Hemoperitoneum in a cow with lumbar muscle hemangiosarcoma

Background: Hemangiosarcoma is a malignant neoplasm of endothelial cells with an infiltrative growth pattern. Hemangiosarcomas are frequently reported in canines and rare in felines, sheep, goats, swine, horses and cattle. Few cases of hemangiosarcoma were reported in cattle. In the present report, we describe the clinicopathological findings of a bovine muscle hemangiosarcoma. Case: A 6-year-old, Girolando cow from the Dairy Cattle Sector of the Federal Rural University of Rio de Janeiro (UFRRJ), Seropédica, presented sternal decubitus. Clinical signs were markedly pale mucous membranes, moderate dehydration, respiratory distress, and increased heart rate. The hematological examination revealed intense regenerative anemia. Due to the worsening of the clinical condition, the cow was submitted to euthanasia. The necropsy and collection of various fragments of organs were performed, which were sent to the "Setor de Anatomia Patológica" (SAP-UFRRJ). Tissues were fixed in 10 % buffered formalin, routinely processed for histology and stained with Hematoxylin and Eosin (HE). The external mucous membranes were markedly pale. Multifocal areas of 1.5 x 1.0 cm, irregular and dark red were observed dissecting the quadratus lumborum muscle (hemangiosarcoma) fibers. These neoplasms were associated with an extensive cruoric clot adhered to the muscle fibers. The extensive, red, friable mass measured approximately 76 x 55 x 20 cm on the serous surfaces of the organs of the peritoneal cavity (hemoperitoneum). The spleen was moderately reduced. The bone marrow was markedly pale. Histologically, it was observed that there was an extensive proliferation of endothelial cells in the quadratus lumbar muscle mass dissecting the epimysium and perimysium. Endothelial cells had moderate pleomorphism, organized in vascular channels and forming multifocally solid areas with a significant amount of eosinophilic fibrillar material (fibrin). Sections of muscle neoplasm were subjected to immunohistochemistry with anti-von Willebrand factor primary antibody, which showed a multifocal moderate cytoplasmic immunolabeling of neoplastic endothelial cells. Discussion: There are few reports of striated muscle hemangiosarcoma in cattle. Muscular hemangiosarcomas were reported in a 4-month-old calf in the left cervical trapezius muscle and a 6-year-old Holstein cow with left pelvic limb mass lateral and distal to the knee. Some reports presented hemangiosarcoma in the iliopsoas muscle, left cervical trapezius muscle, pelvic limb muscles and right cervical muscle of the bovine. In the presented report, hemoperitoneum occurred as a result of hemorrhages from muscle hemangiosarcoma. Other studies have demonstrated cavity hemorrhages in joint, pelvic, pleural and cranial cavities associated with hemangiosarcoma. Hemangiosarcoma with regenerative anemia must be distinguished from other diseases that cause anemia. The main differential diagnoses of bovine with anemia are vena cava syndrome, coumarin derivatives poisoning, acute poisoning by Pteridium spp., tick fever, anaplasmosis, babesiosis and trypanosomiasis. Hemangiosarcoma should be differentiated from other lesions as hemangioma, vascular tumor of lymphatic endothelium and perivascular wall tumors. Cases with poorly differentiated morphology should be submitted for immunohistochemistry. In the present hemangiosarcoma case, we have used the von Willebrand factor for immunohistochemistry diagnosis. Expression of angiogenic growth factors such as CD31, vascular endothelial growth factor (VEGF), basic fibroblast growth factor (bFGF) and angiopoietin-1 (Ang-1) have also been used in the diagnosis of vascular proliferation lesions. Hemangiosarcoma in cattle should be included mainly in the differential diagnosis of diseases that cause acute anemia in cattle.

Serological and molecular detection of Theileria equi in horses from Sinop, Mato Grosso state, Brazil / Detecção sorológica e molecular de Theileria equi em equinos oriundos de Sinop, Mato Grosso, Brasil

Equine piroplasmosis is the most important tick-borne disease to affect horses in Brazil. Theileria equi is one of the causative agents of equine piroplasmosis. Chronic cases are expected, in which the animals show no apparent signs of infection and remain asymptomatic but constitute a source of the infectious agent that ticks can spread. This study was conducted across 81 ranches located in the municipality of Sinop, State of Mato Grosso, Brazil. A sample calculation was performed to estimate the apparent prevalence of T. equi among horses. A total of 1,853 animals were included in the sampling analysis based on the information available from the Institute of Agricultural and Livestock Defense of Mato Grosso State. The serological analysis of 367 serum samples using an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to detect anti-T. equi antibodies revealed that 337 animals were positive, representing a frequency of 90.70%. The molecular analysis to amplify the EMA-1 gene showed positivity in 20 of 89 tested samples. The fragments of four samples were sequenced and analyzed to determine their similarities to sequences from other species, based on sequences deposited at GenBank. All showed 100% similarity with T. equi. Our study represents the first report of T. equi antibodies among the equids in north-central region of Mato Grosso, revealing the widespread distribution of seropositive animals.(AU)

A piroplasmose equina é a doença transmitida por carrapatos mais importante em cavalos no Brasil. Theileria equi é um dos agentes causadores da piroplasmose equina. São esperados casos crônicos, nos quais os animais não apresentam sinais aparentes de infecção e permanecem assintomáticos, mas constituem uma fonte de infecção e disseminação por carrapatos. Este estudo foi realizado em 81 fazendas localizadas no município de Sinop, Estado de Mato Grosso, Brasil. Um cálculo amostral foi realizado para estimar a prevalência aparente de T. equi entre cavalos. No total, 1.853 animais foram incluídos na análise amostral com base nas informações disponíveis no Instituto de Defesa Agropecuária do Estado de Mato Grosso. A análise sorológica de 367 amostras de soro por meio de ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) para detecção de anticorpos anti-T. equi revelou que 337 animais eram positivos, representando uma frequência de 90,70%. A análise molecular para o gene EMA-1 mostrou positividade em 20 das 89 amostras testadas. Os fragmentos de quatro amostras foram sequenciados e analisados para determinar suas semelhanças com sequências de outras espécies, a partir das sequências depositadas no GenBank. Todos mostraram 100% de similaridade com T. equi. Nosso estudo representa o primeiro relato de anticorpos contra T. equi entre os equídeos na região centro norte de Mato Grosso, revelando a ampla distribuição de animais soropositivos.(AU)

Serological and molecular detection of Theileria equi in horses from Sinop, Mato Grosso state, Brazil / Detecção sorológica e molecular de Theileria equi em equinos oriundos de Sinop, Mato Grosso, Brasil

Equine piroplasmosis is the most important tick-borne disease to affect horses in Brazil. Theileria equi is one of the causative agents of equine piroplasmosis. Chronic cases are expected, in which the animals show no apparent signs of infection and remain asymptomatic but constitute a source of the infectious agent that ticks can spread. This study was conducted across 81 ranches located in the municipality of Sinop, State of Mato Grosso, Brazil. A sample calculation was performed to estimate the apparent prevalence of T. equi among horses. A total of 1,853 animals were included in the sampling analysis based on the information available from the Institute of Agricultural and Livestock Defense of Mato Grosso State. The serological analysis of 367 serum samples using an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to detect anti-T. equi antibodies revealed that 337 animals were positive, representing a frequency of 90.70%. The molecular analysis to amplify the EMA-1 gene showed positivity in 20 of 89 tested samples. The fragments of four samples were sequenced and analyzed to determine their similarities to sequences from other species, based on sequences deposited at GenBank. All showed 100% similarity with T. equi. Our study represents the first report of T. equi antibodies among the equids in north-central region of Mato Grosso, revealing the widespread distribution of seropositive animals.

A piroplasmose equina é a doença transmitida por carrapatos mais importante em cavalos no Brasil. Theileria equi é um dos agentes causadores da piroplasmose equina. São esperados casos crônicos, nos quais os animais não apresentam sinais aparentes de infecção e permanecem assintomáticos, mas constituem uma fonte de infecção e disseminação por carrapatos. Este estudo foi realizado em 81 fazendas localizadas no município de Sinop, Estado de Mato Grosso, Brasil. Um cálculo amostral foi realizado para estimar a prevalência aparente de T. equi entre cavalos. No total, 1.853 animais foram incluídos na análise amostral com base nas informações disponíveis no Instituto de Defesa Agropecuária do Estado de Mato Grosso. A análise sorológica de 367 amostras de soro por meio de ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) para detecção de anticorpos anti-T. equi revelou que 337 animais eram positivos, representando uma frequência de 90,70%. A análise molecular para o gene EMA-1 mostrou positividade em 20 das 89 amostras testadas. Os fragmentos de quatro amostras foram sequenciados e analisados para determinar suas semelhanças com sequências de outras espécies, a partir das sequências depositadas no GenBank. Todos mostraram 100% de similaridade com T. equi. Nosso estudo representa o primeiro relato de anticorpos contra T. equi entre os equídeos na região centro norte de Mato Grosso, revelando a ampla distribuição de animais soropositivos.

