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Rev. Soc. Bras. Ciênc. Anim. Lab; 1(2): 145-154, 2012.

Artigo em Português | VETINDEX | ID: biblio-1489662

Resumo

O receptor B1 de cininas é uma proteína induzível, que mede a vasodilatação em diversos estados patológicos, tais como inflamação, dor e choque séptico. Considerando que sua expressão tem sido apontada como um indicador da gravidade de doenças, por mecanismos que envolvem espécies oxidarivos e nitrosativos, perguntamos se a indução de receptor B1 poderia ser desencadeada em condições pré-oxidantes. Assim, células endoteliais isoladas de um nódulo linfático axilar de camundongo, SVEC4-10E2, foram tratadas com 0,1 a 1.5 mm de H2O2 ou LPS (10g/ml) e mantidas por 3 h em cultura. Análises quantitativas de RT-PCR mostraram que a expressão do receptor B1 de cininas é dependente da dose de H2O2 com um aumento maximo no pulso 0,05mm. A funcionalidade do receptor B1 nas células tratadas com 1mMH2O2 foi similar àquela induzida por LPS, conforme determinado por medidas da taxa de acidificação extracelular em resposta ao agonista de B1, denominado Des-Arg9-bradicinina (DBK). A expressão das enzimas NADPH oxidase e prote´na do choque térmico 90 (hsp90) também foram analisadas, tendo em conta seus papés já bem conhecidos na disfunção endotelial associada com o estresse oxidativo, de moodo que ambas poderiam estar atuando como contribuintes para a indução do receptor B1 em nosso sistema de estudo. O aumento nas concentrações de H2O2 não causou mudança nos níveis de expressão da NADPH oxidase, mas diminui a expressão de hsp90. Esta mitigação nos níveis da hsp90 possivelmente potencializou a indução do receptor B1 por H2O2, já que níveis baixos ou mau funcionamento do hsp90 estão associados com a geração de superóxido por eNOS desacoplado. Portanto, nossos resultados mostram uma indução específica por H2O2 dos receptores de cininas B1 em céluas endoteliais de camundongo. Tal fenômeno pode significar uma resposta adaptativa das céluas às elevadas condições de estresse oxidativo.

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The inducible kinin B, receptor mediates vasodilation in several pathological states such as inflammation, pain and septic shock. Since it has been considered and indicator of disease severity by mechanisms involving both oxidative and nitrosative species, we asked whether B1, receptor induction could be triggered by pro-oxidant conditions. Thus, endothelial cells from mouse lymph nodes, SVEC4-10E2, were treated with 0.1-1.5mM H2O2 or 10 ug/mL LPS and kept for 3h in culture. Quantitative RT-PCR analyses show H2O2 dose-dependent expression of the kinin B1 receptor, with the maximum increase at 0.05mM pulse. The functionality of the B1 receptor in 1mM H2O2-treated cells was similar to that induced by LPS, as determined by extracellular acidication rate measurements in response to B1 agonis Des-Arg³-Bradykinin (DBK). The expression of the enzymes NADPH oxidase and heat shock protein 90 (hsp90) was also examined, taking into account their well known roles in endothelial dysfunction associated with oxidative stress, so that both could be acting as contributors to rhe B1 receptor induction in our system. increasing H1O2 concentrations caused no changes in NADPH oxidase, but led to down regulation expression of hsp90. This mitigation of hsp90 levels possibly potentiates the B1 receptor induction by H2O2, since low levels or malfunction of hsp90 are associated with the generation of superoxide by eNOS. These results show a specific upregulation of the kinin B1 recepetor expression induced by H1O2 in mouse endothelial cells. This phenomenon could mean an adaptive response to elevated oxidative stress conditions.

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