Incubação e conservação: efeito sobre a motilidade espermática do sêmen suíno / Incubation and conservation: effect on sperm motility of swine semen

Visando aumentar a resistência espermática ao abaixamento de temperatura, foram utilizados ejaculados de três reprodutores coletados pela técnica da mão enluvada. Após a coleta, uma alíquota de sêmen foi diluída em BTS e distribuída, em partes iguais, em cinco tratamentos que diferiam entre si quanto às temperaturas (37 e 25 °C) e aos tempos de equilíbrio (6 e 24 horas) antes da conservação a 17 °C por sete dias. Os tratamentos foram: T1: sêmen sem nenhum tempo ou temperatura de equilíbrio; T2 e T3: sêmen incubado a 37 °C por 6 e 24 horas., respectivamente; T4 e T5: sêmen incubado a 25 °C por 6 e 24 horas., respectivamente. O sêmen foi avaliado nos dias D1 a D4 e no D7 quanto ao vigor e motilidade espermática aos cinco minutos, e duas horas após reaquecimento a 37 °C. O sêmen incubado a 37 °C/24 horas apresentou valores de vigor e motilidade muito inferiores aos dos demais tratamentos (p<0,05), enquanto o sêmen submetido à temperatura de equilíbrio de 25 °C por 6 horas anteriores à diluição destacou-se ao conservar a motilidade espermática após duas horas de incubação a 37 °C (p<0,05). Concluiu-se que as diferentes temperaturas e tempos de equilíbrio utilizadas, influenciaram na conservação do sêmen. A temperatura de incubação mais elevada (37 °C) na pré-diluição, por período prolongado (24 horas), reduziu a resistência espermática ao abaixamento da temperatura. Já, a combinação temperatura/tempo de 25 °C/6 horas, favoreceu a manutenção da motilidade espermática em teste de termorresistência.

Aiming to increase the spermatic resistance to lowering of temperature, ejaculates from three boars collected through the technique of the glove hand were used. After collection, an aliquot of semen was diluted in the BTS and distributed, in equal parts, in 5 treatments that differed in terms of temperatures (37 and 25 °C) and balance period (6 and 24 hours) before conservation at 17 °C for 7 days. The treatments were: T1: semen not subjected to any time or equilibrium temperature; T2 and T3: semen incubated at 37 °C for 6 and 24 hours, respectively; T4 and T5: to semen incubated at 25 °C for 6 and 24 hours, respectively. The semen was evaluated on days D1 to D4 and on D7 for vigor and sperm motility at five minutes, and two hours after rewarming at 37 °C. The semen incubated at 37 °C/24 hours presented values of vigor and motility much lower than those of the other treatments (p<0.05, while the semen submitted to the equilibrium temperature of 25 °C for 6 hours prior to dilution stood out by conserving sperm motility after 2 hours of incubation at 37 °C (p<0.05). In conclusion, the different temperatures and times of equilibrium used influenced the semen conservation, in which a higher pre-dilution incubation temperature (37 °C) for a prolonged period (24 hours) reduced the sperm resistance to a lowering of temperature, while the combination 25 °C/6 hours favored the maintenance of sperm motility in a thermoresistance test.

Uso de placa aquecedora visando a incubação do espermatozoide ovino após criopreservação / Use of heating plate aiming at the ovine sperm incubation after cryopreservation

Objetivou-se avaliar a utilização da placa aquecedora, em substituição ao banho-maria, no teste de termorresistência (TTR) de espermatozoides de carneiros após a criopreservação. Foram coletados 10 ejaculados de três carneiros adultos (n=30), por meio de vagina artificial para ovinos. Em seguida, foram diluídos em TrisGema de ovo, a uma concentração final de 200 x106 sptz/mL, e submetidos á curva de resfriamento, para posterior criopreservação em palhetas em nitrogênio líquido. Após descongelação, as amostras foram analisadas quanto à integridade de membrana, de acrossoma e atividade mitocondrial. O sêmen então foi dividido em dois tubos e submetido ao TTR, um em banho-maria e outro em placa aquecedora, e, ainda, avaliado a cada 30 minutos, do tempo zero (pós-descongelação) até 90 minutos de incubação, a 37 °C, quanto à motilidade espermática e à motilidade progressiva. As variáveis foram submetidas à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. Após o processo de congelação/descongelação, os espermatozoides apresentaram baixo percentual de integridade de membrana e elevado percentual de atividade mitocondrial e integridade do acrossoma. Não foi observada diferença na motilidade espermática nem na motilidade progressiva ao longo do TTR, quando comparados os espermatozoides que foram incubados em banho-maria aos incubados em placa aquecedora durante o período de 90 minutos. A placa aquecedora pode ser utilizada como meio de incubação dos espermatozoides de carneiros em substituição ao banho-maria.

The objective was to evaluate the use of the hot plate to replace the water bath in the thermo resistance test of ovine sperm after cryopreservation. Ten ejaculates were also collected from three adult sheep (n=30), by means of artificial sheep vagina. The collected samples were diluted in Tris-Egg Yolk, at a final concentration of 200 x106 sptz/mL and subjected to a cooling curve for subsequent cryopreservation in liquid nitrogen straws. Immediately after thawing, the samples were analyzed for membrane and acrosome integrity, and mitochondrial activity. The semen was then divided into two tubes and submitted to TTR, one in a water bath and the other in a hot plate, and evaluated every 30 minutes, from time zero (post-thaw) until 90 minutes of incubation at 37 °C, for sperm motility and progressive motility. The variables were subjected to analysis of variance and the means were compared using the Tukey test at 5% probability. After the freeze/thawing process, sperm showed a low percentage of membrane integrity, high percentage of mitochondrial activity, in addition to maintaining the integrity of acrossome. No difference was observed in sperm motility nor progressive motility, along the TTR, when comparing the sperm that were incubated in a water bath in relation to those incubated in a hot plate during the period of 90 minutes. The heating plate can be used as a means of incubating sheep sperm in replacement of the water bath.

Glutathione and IGF-1 in bovine seminal cryopreservation: oxidative stress response and pregnancy rate / [Glutationa e IGF-1 na criopreservação seminal bovina: resposta do estresse oxidativo e taxa de gestação]

The objective of this study was to evaluate the rate of conception, metabolic, and structural conditions of cryopreserved bovine sperm cells, plus extender with IGF-1 and glutathione (GSH). 12 ejaculations of Nelore bulls were used, submitted to treatments: control, gSH (2mM/mL), IGF-1 (100ng/mL) and gSH (1mM/mL) + IGF-1 (50ng/mL). After cryopreservation and thawing the semen passed the fast thermo resistance test (TTR), plasma membrane and acrosomal integrity (PIAI), mitochondrial membrane potential (AP), oxidative stress, and conception rate. Tukey test was used for the statistical analysis of the parametric variables and the Friedman test for nonparametric. The gestation percentage was compared by the Chi-square test. There was no statistical difference (P<0.05) between treatments for the TTRr variable. Otherwise in the oxidative stress evaluated with the CellROX probe was noted that the IGF-1 showed the highest number of reactive cells (P<0.05). The PIAI, AP and gestation rate showed no difference among treatments (P>0.05), with an average of conceptions of 36.58%. It is concluded that IGF-1, gSH and their association did not cause changes in sperm motility, mitochondrial potential, plasma and acrosomal membrane integrity. IGF-1 increased oxidative stress, however, there was no difference in the gestation rate among the treatments.(AU)

Objetivou-se avaliar a taxa de concepção, as condições metabólicas e estrutural das células espermáticas bovinas criopreservadas, acrescidas de diluidores com fator de crescimento semelhante à insulina do tipo 1(IGF-1) e glutationa (GSH). Foram utilizados 12 ejaculados de touros da raça Nelore, submetidos aos tratamentos: controle, gSH (2mM/mL), IGF-1 (100ng/mL) e gSH (1mM/mL) + IGF-1 (50ng/mL). Após a criopreservação e descongelação, o sêmen passou pelos testes de termorresistência rápida (TTRr), integridade de membrana plasmática e acrossomal (PIAI), alto potencial mitocondrial (AP), estresse oxidativo e taxa de concepção. Utilizou-se o teste de Tukey para as análises estatísticas das variáveis paramétricas e o teste de Friedman para as não paramétricas, com significância de 5%. A percentagem de gestação foi comparada pelo teste do qui-quadrado. Não hove diferença estatística (P<0,05) entre os tratamentos para a variável TTRr. Já no estresse oxidativo avaliado com a sonda CellROX, observou-se que o IGF-1 apresentou maior quantidade de células reativas (P<0,05), 36,38± 24,10. A PIAI, o AP e a taxa de gestação não apresentaram diferença entre tratamentos (P>0,05), com média de concepções de 36,58%. Conclui-se que o IGF-1, a gSH e a sua associação não causaram mudanças na motilidade espermática, no potencial mitocondrial, na integridade da membrana plasmática e acrossomal. O IGF-1 aumentou o estresse oxidativo, porém sem diferença na taxa de gestação entre os tratamentos.(AU)

Does supplementation of vitamin C, reduced glutathione or their association in semen extender reduce oxidative stress in bovine frozen semen? / A suplementação de vitamina C, glutationa reduzida ou sua associação no diluidor de sêmen reduz o estresse oxidativo no sêmen congelado bovino?

