercetina (Experimento 1: 0, 15, 25, 50, 75 ou 100µM de resveratrol; Experimento 2: 0, 15, 25, 50, 75 ou 100µM de quercetina) e congelados. Após o descongelamento, o sêmen foi avaliado quanto à cinética espermática, à integridade das membranas plasmática e acrossomal, à morfologia e ao estresse oxidativo nos tempos zero e uma hora de incubação. Imediatamente após a descongelação (zero hora), o wobble (índice de oscilação) nos grupos tratados com 100µM de quercetina ou de resveratrol foi menor (P<0,05) do que nos tratados com 0 e 25µM de resveratrol e com 0µM de quercetina, respectivamente. Após uma hora de incubação, a motilidade total dos tratamentos com 15, 50 e 75µM de quercetina, assim como a integridade de membrana plasmática em todas as concentrações de quercetina, foi menor (P<0,05) do que à zero hora. Em oposição, a linearidade das amostras de sêmen tratadas com 100µM de quercetina e a retilinearidade daquelas tratadas com 75µM e 100µM de quercetina foram menores (P<0,05) à zero hora do que à uma hora após descongelação. Assim, pode-se concluir que o resveratrol e a quercetina, em concentrações elevadas (100µM), reduzem, transitoriamente, o índice de oscilação de espermatozoides caprinos submetidos à congelação e que a quercetina (75 e 100µM) aumenta a linearidade e a retilinearidade ao longo do tempo, o que pode ser favorável à fertilidade.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Flavonoides/análise , Quercetina/análise , Ruminantes , Preservação do Sêmen/veterinária , Antioxidantes , Criopreservação/veterinária , Estresse OxidativoResumo
Este estudo propôs avaliar o efeito da adição de colesterol ligado à ciclodextrina (CLC) antes do processo de criopreservação e estimulantes de motilidade após o descongelamento (Fert Talp - FT e Pentoxifilina - PTX), sobre a cinética espermática (MT, MP, RAP, VCL, VSL, VAP e LIN), integridade de membrana plasmática, produção de peróxido de hidrogênio intracelular, potencial mitocondrial, desestabilização da membrana plasmática e fertilidade in vivo. Foram criopreservados dois ejaculados de 12 garanhões e cada ejaculado foi subdividido em quatro grupos: G1 (sem CLC), G2 (1mg de CLC), G3 (1,5mg de CLC) e G4 (2mg de CLC). No experimento I o objetivo foi comparar os parâmetros espermáticos após a inclusão de CLC (G1-G4) e avaliar a longevidade celular pelo teste de Termorresitência - TTR após o descongelamento: imediatamente (T0), 40 minutos (T40), 80 minutos (T80) e 120 minutos (T120). Além disso, objetivou-se avaliar o potencial mitocondrial e a desestabilização da membrana. No experimento II o objetivo foi comparar os parâmetros espermáticos nos grupos anteriores (G1-G4), com e sem adição do estimulante FT (20% - v/v) após o descongelamento, quanto a longevidade celular (TTR - T0, T40, T80 e T120 minutos) e avaliar a produção de peróxido de hidrogênio intracelular. No experimento III o objetivo foi comparar os parâmetros espermáticos nos grupos anteriores (G1-G4), com e sem adição do estimulante PTX (20% - v/v) após o descongelamento, avaliar a longevidade celular (TTR - T0, T40, T80 e T120 minutos), avaliar a produção de peróxido de hidrogênio intracelular, o potencial mitocondrial e a desestabilização da membrana. Além disso, objetivou-se avaliar a fertilidade do sêmen criopreservado em três grupos: 1) Grupo controle (sem CLC); 2) Grupo 1,5mg de CLC; e 3) Grupo 1,5 mg de CLC + PTX. No experimento I, os grupos G3 e G4 apresentaram valores superiores de VCL, VSL e VAP. No T0 os parâmetros de MT e MP foram superiores no G3. Quanto ao potencial mitocondrial e a desestabilização da membrana não foram observadas diferenças significativas entre os grupos (p<0,05). No experimento II, a adição de FT foi benéfica à velocidade espermática (VCL, VSL e VAP) em alguns grupos experimentais e em tempos diferentes. O G2 com FT demonstrou maior percentual de células com membrana plasmática íntegra e sem peróxido de hidrogênio em comparação aos grupos sem adição do estimulante. No experimento III, a adição de PTX não foi benéfica aos parâmetros de cinética após o descongelamento ao decorrer do tempo em alguns grupos experimentais. No grupo G1 com PTX notou-se superioridade de células com membrana lesionada com peróxido de hidrogênio em comparação ao G4 com PTX e uma maior população celular com membranas íntegras sem peróxido de hidrogênio no grupo G4 com PTX em comparação ao G2 com PTX. A taxa de concepção nos grupos G1, G2 e G3 foram 50%, 66,7% e 66,7%, respectivamente. A adição de CLC melhorou os parâmetros cinéticos in vitro, sendo que as concentrações de 1,5 mg e 2 mg conferiram melhor resistência ao processo de criopreservação. A adição de FT conferiu longevidade e superioridade aos parâmetros de velocidade espermática. Em contrapartida, a adição do estimulante PTX, afetou a longevidade celular, demonstrando efeito prejudicial ao movimento espermático. Além disso, a inclusão de CLC não demostrou prejudicar a taxa de concepção em