Metastatic calcification and granulomatous grastroenteritis associated to Pythium insidiosum in a dog

Pythiosis is a granulomatous process of which the oomycete Pythium insidiosum is its etiological agent. It can affect animals and humans alike and its infection occurs when free zoospores in the water get in contact with the target tissues and encyst. The disease often occurs in tropical places with abundance of water and aquatic plants that host the fungus. Dogs infection is predominantly gastric with granuloma formations in the stomach and intestine with progressive signs of vomiting, weight loss and diarrhea. In this case report, we described clinical, surgical, necroscopic and histopathological findings of a one year and two months old, male boxer that presented clinical signs of anorexia and persistent vomiting. It was noticed on ultrasound examination an increase in stomach and intestine thickness. Laparotomy confirmed a mass affecting the gastric wall which, an incision biopsy, showed an abundant fibrous tissue associated with granulomatous reaction that was surrounded by tubuliform structures. Due to clinical complications, euthanasia was performed and in necroscopic examination a markedly increased stomach and duodenum was observed. An; histological examination of this areas it was observed that they contained granulation tissue with giant cells and epithelioids macrophages around necrosed areas associated with lymphocytes infiltrate. Also, it was possible to observe tubuliform structures by the Grocott-Gomori’s Methenamine Silver (GMS) stain, this finding is compatible with the agent Pythium insidiosum. Therefore, this presumptive identification was confirmed by PCR analysis which amplicon had 97.83% similarity with current available genomic sequence of P. insidiosum.

Metastatic calcification and granulomatous grastroenteritis associated to Pythium insidiosum in a dog

Pythiosis is a granulomatous process of which the oomycete Pythium insidiosum is its etiological agent. It can affect animals and humans alike and its infection occurs when free zoospores in the water get in contact with the target tissues and encyst. The disease often occurs in tropical places with abundance of water and aquatic plants that host the fungus. Dogs infection is predominantly gastric with granuloma formations in the stomach and intestine with progressive signs of vomiting, weight loss and diarrhea. In this case report, we described clinical, surgical, necroscopic and histopathological findings of a one year and two months old, male boxer that presented clinical signs of anorexia and persistent vomiting. It was noticed on ultrasound examination an increase in stomach and intestine thickness. Laparotomy confirmed a mass affecting the gastric wall which, an incision biopsy, showed an abundant fibrous tissue associated with granulomatous reaction that was surrounded by tubuliform structures. Due to clinical complications, euthanasia was performed and in necroscopic examination a markedly increased stomach and duodenum was observed. An; histological examination of this areas it was observed that they contained granulation tissue with giant cells and epithelioids macrophages around necrosed areas associated with lymphocytes infiltrate. Also, it was possible to observe tubuliform structures by the Grocott-Gomoris Methenamine Silver (GMS) stain, this finding is compatible with the agent Pythium insidiosum. Therefore, this presumptive identification was confirmed by PCR analysis which amplicon had 97.83% similarity with current available genomic sequence of P. insidiosum.(AU)

Media preferences, micro-morphometric analysis, and cardinal growth temperature determination for Phytophthora infestans sensu lato isolated from different hosts in Colombia / Preferências de mídia, análise micro-morfométricos e determinação da temperature cardeal de crescimento para Phytophthora infestans sensu lato isolada de diferentes hospedeiros na Colômbia

During the last years Phytophthora infestans sensu lato (Mont. De Bary) has caused epidemics in Colombia in Andean fruit crops such as Solanum quitoense and Solanum betaceum. Establishment of new or modified experimental procedures to study this pathogen is a mandatory subject for scientists. Twelve isolates of Phytophthora spp. obtained from six different Solanum hosts in Colombia were used to evaluate the effect of five different solid media for growth and ability to produce sporangia and liberate zoospores. Determination of the best media culture and optimal growth temperature were necessary to perform measurements and correlate the provenance of isolates with phenotypic traits. Modifications were made to use ingredients available in local markets on the following media: lime bean agar (LBA), Tree tomato or tree tomato agar (TA), carrot agar (AZ), Rye A modified agar and 32% non-clarified V8 agar. Cardinal temperature determination was performed at 10, 15, 20, and 25 °C. Morphometric traits were measured once the optimal media culture and temperature were defined. Correlation analysis showed that there is a relationship between the host and isolate's preferences for media culture and optimal growth temperature. In addition, the production of characteristic sporangia, sporangiophore and mycelia was related with the media type used and host from which the isolate was collected. In this work useful information was provided to make studies about the biology and development of isolates gathered from cultivated and wild non-traditional hosts.(AU)

Durante os últimos anos Phytophthora infestans sensu lato causou epidemias na Colômbia em lavouras de frutos andinos, como Solanum quitoense e Solanum betaceum. Estabelecimento de procedimentos experimentais novos ou modificados para estudar este patógeno é um assunto obrigatório para os cientistas. Doze isolados de Phytophthora spp. obtidos de seis diferentes hosts Solanum na Colômbia foram usados para avaliar o efeito de cinco diferentes mídias sólidas para o crescimento e a capacidade de produzir esporângios e libertar zoósporos. Determinação da melhor cultura de mídia e temperatura de crescimento ideal foram necessárias para realizar medições e correlacionar a proveniência de isolados com traços fenotípica. Foram feitas modificações para usar os ingredientes disponíveis nos mercados locais nos seguintes meios: ágar do feijão de cal (LBA), tomate da árvore ou ágar do tomate da árvore (TA), ágar da cenoura (AZ), centeio um ágar modificado e 32% de ágar-V8 não-esclarecido. A determinação da temperatura Cardeal foi realizada em 10, 15, 20 e 25 °C. Traços morfométricos foram medidos uma vez que a cultura de mídia ideal e temperatura foram definidos. Análise de correlação mostrou que há uma relação entre o hospedeiro e isolar as preferências para a cultura de mídia e temperatura de crescimento ideal. Além disso, a produção de esporângios característica, esporangióforo e mycelia foi relacionada com o tipo de mídia utilizado e hospedeiros a partir do qual o isolado foi coletado. Neste trabalho foram fornecidas informações úteis para fazer estudos sobre a biologia e o desenvolvimento de isolados recolhidos de hospedeiros não-tradicionais cultivados e selvagens.(AU)

Enhanced conjugated linoleic acid and biogas production after ruminal fermentation with Piper betle L. supplementation / Aumento na produção de ácido linoléico conjugado e biogás após fermentação ruminal com suplementação com Piper betle L.