The aim of this study was to evaluate the addition of vitamin C, reduced glutathione and the association thereof to the bovine semen cryopreservation extender. The ejaculate from nine bulls were divided into four fractions, each corresponding to a treatment, namely: control group-semen diluted with Tris-yolk extender; vitamin C group-semen diluted in Tris-yolk extender supplemented with vitamin C (2.5mmol/mL); glutathione group-semen diluted in Tris-yolk extender supplemented with reduced glutathione (2.5mmol/mL) and associated group-semen diluted in Tris-yolk extender supplemented with vitamin C (1.25mmol/mL) and reduced glutathione (1.25mmol/mL). Afterwards, the semen was packed into French straws and submitted to cryopreservation using automated equipment. After cryopreservation, the semen was thawed and evaluated considering sperm motility, morphology, plasma membrane, acrosome, mitochondrial potential and oxidative stress, as well as the thermo resistance test. Extender's supplementation with the association of vitamin C and reduced glutathione showed benefic effects on sperm motility and preservation of plasma and acrosomal membranes during semen cryopreservation, being also the group that showed higher values of reactive oxygen species. Thus, the association of both antioxidants contributed to the preservation of sperm cells in every analyzed characteristic, suggesting its use on bovine semen cryopreservation.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a adição de vitamina C, glutationa reduzida e sua associação ao diluidor de criopreservação de sêmen bovino. O ejaculado de nove touros foi dividido em quatro frações, cada uma correspondendo a um tratamento, a saber: grupo controle - sêmen diluído em Tris-gema; grupo vitamina C - sêmen diluído em Tris-gema, suplementado com vitamina C (2,5mmol/mL); grupo glutationa - sêmen diluído em Tris-gema, suplementado com glutationa reduzida (2,5mmol/mL) e grupo sêmen associado - diluído em Tris-gema, suplementado com vitamina C (1,25mmol/mL) e glutationa reduzida (1,25mmol/mL ). Posteriormente, o sêmen foi envasado em palhetas francesas e submetido à criopreservação por meio de equipamento automatizado. Após a criopreservação, o sêmen foi descongelado e avaliado quanto à motilidade espermática, à morfologia, à membrana plasmática, ao acrossoma, ao potencial mitocondrial e ao estresse oxidativo, bem como pelo teste de resistência térmica. A suplementação de extensor com a associação de vitamina C e glutationa reduzida mostrou efeitos benéficos sobre a motilidade espermática e a preservação das membranas plasmática e acrossomal durante a criopreservação de sêmen, sendo também o grupo que apresentou maiores valores de espécies reativas de oxigênio. Assim, a associação de ambos os antioxidantes contribuiu para a preservação dos espermatozóides em todas as características analisadas, sugerindo sua utilização na criopreservação de sêmen bovino.(AU)

Does supplementation of vitamin C, reduced glutathione or their association in semen extender reduce oxidative stress in bovine frozen semen? / A suplementação de vitamina C, glutationa reduzida ou sua associação no diluidor de sêmen reduz o estresse oxidativo no sêmen congelado bovino?

The aim of this study was to evaluate the addition of vitamin C, reduced glutathione and the association thereof to the bovine semen cryopreservation extender. The ejaculate from nine bulls were divided into four fractions, each corresponding to a treatment, namely: control group-semen diluted with Tris-yolk extender; vitamin C group-semen diluted in Tris-yolk extender supplemented with vitamin C (2.5mmol/mL); glutathione group-semen diluted in Tris-yolk extender supplemented with reduced glutathione (2.5mmol/mL) and associated group-semen diluted in Tris-yolk extender supplemented with vitamin C (1.25mmol/mL) and reduced glutathione (1.25mmol/mL). Afterwards, the semen was packed into French straws and submitted to cryopreservation using automated equipment. After cryopreservation, the semen was thawed and evaluated considering sperm motility, morphology, plasma membrane, acrosome, mitochondrial potential and oxidative stress, as well as the thermo resistance test. Extender's supplementation with the association of vitamin C and reduced glutathione showed benefic effects on sperm motility and preservation of plasma and acrosomal membranes during semen cryopreservation, being also the group that showed higher values of reactive oxygen species. Thus, the association of both antioxidants contributed to the preservation of sperm cells in every analyzed characteristic, suggesting its use on bovine semen cryopreservation.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a adição de vitamina C, glutationa reduzida e sua associação ao diluidor de criopreservação de sêmen bovino. O ejaculado de nove touros foi dividido em quatro frações, cada uma correspondendo a um tratamento, a saber: grupo controle - sêmen diluído em Tris-gema; grupo vitamina C - sêmen diluído em Tris-gema, suplementado com vitamina C (2,5mmol/mL); grupo glutationa - sêmen diluído em Tris-gema, suplementado com glutationa reduzida (2,5mmol/mL) e grupo sêmen associado - diluído em Tris-gema, suplementado com vitamina C (1,25mmol/mL) e glutationa reduzida (1,25mmol/mL ). Posteriormente, o sêmen foi envasado em palhetas francesas e submetido à criopreservação por meio de equipamento automatizado. Após a criopreservação, o sêmen foi descongelado e avaliado quanto à motilidade espermática, à morfologia, à membrana plasmática, ao acrossoma, ao potencial mitocondrial e ao estresse oxidativo, bem como pelo teste de resistência térmica. A suplementação de extensor com a associação de vitamina C e glutationa reduzida mostrou efeitos benéficos sobre a motilidade espermática e a preservação das membranas plasmática e acrossomal durante a criopreservação de sêmen, sendo também o grupo que apresentou maiores valores de espécies reativas de oxigênio. Assim, a associação de ambos os antioxidantes contribuiu para a preservação dos espermatozóides em todas as características analisadas, sugerindo sua utilização na criopreservação de sêmen bovino.(AU)

Cryopreservation of semen from goats fed a diet supplemented with flaxseed / Criopreservação de sêmen de caprinos alimentados com dieta suplementada com semente de linhaça

The objective of this study was to evaluate the effects of the inclusion of flaxseed in the diet of male goats on the resistance of semen to the cryopreservation process. Sixteen males were distributed in four groups and fed a diet supplemented with 0, 4, 8, and 12% of flaxseed for a period of 60 days. Only the ejaculates that presented motility and vigor above 70% and 3, respectively, were sent through the cryopreservation process. After thawing, the semen was evaluated through thermo resistance, hypoosmotic, and acrossomal integrity tests. The data were submitted to analysis of variance and regression at 5% of significance. There was positive quadratic behavior for motility after 60, 120, and 180 min in the thermoresistance test (TTR), and positive quadratic behavior for sperm vigor after thawing after 120 and 180 min in the TTR (P < 0.05). However, negative quadratic behavior was obtained for plasma membrane integrity according to the hypoosmotic test (P < 0.05) and there was a difference in the acrosomal integrity test, presenting an optimum maximum level of 3.25% of flaxseed for acrosomal integrity of 65.83% (P < 0.05). The results obtained demonstrated that the addition of as much as 12% of flaxseed to the diet of goat breeders improved post-thawing sperm quality.(AU)

O objetivo com o estudo foi avaliar o efeito da inclusão de semente de linhaça na dieta de machos caprinos sobre a resistência do sêmen frente ao processo de criopreservação. Foram utilizados 16 machos, os quais foram distribuídos em quatro grupos e receberam dieta suplementada com 0, 4, 8 e 12% de semente de linhaça, durante um período de 60 dias. As coletas de sêmen iniciaram 25 dias após o início do fornecimento das dietas. Apenas os ejaculados que apresentaram motilidade e vigor acima de 70% e 3, respectivamente, foram encaminhados para o processo de criopreservação. Após o descongelamento, o sêmen foi avaliado através dos testes de termorresistência, hiposmótico e de integridade acrossomal. Os dados foram submetidos à análise de variância e regressão a 5% de significância. Houve comportamento quadrático positivo para a motilidade progressiva aos 60, 120 e 180 minutos no teste de termoresistência (TTR), e comportamento quadrático positivo para o vigor espermático pós-descongelamento aos 120 e 180 minutos no TTR (P<0,05). Entretanto, obteve-se comportamento quadrático negativo para a integridade da membrana plasmática pelo Teste Hiposmótico (P<0,05) e houve diferença para o teste de integridade acrossomal, apresentando nível máximo ótimo de 3,25% de semente de linhaça para integridade acrossomal de 65,83% (P<0,05). Os resultados obtidos demonstram que a adição de 12% de semente de linhaça na dieta de reprodutores caprinos melhora a qualidade espermática pós-descongelamento.(AU)

Cryopreservation of semen from goats fed a diet supplemented with flaxseed / Criopreservação de sêmen de caprinos alimentados com dieta suplementada com semente de linhaça

The objective of this study was to evaluate the effects of the inclusion of flaxseed in the diet of male goats on the resistance of semen to the cryopreservation process. Sixteen males were distributed in four groups and fed a diet supplemented with 0, 4, 8, and 12% of flaxseed for a period of 60 days. Only the ejaculates that presented motility and vigor above 70% and 3, respectively, were sent through the cryopreservation process. After thawing, the semen was evaluated through thermo resistance, hypoosmotic, and acrossomal integrity tests. The data were submitted to analysis of variance and regression at 5% of significance. There was positive quadratic behavior for motility after 60, 120, and 180 min in the thermoresistance test (TTR), and positive quadratic behavior for sperm vigor after thawing after 120 and 180 min in the TTR (P < 0.05). However, negative quadratic behavior was obtained for plasma membrane integrity according to the hypoosmotic test (P < 0.05) and there was a difference in the acrosomal integrity test, presenting an optimum maximum level of 3.25% of flaxseed for acrosomal integrity of 65.83% (P < 0.05). The results obtained demonstrated that the addition of as much as 12% of flaxseed to the diet of goat breeders improved post-thawing sperm quality.