ATIVIDADE REPELENTE E CARRAPATICIDA DE COMPOSTOS DERIVADOS DO ÓLEO DE COCO CONTRA Amblyomma sculptum

Amblyomma sculptum pode parasitar diversos mamíferos, incluindo humanos, e é o principal vetor da bactéria Rickettsia rickettsii no Brasil, agente etiológico da febre maculosa brasileira. Diversos estudos vêm sendo realizados com produtos de origem vegetal para controle de carrapatos. Além disso, o uso de repelentes é uma importante ferramenta para evitar infestações. O presente estudo teve como objetivo avaliar a repelência de ninfas não alimentadas de A. sculptum frente a substâncias derivadas de óleo de coco (éster metílico de ácido dodecanóico- C12; éster metílico de ácido decanóico- C10; óleo de catnip- Nepeta cataria; e ácido graxo livre de coco em formulação de óleo de lavanda) por meio de bioensaios de placa de Petri modificado e, avaliar a atividade carrapaticida dessas substâncias por meio do teste de pacote de larvas. Para o teste de placa de Petri, um semicírculo de papel filtro contendo a substância a ser testada na concentração de 10% diluída em etanol e outro semicírculo contendo o solvente (etanol), foram posicionadas dentro da placa; seis ninfas não alimentadas foram colocadas no centro de cada placa e sua localização foi avaliada aos 1, 3, 5, 10, 15 e 30 minutos e às 24, 48, 72, 96 e 168 horas após o início do teste. Para o teste de pacote de larvas as substâncias foram utilizadas em cinco concentrações (2,5; 5; 10; 15 e 20 mg/mL) sobre larvas não alimentadas de A. sculptum para avaliação de mortalidade após 24 horas do tratamento. Como resultado, todas as substâncias apresentaram repelência, sendo que o ácido graxo livre de óleo de coco conferiu repelência por 7 dias, enquanto o óleo de catnip (Nepeta cataria) e o éster metílico de C10 apresentaram repelência por 4 e 3 dias, respectivamente. A concentração do éster metílico de C12, efetiva contra mais de 93% das larvas testadas, foi de 15 mg/mL e a concentração, dessa mesma substância, de 20mg/mL conferiu 100% de mortalidade. Assim, nossos resultados indicam que compostos derivados do óleo de coco possuem efeito repelente e carrapaticida sobre fases imaturas de A. sculptum e podem ser formulados para proteger humanos e outros animais de infestação, bem como contra patógenos transmitidos por essa espécie de carrapato.

Amblyomma sculptum can parasitize several mammals, including humans, and is the main vector of the Rickettsia rickettsii bacterium in Brazil, the etiological agent of Brazilian spotted fever. Several studies have been carried out with products of plant origin to control ticks. In addition, the use of repellents is an important tool to prevent infestations. The present study aimed to evaluate the repellency of non-fed nymphs of A. sculptum against substances derived from coconut oil (methyl ester of dodecanoic acid-C12; methyl ester of decanoic acid-C10; catnip oil- Nepeta cataria; and fatty acid free of coconut in lavender oil formulation) using modified Petri dish bioassays and, to evaluate the tick activity of these substances by means of the larval pack test. For the Petri dish test, a semicircle of filter paper containing the substance to be tested at a concentration of 10% diluted in ethanol and another semicircle containing the solvent (ethanol), were placed inside the dish; six non-fed nymphs were placed in the center of each plate and their location was assessed at 1, 3, 5, 10, 15 and 30 minutes and at 24, 48, 72, 96 and 168 hours after the start of the test. For the larval packet test the substances were used in five concentrations (2.5, 5, 10, 15 and 20 mg / mL) on non-fed larvae of A. sculptum to assess mortality after 24 hours of treatment. As a result, all substances showed repellency, with fatty acid free of coconut oil conferring repellency for 7 days, while catnip oil (Nepeta cataria) and C10 methyl ester showed repellency for 4 and 3 days, respectively. The concentration of C12 methyl ester, effective against more than 93% of the tested larvae, was 15 mg / mL and the concentration, of that same substance, of 20mg / mL conferred 100% mortality. Thus, our results indicate that compounds derived from coconut oil have a repellent and tick effect on immature stages of A. sculptum and can be formulated to protect humans and other animals from infestation, as well as against pathogens transmitted by this species of tick.

Aspectos de la infección en ganado experimentalmente infectados por Anaplasma marginale / Aspects of infection in cattle experimentally infected with Anaplasma marginale / Aspectos da infecção por Anaplasma marginale em bovinos experimentalmente infectados

Este estudio tuvo como objetivo evaluar las características clínicas, hematológicas, aspectos parasitológicos, así como la eficacia de oxitetraciclina de larga acción contra Anaplasma marginale en el ganado infectado experimentalmente. Seis animales seronegativos fueron obtenidos por RIFI. En día 9 del estudio, los tres animales fueron esplenectomizados, y de día cero, seis animales fueron inoculados con aproximadamente 1x106 glóbulos rojos parasitados por Anaplasma marginale. La temperatura rectal se midio desde el primero al 35 º día después de la inoculación (DPI). Haga que el volumen celular empacado (VG - microhematocrito ) y el cálculo de la parasitemia, fueron obtenidos a partir de la 10ª a la 35ª DPI. Los animales recibieron un tratamiento específico (oxitetraciclina LA), cuando se presenta inicialmente la hipertermia ( > = 39,2o.C) y la parasitemia > = 2,0 %, y recibir nuevos tratamientos, clínicos y parasitológicos hasta que se produce la estabilización del animal. Analizando los resultados, parece que a los 21 DPI la parasitemia estaba presente en seis animales, en el mismo dia, comenzó el declive de VG en el ganado. La temperatura rectal del ganado alcanzó fiebre > = 39,2 picos del 23 DPI, en este día que la parasitemia de los animales se encontraban en el lugar . En general, el tratamiento específico para A. marginale, se tuvo que realizar unos tres días después de esta [...](AU)

This study aimed to evaluate the clinical, hematological, parasitological aspects and the effectiveness of long-acting oxytetracycline against Anaplasma marginale in experimentally infected cattle. Six 10-month-old animals seronegative by indirect immunofluorescence reaction (IFAT) were obtained. On day -9 of the study, three animals were splenectomized, and on day zero all six animals were inoculated with about 1x106 by Anaplasma marginale parasitized erythrocytes. Rectal temperature was measured from the 1st to the 35th day postinoculation (DPI). The packed cell volume (VG - microhematocrit) and calculation of parasitemia was obtained from 10º to 35º DPI. The experimental animals received first specific treatment (oxytetracycline LA) when they presented hyperthermia (> = 39.2o.C) and parasitemia >= 2.0%, and received new treatments until clinical and parasitological stabilization occurred. The results revealed that on 21º DPI parasitemia was present in the six animals, and from this day on the VG decreased. Their rectal temperature reached > = 39.2oC from 23º DPI on, when the parasitemia was on the rise. In general, the specific treatment against A. marginale had to be performed about three days after the haemoparasite was identified in the blood. The animals received one to four specific treatments against A. marginale to obtain clinical and parasitological stabilization. [...](AU)

O presente trabalho teve como objetivo, avaliar os aspectos clínicos, hematológicos, parasitológicos, bem como a eficácia da oxitetraciclina longa ação, contra Anaplasma marginale, em bovinos experimentalmente infectados. Seis animais soronegativos foram obtidos pela RIFI. No dia 9 do estudo, três animais foram esplenectomizados, e no dia zero, os seis bovinos foram inoculados com aproximadamente 1x106 hemácias parasitadas por Anaplasma marginale. A temperatura retal foi aferida do 1º ao 35º dia pós-inoculação (DPI). Já o volume globular (VG - microhematócrito) e o cálculo da parasitemia, foram obtidos do 10º ao 35º DPI. Os animais receberam tratamento específico (oxitetraciclina LA), quando apresentaram, inicialmente, hipertermia (> = 39,2ºC) e parasitemia > = 2,0%, e receberiam novos tratamentos, até ocorrer estabilização clínica e parasitológica do animal. Analisando os resultados, verifica-se que no 21º DPI a parasitemia foi presente nos seis animais, neste mesmo dia, iniciou o decréscimo no VG dos animais. A temperatura retal dos bovinos atingiu picos febris > = 39,2, a partir do 23º DPI, dia este em que a parasitemia encontrava-se em ascensão. De um modo geral, o tratamento específico contra A. marginale, precisou ser realizado cerca de três dias após o hemoparasita ter sido identificado na corrente sanguínea periférica dos animais. Os animais tiveram de receber de um a quatro [...](AU)

Aspectos de la infección en ganado experimentalmente infectados por Anaplasma marginale / Aspects of infection in cattle experimentally infected with Anaplasma marginale / Aspectos da infecção por Anaplasma marginale em bovinos experimentalmente infectados

Este estudio tuvo como objetivo evaluar las características clínicas, hematológicas, aspectos parasitológicos, así como la eficacia de oxitetraciclina de larga acción contra Anaplasma marginale en el ganado infectado experimentalmente. Seis animales seronegativos fueron obtenidos por RIFI. En día 9 del estudio, los tres animales fueron esplenectomizados, y de día cero, seis animales fueron inoculados con aproximadamente 1x106 glóbulos rojos parasitados por Anaplasma marginale. La temperatura rectal se midio desde el primero al 35 º día después de la inoculación (DPI). Haga que el volumen celular empacado (VG - microhematocrito ) y el cálculo de la parasitemia, fueron obtenidos a partir de la 10ª a la 35ª DPI. Los animales recibieron un tratamiento específico (oxitetraciclina LA), cuando se presenta inicialmente la hipertermia ( > = 39,2o.C) y la parasitemia > = 2,0 %, y recibir nuevos tratamientos, clínicos y parasitológicos hasta que se produce la estabilización del animal. Analizando los resultados, parece que a los 21 DPI la parasitemia estaba presente en seis animales, en el mismo dia, comenzó el declive de VG en el ganado. La temperatura rectal del ganado alcanzó fiebre > = 39,2 picos del 23 DPI, en este día que la parasitemia de los animales se encontraban en el lugar . En general, el tratamiento específico para A. marginale, se tuvo que realizar unos tres días después de esta [...]

