Effect of adding anethole to the cryopreservation medium (powdered coconut water) on morphology, kinetics, and oxidative stress of buck sperm / Efeito da adição de anethole ao meio de criopreserção (água de coco em pó) na morfologia, cinética e estresse oxidativo do sêmen de bode

ABSTRACT

The quality of post-thawing goat sperm is critical to the success of artificial insemination protocols and may be influenced by extenders, cryoprotectants, and antioxidant substances. Therefore, the objective of this study was to evaluate the effects of the antioxidant anethole on goat sperm diluted in preservation medium based on powdered coconut water (ACP-101c) and frozen. For that, each ejaculate was submitted to the following treatments ACP-101c (control); control plus supplementation with 30, 300, or 2000 µg/ mL anethole. The samples were thawed and evaluated for morphology, kinetics, membrane integrity, and reactive oxygen species (ROS). The addition of anethole increased morphological abnormalities (P < 0.05), however, it did not affect sperm kinetics. Flow cytometry analysis showed that sperm cells cryopreserved with 300 µg/mL anethole had lower acrosome integrity than those cryopreserved in other treatments. Evaluation of oxidative stress revealed that cells stored in the presence of 2000 µg/mL anethole had small amounts of ROS when compared to those preserved in the control medium alone or supplemented with 300 µg/mL anethole (P < 0.05). After cryopreservation of sperm with 2000 µg/mL anethole, the highest percentage of viable sperm without ROS was observed (P < 0.05). In conclusion, despite reducing ROS levels, the supplementation of anethole in ACP-101c did not affect sperm kinetics or membrane integrity post-thawing, however, it did cause morphological damage to sperm.(AU)

RESUMO

A qualidade do espermatozoide caprino pós-descongelação é crítica para o sucesso dos protocolos de inseminação artificial e pode ser influenciada por extensores, crioprotetores e substâncias antioxidantes. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do antioxidante anetole sobre espermatozoides caprinos diluídos em meio de conservação à base de água de coco em pó (ACP-101c) e congelados. Para tanto, cada ejaculado foi submetido aos seguintes tratamentos ACP-101c (controle); controle mais suplementação com 30, 300 ou 2000 µg / mL de anetole. As amostras foram descongeladas e avaliadas quanto à morfologia, cinética, integridade de membranas e espécies reativas de oxigênio. A adição de anetole aumentou as anormalidades morfológicas (P < 0,05), no entanto, não afetou a cinética dos espermatozoides. A análise da citometria de fluxo mostrou que as células de esperma criopreservadas com 300 µg / mL anethole tinham integridade acrosma menor do que aquelas criopreservadas em outros tratamentos. A avaliação do estresse oxidativo revelou que as células armazenadas na presença de 2000 µg / mL anethole apresentaram pequenas quantidades de ROS quando comparadas às preservadas em meio de controle isoladamente ou suplementadas com 300 µg / mL anethole (P < 0,05). Após a criopreservação de espermatozoides com 2000 µg / mL anethole, observou-se a maior porcentagem de espermatozoides viáveis sem ROS (P < 0,05). A população com espermatozoides viáveis sem ROS foi maior quando utilizado 2.000 µg / mL (P < 0,05). Em conclusão, apesar de reduzir os níveis de ROS, a suplementação de anetole em ACP-101c não afetou a cinética espermática e a integridade da membrana pós-descongelação, entretanto, causou danos morfológicos nos espermatozoides.(AU)