Piper betle L. is edible plant richer in polyphenols that might improve feed utilization in rumen diet. The objective of the present study was to investigate the effect of various Piper betle L. powder (PL) doses on in vitro rumen microorganisms, ruminal biogas and fermentation end-product production, and biohydrogenation including lipolysis-isomerization. The completely randomized design used five levels of PL supplementation (0, 25, 50, 75 and 100 mg DM) incubated with 400 mg of a basal substrate of Pangola hay and concentrate (50:50). The matrix compounds (g/kg DM) of 0.27 catechin, 0.11 rutin, 3.48 quercetin, 0.41 apigenin, 0.04 myricetin, 0.27 kaempferol, 0.76 eugenol and 0.22 caryophyllene derived from PL altered the fermentation pattern, with an increase in degradable nutrients and total volatile fatty acids and acetogenesis without shifting pH during fermentation. These values promoted in vitro gas production, with higher carbon dioxide and lower methane production. Although, hydrogen recovery from lipolysis-isomerization in biohydrogenation was limited, PL successfully promoted stearic acid (C18:0) accumulation by changing the biohydrogenation pathway of fatty acids, causing more C18:1 trans-11 rather than C18:2 trans-11, cis-15. Consequently, this resulted in more conjugated linoleic acid (CLA) cis-9, trans-11, CLA trans-10, cis-12 and CLA trans-11, cis-13. Enhanced PL supply increased total bacteria and fungal zoospores due to a reduction in rumen protozoa. In conclusion, our results demonstrated that PL is a feed additive with potential for ruminants, promising improved ruminal fermentation and biohydrogenation, while reducing methane production.(AU)

Piper betle L. é uma planta comestível rica em polifenois que podem melhorar a utilização de alimentos na dieta de ruminantes. O objetivo do presente estudo foi investigar o efeito de várias doses de Piper betle L em . pó (PL) sobre microrganismos do rúmen in vitro, biogás ruminal e produção de produtos finais de fermentação e bio-hidrogenação, incluindo lipólise e isomerização. O delineamento inteiramente casualizado utilizou cinco níveis de suplementação de PL (0, 25, 50, 75 e 100 mg de MS) incubados com 400 mg de um substrato basal do feno de Pangola e concentrado (50:50). Os compostos da matriz (g / kg MS) de 0,27 catequina, 0,11 rutina, 3,48 quercetina, 0,41 apigenina, 0,04 miricetina, 0,27 kaempferol, 0,76 eugenol e 0,22 cariofileno derivado de PL, alteraram o padrão de fermentação com o aumento de nutrientes degradáveis e voláteis totais, ácidos graxos e acetogênese sem alterar o pH durante a fermentação. Esses valores promoveram a produção de gás in vitro, com maior dióxido de carbono e menor produção de metano. Embora a recuperação de hidrogênio da lipólise-isomerização na bio-hidrogenação tenha sido limitada, o PL promoveu com sucesso o acúmulo de ácido esteárico (C18: 0) alterando a via de bio-hidrogenação dos ácidos graxos, causando mais C18: 1 trans-11 do que C18: 2 trans-11, cis -15. Consequentemente, isso resultou em mais ácido linoléico conjugado (CLA) cis-9, trans-11, CLA trans-10, cis-12 e CLA trans-11, cis-13. O suprimento aprimorado de PL aumentou o total de bactérias e zoósporos de fungos devido a uma redução no número de protozoários do rúmen. Em conclusão, nossos resultados demonstram que o PL é um aditivo alimentar com potencial para ruminantes, prometendo fermentação ruminal e bio-hidrogenação aprimoradas, enquanto reduz a produção de metano.(AU)

Segmental enteritis associated with Pythium insidiosum infection in a horse

Background: Pythiosis is an infectious disease caused by the oomycete Pythium insidiosum, with higher occurrence in wetlands and hot climate regions. This microorganism develops its cycle in aquatic plants, and most cases happen because of the contact of animals or people with water containing the motile zoospores (infectious form). Horses are the principal species affected and develop principally cutaneous and subcutaneous lesions, but the gastrointestinal tract is seldom affected. Humans develop various forms of pythiosis, such as a vascular form. The objectives of the current study are to describe an unusual case of intestinal pythiosis, its clinical signs, aspects of pathogenesis, and diagnosis. Case: A 13-year-old Crioula mare, from Santa Maria, RS, Brazil, presented with reduced food and water intake, apathy, restlessness, rolling, nasal reflux, firm abdomen upon palpation, and tachypnea during 2 days. The horses of this farm were fed native pasture and horse feed, and they had access to a nearby pond. Two days following the start of the clinical signs, the horse died and was necropsied on the farm. During necropsy, there was around 400 mL of reddish effusion in the abdominal cavity (modified transudate). A 15 cm segment of jejunum was firm upon palpation and had a severe transmural thickening. The wall of the affected area was up to 3 cm in thickness and firm, with small yellowish and irregular masses that stood out and looked friable, interpreted as kunkers. Microscopically, the yellowish masses (kunkers) were characterized by dense accumulations of intact and degenerate eosinophils (eosinophilic necrosis). Within these kunkers, and also on their periphery, there were multiple negatively stained hyphal profiles. Hyphae were also seen on the wall of small arteries inside the kunkers. These hyphae had nearly parallel walls and were occasionally...

Segmental enteritis associated with Pythium insidiosum infection in a horse

Background: Pythiosis is an infectious disease caused by the oomycete Pythium insidiosum, with higher occurrence in wetlands and hot climate regions. This microorganism develops its cycle in aquatic plants, and most cases happen because of the contact of animals or people with water containing the motile zoospores (infectious form). Horses are the principal species affected and develop principally cutaneous and subcutaneous lesions, but the gastrointestinal tract is seldom affected. Humans develop various forms of pythiosis, such as a vascular form. The objectives of the current study are to describe an unusual case of intestinal pythiosis, its clinical signs, aspects of pathogenesis, and diagnosis. Case: A 13-year-old Crioula mare, from Santa Maria, RS, Brazil, presented with reduced food and water intake, apathy, restlessness, rolling, nasal reflux, firm abdomen upon palpation, and tachypnea during 2 days. The horses of this farm were fed native pasture and horse feed, and they had access to a nearby pond. Two days following the start of the clinical signs, the horse died and was necropsied on the farm. During necropsy, there was around 400 mL of reddish effusion in the abdominal cavity (modified transudate). A 15 cm segment of jejunum was firm upon palpation and had a severe transmural thickening. The wall of the affected area was up to 3 cm in thickness and firm, with small yellowish and irregular masses that stood out and looked friable, interpreted as kunkers. Microscopically, the yellowish masses (kunkers) were characterized by dense accumulations of intact and degenerate eosinophils (eosinophilic necrosis). Within these kunkers, and also on their periphery, there were multiple negatively stained hyphal profiles. Hyphae were also seen on the wall of small arteries inside the kunkers. These hyphae had nearly parallel walls and were occasionally...(AU)

