Sodium bicarbonate and HEPES as buffer components for cooling the semen of pony stallions / Bicarbonato de sódio e HEPES como tampões para o resfrigeração de sêmen de pôneis

ABSTRACT

The composition of semen diluents can modify its viability during cooling. The buffering effects of HEPES and sodium bicarbonate were evaluated considering the pH and sperm viability. The semen of seven adult Brazilian ponies was evaluated before and after cooling at 5o C for 24 h and 48 h. A non-buffered skim milk powder extender (C) and the same extender buffered with sodium bicarbonate (SB) and HEPES (H) were used. After dilution, semen (three ejaculates/pony) was centrifuged and the seminal plasma discarded. Sperm was then diluted with SB, H or C and its concentration adjusted to 50 x 106 sptz/mL. Progressive motility evaluated after dilution showed similar results with all extenders (71.42% (SB), 74.28% (H), and 74.52% (C)). Sperm motility was evaluated 24 h and 48 h after cooling for SB (44.76% and 25.23%), H (51.42% and 38.09%) and C (54.05% and 41.66%, respectively). Plasma membrane integrity was similar after exposure to the three extenders (62.71% (SB), 68.76% (H), and 69.23% (C)). Mitochondrial activity was higher in SB immediately after dilution (SB= 1.05nm, H= 0.81nm, C= 0.79nm), and after 24 h (0.83nm (SB), 0.73nm (H) and 0.64nm (C)). After 48 h, the mitochondrial activity decreased to 0.72nm (SB), 0.69nm (H), and 0.63nm (C) (P > 0.05). The pH, osmolarity and pH after 48 h of cooling of the diluted semen were higher in SB (8; 382; 7.9), intermediate in H (7.5; 362; 7.32) and lower in C (7.16; 350; 7.07). Lipid peroxidation and its induction were similar in all groups. Data were analyzed by analysis of variance (ANOVA), and Duncan’s test was used to evaluate the significant differences (P < 0.05). Sodium bicarbonate reduced the progressive motility and increased the semen pH. The extender C was considered more appropriate for immediate use in artificial insemination. The non-buffered and HEPES-buffered extenders were considered appropriate for the cooling of equine semen for 48 h at 5°C.

RESUMO

A composição dos diluentes de sêmen pode modificar sua viabilidade durante o processo de resfriamento. O efeito de tamponamento do HEPES e Bicarbonato de Sódio foi avaliado considerando o pH e a viabilidade espermática. Sete pôneis brasileiros adultos tiveram seu sêmen avaliado antes e após a refrigeração a 5°C durante 24 h e 48 h. Um diluente de leite em pó desnatado não tamponado (C) e um diluente tamponado com bicarbonato de sódio (SB) ou HEPES (H) foram utilizados. Após a diluição, o sêmen (três ejaculados/ pônei) foi centrifugado e o sobrenadante foi descartado. O sêmen foi então diluído com SB, H ou C e a concentração ajustada para 50 x 106 espermatozoides/mL. A motilidade progressiva avaliada após a diluição apresentou resultados similares para todos os diluentes (71,42% (SB), 74,28% (H), 74,52% (C)). A motilidade espermática foi avaliada 24 h e 48 h após o resfriamento, respectivamente, para SB (44,76%, 25,23%), H (51,42%, 38,09%) e C (54,05%, 41,66%). A integridade da membrana plasmática foi semelhante após a exposição aos três diluentes (62,71% (SB), 68,76% (H), 69,23% (C)). A atividade mitocondrial após a diluição foi maior em SB (SB = 1.05nm, H = 0.81nm, C = 0.79nm) e após 24 h foi 0.83nm (SB), 0.73nm (H) e 0.64nm (C). A atividade mitocondrial após 48 h diminuiu para 0.72nm (SB), 0.69nm (H) e 0.63nm (C) (P > 0.05). O pH, a osmolaridade e o pH do sêmen diluído após as 48 h de refrigeração foram maiores em SB (8; 382; 7,9), intermediário em H (7,5; 362; 7,32) e menor em C (7,16; 350; 7,07). A peroxidação lipídica e sua indução foram semelhantes em todos os grupos. As médias foram avaliadas através de análise de variância (ANOVA) e o Teste Duncan foi utilizado para analisar as diferenças significativas (P < 0.05). O bicarbonato de sódio reduziu a motilidade progressiva e aumentou o pH do sêmen. O diluente C foi considerado mais adequado para uso imediato na inseminação artificial...