This study aimed to evaluate the clinical, hematological, parasitological aspects and the effectiveness of long-acting oxytetracycline against Anaplasma marginale in experimentally infected cattle. Six 10-month-old animals seronegative by indirect immunofluorescence reaction (IFAT) were obtained. On day -9 of the study, three animals were splenectomized, and on day zero all six animals were inoculated with about 1x106 by Anaplasma marginale parasitized erythrocytes. Rectal temperature was measured from the 1st to the 35th day postinoculation (DPI). The packed cell volume (VG - microhematocrit) and calculation of parasitemia was obtained from 10º to 35º DPI. The experimental animals received first specific treatment (oxytetracycline LA) when they presented hyperthermia (> = 39.2o.C) and parasitemia >= 2.0%, and received new treatments until clinical and parasitological stabilization occurred. The results revealed that on 21º DPI parasitemia was present in the six animals, and from this day on the VG decreased. Their rectal temperature reached > = 39.2oC from 23º DPI on, when the parasitemia was on the rise. In general, the specific treatment against A. marginale had to be performed about three days after the haemoparasite was identified in the blood. The animals received one to four specific treatments against A. marginale to obtain clinical and parasitological stabilization. [...]

O presente trabalho teve como objetivo, avaliar os aspectos clínicos, hematológicos, parasitológicos, bem como a eficácia da oxitetraciclina longa ação, contra Anaplasma marginale, em bovinos experimentalmente infectados. Seis animais soronegativos foram obtidos pela RIFI. No dia 9 do estudo, três animais foram esplenectomizados, e no dia zero, os seis bovinos foram inoculados com aproximadamente 1x106 hemácias parasitadas por Anaplasma marginale. A temperatura retal foi aferida do 1º ao 35º dia pós-inoculação (DPI). Já o volume globular (VG - microhematócrito) e o cálculo da parasitemia, foram obtidos do 10º ao 35º DPI. Os animais receberam tratamento específico (oxitetraciclina LA), quando apresentaram, inicialmente, hipertermia (> = 39,2ºC) e parasitemia > = 2,0%, e receberiam novos tratamentos, até ocorrer estabilização clínica e parasitológica do animal. Analisando os resultados, verifica-se que no 21º DPI a parasitemia foi presente nos seis animais, neste mesmo dia, iniciou o decréscimo no VG dos animais. A temperatura retal dos bovinos atingiu picos febris > = 39,2, a partir do 23º DPI, dia este em que a parasitemia encontrava-se em ascensão. De um modo geral, o tratamento específico contra A. marginale, precisou ser realizado cerca de três dias após o hemoparasita ter sido identificado na corrente sanguínea periférica dos animais. Os animais tiveram de receber de um a quatro [...]

Experimental infection of Capybaras (Hydrochoerus hydrochaeris) with an Amblyomma sculptum-derived strain of Rickettsia rickettsii

A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é reconhecida como a doença transmitida por carrapatos com maior letalidade no Brasil e outros países do hemisfério ocidental. Rickettsia rickettsii é seu agente etiológico e, na sua história natural, os carrapatos e mamíferos cumprem um papel essencial. No sudeste brasileiro, Amblyomma sculptum é o principal vetor incriminado e as capivaras têm sido reconhecidas como hospedeiros amplificadores. Estudos prévios têm comprovado que as capivaras são suscetíveis à infecção com R. rickettsii e apresentam uma rickettsemia prolongada que possibilita a infecção de populações de A. sculptum suscetíveis. Os estudos citados, usaram na infecção, uma cepa de R. rickettsii isolada de carrapatos Amblyomma aureolatum (cepa Taiaçu), sem executar novos desafios de infecção em animais imunes. No presente trabalho, apresentamos os resultados de uma infecção experimental de capivaras com uma cepa de R. rickettsii isolada de carrapatos A. sculptum (cepa Itu) identificando variáveis clínicas, hematológicas e patológicas, o período de rickettsemia e a subsequente transmissão de R. rickettsii a populações de carrapatos A. sculptum suscetíveis, com uma análise sequencial da sua competência vetorial. Adicionalmente, foram executados desafios posteriores para estudar os parâmetros citados em animais imunes ou convalescentes. Cinco capivaras, de duas áreas não endêmicas no estado de São Paulo, foram infectadas com R. rickettsii (cepa Itu) através de infestações com carrapatos A. sculptum infectados. A temperatura retal e os sinais clínicos foram avaliados por um período de acompanhamento de 30 dias e amostras de sangue foram coletadas a cada dois dias, para inoculação de cobaias, extração de DNA, hematologia e reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Adicionalmente, as capivaras também foram infestadas com carrapatos A. sculptum não infectados (ninfas e adultos) em duas câmaras de alimentação (uma junto com os adultos infectados e a outra separados dos adultos infectados), os quais foram posteriormente coletados, incubados e usados para infestar coelhos suscetíveis e para extração de DNA. Estes procedimentos foram repetidos através de infecções subsequentes nas capivaras. Na primoinfecção, quatro de cinco capivaras apresentaram sinais clínicos e duas delas morreram, exibindo lesões macroscópicas vasculares durante a necropsia. Baseando-se na inoculação das cobaias, houve rickettsemia em todas as capivaras com uma duração média de 9,2 dias (intervalo: 6-20 dias). DNA de Rickettsia foi amplificado em amostras de sangue de três capivaras e algumas variáveis hematológicas (hematócrito e contagem de leucócitos) se alteraram durante a infecção. Todos os indivíduos apresentaram respostas sorológicas, mantiveram títulos de anticorpos durante o período de acompanhamento (307-555 dias) e, nos animais convalescentes, anticorpos foram detectados prévio a cada desafio ulterior. Em aquelas capivaras, não foram registrados nem sinais clínicos nem rickettsemia depois de cada um dos desafios. As amostras de carrapatos coletadas durante a primoinfecção, de todas as capivaras, amplificaram DNA de Rickettsia com taxas de infecção de 4,6-30% para ninfas e 5,0-100.0% para adultos. Adicionalmente, depois das infestações com estes carrapatos, os coelhos apresentaram sinais clínicos e reação sorológica. Pelo contrário, carrapatos coletados durante os desafios posteriores não amplificaram DNA de Rickettsia e os coelhos infestados com estes não exibiram sinais clínicos nem resposta de anticorpos. Salienta-se que um lote de carrapatos coletados da capivara 5, durante a segunda infeção, que se alimentaram junto com os adultos infectados, amplificaram DNA de Rickettsia, sugerindo uma provável transmissão horizontal não sistêmica. Em conclusão, no presente estudo foi corroborada a susceptibilidade das capivaras à infecção com R. rickettsii (cepa Itu) e a apresentação de variáveis de infecção similares quando comparada com a cepa Taiaçu. Não obstante, novas características clínicas e de infecção de carrapatos foram registradas em animais primo-infectados e imunes.

Brazilian Spotted Fever (BSF) is recognized as the most lethal tick-borne disease in Brazil and other countries in the western hemisphere. Rickettsia rickettsii is its etiological agent, and in its natural history, ticks and mammals perform an essential epidemiologic role. In Southeastern Brazil, Amblyomma sculptum is the main incriminated vector and capybaras have been recognized as amplifier hosts. Previous studies have comproved that capybaras are susceptible to infection with R. rickettsii and that develop a rickettsemia of sufficient length to infect naïve A. sculptum ticks. These studies used for infection a strain of R. rickettsii isolated from Amblyomma aureolatum ticks (strain Taiaçu) without performing subsequent infection challenges in immune animals. Herein, we present the results of an experimental study infecting capybaras with a R. rickettsii-strain isolated from A. sculptum (strain Itu) identifying clinical, haematological and pathological features, rickettsemic period and subsequent transmission of R. rickettsii to susceptible A. sculptum tick populations with a sequential analysis of their vectorial competence; also, we performed subsequent infections to evaluate the mentioned variables in immune or convalescent animals. Five capybaras, from two non-endemic regions in São Paulo state, were infected with R. rickettsii (strain Itu) through tick infestations with infected A. sculptum adults. Rectal temperature and clinical signs were registered during a 30-day following period and blood samples collected, each two days, for guinea pig inoculation, DNA extraction, haematology and immunofluorescence antibody test (IFA). Also, capybaras were infested with non-infected A. sculptum ticks (nymphs and adults) in two feeding chambers (one to feed with infected adults and another to feed separated from infected adults), which were further collected, incubated and posteriorly used for infestation of susceptible rabbits and DNA extraction. These procedures were repeated during subsequent capybara infections. During primoinfection, four out of five capybaras presented clinical signs and two died, showing vascular gross lesions at necropsy. Based on guinea pig inoculation, rickettsemia was present in all capybaras with a mean duration of 9.2 days (range: 6-12 days). Rickettsia DNA was amplified in blood samples of three capybaras and some hematologic variables (PCV, and leucocyte count) were altered during infection. All individuals presented serological responses and maintain antibody titres during the following period (307-555 days) and, in convalescent capybaras, antibodies were detected before each subsequent infection. In those animals, no clinical signs nor rickettsemia were detected after each infection challenge. Samples of ticks collected during primoinfection of all capybaras amplified Rickettsia DNA with infectious rates of 4.6-30.0% and 5.0-100.0% in molted nymphs and adults, respectively. Also, after infestations with these ticks, rabbits presented clinical signs and serologic reactivity. By contrast, ticks collected during subsequent capybara infections did not amplify Rickettsia DNA and rabbits infested with them did not exhibited clinical signs nor antibody response. Notably, a batch of ticks collected from capybara 5, during the second infection, that fed adjacent with infected adults, amplified Rickettsia DNA, suggesting a probable R. rickettsii non-systemic horizontal transmission. In conclusion, in the present study it was corroborated capybara susceptibility to infection with R. rickettsii (strain Itu) and similar infection variables when comparing with strain Taiaçu. However, new clinical and tick transmission patterns were registered in first-infected and immune animals.