inseminações realizadas após a ovulação. Mediante os resultados encontrados no atual trabalho, pode-se concluir que as concentrações de CLC que melhor conferiram resistência aos espermatozoides ao processo de criopreservação com consequente incremento cinético às células espermáticas foram 1,5 mg e 2 mg. Os achados com a adição do estimulante FT, considerando-o estimulante de motilidade através do aumento no metabolismo celular, conferiu longevidade e superioridade aos parâmetros de velocidade espermática, sendo essa uma atribuição satisfatória além de conferir também maiores populações celulares com membrana plasmática íntegra sem a produção de peróxido de hidrogênio. Em contrapartida a adição do estimulante PTX, afetou a longevidade celular, demonstrando efeito prejudicial ao movimento espermático. E quanto a fertilidade do sêmen criopreservado, os resultados encontrados com a utilização de colesterol ligado a ciclodextrina não interferiu na fertilidade. Dessa forma, o colesterol ligado à ciclodextrina é benéfico à célula espermática ao processo de criopreservação, entretanto a adição de estimulante causou efeitos divergentes, aumentando os parâmetros e a longevidade celular (FT) ou diminuindo os parâmetros de cinética com o tempo (PTX).
The current study proposed to evaluate the effect of the addition of cholesterol bound to cyclodextrin (CLC) before the cryopreservation process and motility stimulants post thawed (fert talp FT and pentoxifylline PTX) on the spermatic kinetics (MT, MP, RAP, VCL, VSL, VAP and LIN), membrane integrity, production of intracellular hydrogen peroxide, mitochondrial potential, destabilization of the plasma membrane and in vivo fertility. Two ejaculates of 12 stallions were cryopreserved; subdivided into four experimental groups: G1 (no CLC); G2 (1 mg of CLC), G3 (1.5 mg of CLC) and G4 (2 mg of CLC). In experiment I, the objective was to compare spermatic parameters after the inclusion of CLC (G1-G4), to evaluate cell longevity through the thermoresistance test - TTR post thawed: immediately (T0), 40 minutes (T40), 80 minutes (T80) and 120 minutes (T120). In addition, mitochondrial potential and membrane destabilization were evaluated. In experiment II the objective was to compare spermatic parameters after the inclusion of CLC (G1-G4) and the addition of the stimulant FT, to evaluate cell longevity (TTR) post thawed (T0, T40, T80 and T120) and to evaluate the production of intracellular hydrogen peroxide. In experiment II the objective was to compare spermatic parameters in the groups (G1-G4), with and without the addition of the stimulant FT (20% - v/v) post thawed, as to the cellular longevity (TTR T0, T40, T80 and T120 minutes) and to evaluate the production of intracellular hydrogen peroxide. In experiment III the objective was to compare spermatic parameters in the groups (G1-G4), with and without the addition of the stimulant PTX (20% - v/v) post thawed, to evaluate cellular longevity (TTR - T0, T40, T80 and T120 minutes), to evaluate the production of intracellular hydrogen peroxide, the mitochondrial potential and the membrane destabilization. In addition, to evaluate the fertility of the cryopreserved semen in three groups: 1) Control group: no cholesterol addition; 2) Group cholesterol: 1.5 mg, and 3) Group cholesterol 1.5 mg + PTX. In experiment I, groups G3 and G4 presented superior values of VCL, VSL and VAP. In T0, the parameters of MT and MP were superior in G3. As to mitochondrial potential and membrane destabilization, no meaningful differences were observed between the groups (p<0.05). In experiment II, the addition of FT was beneficial to spermatic speed (VCL, VSL and VAP) in some experimental groups and in different times. G2 with FT has demonstrated higher percentage of cells with intact membrane and without hydrogen peroxide in comparison to groups without the addition of the stimulant. In experiment III, the addition of PTX was not beneficial to the kinetics parameters post thawed along time in some experimental groups. In the group G1 with PTX it was observed superiority in cells with injured membrane and with hydrogen peroxide in comparison to G4 with PTX and a higher cell population with intact membranes and without hydrogen peroxide in the group G4 with PTX in comparison to G2 with PTX. The conception rate in the groups G1, G2 and G3 was, respectively, 50%, 66.7% and 66.7%. In this way, it is possible to conclude that the addition of the cholesterol bounded to cyclodextrin is beneficial to the spermatic cell in the cryopreservation process, however, the addition of stimulants post thawed has caused divergent effect. The stimulant FT has provided longevity and superiority to the spermatic velocity parameters. In contrast, the addition of the stimulant PTX has compromised the cellular longevity. In addition, the inclusion of CLC has not affected the conception rate in inseminations carried out after the ovulation.
