Equine semen cryopreservation: inter-individual variation, centrifugation processing, protective agents, and freezing protocols / Criopreservação de sêmen equino: variação inter-individual, processamento de centrifugação, agentes protetores e protocolos de congelamento

ABSTRACT

Stallion sperm cryopreservation allows for long distance transport of sperm insemination doses. In addition, it can be used for long term storage and maintenance of sperm and gene reserves; e.g. in case of stallions participating in competition, endangered breeds, or prior to castration or removal of a stallion from a stud book in case of illness or death. In most countries, stallions used for semen cryopreservation, are held in supervised quarantine during the entire collection and processing period, while taking into account international regulations concerning animal breeding and disease control. Sperm cryopreservation involves collection of semen, dilution in extenders containing nutrients and protectants, packaging in straws, controlled cooling and freezing, and storage in liquid nitrogen. Frozen samples are thawed prior to use. All these procedures expose sperm to stress, which affects survival and fertility rates. In this presentation, the following factors affecting sperm cryosurvival are discussed (i) inter- and intra-individual variation of semen quality and survival after cryopreservation, (ii) centrifugation processing for sperm concentration and/or selection and removal of seminal plasma, (iii) composition of the extender that is used, for primary dilution as well as cryopreservation, and (iv) cooling and freezing protocols.(AU)

RESUMO

A criopreservação do esperma de garanhões permite o transporte em longas distâncias de doses de esperma de inseminação. Além disto, pode ser usado para o armazenamento e manutenção de esperma e reservas de genes em longo prazo; e.g. no caso de garanhões participando de competições, raças em extinção ou antes da castração ou remoção de um garanhão dos livros de origem no caso de doença ou morte. Na maioria dos países os garanhões usados para criopreservação de sêmen são deixados em quarentena supervisionada durante todo o período de coleta e processamento, enquanto considerando regulamentos internacionais com relação a reprodução animal e controle de doenças. A criopreservação de esperma envolve a coleta do sêmen, diluição em extensores contendo nutrientes e protetores, o armazenamento em palhetas, resfriamento controlado e congelamento e armazenamento em nitrogênio líquido. Amostras congeladas são descongeladas antes do uso. Todos estes procedimentos expõem o esperma ao estresse, que afeta taxas de sobrevivência e fertilidade. Nesta apresentação são discutidos os seguintes fatores que afetam a criosobrevivência de esperma (i) variação inter e intra individual da qualidade de sêmen e sobrevivência após criopreservação, (ii) processamento de centrifugação para concentração de esperma e/ou seleção e remoção de plasma seminal, (iii) composição do extensor usado para diluição primária além da criopreservação, e (iv) protocolos de congelamento e resfriamento.(AU)