Pesquisa sorológica em cães e pesquisa molecular em carrapatos para Febre Maculosa Brasileira no munícipio de Itu, SP

A febre maculosa é uma doença grave e letal para o ser humano causada pela bactéria Rickettsia rickettsii. Na região metropolitana de São Paulo, onde a população estimada é de 20.000.000 de habitantes, o agente etiológico é transmitido pelo carrapato Amblyomma aureolatum, mas no interior desde Estado, o vetor da doença é o Amblyomma sculptum. O ciclo epidemiológico de transmissão tem sido intensamente estudado e muitos dados foram gerados na última década, no entanto elos importantes como o papel dos cães, hospedeiros destes carrapatos, ainda necessitam ser elucidados. Este projeto objetivou: a) avaliar a frequência sorológica nos cães atendidos no centro de controle de zoonoses (CCZ) do município de Itu, SP, quanto à presença de anticorpos anti- Rickettsia rickettsiii; Rickettsia parkeri e Rickettsia bellii b) pesquisas moleculares quanto a presença da bactéria do gênero Rickettsia em carrapatos coletados em cães. Foram colhidos sangue de 289 cães, sendo 252 da zona urbana e 37 da zona rural; 874 carrapatos, sendo 197 coletados de cães residentes da zona rural e 679 de cães residentes da zona urbana. As espécies encontradas foram Rhipicephalus sanguineus, Amblyomma aureolatum, Amblyomma ovale e Amblyomma sculptum. Foram testados 197 carrapatos da zona rural: a) 23,85% (47/197) dos carrapatos para Rickettsia sp. na PCR Real Time; b) 20,3% (40/197) para o gene glta; c) 1,52% (3/197) para o gene ompB na PCR convencional. Na zona urbana foram testados 206 carrapatos: a) 2,9% (6/206) positivos na PCR Real Time para Rickettsia sp.; b) 1,94% (4/206) positivaram na PCR convencional para o gene glta. Dentre das 289 amostras que reagiram sorologicamente, 12,8% (37/289) soroconverteram para Rickettsia sp.; 8,3% (24/289) para Rickettsia rickettsii; 0,4% para Rickettsia parkeri; 0,4% para Rickettsia bellii. Concluímos com este trabalho que a Rickettsia rickettsii é o provável agente dos casos de FMB na cidade de Itu, estado de São Paulo, pois foram encontrados carrapatos infectados para Rickettsia sp., e foram encontrados animais sorologicamente positivos para a bactéria do gênero Rickettsia rickettsii e Rickettsia parkeri.

The Brazilian spotted fever is a severe and lethal disease for human beings caused by the bacteria Rickettsia rickettsii. In the metropolitan area of São Paulo, which its estimated population is of 20.000.000 inhabitants, the etiological agent is transmitted through the tick Amblyomma aureolatum, but in the countryside area of this State, the disease vector is the Amblyomma sculptum. The epidemiological cycle of transmission has been intensely studied and many data were generated in the last decade, however important links as the role of the dogs, the hosts of these ticks, still needs to be elucidated. The aims of this project are: a) evaluate the frequency of serological tests in dogs treated at the center for zoonosis control in the municipality of Itu,SP, regarding the presence of the antibodies anti- Rickettsia rickettsiii; Rickettsia parkeri and Rickettsia bellii b) molecular researches regarding the presence of the bacteria of genus Rickettsia in the ticks collected in dogs. It were drawn blood from 289 dogs, which 252 were from urban area and 37 from rural area, 874 ticks, which 197 were collected from the dogs living in the rural area and 679 from the dogs living in the urban area. The species found were Rhipicephalus sanguineus, Amblyomma aureolatum, Amblyomma ovale and Amblyomma sculptum. From the rural area 197 ticks were tested: a) 23.85% (47/197) of the ticks for Rickettsia sp in the Real Time PCR; b) 20.3% (40/197) for gene glta; c) 1.52% (3/197) for the gene ompB in the Conventional PCR. In the urban area 206 ticks were tested: a) 2.9% (6/206) positives in the Real Time PCR for Rickettsia sp.; b) 1.94% (4/206) positive in the Conventional PCR for gene glta. Among the 289 samples that reacted serologically, 12.8% (37/289) seroconverted to Rickettsia sp.; 8.3% 924/289) to Rickettsia rickettsi; 0.4% to Rickettsia parkeri; 0.4% to Rickettsia bellii. In this paper, we concluded that the Rickettsia rickettsi is the probable agent of the cases of the Brazilian spotted fever in the municipality of Itu, State of São Paulo, because ticks infected with Rickettsia sp. were found, and it was found animals that were serologically positives for the bacteria of genus Rickettsia rickettsi and Rickettsia parkeri.

Pesquisa de infecção por riquétsias do grupo da febre maculosa em cães, pequenos mamíferos e carrapatos em área endêmica e não endêmicas nos biomas Pampa e Mata Atlântica no estado do Rio Grande do Sul

Em 2005 o primeiro caso de Febre Maculosa Brasileira (FMB) foi reconhecido no estado do Rio Grande do Sul (RS), Brasil. Desde então até abril de 2016 doze casos foram confirmados, sendo que quatro destes são autóctones do município de Cerro Largo, área considerada endêmica para a enfermidade riquetsial. Neste mesmo período o RS também notificou 58 casos suspeitos ao Ministério da Saúde. No RS são encontrados dois biomas, Mata Atlântica e Pampa, este último não ocorrendo em outras unidades federativa do país. Até o momento, inexistem estudos relatando a infecção por riquétsias na ixodofauna gaúcha. Desta forma, o presente estudo teve como objetivo pesquisar a infecção de riquétsias do Grupo da Febre Maculosa (GFM) em cães, pequenos mamíferos e carrapatos; através da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), qPCR e tentativa de isolamento de riquétsias em cultivo celular dos ixodídeos coletados em área endêmica (Cerro Largo) e áreas não endêmicas nos biomas Pampa e Mata Atlântica no RS. Na sorologia (RIFI), 33,5 % (55/164), 2,9% (1/33), 40% (16/40) dos pequenos mamíferos e 8,3% (3/36), 13,9% (5/36) e 20,4 (28/137) dos cães coletados na Mata Atlântica, Pampa e área endêmica para FMB, respectivamente, foram sororreagentes para pelo menos um dos seis antígenos de riquétsias testados. Oito espécies de carrapatos foram coletadas no local de Mata Atlântica, sendo: Amblyomma aureolatum, Amblyomma brasiliense, Amblyomma incisum, Amblyomma ovale, Haemaphysalis juxtakochi, Ixodes loricatus, Rhipicephalus microplus e Amblyomma yucumense com destaque para esta última que foi descrita como uma espécie nova. Já para o fragmento de Pampa quatro espécies foram encontradas (A. aureolatum, A. ovale, Amblyomma tigrinum e Rhipicephalus sanguineus) e na área endêmica para FMB no RS, coletamos cinco espécies de carrapatos, Amblyomma dubitatum, Amblyomma longirostre, A. ovale, I. loricatus e R. microplus. Detectamos molecularmente pela primeira vez no RS, Candidatus Rickettsia amblyommii em A. longirostre e A. brasiliense, Candidatus Rickettsia andeanae em A. aureolatum e A. tigrinum, Rickettsia bellii em I. loricatus, Rickettsia rhipicephali em A. yucumense e H. juxtakochi, Candidatus Rickettsia asemboensis em pulgas no Brasil e de extrema importância para o conhecimento da epidemiologia da FMB no RS, detectamos Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica em A. ovale oriundos de Cerro Largo (área endêmica para FMB no RS). Como primeiros isolamentos de riquétsia para o estado do RS, isolamos R. bellii de I. loricatus coletados na Mata Atlântica e área endêmica para FMB no RS. O presente estudo é pioneiro em relação a investigação comparativa sobre FMB nos biomas Pampa e Mata Atlântica e também o primeiro estudo molecular e isolamento de riquétsias em cultivo celular de amostras coletadas no RS, Brasil.