O objetivo com o estudo foi avaliar o efeito da inclusão de semente de linhaça na dieta de machos caprinos sobre a resistência do sêmen frente ao processo de criopreservação. Foram utilizados 16 machos, os quais foram distribuídos em quatro grupos e receberam dieta suplementada com 0, 4, 8 e 12% de semente de linhaça, durante um período de 60 dias. As coletas de sêmen iniciaram 25 dias após o início do fornecimento das dietas. Apenas os ejaculados que apresentaram motilidade e vigor acima de 70% e 3, respectivamente, foram encaminhados para o processo de criopreservação. Após o descongelamento, o sêmen foi avaliado através dos testes de termorresistência, hiposmótico e de integridade acrossomal. Os dados foram submetidos à análise de variância e regressão a 5% de significância. Houve comportamento quadrático positivo para a motilidade progressiva aos 60, 120 e 180 minutos no teste de termoresistência (TTR), e comportamento quadrático positivo para o vigor espermático pós-descongelamento aos 120 e 180 minutos no TTR (P<0,05). Entretanto, obteve-se comportamento quadrático negativo para a integridade da membrana plasmática pelo Teste Hiposmótico (P<0,05) e houve diferença para o teste de integridade acrossomal, apresentando nível máximo ótimo de 3,25% de semente de linhaça para integridade acrossomal de 65,83% (P<0,05). Os resultados obtidos demonstram que a adição de 12% de semente de linhaça na dieta de reprodutores caprinos melhora a qualidade espermática pós-descongelamento.

INFLUÊNCIA DO TESTE DE TERMORRESISTÊNCIA RÁPIDO SOB O ESPERMATOZOIDE BOVINO, PÓS-DESCONGELAMENTO

A análise do sêmen e a fertilidade dos touros no desempenho reprodutivo do rebanho tem uma relevância significativa para a bovinocultura, pois a baixa fertilidade tem impacto direto na produtividade do sistema e o país vem obtendo excelentes resultados na comercialização de sêmen bovino criopreservado. Este trabalho tem como objetivo avaliar os efeitos da termorresistência rápida sob os aspectos morfofuncionais das membranas, por citometria de fluxo, e qualidade da cromatina de espermatozoides, técnica do Azul de Toluidina, antes e após o teste de termorresistência. Foram utilizadas seis partidas de sêmen congeladas de dez touros. Para análise estatística foi utilizado o teste T pareado, significância (P < 0.05). Observou-se que dos resultados apresentados, as amostras de sêmen depois do teste de termorresistência apresentaram uma redução de aproximadamente 56% para a motilidade e 36% para o vigor (P < 0.05), quando comparado as amostras antes do teste. Na avaliação por citometria de fluxo observou-se diferença significativa para todos os pontos analisados (membrana plasmática e membrana acrossomal). Da análise da compactação e da heterogeneidade foi realizada a média de todos os espermatozoides, pré e pós-teste de termorresistência sem significância estatística. Concluiu-se que o teste de termorresistência rápido (TTR) altera as estruturas, principalmente acrossomal e não tem interferência na estrutura da compactação da cromatina, devendo ser considerado, em associação com outros testes de avaliação, um parâmetro complementar na avaliação da qualidade do sêmen bovino.

The analysis of the semen and the fertility of the bulls in the reproductive performance of the herd has a significant relevance for the bovine culture, since the low fertility has a direct impact on the productivity of the system and the country has been obtaining excellent results in the commercialization of cryopreserved bovine semen. This work aims to evaluate the effects of rapid thermoresistance under the morphofunctional aspects of membranes, by flow cytometry, and quality of sperm chromatin, Toluidine Blue technique, before and after the thermoresistance test. Six sets of frozen semen from ten bulls were used. For statistical analysis, the paired T test, significance (P < 0.05), was used. It was observed that from the results presented, semen samples after the resistance test showed a reduction of approximately 56% for motility and 36% for vigor (P < 0.05), when compared to samples before the test. In the evaluation by flow cytometry, a significant difference was observed for all points analyzed (plasma membrane and acrosomal membrane). From the analysis of compression and heterogeneity, the average of all sperm was performed, pre- and post-thermoresistance test without statistical significance. It was concluded that the rapid thermoresistance test (TTR) alters the structures, mainly acrosomal and has no interference in the chromatin compression structure, and should be considered, in association with other evaluation tests, a complementary parameter in the evaluation of bovine semen quality

Utilização de diferentes volumes de sêmen na realização do teste hiposmótico em touros adultos da raça nelore / Use of different semen volumes in hypoosmotic test of adult nelore bulls / El uso de diferentes volúmenes de semen en el test hiposmótico en toros adultos de la raza nelore

O objetivo deste estudo foi avaliar diferentes proporções de sêmen: solução hiposmótica na realização do teste hiposmótico e suas relações com a congelabilidade do sêmen de touros zebuínos. Utilizaram-se 15 ejaculados de três touros adultos da raça Nelore. No sêmen in natura realizou-se a avaliação física e morfológica, a coloração supravital e o teste hiposmótico. No teste hiposmótico foi utilizada uma solução com osmolaridade de 100 mOsm/Kg com 15 minutos de período de incubação a 37 ºC, tanto no sêmen in natura quanto no congelado/descongelado. Foram utilizados quatro volumes de sêmen em 1mL de solução hiposmótica: 10, 20, 50 e 100 µL. As amostras criopreservadas foram descongeladas e foram realizados os testes hiposmótico, coloração supravital, teste de termo-resistência lento e a coloração fluorescente. Os valores médios e desvios padrão do percentual de espermatozoides reativos ao teste hiposmótico em sêmen in natura e congelado/descongelado foram 69,3 ± 11,8 e 20,5 ± 6,8; respectivamente. Não houve correlação do teste hiposmótico com os aspectos físicos e morfológicos e os testes complementares realizados em sêmen in natura e congelado/descongelado. Nenhum teste de integridade de membrana plasmática dos espermatozoides foi capaz de classificar os touros quanto a sua congelabilidade do sêmen. Conclui-se que o teste hiposmótico pode ser realizado com 20 a 100 µL de sêmen in natura, e 10 a 100 µL de sêmen congelado/descongelado em 1 mL de solução hiposmótica, sem interferir em seus resultados, mas deve-se optar por 100 µL tanto para sêmen in natura e congelado/descongelado, porque melhora consideravelmente a leitura das lâminas.(AU)

The objective of this study was to evaluate different proportions of semen: hypoosmotic solution in the hypoosmotic swelling test and their relationship with semen freezability in Zebu bulls. A total of 15 ejaculates from three adult Nelore bulls were used. Physical and morphological features were analyzed in fresh semen, as well as supravital staining and hypoosmotic swelling test. In the hypoosmotic test, a hypoosmotic solution with 100 mOsm/kg osmolality using 15 minutes incubation at 37 °C was used both in fresh and frozen/thawed semen. Four semen volumes in 1-ml hyposmotic solution were used: 10, 20, 50 and 100 µL. Cryopreserved samples were thawed and submitted to hypoosmotic tests, supravital staining, slow thermo-resistance test and fluorescent staining. Mean values and standard deviations of the percentage of reactive sperm cells in the hypoosmotic test in fresh and frozen/thawed semen were 69.3 ± 11.8 and 20.5 ± 6.8, respectively. There was no correlation between the hypoosmotic test and physical and morphological features and the complementary tests performed on fresh and frozen/thawed semen. None of the plasma membrane integrity tests was able to predict bull semen freezability. It can be concluded that the hypoosmotic test can be performed with 20 to 100 µL fresh semen, and 10 to 100 µL of frozen/thawed semen in 1 mL of hypoosmotic solution without interfering with their results, but 100 µL should be used in both, because it considerably improves the view of the slides.(AU)