Media preferences, micro-morphometric analysis, and cardinal growth temperature determination for Phytophthora infestans sensu lato isolated from different hosts in Colombia

Abstract During the last years Phytophthora infestans sensu lato (Mont. De Bary) has caused epidemics in Colombia in Andean fruit crops such as Solanum quitoense and Solanum betaceum. Establishment of new or modified experimental procedures to study this pathogen is a mandatory subject for scientists. Twelve isolates of Phytophthora spp. obtained from six different Solanum hosts in Colombia were used to evaluate the effect of five different solid media for growth and ability to produce sporangia and liberate zoospores. Determination of the best media culture and optimal growth temperature were necessary to perform measurements and correlate the provenance of isolates with phenotypic traits. Modifications were made to use ingredients available in local markets on the following media: lime bean agar (LBA), Tree tomato or tree tomato agar (TA), carrot agar (AZ), Rye A modified agar and 32% non-clarified V8 agar. Cardinal temperature determination was performed at 10, 15, 20, and 25 °C. Morphometric traits were measured once the optimal media culture and temperature were defined. Correlation analysis showed that there is a relationship between the host and isolates preferences for media culture and optimal growth temperature. In addition, the production of characteristic sporangia, sporangiophore and mycelia was related with the media type used and host from which the isolate was collected. In this work useful information was provided to make studies about the biology and development of isolates gathered from cultivated and wild non-traditional hosts.

Resumo Durante os últimos anos Phytophthora infestans sensu lato causou epidemias na Colômbia em lavouras de frutos andinos, como Solanum quitoense e Solanum betaceum. Estabelecimento de procedimentos experimentais novos ou modificados para estudar este patógeno é um assunto obrigatório para os cientistas. Doze isolados de Phytophthora spp. obtidos de seis diferentes hosts Solanum na Colômbia foram usados para avaliar o efeito de cinco diferentes mídias sólidas para o crescimento e a capacidade de produzir esporângios e libertar zoósporos. Determinação da melhor cultura de mídia e temperatura de crescimento ideal foram necessárias para realizar medições e correlacionar a proveniência de isolados com traços fenotípica. Foram feitas modificações para usar os ingredientes disponíveis nos mercados locais nos seguintes meios: ágar do feijão de cal (LBA), tomate da árvore ou ágar do tomate da árvore (TA), ágar da cenoura (AZ), centeio um ágar modificado e 32% de ágar-V8 não-esclarecido. A determinação da temperatura Cardeal foi realizada em 10, 15, 20 e 25 °C. Traços morfométricos foram medidos uma vez que a cultura de mídia ideal e temperatura foram definidos. Análise de correlação mostrou que há uma relação entre o hospedeiro e isolar as preferências para a cultura de mídia e temperatura de crescimento ideal. Além disso, a produção de esporângios característica, esporangióforo e mycelia foi relacionada com o tipo de mídia utilizado e hospedeiros a partir do qual o isolado foi coletado. Neste trabalho foram fornecidas informações úteis para fazer estudos sobre a biologia e o desenvolvimento de isolados recolhidos de hospedeiros não-tradicionais cultivados e selvagens.

Isolation of Saprolegnia aenigmatica oomycetes and protocol for experimental infection of pacu (Piaractus mesopotamicus) / Isolamento do oomiceto Saprolegnia aenigmatica e protocolo de infecção experimental em pacu (Piaractus mesopotamicus)

Successful disease treatment depends on molecular studies under indoor conditions with experimental infection protocols that facilitate understanding the disease and the drug`s efficacy. The internal transcribed spacer (ITS) region was sequenced from three isolates, which were identified as Saprolegnia aenigmatica. Subsequently, healthy fish were immunosuppressed with dexamethasone (1.2 mg kg-1) and descaled to the skin using a sharp scalpel. These individuals were isolated in individual aquariums maintained at 22°C. Individuals in one group were subcutaneously inoculated with 9,000 zoospores (DDZ treatment), a second group was exposed to oomycetes in water with three colonized baits (DDB), a third group was maintained in water without zoospores (DD), and a control group (C) consisted of healthy animals. After 48 and 96 hours, two animals from each group were euthanized for fungal reisolation. The fish from groups DD and C did not show clinical signs, and no oomycetes were isolated. The animals from the DDZ and DDB groups showed cotton-wool-like masses on the skin, and S. aenigmatica was re-isolated. Thus, for infection using zoospores or baits parasitized by S. aenigmatica, an immunosuppressor (dexamethasone) and a sharp scalpel can be used effectively to establish an experimental infection in P. mesopotamicus.

O sucesso do tratamento de uma enfermidade depende do estudo de moléculas em condições de laboratório por meio de protocolos de infecção experimental que viabilizam a compreensão da doença e da eficácia dos fármacos. Pela sequência ITS foram identificadas três cepas de Saprolegnia aenigmatica. Dessa forma, pacus sadios foram submetidos à imunossupressão com dexametasona (1,2 mg kg-1), esfoliados com auxílio de bisturi e distribuídos em aquários a 22ºC. Após este procedimento, um grupo de animais foi inoculado com 9.000 zoósporos/peixe subcutâneo (DEZ), a outro foram adicionadas três iscas colonizadas com o oomiceto na água (DEI), um terceiro grupo foi mantido sem contato com o oomiceto (DE) e um quarto grupo, de animais sadios, representaram o controle (C). Após 48 e 96h deste procedimento, foram eutanaziados animais de cada grupo para reisolamento. Os animais do grupo DE e C não apresentaram sinais clínicos e não foi reisolado o oomiceto. Porém, tanto os animais do grupo DEZ quanto como os animais do grupo DEI apresentaram micélio branco na pele e foi reisolado Saprolegnia aenigmatica. Assim, a infecção com zoósporos ou com iscas colonizadas por S. aenigmatica, com o uso de dexametasona e abrasivo epitelial são formas eficazes de infecção experimental em P. mesopotamicus.