In 2005 the first Brazilian Spotted Fever (BSF) case was confirmed in the Rio Grande do Sul (RS) state, Brazil. Ever since until April 2016, twelve cases have been confirmed, and four of them are native from Cerro Largo city, an area considered endemic to the riquetsial illness. During the same period, RS also notified 58 suspected cases to the Ministry of Health. There are two distinct biomes in RS, Atlantic Forest and Pampa, the later restricted to RS within the Brazilian land. Until now, no studies reported rickettsial infection in the ixodofauna of RS. Thus, this study aimed to investigate the rickettsial infection of Spotted Fever Group (SFG) in dogs, small mammals and ticks; by immunofluorescence assay (IFA), qPCR and attempted rickettsial isolation in cell culture from ticks collected in an endemic area (Cerro Largo) and non-endemic areas in Pampa and Atlantic Forest biomes of RS. Through serology (IFA), 33.5% (55/164), 2.9% (1/33) and 40% (16/40) small mammals, and 8.3% (3/36), 13.9 % (5/36) and 20.4 (28/137) dogs from the Atlantic Forest, Pampa, and BSF-endemic area, respectively, were seroreactive (titer 64) to at least one of the six rickettsia antigens tested. Eight species of ticks were collected in the Atlantic Forest: Amblyomma aureolatum, Amblyomma brasiliense, Amblyomma incisum, Amblyomma ovale, Haemaphysalis juxtakochi, Ixodes loricatus, Rhipicephalus microplus and Amblyomma yucumense, the later described as a new species. In the Pampa fragment, four tick species were found (A. aureolatum, A. ovale, Amblyomma tigrinum and Rhipicephalus sanguineus), and five tick species (Amblyomma dubitatum, Amblyomma longirostre, A. ovale, I. loricatus, R. microplus) in the BSF-endemic area of RS. We performed the first molecular detection in the RS state of "Candidatus Rickettsia amblyommii" in A. longirostre and A. brasiliense; "Candidatus Rickettsia andeanae" in A. aureolatum and A. tigrinum; Rickettsia bellii in I. loricatus; Rickettsia rhipicephali in A. yucumense and H. juxtakochi; and Candidatus Rickettsia asemboensis in fleas in Brazil. Noteworthy, we detected the pathogen Rickettsia sp. strain Atlantic rainforest in A. ovale ticks from Cerro Largo (endemic area for BSF in RS). We also performed the first isolation in cell culture of rickettsia from RS state, which comprised R.bellii from I. loricatus collected in the Atlantic Forest and the BSF-endemic area. This study is the first comparative research about rickettsiae among Pampa and Atlantic Forest biomes, and also the first molecular detection and isolation in cell culture of rickettsiae from Rio Grande do Sul, Brazil.

Serological survey of Rickettsia sp. in horses and dogs in an non-endemic area in Brazil

Brazilian Spotted Fever (BSF) is a lethal rickettsiosis in humans caused by the bacteria Rickettsia rickettsii, and is endemic in some areas of Brazil. Horses and dogs are part of the disease's life cycle and they may also serve as sentinel animals in epidemiological studies. The first human BSF case in the State of Paraná was reported in 2005. The present study was conducted in the municipality of Almirante Tamandaré, where no previous case of BSF was reported. Serum samples were collected from 71 horses and 20 dogs from nine properties in the area. Ticks were also collected from these animals. All farmers completed a questionnaire about their knowledge of BSF and animal health management. Serum samples were analyzed by indirect immunofluorescent-antibody assay (IFA) using R. rickettsii and R. parkeri as antigens. Ticks were analyzed by PCR for Rickettsia sp., and all of them were PCR-negative. Six horses (8.45%) and 4 dogs (20%) were identified as seropositive. Farmers were not aware of the correlation between the presence of ticks and risk of BSF. Although a non-endemic area, Almirante Tamandaré is a vulnerable environment for BSF and effective tick control measures are required.

A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma riquetsiose letal para humanos, causada pela bactéria Rickettsia rickettsii, e é endêmica em algumas regiões brasileiras. Equinos e cães podem participar do ciclo da doença e podem também servir como sentinelas em estudos epidemiológicos. O primeiro caso humano relatado no Estado do Paraná ocorreu em 2005. O presente estudo foi realizado no município de Almirante Tamandaré, região onde não há relatos de casos de FMB. Foram coletadas amostras de sangue de 71 cavalos e 20 cães em nove propriedades rurais na região. Carrapatos também foram colhidos dos animais. Todos os proprietários responderam a um questionário sobre o manejo sanitário dos animais e o conhecimento a respeito da FMB. As amostras de soro foram processadas pela técnica de Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), utilizando-se os antígenos de R. rickettsii e R. parkeri. Os carrapatos foram analisados por PCR para Rickettsia sp. e todos foram negativos. Seis cavalos (8,45%) e 4 cães (20%) foram identificados como soropositivos. Todos os proprietários desconheciam a relação de carrapatos com a FMB. Embora considerada uma área não endêmica, Almirante Tamandaré é um ambiente vulnerável à FMB e um controle eficiente de carrapatos deve ser implementado.

Serological survey of Rickettsia sp. in horses and dogs in an non-endemic area in Brazil / Identificação sorológica de Rickettsia sp. em equinos e cães de área não endêmica no Brasil

Brazilian Spotted Fever (BSF) is a lethal rickettsiosis in humans caused by the bacteria Rickettsia rickettsii, and is endemic in some areas of Brazil. Horses and dogs are part of the diseases life cycle and they may also serve as sentinel animals in epidemiological studies. The irst human BSF case in the State of Paraná was reported in 2005. The present study was conducted in the municipality of Almirante Tamandaré, where no previous case of BSF was reported. Serum samples were collected from 71 horses and 20 dogs from nine properties in the area. Ticks were also collected from these animals. All farmers completed a questionnaire about their knowledge of BSF and animal health management. Serum samples were analyzed by indirect immunofluorescent-antibody assay (IFA) using R. rickettsii and R. parkeri as antigens. Ticks were analyzed by PCR for Rickettsia sp., and all of them were PCR-negative. Six horses (8.45%) and 4 dogs (20%) were identified as seropositive. Farmers were not aware of the correlation between the presence of ticks and risk of BSF. Although a non-endemic area, Almirante Tamandaré is a vulnerable environment for BSF and efective tick control measures are required. (AU)

A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma riquetsiose letal para humanos, causada pela bactéria Rickettsia rickettsii, e é endêmica em algumas regiões brasileiras. Equinos e cães podem participar do ciclo da doença e podem também servir como sentinelas em estudos epidemiológicos. O primeiro caso humano relatado no Estado do Paraná ocorreu em 2005. O presente estudo foi realizado no município de Almirante Tamandaré, região onde não há relatos de casos de FMB. Foram coletadas amostras de sangue de 71 cavalos e 20 cães em nove propriedades rurais na região. Carrapatos também foram colhidos dos animais. Todos os proprietários responderam a um questionário sobre o manejo sanitário dos animais e o conhecimento a respeito da FMB. As amostras de soro foram processadas pela técnica de Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), utilizando-se os antígenos de R. rickettsii e R. parkeri. Os carrapatos foram analisados por PCR para Rickettsia sp. e todos foram negativos. Seis cavalos (8,45%) e 4 cães (20%) foram identificados como soropositivos. Todos os proprietários desconheciam a relação de carrapatos com a FMB. Embora considerada uma área não endêmica, Almirante Tamandaré é um ambiente vulnerável à FMB e um controle eficiente de carrapatos deve ser implementado. (AU)

First identification of natural infection of Rickettsia rickettsii in the Rhipicephalus sanguineus tick, in the State of Rio de Janeiro / Primeira identificação de infecção natural por Rickettsia rickettsii no carrapato Rhipicephalus sanguineus no Rio de Janeiro

The Brazilian Spotted Fever (BSF) is a zoonotic disease caused by Rickettsia rickettsii and transmitted by ticks of the genus Amblyomma, more frequently, Amblyomma cajennense. The aim of this paper was to report the first molecular detection of R. rickettsii on R. sanguineus naturally infected in Rio de Janeiro, Brazil. Ticks were collected from dogs in a rural region of Resende municipality, Rio de Janeiro State, Brazil (22º30'9.46"S, 44º42'44.29"WO), where occurred five human cases of BSF in 2006. The ticks were identified under a stereoscopic microscope and separated in pools by stages, species and sex. DNA extraction was carried out using QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN®). The DNA was submitted to PCR amplification using 04 set of primers: Rr190.70p/Rr190.602n (OmpA, 532bp), BG1-21/BG2-20 (OmpB, 650bp), Tz15/Tz16 (17 kDa protein-encoding gene, 246bp) and RpCS.877p/RpCS.1258n (gltA, 381bp). PCR products were separated by electrophoresis on 1 percent agarose gels and visualized under ultraviolet light with ethidium bromide. PCR products of the expected sizes were purified by QIAquick® and sequenced by ABI PRISM®. The generated nucleotide sequences were edited with using Bioedit® software and compared with the corresponding homologous sequences available through GenBank, using Discontiguous Mega Blast (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). It was confirmed R. rickettsii by sequencing of the material (GenBank FJ356230). The molecular characterization of R. rickettsii in the tick R. sanguineus emphasizes the role of dogs as carriers of ticks from the environment to home. Moreover, this result suggests that there is a considerable chance for active participation of R. sanguineus as one of tick species in the transmission of R. ricketsii to human being in the Brazilian territory.(AU)