El objetivo de este estudio ha sido evaluar diferentes proporciones de semen: solución hiposmótica en la realización del test hiposmótico y sus relaciones con la congelabilidad del semen de toros cebú. Se utilizaron 15 eyaculados de tres toros adultos de la raza Nelore. En el semen fresco se realizó evaluación física y morfológica, la tinción supravital y test hiposmótico. En el test hiposmótico se ha utilizado una solución con osmolaridad de 100 mOsm/kg con un período de incubación de 15 minutos a 37 ºC, tanto en el semen fresco cuanto en el congelado/descongelado. Fueron utilizados cuatro volúmenes de 1 mL de solución hiposmótica: 10, 20, 50, y 100 µL. Las muestras criopreservadas fueron descongeladas y realizados los tests hiposmótico, tinción supravital, test de resistencia al fuego lento y la tinción fluorescente. Los valores medios y desvío estándar del porcentaje de espermatozoides reactivos al test hiposmótico en l semen fresco y congelado/descongelado fueron 69,3 ± 11,8 y 20,5 ± 6,8; respectivamente. No hubo correlación del test hiposmótico con las características físicas y morfológicas y pruebas adicionales en el semen fresco y congelado/descongelado. Ningún test de integridad de la membrana plasmática de los espermatozoides han sido capaz de clasificar a los toros cuanto su congelabilidad del semen. Se puede concluir que el test hiposmótico puede ser realizado con 20 a 100 µL de semen fresco, y de 10 a 100 µL de semen congelado/descongelado en 1 mL de solución hiposmótica, sin interferir en sus resultados, pero se debe optar por 100 µL para el semen fresco y congelado/descongelado, porque mejora significativamente la lectura de las láminas.(AU)

EFEITO DA ADIÇÃO DO ÁCIDO ARAQUIDÔNICO E DO ÁCIDO OLEICO AO DILUIDOR TRIS-GEMA SOBRE A VIABILIDADE ESPERMÁTICA PÓS- CONGELAÇÃO EM SÊMEN CAPRINO

No intuito de maximizar a produtividade na espécie caprina, a criopreservação seminal se destaca dentre as biotécnicas reprodutivas. Aliado a este fato, é crescente o interesse por substâncias capazes de reduzir o estresse oxidativo provocado por essa biotécnica, aumentando, assim, a qualidade do sêmen caprino após a criopreservação. Portanto, objetivou-se avaliar a suplementação do ácido araquidônico e do ácido oleico ao diluidor TRIS-gema sobre a viabilidade espermática do sêmen caprino pós-criopreservação. Para tanto utilizou-se quatro caprinos da raça Anglo-nubiana, na qual foram coletadas seis amostras por animal, utilizando vagina artificial. Após análise dos ejaculados, foi feito o pool, diluído em TRIS-gema e dividido nos tratamentos: controle, 0,5 M, 5 M e 50 M de ácido araquidônico e de ácido oleico. Após o processamento, as amostras foram criopreservadas, e posteriormente, realizaram-se as análises pós-criopreservação, incluindo a avaliação morfológica, teste de termorresistência, integridade das membranas plasmática e acrossomal, potencial mitocondrial, cinética espermática pelo CASA, quantificação da lipoperoxidação espermática e dos níveis de glutationa reduzida (GSH). Observou-se que as concentrações de ácido araquidônico e de ácido oleico mantiveram a qualidade morfológica dos espermatozoides caprinos após a criopreservação. Elas também não influenciaram no teste de termorresistência. No que se refere à manutenção da integridade da membrana espermática, acrossomal e do potencial mitocondrial, a concentração de 50 M de ácido araquidônico foi prejudicial a todas elas, e a concentração de 50 M de ácido oleico reduziu significativamente (p < 0,05) a integridade acrossomal. Os tratamentos com 0,5 M de ácido araquidônico, e 0,5 M e 5 M de ácido oleico melhoraram a motilidade total do sêmen, diferindo (p < 0,05) dos tratamentos com 50 M de ácido araquidônico e de ácido oleico, respectivamente. A quantificação do malondialdeído (MDA) não apesentou diferença (p > 0,05) entre os tratamentos. Já a concentração de glutationa reduzida foi superior no tratamento com 5 M de ácido araquidônico, diferindo (p < 0,05) do controle. Os tratamentos com ácido oleico não influenciaram a concentração de GSH. Conclui-se que a suplementação de ácido araquidônico e de ácido oleico ao TRIS-gema preservou a qualidade morfológica dos espermatozoides, além de melhorar a motilidade total após a criopreservação. Ademais, o ácido araquidônico contribuiu para elevar atividade da enzima GSH durante a criopreservação, aumentando o potencial enzimático antioxidante.

In order to maximize productivity in goat species, seminal cryopreservation stands out among reproductive biotechniques. Allied to this fact, there is a growing interest for substances capable of reducing the oxidative stress caused by this biotechnique, thus increasing the quality of goat semen after cryopreservation. Therefore, the objective was to evaluate the supplementation of arachidonic acid and oleic acid to TRIS-gem diluent on the sperm viability of goat semen after cryopreservation. Four Anglo-Nubian goats were used, in which six samples per animal were collected using an artificial vagina. After analysis of the ejaculates, the pool was made, diluted in TRIS-gem and divided into the treatments: control, 0.5 M, 5 M and 50 M of arachidonic acid and oleic acid. After processing, the samples were cryopreserved, and subsequently, post-cryopreservation analyses were performed, including morphological evaluation, thermoresistance test, plasma membrane and acrosomal integrity, mitochondrial potential, sperm kinetics by CASA, quantification of sperm lipoperoxidation and reduced glutathione (GSH) levels. It was observed that the concentrations of arachidonic acid and oleic acid maintained the morphological quality of goat spermatozoa after cryopreservation. They also did not influence the heat resistance test. Regarding the maintenance of sperm membrane, acrosomal integrity and mitochondrial potential, the 50 M concentration of arachidonic acid was detrimental to all of them, and the 50 M concentration of oleic acid significantly (p < 0.05) reduced acrosomal integrity. Treatments with 0.5 M of arachidonic acid, and 0.5 M and 5 M of oleic acid improved total semen motility, differing (p < 0.05) from treatments with 50 M of arachidonic acid and oleic acid, respectively. The quantification of malondialdehyde (MDA) showed no difference (p > 0.05) between treatments. The concentration of reduced glutathione was higher in the treatment with 5 M of arachidonic acid, differing (p < 0.05) from the control. Oleic acid treatments did not influence GSH concentration. It is concluded that supplementation of arachidonic acid and oleic acid to TRIS-gem preserved the morphological quality of spermatozoa, and improved total motility after cryopreservation. Furthermore, arachidonic acid contributed to elevate GSH enzyme activity during cryopreservation, increasing the enzymatic antioxidant potential.

Sensibilidade térmica em ratas submetidas à natação / Thermal sensitivity in rats submitted to swimming

The swimming has a number of physiological benefits, among which we can mention the increased resistance to the perception of thermal stimuli. The thermal sensitivity is designated as responsive to rising temperature, harmful heat, decrease the temperature and harmful cold. The thermal and painful sensations are transmitted to the central nervous system via axons C, Aδ. The heat-sensitive fibers C are called mecanotermossensíveis C fibers, which require different membrane receptors to make the distinction between various sensory thresholds. These receptors are called channels TRP (transient receptor potential) and are responsible for performing the transduction of thermal signals. The termocepção can be measured by the hot plate test based on the response latency to a given adverse thermal stimulus. Objectives: to determine the thermal sensitivity in rats submitted to swimming. Methods: This study was approved by the Ethics Committee for the Use of Animals (CEUA) of the State University of Ceará (UECE), Official Letter No. 12725887-0. 16 female Wistar rats were used ± 8 weeks, divided into two groups: control (C) and swimming (N). The animals swimming starting time duration of 3 minutes for the first week and reaching 36 minutes at the end of the second week with a 5% body weight load tied to the tail, to avoid floating. The exercises in the water were carried out by the morning shift, six days a week and a weekly rest. The animals were then immediately dried by a hot air jet device (sized hair dryer). Thermal sensitivity was evaluated using the hot plate test at 50°C is considered as a valid positive response and the heel of the animal licks its hind legs and cleaning of the animals forepaws. The results were analyzed by comparing an average between the two groups tested by one-way ANOVA analysis. Statistical analysis was performed using t test for independent samples, assuming significance of p <0.05. Results and Discussion: As a result, one can observe a significant increase (p = 0.014) in response time to thermal stimulation of the swimming group (5.875 ± 1.060 N = 8) compared to the control group (2.375 ± 0.962 N = 8). These results confirm previous studies, which show that swimming is able to increase the nociceptive threshold in rodents, suggesting that exercise the aquatic environment is able to reduce the activation of TRPV1 channels, which are only activated at temperatures between 42 and 52 ° C. This mechanism might explain the increased latency response comparing the swimming group with the control group. Conclusion: The data demonstrate that swimming increased tolerance to thermal stimuli, which produces a positive effect on the animals, it increases the selectivity of the intensity of painful stimuli perceived by the body.

