Clonagem, expressão e diversidade na seqüência do gene iss de Escherichia coli patogênica para aves (APEC), isolada no Brasil / Cloning, expression and sequence diversity of iss gene from avian pathogenic Escherichia coli (APEC) isolated in Brazil

ABSTRACT

A proteína Iss (increased serum survival) é uma importante característica de resistência ao sistema complemento da Escherichia coli patogênica para aves (APEC). Os objetivos deste trabalho foram clonar e verificar a diversidade da seqüência do gene iss de APEC e caracterizar a proteína Iss recombinante. O gene iss de 309 bp foi amplificado por PCR, clonado e expresso na E. coli BL21 (DE3) utilizando o vetor pET SUMO. O gene iss da APEC9 foi classificado como iss tipo 1 pela diferenciação entre 3 tipos de iss alelos. A proteína Iss foi expressa pela indução com IPTG, purificada em coluna com resina ligada ao íon níquel e utilizada na imunização de galinhas poedeiras. Anticorpos da classe IgY anti rIss reagiram com a proteina rIss, a qual apresentou massa molecular de 22 kDa, correspondendo 11kDa da Iss e 11 kDa da proteína SUMO.

RESUMO

The Iss (Increased serum survival) protein is an important characteristic of resistance to complement system of avian pathogenic Escherichia coli (APEC). The objectives of this work were to cloning and verify the sequence diversity of iss gene from APEC and characterize the recombinant Iss protein. The iss gene of 309 bp was amplified by PCR, cloned and expressed in E. coli BL21 (DE3) using the pET SUMO vector. The iss gene from APEC9 strain was classified as iss type 1 by differentiation of the three iss gene allele types. The protein was expressed by induction of IPTG and purified in resin charged with the nickel ion. Antibodies IgY anti rIss reacted with rIss showing a molecular mass of 22 kDa, corresponding 11KDa of Iss protein and 11 KDa SUMO protein.