A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma zoonose causada por Rickettsia rickettsii e transmitida por carrapatos do gênero Amblyomma, mais freqüentemente pela espécie Amblyomma cajennense. Este trabalho tem como objetivo relatar a primeira detecção molecular de R. rickettsii em Rhipicephalus sanguineus naturalmente infectado no Rio de Janeiro, Brasil. Carrapatos foram coletados de cães, procedentes de uma região rural do município de Resende, estado do Rio de Janeiro, Brasil (22º30'9.46"S, 44º42'44.29"WO), onde ocorreram cinco casos humanos de FMB em 2006. Todos os carrapatos foram identificados segundo chave dicotômica, utilizando-se lupa estereoscópica e separados de acordo com estágio, espécie e sexo. Para a extração de DNA utilizou-se o kit comercial QIAamp DNA (QIAGEN ®). O DNA foi submetido à técnica de PCR utilizando 04 conjuntos de iniciadores para a amplificação dos genes: Rr190.70p/Rr190.602n (OmpA, 532bp), BG1-21/BG2-20 (OmpB, 650bp), Tz15/Tz16 (17 kDa gene que codifica a proteína, 246bp) e RPCs .877p/RpCS.1258n (gltA, 381bp). Os produtos da PCR foram separados por eletroforese em gel agarose 1 por cento corados com brometo de etídio e visualizados sob luz ultravioleta e, aqueles que apresentaram bandas amplificadas foram purificados utilizando-se o kit comercial QIAquick ® e seqüenciados pelo ABI PRISM®. As seqüências nucleotídicas foram geradas usando Bioedit®, editado em software e comparados os correspondentes homólogos com as sequências disponíveis através GenBank, utilizando Discontiguous Mega Blast (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). Confirmou-se R. rickettsii (GenBank FJ356230) no seqüenciamento de apenas um espécime, adulto de carrapato R. sanguineus. A caracterização molecular de R. rickettsii em exemplar de carrapato R. sanguineus confirma que esta espécie pode ter importante papel na transmissão de R. rickettsii para humanos no território brasileiro.(AU)

Anaplasma marginale PURE ISOLATE OBTAINED IN COLOSTRUM-DEPRIVED NEWBORN CALVES / OBTENÇÃO DE ISOLADO PURO DE Anaplasma marginale EM BEZERROS NEONATOS PRIVADOS DE COLOSTRO

This study was conducted with the objective of obtaining pure autochthonous isolates of Anaplasma marginale from blood samples of bovines that have been raised in the tick-borne disease endemic area of the municipality of Goiânia. The inoculum of A. marginale was prepared from a donor animal, known to be natural carrier of hemoparasite mixed infections, after treatment with a babesicid sterilizing dose of imidocarb dipropionate. A 20 mL blood sample was collected from the donor animal 2 days post-infection and then transferred to a colostrum-deprived and hemoparasite free newborn calf. The receptor animal showed signs of fever and apathy with patent A. marginale parasitemia 30 days after inoculation. Blood sample was then collected and prepared as stabilates to be cryopreserved and to take part of an autochthonous blood parasites isolates library. The isolate purity was assured concomitantly by specific seroconversion tests, by PCR and by finally by the subinoculation of susceptible calves with the cryopreseved stabilates. It was confirmed that the use of colostrum-deprived free newborn calves as susceptible animals may be considered a practical and effective model to obtain pure hemoparasite isolates in endemic areas with additional advantages such as feasibility and low cost. Key words: Anaplasma marginale, isolates, calves, bovine anaplasmosis.

O trabalho foi realizado com o objetivo principal de obter isolados autóctones puros de Anaplasma marginale a partir de amostra de sangue de bovino criado em uma área endêmica para a tristeza parasitária bovina no município de Goiânia. Obteve-se o inóculo para o isolamento de A. marginale de animal doador, portador de infecções naturais mistas, após receber tratamento seletivo com dose babesicida esterelizante de dipropionato de imidocarb. Dois dias após esse tratamento, colheu-se dele uma amostra de sangue de 20 mL do animal doador para inoculação em bezerro neonato privado de colostro e livre de infecções por hemoparasitos. Após trinta dias da inoculação, o receptor apresentou febre, apatia e parasitemia patente por A. marginale. Amostras de sangue foram então colhidas e preparadas na forma de estabilizados para serem criopreservadas e, assim, comporem banco de isolados de hemoparasitos autóctones. Realizou-se a comprovação da pureza do isolado, concomitantemente, pela demonstração de soroconversão específica, pela reação de PCR e, ainda, pela subinoculação da amostra criopreservada em bezerro suscetível. Constatou-se ainda que o uso de bezerros neonatos privados de colostro, como animais suscetíveis, pode ser considerado como modelo prático, eficaz e relativamente barato para o isolamento de hemoparasitos em regiões endêmicas. PALAVRAS-CHAVES: Anaplasma marginale, anaplasmos

Aspectos epidemiológicos da febre maculosa da Mata Atlântica em um foco endêmico no município de Blumenau, Santa Catarina / Epidemiological aspects of Atlantic Rainforest spotted fever in an endemic area of Blumenau, Santa Catarina, Brazil

O gênero Rickettsia compreende bactérias intracelulares obrigatórias patogênicas e não patogênicas. A principal espécie patogênica no novo mundo é Rickettsia rickettsii transmitida por carrapatos do gênero Amblyomma. Além de R. rickettsii, outra riquetsiose, causada por Rickettsia parkeri, apresenta sintomatologia branda e foi recentemente descrita causando doença na América do Sul. No Brasil casos clínicos ocasionados por R. parkeri foram notificados na Bahia e em São Paulo. O presente trabalho foi realizado em uma área endêmica para Febre Maculosa na Vila Itoupava, Município de Blumenau, Santa Catarina. Esta área apresenta características de área peri - urbanas inserida em fragmentos de Mata Atlântica. Amostras de sangue de humanos e de cães foram colhidas para pesquisa de anticorpos anti-riquétsias através da reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Os carrapatos removidos dos cães foram identificados e submetidos às técnicas de hemolinfa e shell vial para o isolamento do agente e reação em cadeia pela polimerase (PCR) e sequenciamento de DNA dos isolados obtidos e amostras diretas para a identificação do agente circulante na região. Das 15 amostras de soro humano, 7 foram positivas (46,67%), apresentando sororeatividade de 26,67%, 26,67%, 20%, 40%, 13,34% e 6,67% para R. rickettsii, R. parkeri, R. rhipicephali, R. amblyommii, R. bellii e R. felis, respectivamente. Das 52 amostras de cães 35 foram positivas (67,31%), apresentando sororeatividade de 50%, 57,70%, 44,23%, 48,08%, 25% e 26,93% para R. rickettsii, R. parkeri, Rickettsia rhipicephali, Rickettsia amblyommii, Rickettsia bellii e Rickettsia felis, respectivamente. Dentre os 53 cães pesquisados 21 apresentavam carrapatos, resultando em uma frequência de infestação de 39,62%. Três espécies de carrapatos foram identificadas dentre os 153 coletados, sendo 95 da espécie Amblyomma ovale, 52 Amblyomma aureolatum e 6 Rhipicephalus sanguineus.

The genus Rickettsia comprises pathogenic and non pathogenic obligate intracellular bacteria. The main pathogenic species in the New World is Rickettsia rickettsii transmitted by ticks of Amblyomma genus. Apart of R. rickettsii, another riquetsiosis caused by Rickettsia parkeri, with mild symptoms, was recently described in South America. In Brazil clinical cases caused by R. parkeri were notified in Bahia and São Paulo. This study was conducted in a spotted fever endemic area in Vila Itoupava, Blumenau, State of Santa Catarina, Brazil. This area has a periurban characteristics inserted in fragments of Atlantic rainforest. Blood samples were collected from humans and dogs to be tested by immunofluorescence assay (IFA) against rickettsial antigens. Ticks removed from dogs were identified and submitted to hemolymph test and shell vial attempting to isolate rickettsiae. Polymerase chain reaction (PCR) and DNA sequencing of rickettsial gene fragments were performed on the rickettsial isolates and also directly on tick samples. Of the 15 human sera 7 were IFA positive (46.68%), with seroreactivity of 26.67%, 26.67%, 20%, 40%, 13.34% and 6.67% for R. rickettsii, R. parkeri, Rickettsia rhipicephali, Rickettsia amblyommii, Rickettsia bellii and Rickettsia felis, respectively. Of the 52 samples collected from dogs 35 were IFA positive (67.31%), with seroreactivity of 50%, 57.70%, 44.23%, 48.08%, 25% and 26.93% for R. rickettsii, R. parkeri, R. rhipicephali, R. amblyommii, R. bellii and R. felis, respectively. Ticks were collected from 21 (39.62%).