Sensibilidade térmica em ratas submetidas à natação / Thermal sensitivity in rats submitted to swimming

The swimming has a number of physiological benefits, among which we can mention the increased resistance to the perception of thermal stimuli. The thermal sensitivity is designated as responsive to rising temperature, harmful heat, decrease the temperature and harmful cold. The thermal and painful sensations are transmitted to the central nervous system via axons C, Aδ. The heat-sensitive fibers C are called mecanotermossensíveis C fibers, which require different membrane receptors to make the distinction between various sensory thresholds. These receptors are called channels TRP (transient receptor potential) and are responsible for performing the transduction of thermal signals. The termocepção can be measured by the hot plate test based on the response latency to a given adverse thermal stimulus. Objectives: to determine the thermal sensitivity in rats submitted to swimming. Methods: This study was approved by the Ethics Committee for the Use of Animals (CEUA) of the State University of Ceará (UECE), Official Letter No. 12725887-0. 16 female Wistar rats were used ± 8 weeks, divided into two groups: control (C) and swimming (N). The animals swimming starting time duration of 3 minutes for the first week and reaching 36 minutes at the end of the second week with a 5% body weight load tied to the tail, to avoid floating. The exercises in the water were carried out by the morning shift, six days a week and a weekly rest. The animals were then immediately dried by a hot air jet device (sized hair dryer). Thermal sensitivity was evaluated using the hot plate test at 50°C is considered as a valid positive response and the heel of the animal licks its hind legs and cleaning of the animals forepaws. The results were analyzed by comparing an average between the two groups tested by one-way ANOVA analysis. Statistical analysis was performed using t test for independent samples, assuming significance of p <0.05. Results and Discussion: As a result, one can observe a significant increase (p = 0.014) in response time to thermal stimulation of the swimming group (5.875 ± 1.060 N = 8) compared to the control group (2.375 ± 0.962 N = 8). These results confirm previous studies, which show that swimming is able to increase the nociceptive threshold in rodents, suggesting that exercise the aquatic environment is able to reduce the activation of TRPV1 channels, which are only activated at temperatures between 42 and 52 ° C. This mechanism might explain the increased latency response comparing the swimming group with the control group. Conclusion: The data demonstrate that swimming increased tolerance to thermal stimuli, which produces a positive effect on the animals, it increases the selectivity of the intensity of painful stimuli perceived by the body.(AU)

Viabilidade do sêmen de tatus-peba (Euphractus sexcinctus) centrifugado e diluído em Tris ou agua de coco em pó / Viability of the six-banded armadillos (Euphractus sexcinctus) semen centrifuged and extended in Tris or powdered coconut water

Foram avaliados os efeitos da centrifugação associada ao uso de dois diluentes na manutenção da viabilidade espermática em tatus-peba (Euphractus sexcinctus) ao longo do teste de termorresistência (TTR). Amostras de sêmen (n=12), oriundas de 04 machos adultos coletados por eletroejaculação, foram divididas em quatro alíquotas, sendo duas imediatamente diluídas em Tris ou água de coco em pó (ACP-119(r)), e as outras duas centrifugadas (800g10min-1) previamente à diluição. As amostras foram incubadas a 34°C por 3h, e os parâmetros seminais avaliados em intervalos de 1h. Em termos gerais, verificou-se uma redução da viscosidade espermática imediata à diluição em ambos os diluentes, independente do uso da centrifugação. Aos 60 minutos, verificou-se uma redução dos parâmetros avaliados (P 0,05), embora o Tris tenha promovido uma melhor preservação deles (P 0,05), quando comparado ao ACP-119(r) até os 120 minutos de avaliação. Após este período, os dois diluentes se equipararam (P>0,05). Ainda, verificou-se um efeito deletério da centrifugação sobre a qualidade do sêmen de tatus-peba durante todo o teste de termorresistência. Nas condições do presente estudo, conclui-se que o diluente Tris mostrou-se superior ao ACP-119(r) para a manutenção da viabilidade do sêmen de tatus-peba, sendo desnecessária a realização de centrifugação prévia à diluição.(AU)

The effects of the centrifugation associated to the use of two extenders on the viability of six-banded armadillo's (Euphractus sexcinctus) sperm were evaluated during a thermo resistance test (TRT). Semen samples (n=12) derived from 04 stud males collected by electroejaculation were divided in four aliquots; two of that were immediately diluted in Tris or powdered coconut water (ACP-119(r)); the two others were centrifuged (800g10min-1) prior to the dilution. Samples were incubated at 34ºC per 3h, and the semen parameters were evaluated at each hour. In general, dilution promoted a reduction in semen viscosity in the use of both diluents using centrifugation or not. At 60min, a decrease was verified for all semen parameters (P 0.05), however they were better preserved in the use of Tris when compared to ACP-119(r) (P 0.05) up to 120min. After that, both diluents equated. In addition, centrifugation procedure presented a deleterious effect on the armadillo's semen quality during all the thermoresistance test. In the present conditions, conclude that Tris extender is more efficient than ACP-119(r) for the preservation of six-banded armadillo semen viability, and the previous centrifugation is unnecessary.(AU)

PURIFICAÇÃO, CARACTERIZAÇÃO E ATIVIDADES BIOLÓGICAS DE LECTINA OBTIDA DE Dypsis decaryi

O objetivo deste trabalho foi extrair, purificar, caracterizar e avaliar as atividades biológicas da lectina obtida de sementes de D. decaryi, além de analisar os compostos fitoquímicos presentes no extrato do tegumento das sementes, como também a atividade carrapaticida deste extrato. As sementes foram lavadas em água destilada e secas durante 5 dias. Foram preparados extratos a 10% com NaCl 0,15 M da casca, tegumento e endosperma da semente. Foram determinadas a atividade hemaglutinante (AH), dosagem proteica e atividade hemaglutinante específica (AHE) de todos os extratos. O extrato do tegumento apresentou maior AHE (196,03), sendo utilizado para precipitação com acetona 70% e purificação em Superdex G-75 em sistema AKTA, apresentando único pico no cromatograma, com massa molecular em condições nativas estimada em 34,8kDa. A lectina purificada de D. decaryi foi denominada DdeL. A lectina não foi específica para os tipos sanguíneos avaliados (A, B, AB, O e de coelho), porém maior AH foi observada quando na presença de sangue humano do tipo O e sangue de coelho. Esta lectina foi inibida apenas por glicoproteínas (albumina, azoalbumina e azocaseína), sua atividade foi estável na faixa de pH 5-10, no entanto, apresentou AH maior em pH ácido (pH 5-6), foi termoresistente, pois permaneceu ativa após 3h em temperatura a 100 °C. A atividade antibacteriana de DdeL (2,9 - 1500 µg/mL) foi realizada utilizando o método de microdiluição em caldo. Este ensaio demonstrou que DdeL exibiu atividade bacteriostática frente às bactérias patogênicas testadas, embora a concentração inibitória mínima (CIM) tenha sido elevada. As cepas mais sensíveis foram o isolado clínico Providencia stuartii e Staphylococcus aureus ATCC 29213, as quais apresentaram CIM de 750 µg/mL. A atividade bactericida não foi detectada para os isolados testados. A atividade antifúngica do extrato e DdeL foi realizada pelo teste de microdiluição em placas de 96 poços. Na atividade antifúngica foram avaliadas dez concentrações (2,6 1325 µg/mL) do extrato do tegumento das sementes de D. decaryi, como também, dez concentrações (0,03 16,5 µg/mL) de DdeL. O extrato do tegumento apresentou CMI50 de 5,18 µg/mL para os fungos da espécie Sporotrichum schenckii, e CMI100 ficou entre 10,35 - 82,81 µg/ml para estes fungos. Para os fungos da espécie Candida albicans, o extrato apresentou CMI50 entre 2,59 - 20,7 µg/mL, onde o mais resistente foi o C. albicans URM 6401 com CMI50 de 20,7 µg/mL. A CMI100 do extrato do tegumento para C. albicans foi de 662,5 - 1325 µg/mL. Em relação a DdeL, o S. schenckii URM 7971 foi o mais sensível na CMI50 de 0,26 µg/mL e os demais na CMI50 de 0,52 µg/mL. DdeL não apresentou CMI100 para as espécies de S. schenckii. Para C. albicans, DdeL apresentou CIM50 de 2,06 µg/mL e não foi capaz de inibir em 100% o crescimento destes fungos. A citotoxicidade para macrófagos (J774.A1) e células embrionárias renais (HEK-293) mostraram que a lectina não apresentou efeito citotóxico, além de ter estimulado a proliferação destas células. O extrato do tegumento de D. decaryi indicou a presença de diferentes grupos de metabólitos secundários e alguns constituintes, sugerindo biodisponibilidade de saponinas, taninos e flavonoides. Este extrato, avaliado em diferentes concentrações, apresentou capacidade do consumo de DPPH. O comportamento cinético da reação do DPPH com as diferentes concentrações do extrato, mostrou que as três concentrações maiores (1,73 mg/mL; 0,87 mg/mL; 0,35 mg/mL) atigiram o consumo máximo com dois minutos da reação, e o decaimento do DPPH foi estabilizando-se rapidamente. A maior concentração do extrato (1,73 mg/mL) sequestrou em torno de 100% do radical com dois minutos da reação. Na menor concentração, praticamente não houve sequestro de DPPH. No bioensaio carrapaticida frente a Dermacentor nitens, o controle positivo Cipermetrina 15%, foi ineficiente, pois, os carrapatos apresentaram resistência de 98,81% a este carrapaticida. O extrato bruto na concentração de 17,3 mg/mL também não foi eficiente e os carrapatos apresentaram 100% de resistência às concentrações mais elevadas do extrato. A concentração do extrato a 1,73 mg/mL apresentou 19,23% de eficiência, superior ao cipermetrina que apresentou 1,19% de eficiência. O precipitado proteico na concentração de 1,25 mg/mL obteve maior eficiência com 71,65%. O sobrenadante cetônico foi avaliado e apresentou 38,62% de eficiência. Os resultados mostraram a purificação e caracterização de uma nova lectina, termoresistente, com atividade bacteriostática a bactérias patogênicas, antifúngica a patógenos de humanos e que não apresentou efeitos citotóxicos, sendo uma proteína com potencial para aplicações biotecnológicas. Além disso, apresenta a composição fitoquímica do extrato do tegumento, a atividade sequestradora do radical DPPH e a atividade carrapaticida deste extrato, precipitado proteico e sobrenadante cetônico. Demonstrando o potencial biotecnológico do uso dessa espécie, ainda pouco estudada na comunidade científica, na medicina humana e animal.