Isolation of Saprolegnia aenigmatica oomycetes and protocol for experimental infection of pacu (Piaractus mesopotamicus) / Isolamento do oomiceto Saprolegnia aenigmatica e protocolo de infecção experimental em pacu (Piaractus mesopotamicus)

Successful disease treatment depends on molecular studies under indoor conditions with experimental infection protocols that facilitate understanding the disease and the drug`s efficacy. The internal transcribed spacer (ITS) region was sequenced from three isolates, which were identified as Saprolegnia aenigmatica. Subsequently, healthy fish were immunosuppressed with dexamethasone (1.2 mg kg-1) and descaled to the skin using a sharp scalpel. These individuals were isolated in individual aquariums maintained at 22°C. Individuals in one group were subcutaneously inoculated with 9,000 zoospores (DDZ treatment), a second group was exposed to oomycetes in water with three colonized baits (DDB), a third group was maintained in water without zoospores (DD), and a control group (C) consisted of healthy animals. After 48 and 96 hours, two animals from each group were euthanized for fungal reisolation. The fish from groups DD and C did not show clinical signs, and no oomycetes were isolated. The animals from the DDZ and DDB groups showed cotton-wool-like masses on the skin, and S. aenigmatica was re-isolated. Thus, for infection using zoospores or baits parasitized by S. aenigmatica, an immunosuppressor (dexamethasone) and a sharp scalpel can be used effectively to establish an experimental infection in P. mesopotamicus.(AU)

O sucesso do tratamento de uma enfermidade depende do estudo de moléculas em condições de laboratório por meio de protocolos de infecção experimental que viabilizam a compreensão da doença e da eficácia dos fármacos. Pela sequência ITS foram identificadas três cepas de Saprolegnia aenigmatica. Dessa forma, pacus sadios foram submetidos à imunossupressão com dexametasona (1,2 mg kg-1), esfoliados com auxílio de bisturi e distribuídos em aquários a 22ºC. Após este procedimento, um grupo de animais foi inoculado com 9.000 zoósporos/peixe subcutâneo (DEZ), a outro foram adicionadas três iscas colonizadas com o oomiceto na água (DEI), um terceiro grupo foi mantido sem contato com o oomiceto (DE) e um quarto grupo, de animais sadios, representaram o controle (C). Após 48 e 96h deste procedimento, foram eutanaziados animais de cada grupo para reisolamento. Os animais do grupo DE e C não apresentaram sinais clínicos e não foi reisolado o oomiceto. Porém, tanto os animais do grupo DEZ quanto como os animais do grupo DEI apresentaram micélio branco na pele e foi reisolado Saprolegnia aenigmatica. Assim, a infecção com zoósporos ou com iscas colonizadas por S. aenigmatica, com o uso de dexametasona e abrasivo epitelial são formas eficazes de infecção experimental em P. mesopotamicus.(AU)

Media preferences, micro-morphometric analysis, and cardinal growth temperature determination for Phytophthora infestans sensu lato isolated from different hosts in Colombia

Abstract During the last years Phytophthora infestans sensu lato (Mont. De Bary) has caused epidemics in Colombia in Andean fruit crops such as Solanum quitoense and Solanum betaceum. Establishment of new or modified experimental procedures to study this pathogen is a mandatory subject for scientists. Twelve isolates of Phytophthora spp. obtained from six different Solanum hosts in Colombia were used to evaluate the effect of five different solid media for growth and ability to produce sporangia and liberate zoospores. Determination of the best media culture and optimal growth temperature were necessary to perform measurements and correlate the provenance of isolates with phenotypic traits. Modifications were made to use ingredients available in local markets on the following media: lime bean agar (LBA), Tree tomato or tree tomato agar (TA), carrot agar (AZ), Rye A modified agar and 32% non-clarified V8 agar. Cardinal temperature determination was performed at 10, 15, 20, and 25 °C. Morphometric traits were measured once the optimal media culture and temperature were defined. Correlation analysis showed that there is a relationship between the host and isolates preferences for media culture and optimal growth temperature. In addition, the production of characteristic sporangia, sporangiophore and mycelia was related with the media type used and host from which the isolate was collected. In this work useful information was provided to make studies about the biology and development of isolates gathered from cultivated and wild non-traditional hosts.

Resumo Durante os últimos anos Phytophthora infestans sensu lato causou epidemias na Colômbia em lavouras de frutos andinos, como Solanum quitoense e Solanum betaceum. Estabelecimento de procedimentos experimentais novos ou modificados para estudar este patógeno é um assunto obrigatório para os cientistas. Doze isolados de Phytophthora spp. obtidos de seis diferentes hosts Solanum na Colômbia foram usados para avaliar o efeito de cinco diferentes mídias sólidas para o crescimento e a capacidade de produzir esporângios e libertar zoósporos. Determinação da melhor cultura de mídia e temperatura de crescimento ideal foram necessárias para realizar medições e correlacionar a proveniência de isolados com traços fenotípica. Foram feitas modificações para usar os ingredientes disponíveis nos mercados locais nos seguintes meios: ágar do feijão de cal (LBA), tomate da árvore ou ágar do tomate da árvore (TA), ágar da cenoura (AZ), centeio um ágar modificado e 32% de ágar-V8 não-esclarecido. A determinação da temperatura Cardeal foi realizada em 10, 15, 20 e 25 °C. Traços morfométricos foram medidos uma vez que a cultura de mídia ideal e temperatura foram definidos. Análise de correlação mostrou que há uma relação entre o hospedeiro e isolar as preferências para a cultura de mídia e temperatura de crescimento ideal. Além disso, a produção de esporângios característica, esporangióforo e mycelia foi relacionada com o tipo de mídia utilizado e hospedeiros a partir do qual o isolado foi coletado. Neste trabalho foram fornecidas informações úteis para fazer estudos sobre a biologia e o desenvolvimento de isolados recolhidos de hospedeiros não-tradicionais cultivados e selvagens.

Isolamento e caracterização de espécies de Pythium de ambientes aquáticos no Estado do Rio Grande do Sul e avaliação da patogenicidade em modelo experimental / Isolation and characterization of Pythium species from swampy areas in the Rio Grande do Sul, Brazil, and evaluation of pathogenicity in an experimental model

Foram coletadas 186 amostras de água de ambientes pantanosos em 13 municípios das regiões Sul, Central e Oeste do Rio Grande do Sul, Brasil, com o objetivo de isolar e caracterizar espécies de Pythium e avaliar a sua patogenicidade empregando coelhos como modelo experimental. Em 11,8% (n=22) das águas coletadas foram isoladas diferentes espécies de Pythium incluindo: P. insidiosum (n=1), P. catenulatum (n=3), P. pachycaule voucher (n=1), P. rhizo-oryzae (n=3), P. torulosum (n=4) e Pythium spp. (n=10). Zoósporos desses micro-organismos foram produzidos in vitro e inoculados por via subcutânea em coelhos, os quais foram avaliados durante 45 dias. Dentre os oomicetos testados, apenas P. insidiosum evidenciou patogenicidade, causando pitiose no modelo experimental, evidenciando que, em nossas condições, apenas esta espécie de Pythium é patógena para mamíferos.(AU)