Aspectos epidemiológicos da febre maculosa da Mata Atlântica em um foco endêmico no município de Blumenau, Santa Catarina / Epidemiological aspects of Atlantic Rainforest spotted fever in an endemic area of Blumenau, Santa Catarina, Brazil

O gênero Rickettsia compreende bactérias intracelulares obrigatórias patogênicas e não patogênicas. A principal espécie patogênica no novo mundo é Rickettsia rickettsii transmitida por carrapatos do gênero Amblyomma. Além de R. rickettsii, outra riquetsiose, causada por Rickettsia parkeri, apresenta sintomatologia branda e foi recentemente descrita causando doença na América do Sul. No Brasil casos clínicos ocasionados por R. parkeri foram notificados na Bahia e em São Paulo. O presente trabalho foi realizado em uma área endêmica para Febre Maculosa na Vila Itoupava, Município de Blumenau, Santa Catarina. Esta área apresenta características de área peri - urbanas inserida em fragmentos de Mata Atlântica. Amostras de sangue de humanos e de cães foram colhidas para pesquisa de anticorpos anti-riquétsias através da reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Os carrapatos removidos dos cães foram identificados e submetidos às técnicas de hemolinfa e shell vial para o isolamento do agente e reação em cadeia pela polimerase (PCR) e sequenciamento de DNA dos isolados obtidos e amostras diretas para a identificação do agente circulante na região. Das 15 amostras de soro humano, 7 foram positivas (46,67%), apresentando sororeatividade de 26,67%, 26,67%, 20%, 40%, 13,34% e 6,67% para R. rickettsii, R. parkeri, R. rhipicephali, R. amblyommii, R. bellii e R. felis, respectivamente. Das 52 amostras de cães 35 foram positivas (67,31%), apresentando sororeatividade de 50%, 57,70%, 44,23%, 48,08%, 25% e 26,93% para R. rickettsii, R. parkeri, Rickettsia rhipicephali, Rickettsia amblyommii, Rickettsia bellii e Rickettsia felis, respectivamente. Dentre os 53 cães pesquisados 21 apresentavam carrapatos, resultando em uma frequência de infestação de 39,62%. Três espécies de carrapatos foram identificadas dentre os 153 coletados, sendo 95 da espécie Amblyomma ovale, 52 Amblyomma aureolatum e 6 Rhipicephalus sanguineus. (AU)

The genus Rickettsia comprises pathogenic and non pathogenic obligate intracellular bacteria. The main pathogenic species in the New World is Rickettsia rickettsii transmitted by ticks of Amblyomma genus. Apart of R. rickettsii, another riquetsiosis caused by Rickettsia parkeri, with mild symptoms, was recently described in South America. In Brazil clinical cases caused by R. parkeri were notified in Bahia and São Paulo. This study was conducted in a spotted fever endemic area in Vila Itoupava, Blumenau, State of Santa Catarina, Brazil. This area has a periurban characteristics inserted in fragments of Atlantic rainforest. Blood samples were collected from humans and dogs to be tested by immunofluorescence assay (IFA) against rickettsial antigens. Ticks removed from dogs were identified and submitted to hemolymph test and shell vial attempting to isolate rickettsiae. Polymerase chain reaction (PCR) and DNA sequencing of rickettsial gene fragments were performed on the rickettsial isolates and also directly on tick samples. Of the 15 human sera 7 were IFA positive (46.68%), with seroreactivity of 26.67%, 26.67%, 20%, 40%, 13.34% and 6.67% for R. rickettsii, R. parkeri, Rickettsia rhipicephali, Rickettsia amblyommii, Rickettsia bellii and Rickettsia felis, respectively. Of the 52 samples collected from dogs 35 were IFA positive (67.31%), with seroreactivity of 50%, 57.70%, 44.23%, 48.08%, 25% and 26.93% for R. rickettsii, R. parkeri, R. rhipicephali, R. amblyommii, R. bellii and R. felis, respectively. Ticks were collected from 21 (39.62%). (AU)

Situação epidemiológica da brucelose e tuberculose bovinas na região seis do Estado de São Paulo / Epidemiological situation of the bovine brucellosis and bovine tuberculosis in the sixth region of State of São Paulo

O objetivo do estudo foi caracterizar a situação epidemiológica da brucelose e tuberculose bovinas no Estado de São Paulo, o qual foi dividido em sete regiões. O presente estudo diz respeito à região seis, na qual 230 rebanhos com atividade reprodutiva foram aleatoriamente selecionados. Foram coletadas amostras de soro de 10 ou 15 fêmeas bovinas com idade igual ou superior a 24 meses (em rebanhos com <100 vacas e ≥100 vacas, respectivamente), para o diagnóstico da brucelose, totalizando 1.570 animais. Os soros foram submetidos a um protocolo de testes em série, tendo o teste do antígeno acidificado tamponado (rosa bengala) como método de triagem e o teste 2-mercaptoetanol como confirmatório. Para o diagnóstico da tuberculose foi utilizado o teste tuberculínico cervical comparativo em 20 ou 40 bovinos com idade igual ou superior a 24 meses, totalizando 2.319 animais. A escolha dos animais também foi feita de forma aleatória. A prevalência estimada de focos de brucelose foi de 7,82% [4,70%; 12,08%], e de tuberculose foi de 3,91% [1,80%; 7,29%], enquanto a prevalência estimada de animais foi de 2,6% [1,5%; 4,5%] para brucelose e 0,4% [0,2%; 0,8%] para tuberculose, na região. Em cada rebanho foi aplicado um questionário epidemiológico para avaliar o grau de associação de possíveis fatores de risco (odds ratio, OR) com a doença. As variáveis associadas à condição de foco foram, para brucelose, a presença de piquete de parição na propriedade, como fator protetor (OR = 0,35 [0,13; 0,97]) e para tuberculose, propriedades com 23 ou mais fêmeas bovinas com idade igual ou superior a 24 meses (OR = 6,11 [1,58; 23,67])

The objective of the study was to characterize the epidemiological situation of bovine brucellosis and tuberculosis in the State of São Paulo. The State was divided into seven regions and this paper was about the sixth region, were 230 herds with reproductive activity were randomly selected. Ten or 15 cows (age ≥ 24 months), randomly selected, were tested for brucellosis in each herd, through a serial testing procedure: Rose Bengal followed by 2 - Mercaptoethanol test. The cervical comparative tuberculin test was used for tuberculosis diagnosis in 20 or 40 cows (age ≥ 24 months), randomly selected, in each herd. A total of 1.570 animals were tested for brucellosis and 2.319 for tuberculosis. The prevalence of infected herds for brucellosis was 7,82% [4,70%; 12,08%] and 3,91% [1,80%; 7,29%] for tuberculosis, the prevalence of positive animals for brucellosis was 2,6% [1,5%; 4,5%] and 0,4% [0,2%; 0,8%] for tuberculosis. In order to investigate the risk factors for both diseases, an epidemiological questionnaire was applied in the selected farms. The presence of calving areas emerged as protective factor for brucellosis (OR = 0,35 [0,13; 0,97]) and herds with 23 or more cows (age 24 months) was pointed as risk factor for tuberculosis (OR= 6,11 [1,58; 23,67])

Situação epidemiológica da brucelose e tuberculose bovinas na região seis do Estado de São Paulo / Epidemiological situation of the bovine brucellosis and bovine tuberculosis in the sixth region of State of São Paulo

O objetivo do estudo foi caracterizar a situação epidemiológica da brucelose e tuberculose bovinas no Estado de São Paulo, o qual foi dividido em sete regiões. O presente estudo diz respeito à região seis, na qual 230 rebanhos com atividade reprodutiva foram aleatoriamente selecionados. Foram coletadas amostras de soro de 10 ou 15 fêmeas bovinas com idade igual ou superior a 24 meses (em rebanhos com <100 vacas e ≥100 vacas, respectivamente), para o diagnóstico da brucelose, totalizando 1.570 animais. Os soros foram submetidos a um protocolo de testes em série, tendo o teste do antígeno acidificado tamponado (rosa bengala) como método de triagem e o teste 2-mercaptoetanol como confirmatório. Para o diagnóstico da tuberculose foi utilizado o teste tuberculínico cervical comparativo em 20 ou 40 bovinos com idade igual ou superior a 24 meses, totalizando 2.319 animais. A escolha dos animais também foi feita de forma aleatória. A prevalência estimada de focos de brucelose foi de 7,82% [4,70%; 12,08%], e de tuberculose foi de 3,91% [1,80%; 7,29%], enquanto a prevalência estimada de animais foi de 2,6% [1,5%; 4,5%] para brucelose e 0,4% [0,2%; 0,8%] para tuberculose, na região. Em cada rebanho foi aplicado um questionário epidemiológico para avaliar o grau de associação de possíveis fatores de risco (odds ratio, OR) com a doença. As variáveis associadas à condição de foco foram, para brucelose, a presença de piquete de parição na propriedade, como fator protetor (OR = 0,35 [0,13; 0,97]) e para tuberculose, propriedades com 23 ou mais fêmeas bovinas com idade igual ou superior a 24 meses (OR = 6,11 [1,58; 23,67]) (AU)