The objective of this study was to extract, purify, characterize and evaluate the biological activities of lectin obtained from D. decaryi seed, and analyzing the phytochemical compounds in the extract of the tegument as well as the acaricide activity of this extract. The seeds were washed in distilled water and dried for 5 days. Were prepared extracts 10% with 0.15 M NaCl of the bark, tegument and endosperm of the seed. The hemagglutinating activity (HA), protein dosage and specific hemagglutinating activity (AHE) of all extracts were determined. The extract of the tegument presented higher AHE (196,03), being used for precipitation with 70% acetone and purification in Superdex G-75 in AKTA system, presenting single peak in the chromatogram, with molecular mass in native conditions estimated at 34.8kDa. The purified lectin of D. decaryi was named DdeL. The lectin was not specific for the blood types evaluated (A, B, AB, O and rabbit), but higher AH was observed when in the presence of human type O blood and rabbit blood. This lectin was inhibited only by glycoproteins (albumin, azoalbumin and azocasein), its activity was stable in the range of pH 5-10, however, it presented higher AH in acid pH (pH 5-6), it was thermo-resistant, since it remained active after 3h at 100 ° C. The antibacterial activity of DdeL (2.9 - 1500 g/mL) was performed using the broth microdilution method. This assay demonstrated that DdeL exhibited bacteriostatic activity against the pathogenic bacteria tested, although the minimal inhibitory concentration (MIC) was elevated. The most sensitive strains were the clinical isolate Providencia stuartii and Staphylococcus aureus ATCC 29213, which presented MICs of 750 g/mL. The bactericidal activity was not detected for the tested isolates. The antifungal activity of the extract and DdeL was performed by the microdilution test in 96-well plates. In the antifungal activity, ten concentrations (2.6 -1325 g/mL) of the extract of the tegument of the seed of D. decaryi, as well as 10 concentrations (0.03 - 16.5 g/mL) of DdeL were evaluated. The extract of the tegument had a MIC50 of 5.18 g/mL for the fungi of the Sporotrichum schenckii species, and MIC100 was between 10.35 - 82.81 g/mL for these fungi. For the fungi of Candida albicans, the extract presented MIC50 between 2.59 - 20.7 g/mL, where the most resistant was C. albicans URM 6401 with MIC50 of 20.7 g/mL. The MIC100 of the extract of the tegument for C. albicans was 662.5 - 1325 g/mL. In relation to DdeL, S. schenckii URM 7971 was the most sensitive in MIC50 of 0.26 g/mL and the others in MIC50 of 0.52 g/mL. DdeL did not present MIC100 for S. schenckii species. For C. albicans, DdeL presented a MIC50 of 2.06 g/mL and was not able to inhibit the growth of these fungi in 100%. Cytotoxicity to macrophages (J774.A1) and renal embryonic cells (HEK-293) showed that the lectin did not present a cytotoxic effect and stimulated the proliferation of these cells. The extract of the tegument of the seeds of D. decaryi indicated the presence of different groups of secondary metabolites and some constituents, suggesting bioavailability of saponins, tannins and flavonoids. This extract, evaluated at different concentrations, showed DPPH consumption capacity. The kinetic behavior of DPPH reaction with different concentrations of the extract showed that the three highest concentrations (1.73 mg/mL, 0.87 mg/mL, 0.35 mg/mL) achieved the maximum consumption in two minutes from reaction, and DPPH decay rapidly stabilized. The highest concentration of the extract (1.73 mg/mL) sequestered around 100% of the radical with two minutes of the reaction. At the lowest concentration, there was practically no sequestration of DPPH. In the bioassay against ticks Dermacentor nitens, the positive control Cypermethrin 15%, was inefficient because the ticks were resistant to 98.81% this acaricide. The crude extract at the concentration of 17.3 mg/mL was also not efficient and the ticks showed 100% resistance at the highest concentrations of the extract. The extract concentration at 1.73 mg/mL presented 19.23% efficiency, higher than cypermethrin, which presented 1.19% efficiency. The protein precipitate at the concentration of 1.25 mg / mL obtained higher efficiency with 71.65%. The ketone supernatant was evaluated and presented 38.62% efficiency. The results showed the purification and characterization of a new lectin, thermoresistant, with bacteriostatic activity to pathogenic bacteria, antifungal to human pathogens and that did not present cytotoxic effects, being a protein with potential for biotechnological applications. In addition, it presents the phytochemical composition of the extract of the tegument of the seeds of D. decaryi, the sequestering activity of the DPPH radical and the acaricide activity of this extract, protein precipitate and ketone supernatant. Demonstrating the biotechnological potential of the use of this species, still little studied in the scientific community, in human and animal medicine.

Effect of scrotal insulation on physical and morphological semen features in young cattle / Efeito da insulação scrotal sobre as características físicas e morfológicas do sêmen de touros jovens

The aim of this study was to evaluate the physical and morphological characteristics of semen from young cattle subjected to experimental testicular degeneration by scrotal insulation method. There were used three animals of the Holstein breed with an average of 12 months of age undergoing breeding soundness examination weekly for a period of 10 weeks. Semen was collected from animals by the method of electroejaculation and evaluated for physical characteristics of semen, sperm morphology and thermo-resistance test. Scrotal insulation for 120 hours increased scrotal temperature by 3.4 °C. The rectilinear progressive sperm motility and sperm vigor decreased between 7 to 28 days post-insulation (p<0.05) and sperm incidence with abnormal head increased between 21 to 35 days post-insulation. There was a decrease (p<0.05) in sperm motility during thermo-resistance test, for the periods post-insulation, indicating low sperm viability. The testicular degeneration induced by insulation bags may be temporary and even animals during puberty and adolescence have the ability for restructuring of the seminiferous epithelium and restoration of normal sperm production, although there is need for more recovery time.

O objetivo deste estudo foi avaliar as características físicas e morfológicas do sêmen de bovinos jovens submetidos à degeneração testicular experimental pelo método de insulação escrotal. Foram utilizados três animais da raça Holandesa, com uma média de 12 meses de idade, submetidos a exame andrológico semanalmente por um período de 10 semanas. O sêmen foi coletado pelo método de eletroejaculação e os animais avaliados quanto às características físicas e morfológicas do sêmen e teste de termorresistência. A insulação escrotal por 120 horas aumentou a temperatura escrotal em 3,4 °C. A motilidade espermática progressiva retilínea e vigor espermático diminuiram entre 7 a 28 dias pós-insulação (p<0,05) e a incidência de espermatozóides com a cabeça anormal aumentou entre 21 a 35 dias pós-insulação. Houve uma diminuição (p<0,05) na motilidade espermática durante o teste de termorresistência, nos períodos pós-insulação, indicando baixa viabilidade espermática. A degeneração testicular induzida por sacos de isolamento pode ser temporária e até mesmo animais durante a puberdade e adolescência têm a capacidade de reestruturação do epitélio seminífero e restauração da produção espermática normal, embora haja necessidade de maior tempo de recuperação.

