Incubation time effect after thawing on the viability of cryopreserved ovine sperm with Tris-Yolk supplemented with vitamin C and Trolox / Efeito do tempo de incubação pós-descongelação sobre a viabilidade de espermatozóides ovinos criopreservados com Tris-Gema suplementado com vitamina C e Trolox

ABSTRACT

The aim of this study was to evaluate the effect of the incubation time after thawing on the viability of ovine sperm cryopreserved in Tris-yolk diluent supplemented with vitamin C and Trolox. Semen samples of four Santa Ines rams were collected with an artificial vagina and evaluated according to motility and vigor. The semen samples´ pool was submitted to dilution with Tris-yolk supplemented with antioxidant substances in accordance with the experimental group G1) Tris-yolk (Control Group); G2) Tris-yolk + 600µM/L of vitamin C; G3) Tris-yolk + 60µM/L of Trolox and G4) Tris-yolk + 600µM/L of vitamin C + 60µM/L of Trolox. After this, the straws (0.25 mL) with 100 x 106 spermatozoa were transferred to a freezing machine using the fast curve (- 0.5 ºC/minute, from 25 ºC to 5 ºC, and - 12.5 ºC/minute, from 5 ºC to -120 ºC) and after to reaching -120 ºC the straws were immersed and stored in liquid nitrogen (-196 ºC). After thawing at 37 ºC during 30 seconds, the semen samples were transferred to dry test tubes previously warmed (37 ºC) and kept at this temperature, where they were analyzed at 0, 30 and 60 minutes of incubation according to progressive motility (PM), vigor, acrosome and DNA integrity (AI) and oxidative stress (SOX). Significant differences were evidenced (P 0.05) between incubation time to PM, AI and SOX, as well as between experimental groups to AI and SOX par

RESUMO

Objetivou-se com este estudo avaliar o efeito do tempo de incubação pós-descongelação sobre a viabilidade de espermatozóides ovinos criopreserva¬dos em diluente Tris-Gema suplementado com vitamina C e Trolox. Amostras de sêmen de quatro reprodutores ovinos da raça Santa Inês foram colhidas com auxílio de vagina artificial e, após efetuadas as avaliações (motilidade, vigor), procedeu-se à formação do pool de amostras, o qual foi submetido ao procedimento de diluição com Tris-Gema acrescido de antioxidantes de acordo com o grupo experimental G1) Tris-Gema (Grupo controle); G2) Tris-Gema + 600µM/L de vitamina C; G3) Tris-Gema + 60µM/L de Trolox e G4) Tris-Gema + 600µM/L de vitamina C + 60µM/L de Trolox. A seguir, as palhetas (0,25 mL) contendo 100 x 106 espermatozóides foram colocadas em máquina de congelação utilizando a curva rápida (- 0,5 ºC/ min, de 25 ºC a 5 ºC, e a - 12,5 ºC/ min, de 5 ºC a -120 ºC) e, após atingir - 20 ºC, as palhetas foram imersas e armazenadas em nitrogênio líquido. Após descongelação a 37 ºC durante 30 segundos, as amostras de sêmen foram transferidas para tubos de ensaio previamente aquecidos (37 ºC) e mantidas nesta temperatura, onde foram analisadas a 0, 30 e 60 min de incubação quanto a motilidade progressiva (MP), vigor, integridade de acrossoma (IA) e de DNA, e estresse oxidativo (EOX). Constataram-se diferenças significativas (P 0,05) entre os