The objective of the study was to characterize the epidemiological situation of bovine brucellosis and tuberculosis in the State of São Paulo. The State was divided into seven regions and this paper was about the sixth region, were 230 herds with reproductive activity were randomly selected. Ten or 15 cows (age ≥ 24 months), randomly selected, were tested for brucellosis in each herd, through a serial testing procedure: Rose Bengal followed by 2 - Mercaptoethanol test. The cervical comparative tuberculin test was used for tuberculosis diagnosis in 20 or 40 cows (age ≥ 24 months), randomly selected, in each herd. A total of 1.570 animals were tested for brucellosis and 2.319 for tuberculosis. The prevalence of infected herds for brucellosis was 7,82% [4,70%; 12,08%] and 3,91% [1,80%; 7,29%] for tuberculosis, the prevalence of positive animals for brucellosis was 2,6% [1,5%; 4,5%] and 0,4% [0,2%; 0,8%] for tuberculosis. In order to investigate the risk factors for both diseases, an epidemiological questionnaire was applied in the selected farms. The presence of calving areas emerged as protective factor for brucellosis (OR = 0,35 [0,13; 0,97]) and herds with 23 or more cows (age 24 months) was pointed as risk factor for tuberculosis (OR= 6,11 [1,58; 23,67]) (AU)

Anaplasma marginale PURE ISOLATE OBTAINED IN COLOSTRUM-DEPRIVED NEWBORN CALVES / OBTENÇÃO DE ISOLADO PURO DE Anaplasma marginale EM BEZERROS NEONATOS PRIVADOS DE COLOSTRO

This study was conducted with the objective of obtaining pure autochthonous isolates of Anaplasma marginale from blood samples of bovines that have been raised in the tick-borne disease endemic area of the municipality of Goiânia. The inoculum of A. marginale was prepared from a donor animal, known to be natural carrier of hemoparasite mixed infections, after treatment with a babesicid sterilizing dose of imidocarb dipropionate. A 20 mL blood sample was collected from the donor animal 2 days post-infection and then transferred to a colostrum-deprived and hemoparasite free newborn calf. The receptor animal showed signs of fever and apathy with patent A. marginale parasitemia 30 days after inoculation. Blood sample was then collected and prepared as stabilates to be cryopreserved and to take part of an autochthonous blood parasites isolates library. The isolate purity was assured concomitantly by specific seroconversion tests, by PCR and by finally by the subinoculation of susceptible calves with the cryopreseved stabilates. It was confirmed that the use of colostrum-deprived free newborn calves as susceptible animals may be considered a practical and effective model to obtain pure hemoparasite isolates in endemic areas with additional advantages such as feasibility and low cost. Key words: Anaplasma marginale, isolates, calves, bovine anaplasmosis.

O trabalho foi realizado com o objetivo principal de obter isolados autóctones puros de Anaplasma marginale a partir de amostra de sangue de bovino criado em uma área endêmica para a tristeza parasitária bovina no município de Goiânia. Obteve-se o inóculo para o isolamento de A. marginale de animal doador, portador de infecções naturais mistas, após receber tratamento seletivo com dose babesicida esterelizante de dipropionato de imidocarb. Dois dias após esse tratamento, colheu-se dele uma amostra de sangue de 20 mL do animal doador para inoculação em bezerro neonato privado de colostro e livre de infecções por hemoparasitos. Após trinta dias da inoculação, o receptor apresentou febre, apatia e parasitemia patente por A. marginale. Amostras de sangue foram então colhidas e preparadas na forma de estabilizados para serem criopreservadas e, assim, comporem banco de isolados de hemoparasitos autóctones. Realizou-se a comprovação da pureza do isolado, concomitantemente, pela demonstração de soroconversão específica, pela reação de PCR e, ainda, pela subinoculação da amostra criopreservada em bezerro suscetível. Constatou-se ainda que o uso de bezerros neonatos privados de colostro, como animais suscetíveis, pode ser considerado como modelo prático, eficaz e relativamente barato para o isolamento de hemoparasitos em regiões endêmicas. PALAVRAS-CHAVES: Anaplasma marginale, anaplasmos

Effect of milk production system on the enzootic stability to Anaplasma marginale and Babesia bovis in calves in the Campo das Vertentes region of Minas Gerais state, Brazil / Efeito do sistema de produção de leite sobre a estabilidade enzoótica para Anaplasma marginale e Babesia bovis em bezerras na região do Campo das Vertentes de Minas Gerais, Brasil

We conducted a cross-sectional observational study, in order to determine the frequency of anti-A. marginale and anti-B. bovis antibodies in calves from four to 12 months of age from ten farms that producing B type milk and an equal number that produce raw milk refrigerated, located in the Campo das Vertentes region of Minas Gerais state, in the period September 2008 to August 2009. Blood smears were performed, serologic testing by indirect immunofluorescence technique (IFAT), given the packed cell volume, rickettsemia, and the clinical scores of animals infected by A. marginale. In the farms that produce B type milk, the overall average frequency of seropositive calves was 94.47% (166/176) and 89.20% (157/176) for A. marginale and B. bovis, respectively. Already on the farms that produce raw milk refrigerated, the overall average frequency of A. marginale was 92.59% (149/161) and for B. bovis from 86.30% (139/161), and there was no significant difference (p > 0.05) in the frequency of calves infected for both hemoparasitic between the two systems of milk production. Statistically significant (p 0.05) levels of rickettsemia among calves from farms with different types of milk production, where calves from properties that produce B type milk had a higher percentage of erythrocytes infected with A. marginale. In this study there was a predominance of calves with clinical

Foi realizado um estudo observacional do tipo transversal, com o objetivo de determinar a frequência de anticorpos anti-A. marginale e B. bovis em 337 bezerras com idade entre quatro a 12 meses, oriundas de dez propriedades produtoras de leite B e igual número de fazendas de leite cru refrigerado (leite C), na região do Campo das Vertentes de Minas Gerais, no período de setembro de 2008 a agosto de 2009. Foram realizados esfregaços sanguíneos, sorologia por meio da reação de imunofluorescência indireta (RIFI), determinado o volume globular e riquetsemia, e os escores clínicos das bezerras infectadas por A. marginale. Nas propriedades de leite B (LB), a frequência média global de bezerras soropositivas para A. marginale e B. bovis foi de 94,47% (166/176) e 89,20% (157/176), respectivamente. Nas fazendas de leite cru refrigerado (LCR), a frequência média global de bezerras soropositivas para A. marginale foi de 92,59% (149/161) e para B. bovis de 86,30% (139/161), não havendo diferença (p > 0,05) na frequência de animais infectados para ambos hemoparasitos entre os dois sistemas de produção de leite. Entretanto, houve diferença (p 0,05) nos níveis de riquetsemia entre as bezerras provenientes de propriedades com diferentes tipos de produção leiteira, onde os animais de fazendas de LB tiveram uma maior porcentagem de hemácias infectadas por A. marginale. Neste estudo, houv

Effect of milk production system on the enzootic stability to Anaplasma marginale and Babesia bovis in calves in the Campo das Vertentes region of Minas Gerais state, Brazil / Efeito do sistema de produção de leite sobre a estabilidade enzoótica para Anaplasma marginale e Babesia bovis em bezerras na região do Campo das Vertentes de Minas Gerais, Brasil

We conducted a cross-sectional observational study, in order to determine the frequency of anti-A. marginale and anti-B. bovis antibodies in calves from four to 12 months of age from ten farms that producing B type milk and an equal number that produce raw milk refrigerated, located in the Campo das Vertentes region of Minas Gerais state, in the period September 2008 to August 2009. Blood smears were performed, serologic testing by indirect immunofluorescence technique (IFAT), given the packed cell volume, rickettsemia, and the clinical scores of animals infected by A. marginale. In the farms that produce B type milk, the overall average frequency of seropositive calves was 94.47% (166/176) and 89.20% (157/176) for A. marginale and B. bovis, respectively. Already on the farms that produce raw milk refrigerated, the overall average frequency of A. marginale was 92.59% (149/161) and for B. bovis from 86.30% (139/161), and there was no significant difference (p > 0.05) in the frequency of calves infected for both hemoparasitic between the two systems of milk production. Statistically significant (p 0.05) levels of rickettsemia among calves from farms with different types of milk production, where calves from properties that produce B type milk had a higher percentage of erythrocytes infected with A. marginale. In this study there was a predominance of calves with clinical

Foi realizado um estudo observacional do tipo transversal, com o objetivo de determinar a frequência de anticorpos anti-A. marginale e B. bovis em 337 bezerras com idade entre quatro a 12 meses, oriundas de dez propriedades produtoras de leite B e igual número de fazendas de leite cru refrigerado (leite C), na região do Campo das Vertentes de Minas Gerais, no período de setembro de 2008 a agosto de 2009. Foram realizados esfregaços sanguíneos, sorologia por meio da reação de imunofluorescência indireta (RIFI), determinado o volume globular e riquetsemia, e os escores clínicos das bezerras infectadas por A. marginale. Nas propriedades de leite B (LB), a frequência média global de bezerras soropositivas para A. marginale e B. bovis foi de 94,47% (166/176) e 89,20% (157/176), respectivamente. Nas fazendas de leite cru refrigerado (LCR), a frequência média global de bezerras soropositivas para A. marginale foi de 92,59% (149/161) e para B. bovis de 86,30% (139/161), não havendo diferença (p > 0,05) na frequência de animais infectados para ambos hemoparasitos entre os dois sistemas de produção de leite. Entretanto, houve diferença (p 0,05) nos níveis de riquetsemia entre as bezerras provenientes de propriedades com diferentes tipos de produção leiteira, onde os animais de fazendas de LB tiveram uma maior porcentagem de hemácias infectadas por A. marginale. Neste estudo, houv