One hundred and eighty-six water samples from swampy areas were collected in 13 municipalities of South, Central and West regions of Rio Grande do Sul, Brazil, in order to isolate and characterize Pythium species and assess their pathogenicity using rabbits as experimental model. Different Pythium species were isolated from 22 (11.8%) water samples, including P. insidiosum (n=1), P. catenulatum (n=3), P. pachycaule voucher (n=1), P. rhizo-oryzae (n=3), P. torulosum (n=4) e Pythium spp. (n=10). Zoospores of these microorganisms were produced in vitro and inoculated subcutaneously into rabbits, which were assessed over 45 days. Only P. insidiosum showed pathogenicity, causing pythiosis in the experimental model.(AU)

Isolamento e caracterização de espécies de Pythium de ambientes aquáticos no Estado do Rio Grande do Sul e avaliação da patogenicidade em modelo experimental / Isolation and characterization of Pythium species from swampy areas in the Rio Grande do Sul, Brazil, and evaluation of pathogenicity in an experimental model

Foram coletadas 186 amostras de água de ambientes pantanosos em 13 municípios das regiões Sul, Central e Oeste do Rio Grande do Sul, Brasil, com o objetivo de isolar e caracterizar espécies de Pythium e avaliar a sua patogenicidade empregando coelhos como modelo experimental. Em 11,8% (n=22) das águas coletadas foram isoladas diferentes espécies de Pythium incluindo: P. insidiosum (n=1), P. catenulatum (n=3), P. pachycaule voucher (n=1), P. rhizo-oryzae (n=3), P. torulosum (n=4) e Pythium spp. (n=10). Zoósporos desses micro-organismos foram produzidos in vitro e inoculados por via subcutânea em coelhos, os quais foram avaliados durante 45 dias. Dentre os oomicetos testados, apenas P. insidiosum evidenciou patogenicidade, causando pitiose no modelo experimental, evidenciando que, em nossas condições, apenas esta espécie de Pythium é patógena para mamíferos.(AU)

One hundred and eighty-six water samples from swampy areas were collected in 13 municipalities of South, Central and West regions of Rio Grande do Sul, Brazil, in order to isolate and characterize Pythium species and assess their pathogenicity using rabbits as experimental model. Different Pythium species were isolated from 22 (11.8%) water samples, including P. insidiosum (n=1), P. catenulatum (n=3), P. pachycaule voucher (n=1), P. rhizo-oryzae (n=3), P. torulosum (n=4) e Pythium spp. (n=10). Zoospores of these microorganisms were produced in vitro and inoculated subcutaneously into rabbits, which were assessed over 45 days. Only P. insidiosum showed pathogenicity, causing pythiosis in the experimental model.(AU)

TOXICIDADE DOS EXTRATOS VEGETAIS DE JATOBÁ E CHAPÉU-DE-SOL AO OOMICETO PATÓGENO Saprolegnia ferax

A utilização de quimioterápicos auxilia no controle e profilaxia de patógenos na aquicultura, mas o uso e o descarte incorretos podem apresentar perigo aos usuários e ao meio ambiente. Compostos secundários de plantas vêm despertando o interesse devido apresentarem menor risco de seleção artificial de cepas de resistência e diminuírem a exposição a agentes químicos. O presente estudo verificou a ação oomiceticida dos extratos aquosos das folhas de Terminalia sp. (EAT) e, da casca do caule de Jatobá (EAJ), e dos extratos hidroalcoólicos da casca do caule (EPCA) e do exocarpo de jatobá (EPEJ) no desenvolvimento micelial e viabilidade dos zoósporos do oomiceto Saprolegnia ferax. O cobre foi usado como substância de referência junto aos ensaios realizados em meio Maltose-Peptona (MP5) com inoculo de 0,5 cm para o micélio, enquanto que nos ensaios de viabilidade foram inoculados 2000 zoósporos ao centro das placas com meio de cultura. A avaliação do crescimento das colônias durou 72h, em triplicata. Foram realizadas análises quantitativas de fenóis para os extratos, e para análise estatística utilizou-se o programa CIp para determinar a Concentração Inibitória de 50% do crescimento micelial e viabilidade dos zoósporos, e análise de variância seguida do teste de Dunnet para a determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) de 100% para ambas as estruturas. A menor concentração de fenóis, presentes nos extratos, responsáveis pela inibição de 100% (CIM100; 72h) do crescimento micelial e da viabilidade dos zoósporos foram iguais a 0,745mg.mL-1, para o EPEJ, 1,78mg.mL-1 no EPCA e 3,029mg.mL-1 para o EAJ em ambas as estruturas testadas. No EAT a CIM100 ao fenol foi de 1,651mg.mL-1 para o micélio e 0,826mg.mL-1 para zoósporo em 72h. E concentrações de fenol inferiores a 0,052mg.mL-1 no EAT e 0,006mg.mL-1 para o EAJ apresentaram maior crescimento que as culturas do grupo controle em 24h.

The use of chemotherapy aid in the control and prophylaxis of pathogens in aquaculture, but the incorrect use and disposal may present a danger to users and the environment. Secondary plant compounds have been arousing interest because they present a lower risk of artificial selection of resistance strains and decrease exposure to chemical agents. The present study verified the oomyceticidal action of the aqueous extracts of the leaves of Terminalia sp. (EAT) and, from the bark of the Jatobá tree (EAJ), and from the hydroalcolic extracts of the tree bark (EPCA) and from the Jatobá exocarp (EPEJ) in the mycelial development and viability of the zoospores of the oomycete Saprolegnia ferax. Copper was used as a reference substance in the tests, which proceeded in a Maltose-Peptone (MP5) medium with a 0.5 cm inoculum for the mycelium, while the viability tests were inoculated with 2000 zoospores in the center of the plates with culture. Colony growth assessment lasted 72 hours, in triplicate. Quantitative analyzes of phenols were performed for the extracts, and for statistical analysis, the CIp program was used to identify the inhibitory concentration of 50% of the mycelial growth and viability of the zoospores, and the minimum inhibitory concentration (MIC) of 100% for both structures. S. ferax presented CIM100 in 72h at phenol concentrations of 0.745mg.mL-1, for EPEJ, 1.78mg.mL-1 in EPCA and 3.029mg.mL-1 for EAJ in both tested structures. In the EAT, the CIM100 for phenol was 1.651mg.mL-1 for the mycelium and 0.826mg.mL-1 for the zoospore in 72h. The phenol concentrations less than 0.052mg.mL-1 in the EAT and 0.006mg.mL-1 for the EAJ showed greater growth the cultures of the control group in 24 hours.