Effect of scrotal insulation on physical and morphological semen features in young cattle / Efeito da insulação scrotal sobre as características físicas e morfológicas do sêmen de touros jovens

The aim of this study was to evaluate the physical and morphological characteristics of semen from young cattle subjected to experimental testicular degeneration by scrotal insulation method. There were used three animals of the Holstein breed with an average of 12 months of age undergoing breeding soundness examination weekly for a period of 10 weeks. Semen was collected from animals by the method of electroejaculation and evaluated for physical characteristics of semen, sperm morphology and thermo-resistance test. Scrotal insulation for 120 hours increased scrotal temperature by 3.4 °C. The rectilinear progressive sperm motility and sperm vigor decreased between 7 to 28 days post-insulation (p<0.05) and sperm incidence with abnormal head increased between 21 to 35 days post-insulation. There was a decrease (p<0.05) in sperm motility during thermo-resistance test, for the periods post-insulation, indicating low sperm viability. The testicular degeneration induced by insulation bags may be temporary and even animals during puberty and adolescence have the ability for restructuring of the seminiferous epithelium and restoration of normal sperm production, although there is need for more recovery time.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar as características físicas e morfológicas do sêmen de bovinos jovens submetidos à degeneração testicular experimental pelo método de insulação escrotal. Foram utilizados três animais da raça Holandesa, com uma média de 12 meses de idade, submetidos a exame andrológico semanalmente por um período de 10 semanas. O sêmen foi coletado pelo método de eletroejaculação e os animais avaliados quanto às características físicas e morfológicas do sêmen e teste de termorresistência. A insulação escrotal por 120 horas aumentou a temperatura escrotal em 3,4 °C. A motilidade espermática progressiva retilínea e vigor espermático diminuiram entre 7 a 28 dias pós-insulação (p<0,05) e a incidência de espermatozóides com a cabeça anormal aumentou entre 21 a 35 dias pós-insulação. Houve uma diminuição (p<0,05) na motilidade espermática durante o teste de termorresistência, nos períodos pós-insulação, indicando baixa viabilidade espermática. A degeneração testicular induzida por sacos de isolamento pode ser temporária e até mesmo animais durante a puberdade e adolescência têm a capacidade de reestruturação do epitélio seminífero e restauração da produção espermática normal, embora haja necessidade de maior tempo de recuperação.(AU)

Efeitos do trimetilaminoetano (TES) e ringer lactato em sêmen de macacos-aranha mantidos em cativeiro ( Ateles paniscus e A. marginatus) / Effects of TES and a ringer-lactato diluent in semen from captive spider monkeys (Ateles paniscus e A. marginatus)

The performances of the diluents TES and CEBRAN II were compared as cryopreservatives of semen from non human primates of the genus Ateles. The experiment was carried out using one Ateles marginatus and two Ateles paniscus specimens, males and adults, maintained in the same captivity conditions at the National Center of Primates (CENP-SVS/MS). The animals were subjected to clinical and andrological examinations - testicular biometry - before the semen collection by eletroejaculation. Evaluations of motility and forward movement in the fresh semen were made. Semen were made dilution was made with the diluents TES and CEBRAN II. The ejaculates were diluted with the diluents (2:1proportion), packed in 0.25mL plastic straws and cryopreserved in liquid nitrogen. After thawing, the packed ejaculates were appraised in thermo resistance test (TTR). The averages of volume and concentration were, respectively, 1.94mL (0.83) and 3,020,000 sptz/mL (275.97). The pH 8 and seminal coagulation were observed in all samples. The results suggest that the TES diluent presents better efficiency in the preservation of Ateles semen than CEBRAN II.(AU)

INFLUÊNCIA DA CATALASE NO MEIO DE CONGELAÇÃO NAS CARACTERÍSTICAS DO SÊMEN CRIOPRESERVADO DE TOUROS DA RAÇA NELORE SUPLEMENTADOS OU NÃO COM GORDURA PROTEGIDA

Os ácidos graxos poliinsaturados (AGPs) são integrantes da membrana celular espermática, e embora favoreçam sua fluidez, são extremamente susceptíveis ao estresse oxidativo. Nesse contexto, o presente estudo objetivou avaliar a influência da catalase no meio de congelação para criopreservação do sêmen de machos da raça Nelore suplementados com gordura protegida, a fim de evitar a produção das espécies reativas de oxigênio (EROs). Foram utilizados 12 machos da raça Nelore mantidos em pastagem de capim-marandu em lotação contínua e taxa de lotação fixa. Os animais foram divididos em dois grupos: suplementados dos 14 aos 24 meses de idade (S+), ou não suplementados (S-). A colheita de sêmen foi realizada aos 24 meses, e as amostras de sêmen a fresco foram submetidas a analise computadorizada de cinética espermática (CASA). Posteriormente, as amostras foram divididas em duas frações e foram criopreservadas após a adição de meio de congelação, de igual composição, contendo catalase (C+) ou não (C-). Após o descongelamento do sêmen foram realizadas: avaliações de CASA; teste de termorresistência rápido (TTR); integridade das membranas plasmática e acrossomal; potencial mitocondrial, desestabilização da membrana e produção da ERO ânion superóxido (O2 -); produção da EROs; produção in vitro de embriões (PIVE) e quantificação intracitoplasmática de lipídio dos embriões. O delineamento experimental utilizado foi um esquema fatorial 2X2 (suplementação x catalase), totalizando 4 tratamentos (S+, S-, C+ e C-). A análise dos dados foi realizada utilizando o procedimento PROC MIXED do SAS. Os parâmetros de cinética espermática do sêmen a fresco foram maiores para o grupo S- (motilidade total e porcentagem de células rápidas) quando comparados com o grupo S+ (MT: 91,33 x 85,83%; RAP: 89,00 x 84,33% respectivamente) (P<0,05). Houve interação entre SUP*CAT para a frequência de batimento de cabeça (BCF) (P<0,05). O grupo S+, apresentou valores maiores, quando comparado com o grupo S- para: membrana plasmática e acrossomal lesadas (MPAL) (11,29 X 2,89% respectivamente); mediana da população total de células totais (5,66 x 4,41) (P<0,05); células lesadas (6,54 X 5,39 respectivamente) (P<0,05) e produção de O2- depois do TTR; (6,47 X 5,36 respectivamente) (P<0,05); quantificação lipídica intracitoplasmática, quando avaliado média/área de blastocistos (0,323 X 0,300 respectivamente) (P<0,05).O grupo S+ com catalase apresentou menores valores de MPAL após o TTR (10,11 X 17,69) (P<0,05). Não foram observadas diferenças entre os grupos para os valores de TTR na cinética espermática; produção de EROs e no desenvolvimento embrionário na PIVE. Os resultados do presente estudo sugerem que a dieta influenciou negativamente na qualidade seminal e possivelmente contribuiu para a peroxidação lipídica causada pelo O2-. Além disso, a dieta influenciou fortemente na quantificação lipídica intracitoplasmática. Por outro lado, a catalase no meio de congelação foi benéfica evidenciando que a suplementação com gordura protegida pode ser vantajosa se utilizada em associação com antioxidantes.

Polyunsaturated fatty acids (PUFA) comprise an important component of a sperm cell membrane. Although improving the membrane fluidity, they are extremely susceptible to oxidative stress. In this context, this study aimed to evaluate the catalase influence on extender for semens cryopreservation of Nellore Bulls supplemented with sources of PUFA in order to avoid reactive species of oxygen (ROS) production. Therefore, we have included twelve Nellore bulls kept in Marandu grass pasture in continuous stocking and fixed stocking rate. Bulls were divided in two groups: supplemented at 14 to 24 months old (S+), or non-supplemented (S-). The sperm collections were performed at 24 months old and fresh semen samples were analyzed by computer-assisted sperm analysis (CASA). Subsequently, we have divided these samples into two equal portions, which were both cryopreserved after same composition extender medium addition, containing catalase (C+) or not (C-). After thawing semen, computer-assisted sperm analysis (CASA); rapid test of thermo resistance (TTR); plasma membrane integrity, acrosomal membrane integrity; mitochondrial membrane potential, membrane destabilization; production of ROS superoxide anion (O2 -); ROS ; in vitro embryo production (IVEP) and intracellular lipid content of embryos were performed. The experimental design used was a 2X2 factorial (supplementation x catalase), with 4 treatments (SUPL, CONTR, C+ e C-). Data analysis was performed using SAS PROC MIXED procedure. Sperm kinetic parameters of fresh semen were higher for S- (total motility and percentage of rapid sperm) than S+ (MT: 91.33 x 85.83%; RAP: 89.00 x 84.33% respectively) (P<0.05). We have also observed an interaction between SUP*CAT for beat cross frequency (BCF) (P<0.05). The S+ group has presented higher values compared to S- for damage percentage of plasma and acrosomal membranes (DPAM) (11.29 X 2.89%, respectively); median for total population of total cells (5.66 x 4.41, respectively) (P<0.05); damaged cells (6.54 x 5.39, respectively) (P<0.05) and O2- production after TTR 96.47 x 5.36, respectively) (P<0.05); intracellular lipid content, when evaluated the mean/area of blastocysts (0.323 X 0.300 respectively) (P<0.05). The S+ group with catalase presented lower DPAM values after TTR (10.11 X 17.69 respectively) (P <0.05). No differences were observed between the groups for TTR values on spermatic kinetics, ROS production and on embryonic development in IVEP. Our results suggest that diet has negatively influenced seminal quality and possibly contributed to lipid peroxidation caused by O2-. In addition, diet strongly influenced intracytoplasmic lipid quantification. On the other hand, catalase in the extent was beneficial in showing that supplementation with protected fat may be advantageous if used in combination with antioxidants.