Resumo
A criopreservação de sêmen é uma tecnologia de grande importância na área reprodutiva, por possibilitar melhor disseminação genética de touros, consequentemente aumentando a produtividade dos rebanhos comercias nacionais, por ser a técnica com maior custo-benefício é a mais utilizada, porém ainda se tem algumas dificuldades a qual deve-se solucionar para obter maior produção. A excessiva produção de radicais livres após o descongelamento é uma delas, com o objetivo amenizar os danos causados pelas moléculas dos radicais livres adicionou-se a proteína carnosina que possui propriedades antioxidativas ao diluente de congelação. Foram utilizados os ejaculados de 5 touros da raça nelore de idade superior a 24 meses com fertilidade comprovada, cada animal foi coletado 3 vezes somando-se 15 ejaculados, posteriormente cada amostra foi subdividida em a 4 parcelas: Grupo controle (sem carnosina), CAR1 (100ng/ml), CAR2 (200ng/ml) e CAR3(300ng/ml), as amostras foram envasadas em palhetas de 0,5ml com concentração de 30 milhões de espermatozoides vivos e submetidas ao processo de congelamento lento convencional, onde as palhetas foram acomodadas em uma caixa térmica sob refrigeração de 5ºC por 4 horas, passado o tempo de resfriamento as palhetas foram relocadas para uma caixa de isopor com nitrogênio líquido a uma distância de 5cm da superfície do liquido por 20 minutos e posteriormente mergulhadas no nitrogênio líquido a uma temperatura de -196ºC e armazenadas em botijão criogênico. Todas as amostras foram submetidas as análises em dois momentos, após o descongelamento a 37ºC por 30 segundos (M0) e após o teste de termo regulação rápida (M30) onde uma parcela da amostra é incubada a 46ºC por 30 minutos. Em ambos os momentos as amostras passaram por avaliação pelo CASA para análise da cinética espermática e pela avaliação do citômetro de fluxo para averiguar as injúrias estruturais ocasionadas pelos radicais livres. As avaliações estatísticas foram realizadas através do software SAS utilizando a análise de variância entre os grupos. Não houve alterações nos padrões de motilidade gerais, porém as médias do grupo mais concentrado (300ng/ml) foi observado taxas de células vivas melhores no momento de descongelamento (controle = 55,56 ± 22,37 e CAR3 = 60,91 ± 19,38). A carnosina não demostrou estatisticamente efetividade na proteção contra os danos causados pelos radicais livres em nenhuma das concentrações utilizadas, porém também não ocasionaou danos as células espermáticas.
The cryopreservation of a technology of great importance in the reproductive area, as it allows a better genetic dissemination of bulls, is consequently impaired in the tests of herds of national traders, as it is the most cost-effective technique, it is the most used, but still has some difficulties to qualify problems for greater production. An excessive production of free radicals after thawing is one of them, with the objective of causing damage caused by free radical molecules, applied to a fleshy protein that has antioxidant properties and freezing diluents. Ejaculates from 5 bulls aged over 24 months with proven fertility were used, each animal was collected 3 times with the command 15 ejaculates, afterwards each sample was subdivided into 4 parcels: Control group (without carnosine), CAR1 (100ng / ml), CAR2 (200ng / ml) and CAR3 (300ng / ml), as the samples were packaged in 0.5 ml palettes with a concentration of 30 million live sperm and subjected to a conventional slow freezing process, where the palettes were accommodated in a thermal box under 5ºC refrigeration for 4 hours, after the cooling time as reeds were relocated to a Styrofoam box with liquid nitrogen at a distance of 5cm from the liquid surface for 20 minutes and after drying in liquid nitrogen at a temperature of -196ºC and stored in a cryogenic cylinder. All samples were subjected to analysis in two moments, after thawing at 37ºC for 30 seconds (M0) and after the rapid thermodynamics test (M30) where a portion of the sample is incubated at 46ºC for 30 minutes. At both times, the tests were evaluated by CASA for analysis of sperm kinetics and by the evaluation of the flow cytometer for average, according to injuries occasionally shown by free radicals. How the statistics were performed using the SAS software, using an analysis of variation between groups. There were no changes in the general mobility patterns, however the media of the most concentrated group (300ng / ml) were observed better live cell rates at the time of thawing (control = 55.56 ± 22.37 and CAR3 = 60.91 ± 19 38). Carnosine does not demonstrate statistically effectiveness in protecting against damage caused by free radicals in any of the applications used, but it also does not cause damage such as sperm cells.