Isolation and fermentative activity of rumen anaerobic fungi in dairy cows / Isolamento e atividade fermentativa de fungos anaeróbios do rúmen de vacas leiteiras

The possibility of biotechnological application of anaerobic fungi and their biomass-degrading enzymes has been a growing area of research and development over the past decade. In this context, the occurrence and isolation of rumen fungi were evaluated in three Holstein-Gir dairy cows grazing Urochloa spp., in addition to the fermentation capacity of theses isolates in media containing different carbohydrates. Motile zoospores were found in all of the rumen samples. Twelve fungal strains were recovered and were capable of degrading different carbohydrates and lignocellulosic components, suggesting that these strains are able to produce various degradative enzymes when grown on glucose, xylose, cellobiose, fructose, and cellulose. Results pointed out the first insight into the isolation of rumen anaerobic fungi in dairy cattle in Brazil and suggested that further studies are needed to show the potential of some species for commercial application, especially in tropical ruminants.(AU)

A possibilidade de aplicação biotecnológica dos fungos anaeróbios, e suas enzimas de degradação de biomassa, tem sido uma área cada vez maior de pesquisa e desenvolvimento na última década. Neste contexto, a ocorrência e o isolamento de fungos ruminais foram avaliados em três vacas Holandês x Gir sob pastejo de Urochloa spp., além da capacidade de fermentação dos isolados em meios de cultura contendo diferentes fontes de carboidratos. Zoósporos móveis foram encontrados em todos os conteúdos ruminais analisadas. Doze isolados foram recuperados e todos foram capazes de degradar diferentes carboidratos e componentes lignocelulósicos, sugerindo que estes isolados são capazes de produzir várias enzimas degradativas. Estes resultados revelaram as primeiras descobertas sobre o isolamento de fungos anaeróbios ruminais em gado leiteiro no Brasil e sugere que estudos adicionais são necessários para evidenciar o potencial de algumas espécies para a aplicação comercial, principalmente em ruminantes tropicais.(AU)

Isolation and fermentative activity of rumen anaerobic fungi in dairy cows / Isolamento e atividade fermentativa de fungos anaeróbios do rúmen de vacas leiteiras

The possibility of biotechnological application of anaerobic fungi and their biomass-degrading enzymes has been a growing area of research and development over the past decade. In this context, the occurrence and isolation of rumen fungi were evaluated in three Holstein-Gir dairy cows grazing Urochloa spp., in addition to the fermentation capacity of theses isolates in media containing different carbohydrates. Motile zoospores were found in all of the rumen samples. Twelve fungal strains were recovered and were capable of degrading different carbohydrates and lignocellulosic components, suggesting that these strains are able to produce various degradative enzymes when grown on glucose, xylose, cellobiose, fructose, and cellulose. Results pointed out the first insight into the isolation of rumen anaerobic fungi in dairy cattle in Brazil and suggested that further studies are needed to show the potential of some species for commercial application, especially in tropical ruminants.

A possibilidade de aplicação biotecnológica dos fungos anaeróbios, e suas enzimas de degradação de biomassa, tem sido uma área cada vez maior de pesquisa e desenvolvimento na última década. Neste contexto, a ocorrência e o isolamento de fungos ruminais foram avaliados em três vacas Holandês x Gir sob pastejo de Urochloa spp., além da capacidade de fermentação dos isolados em meios de cultura contendo diferentes fontes de carboidratos. Zoósporos móveis foram encontrados em todos os conteúdos ruminais analisadas. Doze isolados foram recuperados e todos foram capazes de degradar diferentes carboidratos e componentes lignocelulósicos, sugerindo que estes isolados são capazes de produzir várias enzimas degradativas. Estes resultados revelaram as primeiras descobertas sobre o isolamento de fungos anaeróbios ruminais em gado leiteiro no Brasil e sugere que estudos adicionais são necessários para evidenciar o potencial de algumas espécies para a aplicação comercial, principalmente em ruminantes tropicais.

Isolamento, caracterização e avaliação da patogenicidade de Pythium spp. de ecossistemas de água doce no estado do Rio Grande do Sul e influência da temperatura na zoosporogênese de Pythium insidiosum

Pythium insidiosum é o agente etiológico da pitiose, uma doença grave e emergente que acomete os mamíferos. Seu ciclo biológico ocorre em ambientes aquáticos dando origem a zoósporos infectantes. O presente estudo objetivou isolar e caracterizar espécies de Pythium que habitam ambientes aquáticos no Rio Grande do Sul, Brasil; avaliar a patogenicidade das espécies isoladas empregando coelhos como modelo experimental; bem como verificar a influência de diferentes temperaturas sobre a zoosporogênese in vitro de P. insidiosum. Foram coletadas 186 amostras de água de ambientes aquáticos em 13 municípios das regiões Sul, Central e Oeste do Rio Grande do Sul, com o objetivo de isolar e caracterizar espécies de Pythium e avaliar a sua patogenicidade empregando coelhos como modelo experimental. Em 11,8% (n=22) das águas coletadas foram isoladas diferentes espécies de Pythium incluindo: P. insidiosum (n=01), P. catenulatum (n=03), P. pachycaule voucher (n=01), P. rhizo-oryzae (n=03), P. torulosum (n=04) e Pythium spp. (n=10). Zoósporos desses micro-organismos foram produzidos in vitro e inoculados por via subcutânea em coelhos, os quais foram avaliados durante 45 dias. Dentre os oomicetos testados, apenas P. insidiosum evidenciou patogenicidade, causando pitiose no modelo experimental, evidenciando que, em nossas condições, apenas esta espécie de Pythium é patógena para mamíferos. Para verificar a influência de diferentes temperaturas sobre a zoosporogênese in vitro de P. insidiosum, isolados brasileiros de P. insidiosum (n=26) foram submetidos à zoosporogênese e incubados nas temperaturas de 5,15, 20 e 37. Fragmentos de grama foram avaliados em microscopia ótica nas primeiras 4, 8 e 24 horas de incubação (1a etapa do experimento). Após, todos os isolados foram incubados a 37 (grupo controle) e avaliados nos mesmos períodos (2a etapa do experimento). Avaliou-se o desenvolvimento de hifas, presença de vesículas, zoosporângios e zoósporos. A 5 observou-se apenas presença de hifas curtas nas bordas dos fragmentos de grama. Em 15, as hifas apresentavam-se em desenvolvimento ou longas e dois isolados produziram zoósporos. Quando os isolados foram submetidos a 20/4horas verificou-se a presença de hifas longas e miceliais, vesículas, zoosporângios e zoósporos, o que se manteve nos demais períodos avaliados. Os isolados que anteriormente estavam a 5 e 15, e posteriormente foram transferidos para 37, evidenciaram hifas em desenvolvimento e longas com presença de vesículas, zoosporângios e zoósporos em 4 horas de incubação, sendo essas características mantidas nos demais períodos avaliados. Os isolados mantidos a 37 na 1a etapa do experimento apresentaram zoosporogênese evidente nas primeiras 4 horas de avaliação. Evidencia-se que em temperaturas baixas (5 e 15) a viabilidade de P. insidiosum é mantida. No entanto, quando este oomiceto é submetido a temperaturas mais elevadas (20 e 37) a zoosporogênese com a liberação de zoósporos é induzida em um período curto de tempo.

