Congelação lenta de tecido ovariano ovino utilizando 1, 2- propanodiol (PROH) seguida de incubação de curta duração / Sheep ovarian tissue slow freezing using 1, 2-propanediol (PROH) as cryoprotectant followed by short-term in vitro culture
Gonçalves, Raphael Fernando Braga; Lunardi, Franciele Osmarini; Alves , Anelise Maria Costa Vasconcelos; Araújo, Valdevane Rocha; Figueiredo, José Ricardo de; Campello, Cláudio Cabral; Rodrigues, Ana Paula Ribeiro.
Ciênc. Anim. (Impr.);
22(3): 3-16, 20120000. tab, ilus
Artigo
em Português
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| ID: vti-12647
Resumo
A criopreservação de tecido ovariano tem como principal objetivo, a manutenção deste tecido para sua posterior utilização, garantindo a preservação do material biológico de fêmeas de animais de alto valor genético. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivos definir protocolo ótimo para criopreservação de tecido ovariano ovino utilizando PROH como agente crioprotetor e avaliar a resposta do tecido criopreservado incubado in vitro por curtos períodos. Para tanto, o tecido ovariano foi exposto (5, 10 ou 20 minutos) e/ou congelado utilizando PROH em duas diferentes concentrações (1,0 ou 1,5M). Em seguida, após a definição do protocolo mais adequado, realizouse a incubação deste tecido por 2 ou 4 horas. Em ambas as etapas, o tecido ovariano foi avaliado por Histologia Clássica ou viabilidade por inclusão em Azul de Tripan. Verificou-se que a exposição por 5 minutos seguida de criopresevação do tecido em solução de 1,5 M de PROH garantiu percentual de folículos viáveis significativamente semelhantes ao tecido fresco (P<0,05). Em seguida, o tecido congelado nessas condições foi cultivado por 2 ou 4 horas. Tal procedimento demonstrou que, com o decorrer do cultivo, os folículos sofrem perda gradual de sua normalidade morfológica em comparação ao tecido fresco, o que foi confirmado pela análise de viabilidade (P<0,05). Assim, o presente trabalho conclui que é possível congelar eficientemente o tecido ovariano ovino utilizando 1,5 M de PROH e exposição por 5 minutos e, que ocorre uma redução gradual na qualidade folicular do tecido criopreservado e submetido a curtos períodos de incubação.(AU)Ovarian tissue cryopreservation aims to maintain the tissue for later use, ensuring the preservation of biologic material from women and high genetic valuable animals. In this context, this work aimed to define an optimum sheep ovarian tissue cryopreservation protocol using PROH as crioprotectant and to evaluate the responsiveness of cryopreservated tissue to a short-term in vitro culture. Then, the ovarian tisse was exposed (5, 10 or 30 minutes) and/or cryopreservated using PROH (1,0 or 1,5M). After the definition of the most appropriate protocol, the tissue was cultures for 2 or 4 hours. In both stages, ovarian tissue was evaluated by Classic Histology and viability using Trypan blue staining. We observed that the exposure for 5 minutes followed by cryopreservation in 1,5M PROH maintained similar percentages of viable follicles than fresh tissue (P<0,05). Thereafter, cryopreserved tissue was cultured for 2 or 4 hours. This procedure showed that, as in vitro culture goes on, follicles suffer gradual loss in their morphology, what was confirmed by viability analysis (P<0,05) Thus, this work concludes that is possible to properly cryopreservate sheep ovarian tissue using 1,5M PROH and 5 minutes exposure. Moreover, it occurs a gradual quality reduction of follicles obtained from short-term cultured tissue after cryopreservation procedure.(AU)
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BR68.1
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