EFEITO DA PROSTAGLANDINA NA QUALIDADE SEMINAL E LIBIDO EM TOUROS CRUZADOS (Bos taurus taurus x Bos taurus indicus)

O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito da administração do Cloprostenol (análogo da PGF2), na libido e qualidade espermática de touros jovens. Foram utilizados 12 animais hígidos, mestiços Holandes x Gir, de mesma faixa etária, púberes. Os animais foram divididos igual e aleatoriamente em grupo controle e grupo tratamento no dia do início do experimento, dia 0. Os animais do grupo controle receberam 2mL de solução salina, enquanto os animais do grupo tratamento receberam 500g (2ml) de Cloprostenol semanalmente, a partir do dia 7 até o dia 70, perfazendo um total de 10 aplicações, estas aplicações foram feitas 30 minutos antes das coletas de sêmen para avaliação da qualidade espermática. A qualidade espermática foi avaliada através dos exames macroscópicos: cor, odor, aparência e volume (mL); microscópicos: turbilhonamento (0-5), motilidade espermática total (%), vigor (0-5), concentração espermática (sptz/mL) e avaliação da morfologia espermática; e testes complementares: termo-resistência (TTR) e hiposmótico (HOST). Nos dias 0, 35 e 70 foi realizado o teste de libido e aferida a circunferência escrotal dos animais. As variáveis quantitativas foram avaliadas em modelos mistos lineares com medidas repetidas no tempo, com animal como efeito aleatório; os escores dados para a variável libido foram utilizados para a classificação em: questionável, bom, muito bom e excelente. As frequências das classificações foram arranjadas em tabelas de contingência e as associações entre as classificações e os tratamentos foram avaliadas pelo teste exato de Fisher (tabelas 2 x 2) ou teste de Freeman-Halton (tabelas m x n). Para as variáveis qualitativas, foi utilizado o teste de Kruskall-Wallis, com nível de significância de 5%. Os resultados obtidos demonstraram que houve diferenças no HOST para os grupos no decorrer dos dias. Houve diferença (P<0,05) para motilidade no TTR entre os dias em ambos os grupos, porém foram observadas diferenças estatísticas (P<0,05) para o vigor apenas no grupo controle. Para o comportamento sexual dos animais não houve diferença significativa, sendo a maioria dos animais classificados com alta libido, com uma redução (P<0,05) para tempo de reação no D35 nos animais tratados e diferenças no D7 e D56 com aumento do volume do ejaculado dos animais. A circunferência escrotal não apresentou diferenças (P>0,05) entre os grupos tratados. Não houve diferença (P>0,05) para motilidade, turbilhonamento, concentração espermática, espermatozoides totais, espermatozoides viáveis e morfologia espermática. No presente estudo, a administração do Cloprostenol sódico, análogo da PGF2, não afetou de forma expressiva a qualidade espermática e circunferência escrotal, no entanto, apresentou redução do tempo de reação do comportamento sexual.

The objective of this study was to evaluate the effect of administration of Cloprostenol (PGF2 analogue) on the libido and sperm quality of young bulls. We used 12 healthy animals, Holstein x Gir crossbred, with similar age, and pubertal. The animals were divided equally and randomly into control and PGF2 group, since the first day of this experiment, day 0. The control animals received 2 ml of saline, while the PGF2 group received 500g (2 ml) cloprostenol weekly from day 7 to day 70, totalizing 10 applications that were performed 30 minutes before semen collection for evaluation of sperm quality. The sperm quality was evaluated by macroscopic examination: color, smell, appearance and volume (ml); Microscopic: mass movement (0-5), sperm motility (%), sperm vigor (0-5), sperm concentration (sperm / ml) and sperm morphology; and complementary tests: thermo-resistance test (TRT) and hyposmotic swelling test (HOST). On days 0, 35 and 70 libido test and scrotal circumference measurements were conducted. The quantitative variables were evaluated in linear mixed models with repeated measures in time, with animal as random effect; the scores given for the variable libido were used for a classification in: questionable, good, very good and excellent. The frequencies of the classifications were arranged in contingency tables and the association between the classifications and treatments were evaluated by Fisher's exact test (2 x 2 tables) or Freeman-Halton test (tables m x n). For the qualitative variables, the Kruskall-Wallis test was used; the significance level was 5%. The results showed that there were differences in HOST in both groups over the course of days. There were differences (P<0.05) in TRT motility between days for both groups, but sperm vigor showed differences (P <0.05) only in the control. For the sexual behavior of animals there were not significant differences, and most of the animals were classified as high libido, with high (P<0.05) for D35 for reaction time in PGF2 animals and differences in D7 and D56 with increased ejaculate volume in animals. The scrotal circumference did not present differences (P>0.5) between the treated groups . Also, there were not significant differences (P > 0.05) for motility, mass movement, sperm concentration, total spermatozoa, viable spermatozoa and sperm morphology. In the present study, administration of cloprostenol sodium, a PGF2 analogue, did not significantly affect sperm quality and scrotal circumference, however, it showed a reduction in the reaction time of sexual behavior.

PERFIL MICROBIOLÓGICO DE SUPLEMENTOS LÁCTEOS PARA IDOSOS

Idosos são mais suscetíveis a agentes etiológicos de origem alimentar. A proteína do soro de leite, comumente encontrada em suplementos lácteos, é uma fonte benéfica de proteína. No entanto, ela pode conter microrganismos de origem láctica. Endosporos e esporos podem resistir à processamento tecnológico, sendo capazes de produzir toxinas termo estáveis. Todos esses fatores exigem atenção para a produção de suplementos seguros. Os objetivos deste estudo foram realizar as contagens de coliformes totais, Bacillus cereus, estafilococos coagulase positiva, Enterococcus spp., bactérias lácticas e fungos, além da pesquisa de Salmonella spp. e Cronobacter sakazakii. Determinação da resistência bacteriana a antimicrobianos e perfil micotoxicológico de espécies fúngicas isoladas também caracterizaram o nível de qualidade sanitária dos suplementos. Para as análises bacteriológicas foram utilizadas a metodologia descrita pela instrução normativa 62 do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA); os métodos padrão de análise de água e de águas Residuais (APHA); o manual Merck e o método ISO / TS 22964 modificado. Para a resistência bacteriana aos antimicrobianos utilizou-se a metodologia do Clinical and Laboratory Standards Institute, e a contagem de fungos, identificação e perfil micotoxicológico seguindo determinações por Pitt; Hocking em Fungos e alimentos. Contagens bacterianas relevantes se resumiram a Enterococcus spp. Não foi encontrada resistência bacteriana aos antimicrobianos. Contagens de fungos estavam acima do determinado pela USP (10 UFC/g), superando 104 UFC/g, mostrando também elevado coeficiente de variação (CV 0,33). Associada com a atividade de água de baixa encontrada (0,47 ± 0,15) sugere condições adequadas para a manutenção de conídios fúngicos. Há também um risco potencial de germinação de fungos neste substrato, devido ao potencial higroscópico do material. Todas as marcas de suplementos analisadas foram consistentes com os padrões estabelecidos pela legislação brasileira. No entanto, contagens de fungos excederam o estipulado pela USP. Esta contaminação confere potencial risco para a população idosa.

Elders are more susceptible to food born etiologic agents. Whey protein, commonly found in dairy supplements, is a very beneficial source of protein. However, it can contain microorganisms of lactic origins. Endospores and spores can resist the technological processing, being able to produce thermo stable toxins. All those factors demand attention to the production of safe supplements. The aims of this study are realizing the counts of total coliforms, Bacillus cereus, staphylococci positive for coagulase, Enterococcus spp., acid lactic bacteria and fungus, plus the research of Salmonella spp. and Cronobacter sakazakii. Determination of bacterial resistance to antibiotics and mycotoxicological profile of fungi´s species isolated to better characterize the level of sanitary quality of supplements. For the bacteriologic analysis were used the methodology described by the normative instruction n. 62 from by Brazilian Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA); the Standard Methods of the Examination of Water and Waste Water (APHA); the Merck manual and the modified method ISO/TS 22964. For bacterial resistance to antibiotics, the Clinical and Laboratory Standards Institute methodology was followed. Fungi count, identification and mycotoxicological profile followed determinations by Pitt; Hocking in Fungi and food. Relevant bacterial counts resumed to Enterococcus spp. No bacterial resistance to antibiotics were found. Fungal counts were above the determined by the USP (10 CFU/g), in higher order than 104 CFU/g, also showing high coefficient of variation (CV 0.33). Associated with the low water activity founded (0.47 ±0.15) suggests suitable conditions for maintenance of fungal conidia. There is also a potential risk for contamination by fungi sprouting process in this substrate, due to the hygroscopic potential material. All brands of supplements analyzed were consistent with the standards established by Brazilian legislation. However, fungi count exceeded the stipulated by USP. Such contamination confers potential risk to the elder population.