Pythium insidiosum is the agent etiological da pythiosis, a serious and emerging disease affecting mammals. Its biological cycle occurs in aquatic environments giving rise to infectious zoospores. The present study aimed to isolate and characterize Pythium species which in habit aquatic environments in Rio Grande do Sul State, Brazil; evaluate isolated the species pathogenicity by using rabbits as an experimental model; as well as verify the influence of different temperatures on in vitro P. Insidiosum zoosporogenisis.A total of 186 water samples from aquatic environments were collected from 13 municipalities in Southern, Central and Western areas of Rio Grande do Sul State for the purpose of isolating and characterizing Pythium species and evaluating their pathogenicity using rabbits as an experimental model. Different Pythium species were isolated In 11.8% (n = 22) of the collected samples, including P. insidiosum (n = 01), P. catenulatum (n = 03), P. pachycaule voucher (n = 01), P. Rhizo-oryzae (n = 03), P. torulosum (n = 04) and Pythium spp. (n = 10). Zoospores of these microorganisms were produced in vitro and inoculated subcutaneously into rabbits, which were evaluated for 45 days. Of all oomycetes tested, only P. insidiosum showed pathogenicity, causing pythiosis in the experimental model, thus evidencing that, under the analyzed conditions, only this Phythium species is pathogenic to mammals.In order to verify the influence of different temperatures on in vitro P. Insidiosum zoosporogenesis, Brazilian P. insidiosum isolates (n = 26) were submitted to zoosporogenesis and incubated at 5, 15, 20 and 37. Grass fragments were evaluated under optical microscopy at the first 4, 8 and 24 hours of incubation (1st stage of the experiment). Afterwards, all isolates were incubated at 37 and evaluated at the same periods of time (2nd stage of the experiment). The development of hyphae, and the presence of vesicles, zoosporangia and zoospores were evaluated. At 5 only the presence of short hyphae at the edges of grass fragments was observed. In 15, hyphae were developing or elongated, and two isolates produced zoospores. When the isolates were submitted to 20/4 hours, the presence of long and mycelial hyphae, vesicles, zoosporangia and zoospores was observed, which was also the case at the remaining periods of time evaluated. Isolates which had been previously at 5 and 15 and later transferred to 37 evidenced developing and long hyphae with presence of vesicles, zoosporangia and zoospores within 4 hours of incubation; these characteristics were maintained at the other evaluated times.Isolates maintained at 37 in the 1 st stage of the experiment showed evident zoosporogenesis in the first 4 hours of evaluation. It was evidenced that at low temperatures (5 and 15), P. insidiosum viability was maintained. However, when this oomycete was subjected to higher temperatures (20 and 37) zoosporogenes is with the release of zoospores was induced in a short period of time.

Dermatofilose em ovinos da raça Santa Inês no Distrito Federal / Dermatophylosis in Santa Inês sheep from Distrito Federal

Relataram-se quatro casos de dermatofilose em ovinos da raça Santa Inês, no período de um ano. Microscopicamente observaram-se filamentos na forma de "trilho de bonde" e zoósporos nos quatro casos. A tentativa do isolamento do microrganismo foi realizada por meio do método de Haalstra e em apenas um caso obteve-se sucesso, observando-se colônias de aparência lisa, formato circular, cor amarelada e hemolítica em ágar sangue. O exame direto com coloração de Gram mostrou-se um método bastante eficiente na confirmação da presença do microrganismo afetando a epiderme em razão da morfologia típica do agente.(AU)

Four cases of dermatophylosis were reported in Santa Inês sheep in a study period of one year. Microscopically, septate filaments and coccoid forms zoospores were observed. Attempts to isolate the microorganisms were accomplished using Haastra's method and it was successful in only one case. Dermatophilus congolensis samples have grown on blood agar, colonies where hemolytic, small, round and pigmentation vary from yellow to orange. The gram staining method was efficient to confirm the presence of the microorganism affecting the epidermis due to typical morphology of the agent.(AU)

SUSCEPTIBILIDADE DE Pythium insidiosum IN VITRO E IN VIVO FRENTE À ASSOCIAÇÃO DE FÁRMACOS ANTIBACTERIANOS E ANTIFÚNGICOS

Pythium insidiosum é o oomiceto causador da pitiose uma doença de caráter crônico de difícil tratamento que acomete humanos e animais. Este microrganismo aquático semelhante aos fungos possui características distintas de parede celular e ausência de ergosterol na membrana celular, particularidades estas que dificultam o tratamento da doença com antifúngicos tradicionais. O presente estudo teve por objetivos: avaliar as interações sinérgicas das associações de antibacterianos, antifúngicos e compostos fenólicos sobre P. insidiosum; comparar, in vivo e in vitro, a monoterapia e combinação de azitromicina, claritromicina, minociclina e tigeciclina em coelhos com pitiose experimental. Para os testes in vitro de microdiluição em caldo foram utilizados 30 isolados de P. insidiosum, conforme o protocolo de M38-A2 do CLSI. Para os testes in vivo, os animais foram distribuídos nos grupos: Infectados com zoósporos de P. insidiosum, tratados com placebo (Controle positivo, n=6) e não infectados tratados com placebo (controle negativo, n=5), tratados com azitromicina; claritromicina; minociclina; e tigeciclina (n=6); e com as combinações minociclina com azitromicina; minociclina com claritromicina; minociclina com tigeciclina (n=6). Amostras de sangue, medidas da área da lesão, e tecidos foram coletados para análise antes, durante e ao término do tratamento. Índices mais elevados de sinergismo foram obtidos com a associação de claritromicina com micafungina (73,33%); minociclina com claritromicina ou azitromicina (93,33%); itraconazol com os compostos fenólicos timol ou carvacrol (96,60%) e minocilina com claritromicina, azitromicina (93,33%) ou tigeciclina (86,67%). Interações antagônicas das associações de timol ou carvacrol com antibacterianos ou antifúngicos, e antibiótico com antibiótico, não foram observadas. Porém nas associações de antibacterianos com antifúngicos os percentuais mais altos foram vistos em claritromicina ou azitromicina com itraconazol (6,67%) e minociclina com caspofungina (6,67%). A completa regressão da pitiose foi comprovada pela queda nos níveis de anticorpos, regressão das lesões e negatividade nos testes de detecção de hifas em tecido: PCR, histopatologia e isolamento. Nos tratamentos in vivo todos os grupos diferiram do controle positivo. Cura clínica e completa regressão da lesão foram obtidos nos tratamentos com azitromicina (n=56), minociclina (n=16), azitromicina com minociclina (n=46), minociclina com claritromicicna (n=16) e minociclina com tigeciclina (n=16). A comparação in vitro das associações de minociclina com azitromicina ou claritromicina (93,33%), e tigeciclina (86,67) revelou percentuais de sinergismo elevados, no entanto a correlação destes dados com o in vivo demonstra o cuidado na escolha da associação, pois claritromicina (93,33%) e tigeciclina (86,67%) mesmo apresentando altos índices de sinergismo com minociclina nos testes in vivo tiveram um baixo percentual de regressão das lesões (16,66%). Além disso, os tecidos coletados submetidos à análise molecular e histopatológica revelaram que a tigeciclina mesmo em associação com minociclina não foi capaz de conter a metástase da pitiose para os pulmões. A azitromicina em monoterapia demonstrou ser a melhor terapia para a regressão completa das lesões causadas pela pitiose.

Pythium insidiosum is the cause of the oomycete pythiosis one chronic nature of the disease is difficult to treat that affects humans and animals. This water organism similar to fungi has distinct characteristics of cell wall and absence of ergosterol in the cell membrane, these peculiarities that make it difficult to treat the disease with traditional antifungal agents. This study aimed to: assess the synergistic interactions of antibiotics associations, antifungal and phenolic compounds on P. insidiosum; comparison, in vivo and in vitro, monotherapy and combination of azithromycin, clarithromycin, tigecycline with minocycline in rabbits with pythiosis experimental. For testing in vitro broth microdilution were used 30 strains of P. insidiosum as the M38-A2 CLSI protocol. For tests in vivo, the animals were divided into groups: Infected with zoospores of P. insidiosum treated with placebo (positive control, n = 6) and uninfected treated with placebo (negative control, n = 5) treated with azithromycin; clarithromycin; minocycline and tigecycline (n = 6); and minocycline + azithromycin combinations; minocycline and clarithromycin; minocycline and tigecycline (n = 6). Blood samples, the lesion area of measures, and tissues were collected for analysis before, during and after treatment. Higher rates of synergism were obtained with the clarithromycin association with micafungin (73.33%); minocycline with clarithromycin or azithromycin (93.33%); itraconazole with phenolic compounds thymol or carvacrol (96.60%) and minocycline with clarithromycin or azithromycin (93.33%) and tigecycline (86.67%). Antagonistic interactions of thymol or carvacrol associations with antibiotics or antifungal and antibiotic and antibiotic, were observed. However, the associations with antifungal antibiotics the highest percentages were seen in clarithromycin or azithromycin with itraconazole (6.67%) and minocycline with caspofungin (6.67%). The regression of lesions caused by pythiosis was confirmed by the fall in antibodies, regression of lesions and negativity in hyphae detection tests in tissue: PCR, histopathology and isolation. In treatments in vivo all groups differed from positive control. Clinical cure and complete regression of the lesion were obtained in the treatments with azithromycin (n = 5/6), minocycline (n = 1/6), azithromycin or minocycline (n = 4/6), clarithromycin and minocycline (n = 1/6) and tigecycline with minocycline (n = 1/6). In vitro comparisons of minocycline associations with azithromycin or clarithromycin (93.33%), and tigecycline (86.67) showed high percentages of synergism, however the correlation of these data with in vivo demonstrates the care in the association of choice, for clarithromycin (93.33%) and TIG (86.67%) even with high rates of synergism with minocycline in vivo tests had a low percentage of cure (16.66%). In addition, the collected tissues subjected to molecular and histological analysis revealed that even in tigecycline and tigecycline with minocycline association was not able to contain the disease metastasis to the lungs.The azithromycin monotherapy was shown to be the best therapy to the regression of lesions caused by pythiosis.

Zoosporogênese in vitro entre isolados do oomiceto Pythium insidiosum / In vitro zoosporogenesis among oomycetes Pythium insidiosum isolates

Pythium insidiosum é um oomiceto aquático, responsável pela etiologia da pitiose, uma enfermidade crônica, observada freqüentemente em eqüinos. A produção de zoósporos móveis por este microrganismo se constitui no fator determinante da ocorrência da enfermidade. Este estudo avaliou a zoosporogênese e quantificou a produção de zoósporos de 32 amostras de Pythium insidiosum isoladas de eqüinos naturalmente infectados. Pythium insidiosum foi cultivado em meio Corn Meal Agar acrescido de fragmentos de grama, durante 5 dias, a 37ºC. Posteriormente, os fragmentos de grama parasitados foram incubados em Meio de Indução a 37ºC, por 24 horas. Observou-se que 16 amostras (50 por cento) produziram 20.000 zoósporos mL-1, 12 isolados (37,5 por cento) produziram acima de 20.000 zoósporos mL-1, enquanto quatro amostras (12,5 por cento) produziram menos de 20.000 zoósporos mL-1. O período de maior produção de zoósporos foi entre 6 e 8 horas de incubação. O protocolo utilizado na indução da zoosporogênese mostrou-se eficiente e representa uma importante ferramenta, tanto para a identificação do Pythium insidiosum, como para a obtenção de zoósporos em quantidades suficientes para a inoculação em animais experimentais e aplicação no desenvolvimento de testes de suscetibilidade.(AU)

Pythium insidiosum is an aquatic oomycete and the etiology of a chronic disease called pythiosis, commonly found in the skin of horses. The production of mobile zoospores by this microorganism is the determinant factor of this disease. This study evaluated the zoosporogenesis and quantification of zoospores in 32 samples of Pythium insidiosum isolated from horses with pythiosis. The assay used culture of the Pythium insidiosum in Corn Meal Agar plus grass blades for 5 days at 37ºC. The grass blades were incubated in Induction Medium at 37ºC for 24 hours. The findings showed 16 samples (50 percent) yielded 20,000 zoospores mL-1, 12 (37.5 percent) samples yielded over 20,000 zoospores mL-1 and 4 samples (12.5 percent) yielded less than 20,000 zoospores mL-1. The zoospores production was higher between 6 and 8 hours of incubation. The protocol used in the zoosporogenesis induction was efficient and represents an important tool for Pythium insidiosum identification and the attainment of zoospores in adequate amounts for inoculation in experimental animals and application in the development of susceptibility tests.(AU)